Éifeachtaí Frith-iomadaithe Salsa Cistánach ar Dhul Chun Cinn Hipearpláis Phróstatach Neamhurchóideach Ⅰ
Oct 18, 2022
Coimriú:Cistanche TubulosaBaineadh úsáid as i leigheas traidisiúnta chun cóireáil a dhéanamh areasnamh duáin, neurasthenia, galair dysfunction gnéasach, agushipearpláis prostatic neamhurchóideacha(BPH). Ba é aidhm an staidéir seo imscrúdú a dhéanamh ar an meicníocht trína n-eascraíonn sliocht C. tubulosa (CSE) anéifeacht frith-iomadaithe ar an bhfíochán próstatachde francaigh spreagtha BPH. Rinneadh measúnú ar éifeachtaí CSE ar BPH i dtéarmaí meáchain próstatach, táirgeadh seruln dihydrotestosterone (DHT), agus léiriú mRNA de 5o-reductase cineál 1 agus cineál 2 i bhfíochán próstatach na bhfrancaigh spreagtha BPH. Ina theannta sin, rinneadh staining hematoxylin agus eosin (H&E) le haghaidh scrúdú histolaíochta ar mhoirfeolaíocht an fhaireog phróstataigh, agus rinneadh imscrúdú ar leibhéil léirithe próitéine i bhfíochán próstatach le hanailís blot an iarthair. Laghdaigh cóireáil CSE meáchan próstatach, tiúchan serum DHT, agus an abairt mRNA de 5o-reductase cineál 1 agus cineál 2 i bhfíocháin próstatach na bhfrancaigh spreagtha BPH. Ina theannta sin, chuir cóireáil CSE faoi chois iomadú cille trí leibhéil slonn na bpróitéiní athlastacha a bhaineann le (synthase ocsaíd nítreach induchtaithe agus cyclooxygenase 2) agus próitéiní a bhaineann le apoptosis (caspase-3 agus Bcl{{1)} próitéiní teaghlaigh a rialú. D’fhéadfadh CSE a bheith ina iarrthóir teiripeach féideartha do BPH mar gheall ar a chumas chun léiriú próitéiní athlastacha agus apoptóis a bhaineann le léiriú a rialáil.
Eochairfhocail:hipearpláis prostatic neamhurchóideacha, Cistanche Tubulosa, dihidrotestosterone, athlasadh, apoptosis, Bcl-2.
Réamhrá
Cistanche Tubulosaplanda seadánacha atá dúchasach d'iarthuaisceart na Síne. Is leigheas oirthearach traidisiúnta tábhachtach é a gas a úsáidtear chun cóireáil a dhéanamh areasnamh duáinagusneurasthenia(Deng et al.2004).Tá sé tuairiscithe freisin go bhfuil C.tubulosa éifeachtach i gcóireáilgalair dysfunction gnéasach, marimpidheachtagushipearpláis prostatic neamhurchóideacha(BPH) i leabhar leigheas na Cóiré ar a dtugtar an DonguiBogam. Is iad gliocóisídí feanileatánóideach (PhGanna) na comhábhair ghníomhacha is mó den luibh seo (Jimenez agus Riguera 1994). Tá sé léirithe go bhfuil raon leathan airíonna bitheolaíocha ag go leor PhGanna, lena n-áirítear éifeachtaí frithocsaídeacha agus antitumor. Coscann Acteoside, PhG ó C. tubulosa, apoptosis a tharlódh ón 1-ian meitile-4-phenylpyridinium (MMP*) i néaróin gráinnín cerebellar (Pu et al. 2003). Cé go bhfuil staidéir déanta ar fheidhmeanna fiseolaíocha C. tubulosa, níor imscrúdaíodh an mheicníocht mhóilíneach nó na meicníochtaí móilíneacha is bun le héifeachtaí C. tubulosa ar BPH.
Is sainairíonna é BPH méadú ar an próstatach, mar gheall ar fhás neamhailse laistigh den fhaireog (Andriole et al. 2004). Tá méaduithe ar leitheadúlacht agus ar mhinicíocht BPH ag tarlú i gcomhthéacs daonra atá ag dul in aois. Faoin mbliain 2030,20, beidh 20 faoin gcéad de dhaonra SAM 65 bliain d’aois nó níos sine, figiúr a chuimseoidh níos mó ná 20 milliún fear (Parsons 2010). Níl BPH sainmhínithe go hiomlán, agus faoi láthair níl aon chóireáil foirfe do BPH (Djavan et al.2010).
I measc na roghanna cóireála do BPH tá straitéisí cógaseolaíochta agus máinliachta.
Le blianta beaga anuas, tháinig laghdú ar líon na n-idirghabhálacha máinliachta in othair le BPH i bhfabhar cóireálacha cógaseolaíochta (Emberton et al. 2011). Mar gheall ar nádúr BPH, éilíonn cóireáil chógaseolaíoch úsáid fhada agus leanúnach cógais. Dá bhrí sin, is ceist an-tábhachtach í infhulaingteacht fhada agus leanúnach an chógais. Úsáidtear cineálacha éagsúla gníomhairí cógas-loighciúla cosúil le coscairí 5a-reductase (finasteride agus du-tasteride) agus antagonists a-adrenoceptor (alfuzosin, terazosin, doxazosin, tamsulosin) le haghaidh cóireála BPH (Lepor 2011;
Untergasser et al.2005).Is iad na príomhghníomhairí cógaseolaíochta le haghaidh cóireáil BPH ná coscairí 5a-reductase, ar eol go bhfuil leibhéil 5o-dihydrotestosterone rialta acu, agus bacóirí o-adrenergic (Tiwari et al. 2005). Cé go meastar go gcuireann na gníomhairí cógaseolaíochta seo bac suntasach ar dhul chun cinn BPH, thuairiscigh go leor staidéir a gcuid fo-iarsmaí neamh-inmhianaithe (Patel and Chapple 2006). miopaitít thromchúiseach, mar gheall ar a chosúlacht struchtúrach le hormóin stéaróideach (McConnell et al.2003; Uygur et al.1998). Toisc go léiríonn na gníomhairí cógaseolaíochta seo fo-iarmhairtí neamh-inmhianaithe, tá luach míochaine suntasach ag baint le teacht ar leigheasanna luibhe a chóireáil BPH go héifeachtach.
Chun éifeacht C. tubulosa ar BPH a mheas, léirigh muid go bhféadfadh sliocht C. tubulosa (CSE) an éagothroime a mhodhnú idir fás cille próstatach agus apoptosis i múnlaí francach BPH a spreagtha le testosterone.
Ábhair agus modhanna Ábhair agus imoibrithe
Ceannaíodh C.tubulosa ó Omniherb Co.Ltd. (Daegu, Poblacht na Cóiré) agus fuarthas finasteride ó Merck and Co.Inc. (Nua Gheirsí, SAM). Ceannaíodh testosterone, feinilmethylsulfonylfluoride (PMSF), Triton X-100, iaidíd próipidiam (PI), Nonidet P-40(NP-40), agus manglaim coscaire próitéine (PIC) ó Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, Missouri, SAM). Ceannaíodh primers oligonucleotide GAPDH agus cineál 1 5o-reductase agus cineál 2 ó Bioneer (Deajeon, an Chóiré), agus ceannaíodh SYBR Primix Ex Taq ó Takara (Shuzo, Shiga, an tSeapáin).antasubstaintí le haghaidh frith-iNOS(M{{9}). }), COX-2(C-20),poly(ADP-ribose)polymerase-1(PARP-1,(D-1),caspase{{ 16}} (H-277),Bcl-2(C-2),Bcl-xL(H-5),Bax(B-9),agus ceannaíodh frith- -actin(ACTBD11B7) ó Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, California, SAM) Ceannaíodh an antashubstaint le haghaidh frith-PCNA ó BD Biosciences,Pharmingen (San Diego, California, USA). . sliocht tubulosa (CSE)
Ceannaíodh luibheanna C. tubulosa ó Omniherb Co.Ltd. (Yeongcheon, Kyungpook, Poblacht na Cóiré). Bhí cion taise de<13% by="" weight="" and="" were="" air-dried.="" afterward,="" herbs="" underwent="" extraction="" with="" 50%(v/v)="" ethanol-water="" at="" 60="" ℃for="" 8="" h.="" the="" extract="" obtained="" was="" filtered="" through="" 20="" μm="" cartridge="" paper,="" and="" ethanol="" was="" removed="" by="" vacuum="" rotary="" evaporation="" (eyela,="" japan).="" the="" concentrate="" was="" subsequently="" freeze-dried,="" and="" the="" yield="" was="" found="" to="" be="" 12%="" w/w.="" the="" experiment="" was="" performed="" by="" dissolving="" the="" dry="" extract="" in="" distilled="" water,="" and="" the="" rest="" of="" extract="" was="" stored="" at="" -20="" ℃.="" the="" identities="" of="" the="" active="" components="" of="" the="" extract,as="" determined="" by="" hplc,="" were="" reported="" previously(jiang="" and="" tu="">
Ainmhithe
Ceannaíodh francaigh Sprague-Dawley fireann deich seachtaine d'aois (200 ± 20 g) ó Daehan Biolink (Daejeon, Poblacht na Cóiré). Cuireadh cóiríocht ar fáil do na hainmhithe faoi choinníollacha a bhí de réir na dtreoirlínte maidir le cúram agus úsáid ainmhithe saotharlainne, arna nglacadh agus arna bhfógairt ag Coiste Institiúideach um Chúram Ainmhithe Ollscoil Sangji (Uimh. Chlár.2014-09). Bhí na francaigh i dtaithí ar na coinníollacha saotharlainne ar feadh 2 sheachtain sular thosaigh an turgnamh. Soláthraíodh rochtain saor in aisce dóibh ar bhia agus uisce ar feadh 4 seachtaine agus coinníodh iad faoi thimthriall 12 h éadrom/12 h dorcha ag teocht leanúnach 22±2 céim agus taiseachas coibhneasta 55±9 faoin gcéad le linn an turgnaimh. Sannadh na francaigh go randamach do cheann de 4 ghrúpa (n=6): an grúpa rialaithe (Con, gnáth-próstatach le tuaslagán feithicle: saline maolánach fosfáit (PBS) 200μL, po）; grúpa spreagtha BPH (BPH), Grúpa spreagtha BPH cóireáilte le finasteride (5 mg / kg / lá, po, (Fina)); grúpa BPH-spreagtha cóireáilte le CSE (200 mg / kg / lá; po) Gearradh na francaigh sa ghrúpa rialaithe ar oscailt agus fuaite ansin gan na magairlí a bhaint tar éis anaesthetization le zoletil@ 50 (20 mg/kg, ip); choilleadh francaigh sna grúpaí eile. Tar éis 3 lá téarnaimh, cuireadh própionáit testosterone (10mg/kg) ar na grúpaí BPH-spreagtha. /day,ip, tuaslagtha in ola arbhair) ina n-aonar nó in éineacht le CSE nó finasteride go laethúil ar feadh 4 seachtaine.Fiche ceithre huaire an chloig tar éis an riaracháin deiridh, íobairt na francaigh go léir tar éis ainéistéiseach le zoletil@ 50 (20 mg/kg,ip). Tarraingíodh samplaí fola as an vena cava caudal, agus rinneadh an séiream a scaradh trí lártheifneoiriú agus a stóráil ag {-80 céim . et al.2004).
meáchan próstatach le cóimheas meáchan coirp
Rinneadh fíocháin phróstatacha a excised, a rinsiú, agus a mheá láithreach. Ríomhadh cóimheas meáchain próstatach le meáchan coirp (cóimheas PW/BW) mar a thuairiscítear thíos.
Cóimheas PW/BW
= (gach meáchan próstatach ainmhí ó ghrúpa turgnamhach/gach meáchan coirp ainmhí ó ghrúpa turgnamhach) x 100 Cosc ar fhás ar mheáchan próstatach
Ar chríochnú an staidéir, baineadh próstatach agus meáchan. Ríomhadh céatadán an chosc ar fhás mar seo a leanas:100-[(grúpa-rialaithe cóireáilte)(grúpa rialaithe grúpa BPH)×100]. Anailís ar thiúchan serum de dhéhidrotestosterone (DHT).
Socraíodh tiúchan serum DHT le ELISA tráchtála (ALPCO Diagnostics, Salem, New Hampshire, SAM). Rinneadh mar a deir de réir threoracha an mhonaróra.
Anailís histeolaíochta
Socraíodh an fíochán próstatach i ngach grúpa i dtuaslagán formalin 4 faoin gcéad, leabaithe i pairifín, agus ansin gearrtha i rannóga 4 pm. Dathaíodh na hailt le hematocsailín agus eosin (S&E) le haghaidh scrúdú histeolaíochta. Fuarthas íomhánna trí úsáid a bhaint as micreascóp SZX10 (Olympus, Tóiceo, an tSeapáin).Rinne histeolaí gairmiúil ó Institiúid Eolaíochta Leighis Seoul (Seoul, an Chóiré) anailís histeolaíoch agus tiús fíocháin epithelium ó phróstatach (TETP) a thomhas ag baint úsáide as Leica Application Suite (LAS, leagan 3.3.0) bogearraí le haghaidh measúnú oibiachtúil in anailís histeolaíochta. Anailís chainníochtúil imoibriú slabhrúil polaiméaráise (PCR) fíor-ama
Rinneadh an fíochán prostatic ó gach ainmhí a homogenized, agus leithlisíodh RNA iomlán trí úsáid a bhaint as Easy-Blue @ Reagent (Intron Biotech-nology Inc., Gyeongi-do, Poblacht na Cóiré) de réir threoracha an déantóra fear. Rinneadh an RNA iomlán a chainníochtú trí úsáid a bhaint as córas speictreafótaiméadar Epoch@micro-volume (BioTek Instruments, Inc. Winooski, Vermont, USA). Tiontaíodh RNA iomlán ón ae agus fíocháin ghairid visceral go cDNA ag baint úsáide as trealamh ard-acmhainne cDNA trascríobh droim ar ais (Applied Biosystems, Foster City, California, USA).Rinneadh aimpliú PCR ag baint úsáide as in-chorparáid glas SYBR (Bithchórais Fheidhmeach). ). Ba iad na primers oligonucle-otide do 5o-reductase cineál 1, a dearadh ó francach, ná GGAAGG TTT CAT GGCCTT CG (ar aghaidh) agus TCG AGG GCA GCT GTA TG (droim ar ais), na primers cineál 5o-reductase 2, a dearadh ó francach, ná ATG. GGG ACC CTG ATC CTG TG (ar aghaidh) agus CGA CAC CACAAA GGA AGG CA (droim ar ais), agus na primers GAPDH, a úsáideadh mar ghéine coimeádta tí agus deartha ó francach, bhí TGA TTC TAC CCA CGG CAA GT (ar aghaidh) agus AGC ATC ACC CCA TTT GAT GT (cúl).Rinneadh tras-scríobh droim ar ais ag baint úsáide as teirmeascléireach (córas Géine Amp⑧ PCR 9700, Bithchórais Fheidhmeach), agus cuireadh na torthaí in iúl mar an cóimheas idir an dlús optamach agus GAPDH. Anailís blot an Iarthair
Fíochán próstatachRinneadh aonchineálú ó gach ainmhí sa mhaolán tráchtála lysis PRO-PREP⑧ (Intron Biotechnology Inc.) agus goraíodh é ar feadh 25 nóiméad ar oighear chun lysis cille a aslú. Rinneadh eastóscáin fíocháin a lártheifneoiriú ag 16 000g(4 céim) ar feadh 20 nóiméad, agus aistríodh an comhshnáthán go feadán glan. Bhí an tiúchan próitéin a dhíspreagadh léirigh athruithe histologacha tipiciúla, lena n-áirítear epithelium glandular tiubhaithe, cíteaplasma bhfolús dírithe i dtreo an lumen glandular, agus limistéar luminal glandular laghdaithe ( Fíor. 3 A). Chuir riarachán CSE ar feadh 4 seachtaine na patrúin hipearphlaisteacha tipiciúla seo faoi chois, a léiríonn athrú histeolaíoch ó ghnáth-fhíochán prostatach go hipearpláis próstatach. Go hachomair, léirigh scrúdú histolaíochta ar ghrúpaí finasteride-agus CSE-cóireáilte treocht shoiléir chun hipearpláis próstatach a fheabhsú. Ina theannta sin, mar a thaispeántar i bhFíor 3B, léirigh anailís TETP gur breathnaíodh an fíochán epithelial is tiubhaithe i bhfrancaigh spreagtha BPH i gcomparáid leis sin in aon ghrúpa staidéir eile, agus léirigh grúpaí finasteride- agus CSE-cóireáilte laghdú suntasach ar thiús próstatach. .
Chun iomadú cealla epithelial próstatach a mheas, rinneamar scrúdú ar léiriú próitéine PCNA i bhfíochán próstatach na bhfrancaigh a tharlódh BPH. Mar a léirítear i bhFíor 3C, léirigh anailís blot an iarthair méadú ar léiriú próitéin PCNA sa ghrúpa BPH-spreagtha i gcomparáid le leibhéil PCNA sa ghrúpa rialaithe. I gcomparáid leis an ngrúpa BPH-spreagtha, áfach, léirigh na grúpaí finasteride- agus CSE-cóireáilte léiriú próitéine PCNA laghdaithe, rud a léirigh a n-éifeachtaí frith-iomadaithe i BPH.
Fíor.2.Éifeacht riarachán eastósc Cistanche Tubulosa (CSE) ar tháirgeadh serum dilhydrotestosterone (DHT) agus leibhéil mRNA de chineál 1 agus cineál 5a-reductase i bhfíocháin phróstataigh hipearpláis phróstatach neamhurchóideacha (BPH) samhlacha francach spreagtha. (A) Rinneadh tiúchan serum DHT a chinneadh trí úsáid a bhaint as measúnacht ELISA. (B) Rinneadh anailís chainníochtúil PCR fíor-ama ar 5a-Reductase cineál 1 agus cineál 2 mRNA expressionin fíochán próstatach. Léiríonn na sonraí a thaispeántar meán±SEM de 6 francach in aghaidh an ghrúpa."p<><0.001 vs.con=""><0.001 vs.bph="">
