Tógáil Lactobacillus Casei Athchuingreach Vacsaín PEDV Agus a Fhreagairtí Imdhíonachta i Lucha
Sep 06, 2023
Teibí
Cúlra: Is galar tógálach intestinal é buinneach eipidéim na muc (PED) de bharr víreas buinneach eipidéim na muc (PEDV) arb iad is sainairíonna é urlacan, buinneach, anorexia, agus díhiodráitiú, rud a d'eascair caillteanais eacnamaíocha ollmhóra ar fud an domhain. Faoi láthair, is é imdhíonacht vacsaíne an modh is éifeachtaí fós chun leathadh PEDanna a rialú. Sa staidéar seo, rinneamar tréithchineál nua athchuingreach L. casei-OMP16-PEDVS a chuireann in iúl an próitéin PEDVS de PEDV agus próitéin OMP16 de phór Brucella abortus. Chun imdhíon-ghineacht na vacsaíne athchuingreach L. casei-OMP16-PEDVS iarrthóra a bheith eolach, cuireadh i gcomparáid í le BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP{{- 9}} próitéin athchuingreach PEDVS, agus BL21-PEDVS.
Torthaí: Léirigh na torthaí go bhféadfaimis leibhéil níos airde IgG a bhrath, antashubstaint a neodrú, IL-4, IL-10, agus INF- i serum agus IgA in feces de L. casei-OMP16- lucha imdhíonta PEDVS, a thug le fios go bhféadfadh an vacsaín iarrthóir L. casei-OMP16-PEDVS leibhéil níos airde imdhíonacht ghreannáin, imdhíonacht cheallacha, agus imdhíonacht mhúcóis a chothú.
Conclúid: Mar sin, L. casei-OMP16-Is vacsaín iarrthóra tuar dóchais inti é PEDVS le haghaidh próifiolacsas ionfhabhtú PEDV.
Eochairfhocail: PEDV, vacsaín Lactobacillus casei, próitéin PEDV S, OMP16, Freagraí imdhíonachta
sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta
Réamhrá
Tá buinneach eipidéim muc (PED) mar thoradh ar an víreas buinneach eipidéim muc (PEDV) le hairíonna lena n-áirítear buinneach, urlacan, anorexia, díhiodráitiú, agus meáchain caillteanas i bainbh [1, 2]. Is féidir le muca de gach aois a bheith ionfhabhtaithe le hairíonna éagsúla agus tá an ráta mortlaíochta i bainbh suas le 100% [3], rud a d’fhág go bhfuil caillteanais eacnamaíocha ollmhóra ar fud an domhain mar thoradh air. Chun scaipeadh PEDV a rialú, tógtar an chuid is mó de na cineálacha vacsaíní, mar shampla vacsaín díghníomhaithe hiodrocsaíd-adjuvanted alúmanaim, Víreas Gastroenteritis In-tarchurtha défhiúsach vótáilte (TGEV), agus vacsaín PEDV, agus vacsaín PEDV caolaithe [4]. Cé go bhfuil ról tábhachtach ag na vacsaíní seo maidir le PEDanna a rialú, tá a gcuid lochtanna ar fad. Ní féidir le vacsaíní díghníomhaithe freagairtí imdhíonachta ceallacha a ghníomhachtú, níl an vacsaín mhaolaithe an-sábháilte, agus ní féidir leo táirgeadh leordhóthanach antasubstaintí IgA víreas-shonracha de fhreagairtí imdhíonachta múcasacha a spreagadh. Dá bhrí sin, tá sé riachtanach agus práinneach vacsaín nua a fhorbairt chun PEDanna a rialú.
Is minic a mheastar Lactobacillus casei a bheith ina chineál córais veicteora shábháilte do sheachadadh spriocdhírithe antaiginí in imdhíonadh béil, le héifeachtaí tairbhiúla ar shláinte daoine agus ainmhithe [5]. Idir an dá linn, is féidir é a úsáid mar chóras seachadta chun an freagra cille T-helper a rialáil agus secretion IgAs sonracha a spreagadh le haghaidh díolúine mucosal [6]. Ar an láimh eile, tá an vacsaín athchuingreach Lactobacillus casei níos éasca a thabhairt, seans níos lú d’fhrithghníomhú hipiríogaireachta, agus tá sé níos cost-éifeachtaí i gcomparáid le vacsaíní traidisiúnta. Bunaithe ar na tuarascálacha, baineadh úsáid rathúil as vacsaíní athchuingreach Lactobacillus casei chun an víreas papilloma daonna, an niúmóine Streptococcus agus Escherichia coli [7-9] a chosc agus a rialú. Tá roinnt iarrachtaí comhchosúla le vacsaíní PED a dhearadh. Fuair na taighdeoirí amach go bhféadfadh brú athchuingreach Lactococcus lactis a léiríonn géin víreas eipidéime eipidéim athraitheach muc S1 leibhéil arda IL-4 agus IFN- i lucha imdhíonta [10] a chothú. D'fhéadfadh vacsaín frith-PEDV bunaithe ar lactobacillus casei a chuireann in iúl peptide Co1 dírithe ar chill mhicrifhillte a chomhleádh leis an antigen COE de PEDV freagairt imdhíonachta éifeachtach a chothú freisin [11]. Chun éifeachtacht an vacsaín PEDV a fheabhsú. Sa staidéar seo, tógaimid vacsaín nua Lactobacillus casei athchuingreach PED, a fhéadfaidh freagairtí imdhíonachta mucosal, greann agus ceallacha níos láidre a spreagadh i gcoinne ionfhabhtú PEDV trí riarachán béil. Tá PEDV, ball den teaghlach coronaviridae, comhdhéanta de cheithre phróitéin struchtúracha ina bhfuil an próitéin spike glycosylated (S) 150-220 kDa, an próitéin membrane 20-30 kDa (M), an próitéin clúdach 7 kDa (E), 58 kDa próitéin nucleocapsid (N) [12]. Ann , is féidir an próitéin S a roinnt i bhfearainn S1 (1-735 aimínaigéad) agus S2 (736-aimínaigéad deireanach) [13], agus cuimsíonn an próitéin S1 an réigiún ceangailteach receptor agus na príomh-eipitíopaí neodraithe [13]. 14]. Feidhmíonn aidiúvach vacsaín mar imdhíonmodulator agus féadann sé freagairtí imdhíonachta i gcoinne antaiginí comh-seachadta a chothú agus a fheabhsú. Fíoraíodh próitéin OMP16 de phór Brucella abortus chun cealla dendritic in vivo a ghníomhachtú, chun freagairt imdhíonachta th1 a spreagadh, agus ba vacsaín féin-aidiúvach a bhfuil tuar dóchais inti [15-17] é. Mar sin, cuireadh an próitéin OMP16 isteach sa vacsaín athchuingreach cás bacillus Lacto inár staidéar. Go dtí seo, is beag staidéar a rinneadh ar an vacsaín athchuingreach Lactobacillus casei de PEDV a tuairiscíodh. Dá bhrí sin, tá sé mar aidhm ag an staidéar seo vacsaín béil iarrthóra Lactobacillus casei úrscéal a thógáil, a fhéadfaidh díolúine humoral níos fearr, díolúine ceallach, agus díolúine mucosal a sholáthar chun scaipeadh PED a chosc.
Luibh Sínis cistanche plandaí-Antitumor
abhair agus modhanna
Amhrán baictéarach, víris, coinníollacha cultúir, plasmids, agus primers
Púdar cisteán
Tá na tréithchineálacha baictéaracha, na plasmid, agus na primers a úsáideadh sa staidéar seo liostaithe i dTábla 1. Saothraíodh an brú caighdeánach tagartha de Lactobacillus casei ATCC 393 i brat de Man Rogosa agus Sharpe (MRS) ag 37 céim [18]. Rinneadh an BL21 (DE3) agus DH5 a shaothrú i meán Luria-Bertani (LB) ag 37 céim [19]. Saothraíodh na cineálacha athchuingeacha Lactobacil lus casei, BL21 (DE3), agus DH5 sa mheán comhfhreagrach le antaibheathaigh chuí, faoi seach. Fásadh Brucella abortus i mBroth Soighe Tryptic (TSB) nó i meán Tryptic Soy Agar (TSA) (Difco Laboratories, Detroit, MI, USA) ag 37 céim . Saothraíodh na cealla Vero a bhí ionfhabhtaithe le tréithchineálacha PEDV i DMEM (Gibco, Langley, VA, SAM) arna fhorlíonadh le 10 ug/mL trypsin (Gibco, Langley, VA, SAM) [20]. Veicteoirí slonn de Lactobacillus casei agus Escherichia coli, faoi seach, a bhí sna plasmid pVE5523 agus pET28a (+).
Tábla 1 Saintréithe tréithchineálacha baictéaracha, plasmaidí agus primers a úsáideadh sa staidéar seo
Tógáil Lactobacillus casei athchuingreach agus tréithchineálacha BL21
Tógadh na plasmid slonn athchuingreach bunaithe ar na plasmids agus na primers i dTábla 1. Ar dtús, seicheamh páirteach géine PEDV S (493-708 aimínaigéad), seicheamh páirteach géine PEDV S (493-708 aimínaigéad), agus méadaíodh seicheamh páirteach géine Brucella abortus OMP16 (26-168 aimínaigéad) trí úsáid a bhaint as péirí primer PEDVS-F1/R1, PEDVS-F2/R2, agus OMP16-F/R, faoi seach. Ina dhiaidh sin, baineadh úsáid as an modh sínte forluí i blúirí OMP16 agus PEDVS chun blúire nua OMP16-PEDVS a thógáil le polaipeiptíd nascóra (GGGGSGGGGGGGGS) greamaithe sa lár. Ansin, cuireadh na blúirí PEDVS isteach i pET28a plasmid le heinsímí srianta EcoRI/XbaI chun plasmid athchuingreach pET28a-PEDVS a ghiniúint, agus cuireadh na blúirí nua OMP16-PDVS isteach i plasmid pET28a agus pVE5523 le EcoRI/XbaI agus Saliv einsímí srianta chun plasmid athchuingreach pET28a-OMP16-PEDVS agus pVE5523-OMP16-PEDVS, faoi seach a ghiniúint. Aistríodh na plasmidí athchuingeacha (pET28a-PEDVS, pET28a-OMP16-PEDVS, agus pVE5523-OMP16-PEDVS) go BL21 (DE3) nó Lactobacillus casei ATCC393 trí chlaochlú nó leictreaphróisiú bunaithe ar an páipéar tuairiscithe [21].
Anailís ar léiriú próitéine ag blot an Iarthair
Ba é an slonn próitéine de na cineálacha BL21-pET28a-PEDVS, BL21- pET28a-OMP16-PEDVS, agus L. casei-pVE5523-OMP16- PEDVS braite bunaithe ar an modh tuairiscithe le roinnt modhnuithe [21–23]. Saothraíodh na cineálacha athchuingreach BL21-pET28a-PEDVS agus BL21-pET28a OMP16-PEDVS i brat LB agus úsáideadh IPTG chun an bhuaint go pET28a-PEDVS agus pET28a-OMP{{22} } próitéiní PEDVS. Baineadh úsáid as an veicteoir bán mar rialú diúltach. Tar éis lysis cille agus lártheifneoiriú, bailíodh an forshnáthán agus an dríodar. Ansin, íonaíodh na spriocphróitéiní ag baint úsáide as an gcolún crómatagrafaíochta cleamhnas Nickel bunaithe ar an staidéar roimhe seo [24]. Idir an dá linn, baineadh leas as cultúir an athchuingreach L. casei pVE5523-OMP16-PedvS freisin trí lártheifneoiriú ag 9000 × g ar feadh 10 nóiméad ag 4 céim . Ina dhiaidh sin, fiuchadh na samplaí le maolán luchtaithe dódeicile sulfáit sóidiam (SDS) 10 nóiméad. Scaradh na próitéiní le leictreafóiréis glóthach dodecyl sulfate-polyacrylamide 12% (SDS-PAGE) agus ansin aistríodh iad isteach i seicní PVDF (Millipore, Mississauga, ON, Ceanada). Cuireadh bac ar branes mem le bainne bearrtha 5% ar feadh 2 h ag 37 céim agus ansin goraíodh iad le frith-chorp monaclónach murine de phróitéin S thar oíche ag 4 céim agus IgG frith-luch gabhar comhchuingeach HRP (ABclonal, Wuhan, an tSín) ar feadh 2 uair an chloig. 37 céim . Rinneadh na bandaí próitéine a léirshamhlú ag baint úsáide as Foshraith Blotting ECL an Iarthair Clarity™ (Bio-Rad, Hercules, CA, SAM).
Imdhíonadh agus bailiú samplaí
Rinneadh meastóireacht ar imdhíon-ghineacht na vacsaíne Lactobacillus casei athchuingreach ag baint úsáide as lucha BALB/c saor ó phataiginí sainiúla sé seachtaine (SPF) [10, 18], a ceannaíodh ó ionad ainmhithe Ollscoil Talmhaíochta Shandong. Roinneadh 50 lucha go randamach i 5 ghrúpa agus 10 lucha i ngach grúpa. Imdhíonadh na lucha le vacsaín Lactobacillus casei athchuingreach agus próitéin íonaithe (pET28a-PEDVS, pET28a OMP16-PEDVS, pET28a-OMP16-PEDVS+Aidiúvach iomlán Freund), faoi seach. Rinneadh an prótacal imdhíonta bunaithe ar Tábla 2 agus tugadh teanndáileog imdhíonta tar éis 13 lá. Don staidéar séireolaíoch, bailíodh séiream ar 0, 14, agus 28 lá iar-imdhíonta (dpi) trí phuncháil féitheacha eireaball agus é a stóráil ag − 20 céim go dtí go n-úsáidfí é. Bailíodh feces 1 lá roimh an vacsaíniú agus gach uair treisithe. Chun IgA a bhrath, caolaíodh feces (w/v) le EDTA sóidiam 0.05 M ag cóimheasa 1:4 díreach tar éis iad a bhailiú agus goraíodh iad ar feadh 14 h ag 4 céim tar éis meascadh cuí. Bailíodh an comhshnáthán trí lártheifneoiriú 12,000×g agus caomhnaíodh é ag − 20 céim go dtí go n-úsáidfí é. Ag 28ú pso; íobairt trí lucha ó gach grúpa agus próiseáladh an intestine le haghaidh braite IgA de réir an údair a thuairiscítear roimhe seo [10, 18, 23].
Anailís cinnidh ar leibhéil antashubstainte
Rinneadh leibhéil IgG sa sera agus IgA sna feces a thomhas ag modhanna ELISA le roinnt modhnuithe [18, 23]. Ba iad seo a leanas na modhanna: Brataíodh plátaí micriteora polaistiréin thar oíche ag 4 chéim le 100 μL 10 ug/mL próitéin PEDVS, OMP16-próitéin PEDVS, nó 100 μL athchuingreach L. casei-OMP16-péine PEDVS . Tar éis iad a bhlocáil le bainne bearrtha 5%, caolaíodh na samplaí a bailíodh go sraitheach i PBS, cuireadh trí chóip leo, agus goraíodh iad ag 37 céim ar feadh 1 h. Ansin, cuireadh IgG frith-luiche gabhar comhchuingeach HRP nó antashubstaint IgA (Invi trogen, SAM) le gach tobar (1:5000) agus gor iad ar feadh 1 uair ag 37 céim . Nitear na plátaí micriteir polaistiréin 5 huaire le linn gach céime. Ar deireadh, cuireadh 100 μL de shubstráit TMB (tetramethylbenzidine agus H2O2) le gach tobar agus cuireadh 50 μL de thuaslagán stad tar éis 10 nóiméad. Rinneadh na luachanna OD ag 630 nm a thomhas ag baint úsáide as léitheoir pláta ilmhód (EnVision).
Measúnachtaí um neodrú víreas
Scrúdaíodh na titers antasubstainte neodraithe de PEDV i sera de réir na modhanna le roinnt modhnuithe [25, 26]. Go hachomair, díghníomhaíodh an serum murine le teas (56 céim ar feadh 30 nóim) agus ansin caolaíodh dhá uair go sraitheach i 96 pláta tobair (Corning, SAM) le trí chóipeanna de gach sampla. Ansin, cuireadh méid comhionann de 200 tréithchineálacha PEDV TCID50 / 50 μL le 96 pláta tobair agus gor iad ar feadh 1 h ag 37 céim . Cuireadh an meascán le plátaí tobair 96 nua atá brataithe le monolayers cille Vero agus gor ar feadh 1 u ag 37 céim. Ansin nite agus goradh cealla sa mheán cothabhála ag 37 céim i 5% CO2. Tar éis 2 lá, breathnaíodh an éifeacht citopathic (CPE) ag baint úsáide as micreascóp inbhéartaithe, agus sainmhíníodh an tiúchan neodrach sizing mar an tiúchan is ísle d'antasubstaintí sa serum.
Tábla 2 Prótacal imdhíonachta lucha BALB/c
Brath cíteacain
Chun an secretion cytokines a bhrath, fuarthas supernatants ó na lucha saotharlainne (0, 14, agus 28 lá). Cinneadh leibhéil IL-4, IL-10, agus IFN- secreted ag baint úsáide as feisteáin tráchtála ELISA (Elabscience Biotechnology Co., Ltd., Wuhan) de réir mholtaí an déantóra, faoi seach. Rinneadh Cytokine a chainníochtú ó na cuair chaighdeánacha éagsúla a ullmhaíodh ó imoibrithe caighdeánacha a sholáthraíonn na feisteáin faoi seach agus braitheadh luach dlús optúil (OD) ag 450 nm ó gach pláta ag baint úsáide as léitheoir pláta multimode (EnVision) [23, 27].
Anailís staitistiúil
Fuarthas na sonraí go léir ó thrí thurgnaimh neamhspleácha ar a laghad, agus cuireadh na torthaí i láthair mar an modh ± diall caighdeánach (SD). Baineadh úsáid as an anailís staitistiúil trí úsáid a bhaint as t-tástáil dhá eireaball agus anailís aontreo i Graph Pad Prism 7.0 (GraphPad Software Inc., USA). Sainmhíníodh an difríocht shuntasach mar ∗ p < 0.05, agus ainmníodh na céimeanna éagsúla de dhifríocht shuntasach mar ∗∗ p < 0.01, ∗∗∗ agus p < 0.001, faoi seach.
Torthaí
Fíorú athchuingreach Lactobacillus casei agus tréithchineálacha BL21
Chun na plasmidí athchuingeacha tógtha a fhíorú, díleádh an slonn athchuingreach plasmids pET28a-PEDVS, pET28a-OMP16-PEDVS, agus pVE5523-OMP16-PDVS trí úsáid a bhaint as einsímí srianta NcoI/XhoI, agus Léiríodh torthaí díleá einsímí i bhFíor. 1. Bhí méideanna na mbandaí sprice in electrophoretograms mar an gcéanna leis na torthaí a rabhthas ag súil leo agus léirigh torthaí seicheamhaithe nach raibh aon sóchán ar taispeáint sna plasmidí slonn athchuingreach. Léirigh na torthaí seo gur éirigh go maith le tógáil pET28a-PEDVS, pET28a OMP16-PEDVS, agus pVE5523-OMP16-plasmidí athchuingeacha PEDVS. Léirigh torthaí blot an iarthair gur cuireadh na próitéiní athchuingreach pET28a-OMP16-PEDVS agus pET28a-PEDVS in iúl i gcomhshuíomh BL21-pET28a OMP16-PEDVS agus BL21- tréithchineálacha pET28a-PEDVS, faoi seach. Fíoraíodh an phróitéin pVE5523-OMP16-PEDVS freisin san fheadán cultúrtha de phéine L. casei-pVE5523- OMP16-PEDVS. Léirigh na bandaí sonracha ó Fíor 2 gur baineadh go rathúil na próitéiní athchuingreach pET28a-OMP16- PEDVS, pVE5523-OMP16-PEDVS, agus pET28a-PEDVS go léir (Fíor 2).
Fíor 1 Torthaí díleáite einsímí na plasmid athchuingreach. A: Torthaí díleá einsímí an pVE5523-OMP16-PEDVS plasmid. M: Marcóir Dréimire DNA D8000; 1: pVE5523-OMP16-PEDVS plasmid. B: Torthaí díleáite einsímí pet28a-OMP16-PEDVS agus pET28a-PEDVS plasmid. M: Marcóir Dréimire DNA D8000; 1: pet28a-OMP16-PEDVS plasmid; 2: pET28a-PEDVS plasmid
Na leibhéil antashubstainte IgG i serum na lucha imdhíonta le vacsaíní iarrthóra
Chun imdhíon-ghineacht shainiúil na n-iarrthóirí vacsaíne ginte a mheas, roghnaíodh lucha BALB/c agus roinneadh iad i 5 ghrúpa. Ansin, rinneadh leibhéil IgG sa serum agus IgA sna feces a thomhas le feisteáin tráchtála ELISA. Léirigh na torthaí nach raibh aon difríochtaí suntasacha i leibhéil IgG i measc na ngrúpaí vacsaínithe agus níor aimsíodh beagnach aon antasubstaint IgG i ngach lucha roimh an imdhíonadh. Mar sin féin, fuarthas difríochtaí suntasacha ina dhiaidh sin tar éis an chéad vacsaínithe agus bhí leibhéil antashubstainte IgG i séiream ag 28 lá níos airde ná mar a bhí i 14 lá. I measc 5 ghrúpa lucha, léirigh na lucha a imdhíonadh le L. casei-OMP16- PEDVS agus BL21-OMP16-PEDVS-F imdhíon-ghineacht chomhchosúil agus ab airde. Mar sin, d’fhéadfadh L. casei-OMP16- PEDVS agus BL21-OMP16-PEDVS-F an t-imdhíon-ghineacht is airde a tháirgeadh, agus BL21-OMP16- PEDVS ina dhiaidh sin. agus BL21-PEDVS (Fíor 3).
forlíonadh cistanche sochair-díolúine a mhéadú
Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil
【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Na leibhéil antashubstainte IgA i feces de lucha imdhíonta le vacsaíní iarrthóra
Chun imdhíon-ghineacht shainiúil na n-iarrthóirí vacsaíne ginte a mheas, rinneadh measúnú freisin ar leibhéil antasubstaintí IgA i bhféithe na lucha. Léirigh na torthaí nach raibh aon antashubstaint speisialta frith-PEDVS IgA ann roimh an imdhíonadh. Mar sin féin, tá méideanna móra antashubstainte IgA in feces de L. casei-OMP16-PEDVS lucha imdhíonta BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP{{7} }Grúpálann PEDVS, agus BL21-PEDVS lucha 14 lá tar éis an imdhíonta. Ag 28 lá tar éis an imdhíonta, shroich leibhéil antashubstainte IgA de L. casei-OMP16-lucha imdhíonta PEDVS an t-uasleibhéal is airde. Idir an dá linn, níor tháinig méadú soiléir ar leibhéil antashubstainte IgA sna trí ghrúpa eile. Mar sin, d’fhéadfadh an vacsaín iarrthóra L. casei OMP16-PEDVS leibhéil níos airde antashubstainte a spreagadh i lucha imdhíonta i gcomparáid le BL21- OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP21-OMP16- {18}}PEDVS, agus BL21- lucha imdhíonta PEDVS (Fíor 4).
Fíor 2 Fíorú próitéiní slonn athchuingreach. M: marcóir próitéine; 1: foirm an phróitéin rúnda athchuingreach L. casei pVE5523-OMP16-péine PEDVS; 2: an phróitéin íonaithe ó phéine BL21- pET28a-OMP16-PEDVS; 3: an phróitéin íonaithe ó phéine BL{21-pET28a-PEDVS
Na leibhéil antashubstainte neodraithe serum i lucha imdhíonta
Chun éifeacht chosanta vacsaíní iarrthóra L. casei-OMP16-PEDVS, BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21- OMP{{6}PEDVS{6}PEDVS, a mheas , agus BL21-PEDVS i lucha, tomhaiseadh na leibhéil neodrúcháin antashubstainte. Léirigh na torthaí nár aimsíodh aon antasubstaint neodraithe roimh an imdhíonadh. Braitheadh antashubstaint neodraithe ag 14 lá tar éis an imdhíonta agus mhéadaigh sé ag 14 lá tar éis teann-imdhíonta. Bhí gníomhaíocht neodraithe frith-PEDV níos láidre ag an bhfreagra antasubstainte i lucha a fuair L. casei-OMP16-PEDVS ná mar a bhí i lucha a riartar ó bhéal le BL21-OMP16-PEDVS-F, BL 21-OMP16-PEDVS, agus BL21-PEDVS. Mar sin, d'fhéadfadh an vacsaín iarrthóra L. casei OMP16-PEDVS an leibhéal neodraithe antashubstainte is airde a spreagadh, agus BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21- OMP{{{{16-PedVS). 24}PEDVS, agus BL21-PEDVS (Fíor 5).
Leibhéil cíteacain
Chun comparáid a dhéanamh idir an leibhéal freagra imdhíonachta ceallacha L. casei-OMP16-PEDVS, BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21- OMP16-PEDVS, agus BL21-cinneadh lucha imdhíonta PEDVS, IL- 4, IL-10, agus IFN-, faoi seach. Léirigh na torthaí go raibh leibhéil na cítocíní IL-4, IL-10, agus IFN- i sera na lucha ar fad an-íseal agus nach raibh aon difríocht shuntasach acu roimh an imdhíonadh. De bharr an méid, breathnaíodh athruithe comhchosúla i dtorthaí IL-4, IL-10, agus IFN- . Ag 14 lá tar éis an imdhíonta, bhí an leibhéal IL-4, IL-10, agus IFN- i L. casei-OMP16-lucha imdhíonta PEDVS níos airde ná BL21- OMP16-PEDVS F, BL21-OMP16-PEDVS, agus BL21-lucha imdhíonta PEDVS. Ag 14 lá tar éis an imdhíonta teanndáileog, braitheadh leibhéal níos airde IL-4, IL{-10, agus IFN- i L. casei-OMP16- lucha imdhíonta PEDVS i gcomparáid le lucha imdhíonta eile. trí ghrúpa. Mar sin, d'fhéadfadh an vacsaín iarrthóra L. casei-OMP16-PEDVS na leibhéil IL-4, IL{-10, agus IFN- is airde a spreagadh, agus BL21-OMP{{ ina dhiaidh sin). 40}} PEDVS-F, BL21-OMP16-PEDVS, agus BL21-PEDVS (Fíor 6).
Fíor 3 Leibhéil antashubstainte IgG na vacsaíní iarrthóra i serum lucha imdhíonta. Bailíodh séiream ar laethanta 0, 14, agus 28 lá roimh nó tar éis an imdhíonta a scrúdaíodh trí threalamh tráchtála ELISA, agus tomhaiseadh é ag ionsúiteacht 450 nm. Seasann barraí don mheán ± diall caighdeánach de thrí thurgnamh neamhspleách. * p < 0.0 5, ** p < 0.01, agus **** p < 0.0001 is ionann iad agus céimeanna méadaitheacha de dhifríochtaí suntasacha, faoi seach, agus ní chiallaíonn ns aon difríocht shuntasach
Plé
Tharla ráig ar scála mór de PED de bharr athraithigh PEDV i mí Dheireadh Fómhair 2010, rud a d'fhág go raibh caillteanais eacnamaíocha ollmhóra sa tSín agus ar fud an domhain [1]. Mar sin féin, déantar vacsaíní traidisiúnta ar fad a dhearadh bunaithe ar an gcineál CV777 clasaiceach nach féidir cosaint leordhóthanach a sholáthar don leagan PEDV [4]. Chun scaipeadh PEDV a rialú agus caillteanais eacnamaíocha a laghdú, déantar vacsaíní nua de chineálacha athraitheacha PEDV a dhearadh freisin. Faoi láthair, tá an vacsaín neamhghníomhaithe PEDV agus an vacsaín caolaithe de chineálacha athraitheacha PEDV ceadaithe ag rialtas na Síne go léir agus tá na hionchais gealltanais go léir maidir le PED a rialú. Ach tá lochtanna sa dá chineál vacsaíní nua freisin. Ionfhabhtaíonn PEDV muc tríd an gconair díleá agus tá trópachas fíocháin intestinal aige. Dá bhrí sin, tá díolúine mucosal níos éifeachtaí ná díolúine sistéamach chun cosc a chur ar iontráil PEDV isteach i gcealla epithelial intestinal, agus ní mór do vacsaíní cosaint mucosal a sholáthar go héifeachtach sa chonair intestinal. Mar sin, Sa staidéar seo, déanaimid cineál nua vacsaíne a thógáil a fhéadfaidh antasubstaintí IgG agus IgA frith-PEDV-shonracha níos láidre a spreagadh. Tá airíonna imdhíonachta-modulatory féideartha ag Lactobacillus casei mar fheithicil seachadta vacsaíní agus is féidir le léiriú comhdhúile bithghníomhacha ar bhalla cille an bhaictéar seo freagraí imdhíonachta cuí a spreagadh [28, 29]. Úsáidtear go forleathan é chun roinnt antaiginí heitróil ogous den víreas papilloma daonna, Streptococcus niúmóine, agus Escherichia coli a chur in iúl mar vacsaíní i múnlaí ainmhithe, a léirigh go léir imdhíon-ghineacht den scoth [7-9]. I gcomparáid leis an vacsaín neamhghníomhaithe agus an vacsaín mhaolaithe, is féidir leis an vacsaín veicteoir Lactobacillus casei leibhéil IgA níos airde agus freagairt imdhíonachta cheallacha a spreagadh freisin. Tá sé léirithe ag staidéir go mbeadh an chéad líne cosanta ag IgA sa stéig níos fearr ná IgG maidir le bainbh a chosaint ó ionfhabhtú PEDV [10, 30]. Dá bhrí sin, geallann sé cineál vacsaín Lactobacillus casei veicteoir PED a fhorbairt. Bunaithe ar na tuarascálacha, is féidir an próitéin S de PEDV a roinnt i bhfearainn S1 (1-735 aimínaigéad) agus S2 (736-aimínaigéad deireanach) [13], agus folaíonn próitéin S1 an réigiún ceangailteach gabhdóirí agus an príomheipitíopaí neodraithe [14]. Féadann an croí-eipitíopa neodrúcháin (COE) antasubstaintí neodracha láidre a chothú i gcoinne PEDV [31, 32]. In éineacht leis an anailís antigenicity, roghnaíodh seicheamh páirteach den ghéin S1 (1477-2124 bp) chun an plasmid athchuingreach a thógáil. Cruthaíodh go raibh ní hamháin go bhfuil dea-ghineacht imdhíonachta sa bhlúire beag roghnaithe ach go gcuireann sé freisin le léiriú rúnda Lactobacillus casei. Ar an láimh eile, fuair Pasquevich go bhféadfadh próitéin membrane seachtrach Brucella abortus 16 cealla dendritic in vivo a ghníomhachtú, go n-eascraíonn sé freagra imdhíonachta th1, agus bhí sé ina vacsaín féin-choigeartaithe geallta i gcoinne brúsalóise faighte sistéamach agus béil [15]. Taighde comhchosúil a rinne próitéin sheachtrach neamhlipidaithe omp16 ó Brucella spp. toisc go bhféadfadh aidiúvach sróine freagairt imdhíonachta th1 a chothú agus cruthaíodh an fhreagairt ailléirgeach th2 ar phróitéiní bainne bó freisin [16]. Mar sin, roghnaíodh seicheamh páirteach den ghéin omp16 chun plasmid athchuingreach a thógáil chun feidhm imdhíonachta a fheabhsú inár staidéar. Chun a fháil amach an bhféadfadh an vacsaín mholta Lactobacillus casei freagairtí imdhíonachta greannacha a chothú, tomhaiseadh na leibhéil IgG, IgA, agus neodrú antashubstainte. Ní raibh aon difríocht shuntasach idir an leibhéal antashubstainte IgG de L. casei-OMP16- lucha imdhíonta vacsaínithe athchuingreach PEDVS le lucha imdhíonta vacsaínithe athchuingreach BL21-OMP16-PEDVS-F. Mar sin féin, bhí na leibhéil IgA agus antashubstaint neodraithe níos airde ná na leibhéil i BL21-OMP16-PEDVS-F, BL{21-OMP16-PEDV S, agus BL{{47) }}lucha imthacaí vacsaíne in-athchuingreach PDVS. Léirigh na torthaí go bhféadfadh L. casei-OMP16-PEDVS freagairtí imdhíonacha greannacha níos láidre a chothú, go háirithe leibhéil antashubstainte IgA. Tá sé léirithe ag staidéir gurb é IgA an chéad líne cosanta sa stéig agus go mbeadh sé níos fearr ná IgG maidir le bainbh a chosaint ó ionfhabhtú PEDV [30]. Dhearbhaigh an taighde freisin an toradh go bhféadfadh vacsaín athchuingreach L. casei-OMP{16-PEDVS cosaint imdhíoneolaíoch níos fearr a sholáthar do PEDV. Chun an cineál freagartha imdhíonachta a tharlódh de bharr athchuingreach L. casei-OMP16-PEDVS a fhiosrú, braitheadh leibhéil IL-4, IL-10, agus IFN- chun gníomhaíocht T a mheas. limficítí. Bunaithe ar an tuarascáil, tá ról tábhachtach ag IFN- sa fhreagra imdhíonachta ceallacha a dhéantar nuair a bhíonn pataiginí ionradh ar an gcorp, tá ról tábhachtach ag IL-4 sa fhreagra imdhíonachta humoral agus ag cur chun cinn caoinfhulaingt imdhíonachta agus díolúine mucosal [33], IL Imríonn -10 róil riachtanacha sa troid i gcoinne ionfhabhtú miocróbach mucosal agus sláine bhacainn mucosal a chothabháil laistigh den stéig [34]. Idir an dá linn, léirigh torthaí braite cítocín go bhféadfadh lucha a imdhíonadh leis an vacsaín L. casei-OMP16-PEDVS léiriú níos láidre ar IL-4, IL{{{-10, agus IFN- , a spreagadh thacaigh sé leis na torthaí go bhféadfadh vacsaín athchuingreach L. casei-OMP16-PEDVS freagairt imdhíonachta greannach níos láidre, leibhéal antasubstainte IgA, agus freagairt imdhíonachta cheallacha, faoi seach a chothú.
Fíor 5 Na leibhéil antashubstainte neodraithe de vacsaíní iarrthóra i serum lucha imdhíonta. Bailíodh séiream ar laethanta 0, 14, agus 28 lá roimh nó tar éis an imdhíonta agus scrúdaíodh é trí thástáil neodraithe. Seasann barraí don mheán ± diall caighdeánach de thrí thurgnamh neamhspleách. * p < 0.05, ** p < 0.01, agus **** p < 0.0001 is ionann iad agus céimeanna méadaitheacha de dhifríochtaí suntasacha, faoi seach, agus ní chiallaíonn ns aon difríochtaí suntasacha difríocht
Fíor 6 Leibhéil cítocín a bhrath ó shéiream na lucha imdhíonta. Bailíodh séiream ar laethanta 0, 14, agus 28 lá roimh nó tar éis an imdhíonta agus scrúdaíodh é trí threalamh tráchtála ELISA. Tomhaiseadh an luach ionsúcháin ag ionsúchán 450 nm do IL-4 (a), IL-10 (b), agus IFN-(c), faoi seach. Seasann barraí don mheán ± diall caighdeánach de thrí thurgnamh neamhspleách. Léiríonn * p < {{10}}.05, ** p < 0.01, agus **** p < 0.0001 céimeanna méadaitheacha de dhifríochtaí suntasacha, faoi seach
Conclúid
Go hachomair, L. casei-OMP16-PEDVS, BL21-OMP16- PEDVS-F, BL21-OMP16-PEDVS, agus BL{{7} }}Tógadh vacsaíní iarrthóra PEDVS sa staidéar seo. Idir an dá linn, rinneadh meastóireacht ar fhreagairt imdhíonachta humoral agus ar leibhéil freagra imdhíonachta cheallacha na vacsaíní iarrthóra seo i lucha. Léirigh na torthaí go bhféadfadh na lucha a imdhíonadh le L. casei-OMP16-PEDVS leibhéil níos airde IgG, IgA, antashubstaint neodraithe, IL-4, IL- 10, agus INF- a tháirgeadh i gcomparáid le na lucha imdhíonta le BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP16-PEDVS, agus BL21-PEDVS. Dá bhrí sin, féadfaidh an vacsaín athchuingreach L. casei OMP16-PEDVS iarrthóir an bonn a bhunú le haghaidh fhorbairt vacsaíne mucosal athchuingreach atá sábháilte, éifeachtach agus áisiúil le haghaidh próifiolacsas ionfhabhtú PEDV.
cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta
Tagairtí
1. Wang D, Fang L, S X. Buinneach eipidéim muc sa tSín. Víreas Res. 2016; 226:7-13.
2. Sueyoshi M, Tsuda T, Yamazaki K, Yoshida K, Nakazawa M, Sato K, et al. Imscrúdú imdhíonhistochemical ar bhuinneach eipidéim muc. J Comp Pathol. 1995; 113(1):59–67.
3. Sun RQ, Cai RJ, Chen YQ, Liang PS, Song CXJEID. An ráig de bhuinneach eipidéim muc i bainbh diúil, an tSín. Emerg Infect Dis. 2012; 18(1):161–3.
4. Tong YE, Feng L, Li W. Forbairt vacsaín caolaithe dé-chomhcheangailte i gcoinne víreas gastroenteritis in-tarchurtha agus víreas buinneach eipidéim muc. Chin J Roimhe Tréidliachta Med. 1999; 21(6):35–9.
5. Pouwels PH, Leer RJ, Boersma WJ. Acmhainneacht Lactobacillus mar iompróir le haghaidh imdhíonta béil: forbairt agus réamhthréithriú córas veicteora le haghaidh seachadadh spriocdhírithe antaiginí. J Biteicneolaíocht. 1996; 44(1–3):183.
6. Tsai YT, Cheng PC, Pan TM. Biteicneolaíocht: Éifeachtaí inmunomodulatory baictéir aigéid lachtaigh chun feidhmeanna agus sochair imdhíonachta a fheabhsú. Biteicneolaíocht Micribhithil Appl. 2012; 96(4):853–62.
7. Adachi K, Kawana K, Yokoyama T, Fujii T, Tomio A, Miura S, et al. Is straitéis éifeachtach é imdhíonadh béil le vacsaín Lactobacillus casei a chuireann in iúl don víreas papilloma daonna (HPV) cineál 16 E7 chun limficítí mucosal citotocsaineacha a aslú in aghaidh HPV16 E7. Vacsaín. 2010; 28(16): 2810–7.
8. Campos IB, Darrieux M, Ferreira DM, Miyaji EN, Silva DA, Arêas APM, et al. Imdhíonadh sróine ar lucha le Lactobacillus casei ag cur in iúl an Próitéin Dromchla Pneumococcal A: ionduchtú antasubstaintí, sil-leagan iomlán agus cosaint pháirteach i gcoinne dúshlán Streptococcus pneumoniae. Miocróib Infect. 2008; 10(5):481–8.
9. Wen LJ, Hou XL, Wang GH, Yu LY, Wei XM, Liu JK, et al. Cosnaíonn imdhíonadh le tréithchineálacha cási Lactobacillus athchuingreach K99, agus próitéin fimbria K88 lucha ar Escherichia coli enterotoxigenic. Vacsaín. 2012; 30(22): 3339–49.
10. Guo M, Yi S, Guo Y, Zhang S, Niu J, Wang K, et al. Tógáil brú athchuingreach lactococcus lactis ag léiriú géine athraitheach S1 víreas eipidéim muc muc agus a anailís imdhíon-ghineachta i lucha. Imdhíonacht víreasach. 2019; 32(3): 144–50.
11. Wang X, Wang L, Zheng D. Imdhíonadh ó bhéal le vacsaín víreas eipidéim eipidéim frith-mhuc (PEDV) Lactobacillus casei-bhunaithe a chuireann in iúl peptide microfold spriocdhírithe cille Co1 comhleádh leis an antigen COE de PEDV. J Appl Micribhith. 2017; 124(2):368–78.
12. Duarte M, Tobler K, Bridgen A, Rasschaert D, Ackermann M, H L. Nochtann anailís seicheamh ar an genome víreas buinneach eipidéim muc idir na géinte próitéin nucleocapsid agus spike ORF polymorphic. Víreolaíocht. 1994; 198(2):466.
13. Lee DK, Park CK, Kim SH, Lee C. Ilchineálacht i ngéinte próitéin spike de víris buinneach eipidéim muc scoite amach sa Chóiré. Víreas Res. 2010; 149(2): 175–82.
14. Sun DB, Feng L, Shi HY, Chen JF, Liu SW, Chen HY, et al. Tá an réigiún próitéin spike (aa 636789) den víreas buinneach eipidéim muc riachtanach chun antasubstaintí a neodrú a ionduchtú. Virol Gníomh. 2007; 51(3):149–56.
15. Pasquevich KA, Garcia Samartino C, Coria LM, Estein SM, Zwerdling A, Ibanez AE, et al. Is patrún móilíneach nua a bhaineann le pataiginí baictéarach é an próitéin i bpróitéin membrane seachtrach Brucella abortus 16 a ghníomhaíonn cealla dendritic in vivo, a chothaíonn freagairt imdhíonachta Th1, agus is vacsaín féin-choigeartaithe tuar dóchais in aghaidh brúsalóise faighte sistéamach agus béil. J Imdhíon. 2010; 184(9):5200.
16. Ibanez AE, Smaldini P, Coria LM, Delpino MV, Pacífico LGG, Oliveira SC, et al. Próitéin sheachtrach neamhleachtaithe Omp16 (U-Omp16) ó Brucella spp. de réir mar a chothaíonn aidiúvach sróine freagra imdhíonachta Th1 agus modhnaíonn sé freagairt ailléirgeach Th2 ar phróitéiní bainne bó. PLoS a hAon. 2013; 8(7): 69438.
17. Pasquevich KA, Estein SM, Samartino CG, Zwerdling A, Coria LM, Barrionuevo P, et al. Díolúine: Cothaíonn imdhíonadh le próitéin sheachtrach speiceas Brucella Omp16 nó Omp19 in aidiúvach cealla sonracha CD4+ agus CD8+ T chomh maith le cosaint chórasach agus béil ar ionfhabhtú Brucella abortus. Ionfhabhtaigh Imdhíonacht. 2009; 77(1):436–45.
18. Ma S, Wang L, Huang X, Wang X, Chen S, Shi W, et al. Vacsaín Lactobacillus athchuingreach ó bhéal a dhíríonn ar na cealla micreabhille intestinal agus ar na cealla dendritic chun an croí-epitope neodrúcháin den víreas buinneach eipidéime muc a sheachadadh. Monarcha Cell Microb. 2018; 17(1):20.
19. Chu S, Zhang D, Wang D, Zhi Y, Zhou P. Léiríonn léiriú heitreolaíoch agus tréithriú bithcheimiceach níotráite comhshamhlaithe agus nítrít reductase oiriúnú agus poitéinseal Bacillus megaterium NCT-2 san ithir salinization tánaisteach. Int J Biol Macromol. 2017; 101:1019.
20. Guo N, Zhang B, Hu H, Sea S, Chen F, Li Z, et al. Cuireann Caerin1.1 bac ar fhás víreas buinneach eipidéim muc in vitro trí cheangal díreach leis an víreas. Víris. 2018; 10:9.
21. Chen Z, Lin J, Ma C, Zhao S, She Q, Liang Y. Biteicneolaíocht: tréithriú pMC11, plasmid le dhá bhunús macasamhlú scoite ó Lactobacillus casei MCJ agus tógáil veicteoirí tointeála le gach macasamhail. Biteicneolaíocht Micribhithil Appl. 2014; 98(13):5977.
22. Xiaona W, Li W, Xuewei H, Sunting M, Meiling Y, Wen S, et al. Probiotics a Sheachadadh ó Bhéal a Léirítear Peiptíde Dendritic a Dhírítear ar Chealla Dendritic Comhleáite le Víreas Buinneach Eipidéime Muiceoil COE Antigen: Straitéis Gheallta Vacsaín i gcoinne PEDV. Víris. 2017; 9(11):312.
23. Bhuyan AA, Memon AM, Bhuiyan AA, Zhonghua L, Zhang B, Ye S, et al. Tógáil Lactobacillus casei athchuingreach a léiríonn próitéin BVDV E2 agus a fhreagairt imdhíonachta i lucha. J Biteicneolaíocht. 2018; 270:51–60.
24. Noi NV, Chung YCJB, Trealamh B. Leas iomlán a bhaint as léiriú agus íonú an fhearainn S1 athchuingreach den phróitéin spike víreas buinneach eipidéim muc (PEDV-S1) in Escherichia coli. Trealamh Biteicniúil Biteicniúil. 2017; 31(2):1–11.
25. Li C, Li W, Esesarte E, Guo H, Elzen P, Aarts E, et al. Príomhspriocanna chun antasubstaintí a neodrú is ea na fearainn cheangail cille de phróitéin spíc víreas eipidéim an mhuc. J Víreas. 2017; 91(12):1–16.
26. Wen Z, Xu Z, Zhou Q, Li W, Wu Y, Du Y, et al. Fuarthas díolúine PEDV-shonrach i bainbh scoite de bharr riaradh béil ar mhicrea-sféir atá brataithe le PEDV. Vacsaín. 2019; 09(014): 161–6.
27. Gao Q, Zhao S, Qin T, Ceann Y, Yang Q. Éifeachtaí víreas buinneach eipidéim muc ar chealla dendritic de thoradh monaicíte muc agus cealla dendritic intestinal. Tréidliachta Micribhith. 2016; 106:149–58.
28. Bonet MEB, Chaves AS, Mesón O. Gníomhaíocht imdhíonachta agus frith-athlastach a tharlódh de bharr riaradh béil ar chineál probiotach de lactobacillus casei. Athlasadh. 2006; 4(1):31–41.
29. Grangette C, Müller-Alouf H, Geoffroy MC, Goudercourt D, Turner M, Mercenier A. Cosaint i gcoinne tocsain teiteanas tar éis dhá bhaictéar aigéid lachtaigh in-athchuingreach a thabhairt intragastrach: tionchar inmharthanacht brú agus marthanacht in vivo. Vacsaín. 2002; 20(27–28):3304–9.
30. Amhrán DS, Ó JS, Kang BK, Yang JS, Moon HJ, Yoo HS, et al. Éifeachtúlacht bhéil brú víreas eipidéime buinneach maolaithe muc Vero cille DR13. Res Vet Sci. 2007; 82(1):134–40.
31. Makadiya N, Brownlie R, Jan V, Berube N, Allan B, Gerdts V, et al. S1 fearainn an eipidéim muc buinneach víreas spike próitéin mar antigen vacsaín. Víreas J. 2016; 13:1.
32. Chang SH, Bae JL, Kang TJ, Ju K, Chung GH, Lim CW, et al. Cealla: Aithint an réigiúin epitope atá in ann antasubstaintí a neodrú i gcoinne víreas buinneach eipidéim muc. Cill Mol. 2002; 14(2): 295–9.
33. Sumi T, Fukushima A, Fukuda K, Kumagai N, Nishida T, Yagita H, et al. Ranníocaíochtaí difreálach B7-1 agus B7-2 le forbairt toinníteas ailléirgeach turgnamhach murine. Immunol Lett. 2007; 108(1):62–7.
34. Xue M, Zhao J, Ying L, Fu F, Li L, Ma Y, et al. Cuireann IL-22 cosc ar ionfhabhtú coróinvíreas eintreach muc agus rótaivíris trí chonair chomharthaíochta STAT3 a ghníomhachtú. Antivir Res. 2017; 142:68-75.