Teibí

Réamhrá: Is substaint nádúrtha roisíneach é Propolis a bhailíonn beacha meala ó bachlóga agus exudates crann agus plandaí éagsúla; glactar leis go forleathan go mbraitheann comhdhéanamh propolis ar shaintréithe fíteagrafacha an láithreáin bailiúcháin.

Is féidir le glycoside cistanche méadú freisin ar ghníomhaíocht SOD i bhfíocháin chroí agus ae, agus laghdaítear go mór an t-ábhar lipofuscin agus MDA i ngach fíocháin, ag scavening go héifeachtach fréamhacha ocsaigine imoibríocha éagsúla (OH-, H₂O₂, etc.) agus a chosaint i gcoinne damáiste DNA a dhéantar. ag OH-radacach. Tá cumas láidir scavenging fréamhacha saor in aisce ag gliocóisídí cistanche feinileatánóideach, cumas laghdaithe níos airde ná vitimín C, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i bhfionraí sperm, laghdaigh ábhar MDA, agus tá éifeacht chosanta áirithe acu ar fheidhm membrane sperm. Is féidir le polaisiúicrídí cistanche feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD agus GSH-Px in erythrocytes agus fíocháin scamhóg lucha senescent turgnamhacha de bharr D-galactós, chomh maith le hábhar MDA agus collagen sa scamhóg agus plasma a laghdú, agus ábhar elastin a mhéadú. éifeacht scavenging maith ar DPPH, fadú am hypoxia i lucha senescent, feabhas a chur ar ghníomhaíocht SOD i serum, agus moill a chur ar dhíghiniúint fiseolaíoch na scamhóg i lucha senescent turgnamhach Le díghiniúint moirfeolaíoch cheallacha, tá sé léirithe ag turgnaimh go bhfuil an cumas frithocsaídeach maith ag Cistanche. agus tá an cumas aige a bheith ina dhruga chun galair aosaithe craicinn a chosc agus a chóireáil. Ag an am céanna, tá cumas suntasach ag echinacoside i Cistanche fréamhacha saor in aisce DPPH a scavening agus féadann sé speicis ocsaigine imoibríocha a scavening, cosc ​​a chur ar dhíghrádú collagen saor ó radacach saor in aisce, agus tá éifeacht mhaith deisiúcháin aige freisin ar damáiste anion radacach saor ó thymine.

Cliceáil ar Fhorlíonadh Cistanche Tubulosa

【Le haghaidh tuilleadh eolais: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Cuspóirí: Bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo comhdhéanamh fíteiceimiceach sleachta eatánólacha a chinneadh ó ocht mbaisceanna propolis a bailíodh i réigiúin éagsúla Beinin (ó thuaidh, sa lár, agus ó dheas) agus an Chongó, san Afraic.

Ábhar agus modhanna:Rinneadh tréithriú samplaí propolis trí úsáid a bhaint as modhanna éagsúla crómatagrafaíochta hifheinithe in éineacht le dímhíriú carbóin-13 athshondais mhaighnéadaigh núicléach (13C NMR) le bogearraí MixONat. Rinneadh meastóireacht ansin ar a ngníomhaíocht táirge deiridh frithocsaídeach nó frith-ard-glicínithe (frith-AOIS) trí úsáid a bhaint as measúnachtaí défheinilpicrylhydrazyl agus serum albaimine buaibheach, faoi seach.

Torthaí: Léirigh anailísí crómatagrafacha in éineacht le díreáchtáil 13C NMR gur thaispeáin dhá shampla ó lár Beinin, chomh maith le méid ollmhór triterpenes pentacyclic, stilbenoids meitocsylated nó phenanthrenes, atá freagrach as gníomhaíocht frithocsaídeach an sliocht don chéad cheann. Ina measc, d'fhéadfadh combretastatin a bheith citotocsaineach. Don dara ceann, bhí na flavanones prenylated ar a dtugtar i propolis de chineál Macaranga freagrach as a ngníomhaíocht shuntasach frith-AOIS. Bhí an sampla ón gCongó comhdhéanta de go leor díorthach triterpene a bhaineann le speicis Mangifera indica.

Conclúid: Dá bhrí sin, is cosúil go bhfuil suim ar leith ag propolis ó lár Beinin, mar gheall ar a chuid maoine frithocsaídeacha agus frith-AOIS. Mar sin féin, toisc go bhfuil caighdeánú propolis deacair i gcriosanna trópaiceacha mar gheall ar a éagsúlacht mhór chemo, tá gá le hanailís córasach fíteiceimiceach sula gcuirtear úsáid propolis chun cinn i dtáirgí bia agus sláinte san Afraic.

EOCHAIRFHOCAL

13C dímhéilliú NMR, stilbenoids nó feinintréin mheitiocsailithe, triterpenes peinteacyclic, flavanóin réamh-áitithe, Propolis

1. RÉAMHRÁ

Is substaint roisíneach nádúrtha é Propolis a bhailíonn beacha ó bachlóga agus exudates crainn agus plandaí éagsúla, measctha le céir bheach agus einsímí salivary.1 Úsáideann beacha é chun an bealach isteach a chosaint ó ionróirí, poill breiseán, ballaí inmheánacha réidh, mummify ainmhithe marbh. (feithidí beaga) taobh istigh den hive, agus cothromaíocht a taise mhór nó coinníollacha triomach.2,3 Propolis a úsáidtear go forleathan i leigheas tíre ó am ársa mar gheall ar a raon leathan de airíonna teiripeacha.4 Propolis comhdhéanta go ginearálta de roisín (50 faoin gcéad) . , céir (30 faoin gcéad ), olaí (10 faoin gcéad ), pailin ( 5 faoin gcéad ), agus comhdhúile feanólacha breise cosúil le flavonoids.5,6 Is eol go bhfuil comhdhéanamh ceimiceach propolis casta agus athraíonn de réir na speiceas plandaí atá ag fás timpeall an choirceog. , óna mbailíonn beacha exudates.7 Glactar leis go bhfuil roinnt fachtóirí, mar shampla comhdhéanamh floristic an cheantair, áit agus am an bhailiúcháin, an séasúr, an cineál bailitheoir, infhaighteacht agus airde, agus an ghníomhaíocht bia a forbraíodh le linn tá tionchar ag saothrú an propolis ar chomhdhéanamh ceimiceach an propolis.8,9 Tá cineálacha éagsúla propolis ann, ag brath ar limistéar geografach táirgthe, foinse luibheolaíoch, agus comhdhéanamh ceimiceach. Is iad na cineálacha propolis is coitianta ná measartha, beithe, trópaiceach, an Mheánmhuir, agus an tAigéan Ciúin.10 Tagann Propolis ó chriosanna aeráide measartha, mar shampla an Eoraip, Meiriceá Thuaidh, nó réigiúin neamhthrópaiceacha na hÁise, go príomha ó exudates de bachlóga de speicis Populus ( Salicaceae) agus dá bhrí sin tá sé saibhir i flavonoids agus aigéid feanólacha agus a n-eistir; mar sin féin, tá própail trópaiceach, a thionscnaíonn ó réigiúin nach bhfásann poibleog ná beithe, saibhir i ndíorthaigh phreanilithe d'aigéid p-chúmaracha, de bheinsifheinéin, nó d'terpenoidí. , an tSeapáin, agus na hOileáin Sholamón, agus tá propolis beithe le fáil go sonrach sa Rúis.12 Mar thoradh ar staidéar ar propolis ón Áise thrópaiceach fuarthas Macaranga denarius L. agus Mangifera indica L. mar fhoinsí plandaí propolis Indinéisis.13 Ar an láimh eile, is iad speicis bhuaircíneacha an teaghlaigh Cupressaceae príomhfhoinse luibheolaíoch propolis i réigiúin na Meánmhara.14 Léirigh anailís cheimiceach go bhfuil níos mó ná 300 táirge nádúrtha éagsúil (NPanna) ag propolis, lena n-áirítear díorthaigh aigéad feanólach, cúmarins, flavonoids, sesquiterpenes, diterpenes, triterpenes, stéaróidí, lignans, nó benzophenones prenylated.15 Tá cur síos go príomha ar éifeachtaí bitheolaíocha propolis ní amháin ar a frithocsaídeach, 16-18 frith-AOIS (ie, cosc ​​ar fhoirmiú táirge deiridh ard-glicúchán [AOIS]),19 frith -athlasta,20 agus éifeachtaí frith-meall,21-23 ach freisin a ngníomhaíochtaí antibacterial,24-26 frith-fhungacha,15 frithvíreasach,27 agus frith-seadánacha28. Is eol freisin go spreagann Propolis táirgeadh antasubstaintí, rud a thugann le tuiscint go bhféadfaí é a úsáid mar aidiúvach i vacsaíní.29 Tá suim ar leith ag baint le húsáid mhéadaithe na substainte nádúrtha seo de chomhdhéanamh éagsúlaithe agus mar sin de ghníomhaíochtaí bitheolaíocha éagsúla sna tionscail chógaisíochta, chosmaideacha agus bhia. i dtaighde eolaíoch, go háirithe nuair a thagann sé chun a chomhdhéanamh ceimiceach a shainiú. Rinneadh formhór na staidéar ar shamplaí ón Eoraip19,30–33 agus ó Mheiriceá Laidineach, go háirithe an Bhrasaíl, 20,23,34–36 agus is beag staidéar a rinneadh san Afraic.37–41 Tá eolas ar phróifil na Beinséine agus an Chongóil42 fós gann.

Mar sin, bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo tréithriú a dhéanamh ar chomhdhúile móra ó shamplaí propolis a bailíodh i gcriosanna fíteagrafacha éagsúla de Beinin agus Chongó (Afraic) ag baint úsáide as dímhéilliú athshondais mhaighnéadaigh núicléach 13C (NMR) le bogearraí MixONat.43,44 Réamhstaidéar ag baint úsáide as bunachar sonraí (DB) ina raibh Níor thug NPanna a tuairiscíodh roimhe seo ó propolis mar aon lena n-aistrithe ceimiceacha tuartha 13C (δC) aon sonraí inúsáidte i gcomparáid leis na torthaí sásúla a fhaightear de ghnáth le heastóscáin plandaí.43–45 Is féidir é seo a mhíniú trí chomhdhéanamh ceimiceach propolis, atá ag brath go mór. ar an bhflóra áitiúil, rud a fhágann go bhfuil sé dodhéanta DB cemotaxonomic a thógáil. Mar sin, chun mór-chomhdhúile ó propolis Beninese agus Congolese a dhéanamh amach, san obair reatha rinneamar crómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta mar aon le mais-speictriméadracht braite scaipthe solais ultraivialait agus galaithe (HPLC-UV-ELSD-MS) agus crómatagrafaíocht gháis in éineacht le mais-speictriméadracht ( GC-MS) anailís ar sleachta propolis amh chun a bpríomhghnéithe struchtúracha a aithint agus DBanna comhfhreagracha de NPanna atá oiriúnach do bhogearraí MixONat a thógáil.46 Ansin, tar éis codánú garbh a dhéanamh ar na samplaí propolis a roghnaíodh de réir a bpróifíl cheimiceach, ceadaítear dí-mhaolú 13C NMR-bhunaithe. sainaithint NPanna móra gan íonú breise. Rinneadh measúnachtaí frithocsaídeacha agus frith-AOIS freisin.

2. NÓSANNA IMEACHTA Turgnamhach

2.1 Ceimiceáin

Ceannaíodh 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), imoibrí Folin-Ciocalteu, aigéad formach, agus aigéad gaileach, gach grád anailíse, ó Sigma-Aldrich (St Quentin Fallavier, An Fhrainc). Bhí 6-hidrocsa-2,- 5,7,8-tetramethylchroman-2-aigéad carbocsaileach (Trolox®) agus 50 - aigéad caffeoylquinic (aigéad clóirigineach) ann. a fhaightear ó Acros Organics (Geel, an Bheilg).

2.2 Samplaí Propolis

Bailíodh ocht gcinn de shamplaí propolis Beinéise trí scríobadh ó choirceoga i dtrí chrios fíteagrafaíochta (Tábla 1 agus Fíor SI-1). Bailíodh sampla de propolis Congolese san fhoraois shaorga de chrainn acacia i Plateau Bateke i lár Phoblacht an Chongó (Tábla 1).

2.3 Eastóscadh Propolis

Ullmhaíodh eastóscáin eatánólacha de propolis (EEPanna) ar dtús ag baint úsáide as an bprótacal eastósctha seo a leanas.19 Ar dtús, rinneadh smidiríní aonchineálach ar phrópóil amh i láthair nítrigine leachtach. I gcás na samplaí go léir, macerated 1 g de phúdar propolis i 20 ml de 95 faoin gcéad EtOH. Tar éis é a chorraí ar feadh 2 h ag teocht an tseomra, rinneadh an meascán a scagadh ag baint úsáide as scagaire tonnadóir diosca gloine sintéaraithe (méid pore 16-40 μm). Rinneadh an t-iarmhar a ath-eastóscadh faoi dhó ag baint úsáide as na céimeanna céanna. Ansin, coinníodh na trí scagáit bailithe ag 18 C thar oíche, scagtha chun céireanna a bhaint, agus galaithe faoi bhrú laghdaithe (40 C, 10 barra) chun na EEPanna a thabhairt.

Baineadh méideanna 8.0 g de phúdar propolis de BC1 (1) agus BC2 (2) nó 10.3 g de CG (3) arís le EtOH 95 faoin gcéad (UAE, 4 80 ml, 15 min) le haghaidh tuilleadh crómatagrafaíocht flash.

2.4 An t-ábhar feanólach iomlán a chinneadh

Cinneadh an t-ábhar feanólach iomlán trí mhodh dathmhéadrach Folin-Ciocalteu mar a thuairiscítear roimhe seo,19 agus oiriúnaithe le déanaí d'úsáid dhíreach i micreaphlátaí. Go hachomair, 10 ul de gach sliocht propolis i MeOH (3.5 mg/ml do BC1, 5 mg/ml do BN2, BC2, agus CG, 7.5 mg/ml do BN1, BS1a, BS1b, agus BS2, agus Measctha 10 mg/ml do BS3) le 20 ul d’uisce driogtha agus 10 ul d’imoibrí Folin–Ciocalteu i 96-mhicrphláta tobair. Tar éis 3 min, cuireadh 120 ul d'uisce driogtha agus 40 ul de 20 faoin gcéad de charbónáit sóidiam uiscí. Rinneadh an t-ionsúcht a thomhas ar speictreafótaiméadar micreaphláta TECAN® (V6.5) ag 760 nm tar éis 30 nóiméad sa dorchadas ag teocht an tseomra. Ullmhaíodh bán ar an mbealach céanna trí MeOH a úsáid in ionad an tuaslagáin eastósctha agus úsáideadh aigéad gaileach chun an cuar calabraithe a ríomh (0.04–0.328 mg/ml; y=2.7241x 0.0039; r2=0 .9982). Rinneadh anailís faoi thrí ar gach sampla. Cuireadh an t-ábhar feanólach iomlán in iúl i dtéarmaí coibhéis aigéid gháiligh (mg) in aghaidh gach graim eastóscáin (mg GAE/g).

2.5 Réamhanailísí crómatagrafaíochta

2.5.1 TLC Anailíseach

Rinneadh crómatagrafaíocht thana-chiseal anailíse (TLC) ar TLC Alugram Xtra SIL G/UV254 (Macherey-Nagel, Düren, an Ghearmáin), ag baint úsáide as meascán de chicliheacsán: AcOEt mar eluant. Léiríodh spotaí sa chromatogram ar dtús faoi sholas UV (254 nm) agus ansin trí spraeáil le himoibrí d’aigéad veainilín–sulfair (2 ml d’aigéad sulfarach tiubhaithe i 98 ml de thuaslagán eatánóil 1:99 w/v fanailin: 95 faoin gcéad) agus téamh na crómatograms go 110 céim C ar feadh 5 nóiméad.

2.5.2 Nós imeachta GC-MS

Rinneadh anailís GC-MS ar shamplaí neamhdhíorthaithe ag baint úsáide as Crómatagraf Gáis Shimadzu GCMS-QP2010 SE (Noisiel, An Fhrainc) le voltas ianaithe de 70 eV (Leictreonach Tionchar). Ullmhaíodh samplaí i déchlóraimeatán (DCM) ag 2 mg/ml le haghaidh eastóscáin agus 1 mg/ml do chodáin. Rinneadh deighiltí ag baint úsáide as colún Phenomenex ZB5 (trastomhas inmheánach 30 m * 0.250 mm le tiús scannáin 0.25 mm; Phenomenex, Le Pecq, an Fhrainc). Cláraíodh an teocht mar seo a leanas: 180 céim C (3 nóiméad), 180-280 céim C ag ráta 10 C / nóim, agus 280 céim C (27 min). Úsáideadh héiliam mar ghás iompróra ag ráta sreafa 2.0 ml/nóim. Socraíodh teocht an injector agus brathadóir ag 250 céim C agus 280 céim C, faoi seach. Aithníodh meitibilítí trína n-amanna coinneála (Rt), mais ainmniúil, agus/nó patrúin ilroinnte a chur i gcomparáid leo siúd de shamplaí barántúla agus/nó iad siúd atá i leabharlanna patrún ilroinnte an trealaimh (NIST11, NIST11s, agus FFNSC2).

2.5.3 Nós imeachta HPLC-DAD-ELSD

Rinneadh anailísí crómatagrafaíochta ag baint úsáide as crómatagraf leachtach Shimadzu 2030C 3D (Noisiel, an Fhrainc) a bhí feistithe le sraith dé-óidbrathadóir (DAD) agus ELSD (Sedere®) le colún Lichrospher® 1{{10}}0 RP-18 (125 mm * 4 mm id, 5 μm, Merck, Darmstadt, an Ghearmáin ) cosanta le cartúis garda Lichrocart® 4-4 (4 mm*4 mm id), ag baint úsáide as ráta sreafa 1 ml/nóim. Is éard a bhí sa chéim shoghluaiste ná 0.1 faoin gcéad d’aigéad formach in uisce (tuaslagóir A) agus meatánól (tuaslagóir B), agus rinneadh deighilt leis an ngrádán líneach seo a leanas: 25–100 faoin gcéad B (0–40 nóim), 100 faoin gcéad (40–45 min). Taifeadadh speictrim UV-vis sa raon 190–600 nm, agus fuarthas crómatagram ag 254 agus 280 nm. Rinneadh ELSD a théamh ag 30céimeC, agus cuireadh gnóthachan 4 i bhfeidhm ar an gcomhartha. Ullmhaíodh samplaí ag tiúchan de 10 mg/ml i MeOH agus lártheifneoirithe ag 13,000 g ar feadh 10 nóiméad roimh an instealladh (10 ul) chun rianta ábhar ar fionraí a bhaint.

2.5.4 Nós imeachta HPLC-UV-MS

Rinneadh anailísí HPLC-UV-MS ag baint úsáide as modúl deighilte 2795 Waters (Guyancourt, An Fhrainc) atá feistithe le brathadóir Dual λ 2487 Uiscí. Bhí an colún, na céimeanna soghluaiste, agus an grádán mar a chéile agus a thuairiscítear thuas do HPLC-DAD-ELSD. Fuarthas crómatagram ag 254 agus 280 nm. Rinneadh na hanailísí maise ar ianú leicspréála Bruker (Bremen, an Ghearmáin)/ianú ceimiceach brú atmaisféarach (ESI/APCI) ian Gaiste Ian 3000 móide ar mhodhanna dearfacha agus diúltacha mar a leanas: gás imbhuailte, He; aimplitiúid fuinnimh imbhuailte, 1.3 V; nebulizer agus gás a thriomú, N2, 7 L/nóim; brú an gháis nebulizer, 30 psi; teocht tirim, 340 C; ráta sreafa, 1.0 ml/nim; cóimheas scoilte tuaslagóir, 1:9; raon scanadh, m/z 100–1,000. Ullmhaíodh samplaí ag tiúchan 10 mg/ml i MeOH, lártheifneoirithe ag 13,000 g ar feadh 10 nóiméad, agus scagadh trí scagaire steallaire membrane polytetrafluoroethylene (PTFE) 0.{{27} μm roimh instealladh (20 ul) chun rianta a bhaint d'ábhair ar fionraí.

2.6 Codánú EEP le splanc-chrómatagrafaíocht

Ar dtús, tuaslagadh 3.8 g de BC1 (1), 3.5 g de BC2 (2), nó 4.0 g de CG (3) EEPanna i dtoirt íosta DCM agus aicéatón agus measctha le glóthach shilice (sileaic glóthach: cóimheas sliocht, 2:1). I gcás gach ceann acu, bhí cead ag an tuaslagóir galú go dtí go bhfuarthas púdar tirim fíneáil. I gcás gach EEP, rinneadh an codánúchán trí úsáid a bhaint as gaireas CombiFlash Teledyne ISCO (Lincoln, NE, USA) le colún glóthach shilice (Chromabond® Flash RS 4{{2{0}} SiOH, 4{{83} } g, Macherey-Nagel, Hoerdt, an Fhrainc) ag ráta sreafa 25 ml/nóiméad le cicliheacsán (tuaslagóir A) agus aicéatáit eitile (EtOAc) (tuaslagóir B) ag baint úsáide as an elution grádán seo a leanas: (1) le haghaidh BC1 EEP, 5 faoin gcéad B (0–10 nóim), 5–20 faoin gcéad B (10–30 nóim), 20–30 faoin gcéad B (30–60 nóim), 30–50 faoin gcéad B (60–85 nóim), agus 50–100 faoin gcéad B (85–110 nóim); Bailíodh 160 feadán 20 ml agus comhcheangail iad ina 14 chodán (BC{1_F1 go BC1_F14) ar bhonn a bpróifílí crómatagrafaíochta TLC (cóimheas cicliheacsán:EtOac, 90:10 go 50:50 ); (2) le haghaidh BC2 EEP, 5 faoin gcéad B (0–10 nóim), 5–10 faoin gcéad B (10–20 nóim), 10–30 faoin gcéad B (20–40 nóim), 30–40 faoin gcéad B (40–55 nóim) nóim), agus 40-100 faoin gcéad B (55-70 nóim); Bailíodh 100 feadán 20 ml agus cuireadh le chéile iad ina 8 gcodán (BC2_F1 go BC2_F8) ar bhonn a bpróifílí crómatagrafaíochta TLC (cóimheas cicliheacsán:EtOac, 90:10 go 60:40 ); (3) le haghaidh CG EEP, 5 faoin gcéad B (0–10 nóim), 5–10 faoin gcéad B (10–30 nóim), 10–20 faoin gcéad B (30–50 nóim), 20–40 faoin gcéad B (50–70 nóim). nóim), 40–60 faoin gcéad B (70–80 nóim), agus 60–100 faoin gcéad B (80–90 nóim); Bailíodh 135 feadán 20 ml agus comhcheangail iad ina 23 codán (CG_F1 go CG_F23) ar bhonn a bpróifílí crómatagrafaíochta TLC (cóimheas cicliheacsán:EtOac, 80:20 go 60:40 ).

Rinneadh céim chodánaithe bhreise ar an gcodán BC{{18F7: tuaslagadh 200 mg in toirt íosta MeOH agus meascadh é le glóthach C18-sileacain (C18-silice glóthach: cóimheas sliocht, 2:1). Réadaíodh deighilt ar cholún C18 (Interchim® PF-C18HP, 4 g, Montluçon, an Fhrainc) ag ráta sreafa 15 ml/nóim le huisce (tuaslagóir A) agus MeOH (tuaslagóir B) ag baint úsáide as an elution grádán seo a leanas: 50– 70 faoin gcéad B (0-30 nóim) agus 70-100 faoin gcéad B (30-40 nóim); Bailíodh 80 feadán 8 ml agus comhcheangail iad ina 5 chodán (BC2_F7-1 go BC2_F7-5) bunaithe ar a bpróifílí HPLC-UV (280 nm) .

2.7 1 anailísí NMR H agus 13C

Taifeadadh speictrim NMR (1D agus 2D) de chodáin propolis (7-58 mg) nó uaireanta NPanna i gclóraform díothaithe (CDCl3) nó meatánól díothaithe (CD3OD) (500 ul) ar speictriméadar JEOL NMR ag 400 MHz le haghaidh 1 H agus 100 MHz le haghaidh 13C. Rinneadh turgnaimh NMR (1 H NMR, 13C NMR, DEPT-135, DEPT-90, agus 2D NMR) ar chodáin agus NPanna íona ag 298 K ar speictriméadar JEOL 400 MHz H (JEOL Europe, Croissy -sur-Seine, an Fhrainc) atá feistithe le taiscéalaí inbhéartach 5-mm (ROYAL RO5). Cuirtear sealanna ceimiceacha (δH agus δC) in iúl i luachanna ppm agus J in Hz.

I gcás speictrim 13C NMR (100 MHz), baineadh úsáid as seicheamh díchúplála WALTZ-16 le ham éadála 1.04 s (32,768 pointe sonraí casta) agus moill scíthe de 2 s. Bailíodh idir 1,500 agus 11,000 scanadh chun cóimheas S/N sásúil a fháil. Cuireadh scagaire fairsingithe líne easpónantúil 1 Hz i bhfeidhm ar gach lobhadh saor in aisce ionduchtaithe (FID) roimh an gclaochlú Fourier. Rinneadh speictream a chéimniú de láimh agus bunlíne a cheartú ag baint úsáide as bogearraí MestReNova (Mestrelab Research, Santiago de Compostela, an Spáinn) agus rinneadh tagairt dóibh ar athshondas lárnach an tuaslagóra deuterated ag δC 77.16 ppm (CDCl3) agus δC 49.00 ppm (CD3OD). Le haghaidh feabhsúchán gan saobhadh trí thurgnaimh aistrithe polaraithe (DEPT), bhí idir 512 agus 5,500 scanadh ag teastáil agus rinneadh ailíniú leis an speictrim 13C ag baint úsáide as δC tugtha. Úsáideadh tairseach íosta déine ansin chun comharthaí dearfacha 13C NMR agus DEPT-90 agus comharthaí DEPT{-135 dearfacha agus diúltacha a bhailiú de láimh agus déantáin torainn ionchasacha a sheachaint.

Tógadh Propolis DB1 ar dtús trí chuardach a dhéanamh ar chomhdhúile a thuairiscítear i propolis ar SciFindern, 47 mar thoradh ar DB de 1,471 NP; Rinneadh luachanna δC a thuar ag baint úsáide as tuaróirí NMR (C, H) d’Fhorbairt Ard-Cheimice (ACD). Ó DBanna den sórt sin ina bhfuil NPanna mar aon lena luachanna δC-SDF, chruthaigh an gnáthamh CTypeGen atá san áireamh i MixONat DB oiriúnach: Léadh sé an comhad sonraí spáis (SDF) agus shórtáil sé shifts ceimiceacha de réir cineál carbóin. Cruthaíodh an SDF cineál c riachtanach ansin, ie, cineál c Propolis DB1.43,44

Cruthaíodh Stilbenoids_Phenanthrenoids DB2. Cheadaigh cuardach substaintí ag baint úsáide as na heochairfhocail stilbenoids agus feiniméin sa LOTUS DB ina raibh 276,518 NPs48 (LOTUS, 2022) Stilbenoids_Phenanthrenoids DB2 de 2,681 NPs a fháil mar SDF. Cruthaíodh Flavanones DB3 ansin: Cuardach ar SciFindern47 ag úsáid 2-phenylchroman-4-fostruchtúr amháin a cheadaítear chun 56,679 móilín a roghnú. Laghdaíodh iad tuilleadh go 2,893 ag tagairt do "Teagmhas táirgí nádúrtha" ag baint úsáide as anailís ar na substaintí leis an scagaire "Ról Tagartha" molta ag SciFindern. Tar éis scagadh breise trí chéim scagtha bunaithe ar an meáchan móilíneach ionchais (MW) (ie, 340 go 424 Da), onnmhairíodh gach flavanones ábhartha ina dhiaidh sin mar SDF chun na NPanna a fháil ó Flavanones DB3 (684 NP). I gcás gach NP de DB2 agus DB3, rinneadh luachanna δC-SDF a thuar ag baint úsáide as bogearraí ACD NMR predictors (C, H) chomh maith leis an modheolaíocht a ndearna Nuzillard46 cur síos air roimhe seo chun an SDF c-cineál a fháil go díreach réidh le húsáid ag MixONat. Cuimsíonn an dara ceann do gach comhdhúil den DB na luachanna δC tuartha arna n-eagrú mar mheitil, meitiléine, meatán, nó carbóin cheathartha.

Tógadh Triterpenes DB4 ón PNMRNP3 DB49,50 a allmhairítear mar SDF i bogearraí ACD NMR predictors (C, H) trí chuardach triterpenes le MW idir 100 agus 500 Da (.i. Sonraí cuardaigh: triterpenes; Cuardaigh MW: 100 go 500) chun DB de 6,623 triterpenes a fháil go díreach san fhormáid comhaid c-cineál riachtanach.

Tógadh díorthaigh ailc(en)il resorcinol agus feanól DB5 ón PNMRNP3 DB49,50 a allmhairíodh mar SDF i mbogearraí ACD NMR predictors (C, H) trí NNPanna a chuardach le scafall feanól m-alk(en)il agus rangaithe mar feanóil (ie, 3-(hexadec-8-ga-1-il)feanól Cuardach Fostruchtúr; Cuardaigh Classyfire rang: feanól) chun DB de 44 NP a fháil go díreach san fhormáid comhaid c-cineál riachtanach.

2.8 13C Dímhaalú bunaithe ar NMR ag baint úsáid as bogearraí MixONat

Onnmhairíodh na sonraí buaicliosta agus déine a fuarthas ó gach speictream turgnamhach (13C NMR, DEPT-135, agus DEPT-90) mar . csv ag baint úsáide as bogearraí Microsoft Excel (Microsoft 16.45) agus a úsáidtear mar chomhad ionchuir i mbogearraí MixONat. Is éard atá i gcomhaid dá leithéid liosta de na luachanna δC a ordaíodh in ord laghdaitheach a bhaineann lena ndéine ar an líne chéanna, agus camóg eatarthu.

Data were then processed using MixONat, which exploits any dataset that provides molecular structures in the previously described SDF (i.e., c-type DB1–5 file format). Based on this information, MixONat was used to compare the experimental δC values of the fractions to the predicted δC-SDF values from the DB and made suggestions for specific NPs potentially present in the analyzed sample. In the end, MixONat provided NP proposals with scores ranging from 0 to 1, i.e., from 0% to 100% (where 1 corresponds to a perfect match and 0 indicates no similarity for a given compound from the used DB). Acceptable values for putative identification were >0.70. Ina dhiaidh sin, cuireadh sonraí turgnamhacha na NPanna leis na scóir is fearr i gcomparáid leis an litríocht.

2.9 Íonú

2.9.1 HPLC Ullmhúcháin

Rinneadh íonú na gcodán BC{{0}}F6 agus BC1_F8 (40 mg in 2 ml de MeOH) ag baint úsáide as ullmhúchán Shimadzu LC-20AP crómatagraf leachtach atá feistithe le brathadóir UV-vis SPD-40 (Noisiel, an Fhrainc), lúb insteallta 2 ml, agus bailitheoir codáin FRC-10A, ag baint úsáide as colún ullmhúcháin C18 (25{{39) }} mm 21.2 mm id, 5 μm) (Tóir XRs 5, Agilent, Les Ulis, An Fhrainc) ag ráta sreafa 21.24 ml/nóim. Bhí an chéim shoghluaiste comhdhéanta d’aigéad formach 0.1 faoin gcéad in uisce (tuaslagóir A) agus meatánól (tuaslagóir B) agus rinneadh an deighilt ag baint úsáide as an ngrádán seo a leanas: (1) do BC1_F6, 40 faoin gcéad B (0–5 nóim), 40-70 faoin gcéad B (5-20 nóim), agus 70-90 faoin gcéad (20-30 nóim); (2) le haghaidh BC1_F8, 40–70 faoin gcéad B (0–15 nóim) agus 70–90 faoin gcéad (15-25 nóim). Fuarthas crómatagram ag 254 agus 280 nm.

2.9.2 Eastóscadh pas soladach (SPE)

Chun an codán is mó polar de BC2-EPP (200 mg i 5 ml de MeOH measctha le 350 mg de C18-glóthach shilice tar éis galú) a fháil, rinneadh an íonú ag baint úsáide as colún eastósctha pas soladach C18 (2 g/15 ml, Thermo Scientific™, Villebon-sur-Yvette, An Fhrainc) le huisce: MeOH 7:3 (10 ml) agus uisce: MeOH 6:4 (10 ml). Cuireadh feadáin 4–10 le chéile chun an codán polar de BC2 (BC2_SPE) a chruthú bunaithe ar a bpróifílí HPLC-UV (330 nm).

2.10 Measúnachtaí frithocsaídeacha agus frith-AOIS

2.10.1 Fréamhacha DPPH a scaveneáil

Rinneadh an mheastóireacht scavening radacach DPPH ar EEPanna Beninese mar a thuairiscítear roimhe seo.51 Go hachomair, caolaíodh samplaí tástáladh in EtOH absalóideach ag 0.02 mg/ml ó thuaslagáin stoic ag 1 mg/ml i démheitiolsulfocsaíd (DMSO). Cuireadh aliquots (100 ul) de na tuaslagáin chaolaithe seo i 96-phlátaí toibreacha trí chóip. Cuireadh thart ar 25 ul de thuaslagán DPPH úr-ullmhaithe (1 mM) le 75 ul de EtOH iomlán ag baint úsáide as injector an léitheora microplate (Infinite® 200, Tecan, An Fhrainc) chun toirt deiridh de 200 ul in aghaidh an tobair a fháil. Tar éis 30 nóiméad sa dorchadas ag teocht chomhthimpeallach, socraíodh an t-ionsúcht ag 517 nm. Baineadh úsáid as EtOH mar bhán, ach úsáideadh tuaslagáin 10, 25, 50, agus 75 μM de Trolox (analóg hidreafail-tócaifearóil) don chuar calabraithe. Baineadh úsáid as sampla de thuaslagán aigéid chlorogenic (0.02 mg/ml) mar chaighdeán rialaithe cáilíochta. Cuireadh na torthaí in iúl mar choibhéisí Trolox (micromhóil TE in aghaidh g an eastóscáin).

2.10.2 Measúnacht Frith-AOIS

Cinneadh éifeachtaí eastóscáin propolis agus na cúig mhórdhíorthach naringenin scoite ar fhoirmiú AGE mar a thuairiscítear roimhe seo.51 Go hachomair, goradh albaimin serum buaibheach (BSA) (10 mg/ml) le D-ribose ({{). 13}}.5 M) mar aon leis an cumaisc tástáladh (3 μM go 3 mM) nó sliocht (1 ug go 1 mg) i maolán fosfáit 50 mM ag pH 7.4 (NaN3, 0.02 faoin gcéad). Goradh tuaslagáin i 96-plátaí micrititer tobair ag 37 céim C ar feadh 24 h i gcóras dúnta sular tomhasadh fluaraiseacht AGE. Baineadh fluaraiseacht ón sampla gortha i gcoinníollacha comhionanna gan D-ribose le haghaidh gach tomhais. Cosúil le Pentosidine (excitation ag 335 nm, astú ag 385 nm) Rinneadh fluaraiseacht AGE a thomhas de réir fluairiméadrachta. 52 sainmhíníodh luachanna IC50 mar an méid eastósctha (ug / ml) nó rialú dearfach (μM) a theastaíonn chun foirmiú AGE a laghdú 50 faoin gcéad. i gcoibhneas leis an rialú diúltach. De réir na measúnachta bailíochtaithe staidrimh,53 is leor anailís amháin chun IC50 cruinn a chinneadh.

3. TORTHAÍ AGUS PLÉ

3.1 Próifíleáil chromatagrafach

Léirigh próifíliú ginearálta LC na n-ocht Beninese agus an Congolese EPP ag baint úsáide as an brathadóir ELSD leath-uilíoch go raibh comhdhúile neamhpholacha i ngach sampla, a bhí eluted ag deireadh na crómatograms (Fíor 1). Chuir BC1 líon mór níos mó comhdhúile polacha i láthair freisin, agus thaispeáin BC2 roinnt comhdhúile polacha meánacha i méideanna níos lú. Ba chosúil go raibh comhdhúile neamhpholacha i CG EEP an-difriúil ó chomhdhúile Beninese.

Mar sin, mar thoradh ar phróifíliú ELSD tháinig trí shampla éagsúla agus bhunaidh a ndearnadh tuilleadh imscrúdaithe ar a gcomhdhéanamh: BC1, BC2, agus CG.

Ar an gcéad dul síos, rinneadh anailísí GC-MS, ag déanamh comparáide idir an ilroinnt MS agus an NIST DB, chun na haicmí ceimiceacha a shainiú agus, nuair ab fhéidir, chun na comhábhair a shainaithint. Cuirtear sainaithint toimhdeach (bunaithe ar chéatadán na meaitseála leis an NIST DB) agus aicmí ceimiceacha na gcomhdhúl i láthair i dTábla 2 (tá sonraí próifílithe GC-iomlán sruth ianach [TIC] léirithe i bhFíor SI-2).

Chuir gach EEP Beninese na próifílí céanna de chomhdhúile neamhpholacha i láthair, lipéadaithe mar litir A go F, ach d'fhéadfadh a méideanna athrú. Aithníodh iad go toimhdeach mar - nó -amrinone (A), -amyrin (B), lupenone (C), -amyrin (D), - nó -amyrin aicéatáit (E), agus aicéatáit lupeol (F) (cf. Fíor SI -3), cur síos orthu cheana féin mar NPanna móra i propolis Mheicsiceo.54 Zhang et al. (2014) agus Tamfu et al. (2020) cur síos freisin ar thríterpenoids mar aicéatáití amyrin/lúpeol agus amyrin/lúpeol i samplaí éagsúla propolis na hAfraice.41,55 Níor chuir ach BC1 NPanna breise i láthair idir Rt 10 agus 15 nóim a moladh mar stilbenoidí meitiocsailithe nó feinintréin de réir a bpatrúin ilroinnte. Léirigh an EEP Congolese próifíl difriúil ó na cinn Beninese, le eistir eitile aigéad C16 agus C18 mar chomhdhúile níos so-ghalaithe a bhaineann le scór meaitseála maith de 94 faoin gcéad , díorthach feanól ag Rt 13.1 min, trí dhíorthach resorcinol sa raon 14– 17 min, agus cineálacha éagsúla díorthaigh triterpene tar éis Rt 21 min.

Ina theannta sin, rinne HPLC-DAD-MS anailís ar EPPanna chun Nanna neamh-luaineacha a shamhlú (cf. Fíor SI-4). Léirigh an phróifíliú difriúil gur thaispeáin BC1 EEP líon mór de chomhdhúile meánacha polacha le crómafóir ag ionsú ag 280 nm, chomh maith le BC2 i gcomhréireanna níos lú, agus bhí próifíl UV an-lag ag 280 nm ag CG.

3.2 Comhdhéanamh ceimiceach BC1 agus BC2

Chun a gcuid NPanna móra a shainaithint trí úsáid a bhaint as dídhaonrú 13C NMR bunaithe ar MixONat agus DBanna oiriúnacha, baineadh amach ansin codán garbh de BC1 agus BC2 EEP le splanc-chrómatagrafaíocht. Go deimhin, le haghaidh BC1, léirigh anailís GC-MS láithreacht stilbenoids nó feiniméin mheitiocsailithe, rud a thug treoir dúinn na Stilbenoids ar leith a thógáil_Phenanthrenoids DB2. I gcás BC2, ach amháin i gcás na gcomhdhúile polacha níos mó ag Rt 3.8 min, léirigh na comhdhúile go léir speictrim UV de flavonols flavanones-dihydro, rud a mhol cruthú na Flavanones DB3.

Mar a léirítear i dTábla 3, mhol MixONat dihydrophenanthrenes 1 agus 3-5, feinanthrenes 2 agus 6, agus an dihydro stilbene 7 (Fíor 2) i BC1 EEP agus bailíochtaíodh iad trí chomparáid a dhéanamh le sonraí litríochta (cf. faisnéis tacaíochta). Nuair ba ghá, baineadh úsáid as scagaire MW bunaithe ar shonraí HPLC-MS.

Níos cruinne, i measc 9,10-díorthaigh dhéhidrifiréinthréine as 2,681 NP in DB2, mhol MixONat 6-methocsacoelonin (2,7-déhidroxy-3,5-dimethoxy{ {10}},10-déhidreafheinthréine; 3, céim 1, scór 0.75, Fíoracha SI-13 agus SI-14) in BC{{ 18}}Deimhníodh F5 agus a láithreacht trí chomparáid a dhéanamh le sonraí foilsithe NMR. Tá sé aitheanta go fóill ó speicis Combretaceae56 agus sa magairlín Bulbophyllum vaginatum; 57 agus 2,7-déhidrocsa-3,4,6-trimethocsaic- 9,10-déhidreanthréine (4, céim 1, scór 0.88, Fíoracha SI{{33) }} agus SI-16) hipitéiseach in BC1_F2. Tá cur síos déanta ar Chomhdhúil 4 cheana féin i propolis na Seineagáile58 agus deimhníodh a láithreacht bunaithe ar shonraí tuairiscithe ag Pettit et al. ón gcrann Afracach Combretum caffrum59 agus le Lu et al. ó Dioscorea nipponica Makino.60

Bhí 2,6-dé-hiodrocsaí-3,4,{6}}trimethocsa-9,10-dé-hidreafheeantréin(5, céim 8, scór 0.76, Fíoracha SI-15 agus SI-16) in BC1_F2 agus 2,6,7-tríhiodrocsa{{20 }},4-dimethoxy-9,10-dé-hidreafheinthréine (1, céim 2, scór 0.5, Fíoracha SI-5 agus SI-6 ) in BC{{30}}F6-1 nuair a úsáideadh scagaire móilíneach ag MW 288 Da. I gcás 1, bhí an scór sách íseal (0.5); dá bhrí sin, rinneadh turgnaimh bhreise 2D NMR (comhghaolta candamach iolracha heitrea-núicléacha [HMQC], nascacht il-bhannaí heitrea-núicléach [HMBC], speictreascópacht um éifeacht ollchóiriúcháin núicléach [NOESY], cf. figiúirí SI-7–SI-10). a dhéantar chun an struchtúr a dhearbhú; le haghaidh 5, bhí an scór 0.76, ie, níos airde ná 0.70. Luaigh Letcher et al an dá NP (1 agus 5) seo den chéad uair. i speicis Combretum61,62 agus 1 le fáil cheana féin i propolis tSeineagáil.58

I measc na ndíorthach feanthrene, rinne MixONat hipitéisiú 2,6,7-trihidroxy-3,4-dimethoxyphenanthrene (2, céim 1, scór 0.88, Figures SI-11 agus SI{{10}}) in BC1_F8-1, a deimhníodh trí chomparáid a dhéanamh lena sonraí speictreach a ndearna Letcher et al. i Combretum apiculatum. 61 2,7-Déhidroxy-3,4,6-trimethoxyphenanthrene (6, céim 5, scór 0.94, Fíoracha SI-17 agus SI-18) Moladh in BC1_F4 a bhí scoite amach roimhe seo ó Photolida Chinensis63.

Mhol MixONat an chéad chéim (scór 1.0, Fíoracha SI-17 agus SI-19) Combretastatin B{{0} (7), stilbene dihydro, in BC1 EPP agus é in úsáid scagaire MW (MW 304 Da) agus bailíochtaithe trí chomparáid a dhéanamh le sonraí NMR a ndearna Pettit et al. i caffrum Combretum. 59

Tá comhdhúile 2, 6, agus 7 aitheanta cheana féin i propolis na Seineagáile.58

Tá sonraí NMR 1 H agus 13C de 1–7 ar fáil san fhaisnéis tacaíochta.

Maidir le BC2, aithníodh seacht gcomhdhúil a bhaineann le dhá aicme struchtúracha polyphenols, díorthaigh chromóin-C-glucoside agus prenylflavanone (8-14), agus cuireadh síos ar chuid acu den chéad uair i propolis (Fíor 3).

Níor thug an próiseas 13C NMR-bhunaithe ag baint úsáide as MixONat agus DB1 go DB5 torthaí ábhartha a mhol NPanna bunaidh. Sainaithníodh dhá mhórtháirge (8–9) go hiomlán mar mheascán ag úsáid mais-speictrim agus sonraí 1D agus 2D NMR (1 H, 13C, HMQC, HMBC, cf. Fíor SI-20–SI-23) agus aithníodh mar florin (8) agus isobiflorin (9), dhá chromanone-Cglucosides cur síos orthu nua i propolis, cur síos orthu roimhe seo i Pancratium biflorum64 agus clóibh de Eugenia caryophyllata, faoi seach.65

Maidir le díorthaigh flavanone, i measc 688 NP in DB3, mhol MixONat 6-prenylnaringenin (10, céim 1, scór 0.95, Fíoracha SI- 24 agus SI{{8 }}) cur síos air cheana i propolis dearg na Nigéire66 in BC{{10}}F7-1. 6,8-Diprenylaromadendrin (12, céim 1, scór 1.0, Figiúirí SI-28 agus SI-29) agus 6,8-diprenylnaringenin (lonchocarpol A ) (13, céim 1{0, scór 0.84, Fíoracha SI-30 agus SI-31), a fuarthas roimhe seo i samplaí propolis Camarún,42 bailíochtaíodh iad in BC2_F{ {30}} agus BC2_F5, faoi seach. 6-Tuairiscíodh agus deimhníodh Geranylnaringenin (14, céim 1, scór 0.84, Figiúirí SI-32 agus SI-33), ar cuireadh síos orthu roimhe seo i propolis ó Oileáin Sholamón,67 i BC{{41} }}F7-5. Ar deireadh, mhol MixONat 6-naringenin dimethylallyl (11) sa dara háit i BC2_F6 (rang 2, scór 0.65, Fíoracha SI-26 agus SI- 27). Moladh an t-isiméir i suíomh 8 sa chéad suíomh, ach léirigh comparáid le sonraí litríochta 68,69 gurb é an t-isiméir i suíomh 6 é. Bhí cumaisc 11 nua i propolis ach cuireadh síos air cheana féin i sleachta orgánacha Monotes africanus. 70 1 Tá sonraí NMR H agus 13C de 8-14 ar fáil san fhaisnéis tacaíochta.

【Le haghaidh tuilleadh eolais: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】