Éifeachtaí Tráthúcháin Nephrectomy Contralateral agus Coinníollacha Isceimiceacha ar Fhiobróis Duán Tar éis Díobhála Aontaobhach Ischemia Duán
Oct 27, 2023
Réamhrá
An mhinicíochtgortú duáin géarmhíochaine(AKI) méadú mór ar fud an domhain le blianta beaga anuas [1]. Is féidir le AKI a bheith ina chúis le trasphlandú orgáin, postoperative faoi perfusion, fuiliú, díhiodráitiú, turraing agus sepsis i gcleachtas cliniciúil [2]. Léiríodh i staidéir eipidéimeolaíocha agus turgnamhacha le déanaí go bhfuil dlúthbhaint idir déine, minicíocht agus fad AKI leis an minicíocht ina dhiaidh sin.galar duáin ainsealach(CKD). Is féidir le fiobróis duán tar éis AKI a bheith mar thoradh ar CKD nó fiúgalar duáin deiridh(ESKD) [3–5], rud a thugann le tuiscint gur siondróim nasctha iad AKI agus CKD [6]. Mar sin féin, tá na meicníochtaí is bun leis an aistriú ó AKI go CKD anaithnid in ainneoin go leor staidéar turgnamhach agus cliniciúil. Is uirlisí tábhachtacha iad samhlacha ainmhithe chun imscrúdú a dhéanamh ar na meicníochtaí trína n-eascraíonn AKI CKD. Tá gortú ischemia-reperfusion duán (IRI) ar cheann de na príomhchúiseanna le AKI, agus forbraíodh roinnt samhlacha ainmhithe de AKI spreagtha ag IRI [7], lena n-áirítear an tsamhail déthaobhach IRI (bIRI), an tsamhail IRI aontaobhach le duáin slán contralateral. , an tsamhail uIRI le nephrectomy contralateral comhuaineach, agus an tsamhail uIRI le nephrectomy contralateral moill.
Níl an tsamhail bIRI chomh comhsheasmhach mar nuair a bhíonn díobháil ischemic an dá duáin ró-éadrom, níl aon athruithe fibrotic suntasacha san fhadtéarma. Nuair a bhíonn AKI ró-dhian, féadfaidh lucha bás sa chéim ghéarghortaithe. Ina theannta sin, d'fhéadfadh difríochtaí suntasacha a bheith mar thoradh ar dhifríochtaí beaga i gortú an dá duáin ina bpaiteolaíocht duánach ainsealach tar éis cúpla seachtain [8,9]. Tá an tsamhail uIRI le nephrotomy contralateral comhuaineach cosúil leis an tsamhail BIRI toisc nach bhfuil ach an duáin gortaithe fós mar gheall ar nephrectomy an taobh eile [10]. I múnla IRI le duán contralateral slán, tá fiobróis an duáin ischemic dian [11,12]. Tá an tsamhail seo an-chomhsheasmhach agus iontaofa le haghaidh breathnóireachta fadtéarmach ag taighdeoirí. Mar sin féin, mar gheall ar láithreacht duán conarthach gan damáiste, ní féidir é a úsáid chun ráta scagacháin glomerular measta (eGFR), creatinine serum (SCr), agus nítrigin úiré fola (BUN) [11-14] a mheas. I gcomparáid leis an dá shamhail uIRI atá luaite thuas, sáraíonn an tsamhail uIRI le nephrectomy contralateral mhoill na fadhbanna seo agus is féidir é a úsáid le haghaidh breathnuithe fadtéarmacha tar éis AKI agus monatóireacht ar fheidhm na nduán. Dá bhrí sin, tá an tsamhail seo oiriúnach chun staidéar a dhéanamh ar aistriú AKI-CKD [15].
Cliceáil ANSEO CHUN Sliocht CISTANCHE A FHÁIL DODíobháil GÉAR-duáin
Mar sin féin, d’fhéadfadh go mbeadh tionchar suntasach ag coinníollacha éagsúla ischemic agus an t-eatramh idir nephrectomy contralateral agus uIRI ar dhul chun cinn agus ar dhéine CKD tar éis AKI. Dhírigh staidéir roimhe seo ar éifeacht na tréimhse ischemic ar fiobróis duánach iar-AKI agus níor tugadh mórán airde ar chroítheocht an choirp le linn ischemia. Mar shampla, Skrypnyk et al. [12] rialú an teocht ischemic ag 38 C ag córas folctha uisce, le fad ischemic de 30 nóiméad, agus baineadh an duáin slán contralateral 8 lá tar éis uIRI. Léirigh an toradh go raibh athruithe suntasacha fibrotic ag an duáin ischemic 28 lá tar éis uIRI. Leis an ré ischemic céanna, Xiao et al. Léirigh [8] gur tharla athruithe suntasacha fibrotic 11 lá tar éis uIRI nuair a rialaíodh an teocht ischemic ag 37 C 38 C agus ba é an t-eatramh ama idir uIRI agus nephrectomy contralateral 10 lá. Roinnt taighdeoirí, mar shampla Colombaro et al. [14] agus Li et al. [16] níor luaigh [16] an teocht ischemic ina gcuid staidéir.
Idir an dá linn, is beag duine a rinne taighde ar éifeacht an eatraimh ama idir nephrectomy contralateral agus uIRI sa mhúnla seo, rud a d'fhág go raibh torthaí an-éagsúil i measc saotharlanna éagsúla, rud a chuir isteach go mór ar thurgnaimh ina dhiaidh sin freisin. Sa staidéar seo, rinneamar imscrúdú ar éifeachtaí na bpríomhfhachtóirí a théann i bhfeidhm ar fhiobróis duánach tar éis AKI, lena n-áirítear an t-eatramh ama idir nephrectomy contralateral agus uIRI, croítheocht an choirp le linn ischemia, agus fad an ischemic. Bhí sé mar aidhm againn tagairt a sholáthar chun samhail ainmhithe cuí a dhéanamh chun staidéar a dhéanamh ar an trasdul AKI CKD
Ábhair agus modhanna Samhlacha ainmhithe
Cuireadh rochtain saor in aisce ar bhia agus uisce ar fáil do lucha fireann C57BL/6J (8-10 seachtaine d’aois, thart ar 22 g de mheáchan; GemPharmatech Co., Ltd., Nanjing, an tSín) ar bhia agus uisce in Ionad Turgnaimh Ainmhithe Ollscoil Leighis Shanxi. Ba iad seo a leanas na coinníollacha pórúcháin: taise 40-70%, teocht 23 C, rang glaineachta aeir 7, timthriall éadrom / dorcha rialaithe faoi choinníollacha saor ó phataigin, ionradaíocht beathaithe Co60, agus uisce íonaithe. D'fhormheas Coiste Eitice Ainmhithe an Dara Ospidéal de chuid Ollscoil Leighis Shanxi na nósanna imeachta go léir don staidéar seo (uimhir eitice: DW2022028).
Prótacail
Ag cur san áireamh go bhféadfadh tionchar a bheith ag tréimhsí ischemic, teocht an choirp lárnach le linn ischemia, agus amanna athghearrtha na duán neamhghortaithe contrathaobhach ar dhéine AKI agus fiobróis duánach ina dhiaidh sin, rinneamar imscrúdú ar éifeachtaí na dtrí fhachtóir thuas ina n-aonar, agus an dá cheann eile socraithe. Rinneadh trí thurgnamh mar seo a leanas.
Prótacal 1: Chun éifeacht an eatraimh idir nephrectomy contralateral agus uIRI ar fheidhm na duáin agus fiobróis iar-AKI a urramú, socraíodh am ischemic an duáin chlé ag 24 min agus socraíodh teocht an choirp lárnach ag 37 C le linn na duáin. ischemia idir an dá linn. Rinneadh an resection duáin ceart ar lá 7, lá 10, agus lá 14, faoi seach (n ¼ 8 in aghaidh an ghrúpa) tar éis an IRI duáin chlé. Chinneamar fad an ischemia agus resection duáin bunaithe ar thorthaí staidéir roimhe seo [8,10,12,15] agus ar ár dtorthaí réamh-turgnamhach. Féach Fíor 1(A–C) don phrótacal staidéir.
Prótacal 2: Chun éifeacht teocht an choirp lárnach le linn ischemia ar an trasdul AKI-CKD a urramú, socraíodh am ischemic an duáin chlé ag 24 min, agus baineadh an duán ceart 14 lá tar éis an IRI duáin chlé. Rinneadh rialú ar theocht an chomhlachta croí ag 36 C, 36.5 C, 37 C, 37.5 C, agus 38 C, faoi seach (n ¼ 8 in aghaidh an ghrúpa). Féach Fíor 1(D) don phrótacal staidéir.
Prótacal 3: Chun éifeacht tréimhsí ischemic duán ar an aistriú ó AKI go CKD a urramú, socraíodh teocht an choirp lárnach ag 37 C le linn ischemia, agus baineadh an duán ceart 14 lá tar éis an IRI duáin chlé. Roghnaigh muid an pointe ama seo toisc go raibh fiobróis duánach, arbh é an t-athrú tipiciúil tar éis AKI go CKD, an-soiléir de réir na dtuarascálacha [8,10,12,15] agus ár dtorthaí réamhthrialacha. Rinneadh am ischemic an duáin chlé a rialú ag 21 min, 24 min, 27 min agus 30 min, faoi seach (n ¼ 8 in aghaidh an ghrúpa). Féach Fíor 1(E) don phrótacal staidéir.
Eotanaíodh gach lucha ag 8 seachtaine tar éis IRI na duán clé. Stóráladh cuid den fhíochán duáin chlé ag 70 C le haghaidh anailíse RT-PCR agus blot an iarthair, agus socraíodh an chuid eile i formalin neodrach le haghaidh anailíse histeapaiteolaíochta. Bailíodh samplaí fola tríd an sinus aisfhithiseach le haghaidh tástála bithcheimiceach.
Fíor 1. Prótacail na díobhála ischemia-reperfusion aontaobhach (uIRI) le nephrectomy contralateral moill. (A–C): Cuireadh an duán clé faoi IRI ar an lá 0, agus rinneadh resection duánach ar dheis ag pointí ama éagsúla (lá 7, lá 10, agus lá14) leis an ré ischemic seasta ag 24 min agus an croí-teocht an choirp socraithe ag 37 C le linn ischemia duáin. (D): Cuireadh an duán clé faoi réir IRI ar an lá 0, agus rinneadh resection duánach ar dheis faoi chroítheocht an choirp (36 C, 36.5 C, 37 C, 37.5 C, agus 38 C) leis an ischemic. am an duáin chlé socraithe ag 24 min, agus baineadh an duáin ceart 14 lá tar éis an duáin chlé IRI. (E): Bhí an duán clé faoi réir IRI ar an lá 0, agus rinneadh resection duánach ar dheis ag tréimhsí éagsúla ischemic (21 min, 24 min, 27 min, agus 30 min) le croítheocht an choirp socraithe ag 37 C le linn na duáin. ischemia, agus baineadh an duán ceart 14 lá tar éis an IRI duáin chlé. Rinneadh measúnú ar mheáchan na nduán, ar fheidhm na nduán, gortú histeolaíoch duánach, agus ar fhiobróis duánach go dtí an lá 56.
Nós imeachta máinliachta
Roimh an máinliacht, rinne na lucha go léir troscadh ar feadh 12 h le rochtain saor in aisce ar uisce agus cuireadh 3% sóidiam pentobarbital 50 mg/kg orthu go hinpeiritónach. Le linn ainéistéise, coinníodh an teocht rectal ag 36 C, 36.5 C, 37 C, 37.5 C, nó 38 C, faoi seach, i ngrúpaí turgnamhacha éagsúla. Chun é seo a bhaint amach, cuireadh an luch lena droim ar eochaircheap teasa (CW{{1{0}}, BARBAROUS FROWTH, Zhejiang, China) in áit agus a ceann agus a muineál sínte lena chinntiú go bhfanfadh a haerbhealach. gan bhacainn, agus clúdaíodh na súile le uige te saline chun triomú a sheachaint le linn an nós imeachta. Tar éis ainéistéise, bearraíodh an ghruaig ar chúl clé na luiche leis an bearrthóir gruaige. Ansin glanadh an craiceann sa limistéar máinliachta le swab alcóil 75%. Go ginearálta, titeann teocht an choirp ar an luch tar éis bearrtha gruaige. Rinneadh an nós imeachta máinliachta nuair a tháinig teocht an choirp lárnach seasmhach, rud a d'fhéadfadh thart ar 15 nóiméad a ghlacadh. D'fhéadfaí an duán clé a fheiceáil tríd an gcraiceann droma chlé a ghearradh 0.5 cm in aice leis an lárlíne agus 0.5 cm ar imeall íochtair cage rib na luiche. Ansin brúimid an bolg clé le lámh amháin chun an duán clé a bhaint as cuas an choirp, thógamar an duán le fórsa cuartha maol (ag tabhairt aire chun damáiste a sheachaint don duán), scoite an pedicle duán agus chlampáil sé go tapa é, agus chuir sé an clampar. duáin faoin gcraiceann chun é a choinneáil te agus tais. Bhí an ischemia rathúil tréithrithe ag athrú datha na duáin de réir a chéile ó dearg go corcra dorcha, a mhair 21 min, 24 min, 27 min agus 30 min faoi seach, i ngrúpaí turgnamhacha éagsúla. D'athraigh dath na duáin ar ais go dearg laistigh de 2-5 nóiméad tar éis an clamp a scaoileadh. Ansin dhún muid an cuas bhoilg le comhuaimeacha layered. Greasaíodh an craiceann droma ceart agus an muscle ceart ar an lá 7, an lá 10, agus an lá 14 tar éis uIRI, faoi seach, i ngrúpaí turgnamhacha éagsúla, agus rinneadh an duán ceart a resected. Ansin dún an fhoirceannadh le comhuaimeanna caighdeánach. Tar éis gach máinliachta, cuireadh 500 l saline instealladh intraperitoneally mar chúiteamh ar an gcaillteanas sreabhach le linn máinliachta. Ag an am céanna, coinníodh an luch ar eochaircheap teasa ar feadh thart ar 2-3 h go dtí go bhfuair sé lán-chomhfhios sular aistríodh é go dtí an cage tithíochta. Níor chlampáil an grúpa sham an pedicle duáin, agus bhí an chuid eile de na hoibríochtaí máinliachta mar an gcéanna le hoibríochtaí an ghrúpa uIRI. Rinne an duine céanna le níos mó ná 2 bhliain de thaithí ar oibriú an mhúnla seo na hoibríochtaí máinliachta go léir.
Measúnú feidhm duáin
Rinneadh leibhéil SCr a thomhas ag an gCiste Creatinine (Modh Jaffe, 100020170, Bith-theicneolaíocht agus Eolaíocht Biosino). Tomhaiseadh leibhéil BUN ag an Uiréach Kit (Modh Dí-hydrogenáis Úiréáis-Glutamate, Biteicneolaíocht Bithshín agus Eolaíocht).
measúnacht meáchain duáin
Tar éis urination, rinneadh meáchan coirp na lucha a thomhas de réir scála cruinneas leictreonach. Rinneadh duáin úra a shruthlú trí huaire i saline réamhfhuaraithe, ansin baineadh an iomarca uisce ar na duáin le páipéar scagtha. Scafa na capsúil duán ar an oighear agus rinneadh na duáin a mheá láithreach. Ríomhadh an cóimheas idir meáchan duán agus meáchan coirp chun meáchan ceartaithe na nduán a mheas i mg/g.
Scóráil staining hematoxylin-eosin (HE) agus gortú duáin
Díhiodráitíodh fíocháin duáin neodracha formailin-seasta go rialta, leabaíodh iad i bpaifín, rannánaíodh iad (3 lm), agus dathaíodh iad le HE chun damáiste fíocháin duáin a urramú. Gabhadh deich réimse a roghnaíodh go randamach de chortex na nduán i ngach cuid le micreascópacht éadrom ag 400 méadaithe. Scóráil beirt phaiteolaithe an díobháil do na tubules glomerulus agus duáin ar leithligh. Scóráladh an gortú feadánach ar scála {{20}}–4 ag baint úsáide as na critéir seo a leanas [17]: 0, gan aon ghortú; 1, a dhéanann difear 1-25% den limistéar duáin; 2, a dhéanann difear do 26–50% d'achar na nduán; 3, a dhéanann difear 51-75% den limistéar duáin; agus 4, a dhéanann difear do 75-100% de limistéar na nduán. Rinneadh measúnú leathchainníochtúil ar an méid díobhála tiúbacha trí réimse na díobhála tubular duánach a ríomh. Rinneadh an díobháil glomerular a mheas agus a scóráil ar scála 0-4 de réir an limistéir chéatadáin de leathnú mesangial nó scléaróis ag baint úsáide as na critéir seo a leanas [17]: 0, glomeruli gnáth; 1, 1-25% den limistéar gortaithe; 2, 26-50% den limistéar gortaithe; 3, 51-75% den limistéar gortaithe; agus 4, 76-100% den limistéar gortaithe. An scór damáiste glomeruli deiridh ¼ 0 (% grád 0 glomeruli) þ 1 (% grád 1 glomeruli) þ 2 (% grád 2 glomeruli) þ 3 (% grád 3 glomeruli) þ 4 (% grád 4 glomeruli). Scóráladh níos mó ná 50 glomeruli in aghaidh na luiche.
staining trichrome Masson
Díhiodráitíodh fíocháin duáin neodracha formailneacha go rialta, leabaíodh iad i bpaifín, altaíodh iad (3 lm), agus dathaíodh iad le trichrome Masson chun fiobróis duánach a bhreathnú. I slisní tríchróim-dhaite Masson, gabhadh fiche réimse neamh-forluiteacha den chortex duáin faoi 200 formhéadú. Baineadh úsáid as Bogearraí Anailíse Íomhá Image-Pro Plus le haghaidh tomhais agus anailíse uathoibríoch. Baineadh úsáid as céatadán an limistéir fibrotic chun leibhéal fiobróis interstitial duánach a dhéanamh amach [8].
RT-PCR
Bhain Trizol mRNA iomlán as fíochán duáin gach grúpa agus tomhaiseadh a thiúchan, ansin tiontaíodh é go cDNA (Taka Reverse Transcription Kit). Baineadh úsáid as modh fluaraiseachta Taqman (TB Green Premix Ex Taq II Real-time RT-PCR) chun léirithe RNA fibronectin (FN) agus collagen I (COL-I) i bhfíocháin duáin a chainníochtú. Úsáideadh primers sonracha le haghaidh FN (ar aghaidh: 50 -GGAGTGGCACTGTCAACCCTC-30 agus cúl: 50 -ACTGGATGGGGTGGGAAT-30 ), agus COL-I (ar aghaidh: 50 -ACATGTTCAGCTTTGTGGACC{ {9}} agus droim ar ais: 50 -T CSSATTGTATGCAGC-30 ) [18] (arna sholáthar ag Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China). Is iad seo a leanas na coinníollacha aimpliúcháin: 95 C ar feadh 30 s, 95 C ar feadh 5 s, 60 C ar feadh 30 s, 40 timthriall; 95 C ar feadh 10 s, 65 C ar feadh 5 s, agus 95 C/5 C. Tar éis anailís a dhéanamh ar chuair aimpliúcháin agus cuair intuaslagthachta na dtáirgí, socraíodh na leibhéil mRNA coibhneasta ag an modh comparáideach CT (2-DDCt) le 18SrRNA (ar aghaidh: 50 - CGGACACGGACAG GATTGACAG-30 agus droim ar ais: 50 -AATCGCTCCACCAACT AAGAACGG-30 ) mar thagairt inmheánach.
blot an iarthair
Baineadh úsáid as maolán lysis radio-imdhíonachta-measúnachta (RIPA) chun na fíocháin duáin a líseáil agus socraíodh an tiúchan próitéine leis an modh BCA. Baineadh úsáid as leictreafóiréis glóthach grádán chun na próitéiní a scaradh ó 50 lg de shamplaí. Ansin aistríodh na próitéiní chuig membrane nitrocellulose. Tar éis blocáil le bainne nonfat 5% ar feadh 2 h, bhí na seicní blotted thar oíche ag 4 C le coinín frith-luch antasubstainte monoclo naal i gcoinne muscle a-réidh actin (a-SMA) (1:1000, Uimh.19245, Teicneolaíocht Comharthaíochta Cille). ), FN (1:1000, Uimh.ab2413, ABCam), nó COL-I (1:1000, Uimh.72026, Teicneolaíocht Comharthaíochta Cille), faoi seach. An lá dár gcionn, rinneadh na seicní a athnuachan ag teocht an tseomra ar feadh 0.5 h. Tar éis a bheith nite le TBST, gor na seicní le HRP Comhchuingeach AffiniPure Gabhar Frith-coinín IgG (H þ L)(1:1000, Uimh.BA1054, BOSTER Teicneolaíocht Bitheolaíochta) ar feadh 2 h. Tar éis dóibh a bheith nite le TBST arís, rinneadh iad a dhaite le himoibrí cemiluminescence ECL ultra-ard-íogair chun na imdhíonbhlotaí a léirshamhlú. Rinneadh b-actin a thomhas ar an scannán céanna leis an tagairt inmheánach. Socraíodh léirithe próitéine trí chainníocht a dhéanamh ar na slonn coibhneasta de spriocphróitéiní i gcoinne b-actin.
Anailís sonraí agus staitistiúla
Sloinntear na sonraí go léir a scrúdaíodh mar mheán ± diall caighdeánach. Thángthas ar chomparáidí idir an dá ghrúpa le t-tástáil neamhspleách. Bhí rochtain ag ANOVA aontreo ar chomparáidí idir grúpaí iolracha nuair a bhíonn an dáileadh sonraí gnáth, agus an t-athraitheas aonchineálach, baineadh úsáid as Welch ANOVA chun tábhacht staitistiúil a mheas nuair a bhí an t-athraitheas ilchineálach, agus ina dhiaidh sin tástáil post hoc Tukey le haghaidh comparáidí iolracha. Rinne na bogearraí GraphPad Prism 8.0 gach anailís staitistiúil. p < 0.05 a bheith suntasach go staitistiúil.
Seirbhís Tacaíochta Wecistanche-An t-onnmhaireoir cistanche is mó sa tSín:
Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Teil:+86 15292862950
Siopa Le haghaidh Sonraí Breise:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
