Tionchar ag Micreagrafaíocht Insamhlaithe ar Bhithmharcóirí a Bhaineann le Díolúine in Ailse Scamhóg
Aug 10, 2023
Teibí: Is straitéis nua é microgravity a fhéadfaidh feidhmiú mar uirlis chomhlántach chun teiripí ailse a fhorbairt amach anseo. In ailse scamhóg, tugtar aghaidh go maith ar thionchar microgravity ar phróisis cheallacha agus ar chumas imirceach cealla. Mar sin féin, tá a éifeacht ar na meicníochtaí a spreagann dul chun cinn ailse scamhóg ina thús fós. Sa staidéar seo, léiríodh go raibh baint ag 13 ghéinte a cuireadh in iúl go difreálach le prognóis ailse scamhóg faoi mhicrea-gravity insamhladh (SMG). Ag baint úsáide as anailís saibhrithe tacair géine, déantar na géinte seo a shaibhriú i gconairí imdhíonachta humoral. Ina ionad sin, nochtaíodh cealla alveolar basal-epithelial (A549) do SMG trí chóras clinostat 2D in vitro. Chomh maith le hathrú moirfeolaíochta agus laghdú ar an ráta iomadú, d'aisiompaigh SMG an feinitíopa trasdul epithelial-go-mesenchymal (EMT) A549, príomh-mheicníocht i dul chun cinn ailse. Léiríodh é seo le léiriú epithelial E-cadherin méadaithe agus laghdaigh slonn mesenchymal N-cadherin, rud a léirigh staid níos lú metastatach. Is ábhar spéise é gur thugamar faoi deara léiriú méadaithe ar FCGBP, BPIFB, F5, CST1, agus CFB agus a gcomhghaol le EMT faoi SMG, rud a fhágann go bhféadfadh siad bithmharcóirí faoi chois siadaí a shochtadh. Le chéile, léiríonn na torthaí seo deiseanna nua chun straitéisí teiripeacha nua a bhunú le haghaidh cóireáil ailse scamhóg.
Eochairfhocail: microgravity insamhladh; EMT; ailse scamhóg; metastasis; suppressor meall; bithmharcóir
Éifeachtaí Cistanche luibh-Antitumor
1. Réamhrá
Tá cáil ar spás mar gheall ar easpa an veicteoir domhantarraingthe, a chuireann isteach ar an gcorp ag leibhéil orgáin, fíocháin agus ceallacha. Is strusóir spáis suntasach é microgravity, coinníoll de réir dealraimh meáchain, agus is eol go bhfuil tionchar suntasach aige ar shláinte an duine, mar shampla caillteanas cnámh, atrophy muscle, agus díriochtú cairdiach [1,2]. Is pointe fócasach méadaitheach spéise i dtaighde spáis agus ailse é tionchar na micri-dhomhantarraingt ar chealla ailse. Tá sé léirithe go gcuireann microgravity gníomhaíocht na gceall imdhíonachta faoi chois agus go gcuireann sé isteach ar chórais ilchorp, rud a d'fhéadfadh an baol ailse a fhorbairt [2-4] a mhéadú. Mar gheall ar na saincheisteanna sláinte soiléire seo, chuir an timpeallacht microgravity ar chumas taighdeoirí staidéar a dhéanamh ar na meicníochtaí bithfhisiceacha a bhfuil tionchar ag microgravity orthu agus chuidigh sé le teiripí a aimsiú le haghaidh neamhoird neurodegenerative, imteiripeoirí, agus teiripí frith-ailse a d’fhéadfadh a bheith níos fearr agus níos spriocdhírithe [4-6]. Tá doiciméadú maith déanta agus athbhreithniú déanta ag go leor staidéir ar an impleacht mhór atá ag microgravity ar dhul chun cinn ceallacha, iomadú, agus apoptosis i línte cille meall iomadúla, lena n-áirítear ailse scamhóg [7-12]. Mar sin féin, taispeántar go leor staidéir eile a bhaineann le microgravity athruithe i léiriú géine a bhfuil baint acu le iomadú cille ailse, metastasis, agus marthanacht, ag aistriú na gceall i dtreo feinitíopa nach bhfuil chomh ionsaitheach [13,14]. D’fhéadfadh sé seo léargas a thabhairt ar thuiscintí nua ar bhitheolaíocht agus ar dhiagnóis siadaí, agus mar sin ag cur béime ar mhicrea-dhomhantarraingt mar uirlis nuálaíoch chun spriocanna núíosacha a aimsiú le súil le cur chuige nua taighde a fhorbairt agus le straitéisí teiripeacha a fheabhsú. Tá ailse scamhóg, le hailse scamhóg neamh-bheag cille (NSCLC) mar an cineál is suntasaí, mar phríomhchúis báis, is ionann é agus 12% de na hailsí go léir, agus is é an ailse is coitianta a diagnóisíodh [15]. I staidéir a bhaineann le microgravity, a d'fhéadfadh muid a threorú chun tuiscint níos fearr a fháil ar an bpróiseas carcanaigineach, léiríodh go gcaillfidh cealla ailse scamhóg a n-eascracht tar éis nochtadh do microgravity, rud a chuir isteach ar fhás cille ailse agus ar fheidhm [11]. Staidéar le Ahn et al. léiríodh gur tharla imirce agus iomadú tapa de bharr cealla ailse scamhóige (A549) a nochtadh do mhicrogravity. Míníodh é seo le leibhéil upregulated metalloproteases maitrís (MMP-2 agus MMP-9) faoi microgravity, mar sin ag imirt ról ríthábhachtach in ionradh ailse agus imirce [10]. I staidéar eile, rinne Chung et al. fuarthas amach nach raibh tionchar suntasach ag microgravity insamhladh ar iomadú cille ailse scamhóg ach gur tháinig méadú ar imirce i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe faoi ghnáth-mheáchanlár [16]. A mhalairt ar fad, Chang et al. léirigh laghdú ar imirce i líne cille ailse scamhóg A549 tar éis 24 h de nochtadh do choinníollacha microgravity [17]. In ainneoin éifeachtaí suntasacha microgravity ar iompar ceallacha, a chuimsíonn apoptosis, imirce, agus ionradh, níl a éifeacht ar ailse scamhóg soiléir go hiomlán fós. Tá sé bunaithe go maith go dtéann cealla epithelial faoi roinnt athruithe bithcheimiceacha chun feinitíopa mesenchymal a bhunú a fheabhsaíonn friotaíocht apoptosis, ionradh, agus cumais imirce. Tugtar trasdul epithelial-go-mesenchymal (EMT) ar phróiseas bitheolaíoch den sórt sin, sainmharc dul chun cinn ailse [18]. Tá caidreamh EMT le dul chun cinn ailse pléite go maith. Is eol go ngníomhaíonn siadaí EMT trí fhachtóirí trascríobh a rialáil, próitéiní dromchla cille a chur in iúl, agus einsímí díghrádaithe ECM a tháirgeadh. Nuair a bhíonn EMT gníomhachtaithe, cailleann na cealla meall a n-greamaitheacht cille-chealla agus faigheann siad airíonna imirceacha agus ionracha [19]. Níor léirigh ach dhá staidéar go spreagann microgravity insamhlaithe aistriú neamhbhuan epithelial-go-mesenchymal (EMT) i keratinocytes [9]. Ina theannta sin, leagadh béim ar fheiniméin den sórt sin i gcealla MCF-7 agus HUVEC [20]; áfach, níor dhírigh aon staidéir ar éifeacht microgravity ar EMT in ailse scamhóg. In ainneoin an iliomad fionnachtana ríthábhachtacha a rinneadh maidir le cumas microgravity próisis siadomaigineacha agus metastatacha ailse a mhodhnú, tá na meicníochtaí cruinne atá á dtiomáint ag cathair microgravity fós sách anaithnid, rud a fhágann go bhfuil ceisteanna oscailte ann maidir leis na hathruithe oiriúnaitheacha a tharlaíonn ag an leibhéal móilíneach. Sa staidéar seo, tá síniú géinte a bhaineann le himdhíonacht aitheanta againn (FCGBP, BPIFB1, F5, CFB, agus CST1) a léirigh go suntasach léiriú mRNA méadaithe i gcealla A549 faoi éifeacht microgravity insamhladh (SMG). Ina theannta sin, tá measúnú déanta againn ar an méid a chuireann SMG le dul chun cinn ailse an A549 trí rialachán EMT. Léirigh FCGBP, BPIFB1, F5, CFB, agus CST1 agus a gcomhghaol le heochairmharcóirí EMT feinitíopa a d’fhéadfadh a bheith níos lú meiteastatach ailse scamhóg faoi SMG. Soláthraíonn torthaí an staidéir seo bunús le haghaidh imscrúduithe amach anseo a theastaíonn chun meicníochtaí bunúsacha a aithint, a fhorbróidh ár dtuiscint agus a chabhróidh le forbairt straitéisí teiripeacha núíosacha do chóireáil ailse scamhóg.
Buntáistí cistanche tubulosa-Antitumor
2. Torthaí
2.1. Géinte Coitianta Léirithe Difreálach a Aithnítear i gCealla Ailse Scamhóg faoi Mhicrimtharraingt Insamhlaithe (SMG) i gcomparáid le Domhantarraingt Talún (GG)
Chun géinte a bhfuil baint acu le hailse scamhóg faoi mhicrea-dhomhantarraingt insamhlaithe (SMG) a aithint, rinneamar imscrúdú ar dtús ar ghéinte a chuirtear in iúl go difreálach faoi SMG i gcomparáid le domhantarraingthe talún (GG) le haghaidh ailse scamhóg daonna ag baint úsáide as an mbunachar sonraí Omnibus Expression Generation (GEO) atá ar fáil go poiblí. Roghnaíodh dhá thacar sonraí, GSE78210 agus GSE36931, lena n-áirítear léiriú géine do dhá líne chill ailse scamhóg daonna éagsúla, A549 agus Colo699, saothraithe i gcoinníollacha cultúir cille 2D agus 3D. Cuireadh difríochtaí i bpróifílí slonn géiniteacha idir samplaí SMG agus GG i láthair i gceapacha bolcán (Fíor 1). Roinneadh na géinte sainaitheanta go difreálach (DEGanna; Fíor 2) do gach tacar sonraí ina measc siúd atá uasrialaithe in ailse scamhóg (21 ghéinte in A549 agus 29 géinte i Colo699 de thacar sonraí GSE78210 agus 47 géinte in A549 de thacar sonraí GSE36931) agus iad siúd go bhfuil ailse scamhóg íosrialaithe I (40 géinte i A549 agus 27 géinte Colo699 de tacar sonraí GSE78210 agus 87 géinte i A549 de tacar sonraí GSE36931), mar a léirítear i dTábla 1. Bhí trí cinn déag DEG in iúl go mór i gcealla A549 de na tacar sonraí GSE78210 agus GSE369 SMG i gcomparáid leis an riocht GG. Sainaithníodh na géinte is coitianta ag baint úsáide as an uirlis gréasáin InteractiVienn (Fíor 2A). Áirítear ar na géinte iarrthóra AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP, agus BPIFA1. Chun a fháil amach an bhfuil baint ag na DEGanna sainaitheanta le cosáin choiteanna, uaslódáladh na géinte iarrthóra go Metascape (http://metascape.org; rochtain air an 11 Samhain 2021). Is díol spéise é go bhfuil na géinte seo saibhrithe ar bhealaí a bhaineann le freagairt imdhíonachta humoral agus eisicíotóis rialaithe (Fíor 2B).
Fíor 1. Plota bolcáin a thaispeánann géinte léirithe go difreálach (DEGanna) ag baint úsáide as GEO Omnibus. (A) Plota bolcán ag taispeáint DEGanna faoi éifeachtaí SMG agus GG i gcealla A549 ag baint úsáide as (A) GSE78210 agus (B) tacair sonraí GSE36931. (C) Plota bolcán ag taispeáint DEGanna faoi éifeachtaí SMG agus GG i líne chill Colo699 ag baint úsáide as tacar sonraí GSE78210. Léiríonn an dath dearg géinte upregulated, agus léiríonn an dath gorm géinte downregulated.
Tábla 1. Iomlán na ngéinte a chuirtear in iúl go difreálach ag SMG i gcomparáid le GG i línte cille ailse scamhóg A549 agus Colo699. Rinneadh athruithe fillte ar gach tacar sonraí a choigeartú chun an 5% is airde de na DEGanna a bhaint. Maidir le GSE36931, coigeartaíodh an t-athrú fillte (FC) chun géinte amháin a bhfuil FC acu atá níos mó ná nó cothrom le 4 nó níos lú ná nó cothrom le −4 a áireamh. Maidir le GSE78210, coigeartaíodh FC chun géinte amháin a bhfuil FC acu atá níos mó ná nó cothrom le 3 nó níos lú ná nó cothrom le −3 a áireamh.
Fíor 2. Trí DEG déag a roinntear go coitianta idir tacair sonraí GSE78210 agus GSE36931 in ailse scamhóg. (A) Léaráid Venn a thaispeánann 134 DEG i GSE36931 (líne chill A549), 61 DEG i GSE78210 (líne chill A549), agus 56 DEG i GSE78210 (líne chill Colo699) faoi choinníollacha SMG i gcomparáid le GG. As na 251 géine iomlán a aithníodh, fuarthas go raibh 13 DEG coitianta idir an dá thacar sonraí, GSE78210 agus GSE36931, i líne chill A549. Gineadh léaráid Venn ag baint úsáide as InteractiVinn.
2.2. Na Géin a Léirítear go Difreálach a Chomhghaolú le Prognóis Cliniciúil Othair Adenocarcinoma Scamhóg
Na Géin a Léirítear go Difreálach a Chomhghaolú le Prognóis Chliniciúil na nOthar Adenocarcinoma Scamhóg Chun luach prognóiseach cliniciúil na ngéinte iarrthóra ar othair a bhfuil adenocarcinoma scamhóg orthu a mheas, ba cheart go mbeadh plotter Kaplan-Meier (http://www.kmplot.com/; rochtain air an 11 Samhain 2{ {44}}21) chun comparáid a dhéanamh idir marthanacht iomlán (OS) na n-othar adenocarcinoma scamhóg (LUAD) le léiriú ard/idirmheánach i gcoinne léiriú íseal ar ghéinte iarrthóra (Fíor 3). Leibhéil slonn arda mRNA de NOX1 (cóimheas guaise (HR), 1.45; eatramh muiníne 95% (CI), 1.11–1.9; p=0.0058), GDA (HR , 1.74; 95% CI, 1.33–2.26; p=3.2e-05), TCN1 (AD, 1.62; 95% CI, 1.26–2.08; p=0.00014), agus breathnaíodh go raibh baint shuntasach ag BPIFA1 (AD, 1.44; 95% CI, 1.12–1.84; p=0.0026) le prognóis lag (Fíor 3A–D). Ar an láimh eile, bhí baint ag leibhéil arda léirithe mRNA FCGBP (HR, 0.63; 95% CI, 0.46-0.85; p=0.0026) le prognóis níos fearr agus marthanacht iomlán níos airde in othair LUAD (Fíor 3E). Ní raibh aon chomhghaol suntasach idir an mRNA
Figiúr 3. Comhghaolú FCGBP, CST1, F5, CFB, agus BPIFB1 le prognóis cliniciúil othar adenocarcinoma scamhóg. Cuar marthanais Kaplan–Meier de leibhéil slonn mRNA na ngéinte iarrthóra: (A)NOX1; (B) MCBÁC; (C) TCN1; (D) PLUNC; (E) FCGBP; (F) AZGP1; (G) H2Bf; (H) B7X; (I) AGR3; (J) CEACAM6; (K) F5; (L) BPIFB1; agus (M) CST1 in othair adenocarcinoma scamhóg. HR: cóimheas guaise.
sochair fhorlíonadh cistanche-Antitumor
Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche a fheiceáil
【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2.3. Léiriú FCGBP, BPIFB1, F5, CFB, agus CST1 i Microgravity Iar-Insamhlaithe Cealla A549
Chun léiriú na ngéinte sainaitheanta in silico a bhailíochtú (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP, agus BPIFA1), rinneadh feidhmchlár in vitro ag baint úsáide as qRT-PCR. Díol spéise é, ag baint úsáide as qRT-PCR, léirigh ár gcuid sonraí uasrialú suntasach ar léiriú mRNA FCGBP, go sonrach ag 48 agus 72 h i gcealla A549, iar-SMG i gcomparáid le GG (Fíor 4A). Ina theannta sin, rinneadh na habairtí mRNA de CFB, F5, agus BPIFB1 a uasrialáil go suntasach ag 72 h iar-SMG, agus i gcomparáid le GG, i gcealla A549 (Fíor 4B, C, E). Braitheadh méadú beag, cé nach raibh sé suntasach, i slonn mRNA do CTS1 faoi choinníollacha SMG i gcomparáid le GG (Fíor 4D). Bhí na habairtí AZGP1, AGR3, GDA, VTCN1, BPIFA1, NOX1, CEACAM5, agus TCN1 neamhchinnte do SMG agus GG araon (níl sonraí ar taispeáint).
Fíor 4. Uathrialáil FCGBP, CST1, F5, CFB, agus BPIFB1 faoi choinníollacha SMG in vitro. leibhéil slonn mRNA de (A) FCGBP, (B) CFB, (C) F5, (D) CTS1, agus (E) BPIFB1, cainníochtaithe ag qRT-PCR agus normalaithe go GAPDH i gcealla A549 faoi réir coinníollacha GG agus SMG ar feadh 24 , 48, agus 72 h. Taispeánann barraghraif torthaí 3 thurgnaimh neamhspleácha (n=3). * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, agus **** p < 0.0001.
Tríd is tríd, tugann na sonraí seo le tuiscint go bhféadfadh ról tábhachtach a bheith ag FCGBP, F5, CFB, agus BPIFB1 a chuirtear in iúl go difreálach in ailse scamhóg ar dhul chun cinn ailse scamhóg.
2.4. Laghdaíonn Microgravity Insamhladh Inmharthanacht na gCeall agus aisiompaíonn sé an t-aistriú epithelial-go-mesenchymal i Líne Cheallach Ailse Scamhóg A549
Chun imscrúdú a dhéanamh an bhfuil tionchar ag SMG ar chumas iomadaithe cealla A549, rinneadh measúnacht inmharthanachta cille ag baint úsáide as measúnacht eisiamh gorm trypan. Léirigh ár sonraí gur spreag SMG laghdú suntasach ar am-spleách ar iomadú cille (Fíor 5B). Bhí an laghdú ar iomadú cille suntasach go príomha tar éis 48 agus 72 h iar-SMG i gcomparáid le GG, rud a léirigh méadú ar iomadú cille de chealla A549. Ag an am céanna, braitheadh athrú ar mhoirfeolaíocht cheallacha i gcealla A549 faoi SMG. Chun na hathruithe seo a mheasúnú, baineadh cealla as an riocht SMG, síolaíodh iad ar 24-phlátaí tobair, agus breathnaíodh iad faoi mhicreascópacht éadrom tar éis 1 h de chur i bhfeidhm SMG. Is díol spéise é gur léirigh cealla a nochtar do SMG deilbhíocht ghráinneach, chnuasach iar-SMG. (Fíor 5A).
Fíor 5. Laghdaíonn microgravity insamhlaithe inmharthanacht na gceall agus spreagann sé athruithe moirfeolaíocha i gcealla A549 ar bhealach a bhraitheann ar am. (A) Bhí micreagraif ionadaíocha de chealla tuismitheoirí A549 (GG) agus cealla A549 faoi réir SMG ar feadh 24, 48, agus 72 h sular cuireadh iad ar ais ar feadh 1 uair faoi GG. Tógadh íomhánna ag formhéadú 1{549X. (B) Rinneadh measúnú ar inmharthanacht cille cealla A549 trí úsáid a bhaint as measúnacht eisiaimh ruaime gorm trypan. Taispeántar meán-inmharthanacht cille 3 thurgnaimh neamhspleácha mar rialú céatadáin. ****p < 0.0001. Fíor 5. Laghdaíonn microgravity insamhlaithe inmharthanacht na gceall agus spreagann sé athruithe moirfeolaíocha i gcealla A549 ar bhealach a bhraitheann ar am. (A) Bhí micreagraif ionadaíocha de chealla tuismitheoirí A549 (GG) agus cealla A549 faoi réir SMG ar feadh 24, 48, agus 72 h sular cuireadh iad ar ais ar feadh 1 uair faoi GG. Tógadh íomhánna ag formhéadú 10X. (B) Rinneadh measúnú ar inmharthanacht cille cealla A549 trí úsáid a bhaint as measúnacht eisiaimh ruaime gorm trypan. Taispeántar meán-inmharthanacht cille 3 thurgnaimh neamhspleácha mar rialú céatadáin. ****p < 0.0001.
Luibh Sínis cistanche plandaí-Antitumor
Chun na sonraí a fuarthas ar iomadú ceallacha laghdaithe san A549 a thuiscint, rinneamar measúnú ar an méid a chuir SMG leis an meicníocht aistrithe epithelial-go-mesenchymal (EMT). Is sainmharc é EMT agus meicníocht thábhachtach a thiomáineann dul chun cinn ailse agus metastasis, rud a fheabhsaíonn a motility cille agus airíonna ionracha [19]. Tomhaiseadh príomhmharcóirí EMT (E-cadherin, N-cadherin, ZO-1, agus Seilide) agus metalloproteinases MMP-2 agus MMP-9 leibhéil slonn mRNA ag qRT-PCR san A549, faoi GG agus SMG araon (Fíor 6). Ar iarratas SMG, breathnaíodh méadú suntasach ar léiriú mRNA E-cadherin, comhthreomhar le laghdú suntasach ar léiriú mRNA N-cadherin, ag 48 agus 72 h iar-SMG (Fíor 6A, B). Braitheadh méadú neamhshuntasach ar ZO-1 agus MMP-9 agus laghdú ar fhachtóir trascríobh Seilide ar SMG (Fíor 6C–E). Laghdaíodh MMP-2 go suntasach san A549 ag 48 h tar éis SMG (Fíor 6F), rud a léiríonn foirm nach raibh chomh ionrach. I dteannta a chéile, tacaíonn na sonraí seo le feinitíopa trasdul meiseinchymal-epithelial (MET) arna spreagadh ag SMG san A549.
Fíor 6
2.5. Comhghaolann Conair Aistrithe Epithelial-go-Mesenchymal le Léiriú FCGBP, BPIFB1, F5, CFB, agus CST1
Chun léargas meicníoch breise a fháil ar an ról a d’fhéadfadh a bheith ag na géinte sainaitheanta san A549 agus an comhghaol a d’fhéadfadh a bheith acu le EMT faoi choinníollacha SMG, rinneadh anailís ar idirghníomhú géine ag baint úsáide as GeneMANIA i gcoinne marcóirí géine EMT. Léiríonn Fíor 7 na hidirghníomhaíochtaí géine a breacadh idir na géinte EMT E-cadherin (CDH1), N-cadherin (CDH2), TJP1, CTNNB1, SNAI1 (Seilide), ZO-1, agus -catenin, faoi seach. Agus a róil shuntasacha in ionradh agus in imirce ailse ar an eolas, cuireadh na meiteapróitéinasaí MMP-2 agus MMP-9 san áireamh san anailís freisin. Aithníonn na nóid patrúin comh-léirithe idir na géinte a bhfuil láidreachtaí éagsúla acu bunaithe ar thiús an nód. Léiríonn na géinte iarrthóra méid comh-léirithe idir a chéile; Comh-léirítear BPIFB1 le CFB agus CST1; Tá FCGBP comh-léirithe le F5, CST1, agus CFB; Tá CST1 comh-léirithe le CFB, agus tá F5 comh-léirithe le CFB, CST1, agus BPIFB1. Aithníodh nóid chomhléirithe freisin idir géinte EMT agus na géinte iarrthóra; Tá CDH1 comh-léirithe le FCGBP agus F5; Tá CDH2 comh-léirithe le F5, CST1, BPIFB1, agus FCGBP; Tá CTNNB1 comh-léirithe le CST1 agus FCGBP; Comh-léirítear SNAI1 le CST1, F5, agus BPIFB1; Tá TPJ1 comh-léirithe le CST1, FCGBP, agus F5; Tá CTNNB1 comh-léirithe le CST1 agus FCGBP; Comh-léirítear MMP2 le BPIFB1 agus CST1; agus tá MMP9 comh-léirithe le F5, CST1, FCGBP, agus CFB. Tugann na torthaí seo le fios go bhfuil comhghaol suntasach idir na géinte nua-aitheanta agus na marcóirí EMT faoi choinníollacha SMG, b'fhéidir go mbaineann siad le conairí EMT.
Fíor 7. Tá comhghaol idir FCGBP, CST1, F5, CFB, agus BPIFB1 le cosán EMT. líonra idirghníomhaíochta géine-géine de ghéinte iarrthóra roghnaithe; FCGBP, CST1, F5, CFB, agus BPIFB1 le géinte EMT; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1, agus SNAI1, chomh maith le géinte a bhaineann le himirce cille MMP2 agus MMP9 ginte ag GeneMANIA (http://genemania.org/; rochtain ar 11 Samhain 2021) chun idirghníomhaíochtaí idir na géinte iarrthóra a aithint le EMT agus marcóirí imirce cille. Léiríonn dathanna éagsúla imeall an líonra na modhanna bithfhaisnéisíochta a cuireadh i bhfeidhm: tuar láithreán gréasáin (oráiste), idirghníomhaíochtaí fisiceacha (dearg), comhléiriú (corcra), fearainn próitéine roinnte (donn), cosán (gorm éadrom), comhlonnú (dorcha). gorm), agus idirghníomhaíochtaí géiniteacha (glas)
3. Plé
Tae cisteán
Plé Le déanaí tugadh aird mhór ar ailse scamhóg, ceann de na galair shuntasacha atá ag bagairt ar fud an domhain, i “Taighde spáis”. Mar sin féin, in ainneoin dul chun cinn sa réimse seo, tá dul chun cinn ailse scamhóg agus a fhreagairt ar chóireáil fós conspóideach mar gheall ar an easpa straitéisí measúnaithe cinntitheacha a chuidíonn le hailse a chosc nó a chóireáil [21]. Go bhfios dúinn, is é seo an chéad tuarascáil a shainaithnítear sraith géinte mar shíniú ar dhul chun cinn ailse scamhóg faoi thimpeallacht mheicniúil arna spreagadh ag micrea-gravity insamhladh (SMG). Cuirimid béim ar léiriú méadaithe géinte a bhaineann le freagairt imdhíonachta FCGBP, BPIFB, F5, CST1, agus CFB, agus a gcomhghaol le haistriú epithelial-go-mesenchymal (EMT) faoi SMG, rud a fhágann go bhfuil siad mar bhithmharcóirí féideartha ar dhul chun cinn ailse scamhóg. Anseo, tugaimid aird freisin ar éifeacht SMG spreagtha ar rialáil EMT, sainmharc dul chun cinn ailse [18,22], chun tacú le feinitíopa trasdul mesenchymal-go-epithelial (MET). Tríd is tríd, cuireann an staidéar seo an bonn ar fáil chun na géinte sainaitheanta a chomhcheangal le EMT; áfach, tá gá le himscrúduithe breise chun teacht ar na meicníochtaí cruinne a chabhraíonn le teiripe spriocdhírithe nua a fhorbairt le haghaidh ailse scamhóg. Sa staidéar seo, thaispeáin muid trí ghéinte déag (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP, agus BPIFA1) le cur in iúl go suntasach in ailse scamhóg faoi mhicrogravity insamhlaithe (SMG) mar i gcomparáid le domhantarraingt na talún i silico. Léirigh ár gcuid sonraí go bhfuil na géinte seo léirithe go difreálach saibhrithe ar bhealaí a bhaineann go príomha le díolúine humoral agus eisicíotóis rialaithe. Ús i gcomhthreo lenár dtorthaí, cé go bhfuil príomhfheidhm FCGBP fós doiléir [23]. D'fhéadfadh sé seo a bheith i bpáirt mar gheall ar na róil chontrártha a thaispeánann sé i tumaí éagsúla [25]. Mar shampla, taispeántar go bhfuil baint shuntasach ag FCGBP le prognóis foriomlán níos fearr agus le maireachtáil a bhaineann go sonrach le galair in ailse ceann agus muineál, ailse drólainne, agus othair osteosarcoma [25-27], agus in ailsí ovarian agus próstatach, an léiriú ard ar Bhí baint ag FCGBP le maireachtáil iomlán níos boichte [28]. Gan aird, tá ról FCGBP curtha i leith meicníochtaí cosanta imdhíonachta, freagraí frith-athlastacha, chomh maith le cosaint cille [29,30], rud a fhágann gur marcóir prognóiseach riachtanach é [31]. Agus feidhmchláir in vitro á n-úsáid againn, rinneamar measúnú ar léiriú na ngéinte sainaitheanta in ailse scamhóg agus faoi choinníollacha SMG trí chlinóstat 2D. Tá rogha leathan de chineálacha clinostat agus ardáin microgravity eile a forbraíodh. Áirítear orthu seo córais clinostat 1/2/3 D, meaisíní suite randamach atá feistithe le fleascáin sleamhnáin (go príomha le haghaidh cealla ailse thyroid), agus soithí balla rothlach arna bhforbairt ag NASA. Tá gach ceann acu deartha chun freastal ar chuspóir taighde áirithe, áit a bhfuil cuid acu deartha chun cealla greamaitheacha nó fionraí a chothú, agus úsáidtear cinn eile chun freagraí cinéiteach a thomhas ar líne. Is fiú a thabhairt faoi deara, tá an clinostat ar cheann de na hardáin is simplí agus is inoiriúnaithe a úsáideann feidhmchláir turgnamhacha éagsúla. I bprionsabal, is sainairíonna é an clinostat 2D ná ais rothlaithe a rothlaíonn go leanúnach ar luas tairiseach coigeartaithe agus i dtreo atá ingearach le treo veicteoir dhomhantarraingt an Domhain, agus mar sin cruthaítear fórsaí lártheifeacha a dhéanann aithris ar fhíor-mhicrigravity [14,32,33. ]. Is díol spéise é go raibh méadú suntasach ar na trí ghéinte déag, FCGBP, BPIFB, F5, CST1, agus CFB mar fhreagra ar SMG 2D clinostat-spreagtha i gcealla A549. Ba iad na léirithe FCGBP agus BPIFB na cinn is mó a raibh tionchar orthu, rud a léirigh méadú suntasach ar gach pointe ama measúnaithe: 24, 48, agus 72 h iar-SMG. Cosúil le FCGBP, is eol go gcuireann BPIFB1 le freagraí imdhíonachta dúchasach [34]. Tá an fillte BPI ina bhfuil próitéin ball teaghlaigh B 1 (BPIFB1), a tháirgtear go príomha ag epithelia aerbhealaigh, tar éis a bheith rannpháirteach i meicníochtaí cosanta óstach, chomh maith le héifeachtaí bactericidal agus frith-athlastach [35]. I galair riospráide, léirítear go léiríonn BPIPB1 éifeachtaí frith-meall agus frith-mhiostatacha; áfach, tá na meicníochtaí cruinne fós doiléir, ar gá tuilleadh imscrúdaithe a dhéanamh [34,36]. Staidéar amháin le Wei et al. fuarthas amach go gcuireann BPIB1 bac ar imirce agus ionradh carcinoma nasopharyngeal [37]. Mar gheall air sin, fuarthas amach go gcuireann sócháin a tharlaíonn i BPIFB1 an baol ailse scamhóg chun cinn, agus go mbíonn droch-prognóis in othair ailse scamhóg mar thoradh ar a downregulation [38,39]. Chomh maith le ról FCGBP agus BPIFB, taispeántar go bhfuil ról cosanta ag an bhfachtóir comhlántach B (CFB) agus an suppressor meall chimeric 1 (CST1) in ailse. Mar shampla, tuairiscíodh go raibh baint ag léiriú ard CFB le méadú ar mharthanas iomlán othar agus saor ó ghalair in othair ailse scamhóg [40]. Ina theannta sin, feidhmíonn an córas comhlántach mar an chéad líne cosanta i gcoinne pataiginí, ag feidhmiú mar phríomh-chomhpháirt de na córais imdhíonachta dúchasacha agus faighte [41]. Maidir le CST1, léirigh staidéir éagsúla a n-airíonna suimiúla, mar a chumas fás cille a chosc, apoptosis a spreagadh, agus a fhriotaíocht in aghaidh díghníomhaithe foirmeacha oncogenic p53, rud a fhágann gur sprioc teiripeach tarraingteach, malartach é de chineál fiáin p{. {74}}siadaí daonna frithsheasmhacha [42]. Chomh maith le léiriú méadaithe FCGBP, BPIFB1, F5, CFB, agus CST1, léirigh ár sonraí go suimiúil dhá fheinitíopa a bhaineann le ceallacha de chealla A549 faoi SMG - athrú moirfeolaíochta go comhiomláin agus cealla cnap-chruthach agus laghdú suntasach ar an iomadú. ráta iar-SMG. Tá sé seo ag an am céanna le roinnt staidéar eile, nuair a léirigh cealla a bhí faoi lé SMG cnapáin bheaga nó comhiomláin cille ilchiseal [43,44]. Léirítear na difríochtaí moirfeolaíocha seo ag na hathruithe feidhmiúla drámatúla comhchéimneach i bpróisis cheallacha, arb é an EMT cuid díobh. Is sainmharc é EMT den phróiseas méadastatach, a bhaineann le héalú an fhaireachais imdhíonachta agus ionradh an vasculature, rud a ligeann do na cealla scaipeadh chuig orgáin tánaisteacha [19,22]. I bprionsabal, téann cealla epithelial urchóideacha faoi mheicníocht EMT ag na príomhchéimeanna d'fhorbairt an meall, áit a mbíonn claonadh ag na cealla seo airíonna mesenchymal a chur in iúl, ag taispeáint motility méadaithe a éascaíonn a n-éalú ón nideoige príomhúil, ach na cealla meiteastástatacha foirmithe ag an taispeáint taobh tánaisteach. níos lú airíonna difreáilte i gcomparáid lena siadaí bunscoile comhfhreagracha. Anseo, tá próiseas MET (mesenchymal-go epithelial) mar chuid de dhul chun cinn den sórt sin ar fhoirmiú meall méadastatach. Mar sin féin, ní dhéanann sé sin faillí ar rannpháirtíocht EMTanna ag céimeanna éagsúla den dul chun cinn ailse mar go leanfaidh cealla ailse ag suíomhanna tánaisteacha ag fás agus ag iomadú nó ag dul faoi shuanacht [45,46]. D'fhéadfadh torthaí éagsúla a bheith mar thoradh ar chomhordú géine iolrach den sórt sin agus cuma marcóirí imirce ar leith a rialaíonn dul chun cinn meatastatach cealla ailse ar nochtadh SMG [47]. Mar shampla, faoi choinníollacha microgravity, léirigh cealla ailse chíche éagsúla moirfeolaíochtaí éagsúla, greamaitheacht cille, agus airíonna imirceacha nuair a nochtadh do mhicreagravity [5]. Is fiú a thabhairt faoi deara, is é príomh-shaintréith EMT caillteanas an mhóilín greamaitheachta cille, E-cadherin, rud a chuireann isteach ar quiescence sláine na gcealla. Ar an láimh eile, mar thoradh ar mhéadú cadherin neural, N-cadherin, déantar athruithe greamaitheachta cille. Tá sé seo spreagtha go príomha trí fhachtóir fáis a athrú (TGF- ), a ghníomhaíonn fachtóirí tras-scríofa pleiotropically, mar shampla próitéiní Seilide, Twist, agus Zeb agus cosáin comharthaíochta eile a chuirtear i bhfeidhm i cosáin mhéadastatacha [18,48,49]. Anseo, tuairiscímid feabhas ar an marcóir epithelial E-cadherin (CDH1) agus íosrialáil na leibhéil mRNA mesenchymal N-cadherin (CDH2), príomhmharcóirí EMT [49]. Tugann sé seo le tuiscint, i gcomhcheangal lenár sonraí ar an ráta laghdaithe iomadú A549, go bhfuil staid níos lú meiteastach ag na cealla. Is díol suntais é, in éineacht le léiriú athraithe na bpríomhmharcóirí EMT freisin, tháinig laghdú suntasach ar an maitrís metalloproteinase MMP-2, atá ina chomhpháirt mhór den scannán íoslaigh a scarann de ghnáth an ciseal epithelial ón mesenchyme máguaird, rud a fhágann go bhfuil caillteanas an membrane íoslach [50]. Tá sé seo i gcomhthreo le staidéar ag Chang et al., áit a thuairiscigh siad a gcuid torthaí maidir le laghdú a dhéanamh ar acmhainneacht mhéadastatach cealla adenocarcinoma scamhóg daonna trí léiriú MMP2 a athrú [17]. Go ginearálta, tá baint mhaith ag ról an MMP le dul chun cinn urchóideacha, lena n-áirítear metastasis, áit a bhfuil slonn MMP (MMP-2 agus MMP-9) laghdaithe agus gníomhaíocht einsímeach ina shaintréith d’fheinitíopa nach bhfuil chomh meiteastatach [ 50–52]. Le ról suntasach EMT i metastasis, léiríonn ár sonraí comhghaol suntasach FCGBP, BPIFB, F5, CST1, agus CFB le marcóirí géine EMT chomh maith le géinte a bhaineann le himirce cille MMP2 agus MMP9. Suimiúil go leor, Xiong et al. Tá sé léirithe go bhfuil FCGBP ina phríomh-rialtóir EMT sa lamhnán gall [53]. Léiríonn sé seo go bhféadfadh na géinte aitheanta feidhmiú mar bhithmharcóirí féideartha le haghaidh staidéir amach anseo ar féidir leo dul chun cinn ailse scamhóg a thuar agus a thuiscint tuilleadh. I dteannta a chéile, rangaíonn ár dtorthaí na géinte aitheanta mar phríomhrialaitheoirí EMT, ag cothú feabhsuithe féideartha ar fheinitíopa nach bhfuil chomh meiteastatach trí aistriú mesenchymal-go-epithelial (MET) de chealla ailse scamhóg.
4. Ábhair agus Modhanna
4.1. Tacair sonraí chun Géinte Coitianta Léirithe Difreálacha (DEGanna) a Aithint i Línte Cille Ailse Scamhóg atá Nochtar do Mhicrea-dhomhantarraingt Insamhladh
Baineadh tacair shonraí ábhartha ón mbunachar sonraí Omnibus Expression Generation (GEO) atá ar fáil go poiblí le haghaidh anailíse tosaigh. Úsáidtear an bunachar sonraí seo mar anailís géanóm feidhme atá ar fáil go poiblí ar shonraí slonn géine ard-tréchuir agus micrea-eagair. Chomhlíon na tacair sonraí a roghnaíodh na critéir seo a leanas: tacair sonraí a úsáideann línte cille ailse scamhóg daonna amháin, staidéir lena n-áirítear rialtáin a mheaitseáil le coinníollacha domhantarraingthe sa talamh (GG), tacair sonraí le haicmiú sainithe ar línte cille ailse scamhóg, agus tacair shonraí a bhfuil slonn géine cille ailse scamhóg daonna acu. ag baint úsáide as microarray. Tagann dhá thacar sonraí leis an gcritéar seo, GSE78210 agus GSE36931. San iomlán, cuireadh 25 sampla san áireamh sna staidéir, agus rinneadh comparáid idir 14 shampla de líne cille ailse scamhóg i micri-tharraingt insamhlaithe (SMG) le 11 rialú GG, mar a léirítear i dTábla 2 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov /geo/; rochtain air an 11 Samhain 2021).
Tábla 2. Mionsonraí ar Thacair Sonraí a Baineadh as Omnibus Slonn Géine (GEO) a úsáideadh chun DEG a Aithint ar dtús idir Micri- dhomhantarraingt Insamhladh (SMG) agus cealla Ailse Scamhóg Domhantarraingt Talún (GG).
4.2. Anailís Saibhrithe Socraithe Géine GEO2R chun DEGanna a Ghiniúint i ngach Datase
Úsáideadh GEO2R (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r; rochtain ar 11 Samhain 2021), uirlis idirghníomhach ar líne a úsáidtear chun sraitheanna GEO a chur i gcomparáid, i ngach tacar sonraí le haghaidh grúpa agus géinte uasrialaithe agus íosrialaithe a shainaithint i gcoinníollacha SMG i gcomparáid le coinníollacha GG. Roghnaíodh na géinte le p-luachanna níos lú ná 0.05 agus an t-athrú huaire níos mó ná 2 mar ghéinte sainráite difreálach DEG i gcoinníollacha SMG. Dá bhrí sin, trasnaigh DEGanna gach tacair sonraí a chéile, agus aithníodh géinte coitianta
4.3. Cainníochtú Rannpháirtíocht Chliniopatheolaíoch na nGéinte Aitheanta
Ansin, rinneadh na géinte gearrliostaithe a d’eascair a bhailíochtú trí úsáid a bhaint as Kaplan–Meier Plotter (http://www.kmplot.com/; ar tugadh rochtain air an 11 Samhain 2021), bunachar sonraí poiblí ar líne a dhéanann measúnú ar éifeacht géinte roghnaithe ar thorthaí cliniciúla othar. Sainmhíníodh marthanais iomlán (OS) mar an fad ó am an diagnóis (i míonna) go dtí bás. Díorthaítear sonraí slonn géine agus faisnéis marthanais ón Omnibus Léirithe Géine (GEO), The Cancer Genome Atlas (TCGA), agus European Genome-phenome Atlas (EGA). Rinneadh othair a chatagóiriú ina dhá ghrúpa: (1) léiriú ard (le luachanna TPM os cionn na ceathairíl uachtarach) agus (2) léiriú íseal/meánmhéide (le luachanna TPM faoi bhun na ceathairíl uachtarach). Baineadh úsáid as ceapacha Kaplan-Meier chun OS na n-othar adenocarcinoma scamhóg (LUAD) a chur i gcomparáid le léiriú ard/idirmheánach i gcoinne géinte iarrthóra íseal.
4.4. Cnuasú Onteolaíochta Saibhrithe do na Géinte Aitheanta
Chun iniúchadh a dhéanamh an bhfuil cosáin choiteanna ag na géinte sainaitheanta, rinneadh anailís saibhrithe conaire Géin-Ointeolaíochta (GO) do na géinte sainaitheanta ag baint úsáide as uirlis gréasáin Metascape (https://metascape.org/; rochtain ar 11 Samhain 2021) le haghaidh nótaí cuimsitheacha ar an liosta géine. agus acmhainn anailíse in éineacht le GEO2R
4.5. Líne na Cille agus Cultúr na gCeall
Fásadh an líne cille epithelial basal alveolar (A549) adenocarcinoma daonna, a úsáidtear go forleathan mar mhúnla le haghaidh adenocarcinoma scamhóg, in Institiúid Cuimhneacháin Pháirc Roswell (RPMI)-1640 meánach arna fhorlíonadh le 10% de shéiream bó féatais. (FBS; Sigma, St. Louis, MO, SAM) agus 100 aonad/ml de pheinicillin/streiptimícin (P/S; Sigma, St. Louis, MO, SAM). Saothraíodh an líne chill i gorlann taisithe 37 ◦C in atmaisféar 5% CO2. Nuair a shroich na cealla cumar, baineadh úsáid as trypsin 0.5%, lártheifneoirithe ag 100 × g ar feadh 5 nóiméad, agus úsáideadh iad nuair ba ghá.
4.6. Micrea-tharraingt
Saothraíodh cealla ailse scamhóg (A549) i gcóras clinostat 2D ag déanamh aithrise ar an timpeallacht domhantarraingthe gar-nialas (micreagrafacht). Is bith-imoibreoir é an Rotary Culture Max (RCMW ™; Synthecon® Inc-Houston, TX, USA) atá feistithe le soitheach saothraithe cille a ionchorpraíonn croí perfusion microporous agus córas ocsaigineadóir inlíne, a sholáthraíonn gású cothaitheach agus seachtrach na meán, dá bhrí sin árachú a dhéanamh ar mhalartú ceart gáis agus ar thimpeallacht cultúir íseal lomadh. Bhí an seomra pacáilte leis na meáin chultúir ina raibh na cealla. Rothlaigh an seomra seo go cothrománach timpeall ais amháin ingearach le fórsa an domhantarraingthe ar luas 10 rpm. Cuireadh an clinostat 2D taobh istigh den ghorlann taisithe 37 ◦C in atmaisféar 5% CO2. Baineadh cealla A549 microgravity iar-insamhalta (SMG) ag 24, 48, agus 72 h. Chun timpeallacht ailse scamhóg inchomparáide a chruthú, saothraíodh cealla A549 i bplátaí cultúir ag GG, i riocht neamh-rothlach nó statach, agus coinníodh iad in aice leis an bhfeiste taobh istigh den gorlann tais (37 ◦C). Tugtar an grúpa rialaithe ar na cealla seo agus baineadh iad freisin ag 24, 48, agus 72 h.
4.7. Measúnacht Inmharthanachta Cille
Maidir leis na coinníollacha GG, síolaíodh cealla A549 i 24-plátaí saothraithe cille tobair ag dlús 3.0 × 104 chealla in aghaidh an 500 µL. Baineadh cealla trí trypsinization ag 24, 48, agus 72 h tar éis síolú, ansin lártheifneoirithe ag 200 × g ar feadh 5 nóiméad. Rinneadh millíní cille a fuarthas a athdhéanamh sna meáin chultúir. Maidir le coinníollacha SMG, síolaíodh cealla A549 sa chóras rothlach clinostat 2D ag dlús 6.0 × 104 cealla in aghaidh 1 mL. Baineadh cealla ag 24, 48, agus 72 h tar éis nochtadh SMG, ansin lártheifneoirithe ag 200 × g ar feadh 5 nóiméad. Rinneadh millíní cille a fuarthas a athdhéanamh sna meáin chultúir. Rinneadh measúnacht ar eisiamh lí Trypan gorm (Sigma, SAM). Socraíodh comhaireamh na gceall trí úsáid a bhaint as Áiritheoir Cille Uathoibrithe CellDrop™.
4.8. Imoibriú Slabhra Polymerase Fíor-Ama Cainníochtúil (qRT-PCR)
Leibhéil slonn géine (leibhéil mRNA) de na géinte sainaitheanta in silico (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP, agus BPIFA1) mar aon le marcóirí géine EMT (Tábla 3). cinneadh freisin i gcealla A549 ag qRT-PCR. Go hachomair, rinneadh eastóscadh iomlán RNA ó chealla ag baint úsáide as RNEasy Mini Kit (QIAGEN, Hilden, an Ghearmáin) ag 24, 48, agus 72 h ag GG agus tar éis nochtadh do SMG trí phrótacail an mhonaróra a leanúint. Trascríobhadh µg amháin den RNA iomlán droim ar ais chuig DNA comhlántach aon-shnáithe (cDNA) i dtoirt imoibrithe 20 µL ag baint úsáide as trealamh sintéise cDNA iScript™ (Thermo, Waltham, MA, SAM). Rinneadh qRT-PCR ag baint úsáide as PowerUp™ Sybr™ Green master mix (Thermo, SAM) i meaisín pcr Quant Studio 5 (Thermo, SAM). Bhí céimeanna aimplithe PCR mar seo a leanas: céim dínádúraithe tosaigh ag 95 ◦C ar feadh 3 nóiméad, teocht annealaithe na sprice géine ar feadh 30 s, agus ansin 72 ◦C ar feadh 30 s. Fuarthas luach timthriall tairsí an fhluaraiseachta do gach géine. ∆∆ Baineadh úsáid as an modh Cq chun an t-athrú fillte coibhneasta i slonn géine a ríomh tar éis normalaithe go dtí an ghéin coimeádta, Glyceraldehyde 3-fosfáit díhidrigineáis (GAPDH).
Tábla 3. Liosta de na primers daonna. NOX1, NADPH Ocsaídáis 1; GDA, Guanine Deaminase; TCN1, Trascóbalamin 1; FCGBP, Próitéin Ceangailteacha Gáma Fc; BPIFA1, BPI Fill Ina bhfuil Teaghlach A Ball 1; AZGP1, Alfa-2-Glycoprotein 1; CFB, Fachtóir Comhlánaithe B; VTCN1, Fearann V-Socr ina bhfuil T Cosc ar Ghníomhachtú Cille 1; AGR3, Grádán Anterior 3; CTS1, suppressor meall chimeric 1; F5, Fachtóir Téachta V; CEACAM6, CEA Móilín Greamaitheachta Cealla 6; BPIFB1, Fillte BPI Ina bhfuil Ball Teaghlaigh B 1; ZO-1, folaíonn Zonula próitéin 1; MMP-9, maitrís metalloproteinase 9; MMP-2, maitrís metalloproteinase 2; agus GAPDH, Glyceraldehyde 3-fosfáit dehydrogenase
4.9. Anailís ar Idirghníomhaíocht Géine-Géine
Cuireadh sonraí ó in vitro qRT-PCR i bhfeidhm in anailís idirghníomhaíochta géine-géine ag baint úsáide as uirlis gréasáin in silico GeneMANIA (http://genemania.org/; rochtain ar an 11 Samhain 2021), algartam líonra chun feidhmeanna géine a thuar ag baint úsáide as sraith mór de sonraí comhlachais feidhme. Rinneadh é seo chun idirghníomhaíochtaí idir/i measc na ngéinte iarrthóra roghnaithe a mheas tuilleadh; FCGBP, CST1, F5, CFB, agus BPIFB1 le géinte EMT; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1, agus SNAI1, chomh maith le géinte a bhaineann le himirce cille, MMP2 agus MMP9.
4.10. Anailís staitistiúil
Baineadh úsáid as bogearraí GraphPad Prism chun anailís staitistiúil a dhéanamh. Réamhbhrúitear torthaí mar shonraí aonair nó mar mheán ± diall caighdeánach (SD). Baineadh úsáid as t-thástáil na ndaltaí chun grúpaí éagsúla a chur i gcomparáid. Rinne ANOVA athraithis aontreo (ANOVA) measúnú ar dhifríochtaí idir grúpaí. socraíodh p-luachanna agus socraíodh luachanna p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001 (*, **, agus ***, faoi seach) mheas mar suntasach. Rinneadh na turgnaimh go léir i dtrí chóip (n=3).
Tagairtí
1. Bán, RJ; Averner, MJN Daoine sa spás saor in aisce,. Dúlra 2001, 409, 1115–6828. [CrossRef]
2. Bradbury, P.; Wu, H.; Choi, JU; Rowan, AE; Zhang, H.; Pool, K.; Lauko, J. ; Chou, J. Samhaltú tionchar microgravity ar an leibhéal ceallacha: Impleachtaí do ghalar daonna. Tosaigh. Cell Dev. Biol. 2020, 8, 96. [CrossRef] [PubMed]
3. Yuan, M.; Liu, H.; Zhou, S.; Zhou, X.; Huang, Y.-E.; Ho, F.; Jiang, W. Nochtann anailís chomhtháite ar mhodúl rialála comhlachais microgravity le dysfunctions de chórais il-chomhlachta agus tumorigenesis. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7585. [CrossRef] [PubMed]
4. Crucian, BE; Chouker, A.; Simpson, RJ; Mehta, S.; Marshall, G. ; Smith, SM; Zwart, SR; Heer, M.; Ponomarev, S.; Whitmire, A. ; et al. Dírialú an chórais imdhíonachta le linn eitilt spáis: Frithbhearta féideartha le haghaidh misin taiscéalaíochta domhain spáis. Tosaigh. Imdhíonól. 2018, 9, 1437. [CrossRef] [PubMed]
5. Nassef, MZ; Melnik, D.; Kopp, S.; Sahána, J.; Naíonán, M. ; Lützenberg, R.; Relja, B. ; Wehland, M. ; Grimm, D.; Krüger, M. Cealla ailse chíche i microgravity: Gnéithe nua le haghaidh taighde ailse. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7345. [CrossRef]
6. Takamatsu, Y .; Koike, W.; Takenouchi, T. ; Sugama, S.; Wei, J. ; Waragai, M. ; Sekiyama, K.; Hashimoto, M. Cosaint i gcoinne galar neurodegenerative ar an Domhan agus sa spás. NPJ Microgravity 2016, 2, 16013. [CrossRef]
7. Nassef, MZ; Kopp, S.; Wehland, M. ; Melnik, D.; Sahána, J.; Krüger, M.; Corydon, TJ; Oltmann, H.; Schmitz, B. ; Schütte, A. Bíonn tionchar ag microgravity réadúil ar an gcíteis-chnámharlach agus ar ghreamaitheacha fócasacha i gcealla ailse chíche daonna. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3156. [CrossRef]
8. Dietz, C.; Naíonán, M. ; Romswinkel, A.; Striúb, F.; Kraus, A. Ionduchtú apoptosis agus athrú ar chloí cille i gcealla ailse scamhóg daonna faoi mhicrogravity insamhlaithe. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3601. [CrossRef]
9. Ricci, G. ; Cucina, A. ; Proietti, S.; Dincola, S.; Ferranti, F.; Cammarota, M.; Filipigh, A. ; Bizzarri, M.; Catizone, A. Cothaíonn microgravity EMT neamhbhuan i keratinocytes daonna trí rialáil a dhéanamh go luath ar E-cadherin agus trí athmhúnlú greamaitheachta cille. J. Appl. Sci. 2020, 11, 110. [CrossRef]
10. Ahn, CB; Laoi, J.-H.; Han, DG; Kang, H.-W.; Laoi, S.-H.; Laoi, J.-I.; Mac, KH; Lee, JW Cuireann microgravity insamhladh le timpeallacht ar snámh chun cinn imirce ailse scamhóg neamh-bheag cille. Sci. Ionadaí 2019, 9, 14553. [CrossRef] [PubMed]
11. Pisanu, ME; Níl, A. ; De Vitis, C.; Masiello, MG; Coluccia, P. ; Proietti, S.; Giovagnoli, MR; Ricci, A. ; Giarnieri, E.; Cucina, A. gascheall ailse scamhóg chailleann a staid réamhshocraithe stemness tar éis nochtadh do microgravity. BioMed Res. Int. 2014, 2014, 470253. [CrossRef] [PubMed]
12. Naíonán, M. ; Kossmehl, P.; Shakibaei, M.; Bauer, J. ; Kossmehl-Zorn, S.; Cogoli, A.; Curcio, F.; Oksche, A.; Wehland, M. ; Kreutz, RJC; et al. Athraíonn easpa meáchain insamhlaithe na próitéiní maitrís cíteascópacha agus eischeallacha i gcealla carcanóma thyroid papillary. Res Fíochán Cille. 2006, 324, 267–277. [CrossRef] [PubMed]
13. Chen, J. ; Microgravity, L. Cealla meall i microgravity. Sa Spás: Turas ar Mhodhanna a Chur in oiriúint do Dhaoine agus mar a Maíonn siad i Micri-dhomhantarraingt; IntechOpen: Londain, RA, 2018; Imleabhar 139, lgh. 259–268.
14. Grimm, D. ; Schulz, H.; Krüger, M.; Cortés-Sánchez, JL; Égli, M. ; Kraus, A. ; Sahána, J.; Corydon, TJ; Hemmersbach, R.; Wise, PM An comhrac in aghaidh na hailse ag microgravity: An sféaróideach ilcheallach mar mhúnla metastasis. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 3073. [CrossRef]
15. Schabhán, MB; Cote, ML Dul chun cinn agus tosaíochtaí ailse: Ailse scamhóg. Eipidéim Ailse. Bithmharc. Roimhe seo 2019, 28, 1563–1579. [CrossRef] [PubMed]
16. Chung, JH; Ahn, CB; Mac, KH; Yi, E.; Mac, HS; Kim, H.-S.; Lee, SH Éifeachtaí microgravity insamhladh ar iomadú agus imirce cille ailse scamhóg neamh-bheag. Aerosp. Med. Hum. Feidhmigh. 2017, 88, 82–89. [CrossRef]
17. Chang, D. ; Xu, H.; Guo, Y.; Jiang, X. ; Liu, Y.; Li, K.; Pan, C. ; Yuan, M.; Wang, J.; Li, T. ; et al. Athraíonn microgravity insamhlaithe acmhainneacht mhéadastatach líne cille adenocarcinoma scamhóg daonna. Vitr. cill. Dev. Biol. Anim. 2013, 49, 170–177. [CrossRef]
18. Hanahan, D. ; Weinberg, R. Sainmharcanna ailse: An chéad ghlúin eile. Cill 2011, 144, 646–674. [CrossRef]
19. Ribatti, D. ; Tamma, R. ; Annese, T. Aistriú epithelial-mesenchymal in ailse: Forbhreathnú stairiúil. Aistrigh. Oncol. 2020, 13, 100773. [CrossRef]
20. Shi, S.; Li, Q. ; Cao, Q. ; Diao, Y. ; Zhang, Y.; Yue, L.; Tá baint ag fachtóirí trascríobh Wei, L. EMT leis an greamaitheacht cille athraithe faoi éifeacht microgravity insamhlaithe nó ró-ualú de réir rialachán E-cadherin. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1349. [CrossRef]
21. Topal, U. ; Zamur, C. Microgravity, gaschealla, agus ailse: Dóchas Nua do chóireáil ailse. Gaschealla Int. 2021, 2021, 5566872. [CrossRef]
22. Ksiazkiewicz, M. ; Markiewicz, A .; Zaczek, AJ Aistriú epithelial-mesenchymal: Sainmharc i bhfoirmiú metastasis a nascann cealla meall a scaiptear agus gaschealla ailse. Paitibhitheolaíocht 2012, 79, 195–208. [CrossRef] [PubMed]
23. Yan, T. ; Tian, D.; Chen, J.; Tan, Y. ; Cheng, Y.; Sea, L.; Deng, G. ; Liu, B. ; Yuan, F.; Is Bithmharcóir Prognóiseach é Zhang, S. FCGBP agus a Bhaineann le hInsileadh Imdhíonachta i Glioma. Tosaigh. Oncol. 2021, 11, 769033. [CrossRef] [PubMed]
