[6]-Éascaíonn Gingerol Rúnú CXCL8 agus Táirgeadh ROS i Neodróifilí Daonna Príomhúla Trí Dhíriú ar Chainéal TRPV1 Cuid 2

2.6. Tionchar [6]-Gingerol ar Rún CXCL8 ar Spreagadh fMLF

Spreag an toradh roimhe seo an cheist an gcuireann an slonn athraithe próitéine ar dhromchla na neodrófilí isteach ar fhreagraí ginearálta na gceall seo ar mhóilíní gníomhacha aitheanta mar fMLF.

Nuair a bhí neutrophils scoite réamh-ghlais le [6] - gingerol i dtiúchan de 50 nM ar feadh 2 h agus spreagtha le tiúchain éagsúla fMLF ar feadh 4 h breise, méadú ar secretion CXCL8 tar éis spreagadh ina dhiaidh sin le fMLF ag comhchruinnithe de 0.3 nM (22 faoin gcéad , p {{10}}.08), 0.5 nM (32 faoin gcéad , p = 0.05), agus léiríodh 1 nm (33 faoin gcéad , p=0.03) i gcomparáid le spreagadh aonair le fMLF (Fíor 6). Chomh maith leis sin, trí na neodrófilí a réamh-ghothú ar feadh 2 h le 50 nM [6]-gingerol chun cinn aistriú ar luach EC50 ó 0.66 go 0.49, rud a léiríonn freagrúlacht mhéadaithe na gceall i dtreo fMLF. I gcodarsnacht leis sin, níor chothaíodh secretion CXCL8 (níl CXCL8 inbhraite, níor léiríodh sonraí) má dhéantar na neodrófilí a réamh-ghorthú le 50 nM [6]-gingerol ar feadh 2 h amháin.

Tá neutrophils ar cheann de na cealla is tábhachtaí sa chóras imdhíonachta daonna. Tá príomhfheidhmeanna imdhíonachta acu agus is féidir leo sinn a chosaint go héifeachtach ó fhrídíní, víris, baictéir agus pataiginí éagsúla, rud a chuireann feabhas ar ár n-imdhíonacht.

Is é príomhfheidhm neutrophils dul isteach go tapa ar an suíomh lesion nuair atá ionfhabhtaithe nó gortaithe chun phagocytize agus pataiginí, cealla necrotic agus coimpléisc imdhíonachta, etc., a phagocytize agus a díleá, agus sraith substaintí antibacterial agus idirghabhálaithe athlastacha a scaoileadh, mar shampla comhlánú, interferon, fachtóirí cille. , etc., ar an gcaoi sin cealla imdhíonachta eile a ghníomhachtú agus a threorú chun pataiginí a chomhrac agus fíocháin damáiste a dheisiú. Ina theannta sin, is féidir le neutrophils páirt a ghlacadh freisin i dtáirgeadh autoantibodies agus deisiú fíocháin sa chorp.

Mar sin, tá dlúthbhaint ag neutrophils le díolúine an chomhlachta. D'fhéadfadh líon íseal neodrófail an corp a bheith so-ghabhálach d'ionfhabhtú nó do ghalair uath-imdhíonachta, agus d'fhéadfadh athlasadh nó míchothromaíocht iomarcach sa chóras imdhíonachta a bheith mar thoradh ar chomhaireamh ard. Dá bhrí sin, tá sé an-tábhachtach gnáthchomhaireamh neodrófail a choinneáil chun díolúine an duine a chothabháil.

Trí fheidhmiú, ithe sláintiúil, codladh go leor a fháil, etc., is féidir linn ár n-imdhíonacht a fheabhsú, troid i gcoinne pataiginí éagsúla, athlasadh a laghdú, agus ár sláinte a chosaint. Ag an am céanna, nuair a tharlaíonn galar, is féidir linn gnáthchomhaireamh neutrophil a choinneáil, díolúine a neartú, agus aisghabháil a chur chun cinn trí chóireáil ghníomhach agus mí-úsáid drugaí gan ghá a sheachaint.

I mbeagán focal, is cuid thábhachtach de chóras imdhíonachta ár gcorp iad neutrophils. Má choinnítear gnáthchomhaireamh neodrófail, féadtar ár n-imdhíonacht a fheabhsú agus ár sláinte a chosaint. Dá bhrí sin, lig dúinn dearcadh dearfach a choinneáil ar an saol, aird a thabhairt ar ár sláinte, díolúine a fheabhsú go héifeachtach, agus taitneamh a bhaint as saol sláintiúil agus sona. Ón taobh sin de, ní mór dúinn aird a thabhairt ar ár n-imdhíonacht a fheabhsú. Is féidir le Cistanche díolúine a fheabhsú go suntasach, toisc go bhfuil éagsúlacht de chomhpháirteanna bitheolaíocha gníomhacha ag fuinseog feola, mar shampla polaisiúicrídí, dhá beacáin, Huang Li, etc. Is féidir leis na comhábhair seo feoil a spreagadh Gach cineál cealla den chóras imdhíonachta a ngníomhaíocht imdhíonachta a mhéadú.

Cliceáil forlíonadh cistanche deserticola

2.7. Tionchar [6]-Gingerol ar Tháirgeadh ROS

Ansin, rinneamar anailís ar cibé an bhfuil tionchar ag gor neutrophils le [6] - gingerol ar a nginiúint speiceas ocsaigine imoibríoch tar éis na tréimhse goir 2 h le [6]-gingerol agus tar éis spreagadh ina dhiaidh sin le 1 nM fMLF.

Níor léirigh na hanailísí aon tionchar suntasach staitistiúil ag gor 2 h de neutrophils le 50 nM [6]-gingerol (Fíor 7A). Mar sin féin, mhéadaigh neodrófilí réamh-ghoir ar feadh 2 h le 50 nM de [6] - gingerol agus ina dhiaidh sin na cealla a spreagadh le 1 nM fMLF táirgeadh ROS 27.8 faoin gcéad ± 2.2 faoin gcéad (Fíor 7B).

2.8. Cosc Cógaseolaíochta ar Aisiompuithe TRPV1 [6] - Éifeachtaí a Spreagtar le Gingerol

Chun rannpháirtíocht TRPV1 a fhíorú sna méaduithe [6]-gingerol-spreagtha i secretion CXCL8 agus táirgeadh ROS tar éis spreagadh fMLF, cuireadh an t-inhibitor sainiúil TRPV1 tras-tertbutylcyclohexanol (BCH) i bhfeidhm.[5a] Cuireann ceangal BCH le TRPV1 isteach ar a idirghníomhaíocht le [6]-gingerol, agus ba cheart dá bhrí sin bac a chur ar na héifeachtaí [6]-gingerol-spreagtha, a cheadódh an chonclúid go bhfuil na héifeachtaí breathnaithe trí mheán TRPV1.

Maidir leis an gcur chuige seo, goraíodh neutrophils daonna le [6] -gingerol ar feadh 2 h nó le [6] -gingerol agus BCH ar feadh 2 h, agus ina dhiaidh sin spreagadh iad le 1 nM fMLF. D'fhéadfaimis a thaispeáint, nach bhféadfaí an méadú ar tháirgeadh CXCL8 a tharlódh trí na neodrófail a réamh-ghoir le 50 nM [6] -gingerol agus spreagadh ina dhiaidh sin le 1 nM fMLF a bhrath, nuair a bhí na cealla réamh-ghlais le meascán de [6] - gingerol agus 100 μM BCH (Fíor 8A), ag deimhniú rannpháirtíocht TRPV1 sna [6] - éifeachtaí spreagtha gingerol. I gcás táirgeadh ROS, bhí luachanna níos ísle fós ná an rialú tuaslagóir (Fíor 8B).

3. Plé

Cé go bhfuil cur síos maith déanta ar airíonna cemosensory roinnt bealaí TRP, tá a bhfeidhm i fíocháin neamh-céadfach i bhfad níos lú soiléire. Maidir lena bpróifíl léiriú ginearálta i bhfíochán nonsensory cosúil le leukocytes fola, níor rinneadh ach cúpla staidéar san am atá caite. In 2011, rinne Wenning et al.[24] anailís ar léiriú RNA bhaill na dteaghlach TRPC, TRPM, agus TRPV i gcealla daonna CD4 móide T bunscoile trí RT-PCR. Fuair ​​​​siad léiriú comhsheasmhach ar TRPC1, TRPC3, TRPV1, TRPM2, agus TRPM7.

Ina theannta sin, taispeánadh TRPC3 chun iomadú Ca2 móide-spleách ar chealla príomhúla CD4 móide T a mhodhnú. Maidir leis an bpróifíl slonn, tá na torthaí tuairiscithe[24] comhsheasmhach lenár sonraí, seachas TRPC3, nár aimsíodh, san obair seo, ach le minicíocht 80 faoin gcéad . I neodrófail dhaonna, tá Heiner et al.[11] anailís ar phatrún léirithe na n-athscríbhinní a bhaineann go sonrach le TRP trí RT-PCR. Léirigh siad athscríbhinní sonracha le haghaidh LTRPC2 (TRPM2), TRPV1, próitéin receptor vanilloid-mhaith 1 (TRPV2), epithelial Ca2 móide cainéal 1 (TRPV5), epithelial Ca2 móide cainéal 2 (TRPV6), agus TRPC6, atá ag teacht go hiomlán lenár torthaí.

Mar sin féin, go dtí seo, de réir ár n-eolas, ní dhearnadh anailís ar aon sonraí cainníochtúla cuimsitheacha faoi léiriú RNA de na 27 ball den supertheaghlach TRP daonna do chúig cinn de na cineálacha cealla leukocyte fola is suntasaí. Ligeann na torthaí a fuaireamar dúinn teacht ar an gconclúid nach bhfuil slonn an chainéil TRP ag brath ar lineage. Mar sin, d’fhéadfaí hipitéis a thabhairt go bhfuil léiriú ar chainéil TRP á rialú seachas ina n-aonar. Ní féidir ach tuairimíocht a dhéanamh ar na himthosca a théann i bhfeidhm ar léiriú gach cainéal TRP i ngach cineál cille ag pointe áirithe ama, ach d’fhéadfadh, seachas gnéithe ginearálta fiseolaíocha, nósanna cothaithe agus stádas cothaithe an duine aonair a áireamh freisin.

Mar shampla, léiríodh gur mhéadaigh leibhéil arda glúcóis léiriú TRPC1, TRPC3, TRPC5, TRPC6, TRPM6, agus TRPM7 i monaicítí daonna.[25] Is fiú a thabhairt faoi deara nach bhféadfaimis TRPC3 agus TRPC5 a bhrath ar chor ar bith i monocytes, rud a d'fhéadfaí a mhíniú trí anailís a dhéanamh ar chealla ó dheontóirí éagsúla, ag tacú le rialáil an-aonair ar léiriú cainéal TRP.

Ar an láimh eile, níor léirigh spreagadh neutrophils leis an ligand TRPV1 [6] -gingerol ag tiúchan 50 nM ar feadh 2 h aon tionchar suntasach ar a RNA agus léiriú próitéine dromchla. D'fhéadfadh an toradh deiridh a bheith le tuiscint nach bhfuil inmheánú ar an ngabhdóir mar thoradh ar an gor. Is é seo an toradh a spreagann capsaicin inmheánú TRPV1 ach amháin ag tiúchan níos airde (EC50: 500 nM) i gcealla TRPV1 móide HEK293.[26]

Mar thoradh ar gor neutrophils le [6]-gingerol i dtiúchan de 50 nM ar feadh 2 h tháinig athruithe suntasacha i léiriú dromchla próitéin seachas TRPV1, ie, léiriú méadaithe ar an receptor fMLF FPR1, CD11b, agus CD66b. Bhí an toradh seo suimiúil sa mhéid is go bhfuil sé léirithe roimhe seo go mbíonn léiriú dromchla ardaithe ar an ngabhdóir fMLF FPR1, CD11b, CD35, agus CD66b mar thoradh ar thúsú neodrófail.[27] Go contrártha, laghdaíodh slonn CD62L trí shedding einsímeach i neutrophils primed.[28] Is próiseas é primeáil trína n-aistrítear neodrófilí ó staid scíthe go stát “réidh le dul” arb iad is sainairíonna é an cumas freagairt níos láidre a thabhairt do spreagthaigh a ghníomhachtú, gan gnéithe de ghníomhachtú iomlán, m.sh. táirgeadh ROS.[16b] Cibé an bhfuil. is féidir na hathruithe feinitíopacha a breathnaíodh a chur i leith na n-iarsmaí neodrófail atá dothuigthe ag an bpointe seo.

Mar sin féin, d'fhéadfadh méadú ar fhreagrúlacht neodrófail dá ligand, fMLF, an gníomhaí neodrófail is tábhachtaí agus is tábhachtaí agus is dea-staidéar a bheith mar thoradh ar léiriú dromchla méadaithe FPR1. Spreagadh neodrófail le fMLF, i measc freagraí eile, ar scaoileadh ceimicíní, agus tá CXCL8 (IL-8) ríthábhachtach don fhreagra seo. Feidhmíonn CXCL8 mar chemoattractor chuig cealla eile, rud a threoraíonn iad chuig suíomh an ionfhabhtaithe. Go deimhin, mar thoradh ar réamh-goir neutrophils daonna le [6]-gingerol agus spreagadh ina dhiaidh sin le fMLF tháinig méadú ar secretion an chemokine CXCL8. Mar sin féin, ní fhéadfaí an éifeacht seo a fheiceáil ach amháin i raon tiúchana de 0.3–1 nM fMLF. D’fhéadfadh gurb é an chúis atá leis seo ná go gcothaíonn tiúchan fMLF níos airde dí-íogrú nó inmheánú gabhdóirí,

a chuirfeadh deireadh leis an méadú [6]-gingerol-spreagtha i slonn FPR1.[29] Taispeánadh an freagra méadaithe i dtreo fMLF freisin le haghaidh táirgeadh ROS tar éis na cealla a réamh-ghoir le [6] -gingerol agus spreagadh ina dhiaidh sin le 1 nM fMLF. Mar thoradh ar chosc cógaseolaíochta ar TRPV1 trí chicliheacsánól tras-tástáil bhí leibhéil ROS níos ísle fós ná mar a bhí sa rialú, rud a d'fhéadfadh baint pháirteach ghinearálta de TRPV1 a léiriú i dtáirgeadh ROS i neodrófail dhaonna mar a léiríodh do néaróin dronglion fréimhe droma luiche.[30 ]

Níor mhéadaigh an réamh-goir 2 h féin táirgeadh ROS, rud a léiríonn freisin freagrúlacht fheabhsaithe na gcealla, ach níor cuireadh tús le táirgeadh ROS ag [6] -gingerol. Ina theannta sin, níor léirigh an scagadh cítocine agus chemokine ach líon measartha íseal tras-scríbhinní arna rialú ag gor neutrophils le [6]-gingerol, le leibhéil tras-scríbhinn TRPV1 agus próitéin dromchla fiú gan athrú. Tugann sé seo le tuiscint, go dtarlaíonn na hathruithe feidhmiúla agus feinitíopacha a breathnaíodh in éagmais sintéise de novo.

Maidir le torthaí beagán neamhréireach roimhe seo, tacaíonn ár dtorthaí le léiriú feidhmiúil TRPV1 i neodrófail dhaonna. Mar sin féin, Schepetkin et al.[22] léirigh tionchar coisctheach TRPV1-idirghabhála geranyl aicéatón ar imirce neodrófail i dtreo fMLF, agus CXCL8-Ca2 intracellular móide slógadh, i gcodarsnacht lenár dtorthaí a thugann le fios go bhfuil tionchar spreagthach ar TRPV1 ar ghníomhachtú ina dhiaidh sin . Seachas a bheith ina gcomhdhúile éagsúla, d'fhéadfadh go mbeadh na tiúchana cumaisc éagsúla a úsáidtear mar chúis amháin leis an neamhréireacht seo, ós rud é go Schepetkin et al.[22] chuir tiúchan 50 μM geranyl aicéatón i bhfeidhm, ach inár gcuid oibre níor chuireamar ach 50 nM [6] - sinséir i bhfeidhm. Roghnaíodh an tiúchan seo bunaithe ar ár gcuid oibre roimhe seo, a léirigh tiúchan plasma uasta de 42.0 ± 16.3 nmol L -1 ag 30 min tar éis tomhaltas tae ginger agus laghdaigh tiúchan thar chúrsa ama ina dhiaidh sin de 2 h. Mar sin féin, caitheadh ​​​​an tae ginger laistigh de 20 min, rud a d'fhéadfadh nach gcomhfhreagraíonn sé leis an iompar tomhaltais is gnách. Mar sin, ghlacamar leis go bhfuil tiúchan plasma de 50 nM [6] -gingerol insroichte trí ionghabháil chothaithe, ach ní dócha go dtarlóidh tiúchan níos airde.[9]

Cuireadh éifeacht coisctheach geranyl aicéatón i leith tras-dí-íogairiú, rud a d'fhágfadh go dtiocfadh laghdú ar fhreagraí i dtreo spreagthaigh a ghníomhachtú, agus d'fhéadfadh duine glacadh leis nach bhfuil an éifeacht seo i láthair ach amháin ag tiúchan ligand TRPV1 níos airde sa raon μM, rud a fhágann go n-ardófaí comhchruinnithe intracellular Ca2 móide. Sa chomhthéacs seo, is fiú a lua gur léirigh anailísí comhchruinnithe freagartha inár gcuid oibre roimhe seo maidir le secretion cytokine i gcealla T luach IC50 de 82.2 μM do [6] - gingerol.[9] Neartódh sé seo, mar aon leis an éifeacht coisctheach breathnaithe de 50 μM geranyl aicéatón, an toimhde go bhfeidhmíonn tiúchan arda de ligands TRPV1 go hintuigthe, ach go gcuireann tiúchan níos ísle le feidhmeanna cille imdhíonachta. [6]-níor cuireadh tiúchan gingerol faoi bhun 50 nM san áireamh sa staidéar. Mar sin, tá an cheist fós, cé acu an nochtfadh tiúchan níos ísle éifeachtaí suntasacha, ábhartha ó thaobh na bitheolaíochta de. Mar sin féin, léiríonn an staidéar a cuireadh i láthair, go bhfuil tiúchan [6]-gingerol, a bhaintear amach sa phlasma fola tar éis ionghabháil gnáth-chothaithe tae ginger, leordhóthanach chun secretion CXCL8 a éascú chomh maith le táirgeadh ROS i neutrophils daonna.

Léiríonn ár dtorthaí gur féidir le comhábhar bia gníomhach céadfach tionchar a imirt ar fhreagairtí ceallacha ginearálta i bhfíocháin neamhchéadfach ar nós leoicicítí fola tríd an gcainéal TRPV1 ag tiúchan atá ábhartha ó thaobh cothaithe de. Leagann na modhnuithe breathnaithe ar fheidhm neodrófail, mar aon le cur in iúl go forleathan bealaí TRP i leoicicítí fola mar spriocstruchtúir fhéideartha, béim ar a thábhachtaí atá sé measúnú a dhéanamh ar acmhainneacht bhithghníomhach na gcomhábhar bia le fócas ar leith ar thiúchan is féidir a bhaint amach trí nósanna cothaithe coitianta.

4. Alt Turgnamhach

Leithlisiú Leukocytes: Fuarthas samplaí fola tráchtála ó dheontóirí sláintiúla gan ainm ó SonnenGesundheitszentrum/Transfusionsmedizin, (aistriúchán Béarla: Sun Health Centre/Transfusion Medicine) München (An Ghearmáin). Rinneadh neutrophils, cealla NK, cealla B, agus cealla T a leithlisiú ag baint úsáide as na Feisteáin Leithlisithe Fola Iomláin MACSxpress (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, an Ghearmáin) de réir phrótacal an mhonaróra. Ina dhiaidh sin, ídíodh na erythrocytes a bhí fágtha ag baint úsáide as Kit Ídiú Erythrocyte MACSxpress (Miltenyi Biotec). Chun monocytes a aonrú, baineadh úsáid as Coirníní Micrimhilseogra StraightFrom Whole Blood CD14, an Kit Colún Iomlán Fola, agus Réiteach Lysis Red Cell Blood (Miltenyi Biotec).

Leithlisiú RNA, Trascríobh Droim ar Ais, agus PCR Fíor-Ama Cainníochtúil: Rinneadh RNA ó leukocytes a leithlisiú ag baint úsáide as imoibrí QIAzol Lysis (Qiagen, Hilden, an Ghearmáin) tar éis cóireáil DNase ag baint úsáide as an tacar DNase saor ó RNase (Qiagen) de réir phrótacal an mhonaróra. Socraíodh sláine RNA tríd an RNA 6000 Nano Kit (Agilent Technologies, Waldbronn, an Ghearmáin) ag baint úsáide as an Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies). Trascríobhadh RNA go cDNA ag baint úsáide as an iScript gDNA Clear cDNA Kit Sintéise (Bio-Rad Laboratories GmbH, Feldkirchen, an Ghearmáin). Maidir le qPCR 50 ng de cDNA agus SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix (BioRad Laboratories GmbH) a mheascadh le péirí primer ar leith.

Rinneadh na primers faoi seach a bhailíochtú trí tháirgí PCR a dhíorthaítear ó thurgnaimh qRT-PCR a sheicheamhú ag baint úsáide as RNA ón inchinn dhaonna nó ó testis (ó Phainéal Suirbhé RNA Iomlán Daonna FirstChoice, Thermo Fisher Scientific) le haghaidh TRPM4, TRPM5, agus TRPV5, faoi seach. Tugadh Primer agus na sraitheanna táirgí faoi seach i dTábla S1, Faisnéis Tacaíochta. Baineadh úsáid as ACTB, B2M, HMBS, agus HPRT1 mar ghéinte tagartha agus ceannaíodh na primers faoi seach ó Bio-Rad Laboratories. Baineadh úsáid as rialú RT, rialú PCR, rialú gDNA, agus rialú cáilíochta RNA (Saotharlanna Bith-Rad) mar rialuithe ginearálta PCR. Rinneadh imoibrithe PCR ar Chóras Fíor-Ama CFX 96 (Saotharlanna Bith-Rad) ag baint úsáide as na coinníollacha PCR seo a leanas: 95 céim ar feadh 1 nóiméad, agus 45 timthriall de 95 céim ina dhiaidh sin ar feadh 15 s agus 60 céim ar feadh 1 nóiméad. Is féidir minicíochtaí, a léirigh cé mhéad de na deontóirí a d’fhiosraigh an tras-scríbhinn a aimsiú, agus ríomhadh luachanna Δct trí úsáid a bhaint as Microsoft Excel.

Goir Neutrophils: Tar éis aonrú ó fhuil na ndeontóirí sláintiúla, cuireadh neodrófilí ar fionraí i RPMI 1640 (Gibco, Thermo Fisher Scientific, Schwerte, an Ghearmáin) nach raibh aon fhorlíonta breise ann le dlús cille 1 × 1{{18 }}6 mL−1. [6] cuireadh -gingerol (Sigma, Níos mó ná nó cothrom le 98 faoin gcéad íonacht) nó DMSO, faoi seach i dtiúchan deiridh de 50 nM nó 0.02 faoin gcéad . Ina dhiaidh sin, goradh na cealla ag 37 céim agus 5 faoin gcéad CO2 ar feadh 2 h, agus úsáideadh iad go díreach le haghaidh anailísí breise nó lártheifneoirithe ag 300 × g ar feadh 10 nóiméad ag teocht an tseomra, nite le RPMI 1640 (Gibco), agus gortha tuilleadh le fMLF. ( Almone Labs, Iarúsailéim, Iosrael) ar feadh 4 u nó DMSO (0.02 faoin gcéad ) mar rialú tuaslagóir, faoi seach.

Imdhíonadh: Le haghaidh imdhíonchothaithe, rinneadh 105 neodrófail, cóireáilte nó neamhchóireáilte, a lártheifneoiriú ag 300 × g ar feadh 10 nóiméad. Asúíodh an comhshnámh agus cuireadh na cealla ar fionraí arís i maolán PBS. Cuireadh na antasubstaintí leis de réir an mhonaróra, agus na fionraí measctha agus gor ag 4 céim ar feadh 10 nóiméad sa dorchadas. Ina dhiaidh sin, nitear na cealla ag baint úsáide as 1 mL de mhaolán PBS agus cuireadh ar fionraí arís iad i 500 μL de mhaolán PBS le haghaidh anailíse ag baint úsáide as Anailíseoir MACSQuant 16 (Miltenyi Biotec). Ba iad na hantasubstaintí a úsáideadh ná: CD15-VioBlue (tiúchan deiridh: 2.5 ug mL−1), CD62LVioGreen (tiúchan deiridh: 7.5 ug mL−1), CD11b-APC (tiúchan deiridh: 2 ug mL−1), CD66b- APC/Vio770 (tiúchan deiridh: 1 ug mL−1), antashubstaint receptor fMLP-FITC (tiúchan deiridh: 20 ug mL−1) (Miltenyi Biotec), frith-TRPV1-FITC (tiúchan deiridh: 25 ug mL −1) (Saotharlanna Alóim), Coinín IgG Isotype Control-FITC (tiúchan deiridh: 25 ug mL−1) (Thermo Fisher Scientific). Rinneadh measúnú ar inmharthanacht cille ag baint úsáide as staining iaidíde propidium (Miltenyi Biotec). Fuarthas luachanna meándéine fluaraiseachta (MFI) agus na figiúirí comhfhreagracha trí úsáid a bhaint as bogearraí Flowlogic 7.3 (minivan Technologies, Mentone, Victoria, Australia).

Tomhas ROS: Braitheadh ​​​​speicis ocsaigin imoibríoch ag baint úsáide as Imoibrí Glas CellROX (Thermo Fisher Scientific) de réir threoracha an mhonaróra. Go hachomair, déileáladh le neutrophils le ceachtar 50 nM [6] -gingerol ar feadh 2 h nó 50 nM [6] -gingerol ar feadh 2 h agus ina dhiaidh sin le 1 nM fMLF ar feadh 4 h, nó na rialuithe tuaslagóirí faoi seach. Cuireadh an t-imoibrí CellROX leis na cealla ag tiúchan deiridh de 5 μM 30 nóiméad roimh dheireadh na tréimhse goir agus gor an meascán ar feadh 30 nóiméad ag 37 céim agus 5 faoin gcéad CO2. Ina dhiaidh sin, baineadh an meán, agus nitear na cealla trí huaire le PBS agus rinneadh anailís orthu ag baint úsáide as Anailíseoir MACSQuant 16 (Miltenyi Biotec). Fuarthas meánluachanna déine fluaraiseachta (MFI) trí úsáid a bhaint as bogearraí Flowlogic 7.3 (minivan Technologies).

Speictreafhluairiméadracht: Chun comhchruinnithe Ca2 móide intracellular a thomhas, cuireadh neodrófail ar fionraí i RPMI 1640 (Gibco) le dlús cille 1 × 106 mL -1. Lódaíodh na cealla le Fura-2 AM (Promocell, Heidelberg, an Ghearmáin) ar feadh 45 nóiméad ag 37 céim agus 5 faoin gcéad CO2, nite, agus cuireadh ar fionraí arís iad in RPMI 1640 (Gibco). Rinneadh measúnú ar fhluaraiseacht na gceall ag baint úsáide as Spectrofluorometer SAFAS Xenius XC (SAFAS, Monacó) ag na tonnfhaid seo a leanas: astaíocht 340 nm excitation/510 nm agus astaíocht 380 nm excitation/510 nm. Is dath cóimheasmhéadrach é Fura-2 ar féidir é a ghríosú ag 340 nm dá fhoirm atá faoi cheangal cailciam agus 380 nm dá fhoirm neamhcheangailte. Mar thoradh ar mhéadú ar an tiúchan cailciam intracellular bheadh ​​méadú ar fhluaraiseacht don fhoirm atá faoi cheangal cailciam agus laghdú ar fhluaraiseacht don fhoirm neamhcheangailte. Ríomhadh an cóimheas 340/380, a úsáideadh chun lódáil mhíchothrom cheallacha an ruaime a áireamh, trí úsáid a bhaint as Microsoft Excel. Socraíodh an cóimheas 340/380 do na cealla a ndearnadh cóireáil orthu leis an ionophore ionomycin tar éis 2 h go 100 faoin gcéad agus cuireadh an cóimheas do na cealla cóireáilte le 50 nM [6]-gingerol agus an rialú tuaslagóir chuige seo.

Measúnacht Imdhíonta-Cheangailte le Einsím: De réir phrótacal an déantóra, rinneadh na tiúchain CXCL8 sna sáithíní a díorthaíodh ó na turgnaimh ghoir (Roinn 4.3) a chinneadh trí Sandwich ELISA (DuoSet, R&D Systems, bith-theicneolaíocht, Minneapolis, MN, SAM).

Anailís Staitistiúil: Rinneadh na turgnaimh go léir ag baint úsáide as cealla ó thriúr deontóirí neamhspleácha ar a laghad. Mura luaitear a mhalairt, léiríodh sonraí mar mheán ± diall caighdeánach (SD) arna ríomh ag GraphPad Prism 9.0. Maidir leis na hanailísí ar dhifríochtaí suntasacha staitistiúla, rinneadh dhá shampla de thrialacha t an Mhic Léinn, nó, i gcás go ndéanfaí comparáid idir níos mó ná dhá athróg, ANOVA aontreo agus triail chomparáidí iolracha Tukey ina dhiaidh sin mar thástáil iarbhoc. Léiríodh an tástáil faoi seach a úsáideadh san fhinscéal figiúr comhfhreagrach. Measadh go raibh p-luach Níos lú ná nó cothrom le 0.05 suntasach ó thaobh staitistice.

Faisnéis Tacaíochta

Tá Faisnéis Tacaíochta ar fáil ó Leabharlann Ar Líne Wiley nó ón údar.

Buíochas

Cuireadh an Ráiteas Infhaighteachta Sonraí leis an 20 Feabhra 2023.

Coimhlint leasa

Ní dhearbhaíonn na húdair aon choinbhleacht leasa.

Ranníocaíochtaí Údair

GA, DK, agus VS a cheap agus a phleanáil na turgnaimh; rinne GA agus KK na turgnaimh; Rinne VS maoirsiú ar an tionscadal; Scríobh GA an chéad dréacht den lámhscríbhinn. Rinne na húdair go léir athbhreithniú ar an lámhscríbhinn deiridh.

Ráiteas Infhaighteachta Sonraí

Tá sonraí ar fáil ach iad a iarraidh ó na húdair.

Eochairfhocail

bia, ginger, córas imdhíonachta, inmunomodulation, leukocytes polymorphonuclear (PMNs).

Tagairt

[1] DE Clapham, Dúlra 2003, 426, 517.

[2] MJ Caterina, MA Schumacher, M. Tominaga, TA Rosen, JD Levine, D. Julius, Nature 1997, 389, 816.

[3] VN Dedov, VH Tran, CC Duke, M. Connor, MJ Christie, S. Mandadi, BD Roufogalis, Br. J. Cógaslann. 2002, 137, 793.

[4] CM Hochkogler, B. Lieder, P. Rust, D. Berry, SM Meier, M. Pignitter, A. Riva, A. Leitinger, A. Bruk, S. Wagner, J. Hans, S. Widder, JP Ley, GE Krammer, V. Somoza, Mol. Nutr. Bia Res. 2017, 61, 1600731.

[5] a) B. Rohm, AK Holik, N. Kretschy, MM Somoza, JP Ley, S. Widder, GE Krammer, D. Marko, V. Somoza, J. Cell. Bithcheimic. 2015, 116, 1153; b) B. Lieder, M. Zaunschirm, AK Holik, JP Ley, J. Hans, GE Krammer, V. Somoza, Tosaigh. Cógaslann. 2017, 8, 316.

[6] J. Walker, JP Ley, J. Schwerzler, B. Lieder, L. Beltran, PM Ziemba, H. Hatt, J. Hans, S. Widder, GE Krammer, V. Somoza, Mol. Nutr. Bia Res. 2017, 61, 1600474. [7] HS Kim, HJ Kwon, GE Kim, MH Cho, SY Yoon, AJ Davies, SB Ó, H. Lee, YK Cho, CH Joo, SW Kwon, SC Kim, YK Kim, Carcinogenesis 2014, 35, 1652.

[8] a) S. Bertin, Y. Aoki-Nonaka, PR de Jong, LL Nohara, H. Xu, SR Stanwood, S. Srikanth, J. Lee, K. To, L. Abramson, T. Yu, T. .Han, R. Touma, X. Li, JM González-Navajas, S. Herdman, M. Corr, G. Fu, H. Dong, Y. Gwack, A. Franco, WA Jefferies, E. Raz, Nat. Imdhíonól. 2014, 15, 1055; b) R. Samivel, DW Kim, HR Son, YH Rhee, EH Kim, JH Kim, JS Bae, YJ Chung, PS Chung, E. Raz, JH Mo, OncoTargets Ther. 2016, 7, 148; c) RK Majhi, SS Sahoo, M. Yadav, BM Pratheek, S. Chattopadhyay, C. Goswami, FEBS J. 2015, 282, 2661.

[9] C. Schoenknecht, G. Andersen, I. Schmidts, P. Schieberle, J. Agric. Ceimic Bhia. 2016, 64, 2269.

[10] SA Köse, M. Nazıroglu, ˘ Saor Radic. Res. 2015, 49, 338.

[11]             I. Heiner, J. Eisfeld, CR Halaszovich, E. Wehage, E. Jüngling, C. Zitt, A. Lückhoff, Biochem. J. 2003, 371, 1045.

[12] E. Kolaczkowska, P. Kubes, Nat. Ath. Immunol. 2013, 13, 159.

[13] GM Bokoch, Fola 1995, 86, 1649.

[14] WL Lee, RE Harrison, S. Grinstein, Microbes Infect. 2003, 5, 1299.

[15] a) M. Faurschou, N. Borregaard, Miocrób Infect. 2003, 5, 1317; b) P. Lacy, G. Eitzen, Tosaigh. Bitheolaíocht. 2008, 13, 5559.

[16] a) S. Dupré-Crochet, M. Erard, O. Nü𝛽e, J. Leukoc. Biol. 2013, 94, 657; b) J. El-Benna, PM Dang, MA Gougerot-Pocidalo, Semin. Imdhíonpathol. 2008, 30, 279; c) GT Nguyen, ER Green, J. Mecsas, Front Cell Infect. Micribhiol. 2017, 7, 373.

For more information:1950477648nn@gmail.com