R. Vesicarius L. Feidhmíonn Éifeacht Nephroprotective in Aghaidh Strus Ocsaídeach de bharr Cisplatin
Mar 26, 2022
Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com
Mahmudul Hasan Uasal1, an chuid is mó. Sayla Tasmin2, Ahmed M. El-Shehawi3, Mona M. Elseehy4, Md. Abu Reza1agus Ariful Haque2*
Teibí
Cúlra:Is druga frith-ailse den scoth é cisplatin, ach tá laghdú suntasach tagtha ar a úsáid mar gheall ar dhian-tocsaineacht nephrotoxicity. Is glasraí duilleacha é R. vicarious L. atá soiléir le poitéinseal frith-angiogenic, anti-inflammatory, anti-proliferative, hepatoprotective, agus nephroprotective. Dá bhrí sin, dearadh an staidéar seo chun a sliocht meatánóil (RVE) a iniúchadh le haghaidh éifeacht nephroprotective féideartha.
Modhanna:Go príomha, in vitro, deimhníodh gníomhaíocht frithocsaídeach RVE bunaithe ar 2, 2-défheinile-1-picrylhydrazyl (DPPH) infheidhmeacht scavening radacach saor in aisce. Ina dhiaidh sin, cuireadh cóireáil ar lucha fireanna Albino na hEilvéise le cisplatin (2.5 mg/kg) ar feadh 5 lá as a chéile chun nephrotocsaineacht a chothú. Scrúdaíodh téarnamh ó nephratocsaineacht trí RVE (25, 50, agus 100 mg/kg) a chóireáil go hinpeiritónach (ip) ar feadh na 5 lá as a chéile eile. Tar éis an chóireáil a chríochnú, rinneadh lucha a íobairt agus bailíodh na duáin. Rinneadh cuid de a homogenized i maolán fosfáit sóidiam chun leibhéal malondialdehyde (MDA) a mheas, úsáideadh cuid eile chun slonn géine (NQO1, p53, agus Bcl-2) a mheas. Ina theannta sin, rinneadh measúnú ar chumas neodraithe sárocsaíd hidrigine (H2O2) RVE i gcealla HK-2 in vitro. Ar deireadh, rinneadh fíteasceimiceacha bithghníomhacha in RVE a chinneadh ag baint úsáide as crómatagrafaíocht-mhais-speictriméadracht (GC-MS).
Torthaí:Léirigh RVE gníomhaíocht frithocsaídeach in vitro ar bhealach dáileog-spleách le luach 37.39 ± 1.89 ug/mL IC50.
Laghdaigh cóireáil le RVE go suntasach (p < {{0}}.05)="" ábhar="" mda="" i="" bhfíochán="" duáin.="" ina="" theannta="" sin,="" maolaíodh="" go="" suntasach="" (p="">< 0.05)="" léiriú="" géinte="" nqo,="" p53,="" agus="" bcl-2="" ar="" mhodh="" dáileog-spleách="" mar="" gheall="" ar="" riaradh="" rve.="" d'aisiompaigh="" rve="" go="" suntasach="" (p="">< 0.05)="" an="" leibhéal="" h2o2="" i="" gcealla="" hk-2="" go="" dtí="" beagnach="" gnáth.="" ó="" gc-ms,="" deich="" gcomhdhúil="" lena="" n-áirítear="" trí="" fhrithocsaídeoir="" aitheanta="" "4h-pyran{-4-amháin,="" 2,="" 3-dé-hiodrocsa-3,5-dé-hiodrocsa-6-meitil-"="" ,="" braitheadh="" "aigéad="" heicsadecanoic",="" agus="" "squalene".="" bhí="" an="" sliocht="" saibhir="" le="" alcalóideach="">
Conclúid:Tríd is tríd, tá éifeacht chosanta ag RVE i gcoinne damáiste duáin cisplatin-spreagtha.
Eochairfhocail:Cisplatin, R. ionadach, lucha, Duán, cealla HK-2, strus ocsaídiúcháin, géine NQO1
Coscann Cistanche deserticola galar duáin, cliceáil anseo chun an sampla a fháil
Réamhrá
Tá strus ocsaídiúcháin mar thoradh ar dhíréir idir foirmiú speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) agus meicníochtaí cosanta frithocsaídeacha rialta [1]. Mar thoradh ar imoibrithe bithcheimiceacha rialta, nochtadh go minic don timpeallacht neamhfhabhrach, agus iontógáil ardaithe xenobiotics tá táirgeadh ROS [1]. idirghníomhaíonn ROS le hiarmhair cistéin de mhóilíní comharthaíochta atá íogair ó thaobh redox lena n-áirítear fachtóirí trascríobh, fosfatas tyrosine próitéine, agus kinases próitéine; dá bhrí sin, treoraíonn ocsaídiú grúpaí thiol ar na hiarmhair seo athruithe ar na próitéiní spriocdhírithe, gníomhaíochtaí bitheolaíocha, cumas comharthaíochta, díolúine, agus paraidímí beo/marbh cille forlíontacha [2]. Tugtar ROS ar speicis cheimiceacha ina bhfuil ocsaigine a bhfuil airíonna imoibríocha acu a chuimsíonn fréamhacha saor in aisce agus móilíní neamhradacach mar superoxide agus H2O2, faoi seach [3]. Tá baint ag strus ocsaídiúcháin de bharr ROS le etiology galair iomadúla lena n-áirítear ailse. Is fás ailseach ar chealla fola laistigh den smior é leoicéime myeloid ghéarmhíochaine (AML). I measc na n-imeachtaí ceallacha agus móilíneacha is bun le AML tá damáiste DNA, iomadú clonal, bás cille méadaithe, agus éagobhsaíocht ghéiniteach bhreise, atá mar thoradh ar strus ocsaídiúcháin de bharr ROS [4]. Bronntar meicníochtaí iomadúla ar fhiseolaíocht dhaonna a fhéadfaidh frithocsaídeoirí a ghiniúint chun cosaint a dhéanamh i gcoinne strus ocsaídiúcháin as a dtiocfaidh cealla a chosaint ó éifeachtaí tocsaineacha agus a fhreastalaíonn ar ghalair a chosc [5]. Mar sin féin, forbraíonn cealla meicníochtaí endogenous chun strus ocsaídiúcháin a chomhrac agus ROS riachtanach a chaomhnú [6].
NAD(P)H: Is flavoeinsím é quinone oxidoreductase 1 (NQO1) [7] atá in ann laghdú dhá nó ceithre leictreon a chatalú agus a úsáideann an t-airí seo chun cuiníní a dhíthocsainiú [8]. Is féidir leis cealla a chosaint ó dhamáiste ocsaídiúcháin trí rothaíocht redox a choinneáil ar leataobh agus trí tháirgeadh fréamhacha saor in aisce a laghdú [8]. Chomh maith le díthocsainithe xenobiotic, tá baint ag NQO1 freisin le neodrú superoxide, modhnú díghrádú próitéamómach p53 [9], cosc Bcl-2 [10], agus claonadh feabhsaithe i leith díobhála cille [11].
Is é Cisplatin an chéad druga frith-ailse platanam atá ceadaithe ag an Riarachán Bia agus Drugaí (FDA) [12]. Feidhmíonn cisplatin apoptosis trí strus ocsaídiúcháin a spreagadh agus ró-bhrú géine suppressor meall p53 [12]. Tá roinnt éifeachtaí díobhálacha lena n-áirítear nephratocsaineacht, heipitocsaineacht, gastratocsaineacht, ototoxicity, myelosuppression, agus néarthocsaineacht mar thoradh ar strus ocsaídiúcháin de bharr cisplatin [12]. Laghdaigh na fo-iarmhairtí seo úsáid cisplatin go mór cé go bhfuil gníomhaíocht frith-ailse den scoth aige. Is eol go maith go gcothaíonn Cisplatin strus ocsaídiúcháin agus go gcuireann sé géine NQO1 faoi chois i nduáin lucha [13]. Mar sin, tá cuardach agus bailíochtú foinsí nádúrtha éifeachtacha frithocsaídeoirí ag teacht chun cinn ina réimse feasachta. D'fhéadfadh cosaint i gcoinne galair cardashoithíoch, cataracts, agus ailse a bheith mar thoradh ar iontógáil frithocsaídeoirí aiste bia atá díorthaithe ó phlandaí, mar shampla flavonoids, carotenoids, agus comhdhúile feanólacha [14].
Tugtar "Takpalong/ Chukapalong/Amlabetom" ar R. ionadach (Polygonaceae) i mBeangáilis [15]. Fásann sé i bhfásach agus i limistéir leath-fhásach na hÁise, na hAstráile agus na hAfraice Thuaidh [16] . Is planda i mbaol beag-staidéar é sa Bhanglaidéis. Sa Bhanglaidéis, itheann daoine an planda iomlán mar ghlasra tar éis cócaireacht le salann, spíosraí éagsúla, agus ola. Uaireanta, ní úsáideann daoine ach na duilleoga úra i sailéad measctha mar mhalairt ar leitís. Tá an duilleog amh beagán géar, ach éiríonn sé an-ghéar tar éis cócaireachta. Ina theannta sin, de ghnáth measctar líon beag duilleoga i miasa éisc le linn cócaireachta chun blas beagán aigéadach a bheith acu.
Tá an planda seo á úsáid mar luibh glasraí agus míochaine ar fud an domhain [17]. Úsáidtear na duilleoga agus na síolta mar antidote le haghaidh venom nathair agus scairp, faoi seach [17]. I gcóireáil tíre, tá R. ionadach in úsáid le fada i cóireáil galair hepatic, díleá olc, constipation, chairn, urlacan, flatulence, trioblóidí croí, pianta, neamhoird spleen, dyspepsia, toothache, bronchitis, plúchadh, scabies, leucoderma, agus mar a purgóideach bheith mar thoradh, stomachic, appetizer, tonic, diuretic, agus analgesic [18]. Cuimsíonn an gléasra seo comhdhúile iomadúla atá tábhachtach ó thaobh na bitheolaíochta lena n-áirítear flavonoids, anthraquinones, carotenoids, vitimíní, lipidí, agus aigéid orgánacha, a bhfuil aithne mhaith orthu mar ghníomhairí frithocsaídeacha, frithmhiocróbacha agus frith-ailse [19]. Tá quercetin (flavonoids) i méid ardaithe i ngach cuid den phlanda seo [15]. Tá 0.25 mg vitimín A, 1.33 mg vitimín C, 2.37 mg vitimín E [15], flavonoids 3.38 mg, agus 5.66 mg polyphenols [20] in aghaidh an 100 g meáchan tirim sa phlanda seo.
Léirigh Shahat agus comhghleacaithe [21] éifeachtaí frith-angiogenic agus frith-iomadaithe de mheatánól (80 faoin gcéad) sliocht R. chuid aerálach ionadach i gcoinne carcinoma hepatocellular i múnla francach. Léirigh staidéar eile poitéinseal frith-angiogenic in vitro de R. sliocht ionadach [22]. Déanann eastóscán meatánóil de R. iomlán ionadach cosaint i gcoinne heipitocsaineacht charbóin teitreaclóiríde-spreagtha in vivo [23]. Tá éifeacht frith-athlastach i gcoiníní le feiceáil le sliocht duille meatánólach R. ionadach [24]. Thuairiscigh staidéar le déanaí [25] in vivo éifeacht nephroprotective de sliocht ionadach codánach R. ethanolic i gcoinne gentamicin agus tocsaineacht déchrómáit photaisiam.
Agus an fhaisnéis thuas á cur san áireamh, bhí sé mar aidhm againn iniúchadh a dhéanamh ar éifeacht eastóscán ionadach R. (RVE) i dtéarmaí aisghabhála ó nephratocsaineacht cisplatin-spreagtha trí léiriú géine NQO1 a choinneáil i múnla ainmhí.
sochair sláinte cistanche: galair duáin a chóireáil
abhair agus modhanna
Ceimiceáin agus imoibrithe
Ceannaíodh cisplatin agus 2, 2-défheinile-1-picrylhydrazil (DPPH) ó SIGMA-ALDRICH (SAM).
Ceannaíodh Kit Measúnaithe Dathmhéadrach Creatinine (ID táirge – 700,460) ó Cayman Chemical (SAM). Ceannaíodh Meán-Iolar Athraithe Dulbecco (DMEM), séiream bó féatais (FBS), agus antaibheathach (10,000 peinicillin U/mL agus 10,000 ug/mL streiptimícin) ó Gibco (Gibco Laboratories, USA). Fuarthas trealamh Measúnachta H2O2 ROS-Glo™ agus GoTaq® qPCR Master Mix ó Promega (SAM). Ceannaíodh trealamh droim ar ais-trascríobh TIAN- Script M-MLV ó TIANGEN (An tSín) agus priméirí ó IDT (Teicneolaíochtaí Comhtháite DNA, An Mhalaeisia). Bhain grád anailíseach le gach ceimiceán agus imoibrí eile a úsáideadh sa turgnamh seo.
Bailiú samplaí plandaí agus ullmhú sliocht
Ceannaíodh plandaí ionadacha úra R. ó mhargadh áitiúil ag Sonadighi, Rajshahi, an Bhanglaidéis. D'aithin an Dr. Ahmad Humayan Kabir, Roinn na Luibheolaíochta, Ollscoil Rajshahi, an Bhanglaidéis eiseamal planda agus dheimhnigh sé é. Eiseamal faoi dearbhán uimh. Stóráladh 00095 i luibhiam Roinn na Luibheolaíochta, Ollscoil Rajshahi. Glanadh na codanna aerga den ghléasra, triomaíodh iad ag 37 céim, meilte go púdar garbh ag baint úsáide as triomadóir leictreonach, agus stóráiltear iad i gcoimeádán séalaithe ag 4 céim . Díscaoileadh an púdar fíneáil (10 g) i meatánól (500 mL). Rinneadh an t-ábhar sonicated (Soni- prep 150, an tSín) ag 20 kHz ar feadh 10 nóiméad. Rinneadh an sliocht a scagadh trí úsáid a bhaint as páipéar Scagaire Snáithín Gloine (Macherey NAGEL, GmBH, Gearmáinis) le Fearas Scagtha DURAN (Gearmáinis). Ar deireadh, díríodh an scagáit le triomadóir reoite (VirTis Benchtop Pro, SP SCIENTIFIC, USA). Tugadh RVE ar an sliocht ar deireadh.
Tástáil gníomhaíochta frithocsaídeach in vitro
Rinneadh cumas frithocsaídeach in-vitro de RVE bunaithe ar scavenging DPPH mar a thuairiscítear roimhe seo [26] gan mórán modhnú. Rinneadh cumas scavenging radacach DPPH de RVE a mheas bunaithe ar dhath corcra DPPH a thiontú go dath buí. Bhí an meascán imoibrithe i ngach feadán micrea-lártheifneoir (2 mL) comhdhéanta de thuaslagán meatánóil 95{{5} μL de radacacha DPPH (0.1 mM) agus 50 μL RVE ó chúig thiúchan éagsúla (200, 500, 1000, 2000, agus 4000 ug /mL meatánól) chun tiúchain deiridh de 10, 25, 50, 100 agus 200 ug/mL a dhéanamh. Coinníodh feadán eile ina raibh 50 μL meatánól agus tuaslagán meatánóil 950 μL de DPPH mar rialú. Fágadh na feadáin tástála ar feadh 30 nóiméad in áit dorcha. Glacadh ionsúchán na meascán ag 517 nm ag baint úsáide as speictreafótaiméadar UV-VIS GENESYS 10S (Thermo SCIENTIFIC, USA). Ar deireadh, ríomhadh céatadán na gníomhaíochta scavening radacach (RSA) bunaithe ar dhídhathú DPPH ag baint úsáide as an bhfoirmle seo a leanas faoin gcéad RSA=[(ADPPH − ARVE)/ADPPH] × 100 áit arb é ADPPH ionsúiteacht an tuaslagáin DPPH (rialú) agus is é ARVE ionsú an tuaslagáin RVE. Tugadh luach IC50 ar an tiúchan ag a raibh RVE mar thoradh ar 50 faoin gcéad RSA agus ríomhadh é ag baint úsáide as graf ag cur faoin gcéad RSA in aghaidh na dtiúchan RVE éagsúla a úsáideadh.
Ainmhithe turgnamhacha agus dearadh turgnamhach
Bhí lucha Albino na hEilvéise fireann 42 lá d'aois (meáchan coirp 30-32 g) acclimatized ar feadh seachtaine 1 sular thosaigh an turgnamh i seomra (teocht thart ar 25 ± 2 céim agus ~ 50 faoin gcéad taise, 12 h timthriall dorcha / éadrom). Cuireadh uisce óil agus bia ar fáil ad libitum.
Rinneadh lucha a dheighilt go randamach in ocht ngrúpa (n {{0}}). Cóireáladh an chéad ghrúpa (rialú) le 0.2 mL de 0.9 faoin gcéad NaCl. Cuireadh cóireáil ar na chéad cheithre ghrúpa eile le cisplatin ag 2.5 mg/kg ar feadh 5 lá ag eatramh de 24 h. Tar éis riarachán cisplatin, fágadh grúpa amháin (an dara grúpa) gan aon chóireáil bhreise agus sannadh é mar an grúpa rialaithe faoi strus. Cuireadh cóireáil bhreise ar an tríú, an ceathrú agus an cúigiú grúpa le RVE ag 25, 50, agus 100 mg / kg, faoi seach ar feadh 5 lá. Cuireadh cóireáil ar thrí ghrúpa eile le RVE amháin ag 25, 50, agus 100 mg/kg, faoi seach ar feadh 5 lá. Rinneadh cisplatin agus RVE a thuaslagadh in uisce driogtha. Tugadh gach cóireáil intraperitoneally. Tar éis 24 h de chóireáil dheireanach, euthanized na hainmhithe tar éis dislocation ceirbheacs [25]. Ansin osclaíodh an peritoneum le siosúr, bailíodh fuil tar éis puncture croí, agus bailíodh na duáin ag baint úsáide as for- ceps. Cuireadh fola faoi réir leibhéal creatinine i serum a sheiceáil. Bhí na duáin faoi réir leibhéal malondialdehyde agus léiriú géine a mheas.
Tomhas creatiníne serum
Tomhaiseadh creatinín serum ag baint úsáide as Creatinine Colorimetric Assay Kit-700,460 (Cayman Chemical, USA) de réir phrótacal an déantóra a cuireadh ar fáil leis an trealamh.
Sárocsaídiú lipid duánach a thomhas
Is táirge deiridh é malondialdehyde (MDA) de shárocsaídiú lipid i bhfíochán duáin agus déantar é a thomhas de ghnáth mar tháscaire ar tháirgeadh ROS. Mar sin féin, rinneadh leibhéal MDA a thomhas i bhfíochán duánach de réir staidéar roimhe seo [27]. Ar dtús, bhí an fíochán duánach homogenized i maolán fosfáit sóidiam (0.1 M, pH 7.4). Cuireadh réiteach imoibrithe a chuimsíonn 0.8 faoin gcéad aigéad thiobarbituric (1.5 mL), 8.1 faoin gcéad SDS (200 μL), 20 faoin gcéad (pH 3.5) aigéad aicéiteach (1.5 mL), agus dH2O (600 μL) le 100 μL fíocháin homogenized, agus gor an meascán ansin ag 95 céim ar feadh 1 h. Tar éis an fhuaraithe, lártheifneoiríodh na meascáin ag 10,000 g ar feadh 10 nóim ag 4 céim agus tomhaiseadh ionsúiteacht an t-suíochán ag 532 nm le própán tetra methoxy 1, 1, 3, 3- caighdeánach. Rinneadh méid na próitéine iomlán a thomhas trí úsáid a bhaint as trealamh Bradford Protein Assay (BIO-RAD, USA), agus trína chur i gcomparáid le halbaimin caighdeánach séiream buaibheach (BSA). Cuireadh déine sárocsaídí lipid in iúl mar nanmóilíní (nM) de MDA in aghaidh na milleagraim (mg) próitéine.
Imoibriú slabhra polaiméaráise fíor-ama (PCR fíor-ama)
Rinneadh PCR fíor-ama mar a thuairiscítear roimhe seo [28, 29]. Rinneadh RNA iomlán ó fhíochán duáin a leithlisiú trí úsáid a bhaint as imoibrí TRIzol® (Invitrogen) de réir an phrótacail a sholáthair an monaróir. Tiontaíodh an RNA iargúlta (1 ug) ina cDNA ansin. Ar an gcéad dul síos, tógadh 2 μL heicseamaire randamach (10 μM), 2 μL dNTPs (10 mM), 1 ug RNA, agus HO saor ó núicléas suas le 15 μL agus gor iad ar feadh 5 nóiméad ag 70 céim . Cuireadh an meascán láithreach ar oighear le haghaidh 2 min. Ansin cuireadh 4 μL den 1ú snáithe maolán (5x) agus 1 μL M-MLV droim ar ais transcriptase i ngach feadán agus gor ar feadh 10 nóiméad agus 50
min ag 25 céim agus 42 céim , faoi seach . Ar deireadh, díghníomhaíodh an einsím droim ar ais-transcriptase M- MLV tríd an meascán a ghoradh ag 95 céim ar feadh 5 nóiméad. Cuireadh na táirgí sintéisithe cDNA faoi réir PCR fíor-ama chun slonn géine NQO1, p53, agus Bcl-2 a chainníochtú ag baint úsáide as primers ar leith (Tábla 1 ). Rinneadh gach imoibriú (10 μL) trí chóip ar a raibh 5 μL GoTaq qPCR Master Mix (2x) (Promega, USA), 0.5 μL (10 mM) de gach primer, 3 μL uisce saor ó núicléas, agus 1 μL cDNA i 48-plátaí imoibrithe tobair. Rinneadh rothaíocht theirmeach ag baint úsáide as meaisín PCR fíor-ama (Córas PCR Fíor-ama Eco™, Illumine®, SAM) leis na coinníollacha rothaíochta seo a leanas: 95 céim ar feadh 10 nóiméad, agus 40 timthriall 95 céim ar feadh 30 s ina dhiaidh sin, 50 céim ar feadh 30 s, agus 72 céim ar feadh 25 s. Deimhníodh sainiúlacht imoibrithe PCR trí anailís a dhéanamh ar an gcuar leá ag 95 céim ar feadh 15 s, 45 céim ar feadh 15 s, agus 95 céim ar feadh 15 s. Deimhníodh sainiúlacht imoibrithe PCR trí anailís a dhéanamh ar an gcuar leá ag 95 céim ar feadh 15 s, 45 céim ar feadh 15 s, agus 95 céim ar feadh 15 s. Rinneadh an chainníochtú coibhneasta de léiriú géine ag baint úsáide as géine GAPDH endogenous mar rialú bunaithe ar an modh ΔΔCq.
Cultúir agus cóireáil cille
Coinníodh líne ceall epithelial tubule proximal duánach daonna, cealla HK-2, i DMEM arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad FBS agus antaibheathaigh (50 U/mL de peinicillin agus 50 ug/mL streiptimícin) i goradán le 5 faoin gcéad CO2 agus 95 taise faoin gcéad ag 37 céim .
Measúnacht tomhais H2O2
Rinneadh leibhéal H2O2 i gcealla HK-2 a mheas trí threalamh Measúnachta H2O2 ROS-Glo™ (Promega, SAM) a úsáid de réir an phrótacail a chuir monaróir an trealaimh ar fáil. Cuireadh cealla HK-2 (1000 cill) i 70 μL DMEM i toibreacha an 96-pláta microtiter tobair. Tar éis ligean do na cealla a cheangal ar dhromchla an bhalla, cuireadh 10 μL cisplatin (25 μM i DMEM) in ionad 10 μL DMEM ó thoibreacha pláta microtiter le 10 μL cisplatin (25 μM i DMEM) agus coinníodh i gorlann é ar feadh 12 h. Ansin, cuireadh 10 μL RVE leis chun tiúchain deiridh 125, 250, agus 500 ug/mL a dhéanamh i DMEM agus gor iad ar feadh 12 u eile. Tar éis sin, cuireadh 20 μL H2O2 Réiteach Foshraith agus 100 μL ROS-Glo Réiteach Braite ™ le gach tobar. Goradh an t-imoibriú ag teocht an tseomra ar feadh 20 nóiméad. Ar deireadh, rinneadh luminescence a thomhas trí úsáid a bhaint as GloMax Luminometer (Promega, SAM).
Anailís GC-MS
Rinneadh anailís GC-MS ar RVE (tuaslagtha i meatánól) mar a thuairiscítear roimhe seo [30] ag úsáid GCMS- QP2020 (SHIMADZU) ina bhfuil uathshamplóir (AOC{). {5}}s), uath-instealladh (AOC-20i), agus Crómatagraf Gáis (GC-2010 Plus) comhéadain le mais-speictriméadar atá feistithe le SH-Rxi{{1{{30 37}}}}Colún ribeach Sil MS (30 m × 0.25 μm ID × 0.25 μm DF). Coinníodh an Héiliam gáis iompróra ag ráta sreafa seasta de 1.72 mL/nóim, agus cuireadh toirt insteallta 5 μL faoi réir cóimheas scoilte 10:1. Coinníodh teocht an injector ag 220 céim, ba é an teocht foinse ian ná 280 céim, cláraíodh an teocht oigheann ó 80 céim (a shealbhú ar feadh 2 nóiméad), le méadú 5 céim / nóim go 150 céim (am a shealbhú 5.0 min), ansin 5 céim / nóim go 280 céim , ag críochnú le 8 nóiméad isothermal ag 280 céim . Tógadh mais-speictrim ag 1.5 kV le eatramh scanadh de 0.5 s agus ritheadh an sampla ag raon 45–350 m/z. Bhí an mhoill tuaslagóir ó 0 go 3 min, agus ba é 55 min an t-am reáchtála iomlán GC-MS. Rinneadh tiúchan coibhneasta na gcomhdhúl braite a thomhas trí chomparáid a dhéanamh idir a meánachar buaic agus an t-achar iomlán. Rinneadh léirmhíniú mais-speictrim i GC-MS ag baint úsáide as bunachair shonraí Chaighdeáin agus Teicneolaíochta na hInstitiúide Náisiúnta (NIST) lena n-áirítear NIST08, NIST08s, agus NIST14.
Anailís staitistiúil
Rinne ANOVA na hanailísí staitistiúla tar éis tástáil T3 Dunnett ag baint úsáide as bogearraí IBM SPPS (leagan 20). Cuirtear sonraí in iúl mar mhodh ± diall caighdeánach (SD). Breathnaíodh ar an gcomparáid shuntasach ag lch<0.05. all="" of="" the="" graphs="" were="" prepared="" using="" microsoft="" excel="" (version="">
Torthaí
Tástáil gníomhaíochta frithocsaídeach in vitro
Cé gur tuairiscíodh roimhe seo go raibh gníomhaíocht frithocsaídeach ag RVE, rinneamar athsheiceáil ar ghníomhaíocht frithocsaídeach ár sliocht ag baint úsáide as cumas scavenging radacach saor in aisce DPPH. RVE neodraithe DPPH dáileog-spleách (Fig. 1). Nocht RVE gníomhaíocht fhrithocsaídeach in vitro suntasach agus b'ionann luach ríofa IC50 RVE agus 37.39 ± 1.89 ug/mL.
Tomhas creatiníne serum
Méadaíodh leibhéal creatinine serum i lucha go suntasach (p < {{0}}.05)="" tar="" éis="" riarachán="" cisplatin="" (tábla="" 2).="" mhéadaigh="" cóireáil="" le="" rve="" go="" suntasach="" (p="">< 0.05)="" leibhéal="" creatinine="" ar="" bhealach="" a="" bhí="" ag="" brath="" ar="" dháileog="" (tábla="">
Sárocsaídiú lipid duánach a thomhas
I gcomparáid le rialú, mhéadaigh cisplatin go mór (p < {{0}}.05)="" ábhar="" mda="" i="" bhfíochán="" duánach="" lucha="" (tábla="" 3).="" i="" gcodarsnacht="" leis="" sin,="" rinne="" an="" chóireáil="" rve="" go="" mór="" (p="">< 0.05)="" mda="" a="" athbhunú="" go="" gnáth="" beagnach="" ar="" bhealach="" dáileog-spleách="" (tábla="">
PCR fíor-ama
Laghdaigh cisplatin go suntasach (p < {{0}}.05)="" slonn="" nqo1="" mrna="" de="" 0.15-huaire="" agus="" mhéadaigh="" p53="" agus="" bcl-2="" mrna="" slonn="" faoi="" 24="" agus="" 4.2-huaire,="" faoi="" seach="" (fíor="" 2).="" mhaolaigh="" rve="" go="" mór="" (p="">< 0.05)="" slonn="" mrna="" nqo1,="" p53,="" agus="" bcl-2="" ar="" bhealach="" dáileog-spleách="" (fíor="" 2).="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" aon="" ghrúpa="" cóireáilte="" cisplatin,="" méadaíodh="" slonn="" mrna="" nqo1="" faoi="" 3.57,="" 6.36,="" agus="" 9.28-huaire="" ag="" 25,="" 50,="" agus="" 100="" mg/kg="" rve,="" faoi="" seach="" (fíor="" 2a).="" arís,="" laghdaíodh="" slonn="" p53="" mrna="" de="" 0.63,="" 0.46,="" agus="" 0.21-huaire="" ag="" 25,="" 50,="" agus="" 100="" mg/kg="" rve,="" faoi="" seach="" (fíor="" 2b).="" laghdaíodh="" slonn="" mrna="" bcl-2="" freisin="" faoi="" 0.71,="" 0.40,="" agus="" 0.32-huaire="" ag="" 25,="" 50,="" agus="" 100="" mg/kg="" rve,="" faoi="" seach="" (fíor="" 2c).="" ach,="" níor="" aimsíodh="" aon="" athruithe="" suntasacha="" (p=""> 0.05) i leibhéal slonn na ngéinte NQO1, p53, agus Bcl-2 mar gheall ar chóireáil le RVE (Fíor 3).
H2O2measúnacht tomhais
Sa mheasúnacht tomhais H2O2, tá an H2O2measadh go raibh an leibhéal comhréireach le gealtacht. Mhéadaigh riarachán cisplatin go suntasach (p < {{0}}.05)="" leibhéal="" h2o2="" faoi="" 2.2-huaire="" (fíor="" 4).="" laghdaigh="" cóireáil="" le="" rve="" go="" mór="" (p="">< 0.05)="" leibhéal="" h2o2="" faoi="" 0.25,="" 0.38,="" agus="" 0.49-huaire="" ag="" 125,="" 250,="" agus="" 500="" ug/ml,="" dá="" réir="">
Anailís GC-MS
Iomlán de 10 gcomhdhúile (Tábla 4 agus Fíor. 5) lena n-áirítear "Isoborneol, éitear pentamethyldisilanyl (alcól sesquiterpene)", "Thimine (pirimidine nucleobase)", "4H-Py- rith-4-un, 2,{{). 8}}dé-hiodrocsa-3,5-dé-hiodrocsa-6-meitil-(saponin)", "aigéad heicsadecanóch, eistear meitile (aigéad sailleach meitile eistear)", "9,12- Aigéad octadadienoic, eistear meitile (eistear meitile aigéad sailleach)", "9-Aigéad octadecenoic (Z)-, eistear meitile (eistir meitile aigéid sailleacha)", "stearate meitile (eistear meitile aigéad sailleach)", "Diisooctyl phthalate (eistear)", "13-Docosenamide, (Z)- (alcaloid)", agus "Squalene (trí-terpene)" in RVE.
sochair cistanche tubolosa: lipidí fola a ísliú
Plé
Rinneadh staidéar cuimsitheach ar fhrithocsaídeoirí nádúrtha agus sintéiseacha agus tugadh le fios go bhfuil siad feidhmiúil chun tocsaineacht i bhfiseolaíocht ainmhithe a chosc nó a fheabhsú [31]. Is iad forlíontaí frithocsaídeacha an chomhpháirt a fhorbraítear trí shintéis cheimiceach nó trí eastóscadh ó bhianna nádúrtha ach níl siad comhionann ina gcomhdhéanamh agus na frithocsaídeoirí atá ar fáil i mbia [5]. Dá bhrí sin, déantar na tuairimí a dheighilt le himeacht ama cibé an dtugann frithocsaídeoirí sintéiseacha tairbhí sláinte comhchosúla agus atá frithocsaídeoirí nádúrtha [32]. Tá an t-áiteamh ag teacht aníos chun úsáid forlíontaí sintéiseacha frithocsaídeacha a laghdú agus foinsí eile, saor, in-athnuaite, nádúrtha agus b'fhéidir níos sábháilte d'fhrithocsaídeoirí nádúrtha éifeachtacha a lorg.
Is é ceann de na meicníochtaí is tábhachtaí ná an cosán fachtóir a bhaineann le fachtóir núicléach erythroid-2 (Nrf2) a chosnaíonn go ginearálta cealla ó strus ocsaídiúcháin-spreagtha ag strusóirí exogenous nó endogenous [27]. Spreagann na frithocsaídeoirí éifeachtacha léiriú Nrf2, a ghluaiseann isteach sa núicléas a thuilleadh agus a cheanglaíonn leis an eilimint freagartha frithocsaídeach (ARE) a spreagann léiriú céim II díthocsainiúcháin agus géine frithocsaídeach NQO1 [33, 34]. Cuirtear NQO1 in iúl go forleathan agus go difreálach ar bhealach a bhaineann go sonrach le fíocháin. Is flavoprotein frithocsaídeach cítosólach é NQO1 a chatalaíonn 2-laghdú leictreoin de quinones go hidreacuineon, rud a fhágann díthocsainiú na leictreafailí agus réamh-mheas ar rothaíocht redox [35]. De réir staidéar roimhe seo [36], gníomhaíonn -lapachone NQO1, rud a mhéadaíonn leibhéal NAD móide intracellular agus a chosnaíonn an duán ó ghortú géarmhíochaine cisplatin.
Is eol go ndéanann cisplatin damáiste spreagtha sa membrane scagacháin glomerular trí strus ocsaídiúcháin, athlasadh, agus apoptosis, rud a fhágann go laghdaítear ráta scagacháin glomerular ar fad agus go gcailltear gnáth-thréscaoilteacht membrane [37]. Dá bhrí sin, méadaíodh an leibhéal creatiníne serum. Tá creatiníne serum ar cheann de na marcóirí feidhmiúlacht duánach féideartha. Mhéadaigh cóireáil cisplatin ábhar MDA i bhfíochán duáin atá ina tháirge tánaisteach de shárocsaídiú lipid agus tá an tuarascáil seo seasmhach le staidéir roimhe seo [27, 35, 37, 38]. Laghdaigh cóireáil le RVE go mór ábhar MDA i bhfíochán duáin. Ag an am céanna, laghdaíodh an leibhéal creatinine freisin, rud a léiríonn éifeacht leasaithe RVE.
Ina theannta sin, laghdaíodh slonn NQO1 go suntasach, agus méadaíodh slonn p53 agus Bcl-2 go suntasach tar éis nochtadh do chisplatin. Maidir le léiriú NQO1 agus p53 in vivo, tá ár dtoradh comhsheasmhach le réamhstaidéar [13]. Léirigh staidéar le déanaí [39] gur laghdaigh cisplatin léiriú Bcl-2 go suntasach i duáin na lucha, ach is ionadh go bhfuaireamar léiriú ardaithe. D’fhéadfadh an difríocht seo a bheith mar thoradh ar dhifríocht dáileog [40] mar d’úsáid Mohamed agus comhghleacaithe [39] 8 mg/kg ar feadh 12 lá, ach d’úsáideamar 2.5 mg/kg ar feadh 5 lá amháin. Luaigh staidéar eile [41] go bhféadfadh cisplatin léiriú Bcl-2 a mhéadú ag dáileog nuair a bhíonn sé neamh-cíteatocsaineach. Arís, íogaíonn slonn méadaithe Bcl-2 cealla i dtreo strus ocsaídiúcháin [40].
Mar sin féin, tá léiriú p53 íseal ag gnáthchoinníollacha fiseolaíocha ach táthar ag súil go ndéanfar é a uasrialú nuair a dhéantar cóireáil air le cisplatin toisc go ngníomhaíonn an gníomhaire ceimiteiripeach seo atá bunaithe ar platanam cosán apoptotic spleách p53. Chomh luath agus a dhéileáil muid le lucha le cisplatin, tháinig méadú suntasach ar p53 i duáin lucha i gcomparáid le rialú. Tá Bcl proto-oncogene eile comhghaolaithe le leibhéal slonn NQO1 freisin. Ag déanamh aithrise ar an slonn p53, fuaireamar amach freisin gur méadaíodh na leibhéil Bcl- 2 le cóireáil cisplatin, ach gur athchlúdaíodh go mór iad ar chóireáil le RVE. Tá sé seo indéanta, mar fhreagra ar strus ocsaídiúcháin, go gcuirtear géine p53 i ngníomh agus go n-eascraíonn sé timthriall cille, senescence, nó apoptosis [6] a ghabháil. Le díthocsainiú, is minic a mheastar go bhfuil ró-fhorleathadh NQO1 comhghaolú le apoptosis i gcealla ailse [10], cé go bhfuil an mheicníocht bhunúsach apoptosis agus ró-bhrú NQO1 fós conspóideach. Ina theannta sin, i gcarcanóma hepatocellular, laghdaíonn ró-eisbhrú NQO1 an slonn Bcl-2 [10]. Tá p53 cosúil leis an gcomhghaol leis an slonn NQO1 ag próta-oncogene Bcl- 2 freisin. Is fachtóir trascríobh seicheamh-shonrach é p53 a ghníomhaíonn go leor cineálacha strus ceallacha [42], ach d'fheidhmigh ró-bhrú Bcl-2 mar pore-cobhsaitheoir mitochondrial chun scaoileadh cytochrome-c ar strus ocsaídiúcháin [12] a éascú. In ár gcás, rinneamar seiceáil ar an dá fhreagra géine le cóireáil cisplatin i bhfíochán duáin gnáth agus fuair muid a léiriú méadaithe. D'iompaigh cóireáil RVE slonn p53 agus Bcl-2 go dtí beagnach gnáth ar bhealach dáileog-spleách. Taispeánadh an cineál aisghairm slonn Bcl-2 seo freisin trí úsáid a bhaint as scavenger ROS Trolox [43]. Ina theannta sin, tháinig méadú suntasach ar an leibhéal H2O2 i gcealla HK-2 mar gheall ar chóireáil le cisplatin in vitro. Tar éis cóireála le RVE, athchóiríodh an leibhéal H2O2 go mór go dtí an gnáthleibhéal. B'fhéidir go bhfuil sé seo mar gheall ar éifeacht cóireála RVE a mhéadaigh léiriú NQO1 [44], a fheidhmíonn cosaint i gcoinne strus ocsaídiúcháin [6].
Dheimhnigh crómatagram GC-MS go raibh deich gcomhdhúil in RVE. Ina measc seo, tá "4H-Pyran- 4-amháin, 2, 3-dé-hidrigine-3,5-dé-hiodrocsaí-6-meitil-", "aigéad heicsadecanóch", agus " Is frithocsaídeoirí cáiliúla iad Squalene[45-47]. B'fhéidir go raibh éifeacht sineirgisteacha nephroprotective sineirgisteacha ag na trí chomhdhúil seo. Thuairiscigh staidéir roimhe seo freisin faoi ionduchtú léiriú NQO1 ag vitimín A [48], vitimín C [49], vitimín E [50], flavonoids [51], agus polyphenols [50]. Mar sin, molann an tuarascáil seo a shoiléiriú an bhfuil aon rud sa sliocht áirithe seo i measc vitimín A, vitimín C, vitimín E, flavonoids, agus polyphenol, nó nach bhfuil.
Conclúid
Tugann an toradh foriomlán le fios go bhfuil RVE éifeachtach go fiseolaíoch chun na duáin a chosaint ó dhamáiste de bharr cisplatin. Dá bhrí sin, tá sé ríthábhachtach na comhdhúile cruinne atá freagrach as maolú a dhéanamh ar nephratocsaineacht cisplatin-spreagtha a d'fhéadfadh a bheith tairbheach dá gcur i bhfeidhm ag an duine a shoiléiriú.
Buíochas
Tá na húdair buíoch do Chomhairle Taighde Eolaíoch agus Tionscail na Bhanglaidéis (BCSIR), Brainse Rajshahi as tacaíocht saotharlainne a sholáthar chun RNA a chainníochtú.
Ranníocaíochtaí údair
Rinne MMH dearadh turgnamhach, turgnamh, anailís agus ullmhú sonraí, scríobh agus eagarthóireacht lámhscríbhinní, athbhreithniú agus dréachtú lámhscríbhinní; rinne MST & MME turgnamh agus anailís sonraí; Chuir AME & MAR le maoirseacht agus acmhainní; Bhí AH freagrach as coincheapú, maoirseacht, acmhainní agus eagarthóireacht lámhscríbhinní. Gach údar
athbhreithniú ar an lámhscríbhinn. Léadh agus cheadaigh na húdair an lámhscríbhinn deiridh.
Maoiniú
Bhí an obair reatha maoinithe ag uimhir Thionscadal Tacaíochta Taighdeoirí Ollscoil Taif (TURSP - 2020/75), Ollscoil Taif, Taif, an Araib Shádach.
Infhaighteacht sonraí agus ábhar.
Tá na sonraí ábhartha go léir ar fáil agus d’fhéadfaí iad a sholáthar arna iarraidh sin don údar comhfhreagrach.
Dearbhuithe
Faomhadh eitice agus toiliú le bheith rannpháirteach
D’fhaomh an Coiste Institiúideach Ainmhithe, Eitice Míochaine, Bithshábháilteachta agus Bithshlándála (IAMEBBC), Institiúid na nEolaíochtaí Bitheolaíochta (IBSc), Ollscoil Rajshahi, an eitic chun an turgnamh seo a dhéanamh, agus soláthraíodh é faoin meamram uimhir 31/{{1} }IAMEBBC/IBSc. Rinneadh gach modh de réir na dtreoirlínte agus na rialachán a chuir an coiste eitice thuasluaite ar fáil. Rinneadh an staidéar seo de réir threoirlínte ARRIVE (Taighde Ainmhithe: Tuairisciú ar Thurgnaimh In Vivo). Níl "toiliú chun páirt a ghlacadh" infheidhme maidir leis an staidéar seo.
Sonraí an Údair
1Saotharlann Bitheolaíochta Mhóilíneach agus Eolaíochta Próitéin, Roinn na hInnealtóireachta Géiniteacha agus na Biteicneolaíochta, Dámh na Beatha agus Eolaíochtaí na Cruinne, Ollscoil Rajshahi, Rajshahi 6205, An Bhanglaidéis. 2Saotharlann Paiteolaíochta Mhóilíneach, Institiúid na nEolaíochtaí Bitheolaíochta, Ollscoil Rajshahi, Rajshahi 6205, An Bhanglaidéis. 3An Roinn Biteicneolaíochta, Coláiste na hEolaíochta, Ollscoil Taif, Bosca Poist 11099, Taif 21944, An Araib Shádach. 4An Roinn Géineolaíochta, Dámh na Talmhaíochta, Ollscoil Alexandria, Alexandria 21545, An Éigipt.
Tagairtí
1. Bagchi K, Puri S. Fréamhacha saor in aisce agus frithocsaídeoirí i sláinte agus galair: athbhreithniú. Sláinte na Meánmhara Thoir J. 1998; 4:350-60.
2. Koh EM, Lee EK, Amhrán CH, Song J, Chung HY, Chae CH, et al. Feabhsaítear éagothroime PTK/PTP de bharr strus ocsaídiúcháin agus díghníomhú PP2A de bharr Ferulate, atá ina chomhpháirt ghníomhach de ghaiméite cruithneachta. Tocsain Res. 2018; 34(4):333–41.
3. Hassan AI, Ibrahim RY. Ascites roinnt próifílí géiniteacha in ae Ehrlich lucha a bhfuil siadaí faoi strus ionradaíochta. J Radiat Res Appl Sci. 2014; 7(2):188–97.
4. Zhou FL, Zhang WG, Wei YC, Meng S, Bai GG, Wang BY, et al. Baint strus ocsaídiúcháin in athiompú leoicéime myeloid géarmhíochaine. J Biol Ceimic. 2010; 285(20): 15010–5.
5. Pham-Huy LA, He H, Pham-Huy C. Fréamhacha saor in aisce, frithocsaídeoirí i ngalar agus sláinte. Int J Biomed Sci. 2008; 4:89–96.
6. Srijiwangsa P, Na-Bangchang K. Róil NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 (NQO1) ar dhul chun cinn ailse agus chemoresistance. J Clin Exp Oncol. 2017; 6:1–6.
7. Siegel D, Yan C, Ross D. NAD (P) H: quinone oxidoreductase 1 (NQO1) san íogaireacht agus friotaíocht le quinones antitumor. Cógaslann Bithcheimic. 2012; 83(8):1033–40.
8. Dinkova-Kostova AT, Talalay P. NAD (P) H: quinone acceptor oxidoreductase 1 (NQO1), einsím frithocsaídeach ilfheidhmeach agus cytoprotection thar a bheith versatile. Bithcheimic Arch. 2010; 501(1):116–23.
9. Cullen JJ, Hinkhouse MM, Grady M, Gaut AW, Liu J, Zhang YP, et al. Cosc Dicumarol ar NADPH: spreagann quinone oxidoreductase cosc ar fhás ar ailse pancreatach trí mheicníocht superoxide-mediated. Ailse Res. 2003; 63(17):5513–20.
10. Zhang X, Han K, Yuan DH, Meng CY. Ró-eisiúint NAD (P) H: cuireann quinone oxidoreductase 1 bac ar iomadú cille carcanóma hepatocellular agus apoptóis spreagtha tríd an gcosán AMPK/PGC-1 a ghníomhachtú. DNA Cell Biol. 2017; 36(4): 256–63.
11. Zeekpudsa P, Kukongviriyapan V, Senggunprai L, Sripa B, Prawan A. Chuir deireadh le NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 le claonadh na gcealla cholangiocarcinoma le gníomhairí ceimiteiripeacha. J Cait Clin Ailse Res. 2014; 33(1):1–13.
12. Dasari S, Tchounwou PB. Cisplatin i teiripe ailse: meicníochtaí móilíneacha gníomhaíochta. Eur J Pharmacol. 2014; 740:364-78.
13. Laghdaíonn Zhu X, Jiang X, Li A, Zhao Z, Li S. S-Allylmercaptocysteine nephrotoxicity cisplatin-spreagtha trí shochtadh apoptosis, strus ocsaídiúcháin, agus athlasadh. Cothaithigh. 2017; 9(2):166.
14. Matkowski A. Cultúr plandaí in vitro le haghaidh táirgeadh frithocsaídeoirí - athbhreithniú. Biteicneolaíocht Adv. 2008; 26(6):548–60.
15. El-Bakry AA, Mostafa HAM, Alam EA. Gníomhaíocht frithocsaídeach de Rumex ionadach L. ag an gcéim fásúil fáis. na hÁise J Pharm Clin Res. 2012; 5:111–7.
16. Rechinger KH. Rumex (Polygonaceae) san Astráil: athmhachnamh. Nuatsia. 1984; 5:75-122.
17. Shahat AA, Alsaid MS, Alyahya MA, Higgins M, Dinkova-Kostova AT. NAD (P) H: Gníomhaíocht inducer Quinone oxidoreductase 1 de roinnt plandaí míochaineacha na hAraibe Sádaí. Planta Med. 2013; 79(06):459–64.
18. El-Hawary SA, Sokkar NM, Ali ZY, Yehia MM. Próifíl de chomhdhúile bithghníomhacha de Rumex ionadach L. J Bia Sci. 2011; 76(8): C1195–202.
19. Barbosa-Filho JM, Alencar AA, Nunes XP, Tomaz AC, Sena-Filho JG, Athayde- Filho PF, et al. Foinsí alfa-, béite-, gamma-, deilt-agus carotenes eipsealón: athbhreithniú fichiú haois. An tUrr Bras. 2008; 18(1):135–54.
20. Laouini SE, Ouahrani MR. Scagadh fíteiceimiceach, gníomhaíocht frithocsaídeach in vitro agus antibacterial de Rumex vicarious L. extract. Staidéar Eolaíochta Maidir le: Ceimic Chem Engi Biotech Bia Ind. 2017; 18:367-76.
