Éifeachtaí Úrscéalta Teiripe Teaglaim Trí Chosc ar Caspase-1/Piroptóis Ionduchtaithe Gasdermin D i Lupus Nephritis

Tuilleadh eolais:ali.ma@wecistanche.com

Heng Cao, Junyu Liang, Jing Liu, Ye He, Yini Ke, Yiduo Sun, Song Jiang agus Jin Lin

Teibí

Cuspóirí: Tá teiripe teaglaim le mycophenolate mofetil, tacrolimus, agus stéaróidigh éifeachtach chun loghadh iomlán a bhaint amach inephritis lupus(LN). Teiripe teaglaim caspase íosrialaithe uathúil-1 i gcomparáid le monaiteiripe, ar féidir leo gasdermin D (GSDMD) a scoilt agus a aithníodh le déanaí mar anpioptóisseiceadóir. Dá bhrí sin, rinneamar imscrúdú ar cibé acu an raibh ar chumas teiripe teaglaim cosc ​​a chur ar caspase-1/GSDMD-mediatedpioptóisin LN (nephritis lupus).

Cliceáil chun cistanche deserticola ma le haghaidh nephritis

Modhanna: Braitheadh ​​léiriú agus gníomhachtú GSDMD in eiseamail duánach an duine agus an luch le LN (nephritis lupus) ag baint úsáide as staining imdhíon-histochemical agus imdhíobhlothú. Goradh podocytes príomhúla atá scoite ó lucha MRLlpr le LPS móide ATP agus réamhchóireáil iad le monaiteiripe nó teiripe teaglaim. Cosc ar caspase-1/GSDMD-spreagthapioptóisRinneadh measúnú trí theiripe teaglaim i lucha MRLlpr agus i samplaí daonna. Scrúdaíodh mé ag baint úsáide as trealamh caspase-1 FAM agus cíteiméadracht sreafa. An comhghaol idirpioptóissan fhuil imeallach agus rinneadh anailís ar innéacs gníomhaíochta galar lupus erythematosus sistéamach (SLEDAl).

Torthaí: Eiseamail fíocháin duán ó LN (nephritis lupus) léirigh othair agus lucha leibhéil na cainte méadaithe go mór agus scoilteacht GSDMD. I podocytes saothraithe, chuir cóireáil teaglaim bac suntasach ar ghníomhachtú NLRP3 agus caspase-1 agus laghdaigh leibhéil N-teirminéil GSDMD. Teiripe teaglaim dul chun cinn galair athbhrúite trí chosc ar caspase-1/GSDMD-mediatedpioptóisi lucha daoine agus MRL/LPR araon. Rinneadh comhghaolú dearfach ar líon na gceall deimhneach Caspase-1/PI san fhuil imeallach agus SLE-DAl. LN (nephritis lupus) laghdaigh líon na gceall dearfach caspase-1/PI go suntasach i gcomparáid leis an mbunlíne. Chuir Ac-FLTD-CMK, coscaire díorthaithe GSDMD, cosc ​​ar fhorbairt LN (nephritis lupus).

Conclúid: Chuir teiripe teaglaim caspase-1/GSDMD-mediated faoi choispioptóisin vitro agus in vivo agus dul chun cinn galair laghdaithe.

Eochairfhocail:nephritis lupus, pioptóis, caspase-1, gasdermin D, teiripe

Teiripe cóireála le haghaidhpioptóis

RÉAMHRÁ

Nephritis Lupus(LN) athlasadh duáin a eascraíonn mar thoradh ar an galar uath-imdhíonachta lupus erythematosus sistéamach (SLE).LN (nephritis lupus) is léiriú mór é in othair atá ag fulaingt ó SLE. Forbraíonn thart ar 60 faoin gcéad de na hothair an riocht seo, agus téann thart ar 20 faoin gcéad ar aghaidh go dtí galar duáin deiridh (ESRD)(1). Táirgeann teiripe teaglaim le mofetil mycophenolate (MMF), coscairí calcineurin (CNI), agus stéaróidigh éifeachtaí comhlántacha agus laghdaítear tocsaineacht freisin (2). Moltar an teiripe seo mar chóireáil tosaigh do LN (nephritis lupus) agus táirgeann sé éifeachtúlacht níos fearr agus loghadh níos iomláine i gcomparáid le ciorafosfaimíd infhéitheach (IVCY) agus stéaróidigh (3-5).

Chun meicníochtaí móilíneacha agus ceallacha na teiripe teaglaim a imscrúdú, baineadh úsáid as anailís thras-traipeolaíoch chuimsitheach i múnla murine de LN (nephritis lupus). Tugadh MRL/LPR amháin do lucha MMF, tacrolimus, nó prednisone mar mhonaiteiripe, nó teaglaim trí-dhrugaí. Próifílí léiriú na ngéinte i duáin na lucha le LN (nephritis lupus)nochtar meicníochtaí féideartha a d’fhéadfadh cuntas a thabhairt ar éifeachtaí breiseacha agus sineirgisteacha na teiripe teaglaim i gcomparáid le monaiteiripe. Tá caspase-1 (6) ar cheann de na 45 ghéin ísrialaithe atá modhnaithe go uathúil ag teiripe teaglaim. Déantar é a ghníomhachtú le inflammasomes, ar olagaiméirí ilphróitéine iad comhdhéanta de NLRP3, pro-caspase-1, agus próitéin atá cosúil le speck-chosúil le apoptosis (ASC), le fearann ​​​​cleamhnas caspase comhtháite. Aithníodh an t-athlasta NLRP3/ASC/caspase-1 mar phríomh-ranníocóir le pataigineas LN (nephritis lupus). Tiomáineann an NLRP3 inflammasome neamhoird uath-athlastacha trí caspase-1 a ghníomhachtú, ag cur tús le giniúint cítocíní pro-athlastacha m.sh. IL-1 , arb eol go spreagann sé mífheidhmiú podocyte in LN(7-9).

Scoilteann caspase gníomhach-1 gasdermin D(GSDMD) laistigh de nascadh a fearainn N-agus C-críochfort. Ansin, éascaíonn an bhfearann ​​​​N-críochfort foirmiú pore sa membrane cille, spreagann sé cillpioptóisagus táirgeadh cítocine IL-1 agus IL-18(10). Tá sé léirithe ag staidéir atá ag teacht chun cinn go ndearna GSDMD-idirghabhálapioptóisrannpháirteach i ndul chun cinn galar lena n-áirítear einceifilíteas uath-imdhíonachta (11), scléaróis iolrach(12), heipitíteas alcólach(13), agus galar putóige athlastach(14). Chomh maith leis sin, tá cosc ​​géiniteach nó cógaseolaíoch ar caspase-1/GSDMD Léiríodh go gcosnaítear na duáin ó ghortú i múnlaí murine de ghalar diaibéitis duán(15, 16) agus freisin tar éis gortú duáin ghéar(17-19). Ach,pioptóisin LN (nephritis lupus)tá sé fós sainmhínithe go lag go dtí seo(20). Rinneamar hipitéis gur thug teiripe teaglaim éifeachtaí tairbheacha do LN (nephritis lupus)) trí choscpioptóisarna tharlú ag caspase-1/GSDMD.

Sa staidéar reatha, rinneadh imscrúdú ar ghníomhachtú caspase-1 agus GSDMD i bhfíocháin duáin chomh maith le héifeachtaí teiripe teaglaim ar caspase-1/GSDMD-spleáchpioptóiscosc ar lucha MRL/LPR agus othair a bhfuil LN orthu (nephritis lupus). Comhghaolta féideartha depioptóisle hinnéacs gníomhaíochta galar SLE (SLEDAI) agus rinneadh measúnú ar na freagraí cóireála freisin.

Cóireáil le haghaidhpioptóis

ABHAIR AGUS MODHANNA

Déan staidéar ar an Daonra

Bhí an chohórt staidéir comhdhéanta d’othair a diagnóisíodh le bithóipse le LN (lupusnephritis(c) Níos lú ná nó cothrom le 6 mhí roimh an gclárú. Ba é 18-65 raon aoise an othair agus chomhlíon siad go léir na critéir rangaithe de chuid an American College of Rheumatology for SLE (2l, 22) agus an International Society of Neifrology/Renal Pathology Society (2003). Earcaíodh othair ó Scoil an Leighis Ollscoil Zhejiang agus Scoil an Leighis Ollscoil Nanjing a raibh proteinuria (Níos mó ná nó cothrom le 1.5 g/d) agus tiúchan creatiníne serum Níos lú ná nó cothrom le 265.2 umol/L. I measc na gcritéar eisiaimh bhí: cuireadh cóireáil ar othar roimhe seo le dáileoga arda meitilprednisolone; bitheolaíocht (ag díriú ar mhóilíní pataigineacha ar leith) nó teiripe teaglaim; plasmapheresis reatha nó cóireáil le globulin infhéitheach laistigh de 12 sheachtain tar éis an scagtha; feidhmeanna ae neamhghnácha; ionfhabhtuithe gníomhacha reatha; agus meall urchóideach laistigh de 4 seachtaine ó thús an staidéir. LN (lupusnephritis) fuair othair teiripe chuisle le meitilprednisolone ar feadh 3 lá ag dáileog de 0.5 g/d. Nuair a críochnaíodh teiripe pulse meitilprednisolone, an grúpa teaglaim le prednisone (0.6 mg/kg/d), MMF (0.5 g, dhá dháileog/d), agus tacrolimus (2 mg, dhá dháileog/d) ar feadh 4 seachtaine san iomlán. Ansin laghdaíodh na dáileoga prednisone, a bhí fós comhcheangailte le MMF(0.5 g, dhá dháileog/d) agus tacrolimus(2 mg, dhá dháileog/d), faoi 5 mg/d gach 2 sheachtain go dtí baineadh amach dáileog cothabhála 1{0 mg/d(4). Glacadh loghadh iomlán (CR) mar 24-h tiúchan próitéin fuail Níos lú ná nó cothrom le 0.4 g, easpa dríodar fuail gníomhach, tiúchan serum albaimin Níos mó ná nó cothrom le 35 g/L, agus creatinín gnáth. (23). Glacadh le loghadh páirteach (PR) mar laghdú níos mó ná nó cothrom le 50 faoin gcéad ar 24-h tiúchan próitéin fuail go dtí Níos lú ná nó cothrom le 3.5 g, tiúchan serum albaimin de Níos mó ná nó cothrom le 30 g/ L, agus méadú gnáth nó Níos lú ná nó cothrom le 25 faoin gcéad ar an tiúchan creatiníne serum ó bhunlíne. Cheadaigh ár mBord Athbhreithnithe Institiúideach an staidéar (Uimh. IIT20200410A) agus thug gach othar toiliú i scríbhinn roimh chlárú.

Múnlaí Ainmhithe

Sholáthair an tSaotharlann Ainmhithe SLAC Co. Ltd (Shanghai, an tSín) lucha mná MRL/emoji-FasPr(MRL/LPR), roinneadh na lucha go léir go randamach le cabhair ó ghineadóir uimhreacha randamacha, 5 lucha i ngach grúpa agus gach cage . Cuireadh cóireáil orthu ag aois 8 seachtaine ó bhéal, le meascán de 0.5 mg/kg tacrolimus (MCE HY-13756), 50 mg/kg MMF (MCE HY-B0199), agus 1 mg/ kg prednisone (MCE HY-B0214)nó feithicil go laethúil ar feadh 8 seachtaine san iomlán mar a thuairiscítear roimhe seo(6). Rinne MCE ac-FLTD-CMK a shintéisiú agus rinneadh 10 mg/kg a instealladh ip go laethúil. Dalladh na cóireálacha go léir do na rannpháirtithe a bhí freagrach as an bhrath seo a leanas. Cinneadh an cóimheas albaimine-go-creatinine fual (UACR) ag baint úsáide as Albuwell M agus an Creatinine Companion (Excell, Phil, SAM). Socraíodh eiseamail duán i 4 faoin gcéad paraformaildéad roimh staining histological agus Immunohistochemical agus cortices duáin a bhaintear le haghaidh anailís imdhíonblotting. D'fhaomh ár gCoiste Institiúideach um Chúram agus Úsáid Ainmhithe (Uimh.2019-883) úsáid lucha.

Mice Glomeruli leithlisiú agus Podocyte Cultúr

Glanadh glomeruli ó dhuáin 12- lucha baineanna seachtain d’aois C57 agus MRL/LPR mar a cuireadh síos orthu roimhe seo(24). Bhí lucha ainéistéiseach perfused le coirníní maighnéadacha réamhthéite 37 céim C. Baineadh na duáin agus mionfheoil iad ar oighear go 1 mm³. Ansin díleádh na fíocháin duánach ag 37 céim le collagenase 1 mg/ml agus 100 U/ml DNase I ar feadh 30 nóiméad, ansin scagtha faoi dhó le 100-μm strainers cille Falcon (431752, BD). Tar éis roinnt níocháin le tuaslagán 4 céim HBSS (H1025, Solarbio) agus lártheifneoiriú milis ag 200g ar feadh 5 nóiméad, bailíodh coirníní glomeruli trí úsáid a bhaint as an seastán maighnéadach (HY-K0200, MCE) agus nite le tuaslagán HBSS trí huaire. Saothraíodh glomeruli scoite ar miasa saothraithe brataithe cineál I (C3867, Sigma-Aldrich) i 5 faoin gcéad CO, ag 37 céim de réir an mhodha a ndearna Jeffrey cur síos air (25). Baineadh úsáid as podocytes Sliocht 2 sa turgnamh in-vitro.PiroptóisIonduchtú, Citetocsaineacht, agus Brath Rún IL-1

Réitíodh podocytes ó lucha MRL/LPR le 1 mg/ml LPS (tell-pb5lps, InvivoGen) in Opti-MEM ar feadh 4h, agus ina dhiaidh sin spreagadh 5mM ATP(tlrlatpl, géine In Vivo). Scaradh podocytes ó lucha C57 mar ghnáthrialú. Rinneadh monotherapies tacrolimus (10μM), MMF (luM), agus prednisone (10μM), nó teiripe comhcheangailte a réamh-ghlais leis na cealla ar feadh 1 h roimh thúsú LPS. Cinneadh an cíteatocsaineacht tar éis spreagtha trí úsáid a bhaint as trealamh braite cíteatocsaineachta (11644793001, Roche) de réir threoracha an mhonaróra. Bailíodh agus tomhaiseadh an súthach tar éis spreagtha ag baint úsáide as an luch IL{- ELISA Kit(BMS6002, Invitrogen) de réir threoracha an déantóra.

Antasubstaintí agus Imoibrithe

Rinneadh measúnú ar leibhéil Caspase-1(sc-398715, Santa Cruz Biotech), GSDMDC1 (sc-81868, Santa Cruz Biotech) de réir threoracha an déantóra.Piroptóissan fhuil imeallach trí úsáid a bhaint as FAM FLICAMCaspase-1 Kit(Bio-Rad, USA) de réir cíteiméadracht sreafa.

Anailís staitistiúil

Rinneadh anailís staitistiúil le GraphPad Prism (véarsaí 8.0) agus tugtar na sonraí mar mhodh ± SD. Rinneadh comparáid idir dhá ghrúpa agus úsáid á baint as anailís t-tástáil agus comhghaolmhaireacht an Mhic Léinn ag baint úsáide as comhghaol Pearson. lch dhá eireaball<0.05 was="" considered="" statistically="">

Cóireáil le haghaidhpioptóis inephritis lupus (LN)

TORTHAÍ

GSDMD-IdirghabhálaPiroptóisGníomhachtaithe sna Duáin a dtéann LN i gcion orthu (lupusnephritis)

Imscrúdú a dhéanamh ar chuir GSDMD le pataigineas LN (lupusnephritis), rinneamar tástáil ar leibhéal léirithe próitéin GSDMD ar dtús in eiseamail duáin a tógadh ó LN (lupusnephritis) othair. Léirigh anailís imdhíon-cheimiceach leibhéil léirithe GSDMD ardaithe go mór in eiseamail bithóipse duán a tógadh ó LN (lupusnephritis) othair a bhfuil cineál IV, V, I móide Vand IV móide V acu, agus i gcomparáid le hábhair shláintiúla. Cuireadh GSDMD in iúl go huilíoch i podocytes glomerular, cealla feadánacha, agus cealla interstitial insíothlaithe i LN (lupusnephritis) othair. Méadaíodh an limistéar le smálú dearfach (saigheada dearga) agus diúltacha (saigheada dubha) (Fíor 1A). Measadh ansin an céatadán de limistéar dearfach GSDMD sa duán (Fíor 1B). Fuarthas torthaí cosúla sna duáin de lucha MRL/LPR agus rialuithe de chineál fiáin. Dhearbhaigh anailís imdhíon-bhloit méadú mór ar léiriú agus scoilteacht GSDMD in eiseamail duáin de lucha MRL/LPR (Fíor 1C). Ardaíodh an GSDMD i podocytes glomerular, cealla feadánacha agus cealla interstitial insíothlaithe i lucha MRL/LPR i gcomparáid le lucha rialaithe (Fíor 1D). Mhol na sonraí seo go raibh GSDMD-mediated i ngníomh i bhfíochán duánach tionchar ag LN (lupusnephritis).

FIGIÚR 1|Tá GSDMD ardaithe go láidir agus scoilte i duáin na n-othar agus na lucha a bhfuil tionchar ag LN (nephritis lupus).

(A) Staining imdhíoncheimiceach GSDMD in eiseamail duánach a tógadh ó ábhair shláintiúla agus LN (lupusnephritis) othair, dearfach (saigheada Dearg) agus staining diúltach (saigheada Dubh) méadaithe.

(B) Taispeántar cainníochtú limistéar dearfach GSDMD i gcineál III móide V, IV, IV móide V, V LN (lupusnephritis) othair agus ábhair shláintiúla.

(C) Anailís imdhíonta ar an bhfearann ​​​​N-teirminéal lánfhad, scoilte agus GSDMD fearainn C-críochfort sa choirtéis duánach ó thrí phéire rialaithe agus lucha MRL/LPR.

(D) smálú imdhíoncheimiceach GSDMD in eiseamail duáin a tógadh ó rialuithe agus lucha MRL/LPR.

*p < {{0}}.05,="" **p="">< 0.01.="" ln="">lupusnephritis), lupusnephritis; FL, lánfhad; NT, N-críochfort fearainn; CT, C-críochfort fearainn.

Sochtann Cóireáil Teaglaim GSDMD-IdirghabhálaPiroptóisGníomhachtú i Podocytes Bunscoile In Vitro

Imscrúdú a dhéanamh ar na héifeachtaí coisctheacha a bhaineann le teiripe teaglaim arpioptóis, chuireamar an modh spreagtha LPS móide ATP i bhfeidhm chun aslúpioptóisi podocytes ó lucha MRL/LPR, ag glacadh podocytes ó lucha fiáin de chineál C57 mar an gnáthrialú. Cuireadh tús le podocytes ó lucha MRLlpr ar feadh 4h le LPS agus ina dhiaidh sin déileáladh leo le haghaidh 4h le ATP, spreagadh a úsáidtear go coitianta le haghaidh trí mheán GSDMDpioptóisgníomhachtú(26). I gcomparáid leis an ngnáthrialú, thaispeáin podocytes ina dhiaidh sin gnéithe moirfeolaíocha pireaptótacha amhail at agus boilgeoga cille. Chuir réamhchóireáil le teiripe teaglaim feabhas suntasach ar ghnéithe moirfeolaíocha piripteacha agus cíteatocsaineacht (Fíor 2A). LPS móide podocytes spreagtha ATP cíteatocsaineacht. Ar an dul céanna, laghdaigh teiripe chomhcheangailte go suntasach an cíteatocsaineacht agus an t-rún IL{-1 i snámhán arna spreagadh ag LPS móide spreagadh ATP (Fíoracha 2B, C). Gníomhachtú GSDMD-mediated a fhíorú tuilleadhpioptóis, rinneamar anailís ar inflammasomes canonical agus gníomhachtú GSDMD ag baint úsáide as imdhíonoblotting. Ag teacht le hathruithe moirfeolaíocha pirapótacha agus cíteatocsaineacht, ghníomhaigh LPS móide ATP NLRP3, caspase-1 go suntasach, agus scoilt GSDMD i podocytes (Fíor 2D). Chuir cóireáil teaglaim go mór le gníomhachtú NLRP3 agus caspase-1 agus laghdaigh sé leibhéal N-teirminéal GSDMD. Go háirithe, chuir monaiteiripe le tacrolimus, MMF, nó prednisone LPS faoi chois móide cíteatocsaineacht cille spreagtha ATP agus secretion L-1, ach léirigh teiripe teaglaim éifeacht coisctheach níos suntasaí ar Caspase-1 agus GSDMD. Chuir na torthaí seo fianaise ar fáil a thacaigh leis an tuairim gur fheabhsaigh cóireáil teaglaim trí idirghabháil GSDMDpioptóistrí ghníomhachtú NLRP3 agus caspase-1 a shochtadh.

FIGIÚR 2|Feabhsaítear cóireáil teaglaim pyroptosis i podocytes in vitro.

(A) Taispeánadh gnéithe piroptotic i podocytes bunscoile saothraithe tar éis iad a ghoradh le LPS móide ATP agus iad a réamhchóireáil le cóireáil teaglaim. Léirigh na saigheada cealla a thaispeánann gnéithe cosúil le piroptotic.

(B) Rinneadh anailís ar sháitheoirí ó chealla dúshlánacha maidir le bás cille, arna thomhas ag secretion LDH.

(C) Rinneadh anailís ar sháitheoirí ó na cealla dúshlánacha le haghaidh scaoileadh IL-1b.

(D) Anailís imdhíonta ar NLRP3, caspase-1, GSDMD-NT, agus léiriú ASC tar éis tacrolimus, MMF, prednisone, nó cóireáil teaglaim tar éis gníomhachtú inflammasome NLRP3.

*p < {{0}}.05;="" **p="">< 0.01;="" ***p="">< 0.001;="" ****p="">< 0.0001.="" ldh,="" lactate="">

DSMO, Dimethyl sulfoxide, FK506, tacrolimus; MMF, mofetil mycophenolate; PNS, prednisone; COM, teiripe teaglaim; ASC, próitéin atá cosúil le speck apoptosis.

Cóireáil Teaglaim Caspase faoi Shocht-1/GSDMD-spreagthaPiroptóisi lucha MRL/LPR

Tugadh meascán de MMF, tacrolimus, agus prednisone nó rialú feithicle do lucha MRL/LPR ocht seachtaine d'aois. Ag teacht le staidéar roimhe seo (6), tar éis cóireála ar feadh 8 seachtaine, níor aimsíodh aon difríocht i mortlaíocht nó meáchan coirp idir na grúpaí cóireála feithicle agus teaglaim. I gcodarsnacht leis an ngrúpa feithicle, bhí teiripe teaglaim an-éifeachtach chun cosc ​​​​a chur ar phróitéineas, glomerulosclerosis, agus insíothlú cealla imdhíonachta interstitial duánach (Figiúr Forlíontach 1).

Ansin, scrúdaíomar leibhéil slonn caspase-1 agus GSDMD i ngrúpaí teiripe teaglaim agus rialaithe feithiclí. Léirigh anailís imdhíon-cheimiceach gur tháinig laghdú suntasach ar an caspase interstitial glomerular agus duánach-1 agus léiriú GSDMD sa ghrúpa teiripe teaglaim (Fíor 3A). Fuarthas amach san anailís imdhíonblotting freisin go raibh slonn laghdaithe agus scoilteacht caspase-1 agus GSDMD i gcortices duánach an ghrúpa cóireála teaglaim (Fíor 3B). Ina theannta sin, rinneadh cealla dúbailte-dearfach caspase-1/propidium iaidíd (PI) a chomhaireamh ag baint úsáide as cíteiméadracht sreafa agus apioptóisTrealamh-1FAM Caspase. Léirigh na torthaí laghdú suntasach ar líon na gceall fola imeallach caspase-1*/PI' i lucha MRL/LPR a fuair an chóireáil teaglaim i gcomparáid le lucha MRL/LPR a cóireáladh le feithicil. (Fíoracha 3C,D). Ina theannta sin, laghdaigh cóireáil teaglaim go suntasach an tiúchan serum Ii (Fíor 3E). Mar sin tháinig muid ar an gconclúid gur shocht cóireáil teaglaim caspase-1/GSDMD-spreagthapioptóissna duáin agus cealla fola LN (lupusnephritis) lucha.

FIGIÚR 3|Cóireáil teaglaim caspase maolaithe-1/piroptóis trí mheán GSMMD i lucha MRL/LPR.

(A) Smáil imdhíoncheimiceach GSDMD agus caspase-1 in eiseamail duán lucha MRL/LPR. I gcomparáid leis an rialú feithicle, bhí bac suntasach ar léiriú caspase-1 agus GSDMD sa ghrúpa cóireála teaglaim.

(B) Anailís imdhíonta ar GSDMD agus caspase lánfhad agus scoilte-1 in eiseamail cortex duánach de lucha MRL/LPR; comparáid idir na torthaí ó na grúpaí cóireála feithiclí agus teaglaim.

(C) FACS de chealla caspase-1/PI dúbailte-dearfach san fhuil imeallach ó lucha MRL/LPR ar tugadh nó nár tugadh cóireáil teaglaim dóibh.

(D) Cainníochtú cealla dúbailte-dearfach caspase-1/PI san fhuil imeallach de lucha MRL/LPR ar tugadh teiripe teaglaim dóibh nó nár tugadh.

(E) Cainníochtú tiúchan serum IL{{{0}}b i lucha MRL/LPR a tugadh nó nár tugadh cóireáil mheasctha. ####P < 0.0001.="" facs,="" sórtáil="" cille="" gníomhachtaithe="" fluaraiseachta;="" ct,="" teiripe="">

Teiripe Teaglaim Caspase faoi Shocht-1/GSDMD-spreagthaPiroptóisin LN (lupusnephritis) Othair

Idir Eanáir 2020 agus Meitheamh 2020, bhí 47 othar le LN (lupusnephritis) cláraithe agus chríochnaigh 43 seachtaine de theiripe teaglaim 24-. Tá galar bunlíne agus déimeagrafaic an chohórt cláraithe liostaithe i dTábla Forlíontach 1. Cainníochtú caspase-1/própidium iaidíd (PI cealla dúbailte-dearfach a rinneadh in othair le LN (lupusnephritis) cineál III, IV, V, III móide V, IV móide V agus i rialuithe sláintiúla ag baint úsáide as apioptóisFAM Caspase-1 trealamh agus cítoiméadracht sreafa. I gcomparáid leis na rialuithe sláintiúla, méadaíodh líon na gceall dúbailte-dearfach caspase-1/PI san fhuil imeallach (Fíoracha 4A, B). Rinneamar scrúdú freisin ar chealla dúbailte-dearfach caspase-1/PI tar éis 24-seachtainí teiripe agus ag bunlíne. Tar éis 24-seachtainí de theiripe ionduchtaithe, ba é an mhinicíocht CR agus PR ná 39.5 faoin gcéad (17/43) agus 32.6 faoin gcéad (14/43), faoi seach. Laghdaíodh an líon cille dúbailte-dearfach caspase-1/PI san fhuil imeallach d’othair CR agus PR go suntasach i gcomparáid leis an mbunlíne (Fíor 4C). D’aithníomar freisin comhghaol idir caspase-1 spreagthapioptóisagus an SLEDA; léirigh na sonraí go soiléir go raibh comhghaol dearfach idir an cóimheas caspase-1/PI san fhuil imeallach agus SLEDAI (Fíor 4D). Chuir Ac-FLTD-CMK, Coscóir de Dhíorthú GSDMD, Cosc ar Fhorbairt LN (lupus nephritis).

FIGIÚR 4|Teiripe teaglaim caolaithe caspase-1-piroptóis idirghabhála in othair LN (nephritis lupus).

(A) FACS de chealla caspase-1/PI dúbailte-dearfach san fhuil imeallach LN (lupusnephritis) othair a gcuirtear cóireáil orthu le nó gan teiripe teaglaim.

(B) Cainníochtú cealla deimhneacha caspase-1/PI san fhuil fhorimeallach de chineál III, IV, V, III móide V, agus IV móide V LN (lupusnephritis) othair agus ábhair shláintiúla.

(C) Cainníochtú na gcealla caspase-1/PI dédhearfach san fhuil imeallach LN (lupusnephritis) othair ag bunlíne, CR, PR, agus neamh-loghadh tar éis teiripe teaglaim.

(D) Anailís comhghaolaithe ar chóimheasa cealla dúbailte-dearfach caspase-1/PI le SLE-DAI.

**p < 0.01.="" facs,="" sórtáil="" cille="" gníomhachtaithe="" fluaraiseachta;="" ln="">lupusnephritis), lupusnephritis; CR, loghadh iomlán; PR, loghadh páirteach; SLE-DAI, innéacs gníomhaíochta galar lupus erythematosus sistéamach.

Fuair ​​​​staidéar le déanaí gur fhorbair GSDMDhmice sil-leagan C3 agus IgG duánach méadaithe, gortú duánach níos déine, agus mortlaíocht feabhsaithe i múnla SLE arna spreagadh ag imiquimod.17 Chun ról GSDMD in LN a shoiléiriú tuilleadh (lupusnephritis), Cuireadh cóireáil ar lucha MRL/LPR le Ac-FLTD-CMK21 ag tosú ag 8-seachtainí d'aois, agus an fheithicil maidir leis an rialú. Tar éis 8-seachtainí cóireála, níor aimsíodh aon difríocht i mbásmhaireacht nó meáchan coirp idir an fheithicil agus grúpa cóireáilte Ac-FLTD-CMK. I gcomparáid leis na lucha rialaithe feithicle, bhí cóimheas albaimin-creatinine fual níos ísle (Fíor 5A), tiúchan creatiníne serum níos ísle (Fíor 5B), glomerulosclerosis laghdaithe (Fíor 5C), agus CD3 ag lucha MRL/LPR cóireáilte Ac-FLTD-CMK. , CD4, agus CD68 insíothlú cille dearfach (Fíor 5D). Léirigh torthaí imdhíon-cheimice slonn laghdaithe GSDMD(Fíor 5D) agus secretion serum IL-1 faoi chois arna chinneadh ag ELISA (Fíor 5E). I dteannta a chéile, thug na sonraí le tuiscint go raibh bac ar Ac-FLTD-CMKpioptóissna duáin a bhfuil tionchar ag LN (lupusnephritis).

FIGIÚR 5|Chuir Ac-FLTD-CMK, coscaire de bhunadh GSDMD, cosc ​​ar fhorbairt LN (nephritis lupus).

(A) Ríomhadh an cóimheas fuail albaimin-go-creatinine i lucha MRL/LPR a tugadh nó nár tugadh coscaire GSDMD.

(B) Séiream creatinín i lucha MRL/LPR tugtha nó nár tugadh coscaire GSDMD.

(C) Íomhánna ionadaíocha d'eiseamail duánach daite le haigéad Peiriadach-Schiff (PAS) agus céatadán glomerulosclerosis cainníochtaithe.

(D) staining imdhíoncheimiceach CD3, CD4, F4/80, agus GSDMD. (E) Cainníochtú tiúchan serum IL-1b i lucha MRL/LPR a thugtar nó nár tugadh coscaire GSDMD.

Taispeántar sonraí mar an meán ± SEM. #p < {{0}}.05,="" ##p=""><>

PLÉ

Is straitéis dóchasach é teiripe teaglaim mar gheall ar CR níos airde agus rátaí freagartha foriomlána, am níos giorra chun loghadh, agus níos lú fo-iarmhairtí. Go dtí seo, níorbh eol na meicníochtaí móilíneacha bunúsacha a bhaineann le teiripe teaglaim. Le déanaí, thug Fu et al.(6) cóireáil do lucha MRL/LPR le monaiteiripe nó teiripe teaglaim agus rinne siad anailís thras-traipeolaíoch chuimsitheach ar na duáin iomlána. Is díol spéise é go bhfuair siad amach gur chuir teiripe teaglaim ach ní monaiteiripe go sonrach agus go huathúil faoi chois slonn caspase-1.

Aithnítear anois an t-athlasta NLRP3/ASC/caspase-1 mar phríomh-ranníocóir le pataigineas LN (lupusnephritis). Cuirtear inflammasomes NLRP3 i podocytes i ngníomh i lucha atá seans maith le lupus agus freisin in othair le LN (lupusnephritis). Nuair a cuireadh inflammasomes NLRP3 faoi chois le coscaire caspase-1, fuarthas amach go raibh an phróitéiniúir, loit histolaíochta duánach, agus eisfhearadh próisis coise podocyte feabhsaithe i lucha a bhí seans maith le lupus(8). Tá Huang et al. (27) thuairiscigh gur cuireadh NLRP3 in iúl i gcealla feadánacha LN (lupusnephritis) aicme IV agus go raibh comhghaol dearfach idir gníomhachtú NLRP3 agus an scór innéacs gníomhaíochta d'othair le LN. Tá sé cruthaithe go bhfuil ról ríthábhachtach ag Caspase i lupus agus i mífheidhmiú soithíoch, agus mar sin is sprioc ionchasach é d’idirghabhálacha teiripeacha núíosacha(28). Chuir drugaí turgnamhacha atá ag teacht chun cinn mar RIP3(29), antagonists receptor P2X7(30), coscairí GSK-3 (31) agus agónaí Nrf2 (32) bac ar fhorbairt LN (lupusnephritis) i lucha MRL/LPR trí ghníomhaíocht athlastach NLRP3/ASC/caspase-1 a mhodhnú, rud a leagann béim ar thábhacht agus ríthábhachtacht an NLRP3/ASC/caspase-1 inflammasome in LN. Tá comhghaolú idir tiúchain séiream ardaithe de IL-18 le déine an ghalair agus an méid gortaithe/rannpháirtíocht duáin in othair SLE(33). Chomh fada agus is eol dúinn, is cosúil go bhféadfadh an teaghlach gasdermin a bheith riachtanach chun forbairt a dhéanamh arpioptóis, ach tá ganntanas fianaise ann maidir le láithreacht GSDMD/GSDME in othair SLE.

Ar an iomlán, rinneamar scrúdú ar ghníomhachtú agus léiriú GSDMD in eiseamail bithóipse duáin a tógadh ó LN (lupusnephritis) othair agus lucha MRL/LPR. Rinneadh GSDMD a tharlú go láidir agus a scoilteadh i podocytes glomerular agus i gcealla feadánacha agus i gcealla idir-stitial insíothlaithe. Ina dhiaidh sin, tugadh meascán de MMF, tacrolimus, agus prednisone nó feithicil do lucha MRL/LPR. I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe feithiclí, laghdaíodh gníomhachtú caspase-1 agus GSDMD sa ghrúpa cóireála teaglaim. An chéim depioptóissan fhuil imeallach freisin i bhfad níos ísle i LN (lupusnephritis) othair tar éis teiripe teaglaim a riaradh. Thairis sin,pioptóissan fhuil imeallach a chomhghaolú go dearfach le SLEDAI, rud a thug le tuiscint gopioptóisd'fhéadfadh san fhuil imeallach gníomhú mar mharcóir suntasach do ghníomhaíocht SLE. Rinneamar hipitéis mar sin go bhféadfadh teiripe teaglaim éifeachtaí tairbheacha a thabhairt do LN (lupusnephritis) trí choscpioptóisarna tharlú ag caspase-1/GSDMD. Nocht staidéir struchtúracha criostail roimhe seo ar caspase-1 i gcoimpléasc le Ac-FLTD-CMK go leor idirghníomhaíochtaí einsím-cosc a chuir cosc ​​ar aithint GSDMD trí caspase-1. Mar sin féin, fuaireamar amach gur chuir Ac-FLTD-CMK, a fheidhmíonn mar choscóir díorthaithe GSDMD, bac arpioptóisin LN (lupusnephritis), a d’fhéadfadh meicníocht eile a tharlú.

Le déanaí, i múnla murine spreagtha TLR de SLE(34), d'fhorbair GSDMD-/- lucha méid níos mó damáiste duáin agus básmhaireacht mhéadaithe, rud a thug le tuiscint ar dtús go mbeadh éifeacht chosanta ag scriosadh GSDMD agus go mbeadh baint aige leis. athlasadh sistéamach agus táirgeadh uath-antasubstaintí leis an mbásmhaireacht mhéadaithe ghaolmhar. Forbraíonn lucha atá easnamhach GSDMD sil-leagan níos suntasaí de choimpléasc imdhíonachta glomerular in eiseamail duánach agus próitéiniúir níos airde i gcomparáid le lucha de chineál fiáin. Fuarthas secretion feabhsaithe HMGB1 eischeallach freisin i GSDMD-/limficítí a thugann le tuiscint go bhfuil neacróis/pioptóistharla nuair a bhí GSDMD as láthair.

Truicear-1 Caspasepioptóistrí scoilteacht GSDMD. I gcodarsnacht leis sin, i gcealla atá easnamhach GSDMD nó GSDMD-íseal, spreagann caspase apoptosis agus ansin neacróis tánaisteach atá ag brath ar GSDME aguspioptóis. Nuair a bhíonn gníomhaíocht GSDMD as láthair tar éis teiripe, b'fhéidir go bhféadfadh GSDME caspase-3-apoptosis idirghabhálaithe a athrú go dtípioptóis(35,36).Chomh maith leis sin, cuireadh feabhas mór ar ghníomhachtú caspase-8 i macraí a raibh GSDMD easnamhach orthu. Fuarthas gníomhachtú suntasach caspase-8 freisin in LN a d’eascair le GSDMD-easnamhach TLR (lupusnephritis) lucha(34). Mar sin, in éagmais GSDMD, is dócha go gcomhoibríonn caspase le caspase-8 chun apoptosis trí mheán GSDME a aistriú go caspasepioptóisin LN (lupusnephritis), hipitéis a éilíonn tuilleadh imscrúdaithe turgnamhacha.

Tá roinnt teorainneacha sa staidéar reatha. Ar an gcéad dul síos, bunaithe ar na sonraí atá ann faoi láthair, d'fhíoraigh muid go bhféadfadh teiripe teaglaim cur faoi choispioptóis, ach d'fhéadfadh éifeachtaí inchomparáide a bheith ag cóireálacha eile cosúil le dé-teiripe stéaróidigh agus MMF, stéaróidigh agus tacrolimus, nó antasubstaint frith-CD20. Ar an dara dul síos, ní dhéantar iniúchadh maith ar mheicníocht mhóilíneach chruinn éifeacht choiscthe na teiripe teaglaim ar caspase-1. Ar deireadh ach ní ar a laghad, tugaimid faoi deara an gaol idir cealla dúbailte-dearfach caspase-1/PI san fhuil imeallach le SLE-DAI agus an t-athrú roimh agus tar éis cóireála teiripe teaglaim i LN siarghabhálach (lupusnephritis) cohórt othar. Is gá tuilleadh imscrúduithe a dhéanamh ar luach réamh-mheasta cliniciúil na gceall caspase-1/PI le haghaidh gníomhaíochta galar agus freagairt cóireála i gcohórt ionchasach níos mó.

Ar an iomlán, d’aithníomar gur bhronn teiripe teaglaim a éifeachtaí tairbhiúla trí caspase-1/GSDMD-spreagtha a shochtadhpioptóisin LN (lupusnephritis), a thug léargas nua ar na meicníochtaí ceallacha a bhí i gceist. Go deimhin, chuir teiripe teaglaim slonn caspase-1 faoi chois go sonrach agus go huathúil. Cosc cógaseolaíoch nó géiniteach ar NLRP3 agus caspase-1 feidhm duánach feabhsaithe agus uathdhíonacht faoi chois in LN (lupusnephritis). Ról pathfiseolaíoch caspase-1 in LN (lupusnephritis) gur fiú staidéar breise a dhéanamh air, agus teiripí a dhíríonn ar GSDMD in othair le LN (lupusnephritis) is gá a mheas go han-chúramach.

Modh cóireála le haghaidhpioptóis

TAGAIRTÍ

1. Saxena R, Mahajan T, Mohan C.LupusNephritis: Nuashonrú Reatha.Airtrítis Res Ther (2011) 13:240.doi: 10.1186/ar3378

2. An Y, Zhang H, Liu Z. Teiripe aonairithe iLupusNephritis. Ionadaí Int Duán (2019)4:1366-72.doi: 10.1016/j.ekir.2019.08.005

3. Bao H,Liu ZH, Xie HL, Hu WX, Zhang HT,LiLS.Cóireáil rathúil ar Aicme V móide IVLupusNephritisLe Teiripe Multitarget. J Am Soc Nephrol (2008)19:2001-10.doi: 10.1681/ASN.2007121272

4. Liu Z, Zhang H, Liu Z, Xing C, Fu P, Ni Z, et al.Multitarget Teiripe do Chóireáil Ionduchtúcháin deLupusNephritis: Triail Randomized, Ann Intern Med (2015)162:18-26. DOI: 10.7326/M14-1030

5. Zhang H, Liu Z, Zhou M, Liu Z, Chen J, Xing C, et al.Multitarget Teiripe do Chóireáil Cothabhála arLupusNephritis. J Am Soc Nephrol(2017)28:3671-8.doi:10.1681/ASN.2017030263

6. Fu J, Wang Z, Lee K, Wei C, Liu Z, Zhang M, et al.Transcriptomic Anailís Nochtann Meicníochtaí Sineirgisteacha Úrscéalta i Teiripe Teaglaim doLupusNephritis. Kidney Int(2018)93:416-29.doi: 10.1016/j.kint.2017.08.031

7. Umarino D.LupusNephritis: NLRP3 Inflammasome Ignites Podocyte Dysfunction. Nat Rev Rheumatol(2017) 13:451.doi: 10.1038/Orpheum. 2017.9