Tempers Clec12a Athlasadh Le Srian a chur le Leathnú ar Thomhas Colitogenic

ACHOIMRE

Tá rialú an mhicribhithóta ríthábhachtach do shláinte stéigeach ach tá na meicníochtaí a úsáideann díolúine dúchasach doiléir fós. Anseo táimid ag léiriú go bhfuil lucha easnamhach sa receptor C-Cineál-lectin, d'fhorbair Clec12a colitis dian, a bhí ag brath ar an microbiota. Nocht staidéir ar thrasphlandú fecal-microbiota (FMT) ar lucha saor ó ghaiméití micribiota colitogenic a foirmíodh laistigh de Clec12a-/- lucha a bhí marcáilte ag leathnú an orgánaigh ghraim-dhearfach, creimirí Faecalibaculum. Ba leor cóireáil le F. creimire chun colitis a dhéanamh níos measa i lucha de chineál fiáin. Léiríonn macrophages laistigh den gut na leibhéil is airde de Clec12a. Léirigh anailís cíteicne agus seicheamhaithe i Macrophages Clec12a-/- athlasadh ardaithe ach laghdú suntasach ar ghéinte a bhaineann le fagaicíotóis. Go deimhin, tá lagú ag Clec12a-/- macrophages ina gcumas F. rodentium a ghlacadh. Bhí ceangal níos airde ag Clec12a íonaithe le horgánaigh Gram-dearfach ar nós F. rodentium. Mar sin, sainaithnítear inár sonraí Clec12a mar mheicníocht dhúchasach faireachais imdhíonachta chun fairsingiú na dtomhas a d’fhéadfadh a bheith díobhálach a rialú gan athlasadh follasach.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

RÉAMHRÁ

D’fhéadfadh tionchar as cuimse a bheith ag comhdhéanamh agus feidhm an mhiocróib ar shláinte agus ar ghalair mamaigh (Fassarella et al., 2021). Tá sé seo dea-dhoiciméadaithe maidir le galar putóige athlastach (IBD), áit a bhfuil an chuid is mó de mhúnlaí luiche IBD íogair d’athruithe ar chomhdhéanamh miocróib (Gkouskou et al., 2014). Beidh sé tábhachtach na fachtóirí a mbíonn tionchar acu ar chobhsaíocht mhicribhithóta a thuiscint agus a threoraíonn iad de réir mar a fhorbraítear teiripí bunaithe ar mhicribhiota (Sharma et al., 2020; Sorbara agus Pamer, 2022). Bíonn tionchar ag paraiméadair iolracha ar an micribiota lena n-áirítear aiste bia, cógais agus an córas imdhíonachta. Le blianta beaga anuas, léiríodh go bhfuil tionchar ag comhpháirteanna imdhíonachta oiriúnaitheacha, go háirithe IgA, ar chomhdhéanamh microbiota (Nakajima et al., 2018; Okai et al., 2016; Yang agus Palm, 2020). Mar sin féin, níl níos lú ar eolas faoin gcaoi a mbíonn tionchar ag gabhdóirí imdhíonachta sainiúla ar chomhdhéanamh micribiota hoiméastatach.

Is ailléilí riosca suntasacha do IBD iad polymorphisms géiniteacha i ngéinte a rialaíonn aitheantas miocróbach agus díolúine mucosal, lena n-áirítear an próitéin autophagy ATG16L1 (Cadwell et al., 2008; Liu et al., 2015; Rioux et al., 2007; Rialú Cáis Wellcome Trust, 2007, 2007; ). I staidéar le déanaí a rinne iniúchadh ar athruithe léiriú géine myeloid i ndaoine aonair le polymorphism ATG16L1T300A, aithníodh go raibh an receptor lectin coisctheach C-cineál (CLR), Clec12a, faoi chois go suntasach sna cealla seo (Begun et al., 2015). Léirigh an staidéar céanna seo go bhfeidhmíonn Clec12a chun ionfhabhtú pataigineach a chosaint trí chomhcheangal le conair na n-uathphagy. Tugann na sonraí seo le fios go bhféadfadh tionchar a bheith ag íosrialáil Clec12a i ndaoine aonair ar a bhfuil IBD ar dhéine agus/nó ar fhorbairt an ghalair. In ainneoin na fianaise seo, is beag atá ar eolas faoi na meicníochtaí rialaithe imdhíonachta a fheidhmíonn Clec12a le linn colitis.

Is grúpa ilchineálach de mhóilíní intuaslagtha nó faoi cheangal membrane iad lectins de chineál C atá in ann lipidí, próitéiní agus carbaihiodráití óstach nó miocróbach, agus próitéiní agus carbaihiodráití a cheangal (Brown et al., 2018). Is dhá CLR iad Mincle (Clec4e) agus Dectin-1 (Clec7a) a mbíonn tionchar acu ar bhaill ar leith den mhicribhiota chun homeostasis intestinal a chothabháil (Iliev et al., 2012; Martinez-Lopez et al., 2019). Mar sin féin, le níos mó ná 1,000 leictin de chineál C éagsúil, tá go leor le fáil fós laistigh den fhine próitéine seo. Baineann Clec12a leis an teaghlach gabhdóirí marú nádúrtha agus tá sé ar cheann de dhá lectins de chineál C a bhfuil móitíf coisctheach imdhíon-tyrosine (ITIM) ann atá in ann bealaí comharthaíochta athlastacha a shrianadh (Brown et al., 2018; Marshall et al., 2004) . Aithníonn Clec12a aigéad uric atá ina chomhartha damáiste cille (Neumann et al., 2014). Cuirtear Clec12a in iúl go hard i gcealla imdhíonachta dúchasacha, agus i neodrófail gníomhaíonn sé chun gníomhachtú a laghdú agus táirgeadh cítocín athlastach a íosrialáil ar aithint aigéad uric (Neumann et al., 2014). Os a choinne sin, cuireann Clec12a athlasadh chun cinn trí chead a thabhairt do phagaicítí mona-núicléacha (MNPanna) tras-imirce trasna an bhacainn fola-inchinn le linn samhail uath-imdhíonachta de scléaróis iolrach agus comharthaíocht interferon de chineál potentiating I mar fhreagra ar ionfhabhtú víreasach (Li et al., 2019; Sagar et al. ., 2017). Tá Clec12a in ann an táirge plasmodial, hemozoin, a bhfuil sé léirithe go méadaíonn sé cealla T CD8+ san inchinn a aithint tar éis ionfhabhtú Plasmodium (Raulf et al., 2019). Mar sin, is ionann Clec12a agus CLR promiscuous le róil éagsúla i díolúine agus cumais chomharthaíochta uathúla, ach fós a ról sa stéig anaithnid.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Tá sé léirithe againn roimhe seo go ndéanann fungais shonracha gut colitis níos measa trí mheitibilít íonáin, aigéad uric a aslú (Chiaro et al., 2017). Thairis sin, bhí baint ag meitibileacht purine le déanaí le galar intestinal daonna (Zhu et al., 2019). Tugann na sonraí seo le fios go bhféadfadh braiteadh aigéid úraigh a bheith ábhartha don IBD. Bunaithe ar seo, thugamar faoi iniúchadh a dhéanamh ar fheidhm Clec12a sa stéig. Fuaireamar amach go bhfuil ainmhithe a bhfuil easpa Clec12a orthu go mór i mbaol colitis atá ag brath ar chomhdhéanamh microbiota a fhoirmítear in éagmais Clec12a. Ba leor FMT de mhicreabiota Clec12a-/- isteach in ainmhithe WT saor ó ghaiméite chun colitis a dhéanamh níos measa agus tá foirmiú an mhicriobiota colitogenic in ainmhithe Clec12a-/- neamhspleách ar dhíolúine oiriúnaitheach. Chun miocróib ábhartha a d'fhéadfadh colitis a dhéanamh níos measa a aithint, cuireadh cóireáil ar ainmhithe Clec12a-/- le antaibheathaigh éagsúla, agus iad siúd a dhírigh ar ghalair feabhsaithe baictéir gram-dearfach. D'aithin seicheamhú 16S rDNA go raibh Faecalibaculum rodentium i bhfad níos flúirseach in ainmhithe Clec12a-/- agus ba leor gavage béil F. rodentium chun paiteolaíocht galair in ainmhithe WT a dhéanamh níos measa. Léirigh próifíliú imdhíonachta ainmhithe Clec12a-/- laghdú suntasach ar chealla myeloid hoiméastatacha sa colon. Léirigh seicheamhú RNA de mhacrophages cóireáilte F. creimire go gcuireann Clec12a fagaicíotóis chun cinn. Toisc go bhfuil sé léirithe go gceanglaíonn Clec12a il-ligands, d’fhiafraigh muid an mbeadh Clec12a ina cheangal ar bhaill éagsúla den mhicribhiota. Ag baint úsáide as próitéin comhleá Clec12a-Fc sainaithnímid go bhfuil an nasc is mó ag Clec12a le baill ghramdhearfach den mhicribhiota. I dteannta a chéile, tugann na sonraí seo le fios múnla trína rialaíonn Clec12a baill cholitogenic den mhiocróibéite trí cheangal díreach agus fagaicíotóis agus freagairtí athlastacha a chosc. I gcásanna ina laghdaítear slonn Clec12a, is féidir le pathobionts gram-dearfach leathnú agus athlasadh a chur chun cinn. Mar sin, aithníonn ár gcuid staidéir Clec12a mar shochtadh athlastach tábhachtach chun hoiméastáis agus cothabháil microbiota sláintiúil a chinntiú.

TORTHAÍ

Clec12a-/- tá ainmhithe an-so-ghabhálach i leith colitis neamhspleách ar an gcóras imdhíonachta oiriúnaitheach

Tuairiscíodh slonn laghdaithe Clec12a i ndaoine aonair a bhfuil IBD orthu agus tá sé léirithe againn go bhféadann bac a chur ar tháirgeadh ceann de na ligands do Clec12a, aigéad uric, colitis a mhaolú (Begun et al., 2015; Chiaro et al., 2017; Liu et al. ., 2015). Mar sin féin, níl staidéar déanta fós ar Clec12a i múnlaí ainmhithe colitis. Chuige sin, tugadh dúshlán do lucha WT agus Clec12a-/- C57BL/6 le colitis ghéarmhíochaine DSS. Chaill ainmhithe Clec12a-/- i bhfad níos mó meáchain, léirigh colons níos giorra, agus bhí méadú suntasach ar an marcóir athlastach LCN2 i feces i gcomparáid le hainmhithe WT, rud a léiríonn athlasadh agus galair níos measa (Fíor 1A-C). Ag tacú leis seo, léirigh anailís histolaíochta damáiste méadaithe epithelial, caillteanas cripte, agus sní isteach cealla imdhíonachta in ainmhithe Clec12a-/- i gcomparáid le WT (Fíor 1D, E). Ag teacht leis na torthaí sa tsamhail colitis DSS, aistriú cealla CD4+ CD45RBhi go TCRb-/-; Clec12a-/- lucha dúbailte knockout mar thoradh ar ardú meáchain níos lú le himeacht ama agus colons níos giorra i gcomparáid le cealla T aistrithe isteach TCRb-/- lucha (Fíor 1F, G). I dteannta a chéile, léiríonn na torthaí seo go dtagann galar intestinal in olcas as cailliúint Clec12a.

Tuairiscítear go bhfuil Clec12a curtha in iúl den chuid is mó laistigh de chealla imdhíonachta dúchasacha le slonn an-íseal tuairiscithe i gcealla CD8+ T. Dá bhrí sin, chun a chinneadh an bhfuil imdhíonacht oiriúnaitheach i gceist leis an ngalar imithe in olcas a breathnaíodh in ainmhithe Clec12a-/-, thrasnaigh ainmhithe Clec12a-/- go hainmhithe Rag-/- chun cealla T agus B araon a bhaint. Arís, d'fhorbair ainmhithe Clec12a-/- galar in olcas i gcomparáid le hainmhithe WT mar chaill siad níos mó meáchain agus bhí coilíneachtaí níos giorra ná rialuithe WT (Fíor 1H, I). Mar an gcéanna, Clec12a-/-; D'fhorbair Rag-/- galar intestinal níos measa i gcomparáid le rialuithe Rag-/- agus chaill sé an oiread meáchain agus bhí coilíneachtaí níos giorra ná WT agus Rag-/- mar Clec12a-/- (Fíor 1H, I). Thuairiscigh muid roimhe seo go bhfeabhsaíonn cóireáil béil le S. cerevisiae leibhéil aigéad uric chun colitis a dhéanamh níos measa. Mar sin féin, níor breathnaíodh aon difríochtaí i leibhéil aigéad uric an serum nó feces in ainmhithe WT versus Clec12a-/-, le tuiscint nach bhfuil galar feabhsaithe a breathnaíodh sa Clec12A-/- mar thoradh ar aigéad uric méadaithe (Fíor S1). Mar sin, tá forbairt colitis níos measa a breathnaíodh in ainmhithe Clec12a-/- neamhspleách ar an gcóras imdhíonachta oiriúnaitheach.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Braitheann colitis níos measa in ainmhithe Clec12a-/- ar an micribiota

Is eol go bhfuil colitis á thiomáint, go páirteach, ag athruithe ar chomhdhéanamh an mhicribhiota (Kubinak et al., 2015; Ray agus Dittel, 2015). Chun a chinneadh an bhfuil microbiota ag ainmhithe Clec12a-/- a chothaíonn colitis níos measa, rinneadh FMTanna ó lucha WT nó Clec12a-/- isteach in ainmhithe WT saor ó ghaiméite. Ceithre seachtaine tar éis an trasphlandúcháin, cuireadh leath na n-ainmhithe i gcomhchónaí le chéile, agus d'fhan an leath eile faoi lóistín ar leithligh. Spreagadh colitis géarmhíochaine DSS ansin i ngach grúpa (Fíor 2A). Chaill ainmhithe a fuair Clec12a-/- FMT agus ainmhithe comhchónaí meáchan i bhfad níos mó (Fíor 2B) agus bhí colons i bhfad níos giorra (Fíor 2C) ná ainmhithe a fuair FMT ó lucha WT. Ina theannta sin, léirigh anailís histological damáiste epithelial níos mó agus sní isteach athlastacha tar éis trasphlandúcháin le Clec12a-/- microbiota (Fíor 2D, E). Bhí na pobail mhiocróbacha bunaithe ar leith i measc na ngrúpaí arna gcinneadh ag seicheamh géine 16S rRNA ag baint úsáide as Bray-Curtis (PERMANOVA, p=0.0001), neamhualaithe (PERMANOVA, p=0.0062), agus ualaithe- Achair Unifrac (PERMANOVA, p=0.0001). Bhí an neamh-chomhionannas microbiota laistigh den ghrúpa ba mhó in ainmhithe comhchónaí de réir na méadrachta céanna a léirigh go bhfuarthas miocróib ó gach géinitíopa FMT (Fíor 2 FH). Léiríonn na sonraí seo go bhfuil colitis níos measa laistigh d’ainmhithe Clec12a-/- á dtiomáint ag miocróib ar leith a shaibhrítear in éagmais Clec12a; agus ba iad na miocróib seo a bhí ina bpríomhthiománaithe d'fheinitíopa colitogenic, fiú i láthair micribhiota WT seanbhunaithe.

Tá comhdhéanamh micribhithe a fhoirmítear in ainmhithe Clec12a-/- neamhspleách ar dhíolúine oiriúnaitheach

Tá an córas imdhíonachta tábhachtach chun comhdhéanamh an mhicribhiota a dheachtú. Thug turgnamh FMT le fios go dtagann athrú ar chomhdhéanamh an mhicribhiota mar thoradh ar Clec12a-/- a chuireann forbairt colitis níos measa chun cinn. Theastaigh uainn a chinneadh ar dtús an raibh easnamh Clec12a-/- laistigh den urrann imdhíonachta in ann micribiota na putóige a athmhúnlú. Chuige sin, aistríodh smeara ó lucha WT nó Clec12a-/- isteach i lucha faighteora WT SPF ionradaithe go marfach chun an micribhiotán a chaighdeánú agus ina dhiaidh sin bhí tréimhse athdhéanta imdhíonachta de 8-seachtain (Fíor 3A). Le linn an ama seo, tá am ag na córais imdhíonachta trasphlandáilte a fhorbairt laistigh den fhaighteoir, ag múnlú go difreálach comhdhéanamh an mhiocróib. Chun a chinneadh cé acu ar tháinig athruithe procolitogenic ar an micribiota mar thoradh ar an dealbhóireacht imdhíonachta seo, rinneamar FMTanna ag baint úsáide as na feces ó lucha chimeric WT nó Clec12a-/- agus colitis spreagtha DSS (Fíor 3A). Cé nach raibh aon athruithe suntasacha i meáchain caillteanas (Fíor 3B), bhí na colons ó ainmhithe a fuair FMT ó Clec12a-/- lucha chimeric i bhfad níos giorra i gcomparáid le hainmhithe a fuair an FMT ó lucha WT (Fíor 3C), rud a léiríonn galar imithe in olcas. Ina theannta sin, nuair a comhchónaíodh faighteoirí WT agus Clec12a-/- FMT, bhí na coilíneachtaí i bhfad níos giorra i gcomparáid le hainmhithe a fuair WT FMT (Fíor 3C). Mar sin, cruthaítear micribhiota colitogenic ceannasach mar thoradh ar easnamh Clec12a-/- laistigh den urrann hematopoietic.

Chun tuilleadh tacaíochta a thabhairt go bhfuil an córas imdhíonachta oiriúnaitheach inchurtha chun an miocróib colitogenic a fhoirmiú in ainmhithe Clec12a-/-, rinneamar FMT ag baint úsáide as feces ó Rag-/- nó Rag- /-; Clec12a-/- - mar a thuairiscítear roimhe seo. Ainmhithe a fuair Rag-/-; Clec12a-/- Chaill FMT níos mó meáchain agus bhí coilíneachtaí i bhfad níos giorra aige ná mar a bhí ag ainmhithe a fuair FMT ó ainmhithe Rag-/-, ina theannta sin d’fhorbair ainmhithe comhchónaí galar in olcas (Fíor 3D, E). Léiríonn na sonraí seo gur leor easnamh Clec12a laistigh den chóras imdhíonachta dúchasach chun micribhiota a bhunú atá in ann colitis a ghéarú.

Cuireann Clec12a bac ar leathnú rodentium Faecalibaculum

D’úsáideamar sraith antaibheathaigh éagsúla chun na horgánaigh ábhartha a thiomáineann galair laistigh d’ainmhithe Clec12a-/- a shainaithint. Ar an gcéad dul síos, laghdaigh cóireáil le mhanglaim láidir d’antaibheathaigh speictrim leathan lena n-áirítear erythromycin, ampicillin, neomycin, agus gentamycin, déine an ghalair go suntasach in ainmhithe Clec12a-/- agus WT araon, rud a thugann le tuiscint go raibh daonra baictéarach an mhicribhiota ábhartha don ghalar ( Fíor 4A; Fíor S2). Ansin, rinneamar cúngú níos mó ar na daonraí baictéarach a bhí níos ábhartha do ghalair trí úsáid a bhaint as antaibheathaigh éagsúla a dhírigh ar thacsaí uathúla baictéar. Go sonrach, roghnaigh muid gentamycin, aminoglycoside a dhíríonn ar bhaictéir gram-diúltacha, agus cephalothin, cephalosporin a dhíríonn go príomha ar bhaictéir gram-dearfach. Tugadh na drugaí seo do Clec12a-/- ainmhithe le linn colitis DSS. Cé nach ndearna cóireáil le gentamycin aon difríocht maidir le déine an ghalair, choinnigh ainmhithe a fuair cephalothin a meáchan agus bhí coilíneachtaí i bhfad níos faide acu ná ainmhithe cóireáilte bréige (Fíor 4B, C), rud a thugann le fios go raibh orgánaigh ghram-dhearfacha a chónaíonn laistigh den súgradh microbiota Clec12a-/-. ról tábhachtach chun paiteolaíocht galair a dhéanamh níos measa.

An chéad uair eile rinneamar seicheamhú géine rRNA 16S de SPF WT agus Clec12a-/- feces chun próifíl a dhéanamh ar athruithe comhdhéanaimh sa mhicribhiota. Cnuasaigh ainmhithe WT agus Clec12a-/- go suntasach difriúil ó thaobh méadrachta ualaithe raidhse neamh-fhileigineach agus phylogenetic araon, Bray-Curtis agus UniFrac ualaithe, faoi seach (Fíor S3A-C). Níor léirigh méadracht éagsúlachta Alfa aon difríochtaí suntasacha i saibhreas (gnéithe breathnaithe), rud a léiríonn nach raibh Clec12a-/- níos mó speiceas (Fíor 4D). Mar sin féin, méadaíodh innéacsanna cothromaíochta agus éagsúlachta na Sionainne in éagmais Clec12a a thugann le fios gur athraíodh dáileadh comhréireach na mbaictéar i lucha Clec12a-/- (Fíor 4E, F) agus ag tacú tuilleadh go bhfuil Clec12a tábhachtach chun struchtúr microbiota a rialáil laistigh den gut.

Léirigh anailís ar chomhdhéanamh na micribhithóim (ANCOM), i measc na ASVanna (athraithigh seicheamh amplicon) atá flúirseach go difriúil, go raibh méadú suntasach tagtha ar ASV a aicmítear sa ghéineas Faecalibaculum (teaghlach Erysipelotrichaceae), laistigh de na feces Clec12a-/- i gcomparáid le WT (Fíor). 4G, H). Léirigh BLAST ag baint úsáide as an seicheamh ionadaíoch ASV ónár n-anailís aitheantas 100% do sheichimh ón mbaictéar Faecalibaculum rodentium. Soláthraíonn na sonraí seo fianaise go bhfuil baictéir ghram-dhearfach san ainmhí Clec12a-/- freagrach as an bhfeinitíopa colitogenic, agus go mbaineann siad go sonrach leis an orgánach gram-dearfach, F. rodentium, i ngalar atá imithe in olcas.

Bunaithe ar seo, rinneamar tástáil ar an hipitéis go bhféadfadh F. rodentium colitis a dhéanamh níos measa. Rinneamar réamhchóireáil ar ainmhithe WT SPF le 1 x 108 CFU de chreimire F. beo nó seasta le gavage béil agus cóireáil leanúnach gach lá le linn an tsamhail ghéarmhíochaine de DSS chun leibhéil arda de choilíniú creimire F. a chinntiú. Chaill ainmhithe a fuair creimire F. beo agus seasta araon níos mó meáchain agus bhí coilíneachtaí i bhfad níos giorra acu ná ainmhithe a ndearnadh cóireáil orthu i bhfeithiclí (Fíor 4I, J), rud a thugann le fios gur féidir le leibhéil mhéadaithe F. creimire galar a dhéanamh níos measa.

Cuireann Clec12a srian ar fhreagra athlastach macrophage agus feabhas a chur ar phagocytosis

Chun slonn ceallacha Clec12a a shainiú in éagmais galair, rinneamar próifíl ar chealla imdhíonachta dúchasacha agus oiriúnaitheacha sa lamina propria (LP) ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa il-dathanna. Ag teacht le tuairiscí roimhe seo, tá Clec12a teoranta den chuid is mó don lineage myeloid gan mórán cainte ar limficítí (Fíor 5A) (Han et al., 2004; Pyz et al., 2008; Sobanov et al., 2001). Neutrophils stéig, macrophages, agus cealla dendritic taispeáint leibhéil comhchosúla de Clec12a abairt (Fíor S4A), cé go raibh macrophages an céatadán is mó de na cealla laistigh den fíochán gut in iúl Clec12a (Fíor 5A). Mar gheall ar an ról déach atá ag macrophages chun athlasadh a chur chun cinn trí ghníomhachtú clasaiceach ach freisin chun meicníochtaí cúitimh a thionscnamh mar fhreagra ar dhamáiste fíocháin, d'iarramar ar conas a d'fhéadfadh Clec12a tionchar a imirt ar an dichotomy seo le linn colitis. Cé go bhfuil macrophages sách éagsúil, is féidir iad a roinnt go ginearálta i macrófagáin athlastacha M1 agus M2 trí léiriú CD38 agus EGR2 faoi seach. Léiríonn muid Clec12a-/- ainmhithe tar éis méadú M1 macrophages agus laghdaigh M2 macrophages sa LP colonic le linn colitis (Fíor 5 B, C, Fíor. S4 B). Léiríonn na sonraí seo go rialaíonn Clec12a freagraí macrophage sa gut.

Chun tuiscint níos fearr a fháil ar an gcaoi a mbíonn tionchar ag Clec12a ar bhitheolaíocht mhacrafáis mar fhreagra ar ligands miocróbach, cuireadh cóireáil ar mhacrophages díorthaithe smeara (BMDMs) scoite ó ainmhithe WT nó Clec12a-/- le héagsúlacht ligands miocróbach coitianta lena n-áirítear LPS, Pam3CysK, agus Flagellin. Rinneadh anailís cíteicne ar na samplaí seo go léir. Níor tharlaíodh go leor de na cítocíní a tástáladh faoi na coinníollacha seo, áfach, braitheadh ​​MCP-1, IL-27, IFN-b, TNF-a, agus IL-6 sna cultúir seo ( Fíor 5D). Bhí léiriú i bhfad níos airde ag Clec12a-/- BMDManna ar na cítocíní seo mar fhreagra ar go leor de na ligands miocróbacha agus chonacthas na freagraí difreálach is mó mar fhreagra ar an agónaí TLR2 Pam3CysK. Tá na sonraí seo comhsheasmhach le ról aitheanta Clec12a maidir le freagairtí athlastacha a mhaolú le linn athlasadh steiriúil (Neumann et al., 2014).

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

Rinneadh RNA-seq ar BMDManna ó WT nó Clec12a-/- cóireáilte le F. rodentium chun a chinneadh conas a rialaíonn Clec12a freagairtí na gceall seo don orgánach baictéarach sonrach seo. Rinneamar measúnú ar an bhfreagra difreálach trí Clec12a-/- BMDM a nochtar do chreimire F. thar rialuithe feithicle a chur i gcomparáid le BMDManna WT. Léirigh anailís shaibhrithe ar ghéinte a cuireadh in iúl go difreálach go raibh méadú suntasach ag macrophages easnamhach Clec12a ar ghéinte a raibh baint acu le rialú timthriall cille nuair a tugadh dúshlán dó le F. rodentium (Fíor S5A). Tá timthriall cille nasctha go bunúsach le fagaicíotóis agus bhí laghduithe suntasacha freisin ar ghéinte a bhaineann le fagaicíotóis agus ar an bhfreagairt athlastach (Fíor 5E) (Luo et al., 2005). Ag teacht le staidéar le déanaí ar Clec12a agus Salmonella, tugann na sonraí seo le fios go bhfuil fagaicíotóis lochtach in éagmais Clec12a mar fhreagra ar an ngnáthchónaí gut F. rodentium (Begun et al., 2015). Chun é seo a thástáil, bailíodh maicreaphages peritoneal ó ainmhithe WT agus Clec12a-/- agus comhshaothraíodh iad le Sybr®-green lipéadaithe F. rodentium. Bhí i bhfad níos lú miocrób in aghaidh na cille ag Clec12a-/- macrophages (Fíor 5F, G; Fíor S5B), rud a thugann le fios go n-eascraíonn easnamh Clec12a go nglactar le níos lú orgánaigh agus go bhfuil sé comhsheasmhach le fagaicíotóis laghdaithe sa tacar sonraí RNA-seq. I dteannta a chéile, léiríonn na sonraí seo go bhfuil ról déach ag Clec12a maidir le freagairtí soiléire athlastacha ar ligandaí miocróbacha coitianta a mhaolú agus ag an am céanna tógáil baictéarach macrophage a chur chun cinn.

Ceanglaíonn Clec12a go fabhrach le comharthaí gram-dearfach

Ós rud é go gcuirtear tús le fagaicíotóis trí cheangal miocróib agus inmheánú agus marú ina dhiaidh sin, rinneamar hipitéisiú go raibh Clec12a in ann ceangal a dhéanamh le baill ar leith den mhiocróib, amhail F. rodentium. Chun aghaidh a thabhairt ar an bhféidearthacht seo, cruthaíodh próitéin chomhleá ina bhfuil an fearann ​​ceangailteach extracellular de murine Clec12a agus an chuid Fc den IgG1 daonna (Clec12a-Fc) (Fíor 6A) (Maglinao et al., 2014; Neumann et al., 2014; Raulf et al., 2019). Rinneadh an phróitéin a íonú agus a scagadh lena cheangal ar phainéal de bhaictéir ilchineálacha gram-dearfacha agus gram-dhiúltacha ar eol go bhfuil siad i láthair laistigh den gut homeostatach, lena n-áirítear F. rodentium, Roseburia spp., Bifidobacteria animalis, Akkermansia muciniphila, Bacteriodes uniformis, agus na fungais commensal Candida albicans, de réir cítoiméadracht sreafa. Áiríodh Salmonella enterica freisin mar gur léirigh staidéir roimhe seo go bhféadfadh Clec12a a bheith bainteach le hiontráil S. enterica isteach sa chill (Begun et al., 2015). Tá Clec12a faoi cheangal go céimeanna éagsúla le roinnt baictéir phylogenetically ar leith, lena n-áirítear F. rodentium, ach ní na fungais, C. albicans (Fíor 6B). Bhí an ceangal ba mhó ag Clec12a leis na horgánaigh ghramdhearfacha F. rodentium agus ball den teaghlach Lachnospiceae Roseburia sp., agus rinne sé an t-idirghníomhú ba lú le B. animalis, B. uniformis, agus S. enterica (Fíor 6B), rud a léiríonn an féidir Clec12a. ceangal le baill ar leith den mhicribhiotán agus is fearr orgánaigh ghramdhearfach. Aithníonn ár gcuid sonraí Clec12a le chéile mar mheicníocht a úsáideann an córas imdhíonachta chun suirbhé a dhéanamh ar phobal miocróbach na putóige agus chun an micribiota a ghearradh trí cheangail dhíreach agus fagaicíotóis agus ag an am céanna cosc ​​a chur ar fhreagraí athlastacha follasacha ar mhiocróib a bhfuil gram-dearfach go leor acu atá ríthábhachtach chun sláinte putóige a chothabháil.

PLÉ

Éilíonn homeostasis laistigh den stéig meicníochtaí chun miocróib chomhtheagmhálacha a shrianadh gan athlasadh díobhálach a thionscnamh (Macpherson et al., 2000). Tá IgA, le blianta beaga anuas, tagtha chun cinn mar cheann de na bealaí ríthábhachtacha inar féidir le himdhíonacht putóige smacht a chur ar an micribiota (Pabst agus Slack, 2020). Go deimhin, tá IgA in ann ceangal díreach a dhéanamh le miocróib agus/nó a gcuid táirgí agus iad a dhíchur ón bpuiteach gan ionduchtú athlasadh tréithchineálach. Ní dhearnadh staidéar go dtí seo ar mhóilíní imdhíonachta eile a bhfuil na dé-airíonna seo acu. Cuimsíonn lectins de chineál C aicme éagsúil próitéiní ar féidir leo éagsúlacht próitéine, carbaihiodráit, agus móilíní lipid a aithint ó tháirgí miocróbacha agus óstacha (Brown et al., 2018; Drouin et al., 2020). Mar sin féin, is beag duine a ndearnadh staidéar orthu i gcomhthéacs díolúine putóige agus an mhicribhiota (Iliev et al., 2012; Martinez-Lopez et al., 2019). Mar sin, go bhfios dúinn, is é seo an chéad léiriú go n-athraíonn easnamh Clec12a comhdhéanamh an mhicribhiota a thiomáineann déine an ghalair.

sochair cistanche-neartú chóras imdhíonachta

Rinneadh staidéar ar Clec12a den chuid is mó i gcomhthéacs aitheantais monosodium urate (MSU) nó aigéad uric, rud is minic a léiríonn bás ceallacha (Kono et al., 2010; Neumann et al., 2014). Tá aigéad uric in ann freagraí athlastacha a ghníomhachtú tríd an NLRP3 inflammasome, dá bhrí sin, chun scriosadh fíocháin a chosc le linn bás ceallacha, ní mór an athlasadh seo a rialú (Martinon et al., 2006). Taispeánadh go ndéanann Clec12a an freagra athlastach seo a chothromú trí íosrialáil chomharthaíochta Syk (Marshall et al., 2004). I gcomhréir leis seo, scriosadh Clec12a i múnla de athlasadh steiriúla agus múnla autoinflammatory airtríteas is cúis le gníomhachtú neutrophil feabhsaithe agus galair in olcas, a dhéanamh Clec12a coscán tábhachtach athlastacha (Redelinghuys et al., 2016). Léiríodh le déanaí, áfach, go bhfeabhsódh Clec12a comharthaíocht interferon de chineál I mar fhreagra ar ionfhabhtú víreasach agus glacadh le Salmonella trí mheán an chosáin uathphagaíochta antibacterial (Begun et al., 2015; Li et al., 2019). Léiríonn sé seo nach bhfeidhmíonn Clec12a amháin chun athlasadh a shrianadh, ach gur féidir leis róil éagsúla a imirt ag brath ar an gcomhthéacs. Tá an stéig difriúil sa mhéid is go bhfuil líon mór cealla imdhíonachta ann fiú in éagmais galair. Tá sé seo mar gheall ar láithreacht an mhiocróib, a bhfuil ról tábhachtach aige maidir le forbairt imdhíonachta a threorú agus cosc ​​​​a chur ar choilíniú orgánaigh phataigineacha. Tá na patrúin dromchla céanna ag an micreabhiota a bhraitheann TLRanna a aithníonn pataiginí freisin, agus mar sin ní mór go mbeadh meicníochtaí rialála dian i bhfeidhm ag an gcóras imdhíonachta intestinal chun athlasadh na n-orgánach eachtrach seo a shrianadh (Blander et al., 2017).

Chuireamar spéis i Clec12a ar dtús mar gur aithníodh go n-eascraíonn fungas putóige, Saccharomyces cerevisiae aigéad uric chun colitis a dhéanamh níos measa (Chiaro et al., 2017). Ina theannta sin, d'aithin staidéir eile go bhféadfadh tionchar a bheith ag an microbiota ar ghalar intestinal trí mheitibileacht íonáin a ionduchtú, arb é aigéad uric an táirge deiridh i mamaigh (Zhu et al., 2019). Tugann na sonraí seo le fios go bhféadfadh meicníochtaí chun aigéad uric a bhrath, mar Clec12a, tionchar a imirt ar hoiméastáis intestinal. Mar sin féin, níor thugamar faoi deara aon athruithe ar leibhéil aigéad uric i séiream nó feces, rud a thugann le fios nach raibh méadú ar dhéine an ghalair in ainmhí Clec12a-/- á thiomáint ag aigéad uric méadaithe. Mar sin féin, tá déine méadaithe colitis i Clec12a-/- á thiomáint ag comhdhéanamh an mhicribhiota. Mar sin, bunaithe ar ár sonraí d’fhéadfadh léiriú laghdaithe Clec12a-/- tionchar a imirt ar chomhdhéanamh an mhicribhitheora in othair IBD (Jason L. Kubinak, 2015; Rehman et al., 2011; Vijay Kumar et al., 2010). Rud suimiúil, fuaireamar amach go raibh antaibheathaigh a dhírigh ar orgánaigh ghram-dhearfach in ann déine colitis in ainmhithe Clec12a-/- a fheabhsú. Tá sé seo i gcodarsnacht le tuarascálacha éagsúla a d'aithin Enterobacteriaceae méadaithe gram-dhiúltach le linn athlasadh intestinal, dá bhrí sin, tá sé seo ar cheann den bheagán staidéar a d'aithin leathnú in orgánaigh gram-dearfach a bhfuil baint acu le forbairt colitis. Cé nach dócha gurb é an t-aon orgánach amháin a imríonn tionchar ar dhéine colitis sa mhúnla seo, breathnaíodh méadú suntasach ar F. rodentium in ainmhithe Clec12a-/-. Is ball gram-dearfach, oxidase, agus catalase-diúltach den phyla Firmicutes (Bacillota) (Chang et al., 2015) é F. rodentium. Feabhsaíonn tabhairt isteach F. rodentium go laethúil fiú lucha WT colitis, ag tacú go bhfuil leibhéil mhéadaithe F. creimire laistigh den gut díobhálach agus dóchúil déine colitis tiomána sa Clec12a-/-. Léirigh tuarascáil le déanaí gur féidir le F. rodentium láimhdeachas epithelial a mhéadú agus léiriú na n-einsímí laistigh de epithelia a íosrialáil freagraí athlastacha a shochtadh agus dá bhrí sin tá sé ag teacht leis an ngalar níos measa a fheicimid nuair a leathnaítear F. rodentium sa gut (Cao et al., 2022). De réir mar a dhéantar daoine a choilíniú le horgánach cosúil le F. rodentium (Zagato et al., 2020), ba cheart go ndéanfadh staidéir bhreise tionchar na mbaictéar F. seo atá cosúil le creimiriam ar ghnéithe den fhiseolaíocht dhaonna a bhaineann le colitis a shoiléiriú.

Ag tacú le ról Clec12a i measc cealla imdhíonachta dúchasacha, thugamar faoi deara go bhfuil an miocróib colitogenic fós déanta in ainmhithe Clec12a-/- nach bhfuil córas imdhíonachta oiriúnaitheach acu. Ba macrophages an céatadán is airde de chealla laistigh den gut a chuireann Clec12a in iúl, rud a thug orainn díriú ar fheidhm Clec12a sna cealla seo. Tá sé léirithe ag staidéir roimhe seo go bhfuil Clec12a ina idirghabhálaí tábhachtach ar tháirgeadh interferon de chineál I mar fhreagra ar ionfhabhtú víreasach (Li et al., 2019). Mar sin féin, níl measúnú déanta ar an tionchar a bhíonn ag Clec12a ar fhreagraí ar speictream leathan liganda baictéarach; tá sé seo thar a bheith ábhartha sa stéig áit a bhfuil flúirse ligands TLR ann. Anseo, léirímid go bhfreastalaíonn Clec12a ar fhrithghníomhartha macrophage sa gut agus ar fheidhmeanna dóchúla chun homeostasis a chinntiú mar fhreagra ar an microbiota. Léirigh RNA-seq de mhacrophages atá gortha le F. rodentium go mbíonn lochtanna sa timthriall cille agus fagaicíotóis mar thoradh ar easnamh Clec12a mar fhreagra ar na baictéir comónta seo. Léirigh staidéar le déanaí go raibh Clec12a-/- macrophages laghdaithe autophagy mar fhreagra ar Salmonella (Begun et al., 2015). Comhlánaíonn agus leathnaíonn ár sonraí na torthaí seo chun a chur san áireamh go bhfeidhmíonn Clec12a freisin chun orgánaigh ionracha neamh-ionracha a rialú. Tá sé léirithe ag daoine eile go bhfuil tionchar ag F. rodentium ar bhitheolaíocht epithelial, rud a thugann le tuiscint go luíonn F. rodentium in aice leis an óstach agus mar sin ní mór é a rialú go docht ag an gcóras imdhíonachta. Tacaíonn ár sonraí go rialaíonn Clec12a F. rodentium trí rialáil fagaicíotóis. Cuirtear tús le fagaicíotóis trí cheangal fisiceach ligand nó miocrób, agus is féidir le lectins de chineál C a nascadh le ligands iolracha, rud a thug orainn a thástáil an féidir Clec12a a chomhcheangal go díreach le baictéir a chónaíonn sa phut. Is díol suntais é go raibh an ceangal ba mhó ag Clec12a leis na horgánaigh ghramdhearfacha F. rodentium agus Roseburia agus i bhfad níos lú ná sin leis na horgánaigh gram-dhiúltacha A. mucinophila agus B. éideis agus ní ar C. albicans ar chor ar bith. Léiríonn na sonraí seo go bhfuil claonadh ag Clec12a baill shonracha den mhicribhiota a cheangal. Ligeann sé seo dúinn samhail a thógáil trínar féidir le rannpháirtíocht Clec12a agus fagaicíotóis ina dhiaidh sin baill áirithe den mhiocróibóta a rialú agus na héifeachtaí díobhálacha a d’fhéadfadh a bheith ag a leathnú a chosc. Leagann sé seo béim ar dhá fheidhm Clec12a atá in ann athlasadh a shrianadh i gcoinne ligandanna miocróbacha agus ag an am céanna ag aithint agus ag rialú baill shonracha den mhiocróib. Mar sin, is ionann Clec12a agus bealach uathúil a úsáideann an córas imdhíonachta dúchasach chun hoiméastáis a chinntiú laistigh den chonair gastrointestinal.

Finscéalta FIGIÚR

Fíor 1. Cuireann Clec12a srian ar ghalair intestinal neamhspleách ar an gcóras imdhíonachta oiriúnaitheach

(A) Chun measúnú a dhéanamh ar dhéine colitis WT nó Clec12a-/- C57BL/6 lucha ar leith saor ó phataigin (SPF) cóireáileadh le 2.5% de shulfáit sóidiam dextran (DSS) ad libitum ar feadh 7 lá in uisce óil. Rinneadh measúnú faoin gcéad meáchain caillteanas gach lá. Meán +/- SEM, déantar sonraí ó thrí thurgnamh neamhspleácha a chomhthiomsú ag baint úsáide as ANOVA Dhá-bhealach agus triail chomparáid iolrach Śídák.

(B) Tomhaiseadh fad colon (cm) na n-ainmhithe léirithe ag an íobairt. Is éard atá i scaipghrpa ná an meán +/- SEM, comhthiomsaítear sonraí ó thrí thurgnamh neamhspleácha ag baint úsáide as t-thástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin

(C) Tomhaiseadh Lipocalin Fecach-2 (ng/mL) d’ainmhithe sonraithe mar léamh amach athlasadh. Is é an meánghraf +/- SEM an barraghraf, comhthiomsaítear sonraí ó dhá thurgnamh neamhspleácha ag baint úsáide as t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin

(D) Codanna drólainne dhaite H&E ionadaíocha ó ainmhithe sonraithe tar éis colitis arna spreagadh ag DSS.

(E) Gintear scóir histeolaíochta d'ainmhithe sonraithe ó chodanna drólainne i

(D). Is é an meánghraf +/- SEM, a chuirtear i gcomparáid le t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin.

(F) Rinneadh múnla aistrithe cille T de colitis chun colitis ainsealach a mheas. Rinneadh meáchan ainmhithe TCRb-/- agus Clec12a-/-;TCRb-/- a thomhas go seachtainiúil. Léiríonn an graf céatadán meáchain caillte na n-ainmhithe sonraithe le linn an turgnaimh. Meán +/- SEM, i gcomparáid le 2-way ANOVA.

(G) Tomhaiseadh fad coilíneachta na n-ainmhithe léirithe ó (I) ag an íobairt. Is é an meánghraf +/- SEM, a chuirtear i gcomparáid le t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin.

(H) WT, Clec12a-/- , Rag-/- nó Rag-/- ; Clec12a-/- C57BL/6 Rinneadh measúnú ar lucha SPF le haghaidh colitis ghéarmhíochaine. Cuireadh 2.5% DSS ad libitum ar fáil d’ainmhithe léirithe ar feadh 7 lá. Rinneadh measúnú faoin gcéad meáchain caillteanas gach lá. Meán +/- SEM, tá na sonraí ionadaíoch do dhá thurgnamh neamhspleácha. Triail chomparáide ilbhealaigh ANOVA agus Śídák.

(I) Tomhaiseadh fad colon (cm) na n-ainmhithe léirithe ag an íobairt. Is é an meánghraf +/- SEM, is ionann na sonraí agus dhá thurgnamh neamhspleácha a úsáideann t-thástálacha gan péire. Seasann gach pointe do luch amháin * p < 0.05; ** p < 0.01; *** p < 0.001; ****p < 0.0001

Fíor 2. Tugann an micribhithe a fhoirmítear in ainmhithe Clec12a-/- colitis níos measa

A) Rinneadh trasphlandú micribiota fecal (FMT) trí sháithíní fecal a aistriú ó ainmhithe WT nó Clec12a go lucha WT saor ó ghaiméite. Ceadaíodh micrimhiotán aonchineálú a dhéanamh ar feadh ceithre seachtaine, ina dhiaidh sin, comhchónaíodh leath de na lucha WTFMT agus leath de na lucha Clec12a-/-FMT agus cheadaigh siad ceithre seachtaine eile chun meascadh. Ansin fuair gach grúpa 2.5% DSS ad libitum ina n-uisce óil agus rinneadh iad a íobairt ar an 7ú lá.

B) Rinneadh measúnú laethúil ar chéatadán meáchain caillteanas na n-ainmhithe a luaitear. Léiríonn an graf meán +/- SEM, comhthiomsaítear sonraí ó dhá thurgnamh neamhspleácha ag baint úsáide as ANOVA Dhá-bhealach agus triail chomparáide iolrach Śídák.

C) Tomhaiseadh fad an choilín (cm) ó na hainmhithe léirithe ag an íobairt. Is éard atá i gceist le scaipghraf ná an meán +/- SEM, i gcomparáid trí úsáid a bhaint as Gnáth-Aon-Slí ANOVA le tástáil chomparáidí iolracha Dunnett. Léiríonn gach pointe luch amháin.

D) Codanna drólainne daite H&E ionadaíocha na n-ainmhithe sonraithe tar éis FMT agus colitis spreagtha DSS.

E) Gineadh scóir histeolaíochta ó chodanna idirstad in (D). Is é an meánghraf +/- SEM, a chuirtear i gcomparáid le t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin.

F) Fad ualaithe Unifrac ó sheicheamh géine 16S rRNA de WTFMT, Clec12a-/- FMT, nó ainmhithe comhchónaí. Ceapacha bosca agus guairneáin a thaispeánann na pointí go léir (comparáid achair péire) agus iad a chur i gcomparáid le tástáil Kruskal-Wallis.

G) Achair Neamhualaithe Neamhualaithe ó sheicheamh géine 16S rRNA de WTFMT, Clec12a-/- FMT, nó ainmhithe comhchónaí. Ceapacha bosca agus guairneáin a thaispeánann na pointí go léir (comparáid achair péire) agus iad a chur i gcomparáid le tástáil Kruskal-Wallis.

H) Fad Bhré-Curtis ó sheicheamh géine 16S rRNA de WTFMT, Clec12a-/- FMT, nó ainmhithe comhchónaí. Ceapacha bosca agus guairneáin a thaispeánann na pointí go léir (comparáid achair péire) agus iad a chur i gcomparáid le tástáil Kruskal-Wallis.

Fíor 3: Tá comhdhéanamh micribhithe a fhoirmítear in ainmhithe Clec12a-/- neamhspleách ar dhíolúine oiriúnaitheach

A) Léaráid scéimreach a thaispeánann athdhéanamh smeara le FMT ina dhiaidh sin. C57Bl/6 WT Rinneadh lucha ionradaithe go marfach agus athdhéanta le ceachtar WT nó Clec12a-/- smeara. Tar éis 8 seachtaine, tógadh feces ó na lucha seo agus aistríodh go lucha WT saor ó ghaiméite mar a mhínítear in (A). Soláthraíodh ansin 2.5% DSS ad libitum ina n-uisce óil do na hainmhithe chimeric athdhéanta ar dtús.

B) Rinneadh measúnú laethúil ar chéatadán meáchain caillteanas lucha FMT ó (F). Meán +/- SEM, ag baint úsáide as ANOVA Dhá-bhealach agus tástáil comparáide il Tukey.

C) Tomhaiseadh fad an choilín (cm) ó na hainmhithe léirithe ag an íobairt. Is éard atá i scaipghraf ná an t-tástáil meánach +/- SEM, gan péire. Léiríonn gach pointe luch amháin

D) Rinneadh FMTanna chun measúnú a dhéanamh ar ról an chórais imdhíonachta oiriúnaitheach maidir le múnlú miocróbach agus ar dhéine colitis trí sháithíní fecal a aistriú ó Rag-/- nó Rag-/-; Clec12a-/- ainmhithe SPF isteach i lucha WT saor ó ghaiméite mar a thuairiscítear in (A). Cuireadh cóireáil ar lucha le 2.5% DSS ar feadh 7 lá. Rinneadh measúnú faoin gcéad meáchain caillteanas gach lá. Is é an graf meán +/- SEM, ag baint úsáide as ANOVA Dhá-bhealach agus Triail Comparáide il Tukey.

E) Tomhaiseadh fad colon (cm) ó na hainmhithe a luaitear in (F) ag an íobairt. Meán +/-, rinne SEM comparáid idir trí úsáid a bhaint as Gnáth-aon-bhealach ANOVA agus triail ilchomparáide Dunnet. Léiríonn gach pointe luch amháin. * p < 0.05; ** p < 0.01; *** p < 0.001; ****p < 0.0001

Fíor 4. Cuireann Clec12a teorainn le leathnú creimirí Faecalibaculum, miocrób a mhéadaíonn colitis

A) WT nó Clec12a-/- C57BL/6 SPF tugadh cocktail antaibheathach (A) (neomycin, gentamycin, ampicillin, erythromycin), cephalothin, nó gentamycin (B, C) ag tiúchan de 0 do lucha. 5g/L ar feadh ceithre lá dhéag. Tar éis seacht lá tugadh 2.5% DSS d’ainmhithe ina n-uisce óil go dtí an íobairt. Tomhaiseadh fad an choilín (cm) ó na hainmhithe léirithe ag an íobairt. Is éard atá i scaipghraf ná an t-tástáil meánach +/- SEM, gan péire. Léiríonn gach pointe luch amháin.

B) Rinneadh measúnú laethúil ar chéatadán meáchain caillteanas na n-ainmhithe a luaitear. Is é an graf meán +/- SEM, ag baint úsáide as ANOVA Dhá-bhealach agus Triail Comparáide il Tukey

C) Fad colon (cm) na n-ainmhithe léirithe a thomhas ag an íobairt. Is éard atá i scaipghraf ná an t-tástáil meánach +/- SEM, gan péire. Léiríonn gach pointe luch amháin.

D) Gnéithe breathnaithe ó WT nó Clec12a-/- feces, seicheamh 16S rRNA éagsúlacht alfa. Meán +/- SEM, i gcomparáid leis an tástáil Mann-Whitney.

E) Pielou Cothroime ó WT nó Clec12a-/- feces, 16S rRNA seicheamhú éagsúlacht alfa. Meán +/- SEM, i gcomparáid leis an tástáil Mann-Whitney.

F) Meán Eantrópachta na Sionainne +/- SEM, i gcomparáid le triail Mann-Whitney.

G) Anailís ANCOM ó WT agus Clec12a-/- feces. Is iad ainmneacha tacsanomacha na haicmí is fearr ar ASVanna ag baint úsáide as an mBunachar Sonraí Tacsanomaíochta Géanóim (GTDB).

H) Flúirse choibhneasta ASVanna rodentium Faecalibaculum. I gcomparáid le Mann Whitney * p < {{0}}.05; ** p < 0.01; *** p < 0.001; ****p < 0.0001

I) C57Bl/6 WT SPF Rinneadh réamhchóireáil ar lucha le 1x108 CFU de F. creimire trí chuasán béil ar feadh trí lá. Ansin fuair ainmhithe 2.5% DSS ina n-uisce óil ar feadh 7 lá agus iad ag fáil gavage laethúil F. rodentium. Rinneadh measúnú faoin gcéad meáchain caillteanas gach lá. Meán +/- SEM, Comhthiomsaítear sonraí de cheithre thurgnamh ar leith ag baint úsáide as ANOVA Dhá-bhealach agus tástáil chomparáide iolrach Tukey.

J) Tomhaiseadh fad Colon (cm) na n-ainmhithe léirithe ag an íobairt. Is é an meánghraf +/- SEM, Comhthiomsaítear sonraí ó cheithre thurgnamh ar leith i gcomparáid le Gnáth-Aon-Slí ANOVA le tástáil cheartúcháin iolrach Dunnet. Léiríonn gach pointe luch amháin. * p < 0.05; ** p < 0.01; *** p < 0.001; ****p < 0.0001

Fíor 5. Cuireann Clec12a teorainn ar athlasadh agus cuireann sé fagaicíotóis chun cinn i macrophages.

A) Rinneadh imdhíon-fheinitíopáil trí chitoiméadracht sreafa ar chealla atá scoite amach ón lamina propria coilíneach (cLP) ar ainmhithe WT agus Clec12a-/-. Taispeánann léarscáil teasa minicíocht slonn Clec12a ar chealla imdhíonachta dúchasacha agus oiriúnaitheacha

B) Taispeánann an barraghraf minicíocht na gceall réamh-gheata, CD38+ (macrophages M1) ó cLP na n-ainmhithe a luaitear. Meán +/- SEM, i gcomparáid le t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin.

C) Taispeánann an barraghraf minicíocht na gceall réamh-gheata, EGR2+ (macrophages M2) ó cLP na n-ainmhithe sonraithe. Meán +/- SEM, i gcomparáid le t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin.

D) Baineadh BMDManna ó WT agus Clec12a-/- cnámha fada agus saothraíodh iad i láthair M-CSF (20ng/mL) ar feadh 7 lá. Ar lá 8, cuireadh BMDManna le LPS (100ng/mL), MDP (10mg/mL), Pam3cysk (1mg/mL), nó, Flagellin (1mg/mL) ar feadh 24 uair an chloig. Bailíodh meáin agus measadh iad le haghaidh táirgeadh cítocín. Taispeánann an léarscáil teasa an t-athrú fillte Log2 de chitocíní léirithe ó Clec12a-/- thar WT.

E) Rinneadh BMDManna ó WT agus Clec12a-/- lucha a leithlisiú agus a shaothrú mar atá in (A) agus ansin comhshaothraíodh iad le F. rodentium ag MOI 10 ar feadh 24 uair an chloig. Tar éis BMDManna a ní, bailíodh RNA agus ullmhaíodh iad le haghaidh seicheamhú RNA. Na 10 gcatagóir is fearr de théarmaí GO simplithe (Próiseas Bitheolaíoch) saibhrithe i measc Clec12a-/- íosrialaithe

F) Rinneadh macraifóigí peritoneal a leithlisiú ó lucha WT agus Clec12a-/- agus ansin comhshaothraíodh iad le F. rodentium glas-dhaite Sybr chun fagaicíotóis a mheas. Ar chlé: Macrophages WT. Ar dheis: Clec12a-/- macrophages. Léirítear íomhánna ionadaíocha ó réimse geal (colúin ar chlé), fluaraiseacht (colúin lár), agus cumaisc (colúin ar dheis). Léiríonn cinn saigheada buí samplaí de chealla F. creimire sáinnithe ag macrophages. barra scála=20 µm. Tá íomhánna ionadaíoch do dhá thurgnamh ar leith.

G) Taispeánann an barraghraf orgánaigh in aghaidh na cille, mar a fheictear in (F). Áiríodh 250 cill WT agus 269 cill Clec12a-/- chun an méid F. creimire in aghaidh na cille a chainníochtú.

Fíor 6: Ceanglaíonn Clec12a go díreach le baill ar leith den mhicribhiota.

A) Léaráid scéimreach a thaispeánann Clec12a-IgG daonna1-Comhleá próitéin Fc nó veicteoir folamh (cuid Fc amháin) B) Histeagraim d’anailís sreabh-chítiméadrach a léiríonn ceangal difreálach Clec12a-Fc le baictéir éagsúla nó C. albicans.

Finscéalta FIGIÚRAÍ FORLÍONTACHA

Fíor Forlíontach 1. Ní chuireann easpa Clec12a isteach ar leibhéil aigéad uric.

A) Tomhaiseadh aigéad serum uric (µM) na n-ainmhithe a tugadh le fios chun meitibileacht phíonáin idir WT agus Clec12a-/- lucha C57Bl/6 a mheas. Is é an scaipghrpa an meán +/- SEM, comhthiomsaítear sonraí ó thrí thurgnamh neamhspleácha ag baint úsáide as t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin.

B) Tomhaiseadh aigéad uric fecal (µM) na n-ainmhithe léirithe chun eisfhearadh gut d'aigéad uric idir WT agus Clec12a-/- C57Bl/6 lucha a mheas. Is é an scaipghrpa an meán +/- SEM, comhthiomsaítear sonraí ó thrí thurgnamh neamhspleácha ag baint úsáide as t-tástáil neamhphéireáilte. Léiríonn gach pointe luch amháin.

Figiúr Forlíontach 2. Tiomáineann WT agus miocróib Clec12a-/- galar difreálach

Céatadán meáchain caillteanas ainmhithe WT agus Clec12a-/- cóireáilte le mhanglaim antaibheathach comhdhéanta de neomycin, gentamycin, ampicillin, agus erythromycin.

Figiúr Forlíontach 3. Bíonn tionchar ag Clec12a ar chomhdhéanamh an mhicribhiota.

A) Ceapacha PCoA de na chéad 3 ais bunaithe ar achair Bhré-Curtis a thaispeánann comhghaolmhaireacht iomlán na micribiota agus na ceapacha bosca agus guairneáin chomhfhreagracha ag cainníochtú na héagsúlachta laistigh de gach grúpa agus á cur i gcomparáid le tástáil Mann-Whitney.

B) Ceapacha PCoA bunaithe ar achair ualaithe Unifrac agus na ceapacha bosca agus guairneáin chomhfhreagracha ag cainníochtú neamhchosúlachtaí laistigh den ghrúpa i gcomparáid le tástáil neamhphéire Mann-Whitney.

C) Tábla a thaispeánann torthaí tástála PERMANOVA do mhicreabiota WT vs Clec12a-/- fecal le Bray-Curtis agus achair ualaithe Unifrac.

Figiúr Forlíontach 4: Cuireann Clec12a i macrophages srian ar athlasadh.

A) Léiríonn ceapacha veidhlín an meán-déine fluaraiseachta geoiméadrach (MFI) de chealla imdhíonachta a thaispeántar in (A). Meán +/- SEM, tástáil Kruskal-Wallis le ceartúchán Dunn le haghaidh comparáidí iolracha. Léiríonn litreacha grúpaí atá an-difriúil.

B) Ceapacha citeiméadrachta sreafa ionadaíocha de mhacrophages M1 agus M2 ó cLP lucha WT nó Clec12a-/- tar éis colitis DSS. Tá na cealla réamh-gheata ar CD45+, Ly6C-, CD11b+, MHCII+, agus CD64+ beo. Ó Fíor 5A

Figiúr Forlíontach 5. Déanann Clec12a rialú timthriall cille a chobhsú agus rialaíonn sé fagaicíotóis i macrophages.

A) Na 10 gcatagóir is fearr de théarmaí GO simplithe (Próiseas Bitheolaíoch) saibhrithe i measc ghéinte uas-rialaithe Clec12a-/- i gcomparáid le WT mar fhreagra ar F. rodentium. Rinneadh BMDManna ó WT agus Clec12a-/- lucha comhshaothraithe le F. rodentium a leithlisiú agus anailís a dhéanamh orthu mar atá i bhFíor 7A.

B) Peritoneal macrophages were prepared as described and co-cultured with Sybr®-green stained F. rodentium. Bacteria cells were counted inside macrophages. >Áiríodh 200 macrophages. Taispeánann an barraghraf meánlíon F. rodentium ó 4 thobar aonair chun comhsheasmhacht an chomhairimh agus an éifeacht trasna toibreacha a thaispeáint. Meán +/- SEM i gcomparáid le húsáid t-tástáil neamhphéireáilte.

BUÍOCHAS

Ba mhaith linn buíochas a ghabháil le Gordon Brown as na hainmhithe Clec12a-/- a sholáthar don tionscadal seo. Thacaigh Fondúireacht Helen Hay Whitney (KSO), Deontas Oiliúna T32 Pathogenesis Miocróbach NRSA de chuid Ollscoil Utah (KSO), Dámhachtain Taighde Sinsearach CCFA (JLR), NIDDK R01DK124336, NIDDK R01124317 agus NCCAM R01AT011423 (JLR), Edward Mallinckrodt Fondúireacht Jr. (JLR), dámhachtain NSF CAREER (IOS-1253278) (JLR), Comhaltacht Packard san Eolaíocht agus san Innealtóireacht (JLR), Dámhachtain Imscrúdaitheora Fáilte Burroughs i Pathogenesis (JLR), Fondúireacht Asma Mheiriceá (JLR), Margolis Fondúireacht (JLR), deontas MS Society Centre (JLR), agus Dámhachtain Nuálaí Nua NIH WM Keck Foundation (JLR) DP2GM111099-01 (RMO), NHLBI R00HL102228-05 ( RMO), Deontas Taighde Chumann Ailse Mheiriceá (RMO), Dámhachtain Scoláire Kimmel (RMO), R01AG047956 (RMO), agus NIAID R01AI141202 (ASI). Thacaigh Áis Cíteiméadrachta Sreafa Ollscoil Utah leis an obair seo chomh maith leis an Institiúid Náisiúnta Ailse trí Ghradam Uimhir 5P30CA042014-24. Aithnítear go buíoch an tacaíocht agus na hacmhainní ón Ionad um Ríomhaireacht Ardfheidhmíochta in Ollscoil Utah.

RANNÍOCAÍOCHTAÍ AN ÚDAR

Chuidigh TRC leis an staidéar a cheapadh, rinne sé an chuid is mó de na turgnaimh luiche agus imdhíoneolaíochta, chuir na sonraí le chéile i bhfigiúirí, agus chabhraigh sé leis an lámhscríbhinn a scríobh. Chuir RB turgnaimh saor ó ghaiméite ar bun agus choinnigh siad gach ainmhí saor ó ghaiméite. Chuidigh ESV leis na turgnaimh imdhíoneolaíochta gut lamina propria. Chabhraigh KSO le baint na luiche agus thug sé léargas agus treoir. Chuidigh KMB le fómhar luiche agus cíteiméadracht sreafa. Chabhraigh MCN le fómhar luiche. Chuir WV cabhair ar fáil le tógáil na tógála don chomhleá próitéine agus íonú. Chuir TJ cúnamh ar fáil le measúnachtaí fagaicíotóis. Rinne JH anailís ar sleamhnáin mhicreascópachta phagocytosis. Chuir MH cabhair ar fáil le híonú agus le húsáid na próitéine comhleá. Soláthraíonn KAK aonróga baictéaracha. Chuir ROC saineolas agus léargas imdhíoneolaíochta ar fáil. Chuidigh WZS leis an staidéar a cheapadh le hanailísí bithfhaisnéisíochta, chabhraigh sé le hullmhú figiúr agus staitisticí, agus chabhraigh sé leis an lámhscríbhinn a scríobh. Chabhraigh JLR leis an staidéar a cheapadh agus a stiúradh, rinne sé maoirseacht ar dhearadh agus ar thorthaí turgnamhacha, d’eagraigh comhoibrithe agus imoibrithe, ghnóthaigh maoiniú don staidéar, agus chabhraigh sé leis an lámhscríbhinn a scríobh.

MODHANNA

Amhrán luch

Bhí na línte luiche go léir a úsáidtear anseo ar chúlra C57BL/6. Sholáthair Gordon Brown lucha Clec12a-/- go cineálta (Ionad na Comhairle um Thaighde Leighis um Mhíceolaíocht Leighis, Ollscoil Exeter) agus bhí siad géinitíopa de réir a bprótacail a ndearnadh cur síos air roimhe seo (Redelinghuys, et al. 2016). Fuarthas Rag2-/- agus TCRb-/- (Jackson Laboratories, 002118) ó Jackson Laboratories agus coinníodh iad inár gcoilíneacht luiche ar feadh roinnt glúine. Baineadh úsáid as turgnaimh in vivo colitis idir 8 agus 12-seachtain d'aois lucha comhoiriúnaithe. Baineadh úsáid as lucha fireann agus baineann araon. Coinníodh lucha i gcoinníollacha sonracha saor ó phataigin.

Tréithchineálacha baictéaracha agus fungacha

Fuarthas na horgánaigh seo a leanas ó Bhailiúchán DSMZ-Gearmáinis na Miocrorgánach agus na gCultúr Cille GmbH: Faecalibaculum rodentium (DSM# 103405); Akkermansia mucinophilia DSMZ (DSM# 26127); Bifidobacterium animalis DSMZ (DSM# 26074). Fuarthas aonfhoirmeacht Bacteroides ón mBailiúchán Cultúir Cineál Meiriceánach (ATCC® 8492™). Rinneadh Roseburia sp (sainiú brú JLR.KK002) a leithlisiú ar agar Schaedler ó lucha C57BL/6 a chothaíonn micribiota spóir roimhe seo saibhrithe. Rinneadh iar-shaibhriú spóir mar a thuairiscítear roimhe seo agus coinníodh lucha ar feadh glúnta éagsúla leis an micribiota seo inár n-áis gnotobiotic sula raibh JLR.KK002 scoite ó feces (Browne et al., 2016). Rinneamar PCR-aimpliú agus Sanger an ghéin rRNA 16S a sheicheamhú agus ansin é a rangú le seirbhís SILVA ACT agus bunachar sonraí SILVA (Pruesse et al., 2012). Baineadh úsáid as strain Salmonella typhimurimum ST2. Baineadh úsáid as strain Candida albicans sc5314. Déantar cur síos thíos ar na tréithchineálacha baictéaracha a úsáidtear i bpobal sintéiseach PhyLo11b.

DSS-spreagtha colitis turgnamhach

Cothaíodh colitis nuair a cuireadh 2.5% nó 3% (w/v) 36,000-50,{5}MW sulfáit sóidiam Dextran (DSS) (MP Bithleighis) san uisce óil ar feadh 7 lá. Rinneadh monatóireacht laethúil ar dhéine colitis trí athruithe ar mheáchan coirp, comhsheasmhacht stóil, agus fuil fecal. Maidir leis an turgnamh tarrthála monocyte fuair gach lucha 2.5% DSS ar feadh 5 lá, agus tugadh uisce rialta ina dhiaidh sin; monatóireacht meáchain ar aghaidh go dtí an lá 10 nuair a lománaíodh ainmhithe. forchuireadh teorainneacha déine is mó ná 20% meáchain caillteanas mar thairseach déine. Ag críochphointí turgnamhacha, baineadh MLNanna agus idirstad. Tomhaiseadh an idirstad ón cecum go dtí an rectum chun an fad a chinneadh. Próiseáladh fíocháin ansin le haghaidh histeolaíocht, eastóscadh RNA, nó anailís chitiméadrach sreafa.

Histeolaíocht agus Scóráil Coilíneachta

Colons were fixed within histology cassettes O/N at RT in 10% buffered formalin phosphate solution after removal of fecal contents and then transferred to 70% EtOH at 4 C until staining. Sectioning and H&E staining were done at the HCI Biorepository and Molecular Pathology Resource core in the ARUP-operated Research Histology division. Colon scoring was done in a blinded manner with the following rubric scales: percentage of colon crypt loss (0.5 (5%) - 7 (>75%)), crypt loss severity (1 (partial loss) – 5 (full loss)) and inflammatory aggregates (1 (1-3) – 3 (>7)).

Lipocalin-2 (LCN-2) ELISA

Rinneadh an prótacal de réir phrótacal an mhonaróra (Fischer Scientific DY1857-05). Go hachomair, bailíodh feces, rinneadh iad a mheá agus a mhaisítear i HBSS 1X ag tiúchan 100mg/ml. Rinneadh samplaí a sníomh ansin ar 50 xg ar feadh 5 nóiméad chun smionagar mór a bhaint. Baineadh an súthaire ansin agus cuireadh i bhfeadán nua é agus sníomh ag 8000 xg ar feadh 5 nóiméad é chun baictéir a millíní. Caolaíodh an t-eisitheoir seo ansin de réir breoiteachta ainmhithe ach go ginearálta bhí sé idir 1:100- 500 (sláintiúil) – 1:500-1000 (cóireáilte le DSS). Tomhas aigéad uric Rinneadh an tiúchan d'aigéad uric de réir threoracha an déantóra (trealamh measúnachta gníomhaíochta Invitrogen™ Amplex™ Red Uric/Uricase, cat# A22181). Go hachomair, bailíodh fuil ó lucha WT nó Clec12a-/- trí thonnadh cairdiach isteach i bhfeadáin deighilteoirí séiream barr óir. Bhí cead ag feadáin téachtadh ar feadh 30 nóiméad agus ansin iad a sníomh ag 1300 xg ar feadh 10 nóiméad. Baineadh an séiream agus cuireadh i bhfeadáin Eppendorf 1.5ml é, reo é splanc, agus stóráiltear é ag -80 céim Celsius go dtí go ndearnadh tástáil air. Rinneadh aigéad uric fecal trí millíní fecal úra a fháil ó WT agus Clec12-/- lucha. Rinneadh millíní a mheá agus a thaifeadadh agus ansin maisíodh iad i 1ml de mhaolán imoibrithe 1x. Tar éis mashing fisiciúil, rinneadh feadáin a sníomh ar 50 xg ar feadh 5 min chun smionagar mór a bhaint. Rinneadh an sciodar fecal a bhí fágtha a mheas le haghaidh aigéad uric.

Colitis turgnamhach aistrithe T-chealla

Bhí spleens WT aonraithe agus brúite i RPMI ina raibh séiream bó féatais 10%, peinicillin agus streiptimícin. Rinneadh cealla a sníomh ag 367 xg chun cealla a leithlisiú. Cuireadh an millín mar thoradh air ar fionraí ansin i maolán lysis 1x RBC ar feadh 5 nóiméad, sa dorchadas, ag teocht an tseomra. Ansin cuireadh na fuilchealla bána mar thoradh air sin trí cholún MACS CD Miltenyi chun T-chealla CD4+ a leithlisiú. Rinneadh na T-chealla a dhathú ansin le CD4 agus CDRB agus sórtáladh iad ar Chomhleá Aria FACS (BD Biosciences). Bailíodh cealla CD4+ CDRBhi agus tugadh do TCRb-/- nó TCRb-/-; Clec12a-/- lucha go hingearach (IP). Fuair ​​​​gach luch 5 x 105 cealla. Rinneadh monatóireacht sheachtainiúil ar dhéine agus ar fhorbairt colitis trí mheasúnú a dhéanamh ar mheáchain caillteanas. Ag críochphointe an turgnaimh, baineadh MLNanna agus colons agus tomhaiseadh colons ón cecum go dtí an rectum chun measúnú a dhéanamh ar dhéine an ghalair.

Leithlisiú leukocytes ón lamina propria colonic

Baineadh coilíneachtaí muirín le ceca ceangailte agus cuireadh iad i 1X PBS i 6-phlátaí toibreacha ar oighear. Baineadh aon saill agus fíochán nascach a bhí fágtha le feiceáil agus baineadh an cecum as na coilíneachtaí. Rinneadh na colúin a spleáil ar oscailt agus baineadh mucus agus feces go cúramach as an colon sula gcuirfí ar ais i 6-phláta an tobair é. Nuair a spréadh agus a scríobadh na coilíneachtaí go léir, dísleáladh gach colon ar chlúdach mias Petri ag baint úsáide as lann rásúir agus cuireadh i bhfeadán 5{50 ml ar leith é. Cuireadh 10 ml de thuaslagán díthiomsaithe réamhbhlasta (1X HBSS w/o Ca+ agus Mg+, 1.5 mM DTT, 10 mM HEPES, agus 30 mM EDTA) leis agus rinneadh na feadáin a vortexed go hachomair. Goradh na coilíneachtaí ar feadh thart ar 25 nóiméad. ag 37 céim le croitheadh ​​ag 150 rpm go dtí go raibh na réitigh scamallach ó scaradh IEC. Croitheadh ​​samplaí 3X agus vortexed ar feadh 15 soicind agus ansin doirteadh thar scagaire 100 mM ar chónúil 50 ml chun cealla neamh-imdhíonachta ar nós IECanna a bhaint, agus rinsíodh na scagairí go hachomair le 2 ml de oighear-fhuar 1X PBS. Bailíodh an fíochán atá fágtha ar an scagaire le forceps agus bhog sé go cónúil 50 ml nua. 15 ml de thuaslagán díleá réamhthéite (1X HBSS le Ca+ agus Mg, 5% FBS, 50 U/ml Dispase II [Millipore-Sigma, cat # 4942078001], 0.5 mg/ml DNAse I [Worthington Bithcheimiceach, cat # LS002139]) agus 0.5 mg/mL Collagenase D [Millipore-Sigma, cat # 11088866001]) a chur leis, samplaí a vortexed go hachomair, agus ina dhiaidh sin gor ar feadh 45 nóiméad. ag 37 céim le croitheadh ​​ag 150 rpm, nó go dtí go raibh an réiteach scamallach. Croitheadh ​​samplaí 3X ansin agus vortexed ar feadh 15 soicind. Chun na cealla imdhíonachta CLP a bhí fágtha a bhailiú, rinneadh an fíochán díleáite a dhoirteadh thar scagaire 40 mM ar fheadán cónúil 50 mL ina raibh 10 mL 1X PBS. Déantar samplaí a rinsiú agus a scagadh ina dhiaidh sin le 2 ml d'oighearfhuar 1X PBS agus sníofa ag 800 xg ar feadh 10 nóiméad ag 4 chéim . Ansin, baineadh an súthach agus cuireadh i bhfolús é. Ansin athchuireadh cealla i 500 ml de RPMI iomlán, agus áiríodh iad le staining eisiamh gorm Trypan.

Cíteiméadracht sreafa

Rinneadh leukocytes scoite amach ón CLP a dhaite le haghaidh inmharthanachta ag baint úsáide as dath zombie 510 (AmCyan) ar feadh 10 nóiméad ag RT sa dorchadas. Cuireadh bac ar na samplaí ansin le CD-16/32 ar feadh 20 nóiméad ag 4 chéim sa dorchadas. Tar éis sníomh síos ag 367 xg ar feadh 5 nóiméad, dathaíodh cealla scinceáilte ar feadh 30 nóiméad sa dorchadas ag 4 chéim. Úsáideadh gach antasubstaint ag caolú 1:250 mura sonraítear a mhalairt. Bhí painéal Myleloid comhdhéanta de CD45-BV421, CD11b-PerCpCy5.5, MHCII-BV605, CD64-BV711, CX3CR1-BV785, Ly6C-FITC, CD38-PE- Cy7, Ly6G-CF-594, Clec12a-PE (1:500), EGR2-APC (intracellular, 1:50). Rinneadh idirdhealú ar chealla T le: dath zombie 510 (AmCyan), CD45-BV421, CD3e-BV711, CD4-FITC, Foxp3-APC (intracellular 1:50), IL{{ 50}}PE (intracellular 1:50), IFN-g (BV605) (intracellular 1:50), RORgt-PE610 (intracellular 1:50), IL-17A-BV785 (intracellular 1:50). Tar éis iad a smálú, nite cealla dhá uair ar feadh 5 nóiméad an ceann le maolán colúin (1X HBSS w/o Ca2+, Mg2+ agus HEPES, EDTA, FBS). Socraíodh cealla O/N le 2% PFA mura raibh gá le staining intracellular agus ansin nite i maolán colún 2X sula ritheadh ​​ar an gcíteiméadar sreafa. Más gá smálú incheallach, leanadh an trealamh Maolán Staining Factor FoxP3/Transcription (Tonbo Biosciences) agus an prótacal. Ansin athchuireadh na samplaí go léir i 300 ul de mhaolán colúin agus ritheadh ​​iad ar BD LSR Fortessa tar éis cúiteamh a dhéanamh le UltraComp eBeads (ThermoFisher Scientific) agus úsáid a bhaint as rialtáin stainse aonair.

IgA baictéir staining

Rinneadh baictéir a leithlisiú ó millíní fecal trí bhualadh isteach i HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+, ag tiúchan 100 mg feces in aghaidh an ml HBSS. Rinneadh feces mashed a sníomh ansin ar 50 xg ar feadh 5 nóiméad chun smionagar mór a bhaint. Baineadh an súthaire agus cuireadh i bhfeadán nua é. Rinneadh é seo a sníomh ansin ag 8000 xg ar feadh 5 nóiméad chun baictéir a millíní. Baineadh an súthaire agus nite millíní in HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+. Ar deireadh, athchuireadh millíní in HBSS ag tiúchan 100mg/mL, agus cuireadh 10uL de seo i 96-phláta tobair agus blocáladh é le HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+ ina raibh 10% FBS ar feadh 20 nóiméad ag RT. Ansin cuireadh 100uL frith-IgA (PE) go díreach leis an sampla agus gor é ar feadh 30 nóiméad ag 4 C sa dorchadas. Ansin nite cealla i dtuaslagán HBSS+FBS 2x agus ar deireadh cuireadh ar fionraí arís iad i HBSS+1x Sybr®-green agus ceadaíodh iad a ghoradh ar feadh 20 nóiméad sa dorchadas ag RT. Ansin léadh samplaí go díreach ar an sreabhadh-cíteaiméadar.

Leithlisiú smeara

Bhí smeara aonraithe mar a thuairiscítear roimhe seo. Go hachomair, baineadh cnámha fada ó ainmhithe de chineál C57Bl/6 Wild nó Clec12a-/- agus glanadh iad le tuáille páipéir trí chuimilt go réidh. Coinníodh cnámha glana ar oighear agus ainmhithe á bpróiseáil. Gearradh foircinn na gcnámha beagán chun an smior a nochtadh. Cuireadh cnámh isteach (an taobh nochtaithe os comhair síos) i bhfeadán Eppendorf 0.5ml a bhí pollta le snáthaid 18g. Cuireadh an feadán Eppendorf 0.5mL seo laistigh d'fheadán 1.5mL Eppendorf ansin agus é sníofa ag 13,000 x g ar feadh 1 nóiméad. Rinneadh RBC-lysed ansin trí smeara, ag baint úsáide as maolán RBC-lysis (Biolegend) de réir mholtaí an déantóra. Tar éis lysis RBC, athchuireadh cealla i Meán Iolair Athraithe iomlán Dulbecco (DMEM) ina raibh: 10% FBS, 1mg/mL Peann/Strep, HEPES 10mM, 1x aimínaigéad neamhriachtanach, Sóidiam Pyruvate 1mM. Ansin rinneadh cealla a sníomh ar 367 xg ar feadh cúig nóiméad chuig na cealla millíní. Baineadh úsáid as cealla scoite ansin chun BMDManna a fhorbairt, nó chun monocytes a aonrú tuilleadh.

Macrophages díorthaithe smeara

Rinneadh leoicicítí a leithlisiú ó leithlisiú smeara, ar crochadh i DMEM iomlán, agus iad a chomhaireamh trí staining eisiaimh gorm trypan ar haemocytometer. Plátáladh cealla ar miasa 10cm atá cóireáilte le saothrán fíocháin ag tiúchan de 5-8 x 106 cill/pláta i 10 mL de mheáin iomlána + M-CSF (20ng/mL). Cuireadh meáin úra, lena n-áirítear M-CSF, leis na meáin atá ann cheana féin ar laethanta 4 agus laethanta 7. Baineadh úsáid as BMDManna a bhí difreáilte go hiomlán le haghaidh úsáide turgnamhacha idir laethanta 7-9.

Aonrú Monacítí

Baineadh smeara ó ainmhithe WT agus Clec12a-/- mar a thuairiscítear roimhe seo. Rinneadh monaicítí a aonrú leis an Monocyte Aonrúchán Kit (BM), luch (Miltenyi Biotec), agus colún LS MACS de réir treoracha an mhonaróra.

F. comhchultúr rodentium BMDM agus RNAseq

Rinneadh cultúir creimire F. a chainníochtú le OD 600nm (ag baint úsáide as 1 OD 600nm=1 x 10^8 cealla/mL), nite 2x i PBS steiriúla, agus comhshaothraithe le 1 x 106 cill/mL BMDM difreáilte go hiomlán ag an. MOI de 10 i 6-plátaí saothraithe tobair fíocháin. Tar éis 24 uair an chloig de chomhchultúr, bailíodh agus stóráladh meáin ag -20 C go dtí go n-úsáidfí a thuilleadh iad. Nigh BMDManna le PBS fuar, steiriúla, 2x. Cuireadh imoibrí cobhsaithe RNA Qiazol (Qiagen cat # 79306) go díreach le gach tobar ansin. Scríobadh toibreacha le scraper cille a bailíodh i 1.5 feadáin Eppendorf agus reoite ag -20 céim go dtí gur baineadh RNA amach. Rinneadh eastóscadh RNA ag baint úsáide as trealamh mionprep RNA Direct-zol (Zymo Research cat # R2070) de réir threoracha an déantóra agus d'ullmhaigh croíshaoráid Ghéanómaíocht Ard-thréchur Institiúid Ailse Huntsman leabharlanna seicheamhaithe. Rinneadh hibridiú ar RNA iomlán ar dtús le trealamh ídithe rRNA NEBNext v2 (NEB, cat#E7400) chun rRNA a laghdú ó na samplaí. Ullmhaíodh leabharlanna seicheamhaithe RNA snáithithe ag baint úsáide as Kit Prep Library RNA Treorach Ultra II NEBNext for Illumina (NEB, cat# E7760L). Cáilíodh leabharlanna íonaithe ar TapeStation Agilent Technologies 4150 ag baint úsáide as measúnacht Téip Scáileáin D1000 (Agilent, cat# 5067-5582 agus 5067-5583). Sainmhíníodh mólartacht na móilíní oiriúnaitheora ag PCR cainníochtúil ag baint úsáide as Kit Quant Leabharlann Kapa Biosystems Kapa (Roche, cat # 07960140001). Rinneadh leabharlanna aonair a normalú go 5 nM mar ullmhúchán d'anailís seicheamh Illumina agus rinneadh iad a sheicheamhú ar NovaSeq 6000 le rith seicheamhaithe timthriallta 150-deireadh péireáilte.

Anailís cytokine

Rinneadh BMDM a leithlisiú agus a fhás mar a thuairiscítear roimhe seo. Plátáladh BMDManna lán-dhifreáilte ag 1 x 105 cill/tobar i 12-plátaí saothraithe fíocháin toibreacha. Spreagadh BMDManna le 100ng/mL LPS; 1 ug/mL Pam3Cysk; nó bratach 1ug/mL. Spreagadh cealla ar feadh 24 uair, bailíodh meáin agus sábháladh iad ag -20 C le haghaidh anailíse. Rinneadh anailís ar cítocíní le Painéal Athlasadh Luiche LEGENDplex™ (13-plex) (Biolegend, cat# 740150). Rinneadh anailís ar shonraí ag baint úsáide as bogearraí anailíse sonraí LEGENDplex™.

16s seicheamh géine rRNA

Bailíodh millíní fecal nó inneachar ileal ó lucha aonair agus reoitear iad láithreach ag {{0}} céim i bhfeadáin caipín scriú 2mL ina raibh 250 mg de choirníní gairnéad 0.15 mm (MoBio, cat# {{5 }}). Baineadh DNA ag baint úsáide as an Kit Leithlisiú DNA Power Fecal (MoBio nó QIAGEN), de réir treoracha an trealamh, agus chuimsigh sé 2 thimthriall de 1 nóiméad de bhuille coirníní ag 4 céim ar Mini-Bead-Beater 16 (Táirgí BioSpec). Méadaíodh na réigiúin V3 agus V4 den ghéin rRNA 16S le babhta amháin PCR ag baint úsáide as primers a chuimsigh (cur síos 3' go 5') seicheamh spriocdhírithe géine rRNA réigiún V3/4 réigiún 16S, 2-eochaircheap núicléitíd ina dhiaidh de réir na seichimh primer Illumina, seicheamh innéacs nucleotide 8- agus an seicheamh cuibheora Illumina atá fágtha. Tógadh na seichimh spriocdhírithe V3/4 16S ó Takahashi (Takahashi et al., 2014), agus tógadh na hInnéacsanna ó Kozich (Kozich et al., 2013). Ba iad na seichimh iomlána oligonucleotide a úsáideadh ná (innéacsanna sainithe ag Xs): Prok16SV34_Do: AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACXXXXXXXXACACTCTTTCCCTACACGACGCTC TTCCGATCTTGCCTACGGGNBGCASCAG; Prok16SV34_Tath: CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCC GATCTGCGACTACNVGGGTATCTAATCC. Seo a leanas na coinníollacha rothaíochta PCR: dínádúrú tosaigh 98 céim ar feadh 2 nóiméad; 26 timthriall de dínádúrú 20 soicind 98 céim, 20 soicind 51.5 céim anneal, síneadh 20 soicind 72 céim; agus síneadh deiridh singil 72 céim ar feadh 2 nóiméad. Rinneadh gach PCR (a dhéantar i dtrí chóip do gach sampla) i dtoirt 25 ul ag baint úsáide as Q5 High-Fidelity 2X Master Mix (NEB, cat # M0492L), 5 pmol de gach primer agus 50 ng teimpléad DNA. Tar éis aimplithe, comhthiomsaíodh PCRanna triarach ó gach sampla, ritheadh ​​5 ul ar fhoirmiú agarose chun aimpliú a dhearbhú, agus glanadh an toirt a bhí fágtha le coirníní glanta Axygen AxyPrep MAG PCR (Corning, cat# MAG-PCR-CL{{53) }}) caolaithe go 62.5% in uisce chun aon dimer primer a bheadh ​​in ord tosaíochta a bhaint go héifeachtach. Cuireadh coirníní caolaithe leis ag toirt 1.8X de na frithghníomhartha PCR, glanta de réir threoirlínte an déantóra agus na hamplicons glanta eluted le 25 ul 10 mM Tris-Cl, pH 8.0. Rinneadh na amplicons a chainníochtú ansin le measúnacht pico green dsDNA (ThermoFisher, cat #P11495) ar léitheoir micreaphláta, agus ansin rinneadh na leabharlanna seicheamhaithe aonair glanta agus innéacsaithe a ilphléacsáil go cothrom (trí NG DNA) agus a sheicheamhú ar ionstraim Illumina MiSeq i ndeireadh péireáilte. Modh rothaíochta 300 ag saoráid acmhainne roinnte Géanómaíocht Ard-Throughput Institiúid Ailse Huntsman.

Bithfhaisnéisíocht a phróiseáil sonraí seichimh

Rinneadh amhaléamh géine 16S rRNA a dhí-ilphléacsú, rud a fhágann 0 neamhréireanna sna hinnéacsanna a próiseáladh agus a ndearnadh anailís orthu laistigh de chreat QIIME2 (Bolyen et al., 2019) mar a chuireamar síos roimhe seo (Stephens et al., 2021). Go hachomair, rinneadh seichimh dí-iolphléacsaithe agus cáilíochta-scagtha a bhearradh ar dtús de sheichimh primer agus nascóirí leis an mbreiseán Cutadapt, ansin díníodh iad le DADA2 (Callahan et al., 2016; Martin, 2011). Ansin sannadh tacsanomaíochtaí do ASVanna leis an modh classifysklearn sa bhreiseán gné-aicmitheora, i gcoinne an tacair tagartha GTDB (release89) bearrtha go dtí an réigiún aimplithe V3/4 agus cuireadh oiliúint orthu leis an modh oiriúnach-aicmitheora-naive-bayes (Bokulich et al. , 2018; Páirceanna et al., 2018; Pedregosa et al., 2011). Ríomhadh méadracht éagsúlachta, faid, agus tábhacht staitistiúil na ngrúpaí éagsúlachta béite de réir permanova laistigh de QIIME2 (Anderson, 2001).

Maidir le RNA-seq de BMDManna, bhí na léamha amh ar chaighdeán den chéad uair agus bearraíodh cuibheoirí ag baint úsáide as an iliomad Baile Átha Troim, ansin rinneadh comhaireamh tras-scríbhinní a chainníochtú trí úsáid a bhaint as Bradán i gcoinne an tras-scríbhinne ón gcomhthionól GRCm38 (mm10) (Patro et al., 2{{). 16}}17). Léadh cainníochtaí leibhéal trasscríbhinne isteach i R ag baint úsáide as an bpacáiste ama agus rinneadh achoimre ar chomhaireamh leibhéal na géine roimh anailís difreálach slonn le DESeq2 ag baint úsáide as an bhfoirmle deartha '~ Géinitíopa + Cóireáil + Géinitíopa: Cóireáil' (Love et al., 2014; Love et al., 2020). Ba ionann freagairtí difreálacha ar F. rodentium agus an difríocht idir freagairt gach géinitíopa ar chóireáil bheo F. creimire thar chealla atá faoi rialú feithicle. Sainmhíníodh géinte atá léirithe go suntasach difreálach mar iad siúd a bhfuil p-luach coigeartaithe < 0.05 agus athrú fillte log2 acu > |0.58| (1.5 huaire-athrú). Baineadh úsáid ansin as liostaí géine atá síos-rialaithe agus uas-rialaithe go suntasach chun saibhriú i dtéarmaí ontology géine (GO) a thástáil ag baint úsáide as an bpacáiste clusterProfiler lena n-áirítear an fheidhm a shimpliú chun iomarcaíocht téarma GO a laghdú agus príomhphróisis bhitheolaíocha a aithint (S, 2020; Wu et al ., 2021).

F. dúshlán rodentium DSS

F. F. creimire a fhás mar a thuairiscítear roimhe seo agus a chainníochtú go 1 x 109 CFU/mL i PBS steiriúla. Socraíodh F. creimire trí 2x a ní ar dtús i PBS steiriúla agus ansin é a athbhunú i 1mL 10% Fomalin-PBS ar feadh 10 nóiméad. Ansin nite cealla dhá uair eile i PBS steiriúla 10ml chun ullmhú le haghaidh gavage béil. Neamh-seasta a ní cosúil le cealla seasta agus a choinneáil ar oighear go dtí an gavage. WT C57BL/6 SPF bhí lucha gaged ó bhéal le 100uL de thuaslagán ina raibh ceachtar PBS amháin (feithicil), F. rodentium (beo), nó F. rodentium (seasta) ó laethanta -3 go dtí 10. Tugadh ainmhithe 3.0%. DSS ar laethanta 0-7; cuireadh uisce úr DSS in ionad gach lá eile. forchuireadh teorainneacha déine is mó ná 20% meáchain caillteanas mar thairseach déine. Ag críochphointí turgnamhacha, baineadh MLNanna agus idirstad. Tomhaiseadh an idirstad ón cecum go dtí an rectum chun an fad a chinneadh. Próiseáladh fíocháin ansin le haghaidh histeolaíocht, eastóscadh RNA, nó anailís chitiméadrach sreafa.

Measúnacht phagocytosis

Rinneadh macrophages peritoneal a leithlisiú trí 5ml de PBS Sterile a instealladh isteach sa chuas peritoneal. Bhí PBS corraithe go réidh agus é sa chuas gach cúpla soicind. Tar éis 2 nóiméad, tarraingíodh siar an PBS ag baint úsáide as snáthaid 28 tomhsaire agus dáileadh é isteach i DMEM iomlán fuar. Rinneadh cealla a sníomh ag 367 xg agus nite i meán iomlán. Rinneadh cealla ansin a chomhaireamh le haemocytometer agus plátáilte isteach 12-plátaí saothraithe fíocháin tobair ag tiúchan 2.5 x 105 cill/mL. Bhí cead ag cealla cloí thar oíche. An lá dár gcionn, rinneadh na toibreacha a mheascadh go réidh le guairneáil agus rinneadh asú ar na meáin. Ansin nite cealla greamaitheacha faoi dhó le 500uL fuar, steiriúla, PBS. Ansin cuireadh DMEM iomlán réamhthéite ina raibh F. rodentium ag MOI de 10 le greamachán (macrophages). Ansin rinneadh plátaí a sníomh go réidh ag 200 xg, ag teocht an tseomra ar feadh trí nóiméad agus ansin iad a ghoradh faoi choinníollacha gnáthshaothraithe cille (37 C, 5% CO2) ar feadh 90 nóiméad. Ullmhaíodh F. rodentium mar a thuairiscítear le haghaidh comhchultúr BMDManna le haghaidh seicheamhú RNA amháin, tar éis níocháin, athshuíodh cealla i glas 1x Sybr® (Sigma-Aldrich CAS: 163795-75-3), ag RT ar feadh 20 nóiméad. Ansin rinneadh na cealla baictéaracha a mhilleadh ag 4000 rpm ar feadh 5 nóiméad a athbhunú le DMEM iomlán agus réamh-théamh le haghaidh macrophages peritoneal. Tar éis 90 min de chomhchultúr, bhí na meáin asúite, agus nite cealla faoi dhó le fuar, steiriúla, PBS. Socraíodh cealla greamaitheacha ina raibh Sybr® creimire F. dhaite glas le 2% paraformaildéad (PFA) ar feadh 10 nóiméad. Rinneadh PFA a asú agus cuireadh PBS steiriúla ar chealla. Rinneadh íomhánna de chealla ansin le haghaidh fagaicíotóis F. rodentium

Anailís Íomhá Macrophage

Tógadh íomhánna Brightfield agus fluaraiseacht de chultúir macrophage cóireáilte F. rodentium ag baint úsáide as Córas Íomháithe EVOS m7000 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Tógadh trí nó cúig íomhá randamach ar leith do gach cultúr, a rinneadh i dtrí chóip.

Images were blinded and quantified using the software Fiji (Schindelin et al., 2012). Individual bacteria and macrophages were easily distinguished based on size. The total number of bacteria that were associated with (touching or overlapping with) single macrophages was quantified for a randomized subset of cells within the image. Equal numbers of cells were quantified between genotypes (n>200).

CLEC12A-Fc tógáil próitéin comhleá and purificatiar

Méadaíodh na cDNAanna a ionchódaíonn na fearainn eischeallacha de luch Clec12a ag PCR ó chealla fola bána scoite ó smeara C57Bl/6 WT SPF agus deimhníodh iad trí sheicheamhú. Comhleádh na cDNAanna le foirceann C IgG daonna1-Fc sa slonn veicteoir pFuse-hIgG1- Fc2 (InvivoGen). Aistríodh tógálacha ina raibh Clec12a nó veicteoir folamh isteach i gcealla Lx293 arna saothrú le DMEM +10% FBS agus Peann/strep (1mg/mL). Baineadh próitéiní comhleá rúnda ó na meáin 24-48 tar éis aistrithe. Rinneadh na meáin chumarsáide a sníomh ag 367 xg ar feadh 5 nóiméad chun smionagar/cealla marbha a bhaint, agus reoitear an comhshnámh ag -20 C go dtí go n-úsáidfí é. Rinneadh próitéiní comhleá Clec12a-Fc nó Fc-amháin a aonrú le Pierce™ Classic Maighnéadach IP/Co-IP Kit (Thermo Fisher Scientific, Uimhir Chatalóige: 88804), cainníochtaithe le Pierce™ BCA Próitéin Measúnacht Kit (Uimhir Chatalóg Eolaíoch Thermo Fisher: 23227) agus deimhnithe ag blot an iarthair ag baint úsáide as antasubstaint antiClec12a (Novus Biologicals NBP2-27346SS).

Clec12a-Fc-measúnacht cheangailteach

Caolaíodh tógálacha íonaithe go 0.4 mg/mL in HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+. Fásadh baictéir ina gcoinníollacha meán agus aeróbach faoi seach agus normalaíodh iad ag OD 600nm. Níodh baictéir le HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+ agus bacadh iad le HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+ +10% FBS ar feadh 20 nóiméad ag RT. Rinneadh na nósanna imeachta staining go léir faoi choinníollacha atmaisféaracha. Cuireadh 1 x 107 ceall baictéar i bpláta tobair 96-bun cruinn, sníofa ag 3,000 xg, agus scinceáil iad. Cuireadh 50uL de thógálacha ar chealla baictéir, measctha go réidh, agus gor iad ag 4 C ar feadh 1 uair an chloig. Níodh cealla baictéir le HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+ + 10% FBS, 2x. Cuireadh 50uL de gabhar frith-dhaonna Fc (PE) (Catalóg ebioscience # 12-4998-82) le cealla agus gor ag 4 C ar feadh 1 uair an chloig, sa dorchadas. Ansin nitear cealla mar a rinneadh cheana agus cuireadh iad in HBSS w/ Ca2+ agus Mg2+ ina raibh 1x Sybr® green (Sigma-Aldrich CAS: 163795-75-3). Goradh cealla ag RT ar feadh 20 nóiméad sa dorchadas agus léigh siad láithreach ar chitoiméadar sreafa BD LSR Fortessa.

Ionradaíocht agus athdhéanamh smeara

Baineadh smeara ó ainmhithe WT agus Clec12a-/- mar a thuairiscítear roimhe seo. Rinneadh lucha faighteora a ionradú go marfach le 500 Rads ar an lá -1, agus 400 Rad ar an lá 0 ina dhiaidh sin. Ceithre huaire tar éis an ionradaíochta deiridh, cuireadh lucha faighteora faoi ainéistéitic isoflurane, agus 100uL de scoite Seachadadh cealla smeara ar crochadh i PBS steiriúla (1 x 108 cill/mL) trí shnáthaid tomhsaire 28.5 chuig an spás aisfhithise. Bhí suim againn sa mhicribhiota mar sin níor cuireadh ainmhithe ar antaibheathaigh, agus tar éis 8 seachtaine bailíodh millíní fecal le haghaidh aistriú micreabhiota isteach in ainmhithe GF.

TAGAIRTÍ

Anderson, MJ (2001). Modh nua chun anailís ilathraitheach neamh-pharaiméadrach ar athraithis. Éicil na hAstráile. 26, 32-46. DOI 10.1111/j.1442-9993.2001.01070.pp.x.

Thosaigh, J., Lassen, KG, Jijon, HB, Baxt, LA, Goel, G., Heath, RJ, Ng, A., Tam, JM, Kuo, SY, Villablanca, EJ, et al. (2015). Géanóm chomhtháite athraitheach riosca galar Crohn

aithníonn sé ról do CLEC12A in uathphagaíocht antibacterial. Cill Ionadaí 11, 1905-1918. 10.1016/j.celrep.2015.05.045.

Blander, JM, Longman, RS, Iliev, ID, Sonnenberg, GF, agus Artis, D. (2017). Athlasadh a rialáil trí idirghníomhaíochtaí micreabhiota leis an ósta. Nat. Imdhíonól. 18, 851-860. 10.1038/ní.3780.

Bokulich, NA, Kaehler, BD, Rideout, JR, Dillon, M., Bolyen, E., Knight, R., Huttley, GA, agus Caporaso, JG (2018). Aicmiú tacsanomaíoch de sheichimh aimplicain géine marcóra a bharrfheabhsú leis an mbreiseán aicmitheora gné-gné QIIME 2 ''. Micribhithóim 6. ARTN 90 10.1186/s40168-018-0470-z.

Bolyen, E., Rideout, JR, Dillon, MR, Bokulich, N., Abnet, CC, Al-Ghalith, GA, Alexander, H., Alm, EJ, Arumugam, M., Asnicar, F., et al. (2019). Eolaíocht sonraí micribhithóim in-atáirgthe, idirghníomhach, inscálaithe agus insínte ag baint úsáide as QIIME 2. Nat. Biteicneolaíocht. 37, 852-857. 10.1038/s41587-019-0209-9.

Brown, GD, Willment, JA, agus Whitehead, L. (2018). lectins de chineál C i díolúine agus hoiméastáis. Nat. Ath. Immunol. 18, 374-389. 10.1038/s41577-018-0004-8.

Browne, HP, Forster, SC, Anonye, ​​BO, Kumar, N., Neville, BA, Stares, MD, Goulding, D., agus Lawley, TD (2016). Nuair a shaothraítear micribiota daonna 'neamhchultúrtha', léirítear tacsaithe nua agus spóiriú forleathan. Dúlra 533, 543-+. 10.1038/cineál17645.

Cadwell, K., Liu, JY, Brown, SL, Miyoshi, H., Loh, J., Lennerz, JK, Kishi, C., Kc, W., Carrero, JA, Hunt, S., et al. (2008). Ról lárnach don autophagy agus an ghéin autophagy Atg16l1 i lucha agus cealla Paneth intestinal daonna. Dúlra 456, 259-263. 10.1038/cineál07416.

Callahan, BJ, McMurdie, PJ, Rosen, MJ, Han, AW, Johnson, AJA, agus Holmes, SP (2016). DADA2: Tátal samplach ardtaifigh ó shonraí aimplicon Illumina. Nat. Modhanna 13, 581-+. 10.1038/Nmeth.3869.

Cao, YG, Bae, S., Villarreal, J., Moy, M., Chun, E., Michaud, M., Lang, JK, Glickman, JN, Lobel, L., agus Garrett, WS (2022). Déanann Faecalibaculum creimire athmhúnlú ar chomharthaíocht aigéid retinoic chun hoiméastáis epithelial intestinal atá ag brath ar eosinophil a rialú. Óstach cille & miocrób 30, 1295- 1310 e1298. 10.1016/j.chom.2022.07.015.

Chang, DH, Rhee, MS, Ahn, S., Bang, BH, Ó, JE, Lee, HK, agus Kim, BC (2015). Faecalibaculum rodentium gen. nov., sp. nov., scoite amach ó na feces de luch saotharlainne. Antonie Van Leeuwenhoek 108, 1309-1318. 10.1007/s10482-015-0583-3.

Chiaro, TR, Soto, R., Stephens, WZ, Kubinak, JL, Petersen, C., Gogokhia, L., Bell, R., Delgado, JC, Cox, J., Voth, W., et al. (2017). Déanann ball den mycobiota gut meitibileacht íonachta óstaigh a mhodhnú, rud a mhéadaíonn colitis i lucha. Sci. Aistrigh. Med. 9, .

Drouin, M., Saenz, J., agus Chiffoleau, E. (2020). Gabhdóirí cosúil le lectin de Chineál C: Ceann nó eireaball i díolúine bás cille. Tosaigh. Imdhíonól. 11. ARTN 251 10.3389/fimmu.2020.00251.

Fassarella, M., Blaak, EE, Penders, J., Nauta, A., Smidt, H., agus Zoetendal, EG (2021). Cobhsaíocht agus athléimneacht micribhithóim gut: an fhreagairt ar shuaitheadh ​​a shoiléiriú chun sláinte putóige a mhodhnú. Guta 70, 595-605. 10.1136/gutjnl-2020-321747.

Gkouskou, KK, Deligianni, C., Tsatsanis, C., agus Eliopoulos, AG (2014). An gut microbiota i múnlaí luch de ghalar putóige athlastach. Teorainneacha i Micribhitheolaíocht Cheallach agus Ionfhabhtaithe 4. ARTN 28 10.3389/fcimb.2014.00028.

Han, YM, Zhang, MH, Li, N., Chen, TY, Zhang, Y., Wan, T., agus Cao, XT (2004). Cuireann KLRL1, gabhdóir leictin cosúil le cille marfach úrnua, cosc ​​ar chiteatocsaineacht cille marfach nádúrtha. Fuil 104, 2858-2866. DOI 10.1182/fola-2004-03-0878.

Iliev, ID, Funari, VA, Taylor, KD, Nguyen, Q., Reyes, CN, Strom, SP, Brown, J., Becker, CA, Fleshner, PR, Dubinsky, M., et al. (2012). Bíonn tionchar ag idirghníomhaíochtaí idir fungais comónta agus an receptor lectin de chineál C Dectin-1 ar cholitis. Eolaíocht 336, 1314-1317. 10.1126/eolaíocht.1221789.

Jason L. Kubinak, WZS, Ray Soto, Charisse Petersen, Tyson Chiaro, Lasha Gogokhia, Rickesha Bel1, Nadim J. Ajami, Joseph F. Petrosino, Linda Morrison4, Wayne K. Potts, Peter E. Jensen, Ryan M. O' Connell & June L. Babhta (2015). Dealbhaíonn éagsúlacht MHC pobail mhiocróbacha aonair a rialaíonn so-ghabhálacht i leith ionfhabhtú eintreach. Cumarsáid Dúlra. 0.1038/ncomms9642.

Kono, H., Chen, CJ, Ontiveros, F., agus Rock, KL (2010). Cuireann aigéad uric freagairt ghéar athlastach chun cinn ar bhás cealla steiriúla i lucha. J. Clin. Infheistiú. 120, 1939-1949. 10.1172/Jci40124.

Kozich, JJ, Westcott, SL, Baxter, NT, Highlander, SK, agus Schloss, PD (2013). Forbairt ar Phíblíne um Dhé-Innéacs Seicheamhaithe agus Coimeádta chun Anailís a dhéanamh ar Shonraí Seichimh Amplicon ar Ardán Seicheamhaithe MiSeq Illumina. Micribhitheolaíocht Fheidhmeach agus Chomhshaoil ​​79, 5112-5120. 10.1128/Aem.01043-13.

Kubinak, JL, Petersen, C., Stephens, WZ, Soto, R., Bake, E., O'Connell, RM, agus Round, JL (2015). Treoraíonn comharthaíocht MyD88 i gcealla T rialú IgA-idirghabhála ar an micribiota chun sláinte a chur chun cinn. Miocrób Óstach Cill 17, 153-163. 10.1016/j.chom.2014.12.009.

Li, K., Neumann, K., Duhan, V., Namineni, S., Hansen, AL, Wartewig, T., Kurgyis, Z., Holm, CK, Heikenwalder, M., Lang, KS, agus Ruland, J. (2019). Cuireann an glacadóir criostail aigéad uric Clec12A le freagairtí interferon de chineál I. Proc Natl Acad Sci USA 116, 18544-18549. 10.1073/GNF. 1821351116.

Liu, JZ, van Sommeren, S., Huang, H., Ng, SC, Alberts, R., Takahashi, A., Ripke, S., Lee, JC, Jostins, L., Shah, T., et al . (2015). Aithníonn anailísí comhlachais 38 ionad so-ghabhálachta do ghalar putóige athlastach agus leagann siad béim ar riosca géiniteach roinnte ar fud na ndaonraí. Nat. Géinte. 47, 979-986. 10.1038/ng.3359.

Love, MI, Huber, W., agus Anders, S. (2014). Meastachán measartha ar athrú fillte agus scaipthe do shonraí RNA-seq le DESeq2. Géanóim Biol. 15. ARTN 550 10.1186/s13059-014-0550-8.

Love, MI, Soneson, C., Hickey, PF, Johnson, LK, Pierce, NT, Shepherd, L., Morgan, M., agus Patro, R. (2020). Tximeta: Seiceálacha seichimh thagartha chun bunáitíocht a shainaithint in RNA-seq. Bitheolaíocht Ríomhaireachtúil Plos 16. ARTN e1007664 10.1371/journal.pcbi.1007664.

Luo, Y., Tucker, SC, agus Casadevall, A. (2005). Spreagann gníomhachtú receptor Fc- agus comhlánú dul chun cinn timthriall cille cealla macrophage ó G1 go SJ Immunol. 174, 7226- 7233. 10.4049/174.11.7226.

Macpherson, AJ, Gatto, D., Sainsbury, E., Harriman, GR, Hengartner, H., agus Zinkernagel, RM (2000). Meicníocht primitive T-neamhspleách ar chealla T de fhreagraí IgA mucosal stéigeach ar bhaictéir chomhtheagmhálacha. Eolaíocht 288, 2222-+. DOI 10.1126/eolaíocht.288.5474.2222.

Maglinao, M., Eriksson, M., Schlegel, MK, Zimmermann, S., Johannssen, T., Gotze, S., Seeberger, PH, agus Lepenies, B. (2014). Ardán chun scagadh a dhéanamh ar charbaihiodráití atá ceangailteach le gabhdóirí lectin C-cineál agus a n-acmhainneacht le haghaidh spriocdhíriú cille-shonrach agus modhnú imdhíonachta. Dialann Eisiúna Rialaithe 175, 36-42. 10.1016/j.jconrel.2013.12.011.

Marshall, ASJ, Willment, JA, Lín, HH, Williams, DL, Gordon, S., agus Brown, GD (2004). Sainaithint agus tréithriú gabhdóir nua-choisctheach Myeloid daonna c-cineál lectin (MICL) a chuirtear in iúl go príomha ar granulocytes agus monocytes. J. Biol. Ceimic. 279, 14792-14802. 10.1074/jbc.M313127200.

Máirtín, M. (2011). Léann Cutadapt Seichimh Cuibheoirí As Seichimh Ard-Thráchchur. EMBNet.journal 17. Martinez-Lopez, M., Iborra, S., Conde-Garrosa, R., Mastrangelo, A., Danne, C., Mann, ER, Reid, DM, Gaboriau-Routhiau, V., Chaparro , M., Lorenzo, MP, et al. (2019). Rialaíonn Braiteadh Micribhithóta le hAis Mincle-Syk i gCealla Dendritic Táirgeadh Interleukin-17 agus -22 agus Cothaíonn sé Sláine Bhacainní Stéig. Díolúine 50, 446-461 e449. 10.1016/j.immuni.2018.12.020.

Martinon, F., Petrilli, V., Méara, A., Tardivel, A., agus Tschopp, J. (2006). Gníomhaíonn criostail aigéad uric a bhaineann le gout an inflammasome NALP3. Dúlra 440, 237-241. 10.1038/cineál04516.

Nakajima, A., Vogelzang, A., Maruya, M., Miyajima, M., Murata, M., Son, A., Kuwahara, T., Tsuruyama, T., Yamada, S., Matsuura, M., et al. (2018). Rialaíonn IgA comhdhéanamh agus feidhm meitibileach na micribiota gut trí symbiosis idir baictéir a chur chun cinn. J. Cait. Med. 215, 2019-2034. 10.1084/nm.20180427.

Neumann, K., Castineiras-Vilarino, M., Hockendorf, U., Hannesschlager, N., Lemeer, S., Kupka, D., Meyermann, S., Lech, M., Anders, HJ, Kuster, B. , et al. (2014). Is receptor coisctheach é Clec12a do chriostail aigéad uric a rialaíonn athlasadh mar fhreagra ar bhás cille. Díolúine 40, 389-399. 10.1016/j.immuni.2013.12.015.

Okai, S., Usui, F., Yokota, S., Hori, IY, Hasegawa, M., Nakamura, T., Kurosawa, M., Okada, S., Yamamoto, K., Nishiyama, E., et al. (2016). Rialaíonn IgA monaclónach ard-chleamhnas microbiota gut agus cuireann sé cosc ​​​​ar colitis i lucha. Micribhitheolaíocht Nat 1, 16103. 10.1038/nmicrobiol.2016.103.

Pabst, O., agus Slack, E. (2020). IgA agus an microbiota intestinal: an tábhacht a bhaineann le bheith sainiúil. Imdhíonól Mucosal. 13, 12-21. 10.1038/s41385-019-0227-4.

Páirceanna, DH, Chuvochina, M., Waite, DW, Rinke, C., Skarshewski, A., Chaumeil, PA, agus Hugenholtz, P. (2018). Déanann tacsanomaíocht chaighdeánaithe bhaictéarach atá bunaithe ar ghéanóim phylogeny crann na beatha a athbhreithniú go substaintiúil. Nat. Biteicneolaíocht. 36, 996-+. 10.1038/nbt.4229.

Patro, R., Duggal, G., Love, MI, Irizarry, RA, agus Kingsford, C. (2017). Soláthraíonn bradán cainníochtú tapa agus feasach ar shloinneadh tras-scríofa. Nat. Modhanna 14, 417-+. 10.1038/nmeth.4197.

Pedregosa, F., Varoquaux, G., Gramfort, A., Michel, V., Thirion, B., Grisel, O., Blondel, M., Prettenhofer, P., Weiss, R., Dubourg, V., et al. (2011). Scikit-learn: Meaisín Foghlaim i Python. J Mach Foghlaim Maidir le 12, 2825-2830.

Pyz, E., Huysamen, C., Marshall, AS, Gordon, S., Taylor, PR, agus Brown, GD (2008). Tréithriú MICL murine (CLEC12A) agus fianaise ar ligand ingenous. Eur. J. Imdhíon. 38, 1157-1163. 10.1002/dheis.200738057.

Raulf, MK, Johannssen, T., Matthiesen, S., Neumann, K., Hachenberg, S., Mayer-Lambertz, S., Steinbeis, F., Hegermann, J., Seeberger, PH, Baumgartner, W., et al. (2019). Aithníonn an receptor lectin C-cineál CLEC12A hemozoin plasmodial agus cuireann sé le forbairt maláire cheirbreach. Cill Ionadaí 28, 30-38 e35. 10.1016/J.celrep.2019.06.015.

Ray, A., agus Dittel, BN (2015). Idirghaolmhaireacht idir dysbiosis i miocróib an gut mar gheall ar easpa imdhíonachta agus penetrance galair colitis. Imdhíoneolaíocht 146, 359-368. 10.1111/imm.12511.

Redelinghuys, P., Whitehead, L., Augello, A., Drummond, RA, Levesque, JM, Vautier, S., Reid, DM, Kerscher, B., Taylor, JA, Nigrovic, PA, et al. (2016). Rialaíonn MICL athlasadh in airtríteas réamatóideach. Ann. Rheum. Dis. 75, 1386-1391. 10.1136/annrheumdis-2014-206644.