Rialaíonn an RNA M6 A Reader YTHDF2 Antitumor Cill NK agus Díolúine Frithvíreasach Cuid 2

Tá YTHDF2 ag teastáil le haghaidh feidhm antiviral cealla NK

Chun a chinneadh an bhfuil tionchar ag easnamh Ythdf2 ar antiviralactivity cealla NK, rinneamar instealladh 2.5 × 104 PFU de lucha MCMV intoYthdf2WT agus lucha Ythdf2ΔNK.

Léirigh na torthaí go raibh lucha Ythdf2ΔNK níos so-ghabhálaí i leith ionfhabhtú MCMV, arna léiriú ag meáchain caillteanas suntasach agus titers víreasach méadaithe san fhuil, spleen, agus ae i gcomparáid le lucha Ythdf2WT (Fíor 3, A agus B; agus Fíor. S2, A agus B) .

Thugamar faoi deara freisin laghdú suntasach ar chéatadán agus ar líon iomlán na NKcells iomlána i spleen agus fola lucha Ythdf2ΔNK i gcomparáid leo siúd i lucha Ythdf2WT tar éis ionfhabhtú (Fíor 3, C agus D; agus Fíor.S2, C agus D). Léirigh anailís bhreise go raibh léiriú i bhfad níos ísle ar lucha Ki67 ag cealla NK óYthdf2ΔNK ná luchaYthdf2WT (Fíor 3, E-G).

Mar sin féin, bhí inmharthanacht cille NK cosúil le lucha Ythdf2WT agus lucha Ythdf2ΔNK, mar a léirítear le staining V annexin (Fíor S2 E). Léiríonn na sonraí seo go bhfuil easnamh YTHDF2 i gcealla NK mar thoradh ar locht ar iomadú cille seachas maireachtáil cille le linn ionfhabhtú víreasach. Cuireann NKcells bac ar ionfhabhtú MCMV trí na gabhdóirí gníomhachaLy49H agus Ly49D, agus tá an próiseas tréithrithe ag freagairt antiviral perforin- nó IFN--idirghabhála (Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; Orr et al., 2010; Sumaria et al., 2009).

Fuaireamar amach gur laghdaigh lucha Ythdf2ΔNK go suntasach ceallaLy49H+ agus Ly49D+ NK sa spleen agus san fhuil i gcomparáid le lucha Ythdf2WT tar éis ionfhabhtú (Fíor 3, H–J; agus Fíor. S2, F–K).

Léirigh anailís bhreise cé gur de réir céatadán, níor léirigh ach cealla Ly49D+Ly49H+ difríocht i lucha Ythdf2ΔNK i gcomparáid le lucha Ythdf2WT, líon iomlán na gcealla de chealla Ly49D - Ly49H+ NK, Ly49D+Ly49H− i gcealla NK, agus Ly49D i gcealla N+L spleen agus fola bhí laghdú suntasach ar fad i lucha Ythdf2ΔNK i gcomparáid le Ythdf2WTmice tar éis ionfhabhtú (Fíor S2, L-W).

Tugann ár sonraí le fios gur cosúil go ndéantar idirghabháil den chuid is mó ag cealla Ly49D+Ly49H+ NK chun ionfhabhtú MCMV a rialú ag YTHDF2. Bhí táirgeadh granzyme B agus IFN- ag cealla NK i lucha Ythdf2ΔNK inchomparáide le lucha Ythdf2WT (Fíor S2, X agus Y).

Fuaireamar laghdú suntasach ar tháirgeadh perforin ag lucha Ythdf2ΔNK i gcomparáid le lucha Ythdf2WT sa spleen agus san fhuil 7 d tar éis ionfhabhtaithe (Fíor 3, K-M), rud a thugann le fios go gcuireann YTHDF2 isteach go príomha ar ghníomhaíocht fhrithvíreasach perforin-idirghabhála i gcoinne MCMV i gcealla NK. le fios go bhfuil YTHDF2 ríthábhachtach maidir le leathnú cille NK agus feidhm éifeachtóra le linn ionfhabhtú MCMV.

Rialaíonn YTHDF2 hoiméastáis cille NK agus aibiú teirminéil ag staid sheasta

Spreag na torthaí thuas gur fheabhsaigh easnamh Ythdf2 i gcealla NK metastases meall agus lagaigh cumas cille NK chun ionfhabhtú a rialúMCMV dúinn imscrúdú a dhéanamh an bhfuil YTHDF2 ag teastáil le haghaidh cothabháil cille NK ag staid sheasta.

Mar a léirítear i bhFíor 4 A, laghdaíodh minicíocht agus líon iomlán na gceall NK go suntasach san fhuil imeallach, san spleen, san ae, agus san scamhóg ach ní i smeara (BM) de lucha Ythdf2ΔNK i gcomparáid le lucha Ythdf2WT.

Mar sin féin, ní raibh aon athruithe suntasacha i measc ginearaí coitianta lymphoid, ginearaí cille réamh-NK, agus ginearaí cille NK scagtha (NKP) sa BM (Fathman et al., 2011) idir lucha Ythdf2WT agus Ythdf2ΔNK (Fíor S3 A), rud a léiríonn go bhfuil Ní fhéadfaidh YTHDF2 difear a dhéanamh d'fhorbairt luath cille NK inár múnla.

Chun iniúchadh a dhéanamh ar na meicníochtaí féideartha atá freagrach as laghdú cealla NK i lucha Ythdf2ΔNK, rinneamar imscrúdú ar iomadú cealla, inmharthanacht, agus cumas gáinneála cealla NK tar éis scriosadh Ythdf2 ag staid sheasta. Bhí céatadán na gcealla iomadaitheNK inchomparáide idir lucha Ythdf2WT agus Ythdf2ΔNK, mar is léir ó staining Ki67 ( Fíor. S3 B).

Bhí inmharthanacht NKcells comhionann freisin idir lucha Ythdf2WT agus Ythdf2ΔNK, mar atá léirithe ag iarscríbhinn V staining (Fíor S3 C). Chun a sheiceáil an bhfuil tionchar ag YTHDF2 ar dhul amach cealla NK ó BM go dtí an imeall, instealladh lucha Ythdf2WT agus Ythdf2ΔNK iv le antasubstaint antiCD45 chun cealla imdhíonachta a mharcáil agus a íobairt tar éis 2 nóiméad, agus rinneadh anailís ar a gcealla BM.

Cheadaigh sé seo dúinn líon na gceall NK sna réigiúin sinusoidal versus parenchymal den BM a chainníochtú, táscaire ar gháinneáil cille NK ó BM go fuil imeallach faoi staid sheasta (Leong et al., 2015). Léirigh na torthaí laghdú suntasach ar mhinicíocht na gcealla CD45+ NK i lucha Ythdf2ΔNK i gcomparáid le lucha Ythdf2WT sna sinusoids (Fíor 4 B), rud a léiríonn go gcuireann easnamh Ythdf2 isteach ar imeacht cealla NK ó BM go dtí an córas cúrsaíochta in vivo .

Téann cealla imdhíonachta faoi iomadú homeostatach le linn lymphopenia de bharr ionfhabhtuithe víreasacha áirithe nó de bharr ceimiteiripe (Sun et al., 2011). Cé go bhfuaireamar amach go bhfuil YTHDF2 inchurtha le haghaidh iomadú cille NK ag staid seasta, thugamar faoi deara laghdú suntasach ar iomadú cille le linn ionfhabhtú MCMV (Fíor 3, E-G). Mar sin rinneamar imscrúdú ar ról YTHDF2 maidir le hiomadú hoiméastatach cille NK a rialú i suíomh limfeach in vivo.

Rinneamar líon comhionann de chealla NK splenic a chomhaistrithe óCD45.2 lucha Ythdf2ΔNK nó lucha comhghineacha CD45.1 isteach i lucha inlymphocyte-easnamhach Rag2 - / -Il2rg - / - lucha. Léirigh na torthaí go raibh cion níos mó de chealla NK díorthaithe ó lucha rialaithe CD45.1WT ná ó lucha CD45.2 Ythdf2ΔNK ar lá 3 tar éis aistriú cille (Fíor S3 D).

Léirigh anailís bhreise go raibh laghdú cealla NK ó lucha Ythdf2ΔNK mar gheall ar iomadú cille lagaithe (Fíor S3 E) ach ní apoptosis cille (Fig.S3 F), rud a thugann le tuiscint go dtiomáineann YTHDF2 iomadú homeostatic cille NK in vivo faoi choinníollacha limfopenic.

Is féidir tuilleadh difreála ar chealla murine NK a rangú i gcéimeanna neamhaibí (CD11b -CD27+), aibíocht idirmheánach (CD11b+CD{4}}), agus aibíocht chríochfoirt (CD11b+CD27−) bunaithe ar leibhéil CD11b agusCD27 ( Chiossone et al., 2009; Geiger agus an Ghrian, 2016).

Fuaireamar amach gur mhéadaigh slonn Ythdf2 le haibíocht agus gur thaispeáin CD11b−CD27+, CD11b+CD{5}}, CD11b+CD27− leibhéil slonn is ísle, idirmheánacha agus is airde de Ythdf2, faoi seach (Fíor S3 G), rud a thugann le fios go bhféadfadh baint a bheith ag YTHDF2 le haibiú cille NK. Mar sin rinneamar imscrúdú ar ról YTHDF2 in aibiú cille NK arna shainiú ag na marcóirí dromchla cille CD11b agus CD27.

Fuaireamar amach gur tháinig laghdú suntasach ar mhinicíocht cealla NK aibíochta críochfoirt mar thoradh ar chailliúint Ythdf2 i NKcells agus/nó méadú ar chealla NK aibí neamhaibí agus idirmheánacha sa spleen, ae, scamhóg, agus fola ach ní i BM (Fíor 4 C agus). Fíor. S3 H), ag léiriú go rialaíonn YTHDF2 go dearfach aibiú cille NK teirminéil. Ag teacht leis na sonraí seo, laghdaíodh leibhéil KLRG1, arb é marcóir aibithe cille NK aimirneach é, go suntasach i lucha Ythdf2ΔNK sa spleen, ae, agus scamhóg ach ní BM i gcomparáid le sin lucha Ythdf2WT sna hurranna orgáin nó fíocháin chomhfhreagracha (Fíor 4 D).

Chun a chinneadh an bhfuil laghdú ar líon na gcealla NK aibí de réir easnamh Ythdf2 iscell intreach, chruthaigh muid chimeras i Rag2 - / - Il2rg - / - lucha trí chealla BM a instealladh ó CD45.1 WT agus CD45.2 lucha Ythdf2ΔNK, measctha ag 1:1: cóimheas. Mar a léirítear le cítoiméadracht sreafa ag aftertransplantation 8 wk, díorthaíodh cion laghdaithe de chealla NK aibí críochfoirt ó chealla CD45.2 Ythdf2ΔNK BM ná iad siúd ó chealla rialaithe CD45.1 WT (Fíor 4 E), le tuiscint go bhfuil aibiú ceallacha NK á rialú ag YTHDF2 is cill intreach.

Fachtóirí trascríobh bosca-T Tá Eomes agus Tbet ríthábhachtach le haghaidh aibithe NKcell (Daussy et al., 2014; Gordon et al., 2012). Léirigh staining intracellular laghdú suntasach ar leibhéil próitéine Eomes i gcealla NK ó lucha Ythdf2ΔNK i gcomparáid le lucha Ythdf2WT (Fíor S3 I). Ina theannta sin, fuair muid amach gur tharla an laghdú ar leibhéil próitéine agus mRNA de Eomes go sonrach i gcealla NK aibíochta teirminéil (CD11b + CD27 -) ( Fíor. S3 , J - L ).

Mar sin féin, i gcodarsnacht le Eome, bhí léiriú Tbet coibhéiseach i gcealla NK idir lucha Ythdf2ΔNK agus Ythdf2WT (Fíor S3, I agus K), rud a léiríonn go bhféadfadh YTHDF2 aibiú críochfoirt NKcell a rialáil trí dhíriú ar Eomes.