Nanachomhthionóil Fhóta-íogaire Pro-dhrugaí a Choimeád Feidhm Suanacht Cheimiteiripeach A chuireann ar chumas Imdhíonteiripe Ailse
Dec 25, 2023
Teibí
Is straitéis rathúil é imdhíonteiripe in éineacht le teiripí éifeachtacha cosúil le ceimiteiripe agus teiripe fhótadinimiciúil chun freagairtí imdhíonachta frith-meall a ghníomhachtú le haghaidh cóireála feabhsaithe frith-ailse. Mar sin féin, is dúshlán fós é nana-spreagthaigh ilfheidhmeacha in-bhithmhillte, bith-chomhoiriúnacha, íseal-tocsaineacha ach an-éifeachtacha atá ar fáil go cliniciúil a fhorbairt agus tá éileamh mór air. Anseo, déanaimid tuairisciú agus dearadh ar nana-táirge nana-táirgí fóta-cheimiteiripeach nua-saor ó fhótagrafach COS-BA/Ce6 NPanna trí thrí chomhpháirt ilfheidhmeacha a chomhcheangal le haigéad betulinic móilín beag nádúrtha féin-chóimeáilte (BA), olagaishiúicríd chitosan intuaslagtha in uisce (COS), agus fóta-sensitizer íseal-tocsaineach clóirín e6 (Ce6) chun cur le héifeachtúlacht fhrith-tumóra na himdhíonteiripe ailse inmheánaithe frith-PD-L{1-idirghabhálaithe. Léirímid go raibh tréith "suanacht" cliste agus sainiúil ag na nana-dhrugaí deartha in éifeacht cheimiteiripeach le cíteatocsaineacht níos ísle inmhianaithe, agus gnéithe teiripeacha iomadúla fabhracha lena n-áirítear giniúint 1 O2 feabhsaithe de bharr bearna fuinnimh laghdaithe Ce6, sofhreagracht pH, bith-dhíghrádaitheacht mhaith, agus bith-chomhoiriúnacht, a áirithíonn fóta-cheimiteiripe sineirgiste ardéifeachtúil. Ina theannta sin, nuair a dhéantar iad a chomhcheangal le teiripe frith-PD-L1, d’fhéadfadh ceimiteiripe nana-chó-thionól agus ceimiteiripe/teiripe fótadinimiciúil (PDT) imdhíonacht antitumor a ghníomhachtú go héifeachtach agus iad ag cóireáil siadaí príomhúla nó i bhfad i gcéin, ag oscailt féidearthachtaí a d’fhéadfadh a bheith tarraingteach do imdhíonteiripe cliniciúil.
Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor
EOCHAIRFHOCAL
Imdhíonteiripe ailse; Nana-imdhíon-spreagthaigh; Suanacht cheimiteiripeach; Pro-dhruga; Féin-thionól; Móilín beag nádúrtha; Aigéad betulinic; Teiripe fhótadinimiciúil
1. Réamhrá
Níl aon dabht ach go bhfuil réabhlóidiú déanta ar chóireáil ailse1,2 ag imdhíonteiripe ailse, amhail an straitéis imshuí seicphointí imdhíonachta a úsáideann PD-L1 nó CTLA-4 chun ailse a chomhrac trí chóras imdhíonachta an óstaigh a ghníomhachtú. Ar an drochuair, chuir an freagra imdhíonachta lag agus éifeachtaí teiripeacha neamhéifeachtúla srian mór ar a hionchais chliniciúla3,4. Le déanaí, léirigh staidéir atá ann faoi láthair gur féidir le teaglaim de imdhíonteiripe le modhanna eile cosúil le ceimiteiripe5, teiripe fótadinimiceach (PDT)6, teiripe fótaiteirmeach (PTT)7, agus radaiteiripe8, in-imdhíon-ghineacht antitumor a spreagadh go héifeachtach trí chealla ailse a spreagadh chun bás cille imdhíon-ghineach a fháil. ICD)9, a thugann le tuiscint go bhféadfadh modhnú imdhíonachta freagairtí imdhíonachta frith-meall a ghníomhachtú. Tá go leor dearaí nuálaíocha nana-ábhar bunaithe ar na teaglamaí sineirgisteacha seo de straitéisí imdhíonteiripe tar éis feabhas suntasach a chur ar ghníomhaíocht frith-ailse lena n-áirítear nanacháithníní neamhorgánacha10, polaiméire11, agus bithimiméiteacha12 (NPanna). Mar sin féin, is dúshlán mór agus éileamh ollmhór é nana-spreagthaigh ilfheidhmeacha in-bhithmhillte, bith-chomhoiriúnacha, íseal-tocsaineachta ach an-éifeachtach agus atá ar fáil go cliniciúil a fhorbairt. Tá ábhair bhitheolaíocha nádúrtha cosúil le haigéid núicléacha13, próitéiní12, peiptídí14,15, agus táirgí beaga móilíneacha nádúrtha16,17 mar gheall ar a mbuntáistí dúchasacha (eg, bith-chomhoiriúnacht, neamhthocsaineacht) tar éis suim shuntasach taighde a tharraingt in iarratais leighis. Go háirithe le blianta beaga anuas, thángthas ar mhóilíní beaga nádúrtha terpenoid bithghníomhacha frith-ailse (NSManna) a bhfuil feidhm féin-chóimeála acu18,19. Mar shampla, is féidir le haigéad betulinic (BA), ergosterol (ET), agus aigéad aibéiteach (AA) iad féin a chur le chéile i gcáithníní miocrón nó nana-struchtúrtha. Is bloic thógála tarraingteacha iad na NSManna seo le húsáid chun oibreáin fhrithtumóra a fhorbairt le haghaidh ceimiteiripe sineirgisteacha agus PDT. Tá sé cruthaithe go léiríonn siad buntáistí suntasacha a bhaineann le nana-dhéantúsaíocht éasca, bith-chomhoiriúnacht agus bith-dhíghrádaitheacht níos fearr, tocsaineacht níos ísle le gortú ae laghdaithe, agus sineirgíocht ard i teiripe antitumor20e23. Soláthraíonn sé seo roghanna eile a bhfuil gealladh fúthu chun nana-spreagthaigh inaistrithe atá ar fáil go cliniciúil a fhorbairt le haghaidh imdhíonteiripe sineirgisteacha. Mar sin féin, ba é an toradh a bhí ar lipophility ginearálta níos láidre na NSManna seo ná endocytosis ceallach neamhéifeachtach, rud a lagaigh a ngníomhaíocht frith-ailse agus a chuir srian lena luach cliniciúil le haghaidh cóireála ailse24. Cosúil leis na nanach-chomhábhair a thuairiscítear go coitianta, chuir nana-fhoirmlithe NSManna comhfhreagracha chun cinn glacadh ceallacha chun éifeachtaí ceimiteiripeacha a fheabhsú, ach mhéadaigh siad freisin gan chuimhneamh ar an mbaol cíteatocsaineachta neamhshonrach do ghnáthchealla22. Dá bhrí sin, is fiú smaoineamh go domhain mar shaincheist ríthábhachtach sa phróiseas imdhíonteiripe sineirgisteacha conas éifeachtúlacht frith-ailse na nanaghníomhairí terpenoid NSM a uasmhéadú agus a thocsaineacht d'fhíochán gnáth a íoslaghdú.
sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta
Cuireadh straitéisí ar son drugaí i bhfeidhm go forleathan chun iontógáil cille móilíní beaga lipophile a fheabhsú trí hidreafaileacht a mhéadú25. Go ginearálta, bíonn éifeachtúlacht glacadh cealla níos airde ag drugaí amfafilic go háirithe ná mar a bhíonn drugaí hidreafaileacha nó lipophileacha26. Dá airde an fagaicíotóis cheallacha, is amhlaidh is fearr an éifeachtúlacht theiripeach24. Mar sin, d’fhéadfadh go mbeadh forbairt ar mhóilíní pro-dhrugaí NSM terpenoid amfaphilic ina modh féideartha chun a n-éifeachtaí teiripeacha a uasmhéadú. Ina theannta sin, tá gealltanas mór ag nanai-dhrugaí spreagthacha-fhreagracha do mhicrea-thimpeallacht na meall ar leith (m.sh., aigéad, freagrúlacht redox) maidir le scaoileadh drugaí a rialú, rud atá buntáisteach chun cítotocsaineacht na ndrugaí ceimiteiripeacha a shochtadh27,28. Idir an dá linn, straitéis éifeachtach a bhí i gcóimeáil formhóilínigh (m.sh. cur chuige fuascailte) chun nana-dhrugaí saor ó iompróirí intuaslagtha in uisce22,29 a ullmhú, rud a d’fhéadfaí a bheith ag súil go laghdódh sé éifeachtúlacht fagaicíotóis na NSManna amfafileacha go pointe áirithe, rud a mhaolódh a réamh-. cíteatocsaineacht deartha. Tugaimid hipitéis gur bunaíodh nanodrugaí spreagthacha agus go hiomlán hidrophilic bunaithe ar NSMs pro-dhrugaí amphiphilic agus is féidir leo a cíteatocsaineacht neamhshonrach chuig gnáthchealla a chosc agus scaoileadh NSManna amfaphilic an-tocsaineach isteach i gcealla meall a spreagadh, rud a éascaíonn a suanacht i ngnáthfhíocháin agus gníomhachtú i suíomh meall. Tá sé tábhachtach an réamhtheachtaí cuí intuaslagtha in uisce agus spreagthach a roghnú chun NSManna terpenoid a mhodhnú chun móilíní pro-drugaí amphiphilic a ullmhú. Ar feadh na mblianta, tá oligosaccharides chitosan (COS), mar tháirgí díghrádaithe chitosan, ní hamháin go bhfuil tuaslagthacht uisce maith agus grúpaí eOH oreNH2 flúirseach a bhfuil freagra maith pH mar thoradh orthu ach freisin go bhfuil gníomhaíochtaí tairbheacha antitumor acu trí fheabhas a chur ar fheidhm imdhíonachta an óstaigh tríd an ngníomhaíocht a rialáil. cealla imdhíonachta cosúil le macrophages monocyte agus limficítí30,31. Ráthaíonn siad seo an fhéidearthacht ollmhór maidir le nana-imdhíon-spreagthaigh sprice-fhreagracha a thógáil le haghaidh imdhíonteiripe sineirgisteacha.
Anseo, bunaithe ar na breithnithe thuas, inár ndearadh turgnamhach, úsáidtear NSMs triterpene pentacyclic d'aigéad betulinic (BA) mar ghníomhaire frith-ailse potent32, tugadh isteach COS chun móilín COS-BA amphiphilic a shintéisiú chun an éifeacht ceimiteiripeach a fheabhsú. Fostaíodh clóirín e6 (Ce6), fóta-íogairí a úsáidtear go forleathan agus a bhfuil tocsaineacht an-íseal/gan tocsaineacht dorcha ar bith aige33, chun táirge fóta-íogair iompróra atá go hiomlán intuaslagtha in uisce a thógáil COS-BA/Ce6 NPanna ag baint úsáide as straitéis comhthionóil dhírigh. Chuir NPanna COS-BA/Ce6 dhá mhódúlacht theiripeach le chéile, ceimiteiripe agus teiripe fótadinimiciúil (PDT), ar féidir leo cur i láthair antaiginí meall-díorthaithe ar chealla T a mhéadú go héifeachtach, ag giniúint freagraí imdhíoneolaíocha láidre le cúnamh ó aidiúvach imdhíonachta frith-PD-L1 ceimiteiripe/PDT/imdhíonteiripe atá thar a bheith éifeachtach agus sineirgistíoch a chur faoi deara (Scéim 1). Thaispeáin na NPanna COS-BA/Ce6 a ndearnadh innealtóireacht orthu feidhm chliste suanachta le héifeachtaí ceimiteiripe insidious, ie, léirigh NPanna comhchruinnithe neamhirradiated go raibh siad bac thar cuimse ar chiteatocsaineacht in vitro i gcomparáid le COS-BA amfafilic cibé acu i gcoinne ailse nó gnáthchealla. Ag cur i leith an iompair shainiúil a fhreagraíonn do pH, feidhmíonn sé tocsaineacht íseal agus bithshábháilteacht do ghnáthfhíocháin in vivo ach tá sé an-tocsaineach d'fhíochán siadaí mar gheall ar scaoileadh spreagthach COS-BA hipirghníomhach i micrithimpeallacht siadaí lag aigéadach34. Go dtí an t-eolas is fearr atá againn, faoi láthair, is annamh a thuairiscítear nana-dhrugaí deartha a chothaíonn an fheidhm seo de shuanacht cheimiteiripeach. Idir an dá linn, tá gnéithe teiripeacha fabhracha iomadúla ag an nanodrug mar ghiniúint 1 O2 feabhsaithe tríd an mbearna fuinnimh (DEST) de Ce6 a laghdú, meitibileacht bitheolaíoch tapa, agus carnadh meall feabhsaithe, rud a d'eascair meascán antitumor éifeachtach agus sábháilte de chóireáil ceimiteiripe agus PDT. Níos tábhachtaí fós, d’fhéadfadh córais ceimiteiripe NP-bhunaithe agus ceimiteiripe/PDT araon imdhíonacht antitumor a ghníomhachtú go héifeachtach trí iomadú cealla CD8þ T TNF-a agus IFN-g-táirgeadh i siadaí príomhúla nó i bhfad i gcéin a éascú. Tá nana-dhrugaí fóta-cheimiteiripeacha in-bhithmhillte, bith-chomhoiriúnacha atá beartaithe, atá díomhaoin uathúil, bithshábháilte agus an-éifeachtach, ag baint amach freagraí suntasacha teiripeacha imdhíonachta sistéamacha, ag oscailt féidearthachtaí tarraingteacha d'fheidhmiú cliniciúil i gcóireáil teiripe ailse i bhfad i gcéin nó i bhfad i gcéin.
Rinne Scéim 1 PDT agus ceimiteiripe de NPanna COS-BA/Ce6 comh-chóimeáilte frith-PD-L1 a chumasú chun imdhíonteiripe sistéamach antamaire a chothú. Is féidir le tabhairt isteach COS intuaslagtha in uisce feabhas a chur go héifeachtach ar ghníomhaíocht cheimiteiripeach BA (léirítear mar leath-sword), agus mar thoradh air sin tá táirge amphiphilic COS-BA hipirghníomhach (claíomh fada). Nuair a comhchruinníodh iad le photosensitizer Ce6 (scabbard), bhí feidhm chliste agus shainiúil "suanacht" ag na nana-chomhthionóil bhlaosc-struchtúrtha agus pH-íogair le tocsaineacht cheimiteiripeach choiscthe chuig gnáthfhíocháin. Ach, a luaithe a tháinig sé agus a spreag an micro-thimpeallacht siadaí aigéadach (Hþ), scaoilfear an táirge amphiphilic COS-BA an-ghníomhach agus beidh ceimiteiripe suntasach mar thoradh air. Ina theannta sin, léirigh na comhthionóil tógtha sárghníomhaíocht PDT le giniúint feabhsaithe ocsaigine singil (1 O2) de bharr na bearna fuinnimh laghdaithe idir na stáit spleodartha singlet agus triplet (DEST) de Ce6. I dteannta le himshuí seicphointe frith-PD-L1, d'fhéadfadh scaoileadh antaiginí a bhaineann le siadaí tar éis cóireála ceimiteiripe/PDT freagairt imdhíonachta sistéamach frith-tumor d'imdhíonteiripe ailse i bhfad i gcéin a ghníomhachtú go héifeachtach.
2. Ábhair agus modhanna
2.1. Sintéis de COS-BA
Aigéad Betulinic (40 mg, 0.1 mmol), EDC (38 mg, 0.2 mmol), agus NHS (17 mg, 0.15 mmol ) a thuaslagadh i 3 ml de N, N-démheitiolformaimíd (DMF). Tar éis é a chorraí ag teocht an tseomra ar feadh 30 nóim, cuireadh 96 mg de thuaslagán uisce COS (1 mL) go réidh isteach sa mheascán agus corraigh ar feadh 24 h. Ansin caolaíodh an meascán imoibrithe le CH2Cl2, agus eastósctar arís agus arís eile é. Rinneadh an ciseal CH2Cl2 a ghalú agus a íonú ar cholún glóthach shilice. Baineadh an BA neamh-imoibrithe ar dtús ag baint úsáide as éitear peitriliam: aicéatón (5:1, v/v) mar eluent, agus ansin athraigh go 3:1 chun bán COS-BA (toradh: 42%) a thabhairt, áit ar aithníodh COS mar dimer ( n Z 2). 1 H NMR (40{{70}} MHz, CDCl3) d: 8.98 (1H, s, BA-28 O] CeNH), 4.73 (1H, s, H -29a), 4.60 (1H, s, H{{-29b), 3.18 (1H, dd, JZ 4.8, 10.8 Hz, H{-3), 2.95e3.93 (8H, m, COS), 2.64 (3H, s, CH3eCOS), 0.76 (3H, s, H-24), 0.83 (3H, s, H-25), 0.90 (3H, s, H{ {69}}), 0.97 (3H, s, H-26), 0.98 (3H, s, H-27), 1.70 (3H, s, H-30). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) d: 179.18 (CO, COS), 156.43 (C- 28), 150.97 (C-20), 109.03 (C{-29), 78.74, 77.04 , 69.32, 69.22, 65.25, 58.14, 55.62, 55.21, 53.65, 53.22, 50.52, 45.96, 44.32,44.11, 41.85, 43.5. 04, 36.39, 35.31, 34.21, 31.81, 31.54, 31.17, 30.28 , 29.09, 27.80, 27.22, 25.74, 25.53, 20.91, 19.48, 18.12, 16.02, 15.87, 15.17, 14.65, 14.62. ESieMS m/z: 814.5871 [M‒6H] (C44H72N2O12).
2.2. Ullmhú NPanna COS-BA/Ce6
Ullmhaíodh NPanna COS-BA/Ce6 comh-chóimeáilte ar mhodh aon-chéim deascaidh. De ghnáth, meascadh ar dtús 5 mL de thuaslagán DMSO Ce6 (33 mmol/L) agus 40 ml de thuaslagán DMSO COS-BA (33 mmol/L). Ina dhiaidh sin, rinneadh an meascán a instealladh go tapa isteach i 1 ml d'uisce ina raibh 10 ml de NaOH (50 mmol/L) faoi ultrasonaic (KQ-250E, ShuMei, Kunshan, an tSín). Tar éis sonication ar feadh 10 nóiméad, fuarthas na NPanna COS-BA/Ce6 trí lártheifneoiriú ag 13,000 rpm (TGL-16G, Xiangyi, Changsha, an tSín) ar feadh 25 nóiméad. Ullmhaíodh foirmlithe eile le cóimheasa difriúla COS-BA le Ce6 de réir an nós imeachta céanna le cóimheas tairiseach NaOH go Ce6 molar de 3:1.
2.3. Línte cille
Soláthraíonn Institiúid na Bithcheimice agus na Bitheolaíochta Ceall, SIBS, CAS (An tSín) línte cille MCF Daonna-7, HepG2, LO2, agus luch 4T1, L929 (an tSín). Saothraíodh MCF-7, HepG2, agus LO2 i meán DMEM le séiream bó féatais 10% (FBS, Gibco) agus 1% antaibheathach peinicillin-streiptimícin (Teicneolaíocht Beatha, SAM) ag 37 C. Saothraíodh 4T1 agus L929 i RMPI-1640 meán leis an gcóimheas céanna thuas.
2.4. Glacadh ceall agus staidéir ar chonairí ionicídeacha
Le himscrúdú a dhéanamh ar ghlacadh ceallach, goraíodh cealla 4T1 nó LO2 le NPanna Ce6 nó COS-BA/Ce6 saor in aisce (tiúchan coibhéiseach de Ce6: 1.7 mg/mL, COS-BA: 19.5 mg/mL, BA: 1{2 .8 mg/mL) le haghaidh amanna éagsúla. Tar éis níocháin, gléasta, agus staining DIPA (#D9542, Sigma), rinneadh na cealla a íomháú faoi mhicreascóp inbhéartaithe fluaraiseacha (FIM) (DSY-2000X, UP Optotech, Changchun, An tSín). Socraíodh an déine fluaraiseachta trí úsáid a bhaint as cíteiméadracht sreafa ag baint úsáide as mionchóras Guava EasyCyte (Merck Millipore, an Ghearmáin). Chun an éifeachtúlacht glactha a chainníochtú, tomhaiseadh an carnadh ceallach BA agus COS-BA ag baint úsáide as HPLC (Agilent 1200, USA). De ghnáth, déileáladh le cealla 4T1 le COS-BA nó BA saor in aisce (BA: 25 mg / mL) ar feadh 0.5 agus 3 h. Tar éis níocháin le PBS, baineadh na millíní cille agus rinneadh homogenization ultrasonaic (JY92-IIN, Scientz Biotechnology, Ningbo, an tSín) le haghaidh lysis cille. Ansin, baineadh COS-BA nó BA le clóraform le haghaidh anailíse HPLC tar éis na samplaí a lyophilizing. Ba é an chéim shoghluaiste ná uisce (0.2% aigéad fosfarach) agus aicéatóintríle ag ráta sreafa de 1.0 mL/min, agus ba iad na cóimheasa toirte comhfhreagracha ná 60:40 agus 15:85 (v/v) chun anailís a dhéanamh ar COS-BA agus BA, faoi seach. . Ba é 213 nm an tonnfhad braite. Le himscrúdú a dhéanamh ar bhealaí endocytic de COS-BA/Ce6 NPs, síolaíodh cealla 4T1 i 6-plátaí tobair agus goraíodh iad ar feadh 24 h sula ndearnadh réamhchóireáil orthu le coscaire endocytosis éagsúla ar feadh 30 nóiméad, lena n-áirítear coscaire micreapinocytosis [50 mmol/L , amiloride iseapróipile eitile (EIPA) (#N132356, Aladdin)], coscaire endocytosis trí mheán clathrin [20 mmol/L, clorpromazine (#C7010, Solarbio)], coscaire endocytosis trí mheán caveola [25 mmol/L, nystatin ( #IN0260, Solarbio)], agus coscaire aigéadaithe lísómach [50 mmol/L, fosfáit chloroquine (#C9720, Solarbio)]35. Ansin, saothraíodh na cealla tuilleadh le 2 mL de COS-BA/Ce6 NPs (Ce6: 1.7 mg/mL, COS-BA: 19.5 mg/mL) ar feadh 2 h agus íomháíodh iad faoi FIM (UP Optotech). Socraíodh na cealla gortha gan coscaire endocytic ag 37 C mar rialú agus ag gor ar theocht íseal (4 C) chun an endocytosis atá ag brath ar fhuinneamh a mheas. Idir an dá linn, rinneadh meán-déine fhluaraiseachta na gceall a chinneadh freisin trí chitoiméadracht sreafa.
cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta
Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil
【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2.5. Measúnacht cíteatocsaineachta
Síolaíodh cealla 4T1 i 96-phláta tobair. Ansin déileáladh leis na cealla le tiúchain éagsúla de NPanna COS-BA ar feadh 24 h. Ina dhiaidh sin, cuireadh 10 mL de lí MTT (# M158055, Aladdin) (5 mg/mL) leis an tobar agus gor é ar feadh 4 h breise, agus ansin cuireadh 150 mL de DMSO leis chun na criostail formazan a thuaslagadh. . Thaifead léitheoir micreaphláta ionsúcht gach tobair ag 492 nm. Don ghrúpa ionradaíochta, rinneadh cóireáil ar na cealla le drugaí ar feadh 4 h, ansin ionradaithe ar feadh 10 nóiméad faoi 675 10 nm light agus goraíodh iad ar feadh 20 h breise. Freagraíonn cítotocsaineacht COS-BA/ Ce6 NPs (1 mg/mL de Ce6 do 11.5 mg/mL COS-BA agus 6.4 mg/mL BA) i gcoinne cealla eile (MCF-7, HepG2, LO2, agus L929) cinneadh freisin ag an measúnú MTT céanna ach amháin le meán difriúil. Idir an dá linn, ríomh na bogearraí CompuSyn 2.0 an t-innéacs teaglaim trí úsáid a bhaint as ríomh teoirim Chou Talalay36.
2.6. Samhlacha ainmhithe
Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir a fhorghníomhú de réir na bprótacal a cheadaigh Coiste um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Ollscoil Leighis Harbin. Cuireadh cealla 4T1 ar fionraí i meán RMPI-1640 agus cuireadh instealladh subcutaneously chuig cúl dheis gach luch baineann BALB/c (18e22 g, 6e7 seachtaine d'aois).
2.7. Íomháú fluaraiseachta in/ex vivo
Rinneadh 200 ml de thuaslagán glúcóis 5% de COS-BA/Ce6 NPs (comhionann Ce6: 0.35 mg/mL, COS-BA: 4.02 mg/mL) a instealladh tríd an vein eireaball isteach i lucha a bhfuil siadaí orthu. Tar éis sin, rinneadh íomháú fluaraiseachta ar shuíomhanna meall ag am réamhshocraithe ag baint úsáide as córas íomháithe ainmhithe in vivo il-mhúnla AniView 100/600 (Guangzhou Biolight Biotechnology Co., Ltd., an tSín) leis an excitation ag 630 nm. Tar éis 24 h iar-instealladh, bailíodh na horgáin mhóra (croí, ae, spleen, scamhóg agus duán) agus meall le haghaidh íomháithe fluaraiseachta ex vivo. Ina theannta sin, rinneadh measúnú freisin ar na híomhánna fluaraiseachta ex vivo de thumaí agus de mhór-orgáin ag amanna éagsúla tar éis instealltaí iv de NPanna Ce6 nó COS-BA/Ce6.
2.8. Ceimiteiripe in vivo/PDT
4T1-lucha a bhfuil (75e100 mm3 ) roinnte go randamach i sé ghrúpa (n Z 5): 1) tuaslagán glúcóis 5%; 2) Ce6; 3) Ce6 le ionradaíocht; 4) COS-BA (40.2 mg/kg, áit a bhfuil BA: 22.3 mg/kg); 5) NPanna COS-BA/Ce6; 6) NPanna COS-BA/Ce6 le ionradaíocht. I gcás gach grúpa, déantar lucha a instealladh le 200 mL de COS-BA/Ce6 NPs (comhionann Ce6: 3.5 mg/kg den chorp) tríd an vein eireaball ar Laethanta 0, 2, agus 4. Do na grúpaí ionradaíochta, ag 4 h. iar-instealladh tar éis gach riaracháin, rinneadh ainéistéiseach ar na lucha go léir le isoflurane, agus rinneadh na suíomhanna meall a ionradaíocht le solas 675 10 nm (150 mW/cm2 ) ar feadh 15 nóiméad. Déantar toirteanna meall agus meáchain choirp na lucha a thaifeadadh gach lá eile freisin. Ríomhtar toirteanna meall leis an bhfoirmle: VZ leithead2 fad/2. Tar éis 14 lá de chóireáil, rinneadh na siadaí a mhuirearú agus a ualú chun an cóimheas coiscthe meall (TIR) a ríomh de réir na cothromóide a úsáidtear go coitianta: TIRZ (1 sampla/rialú) 100%. I gcás ina raibh sampla agus rialú meánmheáchan siadaí gach grúpa cóireáilte agus grúpa tuaslagán uiscí glúcóis 5%, faoi seach.
2.9. Ceimiteiripe in vivo/PDT/imdhíonteiripe
Chun acmhainneacht NPanna COS-BA/Ce6 in éineacht le himdhíonteiripe a léiriú, dearadh an tsamhail siadaí déthaobhach trí instealladh subcutaneous de chealla 4T1 isteach sa chliabhán clé agus ar dheis. Nuair a bhí na siadaí ag druidim le 75e100 mm3, roinneadh na lucha i gcúig ghrúpa. (1) Rialú; (2) COS-BA/ Ce6 NPanna (COS-BA Z 40.2 mg/kg, áit a bhfuil BA Z 22.3 mg/kg); (3) COS-BA/Ce6 NPs þ solas; (4) COS-BA/Ce6 NPs þ frith-PDL1; (5) COS-BA/Ce6 NPs þ frith-PD-L1 þ solas. Ar Lá 0, cuireadh 200 ml de thuaslagán glúcóis 5% (Grúpa 1) nó COS-BA/Ce6 NPs (Ce6 Z 3.5 mg/kg) (Grúpa 2, 3, 4, 5) iv isteach i lucha. Tar éis 4 h iar-instealladh, ionradaithe siadaí ceart Grúpaí 3 agus 4 ar feadh 15 min. Rinneadh na lucha a ainéistéisiú le isoflurane agus rolladh ar thaobh amháin chun na siadaí clé a sheachaint. Ansin cuireadh antasubstaint frith-PD-L1 (BioXcell, uimhir táirge: BE0101, uimhir chlón: 10F.9G2) iv isteach i lucha do Ghrúpaí 4 agus 5 ar Laethanta 2, 4, agus 6 (15 mg in aghaidh an luch in aghaidh an insteallta). Rinneadh monatóireacht ar fhad agus leithead gach meall gach lá eile. Tar éis 14 lá de chóireáil, bailíodh serum fola lucha chun interferon-gáma (IFN-g) (#KMC4021) agus fachtóir neacróis siadaí (TNF-a) (#BMS607-3) a mheas ag baint úsáide as measúnacht ELISA (eBioscience). ). Bailíodh na siadaí, díthiomsaíodh iad, déileáladh leo le maolán lysis cille fola dearga, agus nite le PBS trí lártheifneoiriú. Ansin, dathaíodh fionraí na cille le frith-CD3-FITC(#MA1-10187, clón 145-2C11, eBioscience) agus frith-CD8a-PE (#{12-0081-85, clón 53-6.7, eBitheolaíocht). Ina dhiaidh sin, rinneadh insíothlú citotocsaineach T lymphocyte (CTL) sna siadaí ar dheis agus ar chlé tar éis cóireálacha éagsúla a mheas ag cíteiméadracht sreafa.
3. Torthaí agus plé
3.1. Sintéis, monarú, agus tréithriú NPanna COS-BA/ Ce6
Sa staidéar seo, déanaimid dearadh ar mhóilín beag táirgíochta COS-BA atá bunaithe ar oligosaccharide chitosan intuaslagtha in uisce (COS), a d'fhéadfadh gníomhaíocht cheimiteiripeach aigéad betulinic triterpene pentacyclic (BA) a ardú trí iontógáil cille a fheabhsú trí hidreafaileacht a mhéadú. Ullmhaíodh an COS (céim pholaiméirithe, DP: 2e6) atá in úsáid anseo ag an modh a ndearnadh cur síos air roimhe seo30. Ansin, rinneadh an COS-BA a shintéisiú trí imoibriú comhdhlúthaithe díhiodráitithe. In éineacht leis an anailís phríomh-chomhpháirt COS, measadh go raibh struchtúr ceimiceach COS-BA ina dhéshiúicríd (DP: 2) modhnaithe BA (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S1), a dheimhnigh 1 H NMR, 13C NMR, agus ESIeMS (Fíricí Faisnéise Tacaíochta. S2eS4). Léirigh anailís ar an ionadaí 1 H NMR an comhartha prótón ar leith de COS timpeall 2.64e3.93 ppm agus C] CH2 beanna (4.60, 4.73 csm) de BA, rud a léiríonn an shintéis rathúil COS-BA (Fíor 1 A). Chun an t-imoibrí frith-tumóra sineirgistigh cóimeáilte COS-BA/Ce6 NPs a ullmhú, baineadh úsáid as cur chuige ath-fhlaiseadh ildánach trí chomhoibriú le fóta-íogair ardéifeachtúil Ce6. Trí na cóimheasa molar tosaigh a athrú, d'fhéadfadh foirmlithe comhthionól COS-BA/Ce6 araon nanastruchtúir sféarúla a fhoirmiú le méideanna modhnaithe ( Fíor. 1 B agus Eolas Tacaíochta Fíor. S5 ). Trasna cóimheasa ionchuir éagsúla COS-BA/Ce6, bhí na trastomhais hidreafaileacha de NPanna COS-BA/Ce6 gar do 200e300 nm le poitéinseal z diúltach. Ag cur san áireamh gur léirigh NPanna a ullmhaíodh ag foirmliú 8:1 innéacs ildispersity níos ísle (PDI, 0.143) le méid réasúnta níos lú (249 nm), bhí gá le méid leordhóthanach de ghníomhaire ceimiteiripeach COS-BA freisin don chóireáil chomhcheangailteach. Mar sin, roghnaigh muid foirmlithe COS-BA/Ce6 (8:1) don staidéar seo a leanas. Faoin leas iomlán a bhaint, léirigh NPs COS-BA/Ce6 dáiltí méid cúng (Fíor 1 C) agus dea-intuaslagthacht in uisce, rud a léiríonn a nádúr collóideach ( Fíor. 1 D ). Chun na cúiseanna atá taobh thiar den chomhthionól rathúil seo a fhiosrú, rinneadh imscrúdú ar iompar féintionóil príomhúil COS-BA saor in aisce ag baint úsáide as scanadh micreascópachta leictreon (SEM) (Fíor 1E), a mhol go bhféadfadh COS-BA nana-aonfhoirmeach a chruthú. sféar w168 nm, rud a thugann le tuiscint nach n-athraíonn modhnú ceimiceach COS cumas féintionóil BA é féin (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S6). Is í an mhaoin sin a chothaíonn tógáil rathúil na gcomhthionól sa deireadh. Go háirithe, seachas an nanastruchtúir soladach arna dhearbhú ag micreascópacht leictreoin tarchurtha (TEM), léirigh COS-BA/ Ce6 NPanna struchtúr sliogáin ar leith saor ó COS-BA NPs, agus bhí tiús an bhlaosc meánach thart ar 2.35 nm. Tá achoimre ar an tréithriú fisiceimiceach eile i bhFíor 1F. Thairis sin, léirigh NPanna COS-BA/Ce6 acmhainneacht z diúltach de 5.38 mV agus méid hidridinimiciúil w249 nm, níos airde ná an méid a fuarthas ó SEM (w182 nm). Ag an am céanna, b'ionann éifeachtúlachtaí luchtaithe agus imchapaithe Ce6 8.1 agus 96%, faoi seach, mar a chinntear le crómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta (HPLC). Chomh maith leis sin, dhearbhaigh sonraí FT-IR (Fíor 1G) an comhthionól seo a thuilleadh toisc gur thaispeáin NPanna COS-BA/Ce6 na beanna tréith C]N, CeN, agus C]CH de Ce6 ag 1633, 1078, agus 633 cm 1 , faoi seach.
cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta
3.2. Meicníocht comh-chéile agus foirmiú an struchtúir bhlaosc
Ina dhiaidh sin, chun an mheicníocht comhthionóil a thuiscint níos fearr, rinneamar imscrúdú ar phróiseas foirmithe príomhúil NPanna ar dtús. Fuair muid amach go bhféadfadh comhthionól COS-BA le Ce6 a bheith spontáineach toisc go bhféadfadh an dá speiceas seo nanostructure sféarúil a fhoirmiú fiú amháin más rud é gan sonication (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S7), a d'fhéadfadh a bheith mar gheall ar an athrú diúltach fuinnimh saor in aisce Gibbs (DG. ) i gcomhthionóil37. Mhol an tionól spontáineach seo freisin idirghníomhaíocht idirmhóilíneach níos láidre idir COS-BA agus Ce6. Go ginearálta, is iad na hidirghníomhaíochtaí idirmhóilíneacha i gcomhthionóil féin (nó comh-) supramóilíní ná p‒p-cruachta neamhchomhfhiúsacha, nascáil hidrigine, agus fórsaí van der Waals 38,39. Don anailís seo, rinneamar imscrúdú ansin ar ionsú UV de COS-BA/Ce6 NPs (Fíor 1H agus F), a mhol bannaí dearg-aistrithe Soret (410 nm) agus Qy (667 nm) i gcomparáid le saor in aisce Ce6 (405 agus 665 nm, faoi seach). Idir an dá linn, is féidir an t-ionsú suntasach dearg-aistrithe de COS-BA a fháil freisin, rud a léiríonn cruachadh pp idirmhóilíneach féideartha idir COS-BA agus Ce640. Ina theannta sin, tar éis gor leis an dromchlaghníomhaithe sulfáit dodeicile sóidiam (SDS, 0.2% w/v) (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S8), léirigh COS-BA/Ce6 NPs banna Qy nua-aistrithe gorm ag 641 nm agus an fhluaraiseacht a d'aisghabh go mór, rud a léiríonn gur chuir na hidirghníomhaíochtaí hidreafóbach leis an gcomhthionól freisin28. Ós rud é na hidirghníomhaíochtaí noncovalent comhthiomsaitheach, léirigh comh-tionóil múchadh fluaraiseacht iontach (98.2%) in uisce ( Fíor. 1 I ). I dteannta a chéile, tá sé réasúnta a chreidiúint go bhféadfadh cruachta p‒p agus idirghníomhaíochtaí hidreafóbach a bheith ar na príomhfhórsaí tiomána chun comhthionóil a thógáil. Ina dhiaidh sin, chun an próiseas tionóil a fheiceáil ar bhealach níos intuigthe agus na bunchúiseanna a d’fhéadfadh NPanna bhlaosc-struchtúrtha a léiriú, rinneamar múnla ionsamhlúcháin dinimic mhóilíneach (MD) simplithe ina raibh 16 móilín COS-BA optamaithe agus dhá Ce6 breise i mbosca uisce. . Ar dtús, rinneamar measúnú ar an idirghníomhú féideartha / ceangailteach de COS-BA féin-tionóil laistigh de 5 ns ama insamhalta (Fig. 2 A agus Tacaíocht Faisnéise Fíor. S9). Fuaireamar amach, ach amháin i gcás bannaí iomadúla hidrigine intramolecular sa chodán COS, d'fhéadfaí roinnt péirí de bhannaí H idirmhóilíneacha idir COS-BA a thabhairt faoi deara freisin (Fíor 2B agus Faisnéis Tacaíochta Fíor. S10), a léirigh go bhféadfadh nascáil hidrigine a bheith ina cheann. de na príomhfhórsaí tiomána chun NPanna COS-BA a fhoirmiú. Go háirithe suimiúil, i bhféintionóil COS-BA, cruthaíonn gach móilín COS-BA struchtúr siméadrach de réir dealraimh (Fíor 2C). Spreag an feiniméan iontach seo sinn chun iniúchadh a dhéanamh ar an gcaidreamh féideartha idir an mhaoin seo agus bunú NPanna COSBA struchtúrtha sliogán. Ansin, rinneamar iarracht aonaid an bhosca a leathnú. Ar ionadh, socraíodh na boscaí ceangailte comhdhéanta de mhóilíní COS-BA ar bhealach rialta agus mar thoradh air sin bhí struchtúir líonra log "orthogonal" (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S11). Níos tábhachtaí fós, rinneamar tiús na móilíní bhlaosc a ríomh go randamach agus fuarthas amach go raibh siad ag teacht leis an TEM (w2.35 nm) ( Fíor. 2D). D’fhéadfadh go mbeadh an claonadh seo struchtúir logacha líonra a fhoirmiú freagrach as NPanna sliogstruchtúrtha a fhoirmiú. Chun an smaoineamh seo a thástáil, insamhladh struchtúr MD comhthionóil COS-BA/ Ce6 (Fíor 2E agus Faisnéis Tacaíochta Fíor. S12). Cosúil le féin-tionóil COS-BA, fuarthas líon mór de ionmhóilíneacha agus idirmhóilíneacha H-bannaí freisin sna comh-tionóil (Fíor 2 F agus Tacaíocht Faisnéise Fíor. S13). Ina theannta sin, breathnaíodh an cruachadh pp féideartha idir C]C de COS-BA agus an fáinne aramatach de Ce6 sna comhthionóil (Fíor 2G), atá ag teacht leis na sonraí ó imscrúduithe UV roimhe seo. Tar éis líon na mboscaí a leathnú, is féidir struchtúir líonra log den chineál céanna a fháil fós, ach amháin le rialtacht agus orthogonality laghdaithe (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S14). B’fhéidir gurb é seo an chúis a d’fhéadfadh a bheith le moirfeolaíocht neamh-éide na NPanna COS-BA/Ce6 i gcomparáid le NPanna COSBA. Thairis sin, tá an t-achar móilíneach bhlaosc-ciseal freisin gar do thiús bhlaosc (w2.35 nm) de NPanna mar a fheictear ag baint úsáide as an TEM (Fíor 2H). I dteannta a chéile, rinneamar tuairimíocht go bhféadfadh foirmiú NPanna COS-BA/Ce6 struchtúrtha sliogán nó NPanna COS-BA a bheith inchurtha go mór i leith an chlaonadh seo de mhóilíní le chéile i struchtúir ghréasán log-bhlaosc.
Fíor 1 Déantúsú agus tréithriú nana-chomhthionóil oligosaccharides chitosan-modhnaithe d'aigéad betulinic (COS-BA) táirgí-idirghabhála COS-BA/Ce6 NPs. (A) Na príomhshuímh mhéadaithe de 1 H NMR de COS-BA. (B) NPanna COS-BA/Ce6 comhchruinnithe a ullmhú le cóimheasa éagsúla COS-BA/Ce6. (C) Dáileadh méide NPanna COS-BA/Ce6 ag baint úsáide as COS-BA agus Ce6 (cóimheas molar, 8:1) mar bhloic thógála. (D) Léiríonn tuaslagthacht uisce agus éifeacht Tyndall na gcomhthionóil, nádúr collóideach. (E) Íomhánna SEM agus TEM d’fhéintionóil COS-BA saor in aisce agus NPanna COS-BA/Ce6 comh-chóimeáilte. (F) Achoimre ar airíonna fisiceimiceacha NPanna COS-BA/Ce6. (G) speictrim FT-IR, (H) speictrim UV Vis, agus (I) speictrim astaíochta fluaraiseachta de Ce6, COS-BA saor in aisce, agus NPanna COS-BA/Ce6 atá comhchruinnithe in uisce.
Fíor 2 Struchtúir (A) féin-chóimeálacha COS-BA agus (E) NPanna COS-BA/Ce6 comhchruinnithe tar éis insamhalta dinimic mhóilíneach (MD) ar feadh 5 ns le cóimheas aonad struchtúrach molar de 8:1 (COS-BA /Ce6, arna ríomh bunaithe ar éifeachtacht luchtaithe Ce6). Úsáideadh an tsamhail líne le haghaidh H2O agus seasann na samhlacha bata do mhóilíní COS-BA nó Ce6, áit a bhfuil na hadaimh C de Ce6 lipéadaithe le corcra. An fhaisnéis maidir le bannaí hidrigine idir móilíní COS-BA ina (B) ina gcomhchóimeálacha féin agus (F) COS-BA/Ce6 NPanna. (C) Struchtúr dealraitheach siméadrach socrú móilíneach COS-BA tar éis insamhalta MD. (G) Léiríonn idirghníomhaíochtaí móilíneacha féideartha idir COS-BA agus Ce6 cruachadh pp féideartha. Tiús léirithe na móilíní bhlaosc i struchtúr líonra log "orthogonal" tar éis síneadh a chur le boscaí MD comhfhreagracha de (D) féin-chomhthionóil COSBA saor in aisce agus (H) comhthionóil NP COS-BA/Ce6.
3.3. Meicníocht fuinnimh de ghiniúint 1 O2 feabhsaithe
Ansin, rinneamar scrúdú breise ar ghiniúint ocsaigine singlet (1 O2), ceann de na speicis ríthábhachtacha ocsaigine imoibríocha (ROS) d'fheidhmíocht PDT ag baint úsáide as DPBF (1,3-diphenylisobenzofuran) mar thaiscéalaí. Tar éis ionradaíocht leanúnach ar réitigh mheascáin COS-BA/ Ce6 NPs le DPBF, laghdaigh an ionsú UV de DPBF i déine, rud a léiríonn 1 giniúint O2 (Fíor 3 A). Tar éis comparáid a dhéanamh leis an tagairt gorm meitiléine (MB), ríomhadh an F ( 1 O2) de COS-BA/ Ce6 NPanna mar 0.26, beagán níos airde ná an saor Ce6 (FZ0.19) (Fíor 3B). Go ginearálta, rachaidh an fuinneamh a ionsúnn fóta-íogairí faoi thrí chonair scíthe lena n-áireofar fluaraiseacht, éifeacht teasa trí mhaolú creathadh, agus giniúint ROS trí thrasnú idirchórais (ISC)41. Ag teacht leis an astaíocht fhluaraiseachta atá múchta go suntasach, níor chuir NPanna COS-BA/ Ce6 aon éifeacht téimh in uisce chun cinn (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S15), rud a thug le tuiscint próiseas feabhsaithe ISC tar éis Ce6 a chomhthionól le COS-BA, rud a thug le tuiscint. don ghiniúint 1 O2 feabhsaithe. Chun meicníocht mhóilíneach éifeacht den sórt sin a shoiléiriú a thuilleadh, rinneamar iarracht an tsamhail aonair-mhóilín féideartha COS-BA/Ce6 a bharrfheabhsú agus a ríomh comhdhéanta de chruachadh pp féideartha a fhaightear ó insamhalta MD de réir teoiric fheidhmiúil dlúis (DFT) (Fig. 3C) . Go hiontach, léirigh COS-BA/Ce6 ionsú UV inbhraite dearg-aistrithe de 581.24 nm ná mar a bhí ag Ce6 saor in aisce (579.30 nm), rud a thugann le fios gur tharla cruachadh pp (Fíor 3D). Cé gur léirigh céimseata íoslaghdaithe fuinnimh COS-BA/Ce6 difríochtaí beaga struchtúracha le cumraíocht MD ionchuir, bhí an pstacking sainiúil idir bannaí C]C nó C]O de COS-BA le fáinne porphine Ce6 fós inbhraite, rud a bhailíochtú tuilleadh go raibh an thuas p‒p cruachta is féidir. Idir an dá linn, tá sé léirithe le déanaí go bhféadfadh an éifeachtúlacht mhéadaithe leictreon-dheonaithe trí chruachadh p‒p an próiseas ISC a éascú42, agus an ráta ISC (KISC) i gcomhréir le (1/DEST) 2,43. Is é sin, feabhsóidh an bhearna fuinnimh níos ísle (DEST) de fhótaisintéisitheoir an próiseas ISC chun giniúint éifeachtach ROS a chur chun cinn. Ríomhaimid ina dhiaidh sin an stát singil corraithe is ísle (S1) agus an stát triplet (T1) de Ce6 agus COS-BA/Ce6 (Fíor 3E), faoi seach. Léirigh na torthaí gur léirigh COS-BA/Ce6 DEST laghdaithe de 1.1892 eV i gcomparáid le Ce6 saor in aisce (1.2001 eV), rud a dhearbhaíonn an próiseas feabhsaithe ISC. Tá laghdú DEST ina chuidiú le haghaidh táirgeadh 1 O2, atá fíoraithe freisin i nanaphotosensitizers eile44. Le chéile, is cosúil go laghdóidh an p-cruachta DEST de Ce6 tar éis comhthionól le COS-BA, rud a fhágann go dtiocfaidh feabhas ar ghiniúint 1 O2.
![Figure 3 Energy mechanism of improved 1 O2 generation induced by COS-BA/Ce6 NPs. (A) UV Vis spectra of photodecomposition of 1,3-diphenylisobenzofuran (DPBF) after prolonged irradiation of COS-BA/Ce6 NPs. (B) In the first-order plots of DPBF UV absorption changes (DOD), the 1 O2 yield was evaluated using methylene blue (MB) (F Z 0.52) in DMSO as the reference compound. (C) Energy-minimized structures of a possible single-molecule COS-BA/Ce6 model viewed from the side and front, which was obtained according to the initial molecular configuration between Ce6 with COS-BA after MD simulation and following DFT calculations. (D) Predicted UV Vis absorption spectra transitions (vertical bars) of free Ce6 and an optimized COS-BA/Ce6 model. (E) Calculated energy levels of their lowest excited singlet state (S1) and lowest triplet state (T1), respectively, [Gaussian 09/B3LYP/6-31G (d, p)]. Where DEST was calculated as ES1 ET1.](/Content/uploads/2023842169/20231220105921392c9765b52f4ceb80db09f348c7b92e.png "Figure 3 Energy mechanism of improved 1 O2 generation induced by COS-BA/Ce6 NPs. (A) UV Vis spectra of photodecomposition of 1,3-diphenylisobenzofuran (DPBF) after prolonged irradiation of COS-BA/Ce6 NPs. (B) In the first-order plots of DPBF UV absorption changes (DOD), the 1 O2 yield was evaluated using methylene blue (MB) (F Z 0.52) in DMSO as the reference compound. (C) Energy-minimized structures of a possible single-molecule COS-BA/Ce6 model viewed from the side and front, which was obtained according to the initial molecular configuration between Ce6 with COS-BA after MD simulation and following DFT calculations. (D) Predicted UV Vis absorption spectra transitions (vertical bars) of free Ce6 and an optimized COS-BA/Ce6 model. (E) Calculated energy levels of their lowest excited singlet state (S1) and lowest triplet state (T1), respectively, [Gaussian 09/B3LYP/6-31G (d, p)]. Where DEST was calculated as ES1 ET1.")
Fíor 3 Meicníocht fuinnimh de ghiniúint feabhsaithe 1 O2 arna spreagadh ag NPanna COS-BA/Ce6. (A) speictrim UV Vis de chomhdhéanamh fótadhianaithe de 1,3-défheinilisobenzofuran (DPBF) tar éis ionradaíocht fhada ar COS-BA/Ce6 NPs. (B) Sna ceapacha céad-ordú d'athruithe ionsúcháin UV DPBF (DOD), rinneadh meastóireacht ar an toradh 1 O2 ag baint úsáide as gorm meitiléine (MB) (FZ 0.52) i DMSO mar an cumaisc tagartha. (C) Struchtúir íoslaghdaithe fuinnimh de mhúnla COS-BA/Ce6 aon-mhóilín féideartha a breathnaíodh ón taobh agus ón taobh tosaigh, a fuarthas de réir na cumraíochta móilíneach tosaigh idir Ce6 le COS-BA tar éis insamhalta MD agus ríomhanna DFT i ndiaidh a chéile. (D) Aistrithe speictrim ionsúcháin UV Vis (barraí ingearacha) de Ce6 saor in aisce agus samhail optamaithe COS-BA/Ce6. (E) Leibhéil fuinnimh ríofa dá staid shingil sceite is ísle (S1) agus an staid triplet is ísle (T1), faoi seach, [Gaussian 09/B3LYP/6-31G (d, p)]. An áit ar ríomhadh DEST mar ES1 ET1.
3.4. Saintréithe suanachta ceimiteiripe
Ina dhiaidh sin, chun an coincheap dearaidh a bhailíochtú sa staidéar seo go bhféadfadh forbairt mhóilín COS-BA amfaphilic éifeacht theiripeach BA a mhéadú go héifeachtach trí iontógáil cille a fheabhsú trí hidreafaileacht a mhéadú, agus ag an am céanna tógáil bhreise COS-BA/Ce6 spreagthach freagrúil agus go hiomlán hidreafail. D'éascaigh NPanna a suanacht i ngnáthfhíocháin agus gníomhachtú i suíomhanna meall. Chun an hipitéis seo a thástáil, rinneamar imscrúdú ar dtús ar iompar scaoileadh drugaí COS-BA/Ce6 NPs i réitigh mhaoláin éagsúla (Fíor 4 A). Léirigh na torthaí gur léirigh NPanna COS-BA/Ce6 iompar a fhreagraíonn do pH le scaoileadh carnach Ce6 de 88% ag pH 5.6 agus 57% ag pH 7.4 tar éis 24 h, faoi seach. Is dócha gur eascair an ghné seo as scrios na mbannaí hidrigine iomadúla a bhí ann i NPanna COS-BA/Ce6 tar éis tabhairt isteach Hþ45 aigéadach, rud a fhágann gur tháinig méadú ar scaoileadh Ce6 (Fíor 4 B). Deimhníodh é seo a thuilleadh le díchóimeáil NPanna COS-BA/Ce6 tar éis gor i dtimpeallachtaí aigéadacha go díreach (Fíor 4 C). D’fhéadfadh an ghné seo a fhreagraíonn do pH a bheith tairbheach do theiripe éifeachtach fhrith-tumor mar gheall ar mhicrea-thimpeallacht siadaí lag aigéadach34. Idir an dá linn, bhí cobhsaíocht níos fearr ag COS-BA/Ce6 NPanna mar níorbh fhéidir aon athruithe suntasacha méide nó PDI a thabhairt faoi deara tar éis gor i PBS agus 1640-mheán cultúir cille RMPI ar feadh 10 lá (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S16), rud a bheadh tábhachtach as a n-úsáid fhéideartha le haghaidh tuilleadh feidhmeanna bithleighis. Ina dhiaidh sin, rinneadh imscrúduithe breise trí mheasúnú a dhéanamh ar chiteatocsaineacht BA lipophilic saor in aisce (uillinn theagmhála q: 133.3 ) agus COS-BA (q: 52 ) ( Fíor. 4D ) trí mheasúnuithe caighdeánacha meitile thiazolyl-diphenyl tetrazolium tetrazolium (MTT). Mar atá tuartha, i gcás cealla ailse 4T1 nó gnáth-heipitocítí LO2, níl aon ghníomhaíocht frith-ailse ag dáileoga réasúnta íseal go bunúsach ag COS aonair. D’fhéadfadh sé seo tarlú de bharr éifeachtaí frith-iomadaithe COS a bheith á ngníomhú trí chonair chomharthaíochta NF-kB a aslú ach amháin ag tiúchan arda (thart ar leibhéal na milleagraim)30. De bharr an méid, go bhfeidhmíonn COS-BA cíteatocsaineacht thar a bheith feabhsaithe le luachanna IC50 an-íseal (6.03 mg/mL do 4T1 agus 9.92 mg/mL do LO2) i gcomparáid leo siúd de BA (17.63 mg/mL do 4T1 agus 20.53 mg/mL do LO2) fiú. ag na comhchruinnithe maise céanna (Fíor 4E agus J). Thug na torthaí a fuarthas le tuiscint go gcuireann modhnú COS intuaslagtha in uisce go mór le héifeachtúlacht glactha ceallacha BA lipophilic, rud a fhágann go bhfuil gníomhaíocht láidir in aghaidh ailse COS-BA. Chun an éifeachtúlacht glactha a chainníochtú, chinn HPLC (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S17) carnadh BA nó COS-BA laistigh de chealla 4T1 go díreach. Thacaigh na torthaí go soiléir go léiríonn COS-BA amfaphilic iontógáil i bhfad níos airde ná saor-BA (thart ar 3.6-huaire tar éis 3 h de gor), rud a léiríonn gníomhaíocht cheimiteiripeach fheabhsaithe COS-BA. Tugadh tacaíocht bhreise don chonclúid thuas ag cíteatocsaineacht feabhsaithe go suntasach COSBA amfafilic i gcoinne cealla ailse HepG2 agus MCF-7 (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S18), atá comhsheasmhach go maith leis an gcoincheap dearaidh. Tar éis comhthionól le Ce6, fuair muid amach go léiríonn NPanna gan ionradaíocht COS-BA/Ce6 go suntasach bac ar cíteatocsaineacht i gcoinne cealla ailse 4T1 i gcomparáid leis an COS-BA comhionann, go háirithe ag 11.5 mg / mL, ach níor cuireadh isteach ar an mbunghníomhaíocht PDT ( Fíor 4F). Chun an feiniméan seo a bhailíochtú níos iomláine, rinneamar imscrúdú breise ar chiteatocsaineacht in vitro NPanna COS-BA/Ce6 i gcoinne cealla ailse eile lena n-áirítear MCF-7 agus HepG2. Díol spéise é gur léirigh COS-BA amfaphilic cíteatocsaineacht an-láidir i gcoinne cealla MCF-7 (Fíor 4G), ach tháinig laghdú suntasach ar ghníomhaíocht cheimiteiripeach tar éis comhthionól le Ce6, ie, COS-BA/Ce6 NPanna neamh-irradaithe. Breathnaíodh torthaí comhchosúla freisin i gcealla HepG2 ach le laghdú beag (Fíor 4H). Chun tacú leis na conclúidí thuas a thuilleadh, rinneamar measúnú freisin ar éifeachtaí ceimiteiripeacha nana-tionóil agus COS-BA i gcoinne gnáthchealla fibroblast L929 luch agus heipitocytes LO2 daonna (Fíor 4I). Léirigh na torthaí gur laghdaigh na NPanna COS-BA/Ce6 cóimeáilte go suntasach an bundhruga amfaphilic COS-BA an-tocsaineach, rud a léirigh bith-chomhoiriúnacht den scoth. Trí anailís a dhéanamh ar an cíteatocsaineacht, bhí luachanna IC50 an COS-BA amphiphilic i bhfad níos ísle ná mar a bhí na NPanna COS-BA/Ce6 comh-chóimeáilte beag beann ar ailse nó gnáthchealla (Fíor 4J). Is é sin le rá, is féidir le tógáil cóimeálacha nana-freagracha go hiomlán hidreafhile agus spreagthach ard-chíteatocsaineacht COS-BA an druga amphiphilic a chosc go héifeachtach roimh ré. Ag cur san áireamh an ghné shainiúil a fhreagraíonn do pH, is cosúil go mbeidh COS-BA/Ce6 NPanna díomhaoin i ngnáthfhíocháin le tocsaineacht ceimiteiripe íseal atá ag teastáil, ach gníomhach i bhfíocháin siadaí mar gheall ar scaoileadh spreagúil COS-BA an-tocsaineach sa siada lag aigéadach. micrithimpeallacht. Nuair a chuirtear le chéile, murab ionann agus an nuafheidhmiú imoibrithe ceimiteiripeacha a thuairiscítear go forleathan a bhfuil gníomhaíocht frith-ailse feabhsaithe acu22,23, ní hamháin go léiríonn nana-chomhthionóil idirghabhála COS-BA amphiphilic tréith "suanacht" cliste le héifeachtaí ceimiteiripe insidious ach coinníonn siad gníomhaíocht PDT speisialaithe freisin, rud a léiríonn acmhainneacht ollmhór. le haghaidh teiripe cliste antitumor.
Fíor 4 (A) Próifílí scaoilte in vitro Ce6 ó COS-BA/Ce6 NPanna i PBS (pH 7.4, 6.5 nó 5.6) ina bhfuil Tween 80 (0.5%, v/v) ag 37 C. (B) An mheicníocht fhreagrúil pH a d’fhéadfadh Hþ a spreagadh dí-chomhthionól NPanna. (C) Díchóimeáil COS-BA/Ce6 NPanna tar éis gor díreach in uisce thart ar pH 4.{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{}}}}}). (D) Uillinn teagmhála na NPanna saor in aisce BA, Ce6, COS-BA, agus COS-BA/Ce6, faoi seach. (E) Citeatocsaineacht cille BA, COS, agus amphiphilic COS-BA saor in aisce i gcoinne ailse ionadaíoch 4T1 agus gnáthchealla LO2. Inmharthanacht cille (F) 4T1, (G) MCF-7, (H) cealla ailse HepG2 tar éis a bheith gortha le NPanna COS-BA, COS-BA/Ce6 saor in aisce le/gan ionradaíocht ag tiúchan COS-BA coibhéiseach léirithe ar feadh 24 h. (I) Cíteatocsaineacht cille NPanna COS-BA/Ce6 saor in aisce COS-BA, neamh-ionradaithe i gcoinne gnáthchealla LO2 agus L929. (J) Anailís IC50 ar COS-BA in aghaidh ailse agus gnáthchealla. Cuirtear sonraí in iúl mar mhodh SD (n Z 6). Léiríonn *P ˂ 0.05, **P ˂ 0.01, agus ***P ˂ 0.001 na difríochtaí suntasacha.
Chun iniúchadh a dhéanamh ar na cúiseanna a d'fhéadfadh a bheith taobh thiar den tréith suanachta ceimiteiripe seo, rinneadh meastóireacht leanúnach ar iompar glactha cheallacha COS-BA/Ce6 NPanna trí gor le cealla ailse 4T1. Léirigh na torthaí, cé gur léirigh COS-BA/Ce6 NPanna múchadh fluaraiseachta iontach, léirigh siad fós éifeachtacht phagocytic feabhsaithe i gcomparáid le Ce6 saor in aisce mar gheall ar an fhluaraiseacht dearg cíteaplasma níos láidre, arna chinneadh ag anailís chainníochtúil cíteiméadracht sreafa (Fig. 5 A). D’fhéadfaí an inmheánú ceallach feabhsaithe seo de NPanna a chur i leith endocytosis21. Le chéile, rinneamar tuairimíocht, cé gur léirigh comhthionóil an-intuaslagtha in uisce COS-BA/Ce6 NPs (uillinn teagmhála q: 36.7 ) endocytosis ceallacha feabhsaithe ná lipophilic Ce6 (q: 132.6, gar do BA), éifeachtacht fagaicíotóis laghdaithe. D’fhéadfadh go mbeadh NPanna le feiceáil i gcomparáid le móilín amfaphilic COS-BA, rud a d’fhág go bhfuil an cíteatocsaineacht cheimiteiripeach de NPanna COS-BA/Ce6 faoi chois. Is é sin le rá, an éifeachtúlacht glacadh cille ó ard go híseal mar seicheamh den sórt sin: amphiphilic COS-BA, hydrophilic COS-BA/Ce6 NPs, lipophilic BA nó Ce6. Níos tábhachtaí fós, d’fhéadfadh go mbeadh dí-chomhthionól neamhleor NPanna cealla ina chúis thábhachtach eile leis an éifeacht cheimiteiripeach lagaithe, agus d’fhéadfadh baint a bheith acu go léir le suanacht ceimiteiripe cliste NPanna COS-BA/Ce6. Thairis sin, toisc go ndearnadh díchóimeáil NPanna go sonrach i dtimpeallacht aigéadach na gcealla meall, chun an ghné a fhreagraíonn do pH a léiriú, rinneamar iarracht tuilleadh comparáid a dhéanamh idir éifeachtaí glactha NPanna COS-BA/Ce6 i ngnáthchealla LO2 (Fíor 5 B). . Mar sin féin, níor léirigh NPanna COS-BA/Ce6 go suntasach fluaraiseacht dearg Ce6 i gcealla LO2. I gcodarsnacht leis sin, bhí iompar glactha LO2 cosúil le hiompar cealla ailse 4T1, rud a thugann le tuiscint gur féidir le COS-BA/Ce6 NPanna díchóimeáil fiú i gcealla gnáth, rud a d’fhéadfadh a bheith mar thoradh ar na hurranna intracellular pH lag aigéadach (endosomes/líosóim) atá ann cheana féin laistigh. ailse agus gnáthchealla araon46. Ós rud é go mbraitheann glacadh ceallacha NPanna ar an bpróiseas endocytosis, d'fhéadfadh nach gcuirfeadh an gor drugaí díreach béim ar fhreagraí pH COS-BA/Ce6 NPanna ag an leibhéal ceallacha. Mar sin féin, tá micrea-thimpeallacht an siadaí (TME) an-aigéadach i gcomparáid le gnáthfhíocháin47. Beag beann ar ailse incheallach nó TME, is féidir le NPanna COS-BA/ Ce6 a bheith freagrach ó thaobh pH agus díchóimeáil chun scaoileadh COS-BA atá an-tocsaineach a spreagadh. De bharr an méid, i ngnáthfhíocháin, ní fhéadfaí NPanna COS-BA/Ce6 a dhíchóimeáil ach amháin tar éis dul isteach i ngnáththimpeallacht cheallacha, rud a laghdódh an dóchúlacht go scaoilfí COSBA. Dá bhrí sin, tá sé le tuiscint againn go bhfuil tréith suanachta ceimiteiripe COS-BA/Ce6 NPs do mhicrea-thimpeallacht an meall bailí agus iontaofa, agus go bhfuil an smaoineamh dearaidh sa staidéar seo indéanta.
3.5. Éifeachtúlacht frith-ailse ceimiteiripe in vitro/PDT NPanna COS-BA/ Ce6
Ina theannta sin, roimh éifeachtúlacht frith-ailse in vitro ceimiteiripe/PDT de NPanna COS-BA/Ce6 agus chun an mheicníocht endocytosis a nochtadh tuilleadh, déanaimid staidéar ar na ceithre phríomhbhealach endocytosis trí choscóirí endocytic comhfhreagracha a chur leis lena n-áirítear clorpromazine (clathrin-mediated), fosfáit chloroquine ( inhibitor aigéadú lysosome), nystatin (caveolae-mediated), agus inhibitor macropinocytosis EIPA (eitilisopropyl amiloride) (Fíor 5 C agus D). Tugaimid faoi deara go bhféadfadh tabhairt isteach nystatin agus clorpromazine bac níos éifeachtaí a chur ar éifeachtúlacht phagocytic ná EIPA agus fosfáit chloroquine, rud a léiríonn laghdú suntasach ar fhluaraiseacht cheallacha i gcomparáid le gnáth-37 C. Léirigh na torthaí seo go ndearnadh NPanna COS-BA/Ce6 a inmheánú trí mheicníochtaí iolracha, go príomha trí na cosáin endocytosis trí mheán na clathrin agus caveolae. Ós rud é gur tháinig méadú ar ghiniúint 1 O2 trí idirghníomhaíochtaí idirmhóilíneacha, taispeánann NPanna COS-BA/Ce6 táirgeacht ROS idircheallacha feabhsaithe go mór ná toradh Ce6 mar atá léirithe ag fluaraiseacht glas níos láidre an tóireadóir DCFH (Fíor 5E), rud a thugann éifeachtúlacht fhótadinimiciúil níos airde le fios. Léiríonn measúnachtaí MTT go ndéanann NPanna COS-BA/Ce6 faoi ionradaíocht éifeacht coiscthe thar a bheith feabhsaithe ar chealla 4T1 ná mar a bhíonn ag Ce6 coibhéiseach, agus le cíteatocsaineacht measartha gan ionradaíocht ( Fíor. 5 F ). Go suntasach, bhí an IC50 de Ce6 (0.53 mg/mL) i NPanna COS-BA/Ce6 i bhfad níos ísle ná Ce6 saor in aisce (1.39 mg/mL) (Fíor 5G), ag moladh éifeachtúlacht PDT feabhsaithe go mór, a bhí léirithe go foirfe ag cíteatocsaineacht NPanna COSBA/Ce6 i gcoinne cealla ailse daonna MCF-7 agus HepG2 (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S19). Mar an gcéanna, i gcomparáid le Ce6 saor in aisce, breathnaíodh na luachanna IC25, IC50, agus IC75 réasúnta níos ísle freisin i gcomhthionóil (Fíor 5G). Idir an dá linn, i gcomparáid le Ce6 PDT amháin agus ceimiteiripe aonair de NPanna sa dorchadas, bhain NPanna COS-BA/Ce6 faoi ionradaíocht ceimiteiripe/PDT comhcheangailte níos éifeachtaí amach i gcoinne na dtrí chealla ailse thuas, rud a léirigh sineirgíocht (innéacs teaglaim: CI ˂ 1) ( Fíor 5I). Thairis sin, dheimhnigh an dé-ruaimniú fluaraiseachta cille beo/marbh ag baint úsáide as eistear calcein-aicetoxymethyl (calcein-AM) agus iaidíd propidium (PI) go bhféadfadh NPanna COS-BA/Ce6 apoptosis cille agus neacróis a aslú go héifeachtach, toisc go raibh na cealla cóireáilte beagnach dhaite. le comhartha fluaraiseachta PI dearg nuair a shaothraítear é ar feadh 10 u breise tar éis ionradaíochta (Fig. 5H). Idir an dá linn, bhí gníomhaíocht cheimiteiripeach áirithe ag NPanna neamh-ionradaithe COS-BA/Ce6 (dáileog níos airde Ce6: 3.2 mg/mL) mar a chonaic na comharthaí AM agus PI ag an am céanna. Rinneadh an ghníomhaíocht PDT iontach feabhsaithe seo de NPanna COS-BA/Ce6 a bhailíochtú tuilleadh ag an staining AM/PI tar éis cóireála le haghaidh 20 u breise (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S20). Ina theannta sin, nuair a chuirtear aigéad sóidiam (SA) agus D-mannitol (DM), múchadh speisialta ar leithligh de 1 O2 agus $OH48, leis na cealla 4T1 atá cóireáilte le COS-BA/Ce6 NPs-PDT, ba léir gur tháinig méadú ar inmharthanacht na gceall sin. Tharla fóta-imoibrithe de Chineál I ($OH) agus de Chineál II (1 O2) go comhuaineach i bpróiseas PDT trí mheán COSBA/Ce6 NPs (Fíor 5J). Ina theannta sin, tá comhoiriúnacht fola níos fearr ag NPanna COS-BA/Ce6 go háirithe mar atá léirithe ag an haemalú diomaibhseach cille fola dearga (Fíor 5K), rud a thugann le tuiscint go bhféadfaí feidhmchláir bhithleighis a dhéanamh trí riarachán infhéitheach.
3.6. Bithdháileadh in vivo ar NPanna COS-BA/Ce6
Ina dhiaidh sin, roimh an imscrúdú dáileacháin in vivo, rinneamar measúnú ar chógaschinéitic NPanna COS-BA/Ce6 trí mhonatóireacht a dhéanamh ar thiúchan Ce6 san fhuil tar éis instealladh infhéitheach le NPanna Ce6 nó COS-BA/Ce6 coibhéiseacha. Tacaíonn próifílí tiúchan-ama Ce6 san fhuil (Fíor 6A) agus na paraiméadair chógaschinéiteach comparáideacha (Tábla Faisnéise Tacaíochta S1) go soiléir go bhfuil scaipeadh fada ag NPanna COS-BA/Ce6 sa tsruth fola, rud a d’fhéadfadh carnadh níos mó ag siad a cheadú. láithreáin. Go háirithe, léirigh NPanna COS-BA/Ce6 díothú tapa fola laistigh de 2 h, rud a thugann le tuiscint go bhfuil bith-dhíghrádaitheacht fabhrach. Dá réir sin, rinneamar imscrúdú ansin ar an gcumas bithdháilte in vivo agus carnadh siadaí de NPanna COS-BA/Ce6 (Fíor 6B agus C). Cosúil le nanach-chomhábhair Ce6 a thuairiscítear go huilíoch33, is féidir NPanna COS-BA/Ce6 a dháileadh go tapa ar fud an choirp ar fad. Go háirithe le linn na chéad 4 h, léirigh tionóil astuithe fluaraiseachta níos láidre go soiléir ag láithreáin siadaí ná mar a bhí Ce6 saor in aisce, rud a thugann le tuiscint go bhfuil cumas feabhsaithe coinneála agus carnadh spriocdhírithe siadaí de COS-BA/Ce6 NPs, curtha i leith éifeacht coinneála tréscaoilteachta éighníomhach (EPR) is dócha. a thugann na nanacháithníní14. Tar éis 6 h postinstealladh, tháinig laghdú tapa ar an déine fluaraiseachta ag láithreáin siadaí de réir a chéile. Go háirithe, murab ionann agus nana-chomhábhair a tuairiscíodh go coitianta le carnadh siadaí feabhsaithe go suntasach i gcomparáid le drugaí dearfacha saor in aisce29, níor léirigh NPanna COS-BA/Ce6 carnadh an-fheiceálach ag suíonna siadaí ag 24 h iar-instealladh ná Ce6 saor in aisce (Fíor 6C), a bhí tacaíocht bhreise ag an íomháú an meall excised (Fíor 6D agus E). D’fhéadfadh go mbeadh in-bhithmhillteacht den scoth NPanna freagrach as móilíní orgánacha beaga nádúrtha a thabhairt isteach. Breathnaíodh é seo freisin le terpenoids eile nana-tionóil bheaga móilín-idirghabhála49. Thairis sin, léirigh NPanna COS-BA/Ce6 dáileadh fíocháin chomhchosúil le Ce6 saor in aisce (Fíor 6E), agus bhí an meán-déine fhluaraiseachta ex vivo go ginearálta níos ísle ná mar a cuireadh i láthair in vivo, rud a thugann le tuiscint bhreise ar bhith-dhíghrádaitheacht mhaith. Ina theannta sin, ag cur san áireamh an dlúth-difríocht leibhéal an fhluaraiseachta idir 2 agus 4 h tar éis instealladh NPs agus Ce6, chomh maith le hinoibritheacht thurgnamhach a cheadaíonn eatraimh leordhóthanacha le haghaidh ionradaíochta, roghnaíodh 4 h tar éis an riaracháin mar phointe ama éadrom le haghaidh teiripe PDT ina dhiaidh sin.
Ag cur san áireamh an carnadh siadaí nach bhfuil an-fheiceálach ag 24 h ná saor in aisce Ce6, chun an éifeacht mhéadaithe EPR atá ag NPanna COS-BA/Ce6 a bhailíochtú tuilleadh, rinneamar monatóireacht láithreach ar íomhánna fluaraiseachta ex vivo siadaí ag amanna éagsúla tar éis instealladh infhéitheach le nanodrugaí ( Fíor 6F agus G). Go hiontach, ag 20 min nó ag 12 h iar-instealladh, léirigh NPanna COS-BA/Ce6 go deimhin astuithe fluaraiseachta níos láidre ag láithreáin siadaí ná saor in aisce Ce6, rud a léirigh cumas carnadh siadaí den scoth agus feabhsaithe. Idir an dá linn, de réir mar a chuaigh an t-am thart, tháinig laghdú de réir a chéile ar dhéine an fhluaraiseachta a coinníodh i bhfíochán meall (Fíor 6G), atá ag teacht go hiomlán le torthaí íomháithe fluaraiseachta ainmhithe in vivo. Is léir gur sheachain an meitibileacht tapa bhitheolaíoch seo agus an carnadh meall feabhsaithe tocsaineacht charnadh fadtéarmach a d’fhéadfadh a bheith ann, rud a ráthaíonn teiripe antitumor an-éifeachtach le bithshábháilteacht níos fearr.
Fíor 5 Éifeachtúlacht frithailse in vitro NPanna COS-BA/Ce6. Inmheánú ceallacha de (A) cealla ailse 4T1 agus (B) gnáthchealla LO2 gortha i NPanna Ce6 nó COS-BA/Ce6 saor in aisce ar feadh 0.5 agus 3 h, agus anailís chithiméadrach sreafa comhfhreagrach ar dhéine fhluaraiseachta. (C) Cosc ar iontógáil ar shainstaidéir ar chonairí endocytic agus (D) déine fluaraiseachta comhfhreagrach na gceall arna thomhas ag cíteaiméadracht sreafa tar éis gortha le NPanna COSBA/Ce6 le/gan coscairí endocytic lena n-áirítear clorpromazine, cloroquine, nystatin, agus amiloride ethylisopropyl (EIPA). Barraí scála Z 20 mm. (E) Giniúint cheallacha ROS arna spreagadh ag NPanna Ce6 nó COS-BA/Ce6 saor in aisce (comhionann Ce6: 1.6 mg/mL). Barraí scála Z 20 mm. (F) Inmharthanacht cille de chealla 4T1 tar éis cóireálacha éagsúla ar feadh 24 h. (G) Anailís IC25, IC50, IC75 ar NPanna Ce6 agus COS-BA/Ce6 saor in aisce i gcoinne cealla 4T1, MCF-7, agus HepG2, faoi seach. (H) iaidíd Calcein-AM/propidium (PI) staining beo/marbh de NPanna COS-BA/Ce6 (Ce6: 1.6 mg/mL) - cóireáilte 4T1 cealla tar éis gor le haghaidh 10 h breise, chomh maith le neamh-ionradaithe COS- BA/Ce6 NPanna (Ce6: 3.2 mg/mL). Barraí scála Z 50 mm. (I) Innéacs teaglaim (CI) de NPanna COS-BA/Ce6 ar chealla 4T1, MCF-7, agus HepG2, arna chinneadh ag ríomh teoirim Chou Talalay. (J) Meicníochtaí PDT (Cineál I agus Cineál II) a tharlódh de bharr ionradaíochta NPanna COS-BA/Ce6 agus arna measúnú ag 1 O2 agus quencher $OH sainiúil azide sóidiam (SA) agus D-mannitol (DM), faoi seach. (K) Céatadán hemolysis de chealla fola dearga tar éis gor le NPanna COS-BA/Ce6 ar feadh 4 h. Cuirtear sonraí in iúl mar mhodh SD (n Z 3). Léiríonn *P ˂ 0.05, **P ˂ 0.01, agus ***P ˂ 0.001 na difríochtaí suntasacha.
Fíor 6 Scaipeadh fola in vivo agus bithdháileadh NPanna COS-BA/Ce6. (A) Próifílí tiúchan-ama Ce6 san fhuil tar éis iv instealladh de Ce6 coibhéiseach nó NPanna COS-BA/Ce6 coibhéiseach (n Z 3). (B) Íomhánna fluaraiseachta coirp iomláin de lucha meall-iompair 4T1 tar éis instealltaí iv de dhrugaí léirithe ag pointí ama éagsúla. (C) Meán-déine fhluaraiseachta a fhaightear ó na suíomhanna meall i (B). (D) íomhánna fluaraiseachta ex vivo de siadaí agus orgáin móra excised ó na lucha thuas ag 24 h, agus comhfhreagrach (E) toradh cainníochtúil déine fluaraiseachta (n Z 3). (F) Íomhánna fluaraiseachta ex vivo de thumaí agus orgáin mhóra ag amanna éagsúla tar éis instealltaí iv de NPanna Ce6 nó COS-BA/Ce6, agus (G) anailís chomhfhreagrach ar dhéine fhluaraiseachta siadaí. Cuirtear sonraí in iúl mar mhodh SD (n Z 3).
3.7. Cóireáil chomhcheangailte frith-meall in vivo ceimiteiripe/PDT
Arna spreagadh ag an saintréith suanachta uathúil, dea-bhith-dhíghrádaithe, agus gníomhaíocht PDT, rinneadh imscrúdú ar an gcomhtheiripe frith-tumóra ceimiteiripe in vivo/PDT. Roinneadh lucha tumaí 4T1 go randamach i 6 ghrúpa agus ionstealladh infhéitheach iad le Ce6 coibhéiseach (3.5 mg / kg de chorp) gach 2 lá ar feadh trí dháileog san iomlán. 4 h iar-instealladh, bhí na suíomhanna meall na lucha sna grúpaí éadroma ionradaithe ar feadh 15 nóiméad (Fíor 7A). Idir an dá linn, taifeadadh méideanna meall comhfhreagracha nó meáchain choirp gach lá eile. Tar éis 14 lá de chóireáil (Fíor 7B), bhí Ce6 saor in aisce le ionradaíocht agus COS-BA saor in aisce neamhéifeachtach maidir le cosc siadaí, is dócha mar gheall ar an carnadh teoranta drugaí i bhfíochán meall. I gcodarsnacht leis sin, tar éis ionradaíocht a dhéanamh ar COS-BA/Ce6 NPs, breathnaíodh an cosc meall is suntasaí, rud a dheimhnigh éifeachtúlacht teaglaim ceimiteiripe/PDT den scoth. Léirigh na meánmheáchan siadaí (Fíor 7D) agus grianghraif chomhfhreagracha de siadaí scartha (Fíor 7E) araon an éifeachtúlacht antitumor is fearr de NPanna COS-BA/Ce6 faoi ionradaíocht, mar a léirigh lucha cóireáilte na méideanna siadaí is lú ná iad siúd de ghrúpaí eile. Shroich an meánchóimheas coiscthe meall de NPanna COS-BA/Ce6 cóireáilte PDT 80.3%, níos airde ná iad siúd de Ce6 PDT saor in aisce (42.4%), agus COS-BA saor in aisce (38.5%). Go háirithe, cé gur léirigh staidéir in vitro roimhe seo gur léirigh NPanna COS-BA/Ce6 gan solas feidhm dhíomhaoin de ghníomhaíocht cheimiteiripeach, comhlíonann siad éifeachtúlacht feabhsaithe antitumor fós (49.5%) i gcomparáid le COS-BA saor in aisce (Fíor 7D). Rinneamar tuairimíocht go gcuireann dhá chúis leis an toradh seo, is é ceann amháin an carnadh siadaí níos airde de NPanna COS-BA/Ce6 mar gheall ar an éifeacht EPR a tuairiscíodh go forleathan. Fachtóir eile is ea an micro-thimpeallacht siadaí lag aigéadach a spreag scaoileadh COS-BA an-tocsaineach. Mar gheall ar an tiúchan micelle criticiúil níos airde (CMC, 187 mg/mL) de COS-BA (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S21), d'fhéadfadh sé a bheith ann sa stát monaiméir sa timpeallacht siadaí, rud a bheadh i bhfabhar ceimiteiripe feabhsaithe COS-neamh-ionradaithe. BA/Ce6 NPs. Ina theannta sin, chun éifeachtúlacht frith-ailse níos fearr NPanna COS-BA/Ce6 a fhíorú tuilleadh, rinneadh staining siadaí hematoxylin agus eosin (H&E) (Fíor 7 G).
Fíor 7 Staidéar éifeachtúlachta le samhail xenograft subcutaneous 4T1. (A) Léaráid scéimreach de chóireáil PDT in vivo. (B) Próifílí fáis meall, (C) athruithe ar mheáchan coirp, agus (D) meáchain siadaí excised ina bhfuil cóimheasa coiscthe meall de 4T 1-lucha a iompraíonn tar éis cóireálacha éagsúla sna grúpaí a luaitear (n Z 5 do gach grúpa). (E) Íomhánna de siadaí excised ó lucha ionadaíocha tar éis cóireála. (F) Anailís bithcheimice serum tar éis cóireála le NPanna COS-BA/Ce6 ar feadh 14 lá. (G) staining H&E ionadaíoch ar chodanna siadaí máil tar éis cóireálacha éagsúla. Barraí scála Z 50 mm. (H) staining TUNEL de Ce6 agus COS-BA/Ce6 NPs saor in aisce PDT-rannóg siadaí cóireáilte. Barraí scála Z 20 mm **P < 0.01 le fios na difríochtaí suntasacha.
Léirigh na torthaí gur léirigh rannóga siadaí cóireáilte COS-BA/Ce6 NPs-PDT meath tromchúiseach fíocháin agus easnamh núicléis, agus breathnaíodh neacróis fíocháin measartha sna grúpaí eile. Ag an am céanna, i gcomparáid le solas Ce6 saor in aisce, mhéadaigh NPanna COS-BA/Ce6 faoi ionradaíocht go suntasach ar líon na gceall TUNEL-dearfach a léirigh staining núicléach donn níos láidre (Fíor 7H), ag dearbhú tuilleadh an teiripe teaglaim ceimiteiripe/PDT den scoth. Thairis sin, níor breathnaíodh aon athruithe soiléire ar mheáchan coirp i ngach grúpa (Fíor 7C). Fiú dá mbeadh caillteanas measartha i meáchan coirp sna grúpaí NP COSBA/Ce6 nó Ce6 le linn an riaracháin, d’fhill na meáchain choirp ar ais ina gnáthriocht tar éis cúpla lá. Níorbh fhéidir aon damáiste soiléir nó lot athlastach a fháil sna horgáin mhóra a baineadh amach ag deireadh na gcóireálacha (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S22), rud a léirigh an tocsaineacht shistéamach íseal/gan aon tocsaineacht shistéamach agus bithshábháilteacht mhaith NPanna COS-BA/Ce6. Ina theannta sin, cé go bhfuil NPanna COS-BA/Ce6 carntha go príomha i bhfíochán ae, níor léirigh na marcóirí feidhm ae comhfhreagracha (ALT, AST, agus ALP) athruithe suntasacha i gcomparáid le gnáth-lucha sláintiúil (Fíor 7F), rud a thugann bith-chomhoiriúnacht níos fearr le tuiscint. Ina theannta sin, ba chosúil go raibh na marcóirí feidhm duánach (BUN, CRE, agus UA) agus paraiméadair bithcheimiceacha (ALB, agus TBIL) cosúil le gnáth-lucha, rud a thugann bithshábháilteacht níos fearr le tuiscint. Is léir go bhfuil ilghnéithe teiripeacha fabhracha ag an móilín beag orgánach táirge seo arna n-idirghabháil ag COS-BA, ag comhthionóil COS-BA/Ce6 NPanna a chothaíonn féidearthachtaí tarraingteacha le haghaidh feidhmeanna i míochaine chliniciúil.
3.8. Imdhíonacht frith-tumóra ó chomhcheimiteiripe/PDT agus imshuíomh frith-PD-L1
Le déanaí, léirigh staidéir nuálaíocha iomadúla go bhféadfadh an teaglaim idir imdhíonteiripe ailse agus modhanna cóireála eile freagairtí imdhíonachta siadaí-shonracha a mhúscailt go héifeachtach chun siadaí príomhúla nó i bhfad i gcéin a dhíchur1. Arna spreagadh ag feidhm suanachta ceimiteiripe uathúil agus éifeachtúlacht frith-tumor ceimiteiripe/PDT den scoth de NPanna COS-BA/Ce6, is dóigh linn mar sin an bhféadfadh sé freagairtí imdhíoneolaíocha a spreagadh le cúnamh ó aidiúvach imdhíonachta frith-PD-L1 chun teiripe frith-tumóra an-éifeachtach a chur faoi deara. . An bhféadfadh sé siadaí i bhfad i gcéin nach féidir a chóireáil go díreach trí úsáid a bhaint as cóireáil PDT a chóireáil, agus ar an gcaoi sin straitéis mhalartach a sholáthar d'fheidhmeanna cliniciúla frith-ailse? Chun an hipitéis seo a thástáil, sa staidéar seo, bunaíodh múnla "dhá siadaí" agus léiríodh nósanna imeachta turgnamh mionsonraithe i bhFíor 8A. Go hiondúil, rinneadh dhá siadaí 4T1 a ionaclú ar chliatháin chlé agus ar dheis gach luiche. Ag cur san áireamh nach bhfuil éifeacht imdhíon-teiripeach fheiceálach ag frith-PD-L1 amháin50, roinneadh na turgnaimh i 5 ghrúpa lena n-áirítear grúpa neamhchóireáilte, NPanna COS-BA/Ce6, NPanna COS-BA/Ce6 le frith-PD-L1, COS- NPanna BA/Ce6 le solas, NPanna COS-BA/Ce6 le solas agus frith-PD-L1. Tar éis instealladh iv amháin de NPanna (Ce6: 3.5 mg/kg), rinneadh na siadaí cearta (meall bunscoile) sna grúpaí éadroma a ionradaithe ar feadh 15 nóiméad chun éifeachtaí imdhíoneolaíocha PDT/ceimiteiripe a mheas, agus na siadaí clé (siadaí i bhfad i gcéin) Roghnaíodh i ngach grúpa gan aon chóireáil le haghaidh ceimiteiripe aonair. Ina dhiaidh sin, ar Laethanta 2, 4, agus 6, cuireadh lucha sna grúpaí imdhíonachta iv instealladh le antasubstaint frith-PD-L1 (15 mg in aghaidh an luch in aghaidh an insteallta) ar feadh trí dháileog san iomlán. Go suntasach, beag beann ar chóireáil PDT nó nach ea, d'fhéadfadh COS-BA/Ce6 NPs móide frith-PD-L1 bac a chur go héifeachtach ar dhul chun cinn siadaí bunscoile (Fíor 8 B). Agus shroich na cóimheasa coiscthe meall meán comhfhreagracha go leithleach 86.7% (ionradaíocht) agus 76.5% (gan ionradaíocht), i bhfad níos airde ná cóireáil ceimiteiripe aonair (5.7%) nó cóireáil ceimiteiripe/PDT (27.4%) (Fíor 8C). . Thacaigh na grianghraif de thumaí scartha (Fíor 8D) agus 4T1-lucha ar a bhfuil (Faisnéis Tacaíochta Fíor. S23) tar éis 14 lá cóireála leis an gconclúid thuas freisin. Thug na torthaí seo le tuiscint go bhféadfadh ceimiteiripe atá bunaithe ar NPanna agus ceimiteiripe/PDT araon imdhíonacht frith-tumóra a ghníomhachtú go héifeachtach. Idir an dá linn, an rud is suntasaí, chuir imshuíomh frith-PD-L1 móide NPanna éifeacht choiscthe meall thar cuimse ar siadaí i bhfad i gcéin (clé) neamh-ionradaithe (Fíor 8E agus F), go ginearálta níos láidre ná NPanna COS-BA/Ce6 amháin, a bhí. deimhnithe freisin ag na híomhánna tumaí agus lucha scartha comhfhreagracha tar éis cóireála (Fíor 8D agus Fíor. S23), ag léiriú tuilleadh an freagra imdhíonachta éifeachtach antitumor a tharlódh de bharr NPanna COS-BA/Ce6.
Chun iniúchadh iomlán a dhéanamh ar an bhfreagra imdhíonachta éifeachtach antitumor seo, rinneadh meastóireacht bhreise ar limficítí T cíteatocsaineacha CD8þ (CTLanna), imdhíonacht ríthábhachtach d'imdhíonteiripe ailse4, trí anailís a dhéanamh ar na cealla imdhíonachta sna siadaí ar dheis nó ar chlé tar éis 14 lá de chóireáil. Fuarthas amach gur tharraing NPanna COS-BA/Ce6 móide frith-PD-L1 le nó gan cóireáil PDT insíothlú láidir CD8þ CTL sna siadaí bunscoile (Fíor 8H agus J). Bhí an insíothlú CD8þ CTL suas le 11.3% tar éis ceimiteiripe / PDT bunaithe ar COS-BA/Ce6 NPs móide cóireáil frith-PD-L1, beagán níos airde ná NPanna COS-BA/Ce6 móide frith-PD-L1 (9.63%), agus i bhfad níos airde ná sin i ngrúpaí eile gan frith-PD-L1, lena n-áirítear cóireáil le ceimiteiripe bunaithe ar COS-BA/Ce6 NPs (5.12%) nó ceimiteiripe/PDT amháin (4.07%). Mar an gcéanna, i gcomparáid le grúpaí neamh-imdhíonachta, breathnaíodh méadú suntasach ar insíothlú CTL sna siadaí clé (i bhfad i gcéin) do lucha tar éis NPanna COS-BA/Ce6 móide antiPD-L1 le nó gan cóireáil PDT (Fíor 8I agus K), a thuilleadh. freagairtí imdhíonachta an-éifeachtacha á dtionscnamh ag ceimiteiripe nó ceimiteiripe/teiripe teaglaim PDT. Idir an dá linn, tar éis tabhairt isteach frith-PD-L1, d'eascair táirgeadh láidir il-chítocínín a bhfuil ról lárnach acu maidir le feidhmeanna cíteatocsaineacha CTLanna8 a rialú, lena n-áirítear siadaí. necróis fachtóir-alfa (TNF-a) (Fíor 8L) agus interferon-gáma (IFN-g) (Fíor 8M) sna samplaí serum de lucha tar éis 14 lá de chóireáil, ag tacú a thuilleadh go raibh freagraí imdhíonachta éifeachtach antitumor. Thairis sin, níor breathnaíodh aon athruithe dealraitheacha ar mheáchain choirp i ngrúpaí cóireála éagsúla (Fíor 8N), rud a léiríonn bithshábháilteacht fhabhrach an cheimiteiripe/PDT/imdhíonteiripe comhcheangailte seo. Le chéile, fuaireamar amach cé gur léirigh NPanna frith-PD-L1 móide COSBA/Ce6 le solas cóimheas coiscthe meall beagán níos airde (86.7%) ná an grúpa neamh-ionradaithe (76.5%) i gcoinne na siadaí cearta mar gheall ar thionchar PDT (Fíor 8B‒D), níor tugadh faoi deara aon difríochtaí suntasacha in éifeachtaí teiripeacha ar na siadaí clé i láthair (77.8%) nó neamhláithreacht (78.4%) PDT (Fíor 8E‒G). Tuairimíd na cúiseanna féideartha seo a leanas mar thoradh ar an bhfeiniméan seo. Ar an gcéad dul síos, maidir le meicníocht ceimiteiripe nó PDT a fheabhsaíonn éifeachtaí imdhíoneolaíocha imshuí seicphointí frith-PD-L1, léirigh staidéir charntha go bhféadfadh na módúlachtaí cóireála seo athlasadh géarmhíochaine a spreagadh sa limistéar meall, rud a mhéadódh cur i láthair antaiginí a bhaineann le siadaí go T. cealla, rud a spreagann cealla ailse dul faoi ICD8,9. Dhéanfadh cealla meall atá faoi ICD comharthaí "ithe mé" a uasrialáil tríd an calreticulin (CRT) a nochtadh ar dhromchlaí cealla meall atá ag fáil bháis go himdhíon-ghineach agus comharthaí "contúirt" trí bhosca grúpa ard-soghluaisteachta 1 (HMGB1) a scaoileadh, ag cur chun cinn gníomhachtú cealla dendritic. chun CTLanna a ghníomhachtú, a bhféadfaí a ngníomhaíocht a fheabhsú trí fhrith-PD-L1, rud a d’fhág go mbeadh feabhas suntasach ar imdhíonteiripe in aghaidh ailse51.
Fíor 8 Éifeacht frith-meall de cheimiteiripe/PDT bunaithe ar COS-BA/Ce6 NPanna móide imdhíonteiripe frith-PD-L1 imshuímh seicphointí. (A) Léaráid scéimreach de cheimiteiripe/PDT bunaithe ar CNPanna le teiripe frith-PD-L1. (Leaba) (B) Na próifílí fáis meall, (C) meánmheáchan siadaí, agus (D) íomhánna de siadaí excised ó lucha ionadaíocha do siadaí bunscoile (ar dheis) tar éis cóireálacha éagsúla ar feadh 14 lá mar a léirítear. (EeG) (E) Na cuair fáis siadaí, (F) meánmheáchan siadaí, agus (G) íomhánna de siadaí excised do siadaí i bhfad i gcéin neamh-ionradaithe (clé) tar éis cóireálacha éagsúla mar a léirítear. (H) Daonra de chealla CD8þ T i siadaí cearta agus (J) céatadáin de CTL insíothlú braitheadh go cainníochtúil ag cíteiméadracht sreafa tar éis 14 lá de chóireáil. (I, K) Braitheadh citeiméadracht sreafa go cainníochtúil ar dhaonra cealla CD8þ T i siadaí clé ar Lá 14 (n Z 3). Rún cítocíní i sera tar éis 14 lá de chóireáil lena n-áirítear (L) IFN-g agus (M) TNF-a arna thomhas ag measúnacht ELISA (n Z 3). (N) Athruithe ar mheáchan coirp lucha le linn cóireálacha éagsúla. Léiríonn *P < 0.05, **P < 0.01, agus ***P < 0.001 na difríochtaí suntasacha.
Ar an dara dul síos, san obair seo, d’fhéadfaí NPanna COS-BA/Ce6 a dháileadh ar na siadaí clé agus ar dheis ag an am céanna, tá poitéinseal ollmhór ag an gceimiteiripe clé agus ag an gceimiteiripe ar dheis/PDT cealla siadaí atá faoi ICD a aslú. Idir an dá linn, ní riartar NPanna COS-BA/Ce6 ach in aon dáileog amháin, braitheann an t-imdhíonteiripe go príomha ar thrí dháileog frith-PD-L1, cibé acu ceimiteiripe nó ceimiteiripe/PDT, níl iontu ach primers. B’fhéidir nach mbeadh na difríochtaí teiripeacha maidir le ICD cille meall a aslú idir ceimiteiripe aonair agus cóireálacha comhcheimiteiripe/PDT an-fheiceálach. Thacaigh an céatadán de CD8þ CTL ar chlé (Fíor 8I agus K) agus tumaí ceart (Fíor 8H agus J) leis an tuairimíocht thuas freisin, níor tugadh faoi deara aon difríocht shuntasach i CD8þ CTL i láthair nó gan PDT. Mar sin, bhain NPanna COS-BA/Ce6 móide frith-PD-L1 le nó gan ionradaíocht éifeachtúlacht frith-ailse comhchosúil amach i gcoinne na siadaí clé. Ina theannta sin, toisc go léiríonn cealla 4T1 leibhéil ísle PD-L152, tá sé cruthaithe go forleathan go bhfuil aon éifeacht imdhíonteiripeach fheiceálach ag frith-PD-L1 amháin ar ailse chíche 4T153,54. In ainneoin na n-éifeachtaí ICD arna n-idirghabháil ag COS-BA/Ce6 NPanna gur fiú imscrúdú breise a dhéanamh orthu, tá sé léirithe ag na torthaí a cuireadh i láthair go mbaineann NPanna COS-BA/Ce6 freagairtí imdhíonachta thar a bheith feabhsaithe amach le cúnamh frith-PD-L1. I dteannta a chéile, is cosúil gur chuir NPanna COS-BA/Ce6 in ann imdhíonteiripe ailse frith-PD-L1, ní hamháin teiripe teaglaim. Cé nár léirigh NPanna frith-PD-L1 móide COS-BA/Ce6 le nó gan cóireáil PDT difríochtaí suntasacha in éifeachtaí teiripeacha, léirigh an dá cheann acu éifeachtacht feabhsaithe frith-tumor ar ndóigh i gcomparáid le dáileog amháin de NPanna COS-BA/Ce6. Is é sin le rá, fiú amháin más rud é gan chóireáil éadrom, a luaithe a tugadh isteach an aidiúvach imdhíonachta antiPD-L1, is féidir imdhíon-ghineacht iarmhair siadaí tar éis ceimiteiripe COS-BA/Ce6 NPs a threisiú, rud a fhágann freagairtí imdhíonachta antitumor sistéamach iontacha, rud a fhágann go gcuirtear faoi chois éifeachtach. de siadaí bunscoile nó i bhfad i gcéin. Mar sin, ba cheart go bhféadfaí siadaí príomhúla agus meiteastatacha a dhíchur le linn imdhíonteiripe frith-ailse cliniciúil le cóireálacha arís agus arís eile le NPanna. Is léir go dtugann na torthaí seo le chéile fianaise ar fhreagraí imdhíonacha antitumóra an-éifeachtacha agus sineirgisteacha arna dtionscnamh ag NPanna COS-BA/Ce6 i gcomhar le himshuíomh frith-PD-L1, le ceimiteiripe amháin nó i gcomhcheangal le ceimiteiripe/PDT.
cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta
4. Conclúidí
Go hachomair, dhearamar, rinneamar agus d'fhorbraíomar NPanna fóta-chomhoiriúnach, in-bhithmhillte, íseal-tocsaineach ach an-éifeachtach agus atá ar fáil go cliniciúil, nana-táirgí fóta-cheimiteiripeach trasfhoirmithe COS-BA/Ce6 trí chomhpháirt ilfheidhmeacha féin-chóimeáilte aigéad betulinic móilín beag nádúrtha a chomhcheangal. (BA), COS intuaslagtha in uisce, agus fóta-sensitizer íseal-tocsaineach Ce6 le haghaidh ceimiteiripe/PDT comhcheangailte. Spreagann sé ina dhiaidh sin freagairtí imdhíonachta antitumor atá thar a bheith éifeachtach agus sineirgisteacha i gcomhar le himshuíomh frith-PD-L1, le ceimiteiripe ina n-aonar nó i gcomhcheangal le ceimiteiripe/PDT. Léirímid go sonrach go bhféadfadh socrú móilíneach líonra log éascú foirmiú nanacháithníní blaosc-struchtúrtha. D'fhéadfadh modhnuithe ar COS intuaslagtha in uisce cur go mór le gníomhaíocht frith-ailse na móilíní beaga nádúrtha lipophilic trí tháirge amphiphilic a thógáil. Léirímid freisin gur léirigh na nanodrugaí a d'eascair as gnéithe teiripeacha iomadúla fabhracha, go háirithe feidhm "suanachta" cliste le héifeachtaí ceimiteiripe insidious. In éineacht leis an bhfreagrúlacht pH sainiúil, feidhmíonn na comhthionóil seo tocsaineacht íseal agus bithshábháilteacht le gnáthfhíocháin ach tá siad an-tocsaineach d'fhíocháin siadaí. In éineacht leis an nginiúint 1 O2 feabhsaithe, in-bhith-dhíghrádaithe maith, agus bith-chomhoiriúnacht, a chuir go léir le ceimiteiripe/PDT/imdhíonteiripe frith-ailse a bhí an-éifeachtach, sineirgisteach agus slán. Go háirithe, is féidir le ceimiteiripe aonair gan chóireáil PDT freagraí imdhíonachta sistéamach a ghníomhachtú, ag oscailt féidearthachtaí tarraingteacha le haghaidh imdhíonteiripe ceimiteiripe frith-ailse sineirgisteacha. Tríd is tríd, soláthraíonn an obair seo léargas dóchasach ar fhorbairt nana-spreagthaigh nádúrtha ilfheidhmeach an-bhithghníomhach agus íseal-tocsaineach le haghaidh imdhíonteiripe cliniciúil.
Tagairtí
1. Sang W, Zhang Z, Dai YL, Chen XY. Dul chun cinn le déanaí in imdhíonteiripe ailse teaglaim sineirgisteacha nana-ábhar. Chem Soc Rev 2019; 48:3771e810.
2. Li XY, Guo XM, Ling JB, Tang Z, Huang GN, He LZ, et al. Imdhíon-theiripí ailse atá bunaithe ar nana-mhíochaine a fhorbraítear trí mhacrophages a bhaineann le meall a athchlárú. Nanascála 2021; 13:4705e27.
3. Chao Y, Xu LG, Liang C, Feng LZ, Xu J, Dong ZL, et al. Tugann comhtheiripe raidió-iseatóp imdhíon-spreagthach áitiúil agus imshuíomh seicphointe imdhíonachta sistéamach freagraí féideartha frith-tumaí. Nat Biomed Eng 2018; 2:611e21.
4. Wen YY, Chen X, Zhu XF, Gong YC, Yuan GL, Qin XY, et al. Chuir nanacháithníní comhtháite photothermal-ceimiteiripe le freagairt micri-thimpeallachta meall le hionduchtú bás cille imdhíon-ghineach le haghaidh cóireáil éifeachtach ailse cholaireicteach. Comhéadain ACS Appl Mater 2019; 11: 43393e408.
5. Peng JR, Xiao Y, Yang Q, Liu QY, Chen Y, Shi K, et al. Feabhsaítear ceimiteiripe ailse agus imdhíonteiripe comhcheangailte le comhiomlánú intracellular de nana-chomhthionóil mhóilíní beaga athchláraithe peptide. Acta Pharm Sin B 2021; 11:1069e82.
6. Song W, Kuang J, Li CX, Zhang MK, Zheng DW, Zeng X, et al. Imdhíonteiripe feabhsaithe bunaithe ar theiripe fhótadinimiciúil chun siadaí metastasis bunscoile agus scamhóg a dhíothú. ACS Nana 2018;12: 1978e89.
7. Wang C, Xu LG, Liang C, Xiang J, Peng R, Liu Z. Freagraí imdhíoneolaíocha spreagtha ag teiripe fótaiteirmeach le nanafeadáin charbóin i gcomhar le teiripe frith-CTLA-4 chun metastasis ailse a chosc. Adv Mater 2014; 26:8154e62.
8. He CB, Duan XP, Guo NN, Chan C, Poon C, Weichselbaum RR, et al. Comhcheanglaíonn polaiméirí comhordaithe nanascála croí-bhlaosc ceimiteiripe agus teiripe fhótadinimiciúil chun imdhíonteiripe ailse imshuí seicphointe a neartú. Cumann Nat 2016; 7: 12499.
9. Galluzzi L, Buque A, Kepp O, Zitvogel L, Kroemer G. Bás cille imdhíonachta in ailse agus galar tógálach. Nat Rev Immunol 2017; 17: 97e111.
10. Chiang CS, Lin YJ, Lee R, Lai YH, Cheng HW, Hsieh CH, et al. Feabhsaíonn meascán de nanacháithníní maighnéadacha atá bunaithe ar fucoidan agus inmunomodulators imdhíonteiripe meall-áitiúil. Na nanaitheicneolaíochta 2018; 13:746e54.
11. Zheng XL, Ge JC, Wu JS, Liu WM, Guo L, Jia QY, et al. Nanovesicle díorthach hypocretin in-bhithmhillte mar theiranastic solas infridhearg faoi thiomáint ag an íomháú défhótaghníomhach agus teiripe. Bithábhair 2018; 185:133e41.
12. CD Spicer, Jumeaux C, Gupta B, Stevens MM. Comhcheanglaíonn nanacháithníní peptide agus próitéin ardáin ilúsáideacha le haghaidh feidhmeanna bithleighis. Chem Soc Rev 2018; 47:3574e620.
13. Mei YL, Wang RB, Jiang W, Bo Y, Zhang TF, Yu JL, et al. Dul chun cinn le déanaí i nana-ábhair do sheachadadh aigéid núicléacha in imdhíonteiripe ailse. Sci Biomater 2019; 7: 2640e51.
14. Zheng YL, Ye JX, Li ZY, Chen HJ, Gao Y. Dul chun cinn le déanaí i teiripe ailse dinimiciúil sono photo: ó íogróirí nua forbartha go straitéisí feabhsaithe éifeachtúlachta bunaithe ar nanaitheicneolaíocht. Acta Pharm Sin B 2021; 11:2197e219.
15. Li SK, Zou QL, Li YX, Yuan CQ, Xing RR, Yan XH. Drugaí metallo-nano photodinimiciúil supramolecular peptide-bhunaithe cliste atá deartha ag féin-tionól comhordaithe multicomponent. J Am Chem Soc 2018; 140:10794e802.
16. Zhi KK, Wang JC, Zhao HT, Yang X. Glóthach táirgí nádúrtha móilín beaga féin-chóimeáilte le haghaidh seachadadh drugaí: ceannródaíocht i gcur i bhfeidhm nua táirgí nádúrtha móilíní beaga. Acta Pharm Sin B 2020; 10: 913e27.
17. Yang X, Ma C, Chen ZM, Liu J, Liu FY, Xie RB, et al. Déanann nanacháithníní beaga cóimeáilte móilín aonair seachadadh éifeachtach drugaí ó bhéal a idirghabháil. Nano Res 2019; 12: 2468e76.
18. Zhi KK, Zhao HT, Yang X, Zhang H, Wang JC, Wang J, et al. Geallóirí táirgí nádúrtha agus modh ginearálta chun iad a fháil ó orgánaigh. Nanascála 2018; 10:3639e43.
19. Cheng JJ, Fu SY, Qin Z, Han Y, Yang X. Aigéid diterpene móilíní beaga nádúrtha féin-chóimeáilte le gníomhaíocht fhabhrach frith-ailse agus bithshábháilteacht le haghaidh ceimiteiripe frith-tumóra feabhsaithe go sineirgistíoch. J Mater Ceimic B 2021; 9: 2674e87.
20. Wang JC, Zhao HT, Zhi KK, Yang X. Taiscéaladh ar an bpróiseas luchtaithe drugaí beag-mhóilín gníomhach nádúrtha agus éifeachtúlacht antitumor sineirgiste ard-éifeachtach. Comhéadain ACS Appl Mater 2020; 12: 6827e39.
21. Cheng JJ, Zhao HT, Yao L, Li Y, Qi BK, Wang J, et al. Stéaróil nádúrtha féin-chéile ilfheidhmeach simplí agus ilfheidhmeach le fóta-íogairí sármhóilíneacha trí ghníomhaíocht frith-ailse le haghaidh teiripe fótadinimiciúil frith-tumor feabhsaithe. Comhéadain ACS Appl Mater 2019; 11: 29498e511.
22. Cheng JJ, Zhao HT, Wang JC, Han Y, Yang X. Cóimeáil bithghníomhach nádúrtha beag móilín-tiúnta de dhrugaí fóta-íogair le haghaidh fótachemiteiripe ard-éifeachtach sineirgisteacha agus feabhsaithe Cineál I. Comhéadain ACS Appl Mater 2020; 12: 43488e500.
23. Wang JC, Zhao HT, Qiao WS, Cheng JJ, Han Y, Yang X. Nanomedicine-cum-iompróir trí tháirgí beaga nádúrtha a chomhthionól le haghaidh antitumor feabhsaithe sineirgisteacha le gníomhartha cosanta fíocháin. Comhéadain ACS Appl Mater 2020; 12: 42537e50.
24. Xí JC, Liu HP. Dul chun cinn le déanaí i ndearadh drugaí agus vacsaíní amfaphilic féin-seachadta. Adv Ther 2019; 3: 1900107.
25. Zhang RS, Qin XF, Kong FD, Chen PW, Pan GJ. Feabhas a chur ar iontógáil cheallacha na n-eintiteas teiripeach trí idirghníomhú le comhpháirteanna den chillscannán. Drugaí Deliv 2019; 26:328e42.
26. Pujals S, Giralt E. Proline-saibhir, peptides amfapathic treá cille. Adv Drug Deliv Rev 2008;60:473e84.
27. Karimi M, Ghasemi A, Sahandi Zangabad P, Rahighi R, Moosavi Basri SM, Mirshekari H, et al. Micreacháithníní cliste/nana-cháithníní i gcórais seachadta drugaí/géine a fhreagraíonn do spreagadh. Chem Soc Rev 2016; 45: 1457e501.
28. Cheng JJ, Li XY, Wang S, Han Y, Zhao HT, Yang X. Táirgí triterpene saor ó iompróir le freagairt glutathione agus bithshábháilteacht le haghaidh fótaimiteiripe feabhsaithe go sineirgistíoch. Comhéadain ACS Appl Mater 2021; 13:245e56.
29. Déanann Li XS, Lee SY, Yoon J. Photosensitizers supramolecular rejuvenate teiripe fótadinimiciúil. Chem Soc Rev 2018; 47: 1174e88.
30. Zou P, Yuan SJ, Yang X, Guo YZ, Li LN, Xu CW, et al. Tréithriú struchtúrach agus éifeachtaí antitumor oligosaccharides chitosan i gcoinne siadaí ae ortópacha trí chonair comharthaíochta NF-kB. J Funct Foods 2019; 57:157e65.
31. Zhai XC, Yuan SJ, Yang X, Zou P, Li NL, Li GY, et al. Cothaíonn olagaishiúicrídí Chitosan apoptosis i gcarcanóma duánach daonna trí strus reticulum endoplasmach imoibríoch-ocsaigin-spleách. J Agric Food Chem 2019; 67: 1691e701.
32. Deng G, Ma C, Zhao HT, Zhang SQ, Liu J, Liu FY, et al. Teiripe teaglaim frith-éidéime agus frithocsaídeach le haghaidh stróc ischemic trí nanacháithníní aigéad betulinic atá luchtaithe le glioburide. Teirnostics 2019; 9: 6991e7002.
33. Liu K, Xing RR, Zou QL, Ma GH, Mo¨hwald H, Yan XH. Féin-thionól simplí peptide-tiúnta de photosensitizers i dtreo teiripe fótadinimiciúil frith-ailse. Angew Chem Int Ed Engl 2016; 55:3036e9.
34. Li Y, Lín JY, Wang PY, Luo Q, Lín AD, Zhang Y, et al. Víreas féin-spriocdhírithe cruth-aisiompaithe meall micri-chomhshaoil meall spreagtha nanodrug le haghaidh ceimiteiripe fótaiteirmeach infridhearg-II atá treoraithe ag íomháú. ACS Nana 2019; 13:12912e28.
35. Sawada SI, Sato YT, Kawasaki R, Yasuoka JI, Mizuta R, Sasaki Y, et al. Comhthionól hibrideach Nanógál le haghaidh seachadadh infhéitheach exosome: éifeachtaí ar endocytosis agus comhleá ag innealtóireacht polaiméire dromchla exosome. Sci Biomater 2020; 8:619e30.
36. Chou TC. Bunús teoiriciúil, dearadh turgnamhach, agus ionsamhlú ríomhairithe ar shineirgeacht agus ar fhrithbheartaíocht i staidéir teaglaim drugaí. Cógaslann Ath 2006; 58:621e81.
37. Zhao YP, Zhao YN, Ma QS, Sun B, Wang QP, Ding Z, et al. Nanarodanna défheidhmeacha saor ó iompróirí trí mhóilíní íona drugaí a chóimeáil le haghaidh teiripe sineirgisteach ceimeafótainimice. Int J Nanomed 2019;14:8665e83.
38. Ma X, Zhao YL. Feidhmeanna bithleighis na gcóras supramolecular bunaithe ar idirghníomhaíochtaí óstaigh-aoi. Ceimic Rev 2015; 115:7794e839.
39. Qin XH, Zhang MZ, Hu X, Du Q, Zhao ZP, Jiang Y, et al. Nana-innealtóireacht ar dhíorthach clóirín e6 nua-dheartha le haghaidh teiripe fótadinimiciúil méadaithe trí mheitibileacht lachtáit a rialáil. Nanascála 2021; 13:11953e62.
40. Du Q, Qin XH, Zhang MZ, Zhao ZP, Li Q, Ren XM, et al. Nanodrug saor ó iompróir mitochondrial-meitibileacht-rialaithe chun íogaireacht teiripe fótaiteirmeach a mhéadú. Cumann Cheim (Camb) 2021; 57:8993e6.
41. Li XS, Yu S, Lee D, Kim G, Lee B, Cho Y, et al. Cur chuige supramolecular éasca maidir le nanotheranostics inghníomhaithe faoi thiomáint aigéid núicléacha a sháraíonn míbhuntáistí a bhaineann le teiripe fótadinimiciúil. ACS Nana 2018; 12:681e8.
2. Táirgeann Gilson RC, Black KC, Lane DD, Achilefu S. Hibrid TiO2-ruthenium nana-photosensitizer go sineirgisteacha speicis ocsaigine imoibríocha i gcoinníollacha hipocsacha agus normocacha araon. Angew Chem Int Ed Engl 2017; 56:10717e20.
43. Xu SD, Yuan YY, Cai XL, Zhang CJ, Hu F, Liang J, et al. Tiúnadh a dhéanamh ar an mbearna fuinnimh singil trí thríréid: cur chuige uathúil maidir le fóta-íogairí éifeachtacha a bhfuil tréithe astaíochtaí comhiomlánaithe (AIE) acu. Sci Ceimic 2015; 6:5824e30.
44. Wu WB, Mao D, Xu SD, Kenry, Hu F, Li XQ, et al. Fóta-íogaireacht feabhsaithe polaiméirithe. Ceimic 2018; 4: 1937e51.
45. Kundu PK, Samanta D, Leizrowice R, Margulis B, Zhao H, Bo¨rner M, et al. Féin-thionól éadrom-rialaithe de nanacháithníní neamhfhótafhreagracha. Nat Chem 2015; 7:646e52.
46. Miyazaki M, Yuba E, Hayashi H, Harada A, Kono K. Liposóim polaiméire modhnaithe pH-íogair atá bunaithe ar aigéad hyaluronic do chórais seachadta drugaí intracellular atá sainiúil do chill. Ceimic Bithconjug 2018; 29:44e55.
47. Zhang JY, Liu ZN, Lian P, Qian J, Li XW, Wang L, et al. Íomháú roghnach agus bás cille ailse trí fhluaraiseacht in-infridhearg in-inaistrithe pH agus éifeachtaí fótaiteirmeacha. Sci Ceimic 2016; 7:5995e6005.
48. Cheng JJ, Tan GH, Li WT, Zhang HY, Wu XD, Wang ZQ, et al. Sintéis éasca de mhaighnéadach ilfheidhmeach le cúnamh chitosan Fe3O4@ SiO2@CS@pyropheophorbide - nanacháithníní fluaraiseacha le haghaidh teiripe fótadinimiciúil. J Chem nua 2016; 40:8522e34.
49. Cheng JJ, Wang S, Zhao HT, Liu Y, Yang X. Iniúchadh a dhéanamh ar mheicníocht féintionóil agus cemophototherapy antitumor sineirgisteacha éifeachtach d'aigéad ursolic in-bhithmhillte agus glutathione sofhreagrach táirgí aigéad ursolic idirghabhála nanodrug photosensitive. Sci Biomater 2021; 9: 3762e75.
50. Yang Y, Xu J, Sun Y, Mo LT, Liu B, Pan XS, et al. Imoibriú ríomhaireachta loighic bunaithe ar Aptamer ar chealla beo chun teiripe imshuí seicphointe imdhíonachta neamh-antasubstainte a chumasú. J Am Chem Soc 2021; 143: 8391e401.
51. Kuai R, Yuan WM, Son SJ, Nam J, Xu Y, Fan YC, et al. Deireadh a chur le siadaí bunaithe le chemoimmunotherapy teaglaim nanodisc-bhunaithe. Sci Adv 2018; 4:eaao1736.
52. Lesniak WG, Chatterjee S, Gabrielson M, Lisok A, Wharram B, Pomper MG, et al. Brath PD-L1 i siadaí ag baint úsáide as [(64) Cu]atezolizumab le PET. Ceimic Bithconjug 2016; 27: 2103e10.
53. Sagiv-Barfi I, Kohrt HEK, Czerwinski DK, Ng PP, Chang BY, Tobhach R. Cuireann ibrutinib, inhibitor de BTK agus ITK araon, díolúine teiripeach in aghaidh an t-tumóra trí imshuí seicphointí. Proc Natl Acad Sci USA 2015;112:E966e72.
54. Liang C, Chao Y, Yi X, Xu J, Feng LZ, Zhao Q, et al. Teiripe raidió-iseatóp inmheánach trí mheán na nana-cháithníní chun tréscaoilteacht soithíoch meall a mhéadú go háitiúil le haghaidh teiripí ailse feabhsaithe go sineirgisteacha. Bithábhair 2019; 197:368e79.
B’fhéidir gur mhaith leat freisin
-
100 faoin gcéad Nádúrtha Cistanche Deserticola Sliocht
-
Feabhas a chur ar Cistanche Díolúine
-
Cuimhne a Fheabhsú, Éifeachtaí Forlíonta Cistanche Tubulosa
-
Platanam Dubh Wecistanche 50 céim
-
Forlíonadh Aiste Bia Cistanche Gliocóisídí Imdhíon-mhiona...
-
Forlíonadh Aiste Bia Cistanche Tacaíocht Frith-ocsaídiúch...