Gníomhaíonn Cealla TH17 Daonna Piocháin Gasdermin E chun IL a scaoileadh-1 Ar Ghníomhachtú Inflammasome NLRP3

Tá sé léirithe gur féidir le freagairtí imdhíonachta dúchasacha airíonna oiriúnaitheacha amhail cuimhne a ghlacadh. Ní fios cé acu an n-úsáideann cealla T cosáin chomharthaíochta imdhíonachta dúchasacha chun a stór feidhmeanna éifeachtóra a éagsúlú. Is móilín foirmithe membrane é Gasdermin E (GSDME) a ​​bhfuil sé léirithe go ndéanann sé bás cille piripteach agus dá bhrí sin feidhmíonn sé mar sheicphointe féideartha ailse. Sa staidéar seo, léirímid go gcuireann cealla T daonna GSDME in iúl agus, is ionadh é, go bhfuil baint ag an slonn seo le hinmharthanacht marthanach agus go bhfuil sé athchuspóireach le haghaidh scaoileadh an alarmin interleukin (IL)-1 . Bhí an t-airí seo teoranta d'fhothacar de chealla cúntóir daonna de chineál 17 T le sainiúlacht do Candida albicans agus arna rialú ag inflammasome NLRP3 NLRP3 intreach T-chealla, agus a rannpháirtíocht de easghluaiseachta próitéalaíocha de caspase i ndiaidh a chéile-8, caspase{{6 }}, agus scoilteacht GSDME tar éis spreagadh gabhdóra cille T agus aibiú caipitilin cailciam-cheadúnaithe den fhoirm pro-IL-1. Tugann ár dtorthaí le fios go bhfuil foirmiú pore GSDME i gcealla T ina mheicníocht um scaoileadh cítocine neamhghnáthamh. Déanann an toradh seo éagsúlú ar ár dtuiscint ar stór feidhme agus ar threalamh meicníoch na gcealla T agus tá impleachtaí aige d’imdhíonacht antifungal.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Is gníomhaithe tábhachtacha iad cealla T Cúnta (cealla TH) ar fhreagraí éifeachtóra a bhaineann go sonrach le hantaigin trína n-rún cítocíní ar leith. Aithnítear cealla cúntóir de chineál 17 T (cealla TH17), go háirithe, as a bhfeidhmeanna antifungal trí secretion a cítocín sínithe IL-17A, atá á rialú ag an bhfachtóir trascríobh gabhdóir dílleachta a bhaineann le RAR (ROR)- t1. Tá siad freisin ar na príomh culprits i pathogenesis na ngalar uath-imdhíonachta2. TH1Aithníodh 7 gcill roimhe seo chun ilchineálacht fheidhmiúil3 a thaispeáint. Déantar feidhmeanna pro- nó frith-athlastacha a fheidhmiú trí chomhexpression difreálach IL-17 le interferon (IFN)- nó IL-10, faoi seach4–7. Tríd is tríd, mhúnlaigh sé seo an coincheap de dhé-achas cille TH17 agus spreag sé imscrúdú ar na comharthaí agus na spriocanna móilíneacha a rialaíonn an dichotomy idir an dá thoradh feidhme cille TH17 le haghaidh feidhmeanna teiripeacha3,4,8,9. Mar sin féin, tá tuiscint dhomhain ar fhéiniúlacht agus ar bhunús meicníoch na gcinntí cille TH17 pataigineach i gcoinne imdhíon-rialaithe TH17 dothuigthe. D’fhéadfadh meicníochtaí breise éifeachtóra atá fós le fáil a théann níos faide ná táirgeadh IL-17 oibriú freisin i gcealla TH17 a bhfuil sainiúlachtaí antifungal nó antibacterial acu. Cuireann IL-1 cítocíní, ar a seasann IL-1 agus IL-1 na baill is suntasaí, éifeachtaí athlastacha as cuimse. Nuair a scaoiltear amach iad ó chealla léirithe antaiginí (APCanna), ní hamháin go gcothaíonn siad freagairtí athlastacha dúchasacha gasta ach freisin rianaíonn siad imdhíonacht oiriúnaitheach trí pholarú cille TH17 agus pataigineacht cille T a chur chun cinn nuair a bhíonn siad ceangailteach dá ngabhdóir IL-1R14,10,11. . IL-1-táirgeadh cealla TH17 frith-athlastach4 mar thoradh ar thúsú cille neamhspleách TH17, ar cuireadh síos air roimhe seo freisin. Dá bhrí sin feidhmíonn IL-1 ó fhoinsí dúchasacha ceallacha mar fhachtóir lasc don dé-óid de chinntí cille TH17 atá in aghaidh an-fhrith-athlastach. Murab ionann agus an chuid is mó cítocíní eile, tá easpa peiptíde comhartha ag cítocíní IL{-1 agus mar sin tá siad faoi rún ag reticulum neamhchoinbhinsiúnach, endoplasmach (ER)–Golgi-neamhspleách.

Teastaíonn scoilteacht einsímeach ó Pro-IL-1 sula scaoiltear isteach sa spás eischeallach agus gabháil lena ghabhdóir. Is coimpléasc próitéin cítosólach iliméireach é an t-inflammasome NLRP3 a chóimeálann ionfhabhtú miocróbach agus damáiste cheallacha agus a earcaíonn caspase-1 le haghaidh scoilteachta pro-IL-1 ina dhiaidh sin12. Éilíonn imeacht IL-1 freisin go bhfuil scoilteacht agus foirmiú pore caspase-1-idirghabhálaithe deirm D (GSDMD) i bpróiseas ar a dtugtar piroptóis, foirm athlastach de bhás cille13,14. Ar an láimh eile, meastar go ndéantar IL-1 , a phróiseáil go neamhspleách ar an NLRP3 inflammasome trí sheicphointí rialála nach dtuigtear go leor go fóill10. In ainneoin na gconairí iomlána ar leith seo maidir le haibiú agus scaoileadh IL-1 agus IL{-1 , déantar an dá chitocinín a chomhtháirgeadh ag cealla an chórais imdhíonachta dúchasach, rud a thugann le fios go bhfuil na cítocínín fós ann. bealaí comhrialála. Sa staidéar reatha, léirímid go bhfostaíonn fo-thacar de chealla TH17 daonna easghluaiseachta comharthaíochta cleithiúnach NLRP chun foirmiú pore membrane a spreagadh trí GSDME, a fhreastalaíonn ar scaoileadh uathchríneach IL pro-athlastach-1 . Nochtann an toradh seo modh neamhghnáthamh maidir le secretion cítocín ag cealla T daonna agus mar sin déanann sé éagsúlú ar stór feidhme agus meicníoch T chealla.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Torthaí

Is saintréith de chealla TH daonna é táirgeadh IL{0}}

Chun imscrúdú a dhéanamh ar ilchineálacht fho-thacar cille TH17 daonna agus chun feidhmeanna ar leith agus a rialú móilíneach a nochtadh, rinneamar seicheamhú RNA aonchealla (scRNA-seq) de chealla TH17 daonna gníomhachtaithe, a bhí scoite amach ex vivo ó fhuil imeallach de réir a léiriú uathúil de mharcóirí dromchla gabhdóirí chemokine15. D'aithin anailís taiscéalaíoch trí chomhfhogasú agus teilgin aonfhoirmeach aonfhoirmeach (UMAP) agus cnuasú Leiden de na cealla TH17 go léir sé bhraisle aonair (Fíor 1a). Saibhríodh daonra sainiúil agus neamhchoitianta (6%) de chealla IL1A-léirithe TH17 go roghnach i mbraisle 1 (Fíor 1a,b). Léirigh comparáid idir na géinte go léir i mbraisle 1 le gach braisle eile go raibh IL1A uasrialaithe go suntasach (Tábla Forlíontach 1). Ní rabhthas ag súil leis seo ós rud é nach meastar go mbaineann IL-1 leis an repertoire cítocine d’éifeachtaí canónacha de chealla T, ach go léiríonn sé comhartha contúirte dúchasach16. Ní raibh IL1A, áfach, i measc na ngéinte is airde a cuireadh in iúl go difreálach (DEGanna) i mbraisle 1, rud a raibh gá le straitéis chuardaigh níos doimhne chun a upregulation suntasach a bhaint amach i bhfodhaonra de chealla TH17 (Fíor Forlíontach 1). Ag an leibhéal próitéine, rinneadh clóin chill TH17 a dheighilt ina gclónna ar leith IL-1 + agus IL-1 – T ceall, rud a thacaíonn le ilchineálacht slonn próitéin IL{-1 ag an leibhéal aonchealla laistigh an daonra cille TH17 (Fíor 1c). Chun comparáid a dhéanamh idir slonn IL1A ag cealla TH17 agus léiriú i gcineálacha cille imdhíonacha eile, go háirithe táirgeoirí bona fide IL-1 a tuairiscíodh roimhe seo, rinneamar ceistiú ar thacair sonraí scRNA-seq poiblí iolracha de chealla mononuclear fola forimeallacha daonna (PBMCanna). Is ionadh é, níor léirigh sé seo aon léiriú IL1A i gcineálacha cille imdhíonachta éagsúla de PBMCanna scíthe, lena n-áirítear cealla T, cealla B, cealla marfach nádúrtha (NK), cealla NKT, monocytes, agus cealla dendritic (Fíor Forlíontach 2a,b). Níor thaispeáin fiú monocytes aon slonn IL1A ag an leibhéal aonchealla, ach amháin má cuireadh spreagadh sainiúil IL1A-spreagtha, go sonrach lipopolysaccharide (LPS), i bhfeidhm ar na cealla seo (Fíor Forlíontach 2c,d), rud a léirigh a gcumas táirgthe IL1A agus comhcheangal slonn IL1A le freagairt imdhíonachta dúchasach athlastach leanúnach (Fíor Fhorlíontach 2e). Tá sé suimiúil gur ar éigean a léirigh comparáid tras-traipeolaíoch aonchealla de na DEGanna idir cealla IL1A+ agus IL1A – ó chealla TH17 i gcoinne monocytes aon fhorluí ar chomhexpression géine (IL1A agus CCL3), rud a thug le tuiscint go mór modh difriúil de rialáil IL1A i T. cealla i gcoinne monaicítí (Fíor 1d). Nuair a chuirtear le chéile iad, léiríonn na torthaí seo go bhfuil fo-dhaonra ar leith de chealla IL-1 -léirithe laistigh den fhothacar cille TH17.

Tá an fo-thacar a tháirgeann IL de chealla TH17 pro-athlastach

Chun ábharthacht fiseolaíoch slonn IL1A i gcealla TH17 daonna a iniúchadh, rinneamar comparáid tras-traipeolaíoch neamhchlaonta ar chealla IL1A+ agus IL1A–TH17 tar éis scRNA-seq. Léirigh anailís saibhrithe tacair géine (GSEA) le haghaidh géinte comhexpressed le IL1A i gcealla TH17, chomh maith le hanailís saibhrithe ag baint úsáide as DEGanna, nasc buailte IL1A le gníomhachtú agus iomadú cille T tar éis ceistiú neamhchlaonta ar na téarmaí ontology géine go léir atá ar fáil (GO). Fíor 2a agus Fíor Forlíontach 3). Thug an toradh seo dúshlán do ról IL-1 a sannadh roimhe seo i seanaoise agus bás cille i gcomhthéacs nua cealla T17. Léirigh an anailís saibhrithe freisin ró-ionadaíocht láidir do roinnt téarmaí GO a bhaineann le ‘athlasadh’, rud a thugann le tuiscint gur chuir léiriú IL1A ag cealla TH17 le céannacht cille T pataigineach le róil i ngalar athlastacha (Fíor 2a). Tacaíodh leis an smaoineamh seo trí uasrialú géin a bhfuil nótáilte leis an téarma GO ‘freagairt cheallacha ar interleukin-1’, ag cur san áireamh an éifeacht lasc proinflammatory a tuairiscíodh roimhe seo de IL-1 ar fheidhmiúlacht iomlán cille TH174 agus an éifeacht shochtadh. den uathchrín IL-1 ar slonn IL-10 (Sonraí Leathnaithe Fíor 1a–c). Léirigh comparáid dhíreach idir cealla IL1A+ agus IL1A– TH17 thar na braislí go léir gur léirigh cealla IL1A+ TH17 sínithe proinflammatory feabhsaithe go mór, ach laghdaithe frith-athlastach (Fíor 2b) 7. Ina theannta sin, bhí braisle 1, a shaibhríodh do chealla IL1A+ TH17, i bhfad níos proinflammatory agus níos lú frith-athlastach ná na cúig braisle eile, mar atá léirithe ag GSEA (Fíor 2b). Is díol spéise é gur léirigh comparáid tras-traipeolaíoch mórchóir idir fo-thacair cille TH17 frith-athlastacha go raibh IL1A i measc na ngéinte is airde-rialaithe fiú san fho-thacar cille proinflammatory TH17 (Fíor 2c, d agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 2). Ina ionad sin, rinneadh an-íosrialú ar IL10, mar a bhíothas ag súil leis de réir tuarascálacha roimhe seo4,7. Breathnaíodh freisin ar an gcomhghaolú cómhalartach seo de léiriú IL-1 agus IL{-10 ag cealla TH17 ag an leibhéal próitéine ag cíteiméadracht sreafa (Fíor 2e). Léirigh anailís saibhrithe leis na DEGanna ró-ionadaíocht ar bhealaí KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) le haghaidh galair uath-imdhíonacha ar nós 'airtríteas réamatóideach' agus 'galar putóige athlastach' (Fíor 2f), a thacaigh le nádúr proinflammatory an IL1A-léiriú TH17 fothacar cille. Go deimhin, léirigh othair atá ag fulaingt ó airtríteas idiopathic ógánach (JIA), foirm an-athlastach airtríteas réamatóideach i leanaí a raibh a bpataigineas nasctha roimhe seo le IL-1 agus IL-1 18,19 dúchasach, go suntasach agus go láidir. slonn ardaithe IL-1 ag IL-17+ cealla TH i gcomparáid le cealla IL-17+ TH ó fhuil rialaithe shláintiúil (Fíor 2g). Níor tugadh faoi deara aon mhéadú IFN- laistigh de chealla IL-17+ TH ó fhuil na n-othar le JIA i gcomparáid le fuil deontóra rialaithe, ina ionad sin, in ainneoin an chomhcheangail a tuairiscíodh roimhe seo de IFN- le pataigineacht cille TH17 (Fíor 2g, painéal ar dheis). 4. Ina theannta sin, léirigh an anailís ar shreabhán synovial comhoiriúnaithe le fuil minicíochtaí an-ard de chealla IL{-1 + TH, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh cealla T, lasmuigh de chealla dúchasacha, foinse cheallacha ábhartha den IL a bhaineann le galair a léiriú freisin. } ag an suíomh athlasadh.

Buntáistí cistanche tubulosa- an córas imdhíonachta a neartú

Tá slonn IL-1 á rialú ag ríomhchlár TH17

Chun imscrúdú a dhéanamh an bhfuil slonn IL-1 ina airí ginearálta de chealla T, shaibhríomar fo-thacair cille TH aonair ó PBMCanna de réir a slonn difreálach de ghabhdóirí ceimicín (Sonraí Leathnaithe Fíor. 3) agus rinneamar comparáid idir a IL-1 rún. Táirgeadh IL-1 go sonrach ag fo-thacar cille TH17 ach ní raibh an fo-thacar cille TH1, fo-thacar cille TH2, nó cealla T rialála (cealla Treg) (Fíor 3a-c). Go suntasach, bhí a leibhéal secretion ar spreagadh le antasubstaintí monaclónacha frith-CD3 agus frith-CD28 mheaitseáil leis an monocytes daonna spreagtha le LPS agus nigericin, rud a léiríonn go bhfuil cealla TH17 daonna, in ainneoin a bhféiniúlacht imdhíonachta oiriúnaitheach, mar phríomhfhoinse an comhartha contúirte IL. -1 (Fíor 3a). Bhí léiriú próitéin IL-1 intracellular as láthair i gcealla TH scíthe úrscothacha ach ní raibh sé inducible ar ghníomhachtú receptor cille T (TCR), le saibhriú suntasach i gcealla TH17 i gcomparáid le cealla TH1, TH2 agus Treg saibhrithe cille (Fíor 3b). ,c). Is cosúil go mbaineann na torthaí seo go sonrach leis an gcóras imdhíonachta daonna toisc nár áiríodh i dtuarascálacha roimhe seo táirgeadh IL-1 ag cealla T luiche16. Spreag an bhaint uathúil atá ag IL-1 le fothacar cille TH17 sinn chun rialáil an chitocín seo a dháileadh go meicniúil. Tá sé suimiúil gur laghdaíodh slonn IL-1 ar chosc ar leith ar ROR- t, an príomhfhachtóir trascríobh de chealla TH17 (Fíor 3d,e) 1. Tá na sonraí seo ag teacht le láithreacht suíomhanna ceangailteacha toimhdeacha do ROR t agus ROR- sna réigiúin tionscnóra agus feabhsaitheoirí IL1A (Sonraí Leathnaithe Fíor 4a,b). Cinntear cinniúint fo-thacar cille TH ar leith ag an micri-thimpeallacht cítocín polaraitheach ar leith le linn spreagadh cille T naive. Thugamar faoi deara an slonn intracellular is airde agus secretion IL-1 ar priming cille naive T i gcoinníollacha polaraithe cille TH17 (IL-1 agus ag athrú fachtóir fáis (TGF)-) (Fíor 3f, g). Níor tharla, áfach, go raibh léiriú suntasach IL{-1 i gcealla naive T mar thoradh ar chóireálacha aonair le IL-1 nó TGF- amháin, rud a chuir béim ar éifeacht sineirgisteacha na cítocíní cille-priming comhcheangailte TH17 ar ionduchtú de novo IL-1 (Fíor Forlíontach 4). I gcodarsnacht leis sin, níor athraíodh go mór an t-rúrú IL{-1) agus TH1 (IL-12) agus TH2 (IL-4) an tseú IL{{-1) agus faoi spreagadh in éagmais cítocíní polaraitheacha. Le chéile, léiríonn na torthaí seo go bhfaigheann cealla T naive an cumas IL-1 a tháirgeadh trí chitocíní polaraithe ceall TH17. Léirigh cealla cuimhne TH freisin uasrialú suntasach breise ar a n-éifeachtaí cítocine IL{1 i micri-thimpeallachtaí IL{-1 agus TGF (Fíor 3h).

Fíor 1|Is féidir le fo-thacar ar leith de chealla daonna TH17 IL-1 a chur in iúl.

Is sainairíonna é céannacht fho-thacair cille TH freisin ag airíonna imirce ar leith, a bhaineann le léiriú difreálach na ngabhdóirí ceimicín20. Thugamar faoi deara gur saibhríodh slonn IL-1 i gcealla CCR6+ ach ní i gcealla CCR6– T agus laghdaíodh é i gcealla CXCR3– T i gcomparáid le cealla T CXCR3+, cé nach raibh aon difríocht i gcealla T. slonn IL-1 idir CCR4+ agus CCR4- cealla T (Fíor 3i). Léiríonn na sonraí seo go dtaispeánann IL-1 -chealla táirgthe an patrún ascnaimh a sannadh do IL-17-chealla táirgthe roimhe seo15. Nuair a chuirtear le chéile iad, léiríonn na sonraí seo go comhsheasmhach gur feidhm uathúil de chealla TH17 daonna é IL-1.

Fíor 2|Tá IL-1 cealla a tháirgeann TH17 pro-athlastach

Fíor 3|Tá táirgeadh IL-1 ag cealla T teoranta do chinniúint na gceall TH17

Tá Calpain ina réamhriachtanas le haghaidh secretion IL-1 ag cealla TH17

Chun meicníocht secretion IL-1 a iniúchadh, chuireamar cóireáil ar chealla TH17 leis an gcoscadán easpórtála próitéine brefeldin A (BFA) agus fuaireamar amach nach raibh aon tionchar ar an secretion IL-1, murab ionann agus cítocíní traidisiúnta, mar sin. mar IL-17A (Sonraí Leathnaithe Fíor 5a–c). Tacaíonn sé seo le conair neamhchoitianta ER-Golgi-neamhspleách a bheith ann le haghaidh secretion IL{-1 ag cealla T agus tá sé ag teacht le tuarascálacha roimhe seo maidir le cineálacha cealla dúchasacha21,22. Airí uathúil a sannadh do IL-1 roimhe seo ná a logánú comhuaineach sa chíteaplasma agus sa scannán plasma23. Fuaireamar amach, áfach, nár thaispeáin cealla TH17, i gcodarsnacht le monaicítí, IL-1 faoi cheangal membrane (Sonraí Leathnaithe Fíor. 5d). Cé go bhfuil scoilteacht pro-IL-1 ag teastáil chun IL bithghníomhach eischeallach a ghiniúint-1 , is eol go scaoilfear IL-1 go héighníomhach ar bhás cille agus go bhfeidhmeoidh sé a phoitéinseal bithghníomhach tar éis é a cheangal le IL{ {19}}RI ina fhoirm neamhghlanta nó scoilte24. Chun a chinneadh an ndéantar próiseáil incheallach le pro-IL-1 le haghaidh scaoileadh rialaithe ag cealla T daonna, rinneamar measúnú ar fhoirmeacha lánfhad agus aibí IL-1 i gcomhshamhail na gcealla TH17 gníomhachtaithe. Chun monocytes éillitheacha ar bith a eisiamh mar fhoinse fhéideartha de IL rúnda-1 , ghineamar clóin chill TH17 thar thréimhse 2 sheachtain agus rinneamar iad a athspreagadh le antasubstaintí monachlónacha frith-CD3 agus frith-CD28 ar feadh 5 d eile roimh imdhíonadh. Sna sé chlóin chill TH17 a tástáladh, fuaireamar saibhriú tosaíochta ar an bhfoirm scoilte de IL-1 sna súiteoirí cultúir (Fíor 4a). I gcodarsnacht leis sin, léirigh lísáití cille TH17 saibhriú tosaíochta ar an bhfoirm neamhghlanta pro-IL-1, mar a bhíothas ag súil leis (Fíor Forlíontach 5a). Eisiatar leis na torthaí seo scaoileadh éighníomhach pro-IL-1 le linn neacróis cille mar an mhódúlacht scoir réamhshocraithe IL{{-1 i gcealla T agus, ina ionad sin, tugann siad le tuiscint go gcaithfidh innealra móilíneach a bheith ag cealla TH17 daonna le haghaidh pro-IL{{ 46}} scoilteachta chun scaoileadh extracellular rialaithe an mhóilín bithghníomhach láidir ag cealla T inmharthana a chumasú, i gcodarsnacht le cealla dúchasach (Fíor Forlíontach 5b). Ní chuireann sé seo as an áireamh, áfach, rannchuidiú breise de neacróis cille T le scaoileadh na pro-fhoirme bithghníomhach de IL-1 (Fíor Forlíontach 5a). Is féidir próiseáil pro-IL-1 ag suíomhanna scoilteachta ar leith a chatalú le roinnt próitéasanna17,25,26. Is próitéas cistéin atá spleách ar chailciam é Calpain agus is féidir leis an blúire IL-1 p1726 lánaibí, atá aitheanta againn anseo, a chruthú. Fuaireamar gníomhaíocht calpain i gcealla TH17. Mhéadaigh sé ar ghníomhachtú le antasubstaintí monachlónacha frith-CD3 agus frith-CD28 (Fíor 4b). Bhí secretion IL-1 ag cealla TH17 ag brath ar ghníomhaíocht chaipitilin T cille-intreacha toisc gur laghdaigh cosc ​​​​calipitin cógaseolaíochta secretion IL-1 trí chealla TH17 gníomhachtaithe isteach sa spás eischeallach ar bhealach dáileog-spleách (Fíor 4c) . Dá réir sin, ba é an toradh a bhí ar chosc calpain ná carnadh infhéitheach pro-IL-1 (Fíor 4d). Chun spleáchas an tseolta IL{-1 ar calpain a dhaingniú, leagamar amach go géiniteach freisin calpain i gcealla daonna TH17 trí úsáid a bhaint as atriallta palindróim gearra cnuasaithe go rialta idirspásaithe (CRISPR)–Cas9. Léirigh sé seo go raibh ról ag CAPN2, ach ní CAPN1, i secretion IL-1 ag cealla TH17 daonna (Fíor 4e). I gcodarsnacht leis sin, ní raibh an secretion IL-1 spreagtha LPS-/nigericin-spreagtha ag monaicítí ag brath ar calpain (Fíor 4f). Bhí na sonraí seo comhsheasmhach le léiriú tosaíochta CAPN2 ach ní CAPN1 ag fo-thacair chealla T daonna i gcodarsnacht le cealla dendritic, a léirigh patrún slonn géine droim ar ais calpain (Fíor Forlíontach 6). Mhéadaigh secretion IL-1 i gcealla TH17 ar charnadh cailciam infhéitheach agus ar chosc ar an sarco-/ER Ca2+ ATPase le thapsigargin (Fíor 4g) agus laghdaigh sé ar chelation cailciam eischeallacha le (eitiléinebis(ocsaitride) )teitra-aicéatáit (EGTA) (Fíor 4h), comhsheasmhach le feidhm chailciam-spleách calpain agus secretion IL-1 atá ag brath ar TCR26. Le chéile, léirigh na sonraí seo go bhfuil gníomhaíocht próitéalaíoch an chailciam-chleithiúnaí caipitilin prótease ina réamhriachtanas le haghaidh secretion neamhghnáthamh IL-1 ag cealla daonna TCR-ghníomhachtaithe TH17.

Tá secretion IL-1 ag cealla TH17 á rialú ag gníomhachtú inflammach NLRP3

In ainneoin ról riachtanach calpain in aibiú pro-IL-1, níorbh eol fós an mheicníocht as ar eascair imeacht eischeallach IL-1 scoilte agus mar sin díríodh uirthi ina dhiaidh sin. Bhí baint roimhe seo ag scaoileadh IL-1 eischeallach ag cealla myeloid le gníomhachtú inlasta NLRP3, gníomhaíocht neamh-einsímeach caspase-1, agus scaoileadh IL-1 16,27. Thástáil muid an raibh scafall móilíneach an NLRP3 inflammasome i seilbh cealla TH17 daonna agus fuair siad léiriú próitéine de NLRP3 agus an móilín oiriúntóra, próitéin cosúil le speck apoptosis-ghaolmhar ina bhfuil CARD (ASC), i gcealla TH17 daonna (Sonraí Leathnaithe Fíor. 6a, b). Thugamar faoi deara gníomhachtú inflammasome leanúnach i gcealla TCR-gníomhachtaithe TH17 trí specks ASC a aithint ag baint úsáide as teicneolaíocht ImageStream (Fíor 5a, b) 28,29. Go suntasach, bhí minicíochtaí méadaithe specks ASC teoranta go sainiúil d'fhothacar cille TH17 (Fíor 5b, ar chlé). Rinne cealla TH17 fiú comhfhogasú ar fhoirmiú ASC-spec de mhacrophages spreagtha LPS- agus ATP (Fíor 5b, ar dheis). I gcodarsnacht leis sin, léirigh fo-thacair cille TH1 agus TH2 leibhéil ASC-speic chúlra (Fíor 5b, ar chlé). Ina theannta sin, aisghaireadh foirmiú spec ASC-speck agus NLRP3- go hiomlán i láthair an t-inhibitor inflammasome NLRP3 sonrach MCC950, rud a thugann bunús le gníomhachtú inflammasome NLRP3 leanúnach a bheith ann i gcealla TH17 (Fíor 5b, ar chlé agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 6c). Tugadh tacaíocht bhreise do rannpháirtíocht roghnaíoch cealla inflammasome NLRP3 ag cealla TH17 ag ionduchtú láidir athscríbhinní NLRP3 ar spreagadh cille T i láthair na cítocíní polaraithe cille TH17 IL-1 agus TGF- (Fíor 5c). Rud atá tábhachtach, laghdaíodh secretion IL-1 ag cealla TH17 go suntasach trí chosc ar leith ar an inflammasome NLRP3 le MCC950 (Fíor 5d), rud a léirigh ról ríthábhachtach an NLRP3 inflammasome i secretion IL-1 trí cealla TH17 daonna. Is é Caspase-1 an próitéin éifeachtóra chanónach i gcoimpléasc inflammach NLRP330. Thugamar faoi deara slonn pro-caspase-1 i gcealla daonna TH17 gníomhachtaithe (Fíor 5e). Mar sin féin, i gcodarsnacht leis na torthaí i monocytes LPS- agus nigericin-spreagtha, níor aimsíodh aon caspase scoilte-1 i lísáití cille daonna TH17 (Fíor 5e). Tacaíodh leis an bhreathnóireacht seo le heaspa staining caspase-1 FLICA i gcealla TH17 a spreagtar i láthair nó in easnamh IL-1 spreagthaigh chitocine a chur chun cinn (Sonraí Leathnaithe Fíor. 7a–e). D'eisiaíomar freisin scaoileadh eischeallach caspase-1 ag ELISA tar éis cealla TH17 a spreagadh le hantasubstaintí monachlónacha frith-CD3 agus frith-CD28 ar feadh 5 d (Fíor 5f). Fiú i láthair an spreagtha IL-1 IL-1 , ní raibh an t-rún caspase do-indéanta agus d'fhan sé chomh híseal leis sin i monaicítí scíthe (Fig. 5f). Níor laghdaigh cosc ​​cógaseolaíochta ar caspase-1 le Ac-YVAD-CMK secretion IL-1 i láthair nó in easnamh ionduchtaithe IL-1 ag IL-1 . Ina ionad sin, thugamar faoi deara secretion IL -1 beagán ardaithe ar choscadh caspase{-1 (Fíor Forlíontach 7a,b). Is é an rud is tábhachtaí ná níor léirigh cealla TH17 aon athrú ar an secretion IL-1 ar CRISPR–Cas9-ídiú innealtóireachta ar slonn CASP1 (Fíor 5g). Ag teacht leis an easpa caspase bithghníomhach-1, níor thugamar faoi deara aon rún IL-1 ag cealla TH17 daonna. Bhí sé seo i gcodarsnacht leis an gcás i monocytes, a léirigh caspase IL spleách{-1 secretion ar spreagadh le LPS agus ATP (Sonraí Leathnaithe Fíor. 7f). Ina theannta sin, ní raibh aon IL incheallach-1 inbhraite nó induchtach trí IL-1 -polarúchán cítocíní i gcealla TH17 nó clón ceall TH17 nó inbhraite i gcealla TH17 gníomhachtaithe trí anailís scRNA-seq (Sonraí Breisithe Fíor 7g,h, i). Bhí sé seo i gcodarsnacht leis an gcinneadh do monocytes, a chomh-chomhshírigh IL-1 agus IL{-1 ag an leibhéal aonchealla, ag teacht leis an rún a moladh roimhe seo agus patrún croí-rialála toimhde an dá IL-1 cítocíní (Sonraí Breisithe Fíor 7g)16,27. Go carnach, léiríonn na sonraí seo go dtáirgeann cealla TH17 daonna IL-1 neamhspleách ar caspase-1 agus IL-1 , murab ionann agus monocytes agus cealla imdhíonachta dúchasacha eile is dócha, in ainneoin rannpháirtíocht shoiléir an NLRP3 inflammasome.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

IL-1a scoireann cealla TH17 trí phiocháin GSDME

Baineann gasdermins le teaghlach de mhóilíní éifeachtóra póir-fhoirmithe a aithníodh le déanaí agus a chumasaíonn scaoileadh idirghabhálaithe athlastacha31. Nocht ár n-anailís transcriptome upregulation roghnaíoch ar léiriú GSDME san fho-thacar cille TH17 proinflammatory IL-1 -spreagtha, ach gan aon rialáil ar aon bhall eile den teaghlach gastrin (Fíor 6a). Ba ábhar iontais é seo ag cur san áireamh nár tuairiscíodh slonn GSDME riamh i gcealla príomhúla T. I gcodarsnacht leis sin, níor athrialaíodh GSDMD, arb eol go bhfuil sé rialaithe ag an NLRP3 inflammasome agus a bheith ina sprioc ag caspase-1 (tag. 31), ag tacú leis an smaoineamh ar chomharthaíocht inflammasome neamhchanónach NLRP3. Taispeánadh roimhe seo go gcruthaíonn GSDME phiocháin membrane i gcealla imdhíonachta dúchasacha a d'fhéadfadh feidhmiú mar seoladáin le haghaidh scaoileadh allcheallach aláraimín agus tús a chur le bás cille pireaptótach cosúil le GSDMD32. Chun comhlachas GSDME le fo-thacar cille TH17 a thástáil, rinneamar measúnú ar cé acu an bhfuil cítocíní polaraithe cille TH17 ag croí-rialú GSDME. Níor mhéadaigh ach an meascán de TGF- le IL-1 (TH17), ach ní IL-12 (TH1) nó IL-4 (TH2), leibhéil tras-scríbhinn GSDME mar a mheasúnaítear trí thrascríobh droim ar ais– cainníochtúil PCR (RT–qPCR) (Fíor 6b). Tacaíodh leis seo trí shuíomhanna ceangailteacha toimhdeacha a bheith ann do fhachtóirí trascríobh TH17 a bhaineann le cealla ROR- agus BATF (bunfhachtóir trascríobh zipper leucine, cosúil le ATF) i réigiúin tionscnóra GSDME (Sonraí Breisithe Fíor 8a,b)33. GSDMD abairt, i gcodarsnacht leis sin, ní raibh rialú ag cill-polarizing cytokines (Fíor Forlíontach. 8). Spreag an toradh seo sinn chun léiriú GSDME a mheas ag an leibhéal próitéine i gcealla TH17 daonna. Bhí an pro-form GSDME induchtach ar ghníomhachtú TCR. Ní raibh coinne leis an ionduchtú próitéin GSDME mar fhreagra ar an gcomhartha imdhíonachta oiriúnaitheach seo, ach tugadh tacaíocht bhreise dó ó shuímh cheangailteach toimhdeacha fachtóirí trascríobh freagrúla comharthaíochta TCR mar NFAT, FOS, JUN, agus RELA i réigiúin tionscnóra GSDME (Sonraí Leathnaithe Fíor 8a ,b). Cuireadh GSDME in iúl chomh luath le 24 h tar éis spreagadh polyclonal. An cleaved N-críochfort pore-foirmithe GSDME a bhí inbhraite ag pointí am déanach, 3-4 d tar éis spreagadh TCR na cealla TH17 (Fíor. 6c). Cothaíodh GSDMD lánfhad i gcomhthráth ar ghníomhachtú cealla T. I gcodarsnacht leis sin, níor breathnaíodh aon scoilteacht GSDMD, mar a bhí tuartha ó easpa secretion caspase-1 agus IL{{{{{{{{{{6}), rud a fhágann ról GSDMD i gcealla TH17 ar oscailt le haghaidh tuilleadh anailíse (Fíor 6c). Bhí sé mar aidhm againn an chéad chéim eile a fhiosrú an bhfuil phiocháin GSDME ag feidhmiú mar seoladáin le haghaidh scaoileadh eischeallach IL-1 i gcealla TH17. Mar sin chuireamar GSDME amach le teicneolaíocht CRISPR-Cas9 agus rinneamar monatóireacht ar scaoileadh IL{-1 isteach sa chomhshamhail le himeacht ama ag ELISA. Chuir easpa GSDME, ach ní GSDMD, bac suntasach ar scaoileadh IL-1 ag cealla TH17 (Fíor 6d). Léiríonn sé seo go soiléir go bhfeidhmíonn foirmiú pore GSDME mar mheicníocht chun IL-1 neamhghnáthamh a scaoileadh ag cealla TH17 daonna.

Fíor 4|Tá Calpain ina réamhriachtanas chun IL-1 scoilte a scaoileadh ag cealla TH17 daonna

Fíor 5|Rialaíonn gníomhachtú inflammasome NLRP3 neamhchoitianta táirgeadh IL-1 ag cealla TH17 daonna

Cumasaíonn easghluaiseacht scoilteachta caspase-8/3 GSDME secretion NLRP3-spleách IL-1

An chéad uair eile rinneamar iniúchadh ar an bhféidearthacht go mbeadh crosphlé meicníoch idir gníomhachtú inflammach NLRP3 agus scoilteacht GSDME i gcealla TH17 daonna. Léiríodh le déanaí go scoiltíonn Caspase GSDME, rud atá ina sprioc ag caspase idirghníomhaíochta inflammasome NLRP3-8 (tag. 34,35). Go deimhin, braitheadh ​​pro-caspase-8 agus pro-caspase{-3 i gcealla TH17. Fuaireamar amach gur tharla scoilt an dá chás ar spreagadh TCR agus go ndeachaigh scoilteacht GSDME roimhe (Fíor 6e). I gcodarsnacht leis sin, níor aimsíodh aon táirgí scoilte de caspase-8 agus caspase{-3 i monaicítí nigericin-spreagtha agus LPS (Fíor 6e). Chun ról cúiseach a bhunú do na caspáis seo i scoilteacht GSDME agus i secretion IL-1 ag cealla T, chuireamar bac cógaseolaíochta ar ghníomhaíocht caspase-3 nó caspase{{-8 leis an gcoiscín Z-DEVD -FMK nó Z-IETD-FMK, faoi seach. Mar gheall ar ghníomhaíocht caspase-8 le Z-IETD-FMK aisghaireadh scoilt an sprioc-caspase iartheachtacha-3, ag teacht le tuarascálacha roimhe seo ar chineálacha cealla eile36. Laghdaigh an dá chóireáil scoilteacht GSDME agus aisghaireadh an rún IL{-1 freisin (Fíor 6f–i agus Sonraí Breisithe Fíor 9a,b). Ina ionad sin, níor chuir cosc ​​ar caspase-1 isteach ar cháspase-3 nó scoilteacht GSDME (Fíor Forlíontach 9). Léirigh na sonraí seo go soiléir go raibh an ais caspase-8–caspase-3–GSDME ag feidhmiú i gcealla TH17 daonna ar ghníomhachtú TCR agus gur rialaigh sé secretion IL{-1 sna cealla seo. Chun an nasc idir an cascáid scoilteachta próitéalaíoch seo agus an NLRP3 inflammasome a bhunú ar deireadh, chuireamar MCC950 i bhfeidhm ar chealla TH17 spreagtha, rud a d'fhág, go deimhin, laghdú suntasach ar scoilteacht caspase-3 agus GSDME ar lá 5 (Fíor 6f,g. agus Sonraí Breisithe Fíor 9c). Bhí laghdú ar scoilteacht caspase, áfach, níos lú suntasaí ag an bpointe ama céanna anailíse, a bhí ag teacht lena fhuinneog ama gníomhachtaithe níos luaithe (Fíor 6e,f). Go hachomair, bhunaigh cosc ​​spriocdhírithe ar gach imreoir móilíneach aonair an caspase inflammasome-caspase NLRP3-8– GSDME mar an cosán próitéalaíoch a bhaineann le scaoileadh eischeallach IL bithghníomhach-1 ag an duine. cealla TH17.

Fíor 6|Fágann easghluaiseacht scoilteachta NLRP3–casp8/3 go pores GSDME le scaoileadh IL-1

Tá cealla TH17 athléimneach i gcoinne pyroptosis in ainneoin phiocháin GSDME

Bhí baint ag foirmiú pore gasdermin roimhe seo le bás cille pireaptótach i gcineálacha éagsúla cille13,14,37. Fuaireamar léiriú ar an aonad N-GSDME foirmithe pore scoilte sa scannán plasma ach ní an cítosól, a thacaigh le feidhm pore-forming GSDME i gcealla T (Fíor 7a). Is ionadh é, mar gheall ar chomparáid tras-traipeolaíoch idir chealla TH17 daonna mórchóir GSDME-sláine agus géin-eagarthóireacht CRISPR-Cas9 ag GSEA, d'fhág GSEA difríochtaí i bhfoirmeacha éagsúla bás cille as an áireamh; áfach, go háirithe, léirigh sé go raibh baint go príomha ag na próisis agus na cosáin i gcealla TH17 easnamhach GSDME le géinte a rialaíonn iompar transmembrane, ag teacht leis na seoladáin fhoirmithe pore a chruthaigh N-GSDME (Fíor 7b agus Fíor Fhorlíontach Fig. 10). . Thacaigh comparáid tras-traipeolaíoch aonchealla de chealla TH17 aonair a roghnaíodh don láithreacht i gcomparáid le heaspa léiriú GSDME le hinmharthanacht na gcealla TH17 GSDME-léirithe trína saibhriú géine le haghaidh iomadú (Fíor 7c). Ar deireadh rinneamar bailíochtú ar athléimneacht cealla daonna GSDME-léirithe TH17 go piroptosis trí léiriú a dhéanamh ar easpa difríochta i scaoileadh lactate dehydrogenase (LDH) ar fud cealla TH17 géine-eagarthóireachta CRISPR-Cas9, GSDME-easnamhach agus GSDME-slán ar spreagadh TCR (Fig. .7d). Ansin chuireamar cealla IL-1 + agus IL-1 – TH17 i gcomparáid lena n-inmharthanacht agus lena n-acmhainneacht iomadaithe, mar níor thaispeáin cealla TH17 aon slonn dromchla IL-1 i gcodarsnacht le IL{{36 }}cealla de línte ceallacha eile a tháirgeadh, amhail monocytes (Sonraí Breisithe Fíor 5d). Leis an gcomparáid seo idir cealla IL-1 + agus IL-1 – TH17 bhí gá le measúnacht rúndachta IL{-1 -déanta a bhunú, rud a d'fhág go bhféadfaí cealla inmharthana IL TH17 a leithlisiú trí ghabháil na rúnaithe autocrine IL-1 go dtí an dromchla cille tar éis phorbol-12-miristatáit{{{-13-aicéatáit{{{-13-PMA)) agus spreagadh ianomycin. Níor breathnaíodh aon difríocht in éifeachtúlacht chlónála cealla TH17 a taisceadh mar chealla aonair tar éis iad a shórtáil le haghaidh láithreacht nó neamhláithreacht dromchla IL-1 (Fíor Forlíontach 11). D'fhág an toradh seo as an áireamh difríochtaí in inmharthanacht agus leathnú na gceall IL-1 + agus IL-1 – TH17 ag leibhéal aonchealla. Rinneamar athchlúdach ar chlóin TH17 a scrúdaíodh, bunaithe ar mhéideanna éagsúla slonn IL{- incheallach, agus rinneamar monatóireacht ar a n-éifeachtúlacht chlónála faoi seach. Más rud é go raibh baint ag scaoileadh IL-1 atá cumasaithe ag GSDME le bás cille pireaptótach, ansin bhí comhghaol inbhéartach idir slonn IL-1 i gclón T chealla agus minicíocht na gclón ag fás ar a n-athlánú aonair (éifeachtúlacht chlónála) bheith ag súil. Mar sin féin, bhí éifeachtúlacht athlonnaithe cille T neamhspleách ar leibhéil slonn IL-1 sna clóin chill TH17 agus ina ionad sin bhí sé cosúil leis an gceann a bhaineann le clóin chealla T rialaithe, a roghnaíodh ar bhonn leibhéil slonn éagsúla IFN- in éagmais comhexpression IL-1 (Fíor 7e). Rud atá tábhachtach, lean clón cille IL-1 + TH17 ag ath-léiriú IL-1 ar thimthriallta athspreagthacha TCR (Fíor 7f). Mar sin, fágadh caillteanas de IL-1 -cheall a tháirgeann cealla as a ndaonra cille T clónacha faoi seach ar athspreagadh as an áireamh. Go háirithe, léiríonn an toradh seo cuimhne cíteicne T ceall le haghaidh IL-1 ionduchtaithe. Rinneamar comparáid tras-traipeolaíoch idir cealla bulc IL-1 + agus IL-1 – TH17 agus thugamar faoi deara saibhriú níos mó fós le haghaidh tacair ghéinte iomadú in IL-1 + i gcomparáid le cill IL-1 – TH17 Cluain Eois (Fig. 7g). Thacaigh comparáid tras-rapomic aonchealla idir cealla IL1A+ agus IL1A–TH17 leis an saibhriú tras-traipeolaíoch le haghaidh iomadú. Bhí sé seo amhlaidh freisin maidir le comparáid a dhéanamh idir braisle Leiden 1, a shaibhríodh le haghaidh cealla TH17-in iúl TH17 agus sínithe athlastacha, le gach braisle eile (Fíor 7h). Thaispeáin cealla IL-1 + TH17 slonn Ki67 níos airde de réir anailíse cítiméadrach sreafa ná a gcomhghleacaithe tar éis 5 d de spreagadh polyclonal (Fíor 7i), ag tacú arís leis an smaoineamh gur i gcealla TH17 daonna IL{ Níl baint ag imeacht {96}} le bás cille, murab ionann agus i gcealla dúchasacha. Go carnach, ní eisiatar leis na sonraí seo gaol idir táirgeadh IL{-1 le bás cille (piripteatacha) fiú ag an leibhéal aonchealla agus léiríonn siad go bhfuil cuimhne cítocín ag cealla T daonna do tháirgeadh IL{-1 ar athspreagadh TCR athchleachtach. .

Cuidíonn IL-1 atá díorthaithe ó chill le cosaint óstaigh antifungal

Déanann ár gcinneadh go dtáirgeann cealla TH17 daonna an comhartha contúirte dúchasach IL-1 agus go n-athchuireann siad innealra comharthaíochta dúchasach dá scaoileadh eischeallach idirdhealú idir freagairtí imdhíonachta oiriúnaitheacha i gcoinne dúchasacha agus mar sin leathnaíonn sé stór feidhme iomlán na gcealla T. Gné chriticiúil atá fós mar shaintréith de fhreagraí cuimhne oiriúnaitheacha is ea sainiúlacht antaiginí TCR-endowed. Dá bhrí sin rinneamar imscrúdú an bhfuil cumas cealla TH17 daonna chun IL-1 a tháirgeadh teoranta do shainiúlachtaí sonracha antaiginí. Taispeánadh roimhe seo go bhfuil cealla TH17 an-saibhrithe laistigh de chealla atá sonrach do C. albicans agus Staphylococcus aureus antigens15. Tá sé suimiúil gur thugamar faoi deara i bhfad níos mó IL-1 léiriú agus secretion ag C. albicans-sonrach ná ag S. aureus-sonrach Cluain Eois cille TH17 (Fíor 8a). An chéad uair eile rinneamar imscrúdú an mbeadh cealla T naive a aithníonn C. albicans seachas S. aureus préimh ag a n-antaigin gaolmhar chun IL-1 a tháirgeadh go roghnach. Naive (CD45RA+ CCR7+ ) Rinneadh cealla TH a chomhshaothrú le monocytes uathlógacha a bhí pulsed le C. albicans nó S. aureus antigens neamhghníomhaithe le teas nó spreagtha go polyclonally le frith-CD3 agus frith-CD28 antasubstaintí monachlónacha, agus clónáilte ansin ar an lá 7 le cealla friothálacha allogeneic. Rinneadh na clón go léir a athspreagadh ar an 14 lá le hantasubstaintí monachlónacha frith-CD3 agus frith-CD28 ar feadh 5 d le haghaidh ELISA dá n-uaslíontóirí. Go suntasach, fuaireamar amach go ndearna C. albicans, ach ní S. aureus nó gníomhachtú polyclonal TCR, táirgeadh de novo IL-1 ionduchtaithe i gcealla TH17 idirdhealaithe daonna (Fíor 8b). Mar sin deimhníonn ár gcur chuige comhcheangailte um aisghlaoch ex vivo agus in vitro priming go bhfuil an cumas IL-1 a tháirgeadh teoranta do chealla T le sainiúlacht TCR do C. albicans. Rinneamar tástáil ar deireadh an bhfuil baint ag cumas sainiúil cealla TH17 C. albicans-shonrach chun IL-1 a tháirgeadh le ról fiseolaíoch i gcosaint óstaigh antifungal. Chuige seo, rinneamar monaicítí daonna a chomhshaothrú le súiteoirí ó chealla TH17 daonna tar éis a n-athspreagadh polaclónach le hantasubstaintí monachlónacha frith-CD3 agus frith-CD28 ar feadh 5 d. Thugamar faoi deara fagaicíotóis méadaithe go suntasach de C. albicans lipéadaithe FITC ag monaicítí ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa. Rud atá tábhachtach, bhí an fagaicíotóis mhéadaithe C. albicans faoi sháithíní cille TH17 ag brath ar IL{-1 mar a léiríodh ag aisghairm shuntasach fagaicíotóis C. albicans dá mbeadh forlíonta cille TH17 gan IL{-1 tar éis ionsú imdhíonachta nó CRISPR-Cas{ {46}}spriocdhírithe IL-1 ídiú i gcealla TH17 (Fíor 8c). Thacaigh íomháú cille beo in vitro tuilleadh le glacadh agus díothú méadaithe C. albicans ag monaicítí i láthair IL-1 -ina bhfuil TH17 súdairí cille (Fíor 8d, sonraí físeáin). Nuair a chuirtear le chéile iad, tugann na torthaí seo le fios go láidir go nglanann cealla TH17 ionfhabhtuithe C. albicans ní hamháin trí IL-17 a tháirgeadh, mar a ceapadh roimhe seo38, ach freisin, go pointe suntasach, trí chumas fo-thacar cille uathúil TH17 IL-1 a tháirgeadh . Go carnach, léiríonn na torthaí lena n-aithnítear foirmiú pore GSDME i gcealla T mar straitéis scoir le haghaidh IL pró-athlastach-1 agus rialáil GSDME ag ais inflammasome–caspase-8–caspase-3 NLRP3 nua modh secretion cytokine T cille a bhaineann le fo-thacar proinflammatory de chealla TH17 le sainiúlachtaí antifungal TCR. Soláthraíonn sé seo spriocanna teiripeacha nua do mhodhnú cealla TH17 daonna atá ábhartha do chosaint óstaigh antifungal agus a d'fhéadfadh páirt a ghlacadh freisin i bpataigineas galair athlastacha ainsealacha.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Plé

Go hachomair, léiríonn ár dtorthaí cosán bitheolaíoch anaithnid roimhe seo agus módúlacht secretion cítocín i gcealla T daonna a dhéanann éagsúlú ar fheidhmiúlacht iomlán dhaonra na gcealla T. Fuaireamar amach go raibh slonn IL-1 teoranta go sainiúil do chinniúint na gceall TH17, mar is léir óna chomhshamhlú le IL-17A, rialachán ag ROR- t, ionduchtú ag na cítocíní cille-priming TH17 IL{{ 6}} agus TGF- agus trína phróifíl slonn receptor chemokine TH17 a bhaineann le cealla. Tá na torthaí seo comhsheasmhach le suíomhanna ceangailteacha do ROR t agus ROR- a bheith ann sna réigiúin feabhsaitheora agus tionscnóra IL1Α mar a thuairiscítear sa staidéar seo agus leis na suíomhanna ceangailteach ROR-t a tuairiscíodh roimhe seo i réigiún tionscnóra NLRP339. Thugamar faoi deara freisin gur mhéadaigh cítocíní cille-priming TH17 léiriú NLRP3 agus GSDME. Dá réir sin, léirigh máistir-rialtóirí cinniúint TH17 cille, mar shampla ROR- agus BATF, chomh maith le fachtóirí trascríobh il-inducite TCR, suíomhanna ceangailteacha toimhdeacha i réigiúin feabhsaithe GSDME. Dá bhrí sin chuir polarú cille TH17 chun cinn ní hamháin slonn IL-1 ach freisin a slí amach extracellular (Sonraí Leathnaithe Fíor. 10, achoimre grafach). Gan choinne, fuaireamar amach go raibh an NLRP3 inflammasome gníomhach agus go raibh sé athchuspóireach le haghaidh scaoileadh IL-1 in ionad IL-1 i gcealla TH17 atá gníomhachtaithe le TCR. Murab ionann agus cealla dúchasacha, níl cealla T speisialaithe le haghaidh braite contúirte dúchasach, rud is eol a spreagann comhthionól comhpháirteanna inflammasome NLRP3. Mar sin féin, léiríodh roimhe seo go seachnaíonn ardú cíteaplasma Ca2+ comharthaíocht contúirte dúchasach do ghníomhachtú inlasta NLRP316,40. Tá sé seo comhsheasmhach lenár gcinneadh go bhfuil gníomhachtú TCR, a bhfuil flosc cailciam ag gabháil leis, ina riachtanas le haghaidh scaoileadh IL{- ag cealla TH17 daonna. Thugamar faoi deara go ndeachaigh cealla TH17 i mbun easghluaiseachta comharthaíochta iartheachtacha eile NLRP3 trí úsáid a bhaint as caspase-8. B’fhéidir gur éascaíodh é seo de bharr easpa scoilteachta caspase-1 in aghaidh caspase-8 gur léiríodh earcaíocht inlasta roimhe seo34,41. Fuaireamar freisin pro-caspase-1 agus GSDMD neamhghlanta i gcealla TH17 daonna, ach ní raibh aon fhianaise dá scoilteacht inlasta-rialaithe NLRP3 nó do tháirgeadh IL-1. Ardaíonn léiriú a réamhtheachtaithe an cheist an bhféadfadh comharthaíocht inflammasome clasaiceach NLRP3 agus scaoileadh IL-1 oibriú freisin i gcealla TH17 daonna dá gcuirfí spreagthaí malartacha i bhfeidhm atá fós le haithint. Tugann sé seo le tuiscint go bhféadfadh meicníochtaí frith-rialála cleithiúnacha caspase-8- versus caspase-1-déchotomy de IL-1 in aghaidh IL{{-1 táirgeadh ag cealla T a rialú, ag comhdhlúthú róil a moladh roimhe seo don NLRP3 inflammasome i scaoileadh IL-1 i gcealla TH1 daonna42 agus i gcealla murine TH1743. Breathnú suimiúil ar ár staidéar ba ea sainaithint slonn GSDME agus scoilteacht i gcealla T. Léirigh sé seo gur féidir le secretion cítocine neamhghnáthamh trí phiocháin membrane tarlú i gcealla T. Bhain roinnt de na feidhmeanna a sannadh do GSDME le déanaí le pioptóis agus le feabhsú ina dhiaidh sin ar bhás cille siadaí agus le micrea-thimpeallacht athlastach 32,44. Is ionadh é, fuaireamar amach gur léirigh cealla TH17 GSDME-in iúl ina ionad sin inmharthanacht leasaithe agus iomadú leanúnach ar spreagadh TCR athchleachtach i gcomparáid le cealla T easnamhach GSDME. Breathnaíodh na torthaí céanna do IL-1 + i gcomparáid le cealla IL-1 – T. Ní rabhthas ag súil leis na torthaí seo, ag cur san áireamh gur measadh go dtí seo go bhfuil táirgeadh IL{-1 ina shainchomhartha seanaoise agus mar sin de chealla a gabhadh nó a bhí ag fáil bháis45. Léiríonn sé seo an smaoineamh gur féidir leis an comhartha contúirte IL-1 a bheith mar chuid de chuimhne cíteicne T a bhaineann le cealla atá in-athspreagadh ar aithint antaigin ghaolmhar46. Ina theannta sin, d'fhéadfadh na pores GSDME feidhm fiseolaíoch a fheidhmiú chun cur ar chumas cealla TH17 móilíní breise nach bhfuil aitheanta go fóill a scaoileadh thar IL-1 atá sainmhínithe ag a méid nó a lucht47. Bheadh ​​sé seo ag teacht le torthaí ár gcomparáid tras-traipeolaíoch neamhchlaonta idir cealla TH17 GSDME-sláine nó CRISPR-Cas{9-innealtóireacht GSDME-easnamhach, a léirigh róil iolracha do GSDME in iompar trasmembrane ach ní bás cille. Tá an mheicníocht, trína gcaomhnaítear inmharthanacht agus cuimhne fhadtéarmach cítocine IL{-1 i gcealla T le pores GSDME á gcaomhnú, fós le hiniúchadh amach anseo. Ardaíonn infhaighteacht IL-1 ó fhoinsí ceallacha éagsúla, go háirithe ó APCanna dúchasacha, an cheist faoi rannchuidiú coibhneasta IL-1 atá díorthaithe ó chealla T le sláinte agus galair an duine. Cé nach ionann cealla T IL-1 + ach fo-thacar beag laistigh den lineage cille T, bhí a gcumas chun IL-1 a tháirgeadh inchomparáide go cainníochtúil le cumas monaicítí spreagtha LPS, ag tacú leis an gcoincheap nua gur féidir le cealla T freastal orthu. mar fhoinse ábhartha IL-1 athlastach . Léiríonn ár dtorthaí ó anailísí tras-traipeolaíocha agus feidhmiúla go bhfuil baint ag IL-1 le cinniúint pro-athlastach cealla TH17. Thaispeáin fodhaonra IL-1 + cealla daonna TH17 sínithe trascríobhacha de phataigineacht athlastach feabhsaithe agus gaolmhaireacht le galair athlastacha ainsealacha. Tacaíonn slonn feabhsaithe suntasach IL-1 trí chealla TH17 a scaipeadh ó othair le JIA agus a logánú flúirseach sa sreabhán sionóbach inlasta leis an bpoitéinseal pataigineach seo den fho-thacar IL-1 + de chealla TH17. Tá dianghaolmhaireacht chúise fós le bunú idir cealla IL-1 -a tháirgeann cealla TH17 agus pataigineas JIA agus bailíochtaíodh tionchar coibhneasta cealla IL-1 + TH17 i dtrialacha cliniciúla amach anseo. Breathnú suntasach a bhí ann go bhfuil táirgeadh IL{-1 ag cealla T sreangaithe go crua trína sainiúlacht TCR. Cé go spreagann spreagthaí struis neamhshonracha16 táirgeadh IL-1 ó fhoinsí ceallacha dúchasacha, fuaireamar amach go raibh baint ag táirgeadh IL-1 ag cealla TH17 daonna le sainiúlacht TCR do C. albicans. Léirigh cealla TH17 S. aureus-shonracha, ina ionad sin, táirgeadh IL{-1 laghdaithe go suntasach. Tá na torthaí seo comhsheasmhach le riachtanas difreálach IL-1 maidir le giniúint C. albicans- ach ní cealla S. aureus-shonracha TH17, mar a tuairiscíodh roimhe seo4 agus, dá réir sin, le ról ríthábhachtach IL{{126} } le haghaidh ionduchtú slonn IL-1, mar a thuairiscítear anseo. Ina theannta sin, fuaireamar amach go raibh secretion IL-1 ag brath ar spreagadh TCR agus ar chomharthaí cailciam, ag cur béime ar an mbaint atá aige le sainchomharthaíocht imdhíonachta oiriúnaitheach tríd an TCR. Is eol gurb iad cealla TH17 na protagonists maidir le himréiteach ionfhabhtuithe C. albicans trína secretion IL-17, atá léirithe ag dysbiosis C. albicans i suímh d’easnaimh IL géiniteacha nó theiripeacha38. Fuaireamar amach go raibh baint ag an táirge ceall TH17 IL-1 le himréiteach C. albicans toisc gur laghdaigh sé go suntasach fagaicíotóis C. albicans ag monaicítí de bharr a bheith as láthair i súithíní cille TH17. Tugann sé seo le tuiscint go gcuirtear feidhmeanna éifeachtóra cille antifungal TH17 i bhfeidhm ní hamháin trí IL-17A/F, mar a moladh roimhe seo, ach freisin trí IL-1 ar bhealach a bhaineann go sonrach le TCR. Mar sin ní mór tástáil a dhéanamh amach anseo cé acu an bhféadfadh rialáil neamhfhabhrach ar an gcosán móilíneach as a dtiocfaidh táirgeadh IL{-1 ag cealla TH17 réamhshuíomh ar chosaint óstaigh antifungal i mbaol. Le chéile, réitíonn ár dtorthaí an bealach le haghaidh imscrúdú córasach ar an méid a chuireann IL-1 -chealla TH17 a tháirgeadh i galair athlastacha éagsúla agus cosaint óstaigh antifungal. Ní hamháin go léiríonn an ais TCR–NLRP3 inflammasome–caspase-8–caspase-3–GSDME modh comharthaíochta imdhíonachta agus teagasc cinniúint i gcealla TH a ndearnadh faillí orthu roimhe seo ach cuireann sí spriocanna móilíneacha ar fáil freisin chun cur isteach ar chill phataigineach TH17 céannacht nó chun leas a bhaint aisti ar mhaithe le cosaint óstaigh.

Fíor 7|Tá cealla TH17 athléimneach i gcoinne pioptóis ainneoin phiocháin membrane plasma GSDME.

Fíor 8|Rialaíonn sainiúlacht TCR táirgeadh IL-1 ag cur le himréiteach C. albicans

Tagairtí

1. Ivanov, II et al. Treoraíonn an gabhdóir núicléach dílleachta RORgammat an clár difreála de chealla cúntóra IL-17+ T proinflammatory. Cill 126, 1121–1133 (2006).

2. Zwicky, P., Unger, S. & Becher, B. Díriú ar interleukin-17 i ngalar athlastach ainsealach: dearcadh cliniciúil. J. Cait. Med. 217, e20191123 (2020).

3. Stockinger, B. & Omenetti, S. Nádúr déchosach cealla T chúntóra 17. Nát. Ath. Immunol. 17, 535–544 (2017).

4. Zielinski, CE et al. Táirgeann cealla daonna TH17 pataigin-spreagtha IFN-gáma nó IL-10 agus tá siad rialaithe ag IL-1beta. Nádúr 484, 514–518 (2012).

5. Ghoreschi, K. et al. Giniúint cealla pataigineacha TH17 in éagmais comharthaíochta TGF-beta. Nádúr 467, 967–971 (2010).

6. Noster, R. et al. Dírialáil feidhmiúlachtaí cille TH17 daonna pro-inflammatory i gcoinne frith-athlastach sa siondróm Schnitzler autoinflammatory. J. Ailléirge Clin. Imdhíonól. 138, 1161–1169.e1166 (2016).

7. Aschenbrenner, D. et al. Clár cónaitheachta imdhíon-rialaithe agus fíocháin arna mhodhnú ag c-MAF i gcealla TH17 daonna. Nát. Imdhíonól. 19, 1126–1136 (2018).

8. Wu, C. et al. Ionduchtú cealla pataigineacha TH17 ag kinase inducible braite salann SGK1. Nádúr 496, 513–517 (2013).

9. Mathias, J. et al. Gineann salann cealla Th17 frith-athlastach ach méadaíonn sé pataigineacht i micri-thimpeallachtaí cítocine pro-athlastach. J. Clin. Infheistiú. 130, 4587–4600 (2020).

10. Cavalli, G. et al. Interleukin 1alpha: athbhreithniú cuimsitheach ar ról IL-1alfa sa phaitigineas agus i gcóireáil galair uath-imdhíonachta agus athlastacha. Autoimmun. Ath. 20, 102763 (2021).

11. Tá Acosta-Rodriguez, EV, Napolitani, G., Lanzavecchia, A. & Sallusto, F. Interleukins 1beta agus 6 riachtanach chun fachtóir fáis-béite a chlaochlú chun interleukin 17-a tháirgeann cealla cabhrach T daonna a dhifreáil. . Nát. Imdhíonól. 8, 942–949 (2007).

12. Latz, E., Xiao, TS & Stutz, A. Gníomhachtú agus rialáil na inflammasomes. Nát. Ath. Immunol. 13, 397–411 (2013).

13. Shi, J. et al. Cinneann scoilteadh GSDMD ag caspáis athlastacha bás cille piroptotic. Nádúr 526, 660–665 (2015).

14. Liu, X. et al. Gás deirmín inflammasome-gníomhachtaithe is cúis le pioptosis trí phiocháin membrane a fhoirmiú. Nádúr 535, 153–158 (2016).

15. Acosta-Rodriguez, EV et al. Feinitíopa dromchla agus sainiúlacht antaigineach an idirleacáin daonna 17-a tháirgeann cealla cuimhne T cúntóir. Nát. Imdhíonól. 8, 639–646 (2007).

16. Comhlán, O. et al. Cothaíonn gníomhaitheoirí inflammacha secretion alfa idirleukin trí bhealaí ar leith a bhfuil riachtanais éagsúla acu maidir le feidhm próitéas an caspase-1. Díolúine 36, 388–400 (2012).

17. Malik, A. & Kanneganti, TD Feidhm agus rialáil IL-1alfa i galair athlastacha agus ailse. Imdhíonól. Ath. 281, 124–137 (2018).

18. Cimaz, R. Airtríteas idiopathic ógánaigh a thosaigh sistéamach. Autoimmun. Ath. 15, 931–934 (2016).

19. Fong, KY, Boey, ML, Koh, WH & Feng, PH Tiúchan citokine i sreabhán synovial agus plasma othar airtríteas réamatóideach: comhghaol le creimeadh cnámh. Clin. Cait. Réamaitól. 12, 55–58 (1994).

20. Eyerich, S. & Zielinski, CE Ag Sainmhíniú Fo-thacair Th-chealla ar bhealach clasaiceach agus fíocháin-shonrach: samplaí ón gcraiceann. Eur. J. Imdhíon. 44, 3475–3483 (2014).

21. Monteleone, M., Stow, JL & Schroder, K. Meicníochtaí maidir le secretion neamhghnásúil cítocíní teaghlaigh IL-1. Cíticín 74, 213–218 (2015).

22. Keller, M., Ruegg, A., Werner, S. & Beer, HD Gníomhach caspase-1 is rialtóir ar secretion próitéine neamhghnáth. Cill 132, 818–831 (2008).

23. Kurt-Jones, EA, Beller, DI, Mizel, SB & Unanue, ER Aithint interleukin 1 atá bainteach le membrane i macrophages. Proc. Natl Acad. Sci. USA 82, 1204–1208 (1985).

24. Mosley, B. et al. Ceanglaíonn an gabhdóir interleukin-1 an réamhtheachtaithe alfa idirleacáin daonna ach ní cheanglaíonn sé an réamhtheachtaí béite idirléiacine. J. Biol. Ceimic. 262, 2941–2944 (1987).

25. Carruth, LM, Demczuk, S. & Mizel, SB Próteas cosúil le calpain a bheith páirteach i bpróiseáil an réamhtheachtaithe murine interleukin 1alpha. J. Biol. Ceimic. 266, 12162–12167 (1991).

26. Kobayashi, Y. et al. Aithint protease neodrach cailciam-gníomhachtaithe mar einsím próiseála de interleukin daonna 1 alfa. Proc. Natl Acad. Sci. USA 87, 5548–5552 (1990).

27. Fettelschoss, A. et al. Gníomhachtú inflammasome agus IL-1sprioc beta IL-1alfa le haghaidh secretion seachas slonn dromchla. Proc. Natl Acad. Sci. USA 108, 18055–18060 (2011).

28. Franklin, BS, Latz, E. & Schmidt, FI Feidhmeanna laistigh agus seachcheallacha na specks ASC. Imdhíonól. Ath. 281, 74–87 (2018).

29. Nagar, A., DeMarco, RA & Harton, JA Inflammasome agus caspase-1 tréithriú agus luacháil gníomhaíochta: braite agus measúnú bunaithe ar shreabhadh íomháithe ar shreafaí athlastacha agus ar ghníomhachtú caspase. J. Imdhíon. 202, 1003–1015 (2019).

30. Rathinam, VA & Fitzgerald, KA Coimpléisc athlastacha: meicníochtaí atá ag teacht chun cinn agus feidhmeanna éifeachtóra. Cill 165, 792–800 (2016).

31. Broz, P., Pelegrin, P. & Shao, F. Is é an mastermind teaghlach próitéin a fhorghníomhaíonn bás cille agus athlasadh. Nát. Ath. Immunol. 20, 143–157 (2020).

32. Zhang, Z. et al. Cuireann Gasdermin E bac ar fhás siadaí trí imdhíonacht frith-meall a ghníomhachtú. Nádúr 579, 415–420 (2020).

33. Schraml, BU et al. Rialaíonn fachtóir trascríobh AP-1 BATF difreáil TH17. Nádúr 460, 405–409 (2009).

34. Antonopoulos, C. et al. Caspase-8 mar éifeachtóir agus rialtóir ar chomharthaíocht inlasta NLRP3. J. Biol. Ceimic. 290, 20167–20184 (2015).

35. Vajjhala, PR et al. Cothaíonn an cuibheoir inflammasome ASC filiméid fearainn éifeacht bháis procaspase-8. J. Biol. Ceimic. 290, 29217–29230 (2015).

36. Stennicke, HR et al. Príomhsprioc fiseolaíoch de caspase-8 is ea pro-caspase-3. J. Biol. Ceimic. 273, 27084–27090 (1998).

37. Deng, W. et al. Scoilteann eisotoxin streipteacocúil pirigineach B GSDMA agus spreagann sé piriptóis. Nádúr 602, 496–502 (2022).

38. Puel, A. et al. Candidiasis mucocutaneous ainsealach i ndaoine le hearráidí sa bhroinn den díolúine idirléicine. Eolaíocht 332, 65–68 (2011).

39. Billon, C., Murray, MH, Avdagic, A. & Burris, TP RORgamma rialaíonn an NLRP3 inflammasome. J. Biol. Ceimic. 294, 10–19 (2019).

40. Laoi, GS et al. Rialaíonn an gabhdóir braite cailciam an NLRP3 inflammasome trí Ca2+ agus cAMP. Nádúr 492, 123–127 (2012).

41. Gao, Y. et al. Aithníonn próifíliú tras-scríofa caspase-1 mar rialtóir intreach T cill de dhifreáil Th17. J. Cait. Med. 217, 20190476 (2020).

42. Arbore, G. et al. Teastaíonn gníomhaíocht inlasta NLRP3 arna thiomáint ag comhlánú i gcealla T CD4+ chun díolúine ó Chúntóir T1. Eolaíocht 352, aad1210 (2016).

43. Máirtín, BN et al. Cuireann T ASC cille-intreach TH17-einceifilíteas uath-imdhíonachta turgnamhach chun cinn go criticiúil. Nát. Imdhíonól. 17, 583–592 (2016).

44. Wang, Y. et al. Cothaíonn drugaí ceimiteiripe piroptóis trí scoilteacht caspase an mháistirmhúinteora. Nádúr 547, 99–103 (2017).

45. Wiggins, KA et al. Rialaíonn scoilteacht IL-1 ag caspáis athlastacha an athlastach neamhchanónach an feinitíopa rúnaithe a bhaineann le seangacht. Cill Aosaithe 18, e12946–e12946 (2019).

46. ​​Helmstetter, C. et al. Tá cuimhne cítocín cainníochtúil ag cealla cabhracha aonair. Díolúine 42, 108–122 (2015).

47. Xia, S. et al. Nochtann struchtúr pore Gasdermin D scaoileadh tosaíochta idirleacáin aibí-1. Nádúr 593, 607–611 (2021).