Is Príomhphróitéin é Sidt2 sa Chosán Díghrádaithe Uathphagy-lysosomal agus Tá sé Riachtanach Chun Struchtúr Duán agus Feidhm Scagacháin a Chothabháil
Nov 07, 2023
Tá rialáil agus hoiméastáis na n-uathphagy riachtanach chun deilbhíocht agus feidhm orgán a chothabháil. Mar próitéin membrane lysosomal, an éifeachtSidt2arstruchtúr duáinagusautophagy duánachfós anaithnid. Sa staidéar seo, fuair muid amach go bhfuil na duáin deSidt2−/−léirigh lucha athruithe i ramhrú membrane an íoslaigh, comhleá próisis coise, agus at mitochondrial, rud a thugann le tuiscint go raibh anRinneadh damáiste do struchtúr an duáin. próitéin i bhfual méadaithe ag 24 h le fios go bhfuil anfeidhm duáinrinneadh damáiste freisin. Ag an am céanna, d'éagmaisSidt2ba chúis le laghdú ar líon na líseasóim aigéadach, laghdú ar ghníomhaíocht hidrolase aigéad agus léiriú sa lysosome, agus méadú ar pH sa lysosome, rud a thugann le tuiscint go raibh lagú ar fheidhm lysosomal tar éisSidt2scriosadh. Léirigh carnadh uathphagolysosomes, leibhéil próitéin LC3-II agus P62 méadaithe, agus laghdaigh leibhéil mRNA P62 go raibh easpa anSidt2géine ba chúis le cosán neamhghnácha autophagyflógh. Turgnamh cloroquine, imdhíonachtflléirigh uathphagosome uatha, measúnacht chomhleá líseasóim, agus Ad-mcherry-GFP-LC3B freisin, tar éisSidt2scriosadh, níor tháinig méadú ar tháirgeadh na n-uathphagosomes, ach bhí lagú ar chomhleá na n-uathphagosomes agus na lísisóm agus díghrádú autophagolysosomes. Nuair a goirSidt2−/−cealla leis an autophagy activator rapamycin, fuair muid go bhféadfadh sé a ghníomhachtú autophagy, a léiriú mar méadú ar autophagosomes, ach ní fhéadfadh sé feabhas a chur ar díghrádú autophagolysosome. Idir an dá linn, léirigh sé freisin go bhfuil anSidt2Tá ról tábhachtach ag géine i ndul chun cinn rianúil próisis autophagolysosome. Go hachomair, in éagmais anSidt2ba chúis le géine feidhm líseasóim lagaithe agus laghdú ar líon na lísisóm aigéadach, rud a d'eascair foirmiú agus neamhoird díghrádaithe na n-uathphagolysosomes, rud a léirigh sa deireadh marstruchtúr agus feidhm duáin neamhghnácha. Sidt2riachtanach chun gnáthfheidhm na líosóim agus cobhsaíocht fiseolaíoch na nduán a chothabháil.
RÉAMHRÁ
Is é an dearcadh traidisiúnta ná gur diúscairtí truflais na gceall iad lísisóm chun dramhaíl a tháirgeann cealla a bhaint [1-3]. Mar sin féin, léirigh go leor staidéir go bhfuil ról na lísisóm i bhfad níos casta, agus d'fhéadfadh go mbeadh aistriú comhartha cille, tumorigenesis, forbairt, agus gnéithe eile a dhéanann difear do ghníomhaíochtaí saoil an chomhlachta [4-10] i gceist. De ghnáth déantar lysosomes a shaibhriú i bhfíocháin mar an t-ae agus na duáin [11]. Dá bhrí sin, tá dlúthbhaint ag dysfunction lysosomal freisin le galair fíocháin an ae agus na duáin, mar shampla galar Gaucher [12], mucopolysaccharidosis [13], galar Niemann-Pick [14], glomerulosclerosis moill [15], nephropathy membranous idiopathic [16]. , etc. Is iad próitéiní membrane lysosomal (LMPanna) na comhpháirteanna membrane a bhfuil an fheidhm acu ní hamháin sláine an líseasóim a chothabháil ach a bhfuil baint acu freisin le gnéithe éagsúla cosúil le trasdulú comhartha intracellular agus rialáil atá riachtanach chun feidhm an líseasóim a chothabháil. agus gníomhaíochtaí beatha cille [17–19].
Go dtí seo, aimsíodh níos mó ná 100 LMP, ach níl feidhmeanna an chuid is mó acu fós ar eolas [20]. Tá Transmembrane 7 superfamily ball 1 (TM7SF1) riachtanach chun feidhm podocyte duánach a chothabháil [21] agus tá ról tábhachtach aige sa phróiseas forbartha duáin [22]. Is cainéal ian clóiríd-ghalaithe 5 (ClC-5) é cainéal ian clóiríde (Cl(−)) arna shloinneadh i bhfeadáin duánach, atá riachtanach do ghnáthfheidhm tubular duánach [23]; nuair a bhíonn sé mutated, féadfaidh sé a bheith ina chúis le galar Dent [24]. Cuireann Overexpression de Chlóiríd Voltage-Gated Channel 7 (ClC-7) cosc ar apoptosis na gcealla epithelial tubular duánach de bharr staid lagaithe redox [25]. Léiríonn na staidéir seo, mar chomhpháirteanna d'fhíochán duáin saibhrithe líseasóim, go bhfuil LMPanna riachtanach chun gnáthfheidhm a choinneáil, ach níl meicníocht shonrach na pataigineachta gaolmhara soiléir fós.
Is LMP nua-aimsithe é teaghlach transmembrane SID1, ball 2 (Sidt2) a chuirtear in iúl go mór i bhfíocháin ae agus duáin [26]. Léirigh staidéir roimhe seo gur féidir le scriosadh Sidt2 galair a bhaineann le ae a chur faoi deara, a léiríonn steatosis ae agus neamhoird meitibileachta lipid ae [11, 18]. I staidéar le déanaí, fuaireamar amach go ndearnadh damáiste do dhuáin Sidt2 - / - lucha freisin, ach níl an mheicníocht shonrach soiléir. Is orgáin nelles feidhmiúcháin tábhachtacha iad líosóim le haghaidh uathphagy [10]. An bhfuil rialáil autophagy i gceist? Sa staidéar seo, rinneamar scrúdú ar an gcomhghaol idir feidhm liosómach (autophagy) agus galair agus rinneamar iniúchadh ar an mbunmheicníocht a bhaineann le Sidt2 a dhéanann damáiste duáin, rud a bheidh ina cuidiú mór le staidéar a dhéanamh ar an gcomhghaol idir LMP agus galair.
TORTHAÍ
Léiríonn samhail Sidt2−/− é sindamáiste duáinTá baint aige le carnadh autophagolysosome
Taispeántar an modh chun lucha Sidt2 -/ - a thógáil in Fíor 1A. Rinneadh seicheamh ar an DNA eireaball luch homozygous a fhaightear agus ba é an toradh seicheamhaithe unimodal (Fíor 1 B), agus tharla caillteanas blúirí 199 bp sa dara exon. Trí shainaithint géinitíopa PCR, fuaireamar amach go raibh 685 bp deighleog DNA ag lucha Sidt2+/+(Cineál Fiáin, WT), ach bhí 486 bp (Fíor 1C) ag lucha Sidt2-/-. Mar a léirítear i bhFíor 1D, is ar éigean a d’fhéadfaí próitéin Sidt2 a bhrath i lucha Sidt2 -/ - ná sin i WT, rud a thug le tuiscint gur tógadh an tsamhail go rathúil. De réir tástála fuail, fuarthas amach go raibh méadú suntasach ar an próitéin fual 24 h i lucha Sidt2 - / - i gcomparáid le WT (Fíor 1E), rud a thugann le tuiscint go raibh lagú ar an mbacainn scagacháin duáin tar éis an Sidt2 a scriosadh. Léirigh breathnuithe micreascópachta leictreon tarchurtha (Fíor. 1 F), i gcomparáid le lucha WT (a-f), gur léirigh duáin luch Sidt2 - / - comhleá idirleata de phróisis coise, ramhrú an membrane íoslach glomerular (g, h), epithelial tubular duánach. éidéime cille, damáiste microvilli (i, j), éidéime mitochondrial, athruithe cosúil le folúntas, agus an cealú spines (k, l). Suimiúil go leor, Sidt2 - / - lucha ar taispeáint chomh maith le líon mór de carntha autophagolysosome (léirithe ag saigheada dearg, m, n), agus an líon a bhí i bhfad níos airde ná sin an rialaithe ( Fíor. 1 G ). Ag an leibhéal ceallacha, fuair muid amach go raibh Sidt2 riachtanach freisin do mharthanas na gcealla duáin. Mar thoradh ar scriosadh géine Sidt2 tháinig laghdú ar iomadú agus méadú ar apoptosis de chealla MPC5 agus SV40 MES 13 (Fíor Forlíontach 1).
Tagann athruithe ar líon agus ar fheidhm na líosóim aigéadach i gcealla duán luiche mar thoradh ar scriosadh géine Sidt2
Baineadh úsáid as teicneolaíocht Crispr-Cas9 chun an ghéin Sidt2 a bhaint amach i gcealla MPC5 agus SV40 MES 13 chun na samhlacha cille a fháil. Rinneadh na fíoruithe mRNA agus leibhéal próitéine (Fíor. 2A-C) ag qRT PCR agus blotting an iarthair faoi seach, a léiríonn gur tógadh na samhlacha go rathúil. Is céim lárnach é an córas díghrádaithe lysosome-mediated i ndíghrádú autophagy. Mar LMP fíor-riachtanach, an mbeidh tionchar ag baint amach an Sidt2 ar shloinneadh na bpróitéiní a bhaineann le lysosome? Thomhaiseamar an mórphróitéin 1 (LAMP1) a bhaineann le membrane lysosomal-ghaolmhar LMP. Léirigh na torthaí gur tháinig laghdú ar léiriú LAMP1 tar éis scriosadh Sidt2 i gcealla MPC5 agus SV40 MES 13 (Fíor 2D, E). D'úsáideamar LysoTracker freisin chun na líseasóim aigéadach a lipéadú agus fuair muid amach gur tháinig laghdú ar líon na líseasóim aigéadach tar éis scriosadh Sidt2 sa dá chineál cealla (Fíor 2F, G). Ina dhiaidh sin, thomhais muid an cathepsin lysosomal B (CTSB) agus fuarthas amach go bhfuil i bhfíochán duáin luch (Fíor 2H, I), cealla MPC5 (Fíor 2J, K) agus SV40 MES 13 cealla (Fig. 2L, M), na habairtí de CTSB sna samhlacha Sidt2 -/ - laghdaíodh go léir, rud a thugann le fios gur tháinig laghdú ar ghníomhaíocht na heinsíme próitéalaíocha sna líseasóim nuair a scriosadh an ghéin Sidt2. Mar an gcéanna, laghdaíodh go suntasach léiriú an CTSB réamhtheachtaithe sa dá chineál cealla den ghrúpa Sidt2 - / -, rud a léiríonn go raibh tionchar freisin ar an CTSB tar éis scriosadh Sidt2. D'úsáideamar LysoSensor freisin chun timpeallacht aigéadach na líseasóim a bhrath. Dá ísle an cóimheas déine fluaraiseachta, is airde an luach pH sa lysosome. Léirigh na torthaí, tar éis scriosadh Sidt2, gur mhéadaigh an luach pH (Fíor 2N, O) agus bhí an aigéadú neamhghnácha. Chun iniúchadh breise a dhéanamh ar cibé an raibh na neamhghnáchaíochtaí lysosomal thuas mar gheall ar líon neamhghnácha líseasóim nó feidhmeanna neamhghnácha lysosomal, rinneamar imscrúdú ar na cealla trí mhicreascópacht leictreon (Fíor 2 P). Fuaireamar amach nach bhfuil aon athruithe soiléire ar líon na líseasóim phríomha agus ar líon iomlán na líseasóim (lena n-áirítear líseasóim príomhúla agus tánaisteacha) tar éis scriosadh Sidt2 (Fíor 2Q).
Tá cosán na n-uathphagy duánach neamhghnácha tar éis baint Sidt2
Mar a luadh thuas, breathnaíodh líon mór carnuithe autophagolysosome i gcealla duáin Sidt2 - / - lucha, rud a thugann le tuiscint go raibh cosán na n-uathphagy neamhghnách. Ag baint úsáide as anailís blot an iarthair, léiríodh go raibh méadú suntasach ar an leibhéal próitéine de LC3-phosphatidylethanolamine comhchuingeach (LC3-II) agus Sequestosome 1(P62) i nduán Sidt2−/− lucha, agus méadú ar nathanna próitéine a bhaineann le autophagy de Autophagy a bhaineann le 5(Atg5), Autophagy-related 7(Atg7), agus Autophagy-related 12(Atg12) (Fíor 3 A, B). Mar sin féin, tháinig laghdú suntasach ar an leibhéal mRNA P62 (Fíor 3 C), rud a thugann le tuiscint go raibh an cosán autophagy neamhghnácha tar éis deireadh a chur le Sidt2 in vivo. Ansin fuaireamar amach gur méadaíodh léirithe na próitéiní autophagy LC3-II, P62, Atg5, Atg7, agus Atg12 freisin (Fíor 3D–G) sa dá chineál cealla duáin tar éis scriosadh Sidt2, rud a bhí comhsheasmhach. leis an in vivo. Léirigh an méadú ar LC3-II méadú ar uathphagosomes sna cealla duáin tar éis scriosadh Sidt2, rud a d'fhéadfadh a bheith mar thoradh ar ghníomhachtú uathphaga nó díghrádú bactha ar uathphagosomes. P62 immunofluorescence ( Fíor. 3 H ) léirigh go soiléir méadú ar ábhar P62 sa Sidt2 - / - cealla ( Fíor. 3 I ). Murab ionann agus an leibhéal próitéine, léirigh qRT-PCR gur tháinig laghdú suntasach ar an P62 ar an leibhéal mRNA (Fíor 3J), rud a léiríonn go raibh baint ag an méadú ar P62 le díghrádú neamhleor. Léirigh na méaduithe ar Atg5, Atg7, agus Atg12 gur thosaigh agus gur foirmíodh uathphagy de ghnáth, ach mhol carnadh P62 constaicí próisis uathphagy freisin, agus d'éiligh an contrárthacht seo dúinn iniúchadh breise a dhéanamh ar fhíorstaid an flosc autophagy.
In vitro, léiríonn cur i bhfeidhm chloroquine flosc autophagy laghdaithe tar éis caillteanas Sidt2 Tá an turgnamh cloroquine ar cheann de na turgnaimh clasaiceacha chun flosc uathphagy a bhreathnú. Chun na cúiseanna a bhí leis na méaduithe ar LC3-II agus P62 tar éis scriosadh Sidt2 a thuiscint, d’úsáideamar cloroquine (CQ), coscaire iartheachtach ar uathphagy, chun gníomhú ar na cealla chun an flosc autophagy a bhreathnú. Gcéad dul síos, úsáid againn grádáin tiúchan éagsúla chun a dhearbhú go raibh an tiúchan saturation bac ag CQ 50 μM (Fig. 4A-F) i MPC5 agus SV40 MES 13 cealla. Anuas ar an tiúchan seo, nuair a lean an tiúchan CQ ag méadú, níor tháinig méadú níos mó ar LC3-II agus P62 chun sáithiú a bhaint amach. Mar sin, d’úsáideamar spreagadh CQ 50 μM thar 16 h chun cosc iomlán a chur ar flosc uathphagy, agus ag an am seo, imithe na difríochtaí LC3-II idir an grúpa Sidt2+/+ agus grúpa Sidt2−/− i na cealla MPC5 agus SV40 MES 13. Ar an gcaoi chéanna, tar éis próiseáil 50 μM CQ, imithe na difríochtaí P62 de bharr scriosadh Sidt2 freisin (Fíor 4G, H, J, K). Léirigh na staitisticí ar fhlosc uathphagy gur laghdaigh sé nuair a bhí Sidt2 ar iarraidh (Fíor 4I, L), rud a dheimhnigh tuilleadh go raibh na méaduithe ar slonn LC3-II agus P62 tar éis scriosadh Sidt2 mar gheall ar theip ar imréiteach uathphagy seachas méadú ar an leibhéal san autophagy (gníomhachtú autophagy).
Cur isteach ar chomhleá autophagosome-lysosome in vitro tar éis scriosadh Sidt2 Tá imréiteach agus díghrádú na céimeanna lár agus déanach sa phróiseas autophagy, a bhaineann le comhleá an autophagosome le laghdú tar éis an scriosadh an Sidt2 (Fíor 5D), rud a léiríonn go bhfuil an comhleá de rinneadh lagú ar uathphagosomes agus lísisóm.
Fíor 1Damáiste duáinagus carnadh uathphagolysosome i lucha Sidt2−/-. Géin chórais Cre-LoxP atá dírithe ar scéimreach; Is é B thuas an seicheamh léaráid easpórtáilte de DNA eireaball luiche géine knockout géine; thíos tá an léarscáil seicheamhaithe, an tsaighead a léiríonn suíomh na géine atá ar iarraidh. I gcomparáid le lucha WT, tarlaíonn caillteanas géine 199 bp in exon 2; C Fíorú leibhéal DNA Sidt2 (a bhaintear as fíochán eireaball). Tá an bunréigiún leagain amach sa táirge primer aimplithe, arna thaispeáint mar Sidt2+ /+(WT), Sidt2+/−, nó Sidt2−/−; Fíorú leibhéal próitéine D chun leibhéil slonn próitéine Sidt2 a bhrath de réir blot an iarthair; E duáin próitéin fuail 24 h i lucha WT agus Sidt2−/-; F struchtúr ultra-mhicr-mhoirfeolaíoch na nduán de lucha WT (a, f) agus Sidt2-/ - lucha (g–n). I gcomparáid leis an luch WT, taispeánann an duán luch Sidt2 - / - comhleá próiseas coise, ramhrú membrane íoslach (g, h), éidéime cille epithelial tubular duánach, damáiste microvilli (i, j), scrios mitochondrial (k, l), agus carnadh autophagolysosome (m, n); G líon iomlán na n-uathphagolysosomes duánach i lucha WT agus Sidt2−/−. *P < 0.05, **P < 0.01.
Fíor 3 Cuireann scriosadh Sidt2 isteach ar chonair na n-uathphagy. A Brath WT agus Sidt2 -/ - leibhéil slonn próitéine a bhaineann le hútarphagy cille de réir blot an iarthair; B cairteacha staidrimh de thorthaí tástála blotála an iarthair; Leibhéal slonn C P62 mRNA i bhfíocháin duánach lucha WT agus Sidt2−/-; D leibhéil slonn de phróitéiní conair autophagy cille MPC5 roimh agus tar éis cnag amach Sidt2; E graf staidrimh de chairt (D); Leibhéil slonn F de phróitéiní conair uathphaga i gcealla SV40 MES 13 roimh agus tar éis cnag amach Sidt2; G chairt staitistiúil na cairte (F); Imdhíonfluaraiseacht H P62 i gcealla MPC5 agus SV40 MES 13 roimh agus tar éis cnag amach Sidt2; I cairteacha staitistiúla de na torthaí imdhíonfluaraiseacht; Leibhéil slonn J P62 mRNA i gcealla MPC5 agus SV4{0 MES 13 roimh agus tar éis leagadh amach Sidt2. *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001.
Ad-mCherry-GFP-
Tugann lipéadú dúbailte ar fhluaraiseacht LC3B le fios gur cuireadh bac ar fhoirmiú autophagolysosome agus ar a chonair díghrádaithe tar éis scriosadh Sidt2 Is féidir an turgnamh aistrithe Ad-mCherry-GFP-LC3B a úsáid chun athruithe ar fhlosc dhinimiciúil autophagy laistigh de chealla a bhrath. Le linn an phróisis autophagy, bailíonn mCherry-GFP-LC3B ar an membrane autophagosome agus manifests féin i bhfoirm spotaí buí faoi micreascóp fluaraiseachta. Nuair a chomhcheanglaítear uathphagosomes agus lísisóm chun uathphagolysosomes a fhoirmiú, múchfaidh an timpeallacht aigéadach laistigh den líseasóim fluaraiseacht GFP ionas go léireoidh sé é féin i bhfoirm spotaí dearga. Mar sin, ní féidir GFP atá faoi cheangal le LC3 a úsáid ach amháin chun uathphagosomes a bhrath, agus is féidir le mCherry uathphagosomes agus uathphagolysosomes a bhrath ag an am céanna. Nuair a chuirtear na spotaí fluaraiseachta glasa agus dearga le chéile agus á dtaispeáint mar spotaí fluaraiseachta buí, comhfhreagraíonn sé seo d'auphagosomes. Ag an am seo, is féidir leis an bhfluaraiseacht dearg autophagolysosomes a léiriú, agus féadann sé freisin réidh le foirmiú autophagolysosome a léiriú [27]. Aistríodh cealla MPC5 agus cealla SV40 MES 13 sna grúpaí Sidt2+/+ agus Sidt2−/- le adenovirus Ad-mCherry GFP-LC3B agus tógadh iad le micreascóp léasair comhfhócasach (Fíor 6A). Fuarthas amach gur tháinig méadú ar líon na poncanna fluaraiseacha buí agus tháinig laghdú ar líon na poncanna fluaraiseacha dearga (Fíor 6B, C) tar éis scriosadh Sidt2, a léiríodh gur mhéadaigh líon na n-uathphagosomes agus laghdaigh na huathphagolysosomes sa ghrúpa Sidt2 - / -. Tá sé seo toisc go raibh constaicí ann maidir le foirmiú autophagolysosome, agus cuireadh bac ar na cosáin díghrádaithe autophagolysosome, rud a d'eascair constaicí díghrádaithe autophagosome.
Níor fheabhsaigh Rapamycin an carnadh P62 de bharr scriosadh Sidt2 ach chuir sé níos measa é Is coscaire mTOR é Rapamycin (RAPA) agus gníomhaíonn sé autophagy. Nuair a ghníomhaigh RAPA ar chealla MPC5 agus SV40 MES 13 de na grúpaí Sidt2+/+ agus Sidt2−/−, mhéadaigh sé méideanna LC3-II sa dá ghrúpa. Chiallaigh sé seo go bhféadfadh RAPA cosán na n-uathphagy in aghaidh an tsrutha a ghníomhachtú. Mar an gcéanna, fuaireamar amach go raibh an méadú ar leibhéal LC3-II sa ghrúpa Sidt2−/− le RAPA níos soiléire ná mar a bhí sa ghrúpa rialaithe (Sidt2+/+), rud a thaispeánann nuair a ghníomhaigh RAPA ar ghrúpa Sidt2/−, níor tháinig feabhas ar dhíghrádú na n-uathphagosomes fós. Idir an dá linn, thugamar faoi deara freisin na hathruithe ar P62 agus fuaireamar amach, nuair a ghníomhaigh RAPA ar an ngrúpa Sidt2+/+ de chealla MPC5 agus SV40 MES 13, níor tháinig aon athrú suntasach ar P62, rud a thugann le fios go raibh an flosc uathphagy gnáth. Nuair a ghníomhaigh RAPA ar an ngrúpa Sidt2−/−, méadaíodh an leibhéal slonn P62 a thuilleadh i gcomparáid leis an leibhéal roimh an riarachán agus bhí sé níos soiléire freisin ná an leibhéal rialaithe tar éis cóireála RAPA (Fíor 7A, B, D, E). Ina dhiaidh sin, d’fhonn iniúchadh a dhéanamh ar na cúiseanna leis an slonn neamhréireach de phróitéin P62 tar éis don ghrúpa Sidt2+/+ agus an grúpa Sidt2−/− a bheith cóireáilte le RAPA, thomhaiseamar leibhéil mRNA P62 agus fuaireamar amach gur mhéadaigh an leibhéal. tar éis cóireáil RAPA sna grúpaí Sidt2+/+ agus sna grúpaí Sidt2−/−, agus bhí leibhéal níos airde ag an ngrúpa Sidt2+/+ ná é sin sa ghrúpa Sidt2−/− (Fíor 7C , F), rud a d’fhéadfadh a chruthú a thuilleadh go raibh an sreabhadh uathphagag réidh sa ghrúpa Sidt2+/+, agus tharla an neamhord sreafa uathphagy ag deireadh na n-uathphagy sa ghrúpa Sidt2−/−, is é sin, díghrádú na n-uathphagolysosomes nasc. Rinneamar staidéar freisin ar éifeacht Sidt2 ar iomadú agus apoptosis na gcealla duáin faoi choinníoll na n-uathphagy gníomhachtaithe agus fuaireamar amach, tar éis gníomhachtú cille meán-spreagtha saor ó serum de autophagy, i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, iomadú an Sidt2 - / - Cuireadh bac breise ar an ngrúpa, agus bhí an apoptosis níos soiléire (Fíor Forlíontach 2).
Fíor 5 Coisctear comhleá uathphagosome agus lísómach tar éis scriosadh Sidt2. Comhlonnú Imdhíonfhluaraiseachta LC3B agus LAMP1 i gcealla MPC5 agus SV4 MES 13 roimh agus tar éis cnag amach Sidt2, anailís le comhéifeacht comhghaolaithe Pearson; B comparáid idir pointí fluaraiseachta LC3B roimh agus tar éis cnag amach Sidt2 i gcealla MPC5 agus SV40 MES 13; C comparáid a dhéanamh idir comhéifeacht comhghaolaithe Pearson roimh agus tar éis cnag amach Sidt2 i gcealla MPC5 agus SV40 MES 13; D comparáid a dhéanamh idir an ráta comhleá roimh agus tar éis cnag amach Sidt2 i gcealla MPC5 agus SV40 MES 13 (an cóimheas idir líon na spotaí fluaraiseacha comhlonnaithe LAMP1 agus LC3B le líon na spotaí fluaraiseacha de LAMP1); *P < 0.05, **P < 0.01.
Seirbhís Tacaíochta Wecistanche-An t-onnmhaireoir cistanche is mó sa tSín:
Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Teil:+86 15292862950
Siopa Le haghaidh Sonraí Breise:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
