Modhanna Géiniteacha Comhcheangailte Chun Teaglaim Rialála Ard-Ord agus Tiománaithe Géiniteacha Innealtóireachta Chun Difreáil Néarrach a Fháil

Tumadóireacht isteach sa chuardach le haghaidh fachtóirí difreála éifeachtach cille

Tá taighdeoirí fós ag iarraidh teacht ar theiripí níos fearr chun dul chun cinn neamhoird néareolaíocha cosúil le galar Parkinson, galar Alzheimer, agus galar Huntington a chur ar ais nó a mhoilliú. Tá na neamhoird seo mar thoradh ar bhás cille néarónach i gcodanna éagsúla den inchinn. Níl na cógais nó na cóireálacha a úsáidtear chun na hairíonna a mhaolú in othair bunaithe go maith.

Cliceáil chun púdar cistanche tubulosa le haghaidh neuroprotection

Ní athshlánóidh siad na fíocháin néaracha damáiste agus is féidir fo-iarmhairtí nach dteastaíonn a bheith mar thoradh orthu. Dá bhrí sin, breathnaíonn líon méadaitheach staidéar ar ghaschealla mar theiripí tuar dóchais inti, mar gheall ar a gcumas féin-athnuachana agus solúbthacht na difreála i línte cille atá ag teastáil le haghaidh ghreamú isteach san othar chun na fíocháin néaracha caillte a aisghabháil.

Mar sin féin, sular féidir gaschealla a úsáid go cliniciúil chun neamhoird néareolaíocha a chóireáil, tá réimsí ann fós a dteastaíonn tuiscint níos fearr orthu chun a gcumas iomlán a dhíghlasáil. Tá gaschealla athghiniúnach agus intuargainte, agus tá claonadh acu a bheith ina gcineál cille ar bith nuair a thugtar an comhshuíomh ceart fachtóirí chun difreáil a thiomáint. Mar sin féin, tá doimhneacht castachta sa líonra mór fachtóirí.

Tá sé tábhachtach na teaglaim d’fhachtóirí trascríobh (TF), móilíní beaga, agus/nó fachtóirí fáis a chinneadh chun an sineirgíocht is fearr a bhaint amach chun gaschealla a dhifreáil lena n-áirítear gaschealla suthacha (ESCanna) agus gaschealla iolracha spreagtha ag an ráta is tapúla, agus mar thoradh air sin sa daonra purest de lineage néarónach. Mar sin féin, d’fhéadfadh bealach straitéiseach a bheith ann chun na fachtóirí seo a scagadh ar bhealach níos cost-éifeachtaí agus níos éifeachtúla ó thaobh ama de.

Chuideodh sé seo le barrfheabhsú a dhéanamh ar na prótacail atá bunaithe cheana féin atá fós ag obair nó chun fochineálacha néaróineacha a thréithriú tuilleadh amhail néaróin spíonacha mheánacha, néaróin céadfacha, agus néaróin serotonergic. Is dúshlán fós é próifíliú cuimsitheach a dhéanamh ar spreagthaí cinniúint néaróin agus an chaoi a n-idirghníomhaíonn na heilimintí seo lena chéile sa líonra rialála a shainiú.

Bhain roinnt grúpaí úsáid as cineálacha cur chuige nua scagtha ard-thréchuir chun an líonra rialála de chinniúint na gceall a shoiléiriú agus chuir siad léargais faisnéiseacha ar fáil ar fhachtóirí a spreagann tiontú néarónach agus maireachtáil. Dúirt Liu et al. (2018) úsáid CRISPR gníomhachtaithe (CRISPRa) chun cuardach a dhéanamh ar TFanna nó fachtóirí ceangailteach DNA a chuireann cinniúint neuronal ESCanna chun cinn. Mar sin féin, bhí an obair teoranta do staidéar a dhéanamh ar fhachtóirí aonair nó ar chomhcheangail phéire.

Rinne Tsunemoto et al scagadh córasach eile. (2018), a rinne imscrúdú ar an gcaidreamh idir TFanna. Níor léirigh an chuid is mó dá TF aonair roghnaithe aon éifeachtaí sa staidéar, áfach, d'aithin siad 76 teaglaim TF pairwise chun difreáil fibroblasts luiche go néaróin spreagtha a chur chun cinn.

Go háirithe, ní raibh comhsheasmhacht éigin ag a gcuid torthaí le staidéir roimhe seo, amhail gan an t-iompróir gníomhach dopamine Slc6a3 a bhrath i néaróin spreagtha, b'fhéidir mar gheall ar fhachtóirí breise a bheith in easnamh. Chinn staidéar eile na géinte riachtanacha chun maireachtáil néaróin a chothabháil nó a fheabhsú trí scagadh bunaithe ar trasnaíocht CRISPR (CRISPRi) a dhéanamh (Tian et al., 2019). Agus arís, bhí siad teoranta do scagadh sgRNA amháin.

Tá gá le tuilleadh staidéir le haghaidh scagthástála neamhchlaonta le haghaidh fachtóirí géiniteacha eile, agus chun líon na gcomhcheangal fachtóirí a mhéadú, mar tá sé léirithe go bhféadfadh go mbeadh gá le níos mó ná dhá fhachtóir i gcomhthéacsanna éagsúla chun difreáil agus athchlárú a thiomáint go héifeachtach.

Is sampla maith é an meascán de Oct4, Sox2, Klf4, agus c-Myc atá riachtanach chun an líonra comharthaíochta forbartha a rialáil le haghaidh iolrachas na ESCanna (Takahashi agus Yamanaka, 2006). I gcórais chasta den sórt sin, tá gá le tréithe cuimsitheacha a dhéanamh ar fheidhmeanna teaglaim ghéiniteacha ard-ord ar bhealach tréchur ard, agus d’fhéadfadh go mbeadh an modh Combinatorial Genetics En Masse (CombiGEM) in ann é sin a dhéanamh.

Modh CombiGEM le haghaidh scáileán ard-thréchur, ard-ordaithe agus córasach de chomhcheangail fachtóirí

Ní hamháin go dtugann CombiGEM bealach córasach chun scáileáin chomhthiomsaithe ar scála mór a sheoladh ach tá an cumas aige freisin leabharlanna géiniteacha comhcheangailte ard-ord a thionól inscálaithe (Wong et al., 2015, 2016; Zhou et al., 2020). Ligeann an próiseas aonphota don úsáideoir scagadh a dhéanamh ar an iliomad comhcheangail ghéiniteacha; leabharlanna 1-bealach, 2-bealach, 3-bhealach, agus go teoiriciúil, n-bhealach).

Soláthraíonn sé seo malairt tapa ar an ngnáthphróiseas a bhaineann le teaglaim spéise iarrthóirí aonair a thógáil agus a thástáil. Cé gur forbraíodh roinnt straitéisí scagthástála CRISPR combinatorial eile chun staidéar a dhéanamh ar chomhcheangail ghéiniteacha pairwise (Han et al., 2017; Shen et al., 2017; Najm et al., 2018; Truong et al., 2019; DeWeirdt et al., 2020 ), Tugann CombiGEM deis uathúil chun idirghníomhaíochtaí idir trí chomhcheangal géiniteacha nó níos mó a mheas.

Mar shampla, má tá sé d’aidhm ag an úsáideoir CRISPRa nó CRISPRi a úsáid chun ró-shníomh nó athbhrú, faoi seach, liosta de theaglaim TF is iarrthóirí, d’fhéadfadh leabharlann barrachóid de theaglaim scRNA a dhírítear ar TF a scagadh trí úsáid a bhaint as CombiGEM-CRISPR v2.0 ( Wong et al., 2016; Zhou et al., 2020) mar a léirítear i bhFíor 1.

Trí úsáid a bhaint as céimeanna ligála aonphota, ionchorpraítear leabharlann na sgRNAs agus a mbarrachóid faoi seach i veicteoir ceann scríbe lentiviral a thuairiscíonn léiriú próitéine fluaraiseacha nuair a ghníomhaíonn tionscnóir cineál-shonrach néaróin, mar shampla tubulin 1. An leabharlann de sgRNAs agus veicteoir lentiviral ar leith a chothaíonn an Cas9 easnamhach einsímeach comhleádh le gníomhachtóir tras-scríobh nó repressor a sheachadadh isteach na cealla tosaigh inmhianaithe.

Le himeacht ama, de réir mar a thosaíonn cealla ag idirdhealú, ní léireoidh ach cealla néaróin ionduchtaithe fluaraiseacht, agus is féidir na cealla seo a leithlisiú trí úsáid a bhaint as sórtáil cille fluaraiseachta-gníomhachtaithe chun a dteaglaim TF cothaithe a aisghabháil trí sheicheamhú barrachóid.

Chun tuiscint níos fearr a fháil ar na teaglamaí a thiomáineann líneálacha cille ar leith, is féidir na cealla seo a iniúchadh freisin le haghaidh tuairisceoirí nó marcóirí lineage cille aitheanta bunaithe ar rogha na gcéimeanna difreála a roghnaíonn an t-úsáideoir staidéar a dhéanamh orthu. D’fhéadfaí sórtáil cille maighnéadach-ghníomhach a úsáid chun cealla spéise a scaradh ag brath ar na slonn marcála dromchla cille.

D’fhéadfaí seicheamhú RNA aonchealla a chúpláil leis an scagadh comhcheangailte CRISPR mar léamh amach chun próifíl a dhéanamh ar chineál agus ar leibhéil géine suas nó síos-rialú agus is féidir an teaglaim de TFanna spriocdhírithe a chinneadh tríd an léann barrachóid (Replogle et al., 2020). D’fhéadfaí íomháú ard-ábhar a úsáid chun monatóireacht a dhéanamh ar na hathruithe ar mhoirfeolaíocht na gceall ó na céimeanna luatha agus níos déanaí d’fhorbairt néaróin.

Is féidir ábharthacht fiseolaíoch nó feidhmiúlacht na gceall ionduchtaithe cosúil le néaróin a chinneadh trí lipéadú imdhíon-cheimiceach a bhaineann go sonrach le haibiú néaróin, amhail NeuN, TUJ1, agus MAP2, agus trí bhearta leictreafiseolaíocha. Mar a luadh cheana, tá staidéir tar éis TF agus móilíní beaga a chomhcheangal chun cinniúint cille a ionramháil.

Is féidir CombiGEM a úsáid freisin chun teaglamaí beaga móilíní a shainaithint ar féidir leo féin-athnuachan gascheall a choinneáil, difreáil líne cille a spreagadh, nó athchlárú a éascú trí éifeachtúlacht a mhéadú agus fachtóirí géiniteacha a d'fhéadfadh a bheith ina n-ionad. Is féidir CombiGEM a chur i bhfeidhm freisin trí na spriocanna móilíní beaga a bhaineann le cosáin chomharthaíochta, epigenetic, nó fachtóirí próisis cheallacha a chinneadh ar dtús.

Ansin trí leabharlann de sgRNA a dhearadh chun na spriocanna indrugaí a ghníomhachtú nó a dhíghníomhú, is féidir ansin na teaglamaí éifeachtacha de mhóilíní beaga a aithint chun an difreáil nó an athchlárú a fheabhsú. Léirítear an coincheap seo go maith sna staidéir a rinneamar níos luaithe chun teacht ar chomhcheangail spriocdhrugaí i gcoinne ailse agus galar Parkinson (Zhou et al., 2020).

Ní hamháin go bhfuil úsáid CombiGEM teoranta do shaobhadh bunaithe ar CRISPR ach d’fhéadfaí é a chur i bhfeidhm freisin ar fhachtóirí rialála DNA nó RNA eile chun staidéar a dhéanamh ar na scáileáin chaillteanais feidhm a bhfuil cur isteach RNA orthu, chomh maith le cinn ghnóthachan feidhme leis an slonn. de microRNAs (Wong et al., 2015) agus frámaí léitheoireachta oscailte daonna arna bhfíorú le seicheamh mar iad siúd a tuairiscíodh i leabharlann daonna TFome (Ng et al., 2020).

Modh CombiSEAL le haghaidh innealtóireacht ard-thréchur fachtóirí trascríobh

Féadfaidh dúshláin a bheith ag baint le teacht ar an meascán idéalach d’fhachtóirí géiniteacha a tharlaíonn go nádúrtha, mar shampla a bheith teoranta do TFanna tréithrithe an ghéanóim a bhfuil réamheolas acu ar a gcur in iúl agus a róil sa difreáil. Tá sé léirithe ag staidéir go n-osclaíonn TFanna innealtóireacht nó fachtóirí giniúna trascríobh saorga bealach nua roghanna chun an ráta difreála a bhrostú trí bhealaí malartacha, a sháraíonn an spleáchas ar léiriú réamhriachtanas ar chomhfhachtóirí ingineacha eile laistigh den líonra rialála géine, nó athsholáthar iomlán a dhéanamh. TFanna nádúrtha le cinn níos éifeachtaí (Jauch, 2018).

Cuireann sé seo ar chumas taighdeoirí na fachtóirí riachtanacha a oiriúnú de réir a gcuid riachtanas turgnamhacha. Molaimid, má tá sé mar aidhm ag duine só-ghineacht tréchur ard a sheoladh ar láithreáin iolracha chuig TF a chuimsíonn fearainn éagsúla, go bhféadfadh CombiSEAL a bheith ina ardán úsáideach (Choi et al., 2019). Tugann modh CombiSEAL le chéile blúirí DNA códaithe aimínaigéad a chlibítear go comhcheangailte le barrachóid (Fíor 1).

Fíor 1 ｜ Modhanna CombiGEM agus CombiSEAL chun scagadh le haghaidh tiománaithe géiniteacha éifeachtacha difreála. Sampla den mhodh CombiGEM is ea cóimeáil na n-il-sgRNAs a chuirtear in iúl ón gcomhdhéanamh céanna, agus déantar na teaglamaí sgRNA a léiriú ag a mbarrachóid chomhcheangailte. Cuimsíonn modh CombiSEAL sócháin a tugadh isteach do chodanna éagsúla de phróitéin, amhail fachtóirí trascríobh, a léirítear mar P1, P2, P(n), agus P(n móide 1). Agus tá na teaglamaí sócháin léirithe ag a mbarrachóid chomhghafaite. Is féidir leis an úsáideoir na socruithe a chur i bhfeidhm ar chórais seachadta DNA eile, agus sa léiriú seo, úsáidtear veicteoirí lentiviral. Is féidir straitéisí scagthástála a dhéanamh i bhformáid chomhthiomsaithe, agus sa sampla seo, sainaithnítear daonraí cille a dhéanann idirdhealú le líne néaróin ar leith trí thionscnóir a chur in iúl do léiriú próitéine fluaraiseacha, lipéadaithe mar X-fluaraiseacht sa léaráid. Déanfaidh seicheamhú na chéad ghlúine eile (NGS) de na barrachóid ón linn ceall na spriocanna DNA nó an t-athraithe/na hathraithe trascríobhacha a dhéanamh amach. D’fhéadfaí úsáid a bhaint as diananailís ar fhachtóirí a spreagann idirdhealú cineálacha éagsúla néaróin modhanna bunaithe ar eagair, mar shampla iniúchadh na gceall le marcóirí líneachta cille agus sórtáil cille maighnéadach-ghníomhach (MACS) ina phlátaí iltobar ina dhiaidh sin, ar féidir iad a leanúint suas le íomháú ard-ábhar. Mar mhalairt air sin, ligeann seicheamhú RNA aonchealla (RNA-Seq) don úsáideoir na habairtí géine de chealla a phróifíliú leis na feinitíopaí inmhianaithe agus bheadh ​​​​sé in ann na barrachóid a aisghabháil chun teaglaim sgRNA nó teaglaim sóchán na heochrach (s) a aithint. FACS: Sórtáil cille fluaraiseachta-gníomhachtaithe.

Tosaíonn CombiSEAL leis na chéad chodanna den phróitéin ina bhfuil mutagenesis inmhianaithe. Is féidir leis an úsáideoir aon líon leaganacha a ghiniúint do gach rannóg, ansin iad a chlibeáil le barrachóid chun suíomh agus teaglaim na sócháin a aithint. Ansin cuirtear gach comhthiomsú rannáin le chéile go seicheamhach trína gcur isteach i veicteoir ceann scríbe a chothaíonn an seicheamh próitéine de chineál fiáin arna mhodhnú le heinsímí den chineál IIS cliathánach ag réigiún na mutagenesis beartaithe.

Tá sé tábhachtach an scéim chomhleá scarless seo de ilchodanna de phróitéin a nascadh chun aimínaigéid nach dteastaíonn a chur leis an bpróitéin a sheachaint. Ceadaíonn an modh CombiSEAL seichimh aimínaigéad an chomhthiomsaithe malairtí spéise roghnaithe a chinneadh ar bhealach níos éifeachtaí agus níos cost-éifeachtaí, ag seachaint an gá atá le seicheamhú fadléithe thar an próitéin iomlán chun na cineálacha sócháin a shainaithint agus cá bhfuil siad suite trasna an próitéin.

Leis an socrú modheolaíoch seo is féidir anailís níos éasca a dhéanamh trí sheicheamh ard-thréchur a dhéanamh den chomhthiomsú de bharrachóid ghearr-chomhghathaithe a thugann le tuiscint an teaglaim de chineálacha agus de shuíomhanna sócháin aimínaigéad, nó modhnuithe eile atá ag teastáil ar nós babhtáil fearainn, ionsá agus scriosadh, a rinneadh. deartha ar dtús agus suiteáilte ar an TF

Conclúid

I gcomparáid le modhanna trialach agus earráide, tá dul chun cinn déanta maidir le cineálacha cur chuige níos córasaí a úsáid chun na fachtóirí nó na teaglamaí riachtanacha a chinneadh a theastaíonn chun tiontú cineál cille amháin go lineage néarónach a thiomáint. Mar sin féin, tá an cumas chun teaglaim ardoird a aithint in easnamh, agus anseo molaimid go bhféadfadh modh CombiGEM a bheith in ann aghaidh a thabhairt ar na teorainneacha sin.

Úsáideann CombiGEM córas ligála aonphota barrachóidithe chun teaglaim ardoird de fhachtóirí ceangailteacha DNA a chur le chéile chun díriú ar DNA in aon turas amháin, ag dul timpeall ar phróiseas na n-ilbhabhtaí scagthástála chun líon na n-amas a laghdú go méid inláimhsithe le haghaidh bailíochtaithe iartheachtacha. . Ina theannta sin, is féidir TFanna nádúrtha nach bhfuil chomh héifeachtach sin a chur in ionad TFanna saorga nó innealtóireachta chun slonn géine a rialáil níos fearr. Déanaimid cur síos ar mhodh mutagenesis próitéine, CombiSEAL, a chuirfidh ar chumas úsáideoirí linnte móra de leagan fachtóir trascríobh a chruthú trí shócháin suímh iolracha a chur le chéile go díreach atá clibáilte le barrachóid laistigh den phróitéin agus ina bhfearainn éagsúla.

Luasóidh sé seo agus laghdóidh sé seo costas nósanna imeachta scagthástála chun faisnéis a fháil ar na cineálacha sócháin de na malairtí spéise. Tá súil againn gur féidir leis na modhanna atá molta cabhrú le tuilleadh tuisceana agus leathnú a dhéanamh ar na féidearthachtaí a bhaineann le hathghiniúint néarúil a chur chun cinn agus go mbeifear in ann iad a chur i bhfeidhm go forleathan i réimsí eile taighde.

An mheicníocht éifeacht neuroprotective Cistanche

Tá sé léirithe go bhfuil éifeachtaí neuroprotective ag Cistanche trí roinnt meicníochtaí:

1. Éifeachtaí frith-athlastacha: Tá comhdhúile ag Cistanche a léiríodh go gcuireann siad bac ar athlasadh i gcodanna éagsúla den inchinn, ar féidir leo cabhrú le néaróin a chosaint ó dhamáiste.

2. Éifeachtaí frithocsaídeacha: Tá comhdhúile ag Cistanche a bhfuil airíonna frithocsaídeacha láidir acu. Cuidíonn frithocsaídeoirí le néaróin a chosaint ó dhamáiste de bharr fréamhacha saor in aisce agus strus ocsaídiúcháin.

3. Rialáil neurotransmitters: Tá sé léirithe go rialaíonn Cistanche neurotransmitters áirithe, mar shampla serotonin agus dopamine, ar féidir leo cabhrú le néaróin a chosaint agus feidhm chognaíoch a fheabhsú.

4. Spreagadh fachtóir neurotrófach: Tá sé léirithe go spreagann Cistanche táirgeadh fachtóirí neurotrófacha, mar shampla fachtóir neurotrófaigh inchinn-díorthaithe (BDNF), a fhéadfaidh fás agus maireachtáil néaróin a chur chun cinn.

Tríd is tríd, oibríonn na meicníochtaí seo le chéile chun néaróin a chosaint ó dhamáiste, a bhfás agus a marthanacht a chur chun cinn, agus chun feidhm chognaíoch a fheabhsú.

Tagairtí

Choi GCG, Zhou P, Yuen CTL, Chan BKC, Xu F, Bao S, Chu HY, Thean D, Tan K, Wong KH, Zheng Z, Wong ASL (2019) Combinatorial mutagenesis en masse optimizes gníomhaíochtaí eagarthóireachta genome SpCas9. Modhanna Nat 16:722-730.

DeWeirdt PC, Sanson KR, Sangree AK, Hegde M, Hanna RE, Feeley MN, Griffith AL, Teng T, Borys SM, Snáithe C, Joung JK, Kleinstiver BP, Pan X, Huang A, Doench JG (2020) Optimization of AsCas12a le haghaidh scáileáin ghéiniteacha combinatorial i gcealla daonna. Biteicneolaíocht Nat 39:94-104.

Han K, Jeng EE, Hess GT, Morgens DW, Li A, Bassik MC (2017) Comhcheangail drugaí sineirgisteacha le haghaidh ailse a aithníodh i scáileán CRISPR le haghaidh idirghníomhaíochtaí géiniteacha pairwise. Biteicneolaíocht Nat 35:463- 474.

Jauch R (2018) Athchlárú cinniúint na gceall trí innealtóireacht fachtóirí trascríobh dúchais. Curr Opin Genet Dev 52:109-116.

Najm FJ, Snáithe C, Donovan KF, Hegde M, Sanson KR, Vaimberg EW, Sullender ME, Hartenian E, Kalani Z, Fusi N, Listgarten J, Younger ST, Bernstein BE, Root DE, Doench JG (2018) Orthologous CRISPR- Einsímí Cas9 le haghaidh scáileáin ghéiniteacha combinatorial. Biteicneolaíocht Nat 36:179-189.

Ng AHM, Khoshakhlagh P, Rojo Arias JE, Pasquini G, Wang K, Swiersy A, Shipman SL, Appleton E, Kiaee K, Kohman RE, Vernet A, Dysart M, Leeper K, Saylor W, Huang JY, Graveline A, Taipale J, Hill DE, Vidal M, Melero-Martin JM, et al. (2020) Leabharlann chuimsitheach fachtóirí trascríobh daonna le haghaidh innealtóireacht cinniúint cille. Nat Biotechnol doi: 10.1038/s41587-020-0742-6.

Replogle JM, Norman TM, Xu A, Hussmann JA, Chen J, Cogan JZ, Meer EJ, Terry JM, Riordan DP, Srinivas N, Fiddes IT, Arthur JG, Alvarado LJ, Pfeiffer KA, Mikkelsen TS, Weissman JS, Adamson B (2020) Comhscáileáin CRISPR aonchealla trí ghabháil dhíreach RNA agus seicheamhú spriocdhírithe. Biteicneolaíocht Nat 38:954- 961.

Shen JP, Zhao D, Sasik R, Luebeck J, Birmingham A, BojorquezGomez A, Licon K, Klepper K, Pekin D, Beckett AN, Sanchez KS, Thomas A, Kuo CC, Du D, Roguev A, Lewis NE, Chang AN , Kreisberg JF, Krogan N, Qi L, et al. (2017) Scáileáin chomhcheangailte CRISPRCas9 le haghaidh léarscáiliú de novo ar idirghníomhaíochtaí géiniteacha. Modhanna Nat 14:573-576.

Takahashi K, Yamanaka S (2006) Ionduchtú gascheall iolracha ó chultúir suthach lucha agus fibroblast aosach ag fachtóirí sainithe. Cill 126:663-676.

Tian R, Gachechiladze MA, Ludwig CH, Laurie MT, Hong JY, Nathaniel D, Prabhu AV, Fernandopulle MS, Patel R, Abshari M, Ward ME, Kampmann M (2019) ardán bunaithe ar trasnaíocht CRISPR le haghaidh scáileáin ghéiniteacha ilmhódacha iPSC daonna - néaróin díorthaithe. Néarón 104:239-255.

Truong VA, Hsu MN, Kieu Nguyen NT, Lin MW, Shen CC, Lin CY, Hu YC (2019) CRISPRai le haghaidh gníomhachtú géine comhuaineach agus cosc ​​​​a chur chun cinn chondrogenesis gascheall agus athghiniúint cnámh calvarial. Aigéid Núicléacha Res 47:e74. Wong AS, Choi GC, Cheng AA, Purcell O, Lu TK (2015) Géineolaíocht combinatorial ard-ordú comhthreomhar ollmhór i gcealla daonna. Biteicneolaíocht Nat 33:952-961.

Wong AS, Choi GC, Cui CH, Pregernig G, Milani P, Adam M, Perli SD, Kazer SW, Gaillard A, Hermann M, Shalek AK, Fraenkel E, Lu TK (2016) Scagadh barrachóidithe ilphléacsáilte CRISPR-Cas9 cumasaithe ag CombiGEM . Proc Natl Acad Sci USA 113:2544-2549.

Zhou P, Chan BKC, Wan YK, Yuen CTL, Choi GCG, Li X, Tong CSW, Zhong SSW, Sun J, Bao Y, Mak SYL, Chow MZY, Khaw JV, Leung SY, Zheng Z, Cheung LWT, Tan K , Wong KH, Chan HYE, Wong ASL (2020) Scáileán comhcheangailte trí-bhealach CRISPR chun anailís a dhéanamh ar idirghníomhaíochtaí i measc spriocanna indrugaí. Ionadaí Cille 32:108020.

Dawn GL Thean, Alan SL Wong*