Tréithriú Proanthocyanidins Nádúrtha Agus Alcaileach-Ocsaithe i Sleachta Plandaí Le Taifeach Ultra-Ard UHPLC-MS/MS

Le haghaidh tuilleadh eolais. teagmháiltina.xiang@wecistanche.com

Teibí: Sa staidéar seo, rinneamar anailís ar chomhdhéanamh proanthocyanidin (PA) de 55 sliocht plandaí roimh agus tar éis alcaileachocsaídiúcháintrí UHPLC-MS/MS ultra-ard. Rinneamar na struchtúir PA nádúrtha a shaintréithe go mion agus rinneamar staidéar ar na hathruithe sofaisticiúla sna struchtúir PA modhnaithe agus na patrúin agus na samhlacha tipiciúil imoibrithe laistigh de ranganna PA éagsúla mar gheall ar ocsaídiú. Ba iad na LAPanna nádúrtha ríomhairí pearsanta de chineál A agus B, PDanna, agus meascáin PC/PD. Chomh maith leis sin, bhraitheamar PAanna galolactha. Bhí ríomhairí pearsanta de chineál B i sleachta plandaí éagsúla sách cobhsaí agus níor léirigh siad aon mhodhnú nó mionathrú mar gheall ar anocsaídiú alcaileach. I gcás roinnt samplaí, bhraitheamar imoibrithe ionmhóilíneacha ríomhairí pearsanta a tháirgeann naisc éitear de chineál A. Bhí ríomhairí pearsanta de chineál A sách cobhsaí freisin gan aon mhodhnú nó mionathrú, ach i roinnt plandaí, foirmiú éitear breisenaiscbraitheadh. Bhí PAanna ina raibh aonaid PD níos imoibríoch. Tar éis ocsaídiúcháin alcaileach, níor bhraith MS na PAanna seo ná a dtáirgí ocsaídiúcháin a thuilleadh cé gur bhraith UV cineál difriúil agus/nó cnapán PA moillithe fós ag UV ag 280 nm. Bhí PAanna Galloylated sách cobhsaí faoi ocsaídiú alcaileach má bhí siad bunaithe ar PC, ach bhraith muid an tiontú intramolecular ó B-cineál go A-cineál. Bhí na PDanna galolalaithe níos imoibríocha agus d'fhreagair siad ar an gcaoi chéanna le PDanna neamhghalaithe.

Eochairfhocail: mais-speictriméadracht ardtaifigh; orbitrap; ocsaídiú; tainniní; UHPLC-DAD-MS/MS

Cliceáil anseo chun níos mó táirgí a fhoghlaim

1.Réamhrá

Proanthocyanidins(PAs, syn. tainniní comhdhlúite) is olagaiméirí agus polaiméirí iad comhdhéanta d'aonaid mhonaiméireacha flavan(Fíor 1). Eascraíonn éagsúlacht na struchtúr PA ​​go príomha óna bpatrúin hiodrocsailiú, ord seicheamhach na n-aonad flavan, agus an méid polaiméirithe (DP), chomh maith le difríochtaí steiré-cheimic ag C2 agus C3 agus éagsúlacht sa suíomh. agus steirécheimic idirflavanoidbannaí [1] . Is iad na PAanna is coitianta ná procyanidins (ríomhairí pearsanta) ar a bhfuil aonaid catechin (epi) agus próifinidins (PDanna) arb éard iad aonaid (epi) gallocatesine (Fíor 1). Tá na naisc C4→C8 ag na struchtúir PA a léirítear san fhigiúr. Mar sin féin, is féidir LAPanna a nascadh le bannaí C4→C6, agus ní féidir linn an dá nasc seo a scaradh óna chéile de réir mais-speictriméadrachta.

PAs are the most commonly available subgroup of plant tannins, responsible for nearly 90% of the world's overall market for industrial tannins (>iolraí 100-kilo tonna in aghaidh na bliana), agus tá siad níos tarraingtí go ceimiceach agus go heacnamaíoch mar bhithpholaiméir [2-5]. Faoi láthair, ní úsáidtear ach roinnt acmhainní, mar shampla coirt nó coillte caolaigh, mimosa, quebracho, darach, cnó cócó, mangróf, sumach, myrobalans, agus tarra, lena dtáirgeadh agus go príomha le haghaidh éilimh súdaireachta leathair, fíona, mianraí. tionscail snámhachta, agus druileála ola, chun greamacháin a ullmhú, chomh maith le cothú ainmhithe [4,6,7]. Mar sin féin, d’fhéadfadh fiú dramhaíl nó seachtháirgí ó láimhseáil agus próiseáil torthaí, glasraí, agus acmhainní foraoise ó na feidhmeanna tionsclaíocha thuasluaite a bheith ina foinse fhéideartha do PAanna nádúrtha [8-11]. D’fhéadfaí na PAanna a mhodhnú tuilleadh freisin chun a n-inúsáidteacht agus a mbithghníomhaíochtaí a fheabhsú [12,13].

Is féidir airíonna ceimiceacha PAanna a mhodhnú trí imoibrithe díorthaithe [12]. Áirítear leis na frithghníomhartha seo, mar shampla, O-aiciliú trí imoibriú le clóirídí aigéadacha nó ainhidrídí nó ailciliú le hailídí ailcile. Déanann díorthú modhnú ar airíonna fisiciceimiceacha PAnna dá bhfeidhmchláir tráchtála agus dá dteicneolaíochtaí íonúcháin. Mar sin féin, chun na frithghníomhartha iarbhír atá ag tarlú a thuiscint go fírinneach, is gá roinnt paraiméadair, mar shampla na himoibrithe agus na tuaslagóirí a úsáidtear, teocht, pH, agus am imoibrithe a rialú [12]. Bealach simplí tapa chun inúsáidteacht PA plandaí a fheabhsú ná iad a ocsaídiú chun PAanna nua a chruthú le struchtúir mhóilíneacha athraithe. Cé go bhfuil na coinníollacha imoibrithe ocsaídiúcháin ar eolas go maith agus go bhfuil meicníochtaí imoibrithe éagsúla molta, is eol go príomha na hathruithe struchtúracha comhfhreagracha do PAanna beaga aonair [14-18]. Mar shampla, pléadh go galánta imoibrithe ocsaídiúcháin agus athshocraithe olanna difriúla monaiméireacha agus diméireacha 30 bliain ó shin, rud a thaispeánann go rialaítear ceimic na PAanna seo ag pH alcaileach trí fhoirmiú A-agus/nó. quinone-methides B-fáinne mar idirmheánacha an-imoibríocha is cúis leis na frithghníomhartha athshocraithe agus tiontú ocsaídiúcháin de chineál B go PAanna de chineál A[15]. Ina áit sin, ní fios iompar meascáin PA sna sleachta plandaí, agus is dócha go bhfuil sé seo mar gheall ar dheacrachtaí maidir le hanailís a dhéanamh ar PAanna tosaigh atá difriúil ó thaobh struchtúir de, a dtugtar dúshlán níos mó fós tar éis ocsaídiúcháin. Inár staidéar roimhe seo, rinneamar tástáil ar cibé an bhféadfaí cineálacha éagsúla PA nádúrtha a mhodhnú go ceimiceach chun cineálacha nua PAanna a tháirgeadh agus rinneamar staidéar ar éifeachtaí ocsaídiúcháin alcaileach neamhshonrach a dhéanann aithris ar an bpróiseas eastósctha alcaileach a úsáidtear go minic do dhramhaíl choirt [19-23]ar. 102 PA-ina bhfuil sleachta plandaí [13]. Léirigh na torthaí imoibríochtaí difriúla do ríomhairí pearsanta agus PDanna. Thug an toradh le fios go bhféadfaí PA plandaí a mhodhnú ag pH ard, agus chuir láithreacht grúpaí PD go mór le dóchúlacht imoibrithe modhnuithe. Críochnaíodh an príomhbhealach imoibrithe a bheith intramolecular, ach le haghaidh PA-saibhir PD-saibhir agus gallovlated, cuireadh in iúl idir imoibrithe laistigh agus idirmhóilíneacha [13]. Ina theannta sin, léirigh staidéir eile go n-áirítear ocsaídiú PAs imoibrithe intramolecular agus intermolecular araon [14,15,24,25].

Tá sé dúshlánach tréithriú agus tuiscint mhionsonraithe ar PAanna nádúrtha agus ocsaídithe, ach tá dul chun cinn le déanaí in ionstraimíocht mais speictriméadrach crómatagrafaíochta leacht crómatagrafach ultra-ardfheidhmíochta (UHPLC-MS/MS) le hanailíseoirí mais ardtaifigh in ann tréithriú a dhéanamh ar go leor PA plandaí éagsúla. [18,26-28]. Is iad na hanailíseoirí mais coitianta le haghaidh tréithriú PAanna ná orbitrap [27,28] agus quadrupole

am eitilte(OTOF)[29,30] mar gheall ar a n-airíonna ardtaifigh, a cheadaíonn maiseanna cruinne agus foirmlí móilíneacha comhfhreagracha na PAanna a ndearnadh staidéar orthu i eastóscáin phlanda a chinneadh. Is gnách go mbíonn meascán de struchtúir oligo-agus polaiméireacha éagsúla ag PAanna a fhaightear sa nádúr, a thugann iain luchtaithe iolrú in ianú leictreaspré, ag leathnú an raon mais a úsáidtear [30-32]. Ina theannta sin, tá patrúin aitheanta ilroinnte saintréithe ag PAanna, ar féidir iad a úsáid lena sainaithint: áirítear orthu seo scoilteacht quinone-methide (QM), scoilteadh fáinne heitrea-chiorclach (HRF), agus ilroinnt retro-Diels-Alder (RDA) [27, 31-33]. Bíonn na patrúin scoilte céanna i láthair de ghnáth do PAanna de chineál A agus de chineál B araon, agus tá difríocht 2 Da idir na luachanna m/z a breathnaíodh le haghaidh PAanna de chineál A a bhfuil nasc éitear amháin acu agus na PAanna de chineál B comhfhreagrach [26,{{ 19}}].

Sa staidéar seo, bhaineamar úsáid as UHPLC in éineacht le mais-speictriméadracht tandem ardtaifigh d’fhonn (a) mionstaidéar a dhéanamh ar struchtúir nádúrtha PA i 55 sampla planda saibhir PA, (b) chun na hathruithe sofaisticiúla sna struchtúir PA leasaithe a fheiceáil tar éis. an ocsaídiú aerga i gcoinníollacha alcaileach agus (c) patrúin agus samhlacha tipiciúla imoibrithe laistigh d'aicmí éagsúla PA de bharr an ocsaídiúcháin a aithint.

2. Torthaí agus Plé

Roghnaigh muid 55 sampla plandaí PA-saibhir ina raibh meascáin suimiúla ach casta de PA nádúrtha bunaithe ar ár staidéar roimhe seo [13]. Rinneadh na samplaí plandaí seo a ocsaídiú ar an gcaoi chéanna trí ocsaídiú aeir faoi choinníollacha alcaileach mar atá i [13] agus tar éis an ocsaídiúcháin, bhí PAanna níos casta fós. Rinne UHPLC-DAD staidéar ar na PAanna nádúrtha agus mionathraithe seo atá nasctha le Q-orbitrap MS/MS ultra-ardtaifigh chun athruithe sofaisticiúla i struchtúir PA a bhrath. Sainaithníodh PAanna bunaithe ar a n-ian ina n-aonair agus/nó arna n-iolrú lena maiseanna beachta comhfhreagracha agus lena bhfoirmle mhóilíneach. Rinne LC céim droim ar ais na hanailísí, agus dá bhrí sin, bhí PAanna oligomeric agus polaiméireacha i láthair go príomha mar chromáin gan réiteach sna crómatograms UV ag 280 nm, féach sliocht duille Ruprechtia salicifolia i bhFíor 2A mar shampla. Sa chrómatagram ian iomlán, bhí ianú comhdhúile feanólacha eile níos déine ná mar a bhí ag na PAanna, agus dá bhrí sin, ní raibh an chromán PA chomh soiléir (Fíor 2B). Mar gheall ar chruinneas an orbitrap, áfach, is fusa léirmhíniú thorthaí MS mar go bhfuil patrúin iseatópacha na n-ian iolraithe muirearaithe sainmhínithe go soiléir, agus is féidir forluí beanna a d'fhéadfadh a bheith ann a bhrath, rud a fhágann gur féidir maiseanna cruinne agus foirmlí móilíneacha oligo- éagsúla a chinneadh. agus PAanna polaiméire. Mar shampla, taispeánann cateicín galúilated(epi) ag m/z 441, PCat dimeric galoylated m/z729, agus PC trimeric gallovlated ag m/z 1017 beanna dea-dheighilte i gcrómatagramáin ian eastósctha (EICanna)i bhFíor 2C-E, agus iad. Is féidir iad a bhrath go héasca bunaithe ar a speictream UV agus mais, lena n-áirítear maiseanna cruinne agus an fhoirmle mhóilíneach comhfhreagrach. Bhí na torthaí a fuarthas anseo comhsheasmhach le torthaí roimhe seo a fuair MS/MS, ag taispeáint go raibh 24 mg/g de PAanna i nduilleoga Ruprechtia salicifolia, nach raibh ach 3 faoin gcéad díobh ina PAanna ina raibh PD, go raibh cuid acu galoilithe, agus fuarthas an mDP. a bheith 7 [13].

2.1.B-Cineál ríomhairí pearsanta sna Sleachta Gléasra Neamh-ocsaídithe Tosaigh

Braitheadh ​​ríomhairí pearsanta de chineál B sna sleachta plandaí bunaithe ar a n-ianain mhóilíneacha luchtaithe ina n-aonar agus iolrú i dteannta leis na patrúin ilroinnte sainiúla. Mar shampla, is "Nigra" iad ríomhairí pearsanta i Begonia Bower Taispeántar sraith ar leith d'ian [MH] scartha le 288 Da ó m/z289 go m/z 1729 a fhreagraíonn do ríomhairí pearsanta B-chineál ó mhonaiméir go heicseamer agus de [M{{ 6}}H]' hiain deighilte le144 Da ó m/z 1008 go m/z 1296 a fhreagraíonn do ríomhairí pearsanta de chineál B ó heiptaméirí go hainmnitheoirí (Tábla S1). Léirigh mais-speictrim na ríomhairí pearsanta monaiméireacha, ie, flavan{-3-ols catechin agus epicatechin, blúire ian sainiúil ag m/z 245 mar a tuairiscíodh roimhe seo [3132,36].

Go ginearálta, léirigh MS/MS dimers PC de chineál B na patrúin ilroinnte tréithiúla a tháirgeann iain ag m/z 287 agus 289 (scoilt QM), m/z 425, agus 407 (ilroinnt RDA agus díothú seicheamhach uisce) agus m /z 451(HRF; Fíor 3). Meastar gurb é an ilroinnt RDA an patrún ilroinnte is tábhachtaí maidir le tréithriú dimers PC de chineál B agus ceapadh go bhfuil an ilroinnt ar an aonad sínte níos fabhraí go fuinniúil toisc go dtáirgeann sé iain bhlúire le córas hipearchomhchuingeach π-π níos mó ná an. Ilroinnt RDA ar an aonad teirminéil [31-33].

2.2.A-Cineál ríomhairí pearsanta sna Sleachta Gléasra Neamh-ocsaídithe Tosaigh

Deimhníodh láithreacht PAanna de chineál A sna sleachta plandaí tosaigh ag a bpatrúin ilroinnte tréithiúla cosúil le PAanna de chineál B. Mar shamplaí, taispeántar agus pléitear go mion na conairí ilroinnte sainiúla agus na sonraí MS/MS de dimer agus trimer PC de chineál A a bhfuil nasc amháin de chineál A acu (Fíoracha 4 agus 5). Tháirg ilroinnt an dimer PC de chineál A ceithre ian blúirí (Fíor 4). Tháirg ilroinnt RDA an aonaid teirminéil ian ag m/z 423, rud a dhearbhaíonn láithreacht nascachta de chineál A [26,34,35]. Ina theannta sin, molaimid go bhféadfadh ilroinnt RDA an aonaid shínte agus an caillteanas seicheamhach uisce an t-ian a tháirgeadh ag m/z 407. Is é an t-ian ag m/z 449 an táirgeadh HRF, ie., toradh an chaillteanais an t-aonad phloroglucinol [26]. Bhí na hiain ag m/z 285 agus 289 ag freagairt do scoilteacht QM. Mar an gcéanna, thaispeáin an trimer PC de chineál A ian móilíneach ag m/z 863 agus iain shaintréithe blúirí i MS/MS ag m/z 711.693.573.559,451,411 agus 289 mar a thuairiscigh Sui et al. (2016) roimhe seo. )[26]. Tháirg ilroinnt RDA an trimer PC de chineál A ian ag m/z 711, rud a dhearbhaíonn arís láithreacht nascachta A-cineál de réir an staidéir roimhe seo [26] agus tugann sé le fios go bhféadfadh nasc de chineál A a bheith idir dhá fhadú. aonaid. Molaimid go gcomhfhreagraíonn an t-ian ag m/z 693 do chaillteanas seicheamhach uisce agus go dtacaíonn sé le suíomh nascála de chineál A, mar a thaispeántar i bhFíor 5. Ina theannta sin, molaimid go ndéanfaí RDA breise an fháinne C heitreafháinneach den taispeántar an t-ian ag m/z559. Ba bheag an t-ian seo inár gcuid staidéir. Bhí na hiain ag m/z573 agus 289 ag freagairt don scoilt QM den nasc idirfhlavánóideach íochtair [26]. Chomh maith leis sin, bhraitheamar iain ag m/z 575 agus 287. Molaimid go bhféadfadh na hiain ag m/z 451 agus 411 a bheith ag freagairt do HRF an fháinne C heitreafháinnigh den aonad lárfhlaváin-3-ol a thacaíonn le suíomh an Nasc de chineál A idir na haonaid shínte de réir Fíor 5.

2.3.Athruithe ar Ríomhairí de Chineál B i Sleachta Plandaí mar gheall ar an Ocsaídiú Alcaileach

Tar éis an ocsaídiúcháin, rinneadh ríomhairí pearsanta B-cineál i sleachta plandaí éagsúla a mhodhnú go difriúil. Níor léirigh cuid de na samplaí mionathruithe nó mionathruithe; féach Fíor 6A, B, mar shampla, le haghaidh oligomers PC de chineál B níos giorra i sliocht duille Begonia bower tá "Nigra" roimh agus tar éis ocsaídiúcháin. Nuair a ocsaídíodh na cineálacha sleachta plandaí seo, bhí mais speictrim iomlán na n-sleachta plandaí tosaigh agus ocsaídithe cosúil. Mar sin féin, aimsíodh difríochtaí beaga sna sonraí mais-speictriméadracha. Mar shampla, bhí an dimer PC ag m/z 577 in éineacht le m/z575, agus an trimer PC ag m/z865 le m/z 863, faoi seach. Nuair a bhí méideanna na ríomhairí pearsanta íseal roimh an ocsaídiú, tar éis an ocsaídiúcháin d'imigh a gcuid comharthaí beagnach as an mais-speictrim, rud a thug le tuiscint go raibh siad tar éis iompú go neamh-inaitheanta nó díghrádaithe mar gheall ar an ocsaídiú. Breathnaíodh an feiniméan seo, mar shampla, do na sleachta duille de characias Combretum Indicum agus Euphorbia ina raibh méideanna ísle de bheagán oligiméirí PC gearr agus tacaithe ag na sonraí MS/MS roimhe seo a léirigh gur laghdaigh an t-ábhar PA ó 4 mg / mL go 1 mg. /mL agus 7 mg/mL go 1 mg/mL, faoi seach, mar gheall ar an ocsaídiúcháin [13]. D'fhéadfadh baint a bheith ag an bhfeiniméan seo leis na coinníollacha turgnamhacha a úsáideadh, rud a chiallaíonn go raibh siad níos déine nuair a bhí an t-ábhar PA tosaigh íseal. I roinnt samplaí, rinneadh cuid de na ríomhairí pearsanta B-cineál a mhodhnú níos mó, féach Fíor 6C, D, mar shampla, le haghaidh PColigomers B-cineál níos giorra i sliocht bileog Cyperus owoaii roimh ocsaídiú agus dá éis. Nuair a ocsaídíodh na cineálacha sleachta plandaí seo, aimsíodh difríochtaí infheicthe sa mais-speictream iomlán a léiríonn an difríocht mhais de 2 Da i gcomparáid le ríomhairí pearsanta tosaigh (Fíor 6C, D, Tábla S2).

Is eol go maith go dtugann ocsaídiú polyphenols o-dé-hiodrocsa, ie., fáinne B catechol na ríomhairí pearsanta, o-quinones le difríocht maise de 2 Da. Go deimhin, thugamar faoi deara gur féidir leis an gcineál seo ocsaídiúcháin tarlú freisin in anailísí mais-speictriméadracha. Is féidir le mionchomharthaí a bheith sa mhais-speictream a bhfuil na luachanna m/z acu 2 Da níos lú ná luachanna m/z na ríomhairí pearsanta a chomhfhreagraíonn d’ocsaídiú nó d’fhoirmiú féideartha foirmeacha quinone de ríomhairí pearsanta le linn an ianaithe (sonraí gan foilsiú). Tá sé indéanta anseo san ocsaídiú alcaileach, gurb iad na polyphenols o-dé-hiodrocsa na chéad o-quinones. Mar sin féin, tá na 0-foirmeacha quinone a fhoirmítear éagobhsaí agus is dócha go n-imoibríonn siad níos sciobtha. D'fhéadfadh toradh amháin a d'fhéadfadh a bheith ann ná comhshó ocsaídeach de ríomhairí pearsanta B-cineál go ríomhairí pearsanta de chineál A, mar a tuairiscíodh roimhe seo sa litríocht [15]. Is éard atá i gceist le claochlú ríomhairí pearsanta B-chineál go ríomhairí pearsanta de chineál A ná an t-ian hidríde ag C2 den fháinne C a bhaint go ocsaídeach mar chéim tosaigh: mar gheall ar na bunchoinníollacha atá i réim ocsaídítear feidhmiúlacht o-dé-hiodrocsa an fháinne B. chuig o-quinone, a fheidhmíonn ina dhiaidh sin marocsaídeachchun dimer procyanidin de chineál B a thiontú go A-cineál a haon [15] (Fíor 7). Tá an mheicníocht quinone methide seo le feiceáil freisin i dteocht éagsúil, pH, agus coinníollacha catalaíoch [37], trí ocsaídiú radacach ag baint úsáide as 1,{6}}défheinile-2-fréamhacha picrylhydrazile faoi choinníollacha neodracha [38] agus trí laccás ( EC1.10.3.2) [39].

Nuair a rinneamar staidéar ar na ríomhairí pearsanta modhnaithe le maisdhifríocht 2 Da sna heastóscáin ocsaídithe agus a dtáirgeadh a fuair MS/MS, thángthas ar an gconclúid go raibh siad cosúil le ríomhairí pearsanta de chineál A agus a n-iana blúirí (mar a pléadh thuas i Roinn 2.2). ag taispeáint na sainphatrúin scoilte a chruthaíonn iain ag m/z 285 agus 289 (scoilt QM), m/z 423 (ilroinnt RDA) agus m/z449 (HRF). Mar shampla, taispeánann muid comhshó na dimers PC B-cineál de sliocht bileog Microgramma Mháratáin go dimers PC-cineál i bhFíor 8. Saneamh-ocsaídithesliocht, braitheadh ​​​​muid ceithre dimers ríomhaire de chineál B le luachanna m / z 577 (Fíor 8A) ach ní dimers ríomhaire de chineál A le luachanna m / z 575 (Fíor 8B). Is dócha go raibh na beanna bídeacha san EIC ag m/z575 ag freagairt d’ocsaídiú ríomhairí pearsanta de chineál B san fhoinse ian toisc go raibh na hamanna coinneála díreach mar a chéile le ríomhairí pearsanta B-chineál. Sa sliocht ocsaídithe, níor bhraitheamar ach rianta de na ríomhairí pearsanta tosaigh de chineál B ag m/z 577 (Fíor 8C), ach ina ionad sin, bhraitheamar buaiceanna diana ag amanna coinneála níos déanaí a fhreagraíonn do ríomhairí pearsanta de chineál A ag m/z 575 (Fíor 8D).Bhí na beanna bídeacha san EIC ag m/z577 a raibh na hamanna coinneála céanna acu ag freagairt do chomharthaí iseatópacha an m/z 575. Ní mór a thabhairt faoi deara go raibh an staidéar seo cáilíochtúil, rud a chiallaíonn nach féidir flúirse na n-ian a bheith ann. i gcomparáid mar sin. Ina theannta sin, ní mór a thabhairt faoi deara nach raibh an t-athrú de B-cineál PC go A-cineál PC i gcónaí chomh iomlán mar atá sa sampla seo agus nach raibh gach ríomhaire de chineál B thiontú go ríomhairí pearsanta A-cineál; meastar go garbh go raibh flúirse na n-ian d'olagaiméirí PC de chineál A agus de chineál B cothrom. Ar an láimh eile, i roinnt samplaí, bhraith muid difríochtaí níos mó de 2 Da; mar shampla, d'fhéadfaí an heiptamer PC ag m/z 2017 a chomhcheangal le hiain ag m/z2015 agus 2013, ag tabhairt le fios go gcruthófar nasc amháin agus dhá nasc de chineál A, faoi seach.

Cé gur chosúil gurbh é tiontú ríomhairí pearsanta de chineál B go cineál A an príomh-mheicníocht imoibrithe, ní féidir linn imoibrithe modhnuithe eile a eisiamh go hiomlán. Bhí PAanna i láthair mar mheascáin chasta sna heastóscáin neamh-ocsaídithe tosaigh, agus bhí na meascáin seo níos casta fós tar éis an ocsaídiúcháin alcaileach a tháirgeann méid ollmhór sonraí MS. Mar shampla, léirigh staidéir roimhe seo ar ocsaídiú bonn-catalyzed agus imoibrithe athshocraithe PAanna gur féidir le dimers PC a bheith ag casadh i dtáirgí éagsúla isomerization C-ring, lena n-áirítear tetrahydroxypyranochromenes, ar a dtugtar phlorotannins [15]. Thaispeánfadh na táirgí seo luachanna m/z an-chosúil ag 577 ach bheadh ​​amanna coinneála difriúla in LC agus patrúin scoilte éagsúla sna Ballstáit. Bunaithe ar na EICanna ag m/z 577, níor bhraitheamar athshocruithe den chineál seo sna coinníollacha imoibrithe a úsáideadh. D’fhéadfadh na hathshocruithe agus oscailt an fháinne C heitreafháinnigh táirgí eile a tháirgeadh trí regio-isiméiriú, eipiméiriú, nó 13-aistriú arail[15]. Bhain an eipiméiriú go príomha le próisis déantúsaíochta agus, mar shampla, de bharr na dteocht arda a bhaineann le róstadh an chócó cailleann blabhán, ach freisin le heipiméiriú monaiméirí flavan, dimers. , agus trimers [40]. Ina theannta sin, tá sé tuairiscithe gurb é polyphenol oxidase i bhfeoil torthaí banana ba chúis leis an epimerization de (-)-epigallocatechin go (-)-gallocatechin[41]. D’fhéachamar ar eipiméiriú féideartha flavan-3-ól ag baint úsáide as EICs ag m/z289, agus go ginearálta, níor bhraitheamar eipiméiriú suntasach de bharr an ocsaídiúcháin alcaileach a úsáideadh. Mar sin féin, ní féidir linn an epimerization a eisiamh go hiomlán mar a bhraith muid méideanna níos airde de ( móide ) - catechin i ndáil le (-)-eipiceicin sa sliocht ocsaídithe de bhláthanna cóilis Pavonia ná sa sliocht neamh-ocsaídithe tosaigh (Fíor S1). Ní mór a thabhairt faoi deara freisin go ndearnadh na heastóscáin ocsaíde a neodrú roimh an UHPLC-MS/MS, rud a d'fhéadfadh a bheith ina chúis le frithghníomhartha ocsaí. Sna foirmeacha ocsaídithe, is leictreafailí iad quinones atá in ann imoibriú leis an uisce núicléafileach atá i láthair, agus d'fhéadfadh sé go mbeadh sé mar thoradh go simplí ar an imoibriú laghdaithe a thugann ríomhairí pearsanta de chineál B, rud a d'fhéadfadh a mhíniú freisin cén fáth nach raibh aon tionchar ar roinnt de na ríomhairí pearsanta B-chineál.

2.4.Athruithe ar Ríomhairí de Chineál A i Sleachta Plandaí mar gheall ar an Ocsaídiú Alcaileach

D'imoibrigh ríomhairí pearsanta A-cineál i sleachta plandaí éagsúla go difriúil mar gheall ar an ocsaídiú alcaileach. Níor léirigh cuid de na samplaí mionathruithe nó mionathruithe. Nuair a bhí na cineálacha eastóscáin plandaí seo faoi réir ocsaídiúcháin alcaileach, níor aimsíodh aon difríochtaí suntasacha sa mais-speictrim iomlán (mar shampla, féach Tábla S3 le haghaidh na mór-ian a breathnaíodh sa sliocht duille Aglaonema commutatum var. maculatum roimh agus tar éis ocsaídiúcháin). Mar sin féin, d’fhéadfaí difríochtaí beaga a aimsiú sna sonraí mais-speictriméadracha mionsonraithe a bhfuil an mais-difríocht acu de 2 Da agus a thugann le tuiscint go bhféadfaí naisc bhreise éitear de chineál A a fhoirmiú. Bhí an feiniméan seo níos soiléire i gcuid de na samplaí le ríomhairí pearsanta de chineál A; tugadh faoi deara na ríomhairí pearsanta seo de chineál A chun naisc bhreise éitear de chineál A a fhoirmiú mar gheall ar an ocsaídiú alcaileach (Fíor 9). Nuair a ocsaídíodh na cineálacha eastóscáin plandaí seo, aimsíodh difríochtaí ar leith sa mais-speictream iomlán a léirigh an difríocht mhais de 2 Da i gcomparáid le ríomhairí pearsanta tosaigh de chineál A. Comhfhreagraíonn an [MH]-ian ag m/z 863 do thriomadóir PC a raibh nasc éitear de chineál A amháin aige agus an t-ian ag m/z 861 do thriomadóir PC a bhfuil dhá nasc éitear aige (Fíor 9A ). Ar an gcaoi chéanna, bhraith na hiain [M -H]- ag m/z 1151, 1149, agus 1147, faoi seach (Fíor 9B) ríomhairí pearsanta tetrameric a bhfuil nasc amháin, dhá, agus trí éitear acu. , dhá, agus trí nasc éitear braite ag na hiain [M -H]- ag m/z 1439, 1437, agus 1435 agus ag m/z 1727,1725, agus 1723, faoi seach (Fíor 9C, D; áfach, an Bhí [M -2H]2-ian ag m/z 861 de heiciméir PC go follasach níos líonmhaire ná an t-ian [MH] ag m/z 1723 agus mar sin, léirithe sa figiúr).

Bhí tionchar freisin ag bunú naisc bhreise de chineál A ar amanna coinneála na n-olaigiméirí seo. Bhí an chuma ar líon na nascanna éitear breise a mhéadú go pointe de réir mar a mhéadaigh na céimeanna de pholaiméiriú ríomhairí pearsanta, a bhfuiltear ag súil leis mar go bhfuil níos mó suíomhanna ann do na bannaí breise. Mar sin féin, ní mór a thabhairt faoi deara freisin gur féidir comharthaí beaga a bheith ann leis an difríocht mais de 2 Da a fhreagraíonn do ocsaídiú nó foirmiú foirmeacha quinone ríomhairí pearsanta le linn an ianaithe, mar a pléadh thuas. Tá na buaiceanna seo le feiceáil freisin sa mais-speictream i bhFíor 9 roimh na príomhbhuanna a chomhfhreagraíonn do ríomhairí pearsanta de chineál A. Dheimhnigh flúirse na n-ian, cruthanna na bpatrún iseatópacha, agus na n-ian blúirí sainiúla a fuair MS/MS breathnú ar naisc bhreise éitear de chineál A. Tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara freisin nach raibh an chuma air go raibh tionchar ag na frithghníomhartha ionmhóilíneacha seo a breathnaíodh ar an meánchéim pholaiméirithe mar níor aimsíodh na olaigiméirí nó na polaiméirí PA níos airde sna sleachta ocsaídithe i gcomparáid le heastóscáin neamh-ocsaídithe. Tacaíonn Mouls agus Fulcrand (2012) [14] leis an bhreathnóireacht.

2.5.Sliocht Gléasra le PAanna a bhfuil Fo-aonaid PC agus PD acu agus a Athruithe mar gheall ar an Ocsaídiú Acaileach

Bhí PAanna le haonaid (epi) catechin agus (epi)gallocatechin araon i gcuid mhór de na samplaí, .i., meascáin PC/PD a bhí sna PAanna. Bhí cinniúint na meascán PC/PD seo mar gheall ar an modhnú trí ocsaídiú alcaileach difriúil i gcomparáid le ríomhairí pearsanta. Braitheadh ​​meascáin PC/PD go soiléir sna heastóscáin phlanda roimh an ocsaídiú trí UV agus MS; féach, mar shampla, na oligomers PA beag sa sliocht duille tosaigh de Podocarpus macrophyllus (Fíor 10A agus Tábla S4). Tar éis an ocsaídiúcháin, braitheadh ​​na PAanna modhnaithe fós ag UVat 280 nm mar chineál difriúil agus/nó crónán moillithe (Fíor S2), ach níor bhraith MS iad a thuilleadh, féach, mar shampla, na olaigiméirí PA atá ar iarraidh sa duilleog ocsaídithe. sliocht Podocarpus microphallus (Fíor 10B agus Tábla S4). Níor bhraitheamar aon chomharthaí eile a d’fhéadfadh freagairt do na meascáin leasaithe PC/PD ná dá dtáirgí díghrádaithe féideartha. Mar shampla, le haghaidh an dimer PC ag m/z 577, d'fhéadfaimis an dimer ríomhaire de chineál A comhfhreagrach a bhrath ag m/z 575 sa sliocht ocsaídithe, ach níorbh fhéidir tuairimí ar leith comhchosúla a dhéanamh maidir le dimers PC/PD nó trimer (Fíor 10B). D’fhéadfadh gur imoibrithe idirmhóilíneacha idir PAanna [13-15,24,25], mar shampla, an chúis le cailleadh olagaiméirí inbhraite PC/PD in ESI-MS. Is eol go n-eascraíonn na frithghníomhartha idirmhóilíneacha foirmiú PAanna modhnaithe trí dhá shlabhra oligomeric ar leith a nascadh, agus go tipiciúil, mar thoradh orthu go dtiocfaidh méadú ar an meánleibhéal polaiméirithe [14]. Mar shampla, Vernhet et al. (2014) tugtha faoi deara ag turgnaimh scaipthe X-ghathaithe uillinn bheaga, má dhéantar PAanna a ocsaídiú i dtuaslagáin tiubhaithe, gur polaiméirí ard iad na PAanna modhnaithe le slabhraí fada líneacha nó brainseach [25]. Is féidir le ocsaídiú breise a bheith mar thoradh ar chiciliú idir fáinní A agus B de PAanna éagsúla [24]. Ina theannta sin, tugadh faoi deara go bhfuil na bannaí agus na struchtúir nua seo frithsheasmhach in aghaidh scoilteachta aigéad-catalyzed, agus dá bhrí sin, ní féidir an méadú ar an meánchéim polaiméirithe a mheas ach amháin trí mhodhanna neamh-dípholaiméireacha [14,24. Mar sin féin, léirigh ár dtorthaí nach bhfuil na PAanna modhnaithe seo braite faoi na coinníollacha caighdeánacha ESI-MS a úsáidtear le haghaidh CPanna (Fíor 10). Inár staidéar roimhe seo, d'úsáideamar modh bunaithe ar fhaireachán imoibrithe roghnaithe trí cheathairphoill triple chun na PAanna a bhrath i samplaí neamh-ocsaídithe agus ocsaídithe agus thugamar faoi deara gur athraigh comhdhéanamh an fho-aonaid mar gheall ar an ocsaídiú alcaileach agus mar sin ní raibh an modh in ann a bhrath a thuilleadh. na PAanna modhnaithe [13]. Tacaíonn na torthaí MS ardtaifigh reatha lenár dtuairimí roimhe seo trí cheathairpholach thríarach go bhfuil na PAanna modhnaithe sna heastóscáin ocsaídithe i bhfad níos casta ná na PAanna tosaigh sna heastóscáin neamhocsaídithe agus nach mbraitear iad faoi choinníollacha comhchosúla UPLC-MS/MS. [13].

Tá na modhanna a úsáidtear le haghaidh ocsaídiú PAanna sa litríocht sách difriúil ónár modh, agus dá bhrí sin, ní fhéadfaidh na torthaí a bheith inchomparáide go díreach [14,24,25]. I staidéir roimhe seo, rinneadh an ocsaídiú in uisce aigéadaithe le haigéad trifluoroacetic ag pH 3.5 chun an pH fíona a aithris, agus fuarthas an ocsaídiú iarbhír tríd an sampla a chur i láthair aer ar feadh roinnt laethanta [14,24, 25]. D'úsáideamar ocsaídiú alcaileach trí mhaolán carbónáit ag pH 10 ach ar feadh uair an chloig.

Bhain an chuid is mó de na sleachta plandaí le PAanna le PC agus PDsubunits araon, agus gan ach i dhá shampla, d'fhéadfaí na PAanna a mheas beagnach PD íon. Sleachta Callisia gentlei varelegans agus Pellaea ooata a bhí sa dá shampla seo. Braitheadh ​​na PDanna de chineál B sa Callisia gentle var. Sliocht elegans roimh an ocsaídiú; féach, mar shampla, na holagaiméirí beaga PD i dTábla S5, ach tar éis an ocsaídiúcháin, níor aimsíodh na PDanna seo níos mó ag MS. Níor bhraitheamar aon chomharthaí eile a d’fhéadfadh freagairt do na PDanna modhnaithe ná dá dtáirgí díghrádaithe féideartha. Mar sin féin, braitheadh ​​UV ag 280 nm mar chromán níos ísle agus moillithe ag cuid de na PAanna modhnaithe (Fíor S3). Suimiúil go leor, roimh an ocsaídiú, braitheadh ​​​​PDanna trimeric cineál A i sliocht sonraí Pellaea, agus tar éis an ocsaídiúcháin, bhí na comharthaí seo fós i láthair, ach bhí a n-déine i bhfad níos ísle.

ag MS agus, ina theannta sin, braitheadh ​​luachanna m/z a fhreagraíonn do naisc bhreise de chineál A i dtréimhsí PD mar an gcéanna le ríomhairí pearsanta de chineál A (Tábla S6). D’fhéadfadh sé seo a léiriú, chomh maith le frithghníomhartha idirmhóilíneacha a breathnaíodh le haghaidh PDanna homo-agus ilchineálach de chineál B, go bhféadfadh imoibrithe ionmhóilíneacha comhchosúla a bheith ag na PDanna A-cineál a braitheadh ​​le haghaidh ríomhairí pearsanta de chineál A.

2.6. PAanna Galloulated i Sliocht Plandaí agus A n-Athruithe Mar gheall ar an Ocsaídiú Alcaileach

Bhí PAanna galolactha i gcuid de na plandaí. Deimhníodh láithreacht ríomhairí pearsanta, PDanna, agus PC/PDanna leithdháilte i sleachta plandaí ag a bpatrúin ilroinnte sainiúla. Go ginearálta, tharla ilroinnt PAanna gallovlated in anailís MS mar an gcéanna trí mheicníochtaí RDA., HRF, agus QM mar a pléadh thuas [31-33]. Mar shampla, taispeántar agus pléitear go mion an cosán ilroinnte sainiúil agus sonraí MS/MS de dimer ríomhaire galoylated i sliocht duille Ruprechtia salicifolia (Fíor 11). Níl seasamh an ghrúpa galóil ach táscach, agus d'fhéadfaí é a cheangal le haon ghrúpa hiodrocsaile saor in aisce eile san aonad críochfoirt. Is é an t-ian ag m/z603 an táirgeadh HRF. Bhí na hiain ag m/z 287 agus 441 ag freagairt do scoilteacht QM. Ina theannta sin, thugamar faoi deara scoilteacht an ghrúpa gaillile a raibh an t-ian a fhreagraíonn don dimer PC ag m/z577 mar thoradh air agus an ilroinnt RDA ina dhiaidh sin le hian ag m/z425 agus scoilteadh breise uisce le hian ag m/z 407. Tháirg an HRF de m/z 577 an t-ian blúirí ag m/z 451. Ina theannta sin, bhraitheamar iain bhlúire beaga ag m/z 109,123, agus 125, a fhreagraíonn do na fáinní aramatacha. D’fhéadfadh go mbeadh go leor grúpaí gallailile ina struchtúir (Tábla S7).

D'iompair na PAanna galloylated éagsúla le linn an ocsaídiúcháin aerga faoi choinníollacha alcaileach. Bhí ríomhairí pearsanta galaoilínithe sách cobhsaí agus d'fhreagair siad ar an gcaoi chéanna le ríomhairí pearsanta neamhghalaithe. Mar shampla, níor aimsíodh aon athruithe suntasacha maidir leis na ríomhairí pearsanta galoylated a bhfuil grúpa gallaile amháin acu ina struchtúir sa sliocht duille ocsaídithe de Nepenthes maxima (Tábla S7). Ní mór a thabhairt faoi deara, áfach, go raibh déine na n-ian le haghaidh na ríomhairí pearsanta galaolaithe a raibh dhá ghrúpa gaillile nó níos mó acu níos ísle sa sliocht ocsaídithe de Nepenthes maxima agus, mar shampla, ní raibh na pentamers ríomhaire galloylated le roinnt grúpaí galley inbhraite a thuilleadh (Tábla S7). Tá na luachanna slánuimhir m/z do ríomhairí pearsanta áirithe gaolaile cosúil leis na luachanna m/z do ríomhaire/PDanna agus, mar sin, tá an MS ardtaifigh ag teastáil. Mar shampla, comhfhreagraíonn m/z 881 do PA trimeric ar a bhfuil dhá PC agus aonad PD amháin (C4sH3; O19, mcalculated 882.20074) agus do dimer PC gallúlaithe a bhfuil dhá ghrúpa gaalaile (C44H34O20, m ríofa,882.16435), i roinnt samplaí. mar shampla sa sliocht duille ocsaídithe de Coccoloba uvifera, rinneadh ríomhairí pearsanta galloylated a thiontú go ríomhairí pearsanta galloylated A-cineál mar gheall ar ocsaídiú, cé go raibh an chuma ar na PAs galloylated sa sliocht tosaigh a bheith cosúil leo siúd i Nepenthes maxima. Mar shampla, bhí an dimer PC leithdháilte le galloylgroup amháin agus a thaispeánann ian m/z 729 (Tábla S7) cobhsaí le linn an ocsaídiúcháin alcaileach i sliocht duille Nepenthes maxima ach athraíodh go páirteach i sliocht duille Coccoloba ugifera ag taispeáint iain araon ag m. /z 727 agus 729. Bhí an t-iar-ian ag freagairt do PCdimer de chineál A galolactha (m/z727.13148, C37H2O16)agus thaispeáin sé blúirí sainiúla MS/MS a thacaíonn leis an nasc de chineál A:m/z601(táirge HRF de m/z 727),575(PCdimer de chineál A), 557 (scoilt uisce ó m/z575),449 (HRF de m/z575, féach Fíor 4),423(RDA de m/z 575, féach Fíor 4),285 (QM de m/z575, féach Fíor 4), 169 (aigéad gallach),125 (féach Fíor 11) agus 109 (féach Fíor 11). Cúis amháin leis na difríochtaí seo i PAanna comhchosúla idir sleachta plandaí ná na comhdhúile eile atá i láthair sna sleachta agus a dhéanann difear d’imoibrithe PAnna.

Bhí meascáin PC/PD galaolaithe agus PDanna imoibríocha agus modhnaíodh iad ar an gcaoi chéanna leis na meascáin PC/PD neamhghalaithe agus PDanna. Tar éis ocsaídiúcháin, níor bhraith MS na PAanna seo cé go raibh siad fós le feiceáil ag UV ag 280 nm. Níor bhraitheamar aon chomharthaí eile a d’fhéadfadh a bheith ag freagairt do na PAanna modhnaithe seo ná dá dtáirgí díghrádaithe féideartha. I sampla amháin, eadhon i nduilleoga Acacia karroo, níor aimsíodh UV ag 280 nm ach an oiread ar na PDanna modhnaithe galailaithe agus neamhghalaithe.

Inár staidéar roimhe seo [13], nuair a rinneadh anailís ar PAanna i sleachta neamh-ocsaídithe agus ocsaídithe trí mhodhanna roghnaithe monatóireachta imoibrithe, thugamar faoi deara gur braitheadh ​​​​cronán galloile soiléir leis an modh MS / MS sonrach galloyl sna samplaí ocsaíde, ach an cruth Bhí athrú ar an gcrannóg agus d'aistrigh sé dá réir sin chuig an gcrann a breathnaíodh sa chrómatagram UV. Rinneadh na PAanna gallovlated bunaidh a mhodhnú ar bhealach a d'fhéadfaí an galloylgroup a bhrath fós leis an modh roghnaithe monatóireachta imoibrithe [13]. Léirigh staidéir roimhe seo ar (-)-epigallocatechin gallate agus (-)-epigallocatechin gurb é an fáinne B trihydroxyphenyl an príomhshuíomh gníomhaíochta le haghaidh ocsaídiúcháin agus nach bhfuil aon táirgí inbhraite mar thoradh ar ocsaídiú an ghalaile moiety [42]. Mar sin féin, bhí na coinníollacha imoibrithe a úsáideadh agus na táirgí ocsaídiúcháin a fuarthas measartha difriúil i gcomparáid lenár staidéar toisc go ndearnadh an ocsaídiú le fréamhacha sárocsaile a ghintear trí theirmeolaíocht an thionscnóra azo 2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile) [42].

Chomh maith le PAanna galolalaithe, tá dhá shampla, eadhon Cephalotaxus harringtomia subsp. Bhí an chuma ar bhileoga drupaceous agus duilleoga Laurus nobilis go raibh ríomhairí pearsanta glycosylated a raibh aonad siúcra amháin ceangailte le struchtúr PC amháin. Tugadh faoi deara go n-iompódh cuid de na ríomhairí pearsanta B-chineál glycosylated seo go ríomhairí pearsanta de chineál A glycosylated le linn an ocsaídiúcháin alcaileach gan scoilteacht an aonaid siúcra. Ina theannta sin, aimsíodh naisc bhreise éitear le ríomhairí pearsanta de chineál A.

3. Ábhair agus Modhanna

Rinneadh bailiú ábhar plandaí, a bpróiseáil, agus a n-eastóscadh, ina theannta sin, le ocsaídiú ag pH 1{{10}}, mar a tuairiscíodh roimhe seo [13]. Bhí 102 shampla sa staidéar tosaigh, agus rinneamar anailís ar 55 sampla eile san iomlán (Tábla S8). Maidir leis an aer-ocsaídiú, ocsaídíodh 20μLof gach eastósc le 18{40}}uL de pH 1{{6{0}}maolán ar feadh 1 h ag teocht an tseomra. Cuireadh stop leis an ocsaídiú trí 100 ul de 0.6 faoin gcéad HCOOH uiscí a chur leis. Ina theannta sin, cuireadh 280 μLof uisce le 20 μL den neamh-ocsaídithe tosaigh roimh an anailís chun an toirt deiridh de 300 uL a fháil le haghaidh samplaí neamh-ocsaídithe agus ocsaídithe araon. UPLC-DAD-ESI-QOrbitrap-MS/MS a rinne an anailís mais-speictriméadrachta ultra-ardtaifigh. Is éard a bhí san ionstraim ná córas Acquity UPLC (Waters Corp., Baile na nGallóglach, MA, SAM) mar aon le mais-speictriméadar orbitrap ceathairpholach (QExactiveTM, Thermo Fisher Scientific GmbH, Bremen, an Ghearmáin). Ba é an colún a úsáideadh ná colún Acquity UPLC BEH Phenyl (2.1 × 100 mm, 1.7 um, Waters Corp., Loch Garman, Éire). Ba iad A= acetonitrile agus B=0.1 faoin gcéad HCOOH.A ráta sreafa de 0.5 mLmin-1 na heilimintí, agus bhí an phróifíl elution mar a leanas:0-0. 5 nóim,0.1 faoin gcéad A i B(isocratic);0.5-5 nóim,0.1-30 faoin gcéad A i B(grádán líneach);5-6nóiméad,30 faoin gcéad {{44} } faoin gcéad A i B (grádán líneach);6-6.1 nóim, 35-90 faoin gcéad A i B (grádán líneach); 6.1-9.5 nóim, nigh colún agus athchothromú. Ba é an toirt insteallta ná 5μL. Taifeadadh na sonraí UV （λ=190-500nm） agus MS le linn na hanailíse. Baineadh úsáid as ianú diúltach i bhfoinse ESI téite le voltas spraeála de -3.0 kV, ráta sreafa gáis sheath (N2) de 60, gás cúnta (N2) ráta sreafa de 20, ráta sreafa gáis scuabtha de 0, an teocht ribeach móide 380 céim agus díthiomsú in-fhoinse de bharr imbhualadh (CID) de 30 eV. Le haghaidh lánscála MS, ba é m/z150-2250 mais-raon an fhithiseáin, an taifeach 35,000, agus an rialú gnóthachain uathoibríoch 3×10*. Maidir le hanailísí MS/MS, eadhon dd-MS2(TopN), ba iad seo a leanas na paraiméadair: TopN 3; an fuinneamh imbhuailte céimnithe céimnithe 20, 50, agus 80 eV, an taifeach 17,500, agus an rialú gnóthachain uathoibríoch 1 × 105. Rinne Pierce ESI Negative Ion Calibration Solution an calabrú (Thermo Fisher Scentific Inc., Waltham, MA, SAM). Próiseáladh na sonraí le bogearraí Thermo Xcalibur Oral Browser (Leagan 3.0.63, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, SAM). De réir mar a fuarthas na samplaí ocsaídithe ag baint úsáide as maolán carbónáit sóidiam (pH 10), foirmíodh sóidiam iain bhraisle le haigéad formach le linn na hanailíse UHPLC-MS/MS. Dá bhrí sin, ag tús gach crómatagram ian iomlán de shamplaí ocsaíde, braitheadh ​​buaic láidir de bhraislí formáide sóidiam (Tábla S9). Braitheadh ​​an patrún go héasca agus níor chuir sé isteach ar an anailís ar PAanna. Léirítear iain bhlúire MS/MS d'olagaiméirí beaga PA i dTábla S10.

4. Conclúidí

Sa staidéar seo, rinneamar anailís ar chomhdhéanamh PA de 55 eastóscán plandaí roimh agus tar éis ocsaídiúcháin alcaileach trí UHPLC-MS/MS (Tábla S8) ultra-ardtaifigh. Sna struchtúir PA nádúrtha bhí ríomhairí pearsanta de chineál A agus B, PDanna, agus meascáin PC/PD i dteannta na cinn leithdháilte. Bhí na cumadóireachta PA casta, agus bhí gá leis an MS ultra-ard-réiteach chun na maiseanna cruinn agus na foirmlí móilíneacha comhfhreagracha de PAanna éagsúla a thomhas. Bhí ríomhairí pearsanta de chineál B i sleachta plandaí éagsúla sách cobhsaí agus níor léirigh siad aon mhodhnú nó mionathrú mar gheall ar an ocsaídiú alcaileach. I gcás roinnt samplaí, bhraitheamar imoibrithe ionmhóilíneacha ríomhairí pearsanta a tháirgeann naisc éitear de chineál A. Bhí ríomhairí pearsanta de chineál A sách cobhsaí freisin gan aon mhodhnú nó mionathruithe, ach, i roinnt gléasraí, aimsíodh nascálacha éitear breise a fhoirmiú. Bhí eastóscáin ghléasra ina raibh aonaid PD in PA (ceachtar PDanna íon nó meascáin PC/PD) níos imoibríoch. Tar éis ocsaídiúcháin alcaileach, níor bhraith MS na PAnna seo ná a dtáirgí ocsaídiúcháin a thuilleadh cé go raibh UV fós ag 280nm le cineál difriúil agus/nó cnapán PA moillithe. Is dócha gur athraigh na frithghníomhartha idirmhóilíneacha idir PAanna na PAanna sin ionas nár aimsíodh iad faoi choinníollacha caighdeánacha ESI-MS. Léiríonn staidéir roimhe seo nach féidir staidéar a dhéanamh ar na PAanna modhnaithe seo trí mhodhanna díghrádaithe. Dá bhrí sin, bheadh ​​gá le modh anailíse nua chun iad a shainaithint agus a thréithriú. Bhí PAanna Galloylated sách cobhsaí faoi ocsaídiú alcaileach dá mba rud é go raibh siad bunaithe ar PC, ach cruthaíodh naisc éitear breise a thacaíonn le tiontú PAanna de chineál B galaoilithe go PAanna de chineál A galailaithe. Bhí PAanna ina raibh dhá ghrúpa gaillile nó níos mó níos imoibríoch ná iad siúd nach raibh iontu ach grúpa amháin. Bhí meascáin PC/PD Gallovlated agus PDanna níos imoibríoch agus d'fhreagair siad mar an gcéanna le cinn neamh-ghalaithe. Mar sin féin, ní mór a thabhairt faoi deara nach raibh na frithghníomhartha laistigh agus idirmhóilíneacha eisiatach, agus d'fhéadfadh na frithghníomhartha seo tarlú ag an am céanna. Ina theannta sin, chuir an maitrís plandaí agus comhdhúile eile a bhí i láthair isteach ar na hidirghníomhaíochtaí seo.