Freagraí Bithcheimiceacha Agus Histeapaiteolaíocha Biomphalaria Alexandrina ar RIPEX (Rialtóir Fáis Planda)Ⅰ

Teibí

Cúlra

Úsáidtear rialtóirí fáis plandaí go forleathan sa talmhaíocht chun fás agus aibiú plandaí a mhéadú, ach cuireann siad an t-éiceachóras uisceach i mbaol. Rinne an staidéar reatha measúnú ar an éifeacht a bhí ag nochtadh sublethal do thiúchan RIPEX 48 faoin gcéad EC (8 agus 16 µL/L) ar pharaiméadair struis ocsaídiúcháin, hormóin ghnéis, einsímí poitéinsiúla imdhíonachta, comhaireamh difreálach haemocyte, agus histeapaiteolaíocht na faireoga díleácha agus na n-ovotesis i. Seilidí biiomphalaria alexandrina.

Cliceáil chun cistanche herba le haghaidh testosterone

Torthaí

Ba chúis le nochtadh RIPEX méadú foriomlán ar ghníomhaíochtaí Superoxide dismutase agus Glutathione-S-Transferase i B. Alexandrina. Mar sin féin, cuireann nochtadh an-mhór RIPEX bac ar ghníomhaíocht SOD i seilidí. Léirigh gníomhaíocht malondialdehyde méadú ar B. Alexandrina nochta don dá thiúchan tar éis gach tréimhse nochta. Ba chúis le RIPEX freisin méadú suntasach ar testosterone i seilidí a nochtar do 16 µL/L, áfach, laghdaigh sé leibhéil hormóin i seilidí a nochtar do 8 µL/L ag 7 lá. Maidir le estradiol, bhí méadú suntasach tar éis 3 lá nochta do 16 µl/L agus 7 lá nochta do 8 µL/L. Mhéadaigh nochtadh RIPEX freisin gníomhaíochtaí einsímí Myeloperoxidase agus Adenosine deaminase i faireoga díleácha seilidí. Mhéadaigh sé an líon iomlán hemocyte de seilidí nochta chomh maith le líon na granulocytes. Léirigh faireoga díleácha seilide agus ovotestis athruithe paiteolaíocha tar éis 7 lá de nochtadh RIPEX.

Conclúidí

Tugann na torthaí seo le fios go bhfuil RIPEX tocsaineach do B. Alexandrina agus gur féidir an seilide seo a úsáid mar bhiththáscaire le haghaidh éillithe comhshaoil ​​le rialtóirí fáis plandaí.

Eochairfhocail

Biomphalaria alexandrina, RIPEX, Testosterone, Estradiol, Myeloperoxidase, Adenosine deaminase, Histeapaiteolaíocht

1 Cúlra

Is ábhar imní domhanda don chomhshaol é truailliú agraiceimiceach uiscí dromchla, go háirithe i gceantair ina bhfuil an talmhaíocht ag méadú agus ag treisiú go tapa. Úsáidtear ceimiceáin shintéiseacha éagsúla, amhail lotnaidicídí nó leasacháin, chun cainníocht agus cáilíocht na mbarr a mhodhnú chun riachtanais na gcustaiméirí a shásamh [7, 40]. Is agraiceimiceacha coitianta iad tionscnóirí fáis plandaí i go leor tíortha [18].

Nuair a dhéantar na ceimiceáin seo a ionanálú go díreach nó a ithe le glasraí éillithe, gortaítear sláinte an duine [39]. Is ceimiceán sintéiseach a scaoileann eitiléine é an lotnaidicíd orgánafosfair, eiteafón (2-aigéad fosfónach clóiríeitiléin) a úsáidtear go coitianta mar rialtóir fás plandaí (PGR) chun ionduchtú séarach, aibiú torthaí agus imoibrithe fiseolaíocha eile a chur chun cinn. Tá sé ceadaithe le húsáid ar éagsúlacht bia, beatha, neamhbhia, stoc plandlainne cheaptha teasa, agus plandaí ornáideacha a fhástar lasmuigh [3, 50]. Léirigh measúnú saotharlainne ar thocsaineacht eiteafóin gur tharla anchuma moirfiméadrach ar an dara antenna, guairí céadfacha, spine eireaball, agus rostrum Daphnia magna, rud a d'fhág gur cailleadh feidhm agus bás [54].

Taifeadadh Abd-El Azeem [1] laghdú ar ráta fáis, damáiste DNA, agus éifeachtaí apoptotic i gcealla faireoga díleácha an seilide Deroceras reticulatum tar éis nochtadh d'éiteafón. Cheadaigh go leor údair tocsaineacht Ethephon ar francaigh agus éin [2, 17, 55]. Ina theannta sin, ba chúis le nochtadh eiteafóin géineatocsaineacht, strus ocsaídiúcháin, agus tocsaineacht atáirgthe i lucha [16]. Tá teratogenicity agus mífheidhm an chórais gonadal i lucha nasctha freisin le nochtadh ethephon [2, 16]. Tá sé léirithe freisin go bhfuil Ethephon imdhíontocsaineach, go bhfuil éifeachtaí só-ghineacha aige [26], méadú ar strus ocsaídiúcháin, agus tiúchan níos ísle deocsairibonúicléach agus aigéid Ribonucleic [4].

D’fhéadfadh go gcuirfeadh eiteafón i ndobharlaigh fauna uisceach i mbaol; áfach, tá sonraí ar a tionchar ar orgánaigh uisceacha gann. Baineadh úsáid as roinnt speiceas uisceach chun hormóin fáis plandaí a bhrath i gcórais uisceacha. Mar sin féin, tá sé dúshlánach cuid de na horgánaigh seo a ionramháil agus a chothabháil sa saotharlann, rud a fhágann go bhfuil siad níos deacra iad a úsáid i meastóireachtaí éiceathocsaineolaíocha [54]. Tarraingíodh aird le déanaí ar mhoilisc uisceacha, lena n-áirítear seilidí, mar orgánaigh tástála mar gheall ar an ngá atá le samhlacha inveirteabracha a fhorbairt chun faireachán comhshaoil ​​a dhéanamh ar éilleáin uisceacha [21, 45]. Is iad seilidí an grúpa mollusca is flúirseach i gcórais uisceacha. Cuireann seilidí rogha eile nach bhfuil chomh saothrach céanna le veirteabraigh níos airde i láthair mar bhiththáscairí mar is féidir iad a úsáid i dturgnaimh éagsúla gan formheas eiticiúil a lorg, agus níl a n-éadáil agus a gcothabháil saor [13].

Maidir leis seo, baineadh úsáid fhorleathan as seilide Biomphalaria alexandrina mar thásc-orgánach ar thruailliú fionnuisce le lotnaidicídí [29, 30]. Níos faide ná a chumas mar bhiththáscaire, feidhmíonn an seilide seo mar óstach idirmheánach le haghaidh tarchur Schistosoma mansoni [35]. Dá bhrí sin, is féidir le tiúchan agraiceimiceacha sa timpeallacht tionchar a imirt ar tharchur schistosomiasis trí éifeachtaí díreacha agus indíreacha ar an óstaigh idirmheánach agus dlúis parasite [27]. Bhí sé mar aidhm ag an imscrúdú seo imscrúdú a dhéanamh ar an tionchar a bhíonn ag nochtadh sublethal ar an rialtóir fáis plandaí, RIPEX 48 faoin gcéad EC (trádainm eiteafóin, 2-aigéad fosfónaic chloroethyl) ar ghnéithe éagsúla bithcheimiceacha, imdhíoneolaíocha agus histeolaíocha de B. alexandrina seilidí mar orgánach biththáscaire.

2 Modhanna

2.1 Tástáil orgánach

Bailíodh seilidí Biomphalaria alexandrina ó Loch Manzalah atá suite in El-Matarya, Dakahlia Governorate, an Éigipt (31 céim 11′ N 32 céim 2′ E) agus coinníodh iad in uisce sconna dea-aeraithe ag teocht leanúnach 20 céim . Tugadh duilleoga leitís úra a chothú dóibh go laethúil. Tar éis cothabhála ar feadh 4 seachtaine faoi na coinníollacha saotharlainne, baineadh úsáid as seilidí aibí sláintiúla (10-12 mm ar thrastomhas an bhlaosc) sna turgnaimh ina dhiaidh sin.

2.2 Ábhar turgnamhach agus coinníollacha nochta

Ceannaíodh an rialtóir fáis plandaí, RIPEX (foirm réitigh ina bhfuil 48 faoin gcéad ethephon [2- aigéad fosfónach chloroethyl (C2H6ClO3P)] agus 52 faoin gcéad comhábhair támh) ó Chema Industries (Cathair Nubaria Nua, Behira, an Éigipt; ceadúnas clárúcháin Uimh. . 1840). Ullmhaíodh sraith comhchruinnithe. Nochtadh macasamhla crann le deich seilide an ceann. Tar éis 1-lá nochta, rinneadh seilidí marbha a chomhaireamh, agus a bhaint díobh agus ríomhadh LC50 agus LC90 ag bogearraí staidrimh na n-eolaíochtaí sóisialta (SPSS; IBM Corp. Armonk, NY, USA).

2.3 Dearadh turgnamhach

Baineadh úsáid as dhá chomhchruinniú fo-mharfach a sheasann do LC10 agus LC20 (8 agus 16 µL/L). Roinneadh 90 seilide i dtrí ghrúpa, gach grúpa le trí mhacasamhlú (deich seilide / macasamhail): an grúpa rialaithe, an grúpa 8 µL/L-nochta, agus an grúpa 16 µL/L-nochta. Ag eatraimh lae 1-, 3-, agus 7-, rinneadh measúnú ar bhithmharcóirí struis ocsaídiúcháin agus einsímí poitéinsiúla imdhíonachta sa fhaireog díleá. Rinneadh measúnú ar hormóin steroid in Ovotestis. Rinneadh measúnú ar chomhaireamh difreálach hemocyte, agus histeolaíocht na faireoga díleácha agus na n-ovotesis. Le haghaidh imscrúduithe bithcheimiceacha, rinneadh 0.5 g fíochán (faireoga díleácha nó ovotetis) ó gach grúpa a homogenized i 0.5 mL maolán fosfáit (pH 6.5) ag baint úsáide as homogenizer gloine agus lártheifneoirithe ag 10,000 × g, 4 céim ar feadh 10 nóiméad . Baineadh úsáid as na forlíonta a bhí mar thoradh air sin le haghaidh measúnachtaí ina dhiaidh sin.

2.4 Marcóirí struis ocsaídiúcháin a chinneadh

2.4.1 Superoxide dismutase (SOD, CE 1.15.1.1)

Cinneadh gníomhaíocht SOD agus úsáid á baint as Trealamh Measúnaithe EnzyChrom™ Superoxide Dismutase (Cait. Uimh: ESOD{{0}}; BioAssay Systems, Hayward, CA, USA) de réir threoracha an déantóra. Rinneadh an aonchineálach fíocháin trí úsáid a bhaint as maolán fuar-lysis (50 mM fosfáit photaisiam, 0.1 mM EDTA, agus 0.5 faoin gcéad Triton X-100) a lártheifneoiriú ag 12,000g ar feadh 5 nóiméad ag 4 chéim , agus bailíodh an comhshnaidhm chun SOD a chinneadh [43]. Rinneadh gníomhaíocht SOD a thomhas ag an dlús optúil (OD) ag 440 nm.

2.4.2 Glutathione-S-Transferase (GST, CE 2.5.1.18)

Déanann an einsím seo catalú ar an gcomhchuingeach GSH le {{0}}clórai-2,4-dinitrobeinséin (CDNB). Déantar é a thomhas go speictrophotiméadrach ag 340 nm. Sa mheascán imoibriúcháin tá maolán fosfáite Potaisiam 0.1 M, pH 6.5, GSH tuaslagtha sa mhaolán fosfáit photaisiam (140 mg/100 mL), agus CDNB 4 mg/ml in alcól eitile. Sainmhínítear aonad amháin de ghníomhaíocht einsíme mar an méid einsím a chatalaíonn foirmiú 1 μmole de S-chomhchuingeach in aghaidh an nóiméid [11].

2.4.3 Malondialdehyde (MDA)

Cinneadh malondialdehyde i homogenates iomlána mar shubstaintí imoibríocha aigéad thiobarbituric (TBARS) de réir modh caighdeánach Ohkawa et al. [37]. Áiríodh leis an meascán imoibriúcháin 0.1 mL den homogenate fíocháin, toirt chomhionann de thuaslagán Dodecyl Sulfate, 0.75 mL d'aigéad aicéiteach, 0.75 mL d'aigéad tiobarbituric, agus 0.3 ml d'uisce driogtha. Measctha na comhpháirteanna seo i vortex agus gor i ndabhach fiuchphointe uisce ar feadh 1 h ansin fuaraithe go teocht an tseomra. Cuireadh deich 0.5 ml d'uisce driogtha agus 2.5 mL n-butanol le gach feadán agus measctha go bríomhar le vortex iad a rothlú ansin i lártheifneoir ag 2,500 × g ar feadh 10 nóiméad. Léadh ionsúiteacht ag 532 nm.

2.5 Hormóin a chinneadh

2.5.1 Testosterone

Socraíodh testosterone trí úsáid a bhaint as trealamh measúnaithe imdhíon-ionsorbent einsím-nasctha testosterone (ELISA) (Cat. Uimh: ADI-900-065; Enzo Life Sciences, NY, USA), Is é Testosterone an príomh-androgen a chuireann isteach ar fhorbairt ghnéasach bunscoile agus tánaisteach mar tiomáint gnéis. Rinneadh 100 µL de chaolaitheoir caighdeánach (maolán measúnachta 3 nó meáin saothraithe fíocháin) a phíobáil isteach sa cheangal neamhshonrach agus sna toibreacha uascheangail (caighdeán 0 pg/mL). Ina dhiaidh sin 100 µL de chaighdeán #1 trí #5 isteach sna toibreacha cuí. Cuireadh an sampla (100 µL) isteach sna toibreacha cuí agus 50 µL de mhaolán measúnachta 3 isteach sna toibreacha ceangail neamhshonracha. Chomh maith leis sin, cuireadh 50 µL d’antasubstaint bhuí isteach i ngach tobar, ach amháin na toibreacha bána, iomlána gníomhaíochta, agus toibreacha ceangailteacha neamhshonracha. Goir an pláta ag teocht an tseomra ar chroiteoir pláta ar feadh 1 h ag 500 rpm. Ina dhiaidh sin, cuireadh 50 µL den chomhchuingeach gorm isteach i ngach tobar, seachas gníomhaíocht iomlán agus toibreacha bána. Tar éis na toibreacha a fholmhú ó na hábhair, rinneadh níocháin trí 400 µL de thuaslagán níocháin a chur le gach tobar 3 huaire. Cuireadh comhchuingeach gorm (5 µL) leis na toibreacha iomlána gníomhaíochta agus cuireadh 200 µL de thuaslagán de fosfáit p-nitrophenyl le gach tobar agus gor é ag 37 céim ar feadh 1 h gan chroitheadh. Rinneadh an pláta a léamh ag 405 nm tar éis 50 µL de thuaslagán stad a chur le gach tobar [12, 48].

2.5.2 Estradiol

Cinneadh Estradiol ag baint úsáide as trealamh estradiol ELIZA (Cat. Uimh: 501890; Cayman Chemical, Michigan, SAM) de réir phrótacail an mhonaróra. Tá prionsabal an imoibrithe seo bunaithe ar an tiúchan sin de rianaire estradiol acetylcholinesterase (AChE) tairiseach, ach athraíonn an tiúchan estradiol dúchais mar sin tá an méid rianaire estradiol acetylcholinesterase (AChE) a cheanglaíonn le estradiol antiserum comhréireach go contrártha le tiúchan estradiol dúchais. sa tobar. Cuireadh maolán 100 µL ELISA le toibreacha neamhshonracha ceangailteach agus uascheangail. Suimiú 50 µL ó fheadán #8 go dtí an dá thoibreacha caighdeánacha is ísle (Caighdeán 8) agus 50 µL ó fheadán #7 go dtí gach ceann de na chéad toibreacha caighdeánacha eile (Caighdeán 7). Cuireadh sampla (50 µL) le gach tobar. Cuireadh Estradiol AChE Tracer (50 µL) le gach gníomhaíocht iomlán agus toibreacha bána. Ina dhiaidh sin cuireadh Estradiol ELISA antiserum (50 µL) le gach tobar ach amháin i gcás iomlán gníomhaíochta, ceangailteach neamhshonrach, agus toibreacha bána. Tar éis gor coire fithiseach (2 h ag teocht an tseomra), tomhaiseadh ionsúiteacht ag 414 nm [52].

2.6 Einsímí féideartha imdhíonachta a chinneadh

2.6.1 Myeloperoxidase (MPO, CE 1.11.2.2)

Sainmhínítear aonad amháin de ghníomhaíocht MPO mar an méid einsím a hidrealaíonn an tsubstráit agus a ghineann taurine clóirínín chun 1.0 μmól TNB a ithe in aghaidh an nóiméid ag 25 céim . Cinneadh MPO ag baint úsáide as trealamh measúnaithe gníomhaíochta dathmhéadrach myeloperoxidase (Cat. Uimh: MAK068; Sigma-Aldrich, MO, SAM). Tomhaiseadh an ionsúchán ag 412 nm.

2.6.2 Adenosine deaminase (ADA, CE 3.5.4.4)

Is einsím é ADA a chatalaíonn tiontú adenosine agus 2'-deoxyadenosine go inosine agus 2'-deoxyinosine. Socraíodh ADA de réir phrionsabail an fheasacháin theicniúil maidir le trealamh measúnaithe gníomhaíochta adenosine deaminase (Cat. Uimh: MAK400; Merck KGaA, Darmstadt, an Ghearmáin). Aonad amháin de adenosine deaminase is ea an méid einsím a hidrealaíonn adenosine chun 1.0 μmol in aghaidh an nóiméid a tháirgeadh ag 37 céim. Is iad na himoibrithe maolán measúnachta 1 × ADA (41 μL), Tiontaire ADA (2 μL), forbróir ADA (2 μL), agus substráit ADA (5 μL).

2.7 Comhaireamh hemocyte difreálach

Bailíodh an hemolymph ón seilide (rialú, nochta) de réir Sminia [47]. Tar éis do phípéad Pasteur a bheith i dteagmháil léi ar a cos, b'éigean don seilide tarraingt siar go domhain isteach ina sliogán agus an hemolymph a easbhrú, a bailíodh le haghaidh comhaireamh difreálach hemocyte. Bhí hemolymph smeartha ar an sleamhnán micreascóp le scaipeadh. Tar éis é a shocrú i meatánól 99.8 faoin gcéad ar feadh 5 nóiméad, rinneadh an sleamhnán a iompú ag uillinn 45 céim lena thriomú ag teocht an tseomra agus é a dhaite le stain Giemsa ar feadh 20 nóiméad. Socraíodh go raibh an difreáil ar hemocytes comhréireach le comhaireamh 100.

2.8 Imscrúduithe histeolaíocha

Rinneadh scrúduithe histeolaíochta tar éis 7 lá tar éis nochtadh do 8 agus 16 µL/L RIPEX. Rinneadh na faireoga díleácha agus na n-ovatetis a scaradh amach agus iad a shocrú láithreach i sreabhán Bouin᾿s. Tar éis 1 lá de shocrú, díhiodráitíodh na samplaí trí shraith alcóil agus glanadh iad i xiléin. Rinneadh bloic céir pairifín [42]. Deich nAilt. (5-7 μm tiús) a ghearradh agus a dhaite le hematoxylin agus eosin (Mayer H agus E). Tar éis an staining bhí nigh go maith le huisce sconna. Glacadh grianghraif de rannóga histeolaíochta ag baint úsáide as ceamara fóta-uathoibríoch (Optika, an Iodáil).

2.9 Anailís staidrimh

Cuireadh sonraí in iúl mar an meándiall caighdeánach agus anailís déanta orthu ag bogearraí staidrimh na n-eolaíochtaí sóisialta (SPSS; IBM Corp. Armonk, NY, USA). Baineadh úsáid as anailís ANOVA déthreo ar athraithis chun difríochtaí idir na grúpaí rialaithe agus na grúpaí nochta, idir na tiúchain dhifriúla agus na pointí ama nochta a shainaithint. Socraíodh an leibhéal suntasachta ag p Níos lú ná nó cothrom le 0.05.

Treisíonn meicníocht Cistanche an éifeacht testosterone

Fuarthas amach go bhfuil Cistanche chun leibhéil testosterone a mhéadú ar bhealaí éagsúla. Ar an gcéad dul síos, tá comhdhúile ann ar a dtugtar echinacoside agus acteoside, a léiríodh go bhfeabhsaítear táirgeadh hormóin luteinizing (LH) sa fhaireog pituitary. Spreagann LH na cealla Leydig sna magairlí chun testosterone a tháirgeadh. Tá polaisiúicrídí agus gliocóisídí feinileatánóideacha ag Cistanche freisin, a léiríodh go bhfuil airíonna frithocsaídeacha agus frith-athlastacha acu. D'fhéadfadh sé seo cabhrú le strus ocsaídiúcháin agus athlasadh sna magairlí a laghdú, rud a d'fhéadfadh dochar a dhéanamh do tháirgeadh testosterone Ina theannta sin, fuarthas amach go n-ardóidh Cistanche léiriú na ngéinte a bhaineann le sintéis testosterone agus go laghdaítear gníomhaíocht na n-einsímí a bhriseann testosterone, mar {{1} }alfa-reductase. Ar an iomlán, meastar go gcuireann an teaglaim de na meicníochtaí seo le héifeachtaí treisithe testosterone Cistanche.

Hoda H. Abdel-Azeem1*, Azza H. Mohamed1 agus Mohamed R. Habib2