Ag Díriú ar Ard-Ailse Phróstatach le Glacadóir Antaigin Chimeric STEAP1 T Cill agus IL Meall-áitiúil-12 Imdhíonteiripe
Sep 18, 2023
Is antigen dromchla cille é sé antaigin epithelial transmembrane den próstatach 1 (STEAP1) chun díriú go teiripeach ar ailse phróstataigh. Anseo, tuairiscímid léiriú leathan STEAP1 i gcoibhneas le hantaigin membrane próstatach-shonrach (PSMA) in ailsí próstatach marfacha meiteastatacha agus forbairt teiripe T-chealla gabhdóra antaigin chimeric STEAP (CAR). Léiríonn cealla STEAP1 CAR T imoibríocht i ndlús íseal antaigin, gníomhaíocht fhrithtumóra ar fud samhlacha ailse próstatach meiteastatach, agus sábháilteacht i múnla luiche cnag-isteach STEAP1 daonna. Is meicníocht athfhillteach friotaíochta cóireála é éalú antigen STEAP1 agus tá baint aige le próiseáil agus cur i láthair antaigin meall laghdaithe. Feabhsaítear cur i bhfeidhm teiripe idirleukin logánaithe siadaí i bhfoirm fearainn ceangailteach collaigine (CBD)-IL{-12 próitéine comhleá in éineacht le teiripe cille STEAP1 CAR T. éifeachtúlacht fhrithtumóra trí mhicrea-thimpeallacht siadaí fuar imdhíoneolaíoch ailse phróstataigh a athmhúnlú agus éalú antaiginí STEAP1 a chomhrac trí imdhíonacht óstaigh a bheith rannpháirteach agus scaipeadh epitóp.
Luibh Sínis cistanche plandaí-Antitumor
Metastatic prostate cancer represents an incurable disease responsible for over 33,000 deaths per year in the United States1. Prostate cancer is critically reliant on androgen receptor (AR) signaling and thus the suppression of gonadal androgen production through surgical or chemical castration (androgen deprivation therapy) has been a mainstay of treatment for advanced disease. However, metastatic prostate cancer inevitably develops resistance to androgen deprivation therapy and enters a stage called metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). mCRPC is currently incurable and is considered the end stage of the disease and is associated with a median overall survival of three years2. In the past decade, multiple therapies including an inhibitor of extragonadal androgen synthesis (abiraterone acetate)3, second-generation AR antagonists (enzalutamide)4, radioactive isotope (radium-223)5, and a prostate-specific membrane antigen (PSMA)-specific radioligand therapy (lutetium Lu 177 via votide tetraxetan)6 have been approved for mCRPC. Each of these agents extends survival on average by several months but long-term remissions are rare. Strategies to reprogram the immune system to combat prostate cancer first gained traction with the clinical approval of the dendritic cell vaccine sipuleucel-T for asymptomatic mCRPC7. More recently, several types of immunotherapies including immune checkpoint inhibitors, a DNA cancer vaccine, antibody-drug conjugates (ADC), T cell engaging bispecific antibodies (T-BsAb), and chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapies have been under active clinical investigation8,9. CARs are synthetic receptors that leverage the potency, expansion, and memory of T cells and can be engineered against virtually any tumor-associated cell surface antigen. The adoptive transfer of CAR T cells has rapidly become an established treatment for hematologic malignancies with exceptional response rates leading to six clinical approvals in the last five years10. In contrast, CAR T cell therapies targeting solid tumors have lagged due to additional challenges related to the lack of bona fide tumor-specific antigens, inhospitable tumor microenvironments, and poor trafficking, persistence, and expansion of CAR T cells11. Despite the challenges observed in driving effective immune responses toward solid tumors, recent early-phase clinical trials investigating CAR T cell therapies targeting PSMA in mCRPC have reported safety and evidence of significant biochemical and radiographic responses12,13. These preliminary results serve to embolden efforts to develop and optimize new CAR T cell therapies for prostate cancer. While PSMA is the preeminent target for therapeutic and diagnostic development in prostate cancer, recent work indicates that PSMA expression may be quite heterogeneous in mCRPC14. Tumor antigen heterogeneity, especially in the context of single antigen-targeted CAR T cell therapies for solid tumors like prostate cancer, is an important barrier to therapeutic efficacy15. Thus, identifying cell surface antigens with broad and relatively homogeneous expression in prostate cancer is imperative. In addition, very few if any tumor-associated antigens demonstrate tumor-restricted expression—most also exhibit low-level expression in normal tissues that could represent liabilities for CAR T cell therapies due to on-target off-tumor toxicities which can lead to devastating consequences including death16. We previously performed integrated transcriptomic and cell surface proteomic profiling of human prostate adenocarcinoma cell lines and identified six transmembrane epithelial antigens of the prostate 1 (STEAP1) as one of the most highly enriched cell surface antigens17. STEAP1 was first described over two decades ago18 and was recognized as being highly expressed in prostate cancer. STEAP1 is strongly expressed in >80% de mCRPC le baint cnámh nó nód limfe19, 62% de sarcoma Ewing20, agus cineálacha éagsúla ailse eile21. Baineann STEAP1 leis an teaghlach STEAP de Metallo reductases ar féidir leo homatrimers nó heitriméirí a fhoirmiú le próitéiní STEAP eile22. Tá ról feidhmiúil seanbhunaithe ag STEAP1 maidir le iomadú cille ailse, ionradh, agus trasdul epithelial-go-mesenchymal a chur chun cinn-26.
Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor
Ina theannta sin, léiríonn STEAP1 léiriú teoranta i ngnáthfhíocháin27, rud a fhágann gur sprioc an-láidir é do theiripe ailse. Forbraíodh gníomhairí imdhíon-teiripeacha iolracha chun díriú ar STEAP1 ach níl aon cheann ceadaithe go cliniciúil. Fuarthas amach go raibh próifíl sábháilteachta inghlactha ag an ADC vandor tuzumab ved otin (DSTP3086S) ina bhfuil antashubstaint daonnaithe frith-STEAP1 IgG1 nasctha le monomethyl auristatin E i dtriail chliniciúil chéim I i mCRPC ach níor breathnaíodh mórán freagairtí siadaí oibiachtúla28. Tá measúnú á dhéanamh faoi láthair ar T-BsAb a ionchorpraíonn dhá fhearann ceangailteach blúirí-antaiginí (Fab) frith-STEAP1, blúire athróg slabhra aonair frith-CD3 (scFv), agus blúire fearann criostalaithe (Fc) a ndearnadh innealtóireacht ar easpa feidhme éifeachtóra ar a dtugtar AMG 509. i dtriail chliniciúil chéim I (NCT04221542) i mCRPC29. Tuairiscíodh le déanaí freisin go léiríonn T-BsAb défhiúsacha défhiúsacha neamhshiméadracha ar a dtugtar BC261 gníomhaíocht fhrith-tumóra chumhachtach thar mhúnlaí réamhchliniciúla iolracha ailse phróstataigh agus sarcoma Ewing30. Ina theannta sin, léiríodh go gcuirtear bac ar fhás sarcoma Ewing áitiúil agus meiteastatach i múnla xenograft réamhchliniciúil tar éis aistriú uchtaithe cealla T transgenic31, ó receptor cealla T (TCR) aicme I-srianta antaigin leukocyte daonna (HLA) atá sainiúil do pheptíd STEAP1. Sa staidéar seo, déanaimid anailís chomparáideach ar léiriú coibhneasta STEAP1 agus PSMA i mCRPC marfach chun imscrúdú a dhéanamh ar an bhfóntas a bhaineann le díriú ar STEAP1 i ré reatha na teiripeoirí PSMA. Déanaimid CARanna STEAP1 den dara glúin a innealtóireacht agus a scagadh le haghaidh gníomhachtú T-chealla a bhaineann go sonrach le hantaigin agus le haghaidh cítealú spriocchealla chun príomhiarrthóir a thabhairt do thréithriú breise. Cinnimid sainiúlacht fheidhmiúil epitope cealla STEAP1 CAR T agus déanaimid próifíl ar leathnú agus imdhíon-fheinitíopa táirgí cille STEAP1 CAR T ó dheontóirí iolracha. Bunaímid ansin an chumhacht agus an réamhshábháilteacht a bhaineann le teiripe cille STEAP1 CAR T i múnlaí réamhchliniciúla ábhartha ailse próstatach ach breathnaímid ar an gcaillteanas athfhillteach de léiriú antaigin STEAP1 mar mheicníocht friotaíochta cóireála. Chun an tsaincheist seo a shárú, déanaimid measúnú ar riaradh comhchéimneach CBD-IL-12 a athmhúnlaítear micrithimpeallacht siadaí imdhíon-athbhrúite d’ailse phróstataigh agus a fhostaíonn imdhíonacht inghineach chun freagraí frith-tumóra a leathnú. I dteannta a chéile, soláthraíonn na staidéir seo réasúnaíocht láidir maidir le haistriú cliniciúil ar theiripe cealla STEAP1 CAR T chuig fir le mCRPC agus treoraíonn siad straitéisí chun meicníochtaí féideartha frithsheasmhachta teiripeacha a shárú.
Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor
Torthaí
Cuirtear STEAP1 in iúl go ginearálta i bhfíocháin mCRPC cóireála-teasfhulangacha
We first set out to determine the pattern and extent of STEAP1 expression relative to PSMA in advanced metastatic prostate cancer. We performed immunohistochemical (IHC) staining on a duplicate set of tissue microarrays consisting of 121 metastatic tumors (each with up to three cores represented) collected from 44 men with lethal mCRPC patients collected by rapid autopsy between the years 2010 and 2017 through the University of Washington Tumor Acquisition Necropsy Program32 (Fig. 1a). Plasma membrane staining for STEAP1 and PSMA in each tissue was scored by a research pathologist and semiquantitative H-scores were determined based on the staining intensity (Supple mentary Fig. 1a) multiplied by the percentage of cancer cells staining at each intensity (Supplementary Fig. 1b). By implementing a minimal staining threshold with an H-score cut-off of 30, we found that 87.7% of evaluable matched mCRPC tissues (100 of 114) demonstrated staining for STEAP1 compared to only 60.5% (69 of 114) for PSMA (Fig. 1b). In addition, 28.1% of mCRPC tissues (32 of 114) showed STEAP1 but not PSMA staining (Fig. 1b, c) whereas only 0.9% (one of 114) exhibited PSMA but not STEAP1 staining. Based on these results, we used a linear mixed statistical model to determine that the odds of non-zero (H-score >Bhí an smálú {{0}}) 22-fillte (95% CI 6-173) níos airde do STEAP1 ná do PSMA agus bhí na corrlaigh maidir le H-scór Níos mó ná nó cothrom le 3{{ Tá 27}} 84-huaire (95% CI 30-317) níos airde do STEAP1 ná do PSMA. Bhí meánscór H STEAP1 i gcnámh (193; 95% CI 171 go 215) i bhfad níos airde ná i meatastas nód limfe (difríocht −48; 95% CI −21 go −76; p < 0.001) agus i bhfad níos airde ná i meatastas visceral (difríocht −59; 95% CI -42 go -77; p < 0.001). Ní raibh aon difríocht shuntasach idir an meánscór STEAP1 H-i metastasis nód lymph i gcomparáid le metastases visceral (difríocht 11; 95% CI −16 go 39; p=0.4) (Fíor Forlíontach 1c). Thugamar faoi deara freisin roinnt cásanna ina raibh léiriú ilchineálach PSMA laistigh de chroíleacáin (Fíor 1d) atá ag teacht le tuairisc le déanaí ar ilchineálacht PSMA intratumoral i mbithóipí mCRPC14. Anailís ar leibhéal an othair ag baint úsáide as meántairsí scór H de Níos mó ná nó cothrom le 30 agus léirigh tástáil McNemar go raibh siadaí le léiriú STEAP1 ag 95% d’othair inmheasúnaithe (42 de 44) agus bhí 68% (30 de 44) dearfach do PSMA. (Fíor Forlíontach 1d). Chun staidéar a dhéanamh ar phatrúin ilchineálachta idir-othair agus laistigh d’othair a bhaineann le léiriú STEAP1 agus PSMA, d’úsáideamar scóir H STEAP1 agus PSMA chun scóir éagsúlachta hipeargeiméadracha, Simpson, agus na Sionainne a mheas. Thugamar faoi deara dhá phatrún de léiriú STEAP1 (Fíor 1e) le 68% (30/44) d’othair a léirigh léiriú STEAP1 ar fud na suíomhanna metastatacha go léir (ard STEAP1) agus othair 32% (14/44) ag taispeáint láithreáin mheiteastáiteacha le agus gan léiriú STEAP1. (STEAP1 ilchineálach). Níor aithníodh aon othar ina raibh easpa léirithe STEAP1 ag gach fíochán meiteastach. Léirigh anailís den chineál céanna maidir le léiriú PSMA sa chohórt céanna 45% (20/44) othar le léiriú ard PSMA, 32% (14/44) le léiriú ilchineálach PSMA, agus 23% (10/44) gan aon léiriú PSMA. Bunaithe ar fho-aicmiú móilíneach fíocháin mCRPC ag baint úsáide as AR agus an slonn marcóir neuroendocrine synaptophysin (SYP) arna measúnú ag IHC, bhí ailse próstatach AR-dearfach (AR +/SYP- nó AR+/SYP+) ag formhór na n-othar a raibh léiriú ard nó ilchineálach STEAP1 agus PSMA acu agus iad siúd gan aon léiriú PSMA raibh ailse próstatach AR-null (AR-/SYP+ nó AR-/SYP-). D'aithin muid comhghaol dearfach idir léiriú STEAP1 agus AR (p < 0.001) ag múnla measctha líneach feistithe le héifeacht randamach i gcásanna a léirítear ar an microarray fíocháin (Fíor Forlíontach 2a, b) a rabhthas ag súil leis ós rud é gur androgen é STEAP1. -géine rialaithe33,34. I gcodarsnacht leis sin, léiríodh treocht dhiúltach idir léiriú STEAP1 agus SYP (Fíor Forlíontach 2c). Tugann na torthaí seo le fios go bhféadfaí, cosúil le PSMA35, léiriú STEAP1 a chailleadh le trasdhifreáil neuroendocrine ailse phróstataigh.
Fig. 1 | Comparative analysis of STEAP1 and PSMA in lethal, metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). a Characteristics of the mCRPC tissues represented on University of Washington Tissue Acquisition Necropsy Tissue Microarray 92 (UW TAN TMA92). b Contingency table showing the frequency of mCRPC tissues with STEAP1 or PSMA IHC staining above or below an H-score threshold of 30. Micrographs of select mCRPC tissues after STEAP1 and PSMA IHC staining to highlight the (c) absence of PSMA but the presence of STEAP1 expression and (d) intratumoral heterogeneity of PSMA expression but not STEAP1. Scale bars = 50 µm. For panels (c, d) n = 332 mCRPC cores were immunostained for STEAP1 and PSMA. e Dot and box plot showing the distribution of STEAP1 (top) and PSMA (bottom) H-scores in 44 patients from the UW TAN TMA92 cohort. Each dot represents a tumor specimen/core (n = 319 cores for PSMA and 333 cores for STEAP1) and the color indicates the molecular subtype: AR+/SYP+ (red), AR+/SYP− (green), AR−/SYP+ (yellow) and AR−/SYP− (purple). Gray rectangles show interquartile ranges spanning the 25th to the 75th percentiles of PSMA H-scores from each patient. Bar plots (on the right) summarize the frequencies of patients classified based on STEAP1 and PSMA expression as no expression (all cores with H-score ≤30, light grey), heterogeneous expression (at least one core with H-score ≤30 and H-score >30, mid grey) and high expression (all cores with H-scores >30, liath dorcha). Cuirtear sonraí foinseacha ar fáil sa chomhad Foinse Sonraí.
Forbairmoladh STEAP1 CAR cumhachtach, sainiúil don antigen
I bhfianaise léiriú forleathan STEAP1 i mCRPC ag céim dhéanach agus a ról feidhmiúil tuairiscithe i ndul chun cinn ailse27,36,37, thosaigh muid ag déanamh innealtóireacht ar STEAP lentiviral1-CAR dara glúin ar leith. D’úsáideamar an pCCL-c-MNDU3-X cnámh droma lentiviral38 a úsáideadh go forleathan le haghaidh géinteiripe gascheall hematopoietic39 agus tá sé léirithe go bhfuil léiriú CAR i gcealla T faoi thiomáint ag an tionscnóir inmheánach MNDU3 níos airde ná mar a baineadh amach le tionscnóir EFS40. Tugadh fabhar d’fhearann comhspreagthach 4-1BB mar gheall ar an mbaint atá aige le foirmiú cuimhne T chealla agus marthanachta fada41 agus tugadh isteach fearann trasmembrane CD28 mar go bhfuil sé léirithe go laghdódh sé seo an tairseach antaigin don dara glúin 4-1BB Gníomhachtú cille CAR T42. Ionchorpraíomar an scFv lándaonnaithe a dhíorthaítear ó vandor tuzumab vedotin, ADC a dhíríonn ar STEAP1 ar cuireadh deireadh lena fhorbairt tar éis triail chliniciúil chéim I28. Is leagan daonnaithe é an scFv seo den antashubstaint mhonaclónach murine (mAb 120.545) a d’fhorbair Agensys, Inc. ar dtús a léiríonn cleamhnas 1 nM i dtástálacha ceangailteacha cille43. Chun gníomhaíocht CAR a d’fhéadfadh a bheith ann a choigeartú, chuireamar trí faid inse/spásálaí dhifriúla i bhfeidhm lena n-áirítear gearr (inse IgG4), meánach (inse IgG4-CH3), agus fada (IgG4 hinge-CH2- CH3). Rinneadh innealtóireacht ar an spásálaí fada le 4/2- sócháin NQ44 a ndearnadh cur síos orthu roimhe seo44 san fhearann CH2 chun ceangal receptor Fc-gáma agus bás cille spreagtha gníomhachtaithe a chosc a tharlaíonn le haistriú uchtála cealla fada spacer CAR T isteach i lucha imdhíon-easnaimh. Clónáladh na trí CAR is iarrthóirí isteach sa veicteoir lentiviral (Fíor 2a) a chomh-léirítear freisin gabhdóir teasctha fachtóir fáis eipideirm (EGFRt) mar mharcáil trasduchtúcháin. Gineadh agus úsáideadh lenivíris chun cealla daonna CD4 agus CD8 T a aistriú a shaibhrítear ó chealla mona-núicléacha fola forimeallacha deontóra daonna (PBMCanna) a bailíodh ó pheresis. Leathnaíodh cealla CD4 agus CD8 CAR T imdhíonfheinitíopaithe (Fíor Fhorlíontach Fíor. 3a) agus athdhéanta iad i dtáirgí cille de chomhdhéanamh sainithe le gnáthchóimheas CD4/CD8 chun a ngníomhaíochtaí feidhmiúla a mheas. Chun rialú a dhéanamh le haghaidh slonn STEAP1 ar bhealach isogenic, dhíríomar ar an líne chill ailse próstatach daonna 22Rv1 a thaispeánann slonn dúchais STEAP1 agus a rinne STEAP1 knockout (ko) ag eagarthóireacht genome CRISPR/Cas9. Ghineamar líne tarrthála STEAP1 ansin ón 22Rv1 STEAP1 ko trí aistriú le STEAP1 a chuireann lentivirus in iúl (Fíor 2b). Baineadh úsáid as na línte seo ansin chun na trí chealla gearra, meánacha agus fada spacer STEAP1 CAR T a scagadh i dtástálacha comhchultúrtha le léamh amach ar scaoileadh interferon-gáma (IFN-) mar tháscaire ar ghníomhachtú cille T. Níor léirigh ach na cealla fada spacer STEAP1 CAR T (dá ngairtear cealla STEAP1-BBζ CAR T anseo feasta) an patrún sainiúil antaigin réamh-mheasta d'eisiúint IFN, agus níor léirigh na cealla gearra agus meánacha spásálaí STEAP1 CAR T (Fíor 2c). , Fíor Fhorlíontach 3b, c). Thairis sin, léirigh cealla STEAP BBζ CAR T cítealú substaintiúil dáileog-spleách de chealla 22Rv1 i gcomparáid le cealla T neamh-aistrithe (Fíor 2d) agus léirigh siad coigilteas coibhneasta de chealla ko 22Rv1 STEAP1 (Fíor 2e). Rinneadh staidéir chomhchosúla ansin i líne cille ailse próstatach daonna DU145 nach bhfuil in iúl ó dhúchas STEAP1 ach a innealtóireacht chun STEAP1 (DU145 STEAP1) a chur in iúl trí aistriú lentiviral (Fíor Forlíontach 4a). Sa socrú seo, níor breathnaíodh gníomhachtú cille STEAP1-BBζ CAR T ach i gcomhchultúir le cealla DU145 STEAP1 agus ní i gcealla DU145 na dtuismitheoirí (Fíor Forlíontach 4b). Ní raibh meas ar ghníomhaíocht chitolytic ach le cealla STEAP1-BBζ CAR T agus ní le cealla T neamh-aistrithe i gcomhchultúir le cealla DU145 STEAP1 (Fíor Forlíontach 4c). Rinneamar anailís ina dhiaidh sin ar phainéal níos mó de línte cille ailse próstatach daonna chun a léiriú dúchais STEAP1 a thréithriú trí anailís imdhíonbhloic. Léirigh na línte cille le slonn/gníomhaíocht AR aithnid (LNCaP, 22Rv1, VCaP, agus LNCaP95) leibhéil éagsúla slonn STEAP1 agus níor léir go raibh na línte cille AR-null (PC3, DU145, MSKCC EF1, agus NCI-H660) in iúl leibhéil inbhraite STEAP1 (Fíor 2f). Leanamar ar aghaidh le comhchultúr STEAP1-BBζ CAR T a dhéanamh leis na línte seo chun a ngníomhachtúchán sainiúil antaiginí a bhailíochtú tuilleadh bunaithe ar scaoileadh IFN (Fíor 2g). Mar sin féin, thugamar faoi deara toradh neamhréireach sa mhéid is go raibh an líne PC3, nár léirigh aon slonn dealraitheach próitéin STEAP1 (Fíor 2f), tar éis gníomhachtú substaintiúil cealla STEAP1-BBζ CAR T. Moladh sa litríocht roimhe seo go gcuirtear STEAP1 in iúl i gcilllíne PC3 ag leibhéil ísle45. Go deimhin, léirigh nochtadh immunoblot fada banna a thabharfadh le tuiscint go bhfuil léiriú an-íseal ar STEAP1 (Fíor 2h). Chun a dhearbhú an raibh gníomhachtú cille STEAP1-BBζ CAR T mar gheall ar an slonn beag STEAP1 seo i gcealla PC3, ghineamar trí fholíne PC3 STEAP1 ko (Fíor 2h) agus rinneamar comhchultúr arís le STEAP{{133} } cealla BBζ CAR T. Mar thoradh ar STEAP1 ko sa líne PC3, aisghaireadh gníomhachtú cille STEAP1-BBζ CAR T (Fíor 2i), ag déanamh bailíochtú breise ar shainiúlacht agus ag soláthar fianaise ar íogaireacht chealla STEAP1-BBζ CAR T go híseal. coinníollacha dlús antigen.
Easpa tras-imoibríochta STEAP1-BBζ CAR le luch Steap1 agus daonna STEAP1B
forlíonadh cistanche sochair-díolúine a mhéadú
Ag teacht le sainiúlacht frith-dhaonna vandor tuzumab vedotin, níor léirigh cealla STEAP1-BBζ CAR T tras-imoibríocht le luch Steap1 (Fíor Forlíontach 4a, d, e). Mar sin féin, d’úsáideamar é seo mar dheis chun na trí fhearann eischeallacha STEAP1 daonna (ECDs) a athdhéanamh go haonarach ar an luch Steap1 (Fíor Forlíontach 4f) chun a fháil amach cé na ECDanna atá ríthábhachtach d’aithint epitope ag cealla STEAP1-BBζ CAR T. Rinneadh turgnaimh chomhchultúr le cealla STEAP1-BBζ CAR T agus cealla DU145 a ndearnadh innealtóireacht orthu chun luchóg a chur in iúl Step1 le ECDanna daonna a chur in ionad ECDanna luiche ar leith. Fuaireamar amach go raibh baint ag STEAP1 ECD2 daonna ach ní ECD1 nó ECD3 le gníomhachtú cille STEAP1-BBζ CAR T (Fíor Forlíontach 4g). Is díol spéise é gur léirigh an STEAP1 daonna agus an luch Steap1 ECD2 homaleolaíocht 93.9% (31/33 aimínaigéid) (Fíor Forlíontach 4h), rud a thugann le fios go bhfuil C198 agus/nó I209 de STEAP1 daonna ríthábhachtach d'aitheantas táirgiúil ag STEAP1-BBζ Cealla CAR T. Tá sé léirithe go n-idirghníomhaíonn Q198 leis an Fab de 120.545 mar chuid de hotspot idirghníomhaíochta bunaithe ar struchtúr le déanaí a réitíodh le micreascóip leictreoin chrióigineach22. As an teaghlach próitéiní STEAP daonna, tá an homology is mó go STEAP145 ag STEAP1B. Aithníodh trí thras-scríbhinn STEAP1B, a léiríonn go léir caomhnú iomlán ar sheicheamh aimínaigéad an duine STEAP1 ECD2 (Fíor Forlíontach 5a). Thuar an t-algartam tuartha topology membrane comhdhearcach TOPCONS46 go mbeadh seichimh fearainn ECD2 eischeallach sna trí isfhoirmeacha próitéine STEAP1B (Fíor Fhorlíontach 5b) cé go raibh scóir íseal-iontaofachta do STEAP1B i gcomparáid le hSTEAP1 mar gheall ar easpa comhaontaithe idir na cúig mhúnla tuar topology (OCTOPUS, Philius, PolyPhobius, SCAMPI, agus SPOCTOPUS) a úsáideann TOPCONS (Fíor Forlíontach 5c). Mhol anailís roimh ré ag baint úsáide as uirlis tuar topology múnla-bhunaithe eile i bhfolach Markov Markov TMHMM47 freisin go bhféadfadh an seicheamh seo a bheith infhéitheach seachas eischeallach in isoforms próitéin STEAP1B 1 agus 245. Mar sin féin, níor cinneadh go fóill struchtúr criostail STEAP1B chun bunús a thabhairt go díreach. na tuar seo. Chun meastóireacht fheidhmiúil a dhéanamh an bhféadfadh cealla STEAP1- BBζ CAR T a bheith frithghníomhach in aghaidh STEAP1B, rinneamar comhchultúr ag baint úsáide as línte DU145 a ndearnadh innealtóireacht orthu chun gach ceann de na trí isfhoirmeacha de STEAP1B a chur in iúl. Níor shainaithin muid fianaise ar ghníomhachtú cille STEAP1-BBζ CAR T (Fíor Fhorlíontach 5d), rud a thugann le tuiscint go mb’fhéidir nach mbeadh an epitope STEAP1 aitheanta ag cealla STEAP1-BBζ CAR T á chur i láthair mar chuid d’ectodomain le STEAP1B ainneoin hoimeolaíocht seichimh dealraitheach.
Fíor 2|Scagadh 4-1ghabhdóirí antaiginí chimeric (CARanna) den dara glúin chun ceannródaíocht a aithint do theiripe cille STEAP1 CAR T. Scéimreach de thógáil agus éagsúlacht lentiviral STEAP1 CAR bunaithe ar spásairí gearra, meánacha agus fada. Athrá teirminéil fhada LTR, réigiún víreas leoicéime MNDU3 Moloney murine U3, blúire athróg aon-slabhra scFv, slabhra solais athraitheach VL, slabhra trom inathraithe VH, transmembrane tm, receptor fachtóir fáis eipideirm teasctha EGFRt, 4/2 NQ {{1{{28) }}}} sócháin fearainn CH2 chun ceangal le gabhdóirí Fc-gáma a chosc. b Immunoblots de STEAP1 i gcealla tuismitheora 22Rv1, cealla STEAP1 knockout (ko), agus cealla ko STEAP1 le tarrtháil STEAP1. c Tagann IFN- measúnacht imdhíonta-nasctha le heinsím (ELISA) as comhchultúr cealla T neamh-aistrithe nó cealla STEAP1-BBζ CAR T le gach ceann de na folínte 22Rv1 ag cóimheas 1:1 ag 24 h (p < 0.001). Inmharthanacht choibhneasta cille (d) 22Rv1 agus (e) 22Rv1 STEAP1 ko sprice cealla le himeacht ama tomhaiste ag íomháú cille beo fhluaraiseachta ar chomhshaothrú le (ar chlé) cealla STEAP1-BBζ CAR T (p < 0.001) nó ( ar dheis) cealla T neamh-aistrithe ag cóimheasa cille in-éifeachtaí-go-sprioc (E:T). f Immunoblots a léiríonn léiriú STEAP1 i línte cille ailse próstatach daonna receptor androgen (AR) ach ní línte cille ailse próstatach AR-diúltacha. g IFN- cainníochtú ag ELISA ó chomhshaothraithe de chealla T neamh-aistrithe nó de chealla STEAP1- BBζ CAR T le gach ceann de na línte cille ailse próstatach daonna i (f) ag cóimheas 1:1 ag 24 h. h Immunoblots do STEAP1 i bhfolínte 22Rv1, PC3, agus PC3 STEAP1. I IFN- cainníochtú ag ELISA ó chomhchultúr cealla T neamh-aistrithe nó cealla STEAP1- BBζ CAR T le gach líne cille in (h) ag cóimheas 1:1 ag 24 h (p < 0.001). Do phainéil (c-e, g, agus i) n=4 macasamhla bitheolaíocha de réir an choinníll agus is ionann barraí earráide agus an meán le SEM. Taispeánann painéal (b, f, h) torthaí atá ionadaíoch do n=3 macasamhla bitheolaíocha. Baineadh úsáid as GAPDH mar rialú luchtaithe próitéine. I gcás painéil (c) agus (i), baineadh úsáid as ANOVA dhá bhealach le tástálacha comparáide iolracha Sidak. I gcás painéil (d) agus (e), baineadh úsáid as ANOVA dhá bhealach le tástáil chomparáidí iolracha Tukey. Cuirtear sonraí foinseacha ar fáil sa chomhad Foinse Sonraí.
Tréithriú táirgí cealla STEAP1-BBζ CAR T thar sraith deontóirí
An chéad uair eile rinneamar próifíliú ar leathnú, éifeachtúlacht aistrithe, agus imdhíon-fheinitíopa táirgí cille STEAP1- BBζ CAR T ag baint úsáide as trí thacar neamhspleách de chealla monanúicléacha fola forimeallacha (PBMCanna) a bailíodh ó dheontóirí sláintiúla. Go ginearálta thugamar faoi deara 20- go 40-leathnú STEAP1-BBζ CAR T laistigh de 11 lá saothraithe (Fíor Forlíontach 6a). Bhí céatadán na gcealla EGFRt+ CD8 T sa raon ó 24.3 go 54.2% agus bhí an céatadán de chealla EGFRt+ CD4 T níos airde agus sa raon ó 60.1 go 74.9% inár dtáirgí ceall STEAP1-BBζ CAR T (Fíor Forlíontach 6b). Scrúdaíomar léiriú na marcóirí ídithe cille T PD-1 agus LAG-3 sna fo-thacair cille neamh-aistrithe agus STEAP1- BBζ CAR T agus níor thugamar faoi deara aon mhéadú suntasach ar shloinneadh (Fíor Forlíontach 6c ). Mhol an toradh seo comharthaíocht tonach íseal nó neamhláithreachta ón STEAP1-BBζ CAR, rud a bhí spreagúil mar go bhféadfadh drochthionchar a bheith ag comharthaíocht CAR T ar fheidhm éifeachtóra cille CAR T48. Tá baint ag feinitíopaí T-chealla cuimhne gas (Tscm) agus lárchille cuimhne (TCM) le héifeachtúlacht theiripeach teiripe cille CAR T mar go gcuireann siad iomadú agus marthanacht leanúnach in vivo49–51 chun cinn. Léirigh imdhíon-fheinitíopáil ar fho-thacair cealla neamh-aistrithe agus STEAP1-BBζ CAR T minicíochtaí níos airde de chealla Tscm i gcomparáid leis na fo-thacairí cille T i PBMCanna deontóra ónar díorthaíodh na táirgí cille (Fíor Forlíontach 6d). Is dócha go bhfuil an éifeacht seo ann mar gheall ar IL-7 agus/nó IL-15 a chur leis na meáin leathnaithe cille T mar tá sé léirithe go gcaomhnaíonn agus go bhfeabhsaíonn na cítocíní seo difreáil Tscm51,52. Léirigh ár n-anailís freisin saibhriú i ndaonraí Tcm go háirithe i gcealla CD8 STEAP{1-BBζ CAR T (Fíor Forlíontach 6e).
STEAP{0}}Léiríonn cealla BBζ CAR T éifeachtaí suntasacha antitumor i múnlaí ailse próstatach scaipthe le slonn dúchais STEAP1 bunaithe i lucha imdhíon-easpa
cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta
Mar scáileán tosaigh do ghníomhaíocht antitumor in vivo, bhunaíomar siadaí xenograft subcutaneous 22Rv1 i lucha gáma scid scid fireann (NSG). Nuair a d’fhás siadaí go thart ar 100 mm3, cuireadh cóireáil ar lucha le hinstealladh iontumóra amháin de 5 × 106 cealla T neamh-aistrithe nó cealla STEAP1-BBζ CAR T. Bhí baint ag cóireáil intratumoral le cealla STEAP1- BBζ CAR T le cosc suntasach ar fhás siadaí a bhí suntasach go staitistiúil faoin lá cóireála 18 (Fíor 3a). Rinneadh lucha a íobairt ar an 25 lá agus léirigh siadaí iarmharacha ó lucha a cóireáladh le STEAP1-Tá cealla BBζ CAR T réimsí móra de bhruscar necrotic agus insíothlú réigiúin siadaí inmharthana le CD3+ STEAP1-BBζ Cealla CAR T (Fíor Forlíontach Fíor 7a). Caomhnaíodh léiriú STEAP1 sna tumaí trasna grúpaí cóireála (Fíor Forlíontach 7b). D'aistrigh muid cealla 22Rv1 le lentivirus chun slonn firefly luciferase (Luc) a fhorfheidhmiú agus 106 22Rv1-instealladh cealla fLuc isteach i veins eireaball lucha NSG fireann. Léiríodh coilíniú meiteastatach trí íomháú bithluminescence beo (BLI) tar éis dhá sheachtain, agus ag an bpointe sin déileáladh le lucha le hinstealladh infhéitheach amháin de 5 × 106 cealla T neamh-aistrithe nó cealla STEAP1-BBζ CAR T (Fíor 3b) . Nocht Sraith BLI dul chun cinn gasta galair i lucha cóireáilte le cealla T neamh-aistrithe agus léirigh iad siúd a fuair cealla STEAP BBζ CAR T moill shuntasach ar dhul chun cinn siadaí (Fíor 3c, d) agus síneadh marthanais (97 lá in aghaidh 31 lá , p=0.0018 de réir tástála log-ranga, Fíor 3e). Ní raibh aon difríocht shuntasach i meáchain luiche idir airm cóireála (Fíor Forlíontach 7c). Léirigh staining IHC tumaí ag deireadh an staidéir laghdú suntasach ar léiriú STEAP1 (Fíor Forlíontach 7d), rud a léiríonn go raibh éalú antigen ina mheicníocht friotaíochta. Mar sin féin, ní dócha go raibh sé seo mar thoradh ar aistriú chuig staid athraitheach ailse phróstataigh toisc nach raibh meas againn ar athruithe moirfeolaíocha, cailliúint abairt AR agus PSMA53, nó gnóthachan ar léiriú SYP (Fíor Forlíontach 7d). Chun imscrúdú a dhéanamh ar thionchar domhanda caillteanas STEAP1 in ailse próstatach, rinneamar próifíliú transcriptome ar an gcineál fiáin isogenic 22Rv1 (wt), 22Rv1 STEAP1 ko, agus 22Rv1 STEAP1 ko + línte cille tarrthála a d'ullmhaigh muid roimhe seo (Fíor 2b). Sainaithníodh anailís ar léiriú géine difreálach ag déanamh comparáide idir cealla 22Rv1 STEAP1 ko le cealla 22Rv1 wt ~1700 géinte íosrialaithe go suntasach (FDR Níos lú ná nó cothrom le 0.05, athrú fillte<2) with STEAP1 knockout. Rescue of STEAP1 expression in the 22Rv1 STEAP1 ko cells revealed that ~600 genes were significantly upregulated (FDR ≤ 0.05, fold-change>2) trí bhreiseán STEAP1 (Fig. Forlíontach 8a). D’ainmnigh Anailís Saibhrithe Tacair Géin (GSEA) go leor bealaí bitheolaíocha a d’fhéadfaí a dhírialú trí shloinneadh STEAP1 a mhodhnú. Bhí dul chun cinn timthriall cille agus próisis mheitibileach iolracha le feiceáil ina measc seo, lena n-áirítear timthriall Kreb agus glicealú a shaibhríodh go diúltach trí bhualadh amach STEAP1 agus a tharrtháil nuair a cuireadh STEAP1 leis (Fíor Forlíontach 8b). Chuireamar an 31-síniú bailíochtaithe um dhul chun cinn timthriall géine cille (CCP)54 i bhfeidhm ar ár sonraí a léirigh íosrialú suntasach ar shíniú an chontrapháirtí lárnaigh a bhaineann le leagan amach STEAP1 le scór −0.8 a mhéadaigh go suntasach go {{ 14}}.5 le tarrtháil slonn STEAP1 (Fíor Forlíontach 8c). Tá na sonraí seo ag teacht le foilseachán roimhe seo a thugann le fios go gcuireann laghdú ar STEAP1 i líne chill ailse phróstatach LNCaP isteach ar inmharthanacht agus ar iomadú cille agus apoptosis á n-ionsú37. Thugamar faoi deara freisin go raibh próiseáil agus cur i láthair antaigin ar cheann de na cosáin KEGG is suntasaí a dí-saibhríodh le baint amach STEAP1 (Fíor Forlíontach 8b). Thugamar faoi deara íosrialú suntasach géinte lena n-áirítear PSME1 (fo-aonad gníomhachtaithe proteasome 1) atá ina bhall den choimpléasc imdhíonphróteasóim, TAP1 (iompróir 1, ball fotheaghlach caiséad ceangailteach ATP) atá ríthábhachtach don choimpléasc histo-chomhoiriúnachta mór (MHC) aicme I peiptíde- coimpléasc luchtaithe, agus roinnt géinte MHC aicme I agus II ar nós MR1 (mór-choimpléasc histocompatibility, a bhaineann le haicme I), HLA-DQ-B1, agus HLA-DQB2 (Fíor Forlíontach 8d). Rinneamar imscrúdú breise ar na siadaí a bailíodh ó na samhlacha scaipthe 22Rv1 a cóireáladh le teiripe cealla STEAP BBζ CAR T a léirigh caillteanas antaigin (Fíor 3c, Fíor Fhorlíontach Fig. 7d) trí anailís tras-sgrìobhaidh. Léirigh anailís difreálach ar léiriú géine agus GSEA ina dhiaidh sin a rinne comparáid idir siadaí meiteastatacha 22Rv1 ó lucha a chóireáiltear le teiripe cille STEAP leo siúd ar cóireáilte le cealla T neamh-aistrithe saibhriú diúltach ar bhealaí a bhaineann le MHC, limficítí citotocsaineacha, agus gníomhachtú cille T ( Forlíontach Fíor 9a, b). Chomh maith leis sin rinneamar measúnú sonrach ar léiriú géinte aicme I agus II MHC agus thugamar faoi deara a n-íosrialú marcáilte i siadaí 22Rv1 a ndearnadh cóireáil orthu le teiripe cille STEAP BBζ CAR T (Fíor Forlíontach 9c). Rinneadh an toradh seo a dhearbhú tuilleadh le laghdú suntasach ar staining HLA-A, B, C ag IHC sna siadaí seo (Fíor Forlíontach 9d). Is é an impleacht a d’fhéadfadh a bheith ag na sonraí seo ná go bhféadfadh tuilleadh frithsheasmhachta in aghaidh imdhíonteiripe a bheith mar thoradh ar chóireáil le teiripe cille STEAP CAR T agus cailliúint léirithe antaigin siadaí STEAP1 in ailse phróstataigh trí phróiseáil agus cur i láthair antaigin lagaithe. Chomh maith leis sin rinneamar ionaclú ar lucha fireanna NSG le cealla C4-2B-fLuc trí instealladh féitheacha eireaball. Is folíne de LNCaP55 atá frithsheasmhach do choilleadh é C{{55}B, le cinéitic fáis ag teacht níos fearr le hailse próstatach tipiciúil. Ceithre seachtaine tar éis an insteallta, dheimhnigh BLI coilíniú meatastatach, agus déileáladh le lucha le hinstealladh infhéitheach amháin de 5 × 106 cealla T neamh-aistrithe nó cealla STEAP1-BBζ CAR T (Fíor 3b). Léirigh Sraithuimhir BLI freagra iomlán i ngach lucha a fuair cealla STEAP1-BBζ CAR T laistigh de chúig seachtaine tar éis cóireála (Fíor 3f, g). D'aithníomar treocht de réir meáchain caillteanas méadaithe sa ghrúpa cóireála T-chealla neamh-aistrithe (Fíor Forlíontach 10a) ach ní raibh sé seo suntasach go staitistiúil. Níor léirigh necropsy lucha a ndearnadh cóireáil orthu le cealla STEAP{1-BBζ CAR T aon ghalar macrascópach agus níor nocht BLI ex vivo na n-orgán aon chomhartha (Fíor Forlíontach 10b), rud a thugann le tuiscint gur dócha gur leigheasadh na lucha seo. D'aithníomar marthanacht imeallach cealla STEAP1-BBζ CAR T ag deireadh an turgnaimh bunaithe ar láithreacht splenocytes CD inbhraite EGFRt+ (Fíor 3h).
Fíor 3|Gníomhaíocht in vivo antitumor de STEAP1-Teiripe cille BBζ CAR T i samhlacha ailse phróstataigh le slonn dúchais STEAP1. a Imleabhair siadaí subcutaneous 22Rv1 i lucha NSG (n=4 do ghrúpa cealla T neamh-aistrithe agus n=5 do ghrúpa cealla STEAP1-BBζ CAR T) le himeacht ama tar éis instealladh infhéitheach amháin de 5 × 106 chealla T neamh-aistrithe nó STEAP{{10}}BBζ CAR T ag gnáthchóimheas CD4/CD8. p < 0.0001 ar laethanta 20 agus 25. Seasann barraí don mheán le SEM. b Scéimreach de thurgnaimh dhúshláin siadaí do mhúnlaí scaipthe 22Rv1 (barr) agus C4-2B (bun). Luc firefly luciferase, íomháú bithluminescence BLI. c Íomháú bithluminescence beo sraitheach (BLI) de lucha NSG atá greanta le meatastas 22Rv1-fLuc agus cóireáilte le hinstealladh infhéitheach amháin de 5 × 106 cealla T neamh-aistrithe nó STEAP1-BBζ CAR T ag gnáth-CD4/ Cóimheasa CD8 ar an lá 0. Ciallaíonn Dearg X lucha nach maireann. Taispeántar scála radiance. d Breac a thaispeánann cainníochtú an fhlosc iomláin le himeacht ama ó BLI beo gach luiche in (c). e Cuar marthanais Kaplan-Meier lucha i (c) le tábhacht staitistiúil arna chinneadh ag tástáil log-rang (Mantel-Cox). Le haghaidh painéil (c–e) úsáideadh n=5 lucha in aghaidh an choinníll. f BLI beo sraitheach de lucha NSG greanta le meatastaí C4-2B agus cóireáilte le hinstealladh infhéitheach amháin de 5 × 106 cealla T neamh-aistrithe nó STEAP1-BBζ CAR T ag gnáthchóimheas CD4/CD8 ar an lá 0. Ciallaíonn Dearg X lucha nach maireann. Taispeántar scála radiance. g Breac a thaispeánann cainníochtú an flosc iomláin le himeacht ama ó BLI beo gach lucha in (f). Le haghaidh painéil (f, g) n=4 úsáideadh lucha sa ghrúpa cealla T neamh-aistrithe agus n=5 lucha sa ghrúpa cealla STEAP1-BBζ CAR T. h Cainníochtú cealla CD3+ EGFRt+ STEAP1-BBζ CAR T de réir cíteiméadracht sreafa ó splenocytes lucha atá cóireáilte le cealla STEAP1-BBζ CAR T (n=4) ag an deireadh den turgnamh ar lá 49. Seasann barraí don mheán. Maidir le painéal (a), baineadh úsáid as ANOVA dhá bhealach le tástáil chomparáide iolrach Sidak. Cuirtear sonraí foinseacha ar fáil sa chomhad Foinse Sonraí.
Luch-i-luch STEAP1 Léiríonn staidéir cille CAR T éifeachtúlacht theiripeach frith-tumóra
Gníomhachtú agus gníomhaíocht chitolytic na gceall STEAP1-BBζ CAR T a breathnaíodh i gcomhthéacs dlús antaiginí STEAP1 an-íseal (~1500 móilín/cill) den líne ceall PC3 (Fíor 2g–i, Fíor Fhorlíontach 11a, b ) agus fianaise ar ghníomhaíocht antitumor in vivo i múnla siadaí fLuc PC scaipthe (Fíor Fhorlíontach 11c–e) i láthair imní faoin acmhainneacht le haghaidh tocsaineachtaí seach-meall ar-sprioc. Chun tocsaineacht fhéideartha a mheas i múnla-orgánach inrianaithe, ghineamar luch daonna STEAP1 cnag-isteach (hSTEAP1-KI) inar leagadh an ghéine daonna STEAP1 isteach sa lócas géine Steap1 ar an gcúlra C57Bl/6 ( Fíor 4a). Bunaíodh coilíneacht luch le géinitíopáil a rinne imoibriú slabhra polaiméaráise (PCR) de DNA eireaball (Fíor 4b). HSTEAP homaisigeach agus heitrisigeach1-Níor léirigh lucha KI aon neamhghnáchaíochtaí dealraitheacha feinitíopacha nó atáirgthe i gcomparáid le bruscar de chineál fiáin. Rinneadh suirbhé fíocháin le haghaidh slonn daonna STEAP1 bunaithe ar thrascríobh droim ar ais cainníochtúil PCR (qRT-PCR) ar lucha heitrisigeacha fireann agus baineanna 1-KI (hSTEAP1-KI/ + )) agus nocht sé an slonn coibhneasta is mó sa próstatach, agus an uterus agus an fhaireog adrenal ina dhiaidh sin (Fíor 4c). Nocht tuilleadh anailíse in situ le STEAP1 IHC ar hSTEAP fireann1-KI/ + próstatach agus faireoga adrenal léiriú STEAP1 daonna teoranta do chealla epithelial luminal an phróstataigh (Fíor 4d) agus léiriú sa cortex adrenal (Fíor 4e) . Leagan murinithe den STEAP1 CAR, ar a dtugtar STEAP1-mBBζ CAR, inar coinníodh an spásálaí scFv agus IgG4 hinge-CH2-CH3 ach an fearann trasmembrane CD28, 4-1fearann costimulatory BB , agus cuireadh fearann gníomhachtaithe CD3ζ in ionad a n-orthologs luch a bhí clónáilte isteach i tógáil gammaretroviral (Fig. 4f). Ina theannta sin, cuireadh luch teasctha CD19 (mCD19t) in ionad an marcóir aistrithe EGFRt daonna chun imdhíonacht féideartha a íoslaghdú. Dhearbhaíomar trasdultach éifeachtach ais-víreasach cealla T saibhrithe ó splenocytes luiche (Fíor 4g) agus léirigh muid cumas na gcealla CAR T STEAP mBBζ chun cítealú a dhéanamh ar líne chill ailse próstatach luch RM956 a ndearnadh innealtóireacht air chun STEAP1 daonna a chur in iúl. (RM9- hSTEAP1) trí aistriú lentiviral (Fíor 4h). Deimhníodh éifeachtúlacht in vivo na gcealla luch STEAP1-mBBζ CAR T i múnla siadaí fLuc RM scaipthe i lucha NSG (Fíor Forlíontach 12a). Seachtain amháin tar éis instealladh féith eireaball cealla fLuc RM9-STEAP1-, cuireadh cóireáil ar lucha le 5 × 106 ceall T neamh-aistrithe nó le cealla STEAP luchóige1-mBBζ CAR T trí instealladh féitheacha eireaball . Léirigh lucha a fuair cealla T luiche neamh-aistrithe dul chun cinn galar neamhsheiceáil, ach léirigh na cinn a ndearnadh cóireáil orthu le cealla STEAP1-mBBζ CAR T aischéimniú tapa galair go haonfhoirmeach agus athiompaithe ina dhiaidh sin deich lá ina dhiaidh sin (Fíor Forlíontach 12b, c). Bhain teiripe cille STEAP1-mBBζ CAR T le sochar marthanais suntasach go staitistiúil (22 lá in aghaidh 12 lá, p=0.0039 de réir tástála log-ranga, Fíor Fhorlíontach Fíor 12d). Ba léir meáchain caillteanas sa dá ghrúpa cóireála de réir mar a mhéadaigh an t-ualach siadaí roimh bhás (Fíor Forlíontach 12e, f). Léirigh anailís ar splenocytes luiche a bailíodh ag necropsy marthanacht imeallach cealla STEAP1-mBBζ CAR T nuair a aimsíodh cealla mCD3+ mCD19t+ suas go dtí 24 lá tar éis aistriú uchtaithe (Fíor Forlíontach 12g). Baineadh na scamhóga ó lucha sa dá ghrúpa cóireála agus léirigh STEAP1 IHC cailliúint slonn STEAP1 i meitéisí scamhógacha ó lucha a ndearnadh cóireáil orthu le cealla STEAP T (Fíor Forlíontach 12h). Ina dhiaidh sin, mhéadaíomar línte fLuc clonal RM9-STEAP1- le fáil amach an bhféadfadh an t-éalú antaigin siadaí a breathnaíodh a bheith mar thoradh ar ilchineálacht a bhí ann cheana i slonn STEAP1. Rinneadh an turgnamh arís le múnla siadaí fLuc clonal, scaipthe RM9-STEAP1- i lucha NSG (Fíor Forlíontach 13a). Sa chomhthéacs seo, léirigh lucha a cóireáladh le cealla STEAP1-mBBζ CAR T freagra iomlán pras agus buan (Fíor Forlíontach 13b–d). Leagann na torthaí seo béim ar chumas na gcealla STEAP1-mBBζ CAR T chun ailse phróstatach STEAP a dhíothú agus tugann siad le fios freisin go bhféadfadh go mbeadh gá le straitéisí teiripeacha comhcheangailte chun an fhriotaíocht a shárú i bhfoghrúpaí othar ard-ailse phróstataigh áit a bhfuil ilchineálacht STEAP1 tá slonn i láthair (Fig. 1e).
sochair cistanche d'fhir-neartú córas imdhíonachta
Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil
【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Tá teiripe cille STEAP1 CAR T sábháilte i samhail luch daonnaithe STEAP1
Chun imscrúdú a dhéanamh ar shábháilteacht réamhchliniciúil agus éifeachtúlacht teiripe cille STEAP1-mBBζ CAR T, rinneamar lucha heitrisigeacha fireanna ionaclaithe le RM singéineach, neamhchlónúil9-STEAP{4} }cealla fLuc trí instealladh féitheacha eireaball (Fíor 5a). Tar éis don BLI coilíniú meiteastatach a dhearbhú thart ar sheachtain ina dhiaidh sin, fuair lucha ciorafosfaimíd réamhráite 100 mg/kg trí instealladh ion-peritoneal57. Lá arna mhárach, rinneadh lucha go randamach chuig cóireáil le cealla T luiche neamh-aistrithe 5 × 106 nó cealla luch STEAP1-mBBζ CAR T trí instealladh féitheacha eireaball. Léirigh gach lucha a fuair cealla STEAP lucha 1-mBBζ CAR T laghdú ar ualach siadaí laistigh den chéad seachtain de thionscnamh cóireála bunaithe ar BLI (Fíor 5b, c). Bhí an freagra a breathnaíodh gearr-chónaí ach tháinig méadú measartha ar mharthanas (21 lá in aghaidh 12 lá, p=0.0138 trí thástáil log-ranga, Fíor 5d)—cosúil le torthaí ón RM neamhchlónúil 9-STEAP1-turgnaimh fLuc i lucha NSG (Fíor Forlíontach 12d). Ní raibh aon oll-thocsaineachtaí ná básanna roimh am bainteach go sonrach le teiripe cealla CAR T luch STEAP{1-mBBζ MBBζ CAR T ag an leibhéal dáileoige seo áit ar breathnaíodh fianaise shoiléir ar éifeachtúlacht fhrithtumóra. Bhí baint ag meáchain caillteanas le hualach méadaithe siadaí ach is coiteann don dá arm cóireála (Fíor 5e, f). Chun measúnú breise a dhéanamh ar thocsaineacht fhéideartha teiripe chill STEAP1-mBBζ CAR T, rinneadh turgnamh comhchosúil i gcomhthráth i lucha heitrisigeacha hSTEAP{28}}KI lucha a bhfuil RM9-hSTEAP1 orthu agus gan aon siadaí. Níor léirigh lucha neamh-meall atá cóireáilte le cealla T neamh-aistrithe nó cealla STEAP1- mBBζ CAR T aon difríochtaí maidir le marthanacht (Fíor Forlíontach 14a) nó olltocsaineachtaí lena n-áirítear cailliúint meáchain choirp (Fíor Forlíontach 14b). Toisc go bhfuil an STEAP1-BBζ CAR comhdhéanta de spásaire IgG4 modhnaithe a d’fhéadfadh a bheith imdhíonta, rinneamar measúnú le haghaidh freagairt antasubstainte frith-daonna (MAHA) luiche trí fhuiliú aisfhithiseach a bhailiú ó lucha sa turgnamh seo. Níor aimsíodh aon antasubstaintí frith-dhaonna IgG agus IgM i sera na lucha ag an 8ú lá tar éis cóireála le cealla STEAP1-BBζ CAR T (Fíor Forlíontach 14c).
Rud atá tábhachtach, níor léirigh lucha heitrisigeacha hSTEAP1-KI cóireáilte le cealla STEAP1-mBBζ CAR T aon cur isteach soiléir fíocháin nó insíothlú méadaithe ar chealla T CD3+ sa phróstatach (Fíor Forlíontach 15a, b ) nó an fhaireog adrenal (Fíor Fhorlíontach 15c, d) i gcoibhneas lena gcomhghleacaithe atá cóireáilte le cealla T neamh-aistrithe, rud a thugann le tuiscint nach bhfuil tocsaineachtaí seach-mhealla ar an sprioc ann. Léirigh na scamhóga a bailíodh ag deireadh an turgnaimh slonn daonna STEAP1 i meitéisis scamhógacha RM9-hSTEAP1 le ilchineálacht réigiúnach i lucha a ndearnadh cóireáil orthu le cealla T luch neamh-aistrithe (Fíor 5g). Ar an láimh eile, léirigh siadaí ó lucha a ndearnadh cóireáil orthu le cealla luch STEAP1-mBBζ CAR T arís go raibh easpa slonn daonna STEAP1 (Fig. 5h). Chun meastóireacht a dhéanamh an bhféadfadh tionchar a bheith ag teiripe cille luch STEAP1- mBBζ CAR T agus caillteanas antaigin daonna STEAP1 freisin ar chur i láthair antaigin sna siadaí RM9-hSTEAP1, rinneamar IHC le haghaidh béite murine-2-micreaglobulin (B2m). ) atá ina chomhpháirt lárnach de mhóilíní MHC aicme I. Thugamar faoi deara íosrialú suntasach ar léiriú B2m i siadaí forásacha tar éis cóireála le cealla CAR T STEAP 1- mBBζ luch i gcomparáid le cealla T neamh-aistrithe (Fíor Forlíontach 15e, f), ag teacht lenár dtorthaí sa tsamhail 22Rv1.
Fíor 4|Córas luiche-i-luch a bhunú le múnla luch daonna STEAP1 cnag-isteach (hSTEAP1-KI) agus STEAP1 CAR murinated. Scéimreach a thaispeánann an straitéis um athchur homalógach ag baint úsáide as veicteoir spriocdhírithe chun exons STEAP1 daonna 2–5 a bhualadh isteach sa lócas Steap1 luch ar chúlra C57Bl/6. Sprioc aitheantais FRT Flippass. b Amharcléiriú ar tháirgí PCR ó ghéinitíopáil rinn eireabaill ar lucha fiáine (+/+), heitrisigeach (KI/+), nó homaisigeach (KI/KI) ag baint úsáide as péirí primer atá ceaptha codanna de chineál fiáin nó hSTEAP a mhéadú1-ailéilí KI . Rialú teimpléad NTC null. Íomhá glóthach ionadaíoch ó n=3 turgnaimh atá neamhspleách go bitheolaíoch. c qPCR don slonn daonna STEAP1 normalaithe go slonn 18 S i suirbhé ar fhíocháin ó lucha hSTEAP1-KI/+. n=3 d’orgáin a bhaineann go sonrach le gnéas agus n=6 d’orgáin choitianta. Seasann barraí don mheán le SEM. Micreagraif grianghraif de STEAP1 IHC staining (d) fíocháin próstatach ó (ar chlé) +/+ agus (ar dheis) KI/+ lucha agus (e) gland adrenal ó luch KI/+. Barraí scála=50 µm. Maidir le painéal (d, e) rinneadh imdhíonadh STEAP1 ar n=3 eiseamail atá neamhspleách go bitheolaíoch. f Scéimreach den tógáil CAR STEAP1 atá murinithe siar-víreasach. Víreas leoicéime MuLV murine, luch CD19 teasctha mCD19t. g Cainníochtú éifeachtúlacht trasduchtaithe retroviral de chealla T luiche gníomhachtaithe ó thrí thurgnamh neamhspleácha bunaithe ar mhinicíocht cealla CD 3+ CD19t+ de réir cíteiméadracht sreafa (p {{40}}.0003). h Inmharthanacht choibhneasta cille spriocchealla RM9 nó RM9-hSTEAP1 thar am arna thomhas ag íomháú beo cille fluaraiseachta ar chomhchultúr ag cóimheas 1:1 le luchóg STEAP1-mBBζ cealla CAR T nó cealla T neamh-aistrithe (p < 0.0001). n=4 macasamhla bitheolaíocha de réir an choinníll. Léiríonn barraí earráide an meán le SEM. Maidir le painéal (g), baineadh úsáid as tástáil t dhá earball neamhphéireáilte le ceartúchán Welch. I bpainéal (h), baineadh úsáid as ANOVA dhá bhealach le tástáil chomparáide iolrach Sidak. Cuirtear sonraí foinseacha ar fáil sa chomhad Foinse Sonraí.
Fíor 5|Éifeachtúlacht agus sábháilteacht cealla CAR T luch STEAP a chinneadh i hSTEAP1-KI lucha a bhfuil ailse phróstatach shingeneach, scaipthe orthu.
Faigheann comhleá cítocín fearann ceangailteach collagen-IL-12 freagairtí frith-tumaí trí chomharthaíocht fheabhsaithe ar ghabhdóirí T-chealla agus cur i láthair antaigin
Is cítocín heitridimiciúil é IL{{0}} ina bhfuil fo-aonaid p40 agus p35 a rialaíonn freagraí cille T agus as a dtagann táirgeadh IFN- . Léiríodh i roinnt samhlacha réamhchliniciúla58,59 freagairtí buailte frith-mhealla a bhaineann le riar IL{-12 sistéamach58,59 ach tháinig stop le haistriú an chur chuige theiripeach seo chuig an gclinic de bharr tocsaineachta a shrianadh dáileog agus neamhéifeachtúlacht60-63. Díríodh straitéisí malartacha chun na fadhbanna seo a shárú ar IL{{1{{0}} a logánú i leith siadaí, trí sheachadadh iontumórach nó trí innealtóireacht IL-12 próitéiní comhleá chun airíonna uathúla mhicrea-thimpeallacht an siadaí a ghiaráil. Cur chuige amháin a ndearnadh cur síos air le déanaí ná comhleá le fearann fachtóir A3 von Willebrand a fheidhmíonn mar fhearann ceangailteach collaigine (CBD, Fíor 6a) agus a chuireann ar chumas próitéiní comhleá a cheangal le collaigine nochta i soithíocha meall neamhord64. Taispeánadh teiripe sistéamach CBD-IL-12 chun micrea-thimpeallachtaí siadaí de mhúnlaí ailse chíche murine agus meileanóma atá “fuar” a athmhúnlú trí chomharthaíocht IFN-fheabhsaithe agus chun comhoibriú le frith-PD{{2{0}} cosc seicphointe imdhíonachta chun siadaí a dhíothú65. D'fhiafraigh muid an bhféadfadh CBD-IL-12 a bheith éifeachtach maidir le hailse phróstataigh a thiontú ó "fuar" go "te" agus freagairtí frith-meall a spreagadh. Bunaíodh siadaí subcutaneous, syngeneic RM9, agus Myc-CaP i lucha fireann C57Bl/6 agus FVB, faoi seach, agus rinneadh lucha a randamach chun cóireáil le feithicil, frith-PD-1, nó CBD-IL-12 . Spreag riarachán sistéamach CBD-IL-12 cosc suntasach ar fhás siadaí i múnlaí siadaí syngeneic RM9 agus Myc-CaP araon nach raibh freagrúil go dona ar shlí eile do theiripe frith-PD-1 (Fíor 6b, Fíor Forlíontach 16a) . Chun léargas breise a fháil ar mheicníochtaí gníomhaíochta CBD-IL-12, rinneamar anailís RNA-seq (scRNA-seq) aonchealla ar shiadaí RM9 ó lucha a cóireáladh le feithicil nó le CBDIL-12. Nocht ceapacha Iomadúla agus Teilgean Aonfhoirmeacha laghdú suntasach ar urranna cille epithelial, fibroblast, agus endothelial (Fíor Forlíontach 16b) i gcomhréir le gníomhaíocht antitumor. D'aithin próifíliú marc-bhunaithe ar fho-thacair cille imdhíonachta dúchasacha agus oiriúnaitheacha (Fíor 6c,d) sna sonraí scRNA-seq méadú suntasach ar chealla T CD8+ (7.55 vs. 0.76%) , cealla tras-chur i láthair antaigin lena n-áirítear XCR1+ IRF8+ gnáthchill dendritic de chineál 1 (cDC1, 1.33 vs. 0%), CD86+ INOS2+ Macrophages polaraithe M1 ( 2.26 vs 0%), agus CD64+ F4/ {80+ monocytes/macrophages (29.2 vs 4.43%) i siadaí ón ngrúpa cóireála CBDIL-12 i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe feithiclí. Bhain laghdú ar mhacraifítí polaraithe CD{78}} CD206+ M2 (0 vs. 0.25%) agus neodrófail Ly6G+ (0.52 vs. 1.08%) le teiripe CBD-IL{-12 freisin. Dheimhnigh anailís IHC go raibh easpa cealla T CD8+ T ag siadaí RM9 agus léirigh na cinn ar cuireadh cóireáil orthu le CBD-IL-12 go raibh insíothlú suntasach feiceálach ar chealla T CD8+ (Figiúr Forlíontach 16c) . Léirigh cealla meall slonn saibhrithe na bhfo-aonaid proteasome agus imdhíonpróitéasóim Psmb8 agus Psmb9 agus géinte mór-histo-chomhoiriúnachta casta aicme I (MHC I) H2-K1, H{2-D1, agus B2m, ag teacht le huasrialú na próiseála antaiginí agus innealra léirithe (Fíor 6e, Fíor Forlíontach 16d). Ag an am céanna, léirigh cealla T léiriú géine feabhsaithe a bhaineann le comharthaíocht receptor cille T agus idirghníomhaíochtaí imdhíonrialaithe idir lymphoid agus cill neamh-limfóideach (Fíor 6f, Fíor Fhorlíontach. 16e). Léirigh cealla an chórais phagocyte mononuclear (MPS) léiriú géine saibhrithe a bhaineann le próiseáil antigen agus tras-chur i láthair chomh maith le comharthaíocht cytokine (Fíor Forlíontach 16f, g). Bhunaigh na staidéir seo gníomhaíocht antitumor CBD-IL- 12 i múnlaí d’ailse phróstataigh trí mhicrea-thimpeallacht an siadaí a athchlárú agus trí dhul i ngleic leis na córais imdhíonachta dúchasacha agus oiriúnaitheacha araon.
Rialú siadaí feabhsaithe le teiripe comhchéimneach STEAP1-mBBζ CAR T agus teiripe CBD-IL-12
Mholamar an chéad uair eile go bhféadfaí feabhas a chur ar éifeachtúlacht theiripeach teiripe chealla CAR T STEAP in ailse próstatach trí ilchineálacht antaigin siadaí a chomhrac agus trí phróiseáil antaiginí a tharrtháil agus tarrtháil a dhéanamh ar an bhfreagairt imdhíonachta antitumor le teiripe CBD-IL-12. cur i láthair. Bhunaíomar, mar sin, meatastaí fLuc singéineacha, neamhchlónacha RM9-STEAP1-i lucha heitrisigeacha hSTEAP1-KI fireann agus rinneamar randamach chuig cóireáil le ceachtar acu 5 × 1{{{1-6 cealla T luiche neamh-aistrithe nó cealla STEAP luchóg1-mBBζ CAR T trí instealladh féitheacha eireaball le nó d’éagmais teiripe CBD-IL-12 sheachtainiúil trí instealladh sinus retroorbital. Ní bhfuair grúpaí a fuair teiripe CBD-IL-12 ina n-aonar nó i gcomhcheangal le teiripe STEAP1-mBBζ CAR T cioclafosfaimíd ídithe linfó (Fíor 7a). Nocht sraith BLI dul chun cinn gasta galair i lucha cóireáilte le cealla T neamh-aistrithe agus CBD-IL-12 agus léirigh iad siúd a fuair cealla STEAP1-BBζ CAR T i gcomhar le teiripe CBD-IL-12 suntasacht moill ar dhul chun cinn siadaí (Fíor 7b, c). Rud atá tábhachtach, bhí baint ag cóireáil chomhcheangailte le cealla luch STEAP1- mBBζ CAR T agus seachtainiúil CBD-IL-12 le síneadh suntasach go staitistiúil sa mharthanas iomlán i gcomparáid le gach grúpa cóireála eile (Fíor 7d). Léirigh anailís cítocine plasma ar fhuilithe retroorbital a bailíodh ag lá 0 agus lá 8 den chóireáil méadú suntasach ar leibhéil cítocíní proinflammatory IFN- , TNF- , IL{-6, agus IL{-4 (Fíor 7e, Fig. . 17) i lucha atá cóireáilte le cealla STEAP1-mBBζ CAR T agus CBD-IL-12. Bailíodh siadaí iarmharacha ag necropsy agus léirigh STEAP1 IHC caillteanas antaigin i siadaí ó lucha cóireáilte le cealla STEAP1- mBBζ CAR T araon ina n-aonar agus i gcomhcheangal le CBD-IL-12 (Fíor 8a). Ina theannta sin, thugamar faoi deara méadú ar léiriú siadaí B2m (Fíor 8a) a bhaineann le teiripe CBD-IL{-12. Méadaíodh cealla T CD3+ freisin (Fíor 8b) i gcoinníollacha siadaí faoi réir teiripe IL{-12 ach, cé go raibh meas ar threocht, níor aimsíomar méadú suntasach go staitistiúil ar chealla T intratumórach idir an dá linn. STEAP1-mBBζ CAR T cill agus grúpaí cóireála comhcheangailte STEAP1-mBBζ CAR T agus CBD-IL-12. Siadaí iarmharacha lena n-áirítear iad siúd ó lucha cóireáilte le cill STEAP comhcheangailte STEAP1-mBBζ CAR T agus CBD-IL-12 a bailíodh ag freagairt uasta cóireála (nadir) ag lá 10 agus ag críochphointí atruacha le haghaidh dul chun cinn siadaí (athiompaithe). dissociated le cealla aonair agus tréithrithe ag fo-thacair cille imdhíonachta ag cíteiméadracht sreafa ilparametric (Figiúr Forlíontach 18). I gcomhréir lenár dtorthaí scRNA-seq, tháinig méadú suntasach ar CD11b+ Ly6C-/+F4/{{68) mar thoradh ar chóireáil CBD-IL{-12 ina aonar nó i gcomhcheangal le cealla STEAP1-mBBζ CAR T. }} Macrophages MHC-II+ (Fíor 8c, d, Fig. Forlíontach 19a). CD11b+ Ly6CF4/80+ Seasann cealla MHC-II+ do mhacrophages a thíolacann antaigin aibí66 agus rinneadh saibhriú tosaíochta ar an daonra seo agus léirigh sé léiriú méadaithe spreagtha ocsaíd nítreach synthase (iNOS) mar mharcóir ar pholarú proinflammatory M1 le CBD-IL{{84} } teiripe. Thugamar faoi deara freisin méadú ar dhaonra cDC1 agus laghdú ar an ngnáthdhaonra cille dendritic cineál 2 (cDC2) (Fíor 8e, Fíor Fhorlíontach. 19b). Tá baint ag cDC1 le gníomhachtú cealla T CD{8+ cíteatocsaineacha frith-tumóra agus meicníochtaí féideartha d’fhriotaíocht theiripeach. Ní bhfuaireamar aon chomhartha ar imirce cille go dtí an siad agus tá cDC2 tábhachtach chun difríochtaí suntasacha a ghníomhachtú i gcóimheas marfóirí nádúrtha KLRG1+ agus KLRG1- cealla CD{4+ T lena n-áirítear Tregs67 . Ag teacht le torthaí cDC2, cealla trasna grúpaí cóireála (Fíor Forlíontach 19d). Léirigh próifíliú minicíochtaí CD4+ FOXP3+ Tregs laghdú ar an gcomhad Tregs de F40/80+ Méadaíodh eosinophils SiglecF+ agus Ly6G+ néaróis le teiripe CBD-IL{-12 (Forlíontach Fíor 19c). Díol spéise é, laghdaíodh trófail nuair a cuireadh CBD-IL-12 le STEAP1- gur thugamar faoi deara i siadaí athiompaithe tar éis teiripe cealla CAR T comhcheangailte STEAP1-mBBζ mBBζ CAR T (Fíor 8f, g). Go háirithe, tháinig laghdú ar mhinicíocht na teiripe CAR T agus CBD-IL{-12 seo i teiripe cDC1 agus méadaíodh neutrophils a bhaineann le siadaí le cóireáil le méadú ar Tregs, rud a d’fhág go raibh príomhú laghdaithe cítotocsaineach CD8 STEAP{120 }}mBBζ cealla CAR T i gcomparáid le cealla T neamh-aistrithe (54 vs. cealla T agus saibhriú comharthaíochta Treg imdhíonachta mar 34%), laghdaithe i gcoinníollacha le teiripe CBD-IL-12, ach mhéadaigh sé tar éis athiompaithe siadaí tar éis STEAP comhcheangailte. 1-mBBζ CAR T cill agus CBD-IL-12 teiripe (19 go 42%). Tugann na torthaí seo le fios go bhféadfadh ról suntasach a bheith ag airíonna imdhíon-sochtaithe na neodrófilí a bhaineann le siadaí in idirghabháil a dhéanamh ar fhriotaíocht cóireála agus ar dhul chun cinn siadaí. Tríd is tríd, tugann na hanailísí seo le fios go n-aisiompaíonn cóireáil CBD-IL an milieu meall imdhíon-imdhíonachta naimhdeach chuig staid réamh-athlastach agus leathnaíonn sé gníomhaíocht frith-meall i gcomhar le teiripe chealla CAR T STEAP a aistríodh go huchtach. Rinneamar tuilleadh anailís ar stór TCR ag baint úsáide as seicheamhú slabhra béite TCR ilphléacs PCR-bhunaithe68 ar siadaí ar a bhfuil scamhóg a bailíodh ó gach grúpa cóireála ag necropsy. Thugamar faoi deara laghdú suntasach ar chlónacht Simpson i samplaí ó lucha a ndearnadh cóireáil orthu le CBD-IL-12 ina n-aonar agus i gcomhcheangal le teiripe cille STEAP1-mBBζ CAR T, rud a léirigh éagsúlacht mhéadaithe cille T intratumórach (Fíor. 8h). Deimhníonn na torthaí seo go bhféadfaí tairbhe a bhaint as CBD-IL-12 mar aguisín le teiripe cille STEAP1 CAR T trí athmhúnlú a dhéanamh ar mhicrea-thimpeallacht siadaí na hailse próstatach, trí phróiseáil agus cur i láthair antaigin a fheabhsú, agus trí dhíolúine óstaigh a úsáid chun scaipeadh epitóp a chur chun cinn.
Fíor 6|Fearann sistéamach ceangailteach collaigine IL-12 (CBD-IL{-12) teiripe comhleá cítocine bac ar fhás siadaí ailse próstatach agus athchlárú an micrithimpeallacht imdhíonachta siadaí. Scéimre de CBD-IL-12, comhdhéanta de na fo-aonaid p35 agus p40 atá comhleádh leis an CBD ó fhearann fachtóir von Willebrand A3. b Méid siadaí subcutaneous RM9 i lucha syngeneic C57Bl/6 le himeacht ama agus cóireáil le feithicil, frith-PD-1 (clón 29 F.1A12) 200 Μg trí instealladh ionchiniceach gach 5 lá, nó CBD-IL-12 25 Μg trí instealladh infhéitheach gach 5 lá ag tosú ar an lá 0. n=7 lucha i ngrúpaí feithicle agus CBD-IL-12 agus n=8 lucha i ngrúpaí frith -PD1 grúpa cóireáilte. p < 0.0001 ar laethanta 9 agus 12. Léiríonn barraí an meán le SEM. Díorthaítear luachanna-P ó ANOVA déthreo agus níl tástáil chomparáidí iolracha Dunnett, ns suntasach. c Ceapacha Comhfhogasaithe agus Teilgean Iomadúla (UMAP) de fho-thacair éagsúla cille imdhíonacha (barr) ó anailís RNA-seq aonchealla (scRNA-seq) ar chúig siadaí RM9, gach ceann díobh comhiomlánaithe ó lucha atá cóireáilte le feithicil nó CBD-IL{{41} }. Ceapacha UMAP daite le léiriú géine de mharcóirí fo-thacar cille imdhíon-shonracha do pan-mhonaicítí/macrophages, macrófaigí polaraithe M1 agus M2, gnáthchealla dendritic cineál 1 (cDC1), cealla marfacha nádúrtha (NK), agus cúntóir T cineál 1 (Th1). cealla. d Ceapacha a thaispeánann minicíocht daonraí cille imdhíonacha ar leith (i gcoibhneas le cealla imdhíonachta CD45 +) arna sainaithint ag anailís scRNA-seq lena n-áirítear cealla CD4+ agus CD8+ T, Th1 (Infg+ Tbx{ {56}} ) agus cealla Th2 (cMAF+ Gata3+ ), Ly6C+/− monocytes/macrophages (Ly6C+/− Adgre1+ ), macraphages M1 (CD80+ CD{{67} } INOS2+ ), macraphages M2 (CD163+ Mrc1+ cMAF+ ), cDC1 (XCR1+ IRF8+ ), gnáthchealla dendritic de chineál 2 (cDC2 , CD1+ IRF4+ ), cealla dendritic CD103+ imirceacha (Itgae+ ), eosinophils (SiglecF+ ), neodrófailí (Ly6G+), agus cealla NK (Klrb1c+ Ncr1+ ) i siadaí atá cóireáilte le feithicil nó CBDIL-12. Ceapacha bolcán a thaispeánann slonn géine difreálach i (e) cealla meall agus (f) cealla T ó shiadaí RM9 de lucha CBD-IL-12 i gcomparáid leo siúd ar cuireadh cóireáil orthu le feithicil. Athrú fillte FC, ráta fionnachtana bréagach FDR. Cuirtear sonraí foinseacha ar fáil sa chomhad Foinse Sonraí.
Plé
Tá éifeachtacht teiripe cille CAR T agus teiripeoirí spriocdhírithe imdhíonachta-bhunaithe eile ag brath go mór ar léiriú antaiginí comhsheasmhach ar na cealla go léir nó an chuid is mó den daonra meall laistigh d'othar aonair. Mar sin féin, déantar ilchineálacht antaiginí a fhuaimniú i siadaí soladacha lena n-áirítear ailse próstatach, áit a bhfuil baint ag dul chun cinn go mCRPC agus friotaíocht cóireála le teacht chun cinn fochineálacha galair éagsúla marcáilte ag cláir trascríobh ar leith–71 agus léiriú antaigin ar dhromchla cille. Cé go meastar PSMA ar cheann de na bithmharcóirí is mó chun cinn in ailse phróstataigh le ró-léirmheas suntasach le fáil ar fud an speictrim dul chun cinn galair, comhthacaíonn ár gcuid oibre le torthaí ó fhoilseachán le déanaí14 a thugann le fios go bhfuil léiriú PSMA ilchineálach i mCRPC marfach. Léirímid go gcuirtear STEAP1 in iúl ar bhealach níos forleithne ná PSMA sa socrú seo ach ní chuirtear in iúl go haonfhoirmeach é ag leibhéil arda i ngach fíochán mCRPC. Ní fhéadfaidh aon teiripe aonair spriocdhírithe antaiginí lena n-áirítear teiripe cille CAR T a bheith in ann ilchineálacht antaiginí siadaí a bhí ann cheana a shárú i mCRPC. Mar sin, tá sé ríthábhachtach go ndéanfaí spriocanna teiripeacha breise a chreidiúnú go críochnúil ar nós STEAP1 i mCRPC a d'fhéadfadh teiripí comhcheangailte a chumasú a chuireann brú teiripeach dosháraithe orthu. Ina measc seo tá teiripí CAR T dé-dhírithe antigen (m.sh., PSMA agus STEAP1) nó straitéisí ilmhódacha a chomhcheanglaíonn teiripí cille CAR T le ADCanna, T-BsAbs, nó cóireálacha eile a chuireann chun cinn marú meall antigen-neamhspleách agus-spleách. Rinneamar innealtóireacht ar theiripe chealla CAR T spriocdhírithe STEAP atá thar a bheith sainiúil ó thaobh antaiginí agus atá logánaithe go feidhmiúil, an epitope atá aitheanta ag an CAR don dara ECD de STEAP1. Léiríonn ár gcealla STEAP{15}}BBζ CAR T gníomhaíocht shubstaintiúil antitumor i gcoinne il-samhlacha ailse próstatach scaipthe i staidéir daonna-i-luch agus luch-i-luch. Rud atá tábhachtach, tá ár STEAP{20}}BBζ CAR in ann gníomhachtú cealla T agus cítealú spriocchealla a dhéanamh fiú i gcoinníollacha ísealdlúis antaigin, mar is léir ón imoibríocht i gcoinne mhúnla ailse phróstataigh PC3. Mar sin féin, d’fhéadfadh go mbeadh buntáiste ag baint le híogaireacht na gcealla STEAP1-BBζ CAR T go leibhéil ísle slonn STEAP1 ó thaobh éifeachtúlacht an fhrith-mheall a fheabhsú ach d’fhéadfadh sé freisin dliteanais a ghéarú ó thocsaineacht seach-meall ar an sprioc. Tuairiscíodh roimhe seo go bhfuil léiriú sistéamach STEAP1 beagnach as láthair i ngnáthfhíocháin dhaonna18,72 ach amháin an fhaireog próstatach ina bhfuil cur síos déanta ar léiriú membranous i gcealla epithelial próstatach27. Chun iniúchadh a dhéanamh ar shábháilteacht teiripe chealla STEAP1-BBζCAR T sa suíomh réamhchliniciúil, ghineamar samhail luch daonnaithe STEAP1. Rinne samhail na luiche hSTEAP1-KI léiriú arís ar slonn STEAP1 daonna sa fhaireog phróstatach agus léirigh sé slonn sa cortex adrenal. Is cúis áthais dom nach raibh tocsaineachtaí sistéamacha soiléire i lucha hSTEAP mar thoradh ar theiripe cille STEAP BBζ CAR T ag dáileog leordhóthanach chun gníomhaíocht fhrith-mheall a spreagadh{35}}KI lena n-áirítear tocsaineachtaí seachmhealla ar an sprioc ag láithreacha daonna STEAP1 léiriú. Ba é meicníocht athfhillteach athfhillteach ailse phróstataigh agus dul chun cinn tar éis teiripe cille STEAP1-BBζ CAR T inár gcuid staidéir ná éalú antaigin siadaí. Ar lámh amháin, cuireann an toradh seo béim ar chumas iomlán teiripe cille STEAP{{{{1-BBζ CAR T). Mar sin féin, níl sé soiléir cé acu an bhfuil caillteanas léiriú siadaí STEAP1 mar gheall ar ilchineálacht antaiginí dúchasach amháin nó an bhfuil laghdú oiriúnaitheach ar léiriú STEAP1 ann freisin. Léiríodh i bhfoilseachán le déanaí gur leor é meitilation tionscnóra STEAP1 chun slonn STEAP1 a mhodhnú agus dírialú epigenetic trí DNA methyltransferase agus cosc deacetylase histone chun slonn STEAP1 a rialú go suntasach73. D’fhéadfadh cóireáil le coscairí epigenetic i gcomhar le teiripe cille STEAP1 CAR T cur le léiriú siadaí STEAP1 ag an am céanna agus cealla CAR T a athchlárú chuig stáit idirdhealaithe fabhracha atá frithsheasmhach in aghaidh sceite74,75, rud a mhaolódh caillteanas antaigin siadaí agus feabhas a chur ar éifeachtúlacht fhrithtumóra in ailse phróstataigh. Tugann ár staidéar le tuiscint freisin go bhfuil ról feidhmiúil ag STEAP1 maidir le dul chun cinn timthriall na gceall agus meitibileacht cheallacha in ailse phróstataigh a rialú. Tá STEAP1 uathúil ó bhaill eile de theaghlach STEAP (STEAP2, 3, agus 4) sa mhéid is go bhfuil easpa fearainn ocsaídiúcháin intracellular22 aige atá riachtanach do ghníomhaíocht metallo reductase. Mar thoradh air sin, níl an fheidhm einsímeach ag homotrimers STEAP1, ach ní heitrea-thriméirí a bhfuil próitéiní STEAP eile acu, chun Fe3+ a laghdú go Fe{{2+ agus Cu2+ go Cu1+. Tá cinneadh le déanamh go fóill an gcuireann baint STEAP1 le hiain mhiotail agus le meitibileacht cheallacha dul chun cinn ailse chun cinn agus is fiú tuilleadh imscrúdaithe a dhéanamh. Is bac mór ar éifeachtúlacht na n-imdhíonteiripe ailse é micrea-thimpeallacht meall 'fuar' imdhíoneolaíoch na hailse próstatach. Mar shampla, léirigh staidéir thaiscéalacha a bhaineann le triail chliniciúil chéim I de theiripe cille PSMA CAR T armúrtha chun fachtóir fáis claochlaithe ceannasach-diúltach (TGF R-DN) a chur in iúl i mCRPC go raibh méadú ar léiriú móilíní comharthaíochta imdhíon-bhrú i micri-thimpeallacht an siadaí. tar éis insileadh CAR T13. Inár gcuid staidéir, ba é toradh criticiúil an gaol idir cailliúint slonn STEAP1 agus íosrialáil próiseála agus cur i láthair antaigin, i gcealla cnag-amach STEAP1 agus siadaí caillteanas antaiginí STEAP1 tar éis teiripe cille STEAP1-BBζ CAR T. Mar sin, ní hamháin go gcothaíonn caillteanas antaigin STEAP1 in ailse phróstataigh friotaíocht díreach in aghaidh teiripe cille STEAP1-BBζ CAR T ach d’fhéadfadh sé teorainn a chur le himdhíonacht óst-tumóra óstaigh. Tugadh faoi deara freisin i staidéar céim I ar chealla CAR T EGFR-vIII i rannpháirtithe a bhfuil glioblastoma athfhillteach orthu go gcailltear léiriú antaigin sprice siadaí agus tiontú go stát níos imdhíon-bhrúchánach le insíothlú méadaithe Tregs agus léiriú níos airde ar mhóilíní imdhíon-bhrú76. Beidh gá le hobair bhreise chun na meicníochtaí feidhmiúla is bun le caillteanas antaiginí STEAP1 a thuiscint agus níos ginearálta conas a d’fhéadfadh éifeachtaí dinimiciúla teiripe uchtaithe cille CAR T cur le caillteanas antaigin agus imdhíon-eagarthóireacht trí idirghníomhaíochtaí siadaí-imdhíonachta-stromal a mhodhnú i siadaí soladacha.
Fíor 7|Má chomhcheanglaítear CBD-IL-12 le STEAP1-mBBζ teiripe chealla CAR T, feabhsaíonn sé na leibhéil fhoriomlána marthanais agus cítocín athlastacha. Scéimre den turgnamh dúshlán siadaí don tsamhail scaipthe RM9-hSTEAP1 i lucha hSTEAP1-KI/+ a imscrúdaíonn an meascán de CBD-IL-12 le STEAP{{1{{18} }}}mBBζ teiripe cille CAR T. Cy cyclophosphamide (le haghaidh réamhoiriúnú). Cruthaithe le BioRender.com. b BLI beo sraitheach de hSTEAP1-KI/ + lucha greanta le meitéisis RM9-hSTEAP1- fLuc agus cóireáilte le hinstealladh amháin infhéitheach de 5 × 1{06 luch neamh-aistrithe Cealla T nó cealla STEAP1-mBBζ CAR T ar an lá 0 le nó gan cóireáil CBD-IL- 12 go seachtainiúil. Ciallaíonn Dearg X lucha nach maireann. Taispeántar an scála radiance. (c) Breac a thaispeánann cainníochtú an flosc iomláin le himeacht ama ó BLI beo gach lucha in (b). d Cuar marthanais Kaplan-Meier lucha i (b) le tábhacht staitistiúil arna chinneadh ag tástáil log-rang (Mantel-Cox) (p=0.002). e Ceapacha a thaispeánann leibhéil serum cítocine de IFN- (clé, p=0.002) agus TNF- (ar dheis, p < 0.0001) bunaithe ar thástálacha imdhíonachta ProcartaPlex ó fhuiltí aisfhíorbhíteacha de hSTEAP1-KI/+ lucha ( n=4 lucha in aghaidh an ghrúpa) ar a bhfuil RM9-hSTEAP1-fLuc meatastas roimh (lá 0) agus tar éis cóireála (lá 8) le cealla T neamh-aistrithe luiche nó luch STEAP{{38} }mBBζ cealla CAR T a bhfuil teiripe CBD-IL{-12 acu nó nach bhfuil. Léiríonn barra earráide meán le SEM. Maidir le painéal (e), díorthaíodh p-luachanna ó ANOVA déthreo le triail chomparáidí iolracha Sidak. Cuirtear sonraí foinseacha ar fáil sa chomhad Foinse Sonraí.
Fíor 8|Trí CBD-IL-12 a chomhcheangal le STEAP1-mBBζ teiripe cille CAR T athchláraítear micri-thimpeallacht imdhíonachta an siadaí agus cuireann sé cur i láthair antaigin agus scaipeadh epitóp chun cinn. a Photomicrographs de STEAP1 (barr), B2m (lár), agus CD3 (bun) staining IHC de siadaí scamhóg RM9-hSTEAP1 tar éis cóireála le cealla T neamh-aistrithe luchóg nó cealla STEAP1-mBBζ CAR T le nó gan chóireáil CBD-IL-12. Barraí scála=50 µm. b Plota barra a thaispeánann cainníochtú IHC ar chealla dearfacha CD3 ag insíothlú siadaí meiteastatacha na scamhóg (n=4 siadaí in aghaidh an ghrúpa). ANOVA p=0 aon-bhealach.{{80}}021. Seasann barra earráide meán le SD. Ceapacha a thaispeánann minicíochtaí (c) Ly6C− F4/{{2{0}} MHC-II+ (ar chlé, aontreo ANOVA p=0.00{ {98}}5) agus Ly6C − F4/80+ iNOS2+ (ar dheis, aon-bhealach ANOVA p=0.0017) macrophages, (d) Ly6C+ F4/ {{36} } MHC-II+ (ar chlé, aontreo ANOVA p=0.0038) agus Ly6C+ F4/80+ iNOS2+ (ar dheis, aontreo ANOVA p=ns) macrophages, (e) CD11b+ XCR1+ cDC1 (aon-bhealach ANOVA p=0.0003), (f) F4/80+ eosinophils SiglecF+ (aon-bhealach ANOVA p=0. 0008), agus (g) neodrófilí Ly6G+ (aon-bhealach ANOVA p=0.0035) normalaithe go cealla CD45+ iomlán mar a chinntear ag cíteiméadracht sreafa ilpharaiméadraigh tar éis cóireála le cealla T neamh-aistrithe, STEAP{{67 }}mBBζ cealla CAR T, cealla T neamh-aistrithe agus CBD-IL-12, agus cealla STEAP1- mBBζ CAR T agus CBD-IL-12 ag freagairt uasta cóireála (nadir) agus athiompaithe siadaí (athiompaithe). h Ceapacha barra a léiríonn clonality Simpson mar thomhas ar 'cothrom' an stór TCR arna anailísiú ag seicheamhú TCRB ar chealla insíothlaithe siadaí a bailíodh ó lucha in (a). n=4 siadaí in aghaidh an ghrúpa. Is iad na luachanna P do chealla T neamh-aistrithe + CBD-IL-12 i gcomparáid le cealla T neamh-aistrithe agus cealla STEAP1-mBBζ CAR T ná 0.008 agus 0.02, faoi seach; agus cealla STEAP1-mBBζ CAR T + CBD-IL-12 i gcomparáid le cealla neamh-aistrithe agus STEAP1-mBBζ CAR T tá 0.004 agus 0.01, faoi seach. Seasann barra earráide meán le SD. I gcás painéil (c–g) n=3 siadaí in aghaidh an ghrúpa, *p < 0.05; **p < 0.01, ***p < 0.001, tagann luachanna p i bpainéil (b–h) ó ANOVA aontreo le triail chomparáidí iolracha Dunn. Cuirtear sonraí foinseacha ar fáil sa chomhad Foinse Sonraí.
Chun an freagra antitumor a leathnú, rinneamar imscrúdú ar riarachán sistéamach CBD-IL-12 i gcomhcheangal le teiripe cille STEAP1-BBζ CAR T i múnla siadaí scaipthe, shingenéiseach RM9-hSTEAP1 i hSTEAP 1-KI lucha chun neas-nádúr imdhíon-shochtadh mCRPC a dhéanamh bunaithe ar thréithriú RM9 roimhe seo mar mhúnla droch-imdhíon-ghineach57,77. Mar thoradh ar chomhchóireáil le CBD-IL12 tháinig feabhsuithe ar mharthanas foriomlán, táirgeadh cytokine, cur i láthair antigen meall, agus éagsúlacht cealla T intratumoral comhsheasmhach le scaipeadh epitope. Léirigh imscrúdú dlúth ar an micri-thimpeallacht imdhíonachta siadaí go n-eascraíonn cur CBD-IL-12 le teiripe cille STEAP1-BBζ CAR T aisiompú stromal siadaí agus go gcuirtear feabhas ar mhacrophages gníomhachtaithe agus cDC1 agus ag laghdú neodrófail a bhaineann le siadaí. Mar sin féin, níor baineadh amach an leigheas inár gcuid staidéir, agus tugaimid aird ar mheicníochtaí cúitimh, oiriúnaitheacha féideartha friotaíochta agus dul chun cinn meall lena n-áirítear minicíochtaí méadaithe neutrophils imdhíon-bhrú agus cDC2 a d'fhéadfadh ionduchtú Treg a chur chun cinn. Tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara go bhféadfadh go mbeadh gá le barrfheabhsú breise ar an dáileog agus ar an sceideal riaracháin de CBD-IL-12 chun freagairtí frith-meall a uasmhéadú. Mar sin féin, tacaíonn na torthaí seo le himscrúdú a dhéanamh ar chur chuige imdhíon-teiripeacha comhcheangailte ar nós cealla CAR T a armúr chun cítocíní athchuingeacha78 a chur in iúl (m.sh., IL-2, IL-12, IL-15, nó IL{{24). }}), cóireáil chomhthráthach le himdhíonmodulators (m.sh., frith-PD-1/PD-L1 nó frith-CTLA4), nó radaiteiripe meall-threoraithe chun micrithimpeallacht siadaí ailse próstatach a athmhúnlú agus feidhm éifeachtóra cille CAR T a fheabhsú. Cé go raibh an lámhscríbhinn seo á hullmhú, thuairiscigh staidéar ó ghrúpa san Iorua forbairt réamhchliniciúil ar theiripe cille CAR T STEAP1 le gníomhaíocht frith-tumóra i múnla subcutaneous 22Rv1 i lucha imdhíon-chomhbhrú79. Tá difríocht idir an CAR STEAP1 a tuairiscíodh agus STEAP1-BBζ CAR mar go n-ionchorpraíonn sé scFv sintéiseach ar a dtugtar Oslo1 agus fearann inse agus trasmembrane CD8. Gné dhifreálaigh eile is ea go n-ullmhaítear cealla STEAP1-BBζ CAR T mar tháirge sainithe le gnáthchóimheas de chealla T CD4/CD8 agus nach cealla CAR T Oslo1 STEAP1 iad. Níor tuairiscíodh meicníochtaí friotaíochta agus staidéir sábháilteachta a bhaineann le teiripe chealla CAR T Osló1 STEAP1. Mar sin féin, beidh sé suimiúil a fheiceáil conas a d’fhéadfadh tionchar a bheith ag na difríochtaí seo in innealtóireacht CAR agus comhdhéanamh táirgí cille ar éifeachtúlacht frith-tumaí, marthanacht, agus ar shábháilteacht mar theiripe cille Oslo1 STEAP1 CAR T agus ár n-teiripe ceall STEAP. aistrítear cláir chuig an gclinic. Mar thoradh ar thorthaí ár gcuid staidéir tá comhpháirtíocht le Clár Teiripice Turgnamhach (NexT) na hInstitiúide Náisiúnta Ailse (NCI) chun teiripe cealla STEAP BBζ CAR T a aistriú go triail chéad duine d’fhir le mCRPC. Cabhróidh comharthaí sábháilteachta agus éifeachtúlachta ón triail chliniciúil luathchéime seo lena chinneadh an bhféadfadh luach a bheith ann freisin in imscrúdú a dhéanamh ar an gcur chuige teiripeach seo do chineálacha ailse eile a chuireann STEAP1 in iúl go hard.
Tagairtí
1. Siegel, RL, Miller, KD, Fuchs, HE & Jemal, A. Staitisticí ailse, 2022. CA: Ailse J. Cliniceoirí 72, 7-33 (2022).
2. Armstrong, AJ et al. Réamh-mheastachán marthanais cúig bliana agus torthaí sábháilteachta le enzalutamide i bhfear a bhfuil ailse próstatach meiteastatach-resistant a choilleadh ón Triail PREVAIL orthu. Eur. Urol. 78, 347–357 (2020).
3. Fizazi, K. et al. Abiraterone móide prednisone in ailse próstatach meiteastatach, atá íogair do choilleadh. N. Béarla. J. Med. 377, 352–360 (2017).
4. Scher, HI et al. Méadú ar mharthanas le enzalutamide in ailse próstatach tar éis ceimiteiripe. N. Béarla. J. Med. 367, 1187–1197 (2012).
5. Parker, C. et al. Raidiam astaithe alfa-223 agus marthanacht in ailse mheiteastáiteach próstatach. N. Béarla. J. Med. 369, 213–223 (2013).
6. Sartor, O. et al. Lutetium-177–PSMA-617 le haghaidh ailse phróstatach atá frithsheasmhach do choilleadh meiteastatach. N. Béarla. J. Med. 385, 1091–1103 (2021).
7. Kantoff, PW et al. Imdhíonteiripe Sipuleucel-T le haghaidh ailse próstatach atá resistant do choilleadh. N. Béarla. J. Med. 363, 411–422 (2010).
8. Jackson, HJ, Rafiq, S. & Brentjens, RJ T-chealla CAR a thiomáint ar aghaidh. Nát. Ath. Clin. Oncol. 13, 370–383 (2016).
9. Weiner, GJ Ag tógáil teiripí monachlónacha bunaithe ar antasubstaintí níos fearr. Nát. Ailse Ath. 15, 361-370 (2015).
10. Chavez, JC, Bachmeier, C. & Kharfan-Dabaja, MA teiripe T-chealla CAR le haghaidh limfómaí B-chealla: torthaí trialach cliniciúla na dtáirgí atá ar fáil. Teiripeach Adv. Haemaitól. 10, 2040620719841581 (2019).
11. Teiripe cille Sterner, RC & Sterner, RM CAR-T: teorainneacha reatha agus straitéisí féideartha. Ailse fola J. 11, 69 (2021).
12. An tSlóivéin, SF et al. Staidéar Chéim 1 ar chealla P-PSMA-101 CAR-T in othair a bhfuil ailse phróstatach atá frithsheasmhach in aghaidh choilleadh meiteastach (mCRPC). J. Clin. Oncol. 40, 98–98 (2022).
13. Narayan, V. et al. Cealla CAR T armúrtha neamhíogair TGF atá dírithe ar PSMA in ailse próstatach meiteastatach atá frithsheasmhach do choilleadh: triail chéim 1. Nát. Med. 28, 724–734 (2022).
14. Paschalis, A. et al. Ilchineálacht antaigin membrane atá sonrach don próstatach agus lochtanna deisiúcháin DNA in ailse próstatach. Euro. Urol. 76, 469–478 (2019).
15. Chen, N., Li, X., Chintala, NK, Tano, ZE & Adusumilli, PS Tiomáint CARs ar an mbóthar míchothrom de ilchineálacht antigen i siadaí soladach. Curr. Tuairim. Imdhíonól. 51, 103–110 (2018).
16. Morgan, RA et al. Cás-thuairisc ar theagmhas díobhálach tromchúiseach tar éis riarachán na gcealla T a aistríodh le gabhdóir antaiginí chimeric a aithníonn ERBB2. Mol. Ther. J. Am. Soc. Gene Ther. 18, 843–851 (2010).
17. Laoi, JK et al. Aithníonn próifíliú sistéamach dromchlaome sprioc-antaiginí le haghaidh teiripe imdhíonachta-bhunaithe i bhfochineálacha ard-ailse próstatach. Proc. Natl. Acad. Sci. Stáit Aontaithe Mheiriceá 115, E4473–e4482 (2018).
18. Hubert, RS et al. STEAP: antaigin dromchla cille a bhaineann go sonrach le próstatach a chuirtear in iúl go mór i siadaí próstatach daonna. Proc. Natl Acad. Sci. Stáit Aontaithe Mheiriceá 96, 14523–14528 (1999).
19. Nolan-Stevaux, O. Teibí DDT02-03: AMG 509: Úrscéal, daonnaithe, leathshaol leathnaithe, déshonrach STEAP1 × CD3 T ag earcú antashubstainte XmAb® 2+1. Ailse Res. 80, DDT02-03-DDT02-03 (2020).
20. Grunewald, TG et al. Tá baint ag léiriú ard STEAP1 le torthaí feabhsaithe in othair sarcoma Ewing. Ann. Oncol. as. J. Eur. Soc. Med. Oncol. 23, 2185–2190 (2012).
21. Moreaux, J., Kassambara, A., Hose, D. & Klein, B. Tá an iomarca léirithe ag STEAP1 in ailsí: sprioc theiripeach a bhfuil gealladh fúthu. Bithcheimic. Bithfhis. Res. Cumann. 429, 148–155 (2012).
22. Oosterheert, W. & Gros, P. Struchtúr micreascópachta cryo-leictreon agus feidhm einsímeach ionchasach an antigen epithelial daonna sé-transmembrane den próstatach 1 (STEAP1). J. Biol. Ceimic. 295, 9502–9512 (2020).
23. Jiao, Z. et al. Cuireann an antigen epithelial sé-transmembrane den abairt próstatach 1 chun cinn metastasis ailse ovarian trí chuidiú le dul chun cinn an aistrithe epithelial-go-mesenchymal. Histochem. Cill Biol. 154, 215–230 (2020).
24. Tá Gomes, IM, Arinto, P., Lopes, C., Santos, CR & Maia, CJ STEAP1 ró-bhrú in ailse próstatach agus loit neoplasia intraepithelial prostatic, agus tá baint dhearfach aige le scór Gleason. In oinceolaíocht Úralogic: seimineáir agus imscrúduithe bunaidh. imleabhar. 32, 53.e23–53.e29 (Elevier, 2014).
25. Huo, S.-f. et al. Éascaíonn STEAP1 metastasis agus trasdul epithelial-mesenchymal adenocarcinoma scamhóg tríd an cosán comharthaíochta JAK2 / STAT3. Bitheolaíocht. Ionadaí 40, BSR20193169 (2020).
26. Gomes, IM et al. Cuireann Knockdown de STEAP1 bac ar fhás cille agus spreagann sé apoptosis i gcealla ailse próstatach LNCaP chun dul i ngleic le héifeacht na n-androgens. Med. Oncol. 35, 1–10 (2018).
27. Gomes, IM, Maia, CJ & Santos, próitéiní CR STEAP: ó struchtúr go feidhmeanna i teiripe ailse. Mol. Ailse Res. MCR 10, 573–587 (2012).
28. Danila, DC et al. Staidéar Chéim I ar DSTP3086S, comhchuingeach antashubstainte-drugaí a dhíríonn ar antaigin epithelial sé-thrasmembrane de phróstatach 1, in ailse próstatach meiteastatach atá frithsheasmhach do choilleadh. J. Clin. Oncol. as. J. Am. Soc. Clin. Oncol. 37, 3518–3527 (2019).
29. Kelly, WK et al. Staidéar Céim I ar AMG 509, ceall STEAP1 x CD3 T a earcaíonn teiripe imdhíonachta XmAb 2+1, in othair a bhfuil ailse próstatach meiteastatach ar choilleadh orthu (mCRPC). J. Clin. Oncol. 38, TPS5589–TPS5589 (2020).
30. Lín, T.-Y., Páirc, JA, Fada, A., Guo, H.-F. & Cheung, N.-KV Antashubstaint dhéshonrach frith-STEAP1 núíosach chun cealla T a atreorú le haghaidh imdhíonteiripe ailse. J. Imdhíonachta. Ailse 9, e003114(2021).
31. Schober, SJ et al. MHC Aicme I-Srianta TCR-Transgenic CD4(+) Cealla T In Aghaidh STEAP1 Idirmheánach Rialú Meall Áitiúil ar Sarcoma Ewing In Vivo. Cealla 9, 1581 (2020).
32. Roudier, MP et al. Ilchineálacht feinitíopach carcanóma próstatach céim deiridh, meiteastatach go cnámh. Hum. Paitól. 34, 646–653 (2003).
33. Gomes, IM, Santos, CR, Socorro, S. & Maia, CJ Tá sé síos-rialaithe antaigin epithelial membrane tras-an próstatach 1 ag hormóin gnéis i gcealla próstatach. Próstatach 73, 605–613 (2013).
34. Géar, A. et al. Tagann slonn splice receptor androgen-7 chun cinn le friotaíocht coilleadh in ailse phróstataigh. J. Clin. Infheistiú. 129, 192–208 (2019).
35. Bakht, MK et al. Mar thoradh ar dhifreáil neuroendocrine ar ailse próstatach, cuirtear PSMA faoi chois. Endocr.—Abhainn. Ailse 26, 131–146 (2018).
36. Ihlaseh-Catalano, SM et al. Is marcóir neamhspleách é overexpression próitéin STEAP1 le haghaidh atarlú bithcheimiceach i carcanóma próstatach. Histeapaiteolaíocht 63, 678–685 (2013).
37. Gomes, IM et al. Cuireann Knockdown de STEAP1 bac ar fhás cille agus spreagann sé apoptosis i gcealla ailse próstatach LNCaP chun dul i ngleic le héifeacht na n-androgens. Med. Oncol. 35, 40 (2018).
38. Logan, AC et al. Fachtóirí a mbíonn tionchar acu ar an titer agus ar ionfhabhtaíocht veicteoirí lentiviral. Hum. Gene Ther. 15, 976–988 (2004).
39. Morgan, RA, Gray, D., Lomova, A. & Kohn, DB Géinteiripe hematopoietic gascheall: dul chun cinn agus ceachtanna foghlamtha. Gascheall Cille 21, 574–590 (2017).
40. Larson, SM et al. Forbairt réamhchliniciúil ar mhodhnú géine ar ghaschealla hematopoietic le gabhdóirí antaiginí chimeric le haghaidh imdhíonteiripe ailse. Hum. Vacsaín Imdhíonachta. 13, 1094–1104 (2017).
41. Salter, AI et al. Nochtann anailís phosphoproteomic ar chomharthaíocht receptor antigen chimeric difríochtaí cinéiteach agus cainníochtúla a théann i bhfeidhm ar fheidhm na gceall. Sci. Comhartha. 11, eaat6753 (2018).
42. Majzner, RG et al. Tiúnadh a dhéanamh ar an gceanglas maidir le dlús antaigin do ghníomhaíocht T-chealla CAR. Ailse Diosca. 10, 702–723 (2020).
43. Challita-Eid, PM et al. Cosc a chur ar Chumarsáid Idircheallacha In vitro agus ar fhás seinegraftaí siadaí daonna in vivo, a dhéanann antasubstaintí monaclónacha do shé antaiginí epithelial transmembrane an phróstataigh. Ailse Res. 67, 5798–5805 (2007).
44. Hudecek, M. et al. Tá an fearann spásaire eischeallach neamh-chomharthaíochta de ghabhdóirí antaiginí chimeric cinntitheach maidir le gníomhaíocht fhrith-tumor in vivo. Imdhíonacht Ailse. Res. 3, 125–135 (2015).
45. Gomes, IM, Santos, CR & Maia, CJ Léiriú STEAP1 agus STEAP1B i línte cille próstatach, agus rialachán toimhdeach STEAP1 trí mheicníochtaí iar-trascríobhacha agus iar-aistrithe. Ailse na nGéinte 5, 142–151 (2014).
46. Bernsel, A., Viklund, H., Hennerdal, A. & Elofsson, A. TOPCONS: tuar comhdhearcadh topology próitéin membrane. Aigéid Núicléacha Res. 37, W465–W468 (2009).
47. Krogh, A., Larsson, B., Von Heijne, G. & Sonnhammer, EL Topology próitéin transmembrane a thuar le múnla i bhfolach Markov: iarratas ar ghéanóim a chomhlánú. J. Mol. Biol. 305, 567–580 (2001).
48. Fada, AH et al. 4-1Feabhsaítear ídiú na gcealla T mar gheall ar chomharthaíocht tonach ar ghabhdóirí antaiginí chiméireacha mar gheall ar chomharthaíocht tonach. Nát. Med. 21, 581–590 (2015).
49. Berger, C. et al. Bunaítear cuimhne chill T marthanach i bpríomhaigh le haistriú glactha cealla T éifeachtóra CD8+ díorthaithe ó chealla cuimhne lárnacha. J. Clin. Imscrúdú. 118, 294–305 (2008).
50. Gattinoni, L. et al. Fo-thacar de chill T cuimhne daonna a bhfuil airíonna cosúil le gascheall aige. Nát. Med. 17, 1290–1297 (2011).
51. Xu, Y. et al. Tá comhghaol idir gaschealla T-chuimhne agus leathnú in vivo CAR.CD19-Déanann IL-7 agus IL-15 cealla T a chaomhnú. Fuil 123, 3750–3759 (2014).
52. Cieri, N. et al. Tugann IL-7 agus IL-15 treoir do ghiniúint gascheall T cuimhne daonna ó réamhtheachtaithe naive. Fuil 121, 573–584 (2013).
53. Hansel, DE et al. Sóchán géine TP53 roinnte i carcanóma neuroendocrine príomhcheall beag comhthráthach agus adenocarcinoma an phróstataigh atá sainiúil go moirfeolaíoch agus go feinitíopach. Próstatach 69, 603–609 (2009).
54. Cuzick, J. et al. Luach prognóiseacha síniú léirithe RNA a dhíorthaítear ó ghéinte iomadú timthriall cille in othair a bhfuil ailse próstatach orthu: staidéar siarghabhálach. Lancet Oncol. 12, 245–255 (2011).
55. Chen, ME, Lín, SH, Chung, LW & Sikes, RA Leithlisiú agus tréithriú PAGE-1 agus GAGE-7. Géinte nua a chuirtear in iúl i múnla dul chun cinn ailse próstatach LNCaP a roinneann homaleolaíocht le hantaiginí a bhaineann le melanoma. J. Biol. Ceimic. 273, 17618–17625 (1998).
56. Baley, PA, Yoshida, K., Qian, W., Sehgal, I. & Thompson, TC Dul chun cinn chuig neamhíogaireacht androgen i múnla luch úrscéal in vitro le haghaidh ailse próstatach. J. Bithcheimic steroid. Mol. Biol. 52, 403–413 (1995).
57. Murad, JP et al. Déanann réamhoiriúnú an TME a mhodhnú chun éifeachtúlacht cealla CAR T siadaí soladach agus díolúine cosanta ingenous a fheabhsú. Mol. Ther. J. Am. Soc. Gene Ther. 29, 2335–2349 (2021).
58. Brúnda, MJ et al. Gníomhaíocht antitumor agus antimetastatic de interleukin 12 i gcoinne siadaí murine. J. Cait. Med. 178, 1223–1230 (1993).
