Gníomhaíocht Xanthine Oxidoreductase i bPláitíní Poor agus Plasma Saibhir mar Tháscaire Strus Ocsaídeach in Othair Teiripe Athsholáthair Duánach Riachtanach

Cúlra Teibí: Xanthine oxidoreductase(XOR) einsím hidroxylase a bhfuil baint aige le meitibileacht purines. Is féidir le gníomhaíocht XOR a bheith éagsúil: is féidir an próitéin homodimer a thiontú ina dhá isoform éagsúla XD (frithocsaídeach) agus XO (prooxidant). Strus ocsaídiúcháin agus infamation a ghabhann leisgalar duáin ainsealach(CKD), scagdhealú, agus trasphlandú duáin, mar thoradh ar ghníomhachtú pláitíní. Bhí sé mar aidhm ag an staidéar reatha tionchar teiripe athsholáthair duánach feidhmeach ar xanthine oxidoreductase agus a ghníomhaíocht isoform a chinneadh.

Ábhair agus Modhanna: Bhí an grúpa staidéir comhdhéanta de 117 othar, roinnte ina 4 ghrúpa: othair haema-scagdhealaithe - 30, othair scagdhealaithe peritoneal - 30, othair trasphlandúcháin duán - 27, agus cóireáil choimeádach {{5} } othar. Bhí 30 oibrí deonach sláintiúil sa ghrúpa rialaithe. Torthaí: Fuarthas difríochtaí suntasacha i ngníomhaíocht XOR i plasma lag pláitíní (PPP) laistigh de na grúpaí a ndearnadh staidéar orthu (p=0.001). Bhí caidreamh idir an cineál teiripe athsholáthair duánach de gach isoform oxidoreductase i PPP (lch<0.001 all isoforms) and XD (p=0.008), XO (p<0.001) in platelet-rich plasma (PRP). A relationship was observed between the activity of all oxidoreductase isoforms in PPP and PRP, the type of renal replacement therapy the duration of dialysis, and the age of patients. Thecúis le galar duáin ainsealachLéiríodh é freisin sna difríochtaí i ngníomhaíocht XD agus XO i PPP.

Conclúidí: Cuireann an cineál teiripe athsholáthair duánach a úsáidtear in othair CKD, aois na n-othar, fad scagdhealaithe, cúiseanna CKD, agus céim an dul chun cinn isteach go mór ar ghníomhaíocht XOR agus a isoforms.

Eochairfhocail: Xanthine oxidoreductase, Pláitíní, teiripe athsholáthair duánach,Galar duáin ainsealach, Einsímí frithocsaídeacha

CÉ FAD A THÓGAÍONN SÍ CHUN CISTANCHE OIBRE?

Cúlra

Is einsím hidroxylase é Xanthine oxidoreductase (XOR) a bhfuil baint aige le meitibileacht purines. Catalaíonn sé ocsaídiú hypoxanthine go xanthine agus xanthine go aigéad uric (UA). Féadfaidh gníomhaíocht XOR a bheith éagsúil: is féidir an próitéin homodimer a thiontú ina isfhoirmeacha dédhifriúla. Cuirtear Xanthine dehydrogenase (XD) in iúl go príomha i bhfíocháin shláintiúil, agus gintear xanthine oxidase (XO) trí mhodhnú iar-aistrithe XD, iarmhair cistéin ocsaídiúcháin chomh maith le próitéalú teoranta, ag imirt ról ceannasach i gcealla agus fíocháin le linn gortuithe [1-3 ]. Tá gníomhaíochtaí na n-isoformanna luaite i gcoinne a chéile [4]. Feidhmíonn XOR i láthair NAD+ mar dhíhidrigineás, agus le hocsaigin mhóilíneach mar ocsaídáis. Tá cumas XOR a thiontú go tapa ó fhrithocsaídeach go oxidant, i gcineálacha éagsúla damáiste fíocháin, ina ghné riachtanach le haghaidh freagra imdhíonachta tapa innate, atá tairbheach i, mar shampla, ionfhabhtú baictéarach nó fungach [5].

Is féidir le imoibriú idirmheánach de xanthine dehydrogenase (XDO) agus ocsaigine imoibriú le NAD+ agus O2 araon ach tá cleamhnas níos airde acu do NAD+ [6]. Níl an isoform idirmheánach seo scoite amach, ach éascaíonn cinneadh a ghníomhaíochta an claochlú XD go XO a rianú [7].

Rinneadh imscrúdú forleathan ar ghníomhaíocht serum XOR i galair éagsúla. Is é an chúis atá leis an spéis san einsím seo ná déachas a ghníomhaíochta: an cumas frithocsaídeoirí a tháirgeadh, agus ar an láimh eile, cruthú speiceas ocsaigin imoibríoch. Tarlaíonn méadú ar ghníomhaíocht XOR i gcoinníollacha paiteolaíocha cosúil le heipitíteas víreasach, mononucleóis thógálacha, galair autoimmune, niúmóine, scitsifréine, agus diaibéiteas cineál II. Breathnaítear freisin ar an méadú ar ghníomhaíocht XOR i serum na n-othar tar éis trasphlandú duánach nó ae [8]. Tá sé léirithe go bhféadfadh an códú géine do XOR a bheith freagrach as aibiú duánach, agus adipogenesis sna duáin, agus féadfaidh sé cosc ​​​​a chur ar chlaochlú cealla epithelial i bhfíochán mesenchymal [9]. Mar sin féin, mar gheall ar an eolas is fearr atá againn, níl aon tuarascálacha foilsithe a imscrúdaíonn gníomhaíocht XOR i bplasma ar bheagán pláitíní (PPP) agus plasma ar mhórán pláitíní (PRP) in othair atá ag dul faoi theiripe athsholáthair duánach. Baineann tábhacht ghníomhaíocht XOR sa ghrúpa othar seo le gníomhachtú méadaithe pláitíní, rud a tharlaíonn de bharr strus ocsaídiúcháin agus infammation a ghabhann le galar duáin ainsealach (CKD), scagdhealú, agus trasphlandú duáin. Thairis sin, le linn scagdhealaithe agus trasphlandú orgáin, déantar fíocháin agus soithigh fola a mhilleadh, agus is iad pláitíní na cealla frst chun suíomh damáiste fíocháin a bhaint amach, ag glacadh páirt ghníomhach i gcéimeanna tosaigh an phróisis athlastach agus leighis [10].

Is codáin den phlasma fola iad PRP agus PPP le tiúchan éagsúla pláitíní. Is é cion pláitíní PRP agus PPP ná pláitíní/ml agus pláitíní/ml, faoi seach. Faightear PPP agus PRP trí fhuil iomlán daoine a lártheifneoiriú agus a ní arís agus arís eile ag luasanna lártheifeacha éagsúla [11, 12].

Tá tiúchan pláitíní níos ísle ná gnáth-fhuil ag PPP, mar fhotháirge lártheifneoraithe d'fhuil fhrith-théachtach. Is iad na príomhchodanna de PPP fibrinogen, fibronectin, agus thrombin. Tá éifeachtaí bitheolaíocha PPP rannpháirteach i hemostasis agus coagulation, ag gníomhú mar veicteoir ceangail cille, agus mitosis fibroblasts agus cealla epithelial a chur chun cinn [13]. Cé nach bhfuil PPP chomh comhchruinnithe i bpláitíní agus atá PRP, tá sé léirithe gur féidir le CPP fás agus maireachtáil cille a chothú freisin. Cuireann PPP feidhmeanna cille a bhaineann le cneasaithe créachta chun cinn agus luasghéadaíonn sé imirce cille agus iomadú fibroblasts [14, 15]. Tá níos mó pláitíní comhchruinnithe ag plasma saibhir pláitíní ná an gnáthphlasma (thart ar 150–400 × 103 cill/dl). Tá sé ar cheann de na sainmhínithe is coitianta ar PRP sa litríocht [16]. Go dtí seo, léirigh staidéir theoranta XOR agus a ghníomhaíocht isoform i bplasma saibhir pláitíní nó bochta in othair a bhfuil galar duáin ainsealach orthu. Tá Tan et al. léirigh cealla damáiste ag speicis ocsaigin imoibríoch (ROS) (i gcás teiripe athsholáthair duánach ainsealach) "sceitheadh" isoforms XOR, as a dtiocfaidh méadú ar an leibhéal einsím i plasma [17]. Míníonn an mheicníocht seo an ghníomhaíocht níos ísle de XOR agus a isoforms i pláitíní i gcomparáid le PPP. Dá bhrí sin, is díol spéise iad na gníomhaíochta oxidoreductases i PPP agus PRP, toisc go bhféadfadh siad cabhrú le próisis cheallacha a tharlaíonn go laethúil a nochtadh, sis. D'fhéadfadh imscrúduithe den sórt sin aird a tharraingt go hindíreach freisin ar dhéine an strus ocsaídiúcháin sa ghrúpa seo othar.

Berry et al. cur síos freisin go bhfuil xanthine oxidoreductase dháileadh san ae, stéig bheag, faireoga mhamach, agus cealla endothelial. Tá sé léirithe ag modhanna logánaithe subcellular láithreacht xanthine oxidoreductase sa chiteaplasma agus ar na seicní cille. Léiríonn siad freisin go bhféadfadh plasma xanthine oxidasereductase a bheith mar gheall ar scáthú xanthine oxidoreductase ó na seicní cille nó ag sceitheadh ​​​​ón cíteaplasma. Is é seo ceann de na cúiseanna a ndéanaimid tástáil ar ghníomhaíocht XOR i PPP agus PRP chun idirdhealú a dhéanamh ar ghníomhaíocht einsím i pláitíní agus cealla fola eile atá sa plasma [18]. Bunaithe ar ghníomhaíocht na n-einsímí frithocsaídeacha, is féidir linn a chinneadh freisin cén cineál teiripe athsholáthair duánach is lú an seans go mbeidh an t-othar faoi lé strus ocsaídiúcháin. Mar gheall ar nádúr déach XOR, is féidir leis an tuiscint ar an gcaidreamh idir an cineál teiripí athsholáthair duánach agus gníomhaíocht isoforms XOR a bheith an-suimiúil agus cabhrach maidir le roghnú an cineál teiripe athsholáthair duánach.

abhair agus modhanna

Faomhadh agus toiliú eiticiúil

Cheadaigh an Coimisiún Bitheitice in Ollscoil Leighis Pomeranian i Szczecin an taighde a rinneadh (gan KB -0012/36/11). Cuireadh na rannpháirtithe go léir, lena n-áirítear na hoibrithe deonacha sláintiúla sa ghrúpa rialaithe, ar an eolas faoi chuspóir agus raon feidhme an staidéir agus thug siad a dtoiliú samplaí a bhronnadh agus na sonraí a tháinig as a fhoilsiú.

Grúpa staidéir

Bhí 147 rannpháirtí ann: grúpa rialaithe de 30 oibrí deonach sláintiúil (NK), agus 117 othar le galar duáin ainsealach (CKD) ag freastal ar Chlinic Neifreolaíochta, Trasplanetology, agus Galair Inmheánacha Ollscoil Leighis Pomeranian i Szczecin. Roinneadh na hothair te i 4 ghrúpa bunaithe ar an gcóireáil a fuair siad: 30 othar roimh agus tar éis haema-scagdhealaithe (HD A agus HD B): fuair 30 othar scagdhealú peritoneal (PD); 27 othar roimh agus tar éis trasphlandú duáin (5-7 lá tar éis obráid) (TE, TE A); Fuair ​​30 othar cóireáil choimeádach (CT) (CKD céim 2-5). Tugtar inscne, aois, ré scagdhealaithe, cúis agus céim an ghalair duáin ainsealach, agus tiúchan creatinine sna grúpaí tástála agus rialaithe i dTáblaí 1 agus 2.

Samplaí

Tarraingíodh samplaí fola (K2EDTA (8 ml), citrate trisodium 3.8% (9: 1; v / v), agus serum (8 ml)) ó gach rannpháirtí staidéir. Tarraingíodh fuil othar hemodialyzed as a fistula arteriovenous; Baineadh úsáid as venipuncture forimeallach do gach rannpháirtí eile. Tógadh samplaí ó othair haema-scagdhealaithe roimh (HD A) agus thart ar 10 nóiméad tar éis stop a chur leis an gcaidéal (HD B). Bailíodh fuil othar trasphlandúcháin roimh trasphlandú (TE) agus 5-7 lá tar éis máinliachta (TE A). Níor bhain othair a earcaíodh don ghrúpa TE leis an ngrúpa othar haema-scagdhealaithe nó scagdhealaithe peritoneal sa staidéar seo. Othair a bhí iontu a bhí cáilithe le haghaidh trasphlandúcháin ó gach cearn den Pholainn. Rinne formhór mór na n-othar a raibh trasphlandú duáin orthu modhanailís roimh ré. Lártheifníodh samplaí fola K2EDTA agus téachtáin ag 2600 rpm ar feadh 10 nóiméad ag 20 céim chun plasma agus séiream a fháil, faoi seach. Chun plasma saibhir pláitíní (PRP) agus plasma bocht pláitíní (PPP) a fháil, rinneadh an fhuil a bailíodh le citrate a lártheifneoiriú faoi na coinníollacha ag 1100 rpm ar feadh 10 nóiméad ag 20 céim . Aistríodh an PRP mar thoradh air chuig feadán nua agus lártheifneoiríodh é ag 6000 rpm ar feadh 10 nóiméad ag 20 céim : aistríodh plasma lag pláitíní (PPP) chuig feadán ar leith; rinsíodh an millíní pláitíní faoi dhó agus crochadh é i maolán Tyroda (pH7.4). Bhí plasma, séiream, PPP, agus PRP reoite ag −80 céim go dtí go ndearnadh na measúnachtaí. In othair haema-scagdhealaithe, bailíodh fuil roimh riarachán heparin agus tar éis scagdhealaithe a mhair 4-5 h ar an meán (leathré heparin - 4 h) chun deireadh a chur le haon tionchar féideartha heparin ar ghníomhaíocht XOR.

Gníomhaíocht Xanthine oxidoreductase i bplasma agus pláitíní lag-phláitíní

Rinneadh cinntí le speictreafótaiméadar Perkin Elmer UV/VIS Lambda 40P. Taifeadadh athruithe díothaithe ag 340nm (XD) agus 302nm (XDO, XO) ar feadh 5 nóiméad ag 30 céim . Rinneadh an ghníomhaíocht einsímeach a thomhas mar fhoirmiú aigéid uric agus NADH (méaduithe in A340 agus A302) agus curtha in iúl i mU × mL -1 (milliúin in aghaidh an mhillilítear). Ríomhadh an ghníomhaíocht einsímeach, ag cur na rátaí imoibrithe tosaigh san áireamh. Tomhaiseadh foirmiú aigéid úraigh ag 302nm (isoformanna XDO agus XO) toisc go bhfuil a ionsúiteacht ard fós ann, ach ní chuireann athruithe i dtiúchan NAD+ leis. Baineadh úsáid as an chomhéifeacht díothaithe do NADH+ H+ ε340=6.22×103 [L∙mol−1 cm−1 ] chun gníomhaíocht isfhoirmeacha xanthine ocsaídoreductase NADH+ H+: ε302=2.30×103 a ríomh L∙mol−1 cm−1 ] [7, 19–22].

Tábla 1 Saintréithe ginearálta othar haema-scagdhealaithe (HD), scagdhealú peritoneal (PD) cóireáilte go coimeádach (CKD), trasphlandú duáin (TE), agus grúpa rialaithe (C) a ghlac páirt sa staidéar (meán±SD)

P* - suntas staitistiúil do dhifríochtaí idir grúpaí HD, PD agus CKD, tástáil chruinn TE agus C Fisher le haghaidh athróga cáilíochtúla; maidir le hathróga cainníochtúla - ANOVA aontreo agus; P ** - suntas staitistiúil do dhifríochtaí idir grúpaí HD, PD agus CKD agus tástáil TE beacht Fisher le haghaidh athróga cáilíochtúla le haghaidh athróga cainníochtúla ANOVA aontreo nó; DM - nephropathy diaibéitis; HA - Hipirtheannas; GIK - duáin infammation glomerular; ADPKD - galar duáin polycystic oidhreacht ceannasach autosomal; NS - gan aon difríochtaí suntasacha staitistiúla.

Tábla 2 Saintréithe ginearálta na n-othar haema-scagdhealaithe (B - roimh HD, A - tar éis), scagdhealú peritoneal (PD) cóireáilte go coimeádach (CKD) roimh agus tar éis trasphlandú duáin (TE B agus TE A) agus grúpa rialaithe (NK) ag glacadh páirte sa staidéar (meán±SD)

P* - suntas staitistiúil maidir le difríochtaí idir grúpaí HD A, HD B, PD agus CKD, TE agus C maidir le hathróga cainníochtúla - Kruskal Wallis ANOVA, ANOVA aontreo nó T-tástáil an Mhic Léinn P** - suntas staitistiúil do dhifríochtaí idir HD A , HD B, PD agus grúpaí CKD agus TE d'athróga cainníochtúla ANOVA Kruskal Wallis nó anailís aontreo ANOVA Kt / V - innéacs scagdhealaithe (codán toirt V íonaithe ag imréiteach K ag am t) NS níor aimsíodh aon ghaolmhaireachtaí suntasacha staitistiúla

Anailís staitistiúil Chun dáiltí a mheasúnú, baineadh úsáid as an tástáil KS (Kolmogorov-Smirnov), a léirigh i gcás roinnt athróg (gníomhaíocht isoforms XD agus XDO i PRP) dáileadh neamhghnáth paraiméadair. Baineadh úsáid as tástálacha beachta Fisher agus Chi-cearnóg chun anailís a dhéanamh ar shonraí cainníochtúla. Ag baint úsáide as t-tástáil an Mhic Léinn agus anailís ANOVA do chórais aonathróg, rinneadh meastóireacht ar na difríochtaí idir athróga gaolmhara (péireáilte) agus athróga neamhghaolmhara (neamhphéireáilte) i gcás athróg le dáileadh normalach. I gcás athróg le dáiltí neamhghnáth, rinneadh anailís Kruskal-Wallis ANOVA chun difríochtaí idir na paraiméadair a mheas, chomh maith le tástáil neamhparaiméadrach Mann-Whitney U le haghaidh sonraí gan péire nó Wilcoxon le haghaidh sonraí péireáilte. Baineadh úsáid as samhail líneach aischéimniúcháin iolrach chun an mheastóireacht ilfhachtóiriúil ar an gcaidreamh idir na paraiméadair a ndearnadh staidéar orthu a chinneadh. Rinneadh anailís staitistiúil ar thorthaí ag baint úsáide as Statistica 12 (StatSoft).