Gliocóisídí Feinileatánóideach De Deserticola Cistanche: Meicníocht na hÉifeachta Néarchosanta

Maiquan Li, et al

Coimriú:Fachtóir núicléach erythroid 2-fachtóir gaolmhar 2 (Nrf2) is príomhfhachtóir trascríobh i gcoinne strus ocsaídiúcháin agus neamhoird néar-mheathlúcháin.Gliocóisídí feinileatánóideach(PhGs; salidroside,aicteóis, isoacteoside, agusechinacoside) frithocsaídeoir a thaispeáint agusneuroprotectivebithghníomhaíochtaí. Rinneadh an staidéar seo chun imscrúdú a dhéanamh ar anneuroprotectiveéifeacht agus meicníocht mhóilíneach dePhGs. PhGschuir réamhchóireáil faoi chois go suntasach H2O2-chíteatocsaineacht spreagtha i gcealla PC12 trí thrasuíomh núicléach Nrf2 a spreagadh agus slonn próitéine íosrialaithe heme oxygenase 1 (HO-1), NAD(P)H quinone oxidoreductase 1 (NQO1) a aisiompú ), fo-aonad ligáis-catalytach glutamáit-cistéin (GCLC), agus fo-aonad modhnóra ligáis glutamáit-cistéin (GCLM). Laghdaigh an t-inhibitor siRNA Nrf2 nó HO{-1 prótoporphyrin since (ZnPP) anneuroprotectiveéifeacht. Léirigh PhGanna idirghníomhú féideartha le suíomh ceangailteach Nrf2 i bpróitéin 1 (Keap1) atá cosúil le ECH-chomhlachas Kelch. D’fhéadfadh an toradh seo tacú leis an hipitéis gur gníomhaitheoirí Nrf2 iad PhGanna. Léiríomar an ceangal féideartha idir PhGanna agus an cosán Nrf2/ARE arna ghníomhachtú ag Keapl, agus go raibh éifeachtaí feabhsaithe ag PhGanna le níos mó gliocóisídí.

Eochairfhocail:Ceap1; Nrf2;Neuroprotective; cealla PC12;PhGs(NQO1), i measc cinn eile [5-7]. Léiríonn an próiseas seo príomhchéim maidir le cealla a chosaint ó strus ocsaídiúcháin agus tá sé ag teacht chun cinn mar sprioc teiripeach tuar dóchais inti do neuroprotection [8]. Thuairiscigh Gaia go maolaíonn Nrf2 LRRK2- agus neurodegeneration spreagtha a-synuclein trí hoiméastáis próitéine néaróin a chur chun cinn go potent ar bhealach uathrialach cille agus am-spleách [9].

Gliocóisídí feinileatánóideach (PhGs(b) arb iad is sainairíonna iad aigéad cinnamic agus hiodrocsaile feinile eitile a ghabhann le ap -glúcópyranós trí naisc eistear agus glycosidic, faoi seach. Tá na móilíní seo ina mbaill de ghrúpa táirgí nádúrtha intuaslagtha in uisce a dháileadh go forleathan i ríocht na bplandaí [10]. Tá sé léirithe ag staidéir in vitro agus in vivo go bhfuil frithocsaídeach ag na comhdhúile seo [11],neuroprotective[12], antibacterial,

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Tá airíonna neuroprotective ag Cistanche, cliceáil anseo chun tuilleadh a fhoghlaim

1. Réamhrá

Spreagann strus ocsaídiúcháin, atá ina éagothroime de homeostasis frithocsaídeach, sárocsaídiú lipid, díobháil do phróitéin agus DNA, aosú cille, agus bás cille. Is dócha go gcuireann an próiseas seo le roinnt neamhoird néar-mheathlúcháin, amhail galar Alzheimer (AD), galar Parkinson (PD), agus ischemia / reperfusion [1]. Is eol go ndéanann sárocsaíd hidrigine (H2O2), atá ar cheann de na príomhspeicis ocsaigin imoibríoch (ROS), sárocsaídiú lipid agus damáiste DNA [2]. Thairis sin, is foinse endogenous de fréamhacha saor in aisce hiodrocsaile é H2O2 a chuireann le leibhéal cúlra strus ocsaídiúcháin cheallacha [3,4]. Mar sin, d’fhéadfadh go mbeadh an poitéinseal ag straitéisí teiripeacha chun apoptosis ocsaídiúcháin de bharr strus a chosc i gcóireáil galair neurodegenerative.

Is fachtóir trascríobh é fachtóir núicléach erythroid 2-fachtóir gaolmhar 2 (Nrf2) a bhfuil baint láidir aige le strus ocsaídiúcháin. Spreagann gníomhachtú Nrf2 tras-scríobh na ngéinte frithocsaídeacha agus díthocsainiúcháin iomadúla, lena n-áirítear heme oxygenase-1 (HO-1), NAD(P)H quinone oxidoreductase 1

frith-athlastach [13], agus inmunomodulatory [14] bithghníomhaíochtaí. Is comhábhar coitianta é Osmanthusfragrans i roinnt bianna Áiseacha agus tá sé ite le fada. Léirigh muid roimhe seo gur fheabhsaigh sleachta bláthanna O.fragrans foghlaim spásúil agus cuimhne, chuir siad bac ar damáiste ocsaídiúcháin, agus léirigh siad gníomhaíochtaí neuroprotective in aosú d-galactós-spreagtha i múnla luch ICR [15]. Is iad Salidroside, acteoside, agus isoacteoside an príomh-fhreagairt PhGs do ghníomhaíochtaí frithocsaídeacha sleachta bláthanna O.fragrans [16].

Fuair ​​​​staidéir ar éifeacht neuroprotective PhG torthaí inmhianaithe. Laghdaigh Salidroside go suntasach apoptosis cille de chealla PC12 a bhí nochta i MPP móide [17,18]. Mhaolaigh Acteoside freisin apoptosis móide-spreagtha MPP agus strus ocsaídiúcháin i gcealla PC12 [19] agus gortú cille SH-SY5Y de bharr A p25-35-[20].EchinacosideRinneadh imscrúdú ar apoptosis spreagtha neacróis meall-a (TNFa) i gcealla SH-SY5Y [21], tocsaineacht dopaminergic spreagtha MPTP i lucha [22], cultúir phríomha glutamate-ghortaithe de chealla cortical francach [23], agus {{ 9}}Damáiste de bharr OHDA i gcealla PC12 [24]. Léirigh na torthaí gur léirigh PhGanna éifeacht cíteachosanta agus gur gníomhairí féideartha iad chun galair néar-mheathlúcháin a chóireáil. Léirigh staidéir go bhfuil airíonna frithocsaídeacha PhGanna faoi go leor bithghníomhaíochtaí eile do na comhdhúile seo [25]. Mar sin féin, is beag staidéar a rinne imscrúdú ar mheicníocht mhóilíneach PhGanna i gcoinne tocsaineachta ocsaídiúcháin.

Inár staidéar, roghnaigh muid ceithre PhG tipiciúil mar seo a leanas: salidroside (monaisiúicrídí feinileatánóideach), acteoside (déshiúicrídí feinileatánoid), isoacteoside (déshiúicrídí feinileatánóideach), agusechinacoside(tríshiúicrídí feinileatánóideach). D’fhostaigheamar múnla bás néaránach ag baint úsáide as cealla PC12 difreáilte [26] chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht chosanta agus meicníocht mhóilíneach PhG ar mhúnla cille PC12 spreagtha H2O2-. Léiríomar gur ghníomhaigh PhGanna an cosán Nrf2/ARE trí cheangal a dhéanamh ar phróitéin 1 (Keap1) a bhaineann le ECH mar Kelch. Rinne an próiseas seo na heinsímí frithocsaídeacha a rialáil agus mhéadaigh sé friotaíocht na gcealla PC12 in aghaidh strus ocsaídiúcháin.

2. Torthaí

2.1. PhGs H2O Shochtadh2-Cíteatocsaineacht Ionduchtaithe i gCealla PC12

Tástáladh éifeachtaí citotocsaineacha H2O2 agus PhG (0.1,1,5, agus 10 卩g/mL) ar chealla PC12. Léirigh na torthaí gur tharla caillteanas H2O2 d’inmharthanacht cille PC12 ar mhodhanna tiúchan-spleách agus am-spleách (Fíor 1A). Mar thoradh ar nochtadh cealla PC12 do 200 H2O2 ar feadh 2 h bhí inmharthanacht cille 57.4 faoin gcéad . Ní raibh aon éifeacht ag réamhchóireáil cealla le PhG ag 0.1,1, 5, agus 10 -/mL ar inmharthanacht cille (Fíor 1B) agus bhí cosaint shuntasach ar chealla PC12 ó dhamáiste spreagtha H2O trí inmharthanacht na gceall a fheabhsú mar 9.549-22.141 faoin gcéad , 12.092-25.289 faoin gcéad , 1.470-9.289 faoin gcéad , agus 3.411-11.441 faoin gcéad , faoi seach (Fíor 1C) . Mar sin féin, salidroside (0.1 ^ g/mL), isoacteoside (0.1, 1, 5, agus 10 ^g/mL),echinacoside(0.1,1, agus 5 ^g/mL) níor léirigh réamhchóireáil aon difríocht shuntasach ar ghortú cille de bharr HzOz. Mhéadaigh réamhchóireáil ceall le PhGanna an tréith moirfeolaíoch a chothaíonn H2O2 (Fíor 1D).

Fíor 1. Shocht PhGanna cíteatocsaineacht spreagtha H2O i gcealla PC12. Braitheadh ​​inmharthanacht cille le measúnacht MTT. Éifeacht citotocsaineach H2O2 (A) agus PhGs (B) ag tiúchan éagsúla ar chealla PC12. (C) Laghdaigh PhGanna H2O{2-de bharr laghdú ar inmharthanacht cille. Goradh cealla PC12 le PhGanna ({{10}}.1, agus 10 wg/mL) ar feadh 24 h, agus ansin goraíodh iad le 2{00 pM H2O2 le haghaidh ceann eile 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. (D) Breathnú moirfeolaíoch. Breathnaíodh cealla tar éis cóireála le micreascóp codarsnachta céime (x100), CK: gnáthghrúpa, H2O2: grúpa cóireáilte H2O2, HL: grúpa cóireáilte dáileog íseal salidroside, HH: grúpa cóireáilte dáileog ard salidroside, ML: grúpa cóireáilte dáileog íseal acteoside, MH: grúpa cóireáilte dáileog ard acteoside, IL: grúpa cóireáilte dáileog íseal isoacteoside, IH: grúpa cóireáilte dáileog ard isoacteoside, SL: grúpa cóireáilte dáileog íseal echinacoside, SH: grúpa cóireáilte dáileog ard echinacoside. ** p < 0.01="" i="" gcoinne="" grúpa="" neamhchóireáilte;="" #="" p="">< 0.05,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2;="" ##="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="">

2.2. PhGanna faoi Shochtadh H2O2-Carnadh Incheallach Ioncheallach ROS, Sárocsaídiú Lipid (MDA), agus Gníomhaíochtaí Méadaithe Superoxide Dismutase (SOD) i gCealla PC12

Mhéadaigh nochtadh cealla PC12 do 200 pM H2O2 ar feadh 2 h leibhéil ROS, ábhar MDA, agus laghdaigh gníomhaíocht SOD (Fíor 2). Laghdaigh réamhchóireáil PhG leibhéal ROS, salidroside, agus acteoside, agus an dáileog ard de réamhchóireáil isoacteoside agus echinacoside go suntasach maolaithe leibhéal ROS (p < 0.01).="" níor="" léirigh="" pretreatment="" salidroside="" aon="" éifeacht="" ar="" ábhar="" mda,="">aicteóismhaolaigh réamhchóireáil ábhar MDA go suntasach (p < 0.05).="" laghdaigh="" réamhchóireáil="" isoacteoside="" agus="" echinacoside="" go="" mór="" ábhar="" mda="" go="" dtí="" níos="">

Fíor 2. Chuir PhGs bac ar charnadh ROS agus MDA agus mhéadaigh siad gníomhaíochtaí SOD i gcealla PC12. Goradh cealla PC12 le PhG (0.1, agus 10 4g/mL) ar feadh 24 h, agus ansin goraíodh iad le 200 |^M H2O2 le haghaidh ceann eile 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. (A) Chuir PhGanna bac ar charnadh ROS agus MDA. (B) Chuir PhGs bac ar charnadh MDA. (C) Mhéadaigh PhGanna gníomhaíochtaí SOD. CK: gnáthghrúpa, Múnla: grúpa cóireáilte H2O2, Salidroside: grúpa cóireáilte salidroside, Acteoside: grúpa cóireáilte acteoside, Isoacteoside: grúpa cóireáilte isoacteoside, Echinacoside: grúpa cóireáilte echinacoside. ** p < 0.01="" versus="" grúpa="" neamhchóireáilte;="" #="" p="">< 0.05,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2,="" ##="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="">

2.3.PhGanna H2O aisiompaithe2-Apoptosis Ionduchtaithe i gCealla PC12

Mhéadaigh cóireáil H2O2 (200 |1M) ar feadh 2 h go suntasach apoptosis i gcealla PC12, le ráta iomlán apoptotic suas le 16.02 faoin gcéad (Fíor 3). Mar sin féin, laghdaigh réamhchóireáil le PhGs (0.1 agus 10 卩g/mL) ar feadh 24 h an ráta apoptosis ar bhealach a bhraitheann tiúchan (p < 0.01).="">aicteóis, isoacteoside, agusechinacosidelaghdú suntasach ar an gcéatadán apoptosis cille faoi 4.750-6.627 faoin gcéad , 4.413-5.800 faoin gcéad , 6.593-10.047 faoin gcéad , agus 1.530-7. 510 faoin gcéad , faoi seach .

Fíor 3. D'aisiompaigh PhGanna apoptóis spreagtha H2O i gcealla PC12. Goradh cealla PC12 le PhGs (0.1, agus 10 卩g/mL) ar feadh 24 h, agus ansin goradh iad le 200 pM H2O2 ar feadh 2 uair eile tar éis na PhGanna a bhaint. Ansin, tomhaiseadh apoptosis trí chitoiméadracht sreafa ag baint úsáide as taiscéalaí fluaraiseacha PI/FITC.

CK: gnáthghrúpa, Múnla: grúpa cóireáilte H2O2, Salidroside: grúpa cóireáilte salidroside, Acteoside: grúpa cóireáilte acteoside, Isoacteoside: grúpa cóireáilte isoacteoside,Echinacoside: echinacosidegrúpa cóireáilte. ** p < {{0}}.01="" versus="" grúpa="" neamhchóireáilte;="" ##="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="">

2.4. PhGanna maolaithe H2O2-Dírialú Ionduchtaithe ar an Nrf2-TÁ Bealaí i gCealla PC12

Mar cheann de na príomhbhealaí frithocsaídeacha i bhformhór na gcineálacha cille, tá an chonair Nrf tábhachtach maidir le fás cille agus bás cille a rialáil. Dá bhrí sin, rinneamar imscrúdú an bhfuil an conair Nrf2-ARE páirteach in apoptosis spreagtha H2O trí imdhíonfhluaraiseacht agus anailís blot an Iarthair ag baint úsáide as antasubstaintí sonracha. Léirigh an measúnú imdhíonfhluaraiseachta gur spreag PhGanna (0.1 agus 10 pg/mL) traslonnú núicléach Nrf2 (Fíor 4). Tar éis cóireáil PhGs, isoacteoside, agusechinacosidemar thoradh ar aisghabháil páirteach de ghnáth-mhoirfeolaíocht na cille. Léirigh na torthaí ó anailísí blotting an Iarthair agus dlús liath nach raibh aon tionchar suntasach ag PhGs ({{0}}.1 agus 10 pg/mL) ar léiriú Nrf2 sa chiteaplasma (Fíor 5A, B) (p > {{20}}.05) ach slonn Nrf2 uasrialaithe sa núicléas (Fíor 5C,D) (p < 0.01).="" ansin,="" rinneamar="" staidéar="" ar="" ról="" nrf2="" in="" apoptosis="" spreagtha="" h2o="" tríd="" an="" sirna="" nrf2="" a="" allmhairiú.="" rinneadh="" laghdú="" suntasach="" ar="" léiriú="" próitéine="" agus="" mrna="" de="" nrf2="" i="" ngach="" grúpa="" arna="" chóireáil="" le="" sirna="" nrf2="" (fíor="" 5e-h).="" chuir="" phgs="" (0.1="" agus="" 10="" pg/ml)="" cosc="" ​​ar="" chiteatocsaineacht="" spreagtha="" h2o="" i="" ngrúpaí="" gan="" cóireáil="" nrf2="" sirna="" (p="">< 0.01),="" ach="" rinne="" nrf2="" sirna="" an="" chosaint="" sin="" a="" aisiompú.="" tar="" éis="" cóireáil="" nrf2="" sirna,="" tháinig="" laghdú="" suntasach="" ar="" inmharthanacht="" na="" gceall="" fiú="" le="" cóireáil="" phgs="" (fíor="">

Fíor 5. Éifeacht chosanta PhG ar Nrf2 i gcealla cóireáilte H2O PC12. (A) Braitheadh ​​an abairt próitéine Nrf2 sa chiteaplasma trí imdhíonadh ag baint úsáide as antashubstaint ar leith. Baineadh úsáid as p-Actin mar rialú luchtaithe. (B) An anailís chainníochtúil densitometric ar phróitéin Nrf2 sa chiteaplasma. (C) Braitheadh ​​an abairt próitéine Nrf2 sa núicléas trí imdhíonadh ag baint úsáide as antashubstaint ar leith. Baineadh úsáid as Histones H3 mar rialú luchtaithe. (D) An anailís chainníochtúil densitometric ar phróitéin Nrf2 sa núicléas. (E, F) réamhghortaíodh cealla PC12 gan (E) nó le (F) Nrf2 siRNA ar feadh 24 h, ansin gortha le nó gan PhGs (0.1, agus 10 昭/mL) ar feadh 24 h, agus gortha le H2O2 ar feadh 2 h eile tar éis na PhGanna a bhaint. Braitheadh ​​slonn próitéine iomlán Nrf2 trí imdhíonadh ag baint úsáide as antashubstaint ar leith, agus úsáideadh p-actin mar an rialú luchtaithe. (G) An anailís chainníochtúil densitometric ar phróitéin Nrf2 iomlán. (H) An anailís chainníochtúil ar Nrf2 mRNA. (I) Réamhghortaíodh cealla PC12 le siRNA nó gan siRNA ar feadh 24 h, ansin goraíodh iad le nó gan PhGs (0.1 agus 10 -/mL) ar feadh 24 h, agus goraíodh iad le H2O2 ar feadh 2 u eile tar éis na PhGanna a bhaint. Tar éis cóireála, socraíodh na cealla marthanais le measúnacht MTT. CK: gnáthghrúpa, Múnla: grúpa cóireáilte H2O2, Control Si: grúpa cóireáilte siRNA rialaithe, SiRNA Diúltach: gan grúpa cóireáilte siRNA, SiRNA Dearfach: grúpa cóireáilte SiRNA, Salidroside: grúpa cóireáilte salidroside, Acteoside: grúpa cóireáilte acteoside, Isoacteoside: cóireáilte le isoacteoside grúpa,Echinacoside: grúpa cóireáilte echinacoside. ** p < {{0}}.01="" in="" aghaidh="" grúpa="" neamhchóireáilte;="" #="" p="">< 0.05,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2="" (gan="" cóireáil="" le="" nrf2="" sirna),="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2="" (gan="" nrf2="" sirna="" cóireáilte);="" &="" p="">< 0.05="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2="" (le="" nrf2="" sirna="" cóireáilte),="" agus="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2="" (le="" nrf2="" sirna="">

2.4. PhGanna Aisiompaithe H2O2-Rialáil Ionduchtaithe ar Léiriú Próitéin HO-1, NQO1, GCLC, agus GCLM

Is einsímí tábhachtacha frithocsaídeacha ceallacha iad HO{{{0}}, NQO1, agus ligáis ghlútamáit-cistéin (GCL), agus tá HO-1, NQO1, agus fo-aonaid chatalaíoch nó modhnaithe GCL (GCLC nó GCLM). Nrf2-géinte iartheachtacha a rialáil[27]. Breathnaíodh léiriú próitéine ar HO{-1, NQO1, GCLC, agus GCLM tar éis cóireála. Fuarthas difríocht shoiléir idir slonn próitéine HO-1 agus NQO1 le H2O2 nó ná bíodh (Fíor 6A-C) (p < 0.01).="" d'aisiompaigh="" phganna="" (0.1="" agus="" 10="" p^g/ml)="" an="" íosrialáil="" spreagtha="" h2o="" ar="" slonn="" próitéine="" de="" chuid="" ho-1="" (seachas="" salidroside="" ag="" {{32}="" }.1="" pg/ml),="" nqo1="" (seachas="" acteoside="" ag="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" rinne="" h2o2="" íosrialáil="" freisin="" ar="" léiriú="" próitéine="" gclc="" agus="" gclm="" (p="">< 0.05)="" (fíor="" 6a,="" d,e).="" d'aisiompaigh="" phganna="" (0.1="" agus="" 10="" pg/ml)="" h2o{2-dírialáil="" slonn="" próitéine="" gclc="">echinacosideag {{0}}.1 pg/mL) (p < 0.01)="" agus="" gclm="" (seachas="" salidroside="" ag="" 0.1="" pg/ml)="" (="" p="">< 0.01).="" ansin,="" úsáideadh="" na="" coscairí="" ceimiceacha="" do="" ho-1="" chun="" tuilleadh="" meastóireachta="" a="" dhéanamh="" ar="" róil="" na="" n-einsímí="" frithocsaídeacha="" maidir="" le="" cosaint="" phganna="" i="" gcoinne="" cíteatocsaineachta="" spreagtha="" h2o="" a="" rialú.="" chuir="" phgs="" (0.1="" agus="" 10="" pg/ml)="" cosc="" ​​ar="" cíteatocsaineacht="" spreagtha="" h2o,="" ach="" d'aisiompaigh="" an="" t-inhibitor="" ho{-1="" znpp="" (p="">< 0.01)="" ag="" 20="" pm="" (fíor="" 6f,="" p="">< 0.01)="" an="" éifeacht="" chosanta="" sin.="">

2.5. Léiriú Keap1 agus Anailís Dugtha Mhóilíneach

Faoi choinníollacha fiseolaíocha, gníomhaíonn Keap1 mar phróitéin athbhrúite de Nrf2 trí cheangal a dhéanamh d'fhearann ​​Neh2 de Nrf2 agus díriú ar Nrf2 chuig ligáis ubiquitin E3 bunaithe ar Cul3- le haghaidh uileláithreachta agus díghrádú ina dhiaidh sin ag an proteasome 26S [28]. Rinneadh cumas ceangailteach le Keap1 de PhGanna a mheas trí anailís dhugála mhóilíneach chun imscrúdú a dhéanamh ar an meicníocht faoina n-éifeacht frithocsaídeach.

3. Plé

Rinneamar imscrúdú ar néarchosaint PhGanna ar chiteatocsaineacht spreagtha H2O2 i gcealla PC12. Léiríonn na torthaí gur chuir réamhchóireáil PhGanna cíteatocsaineacht HzOz-spreagtha go suntasach faoi chois, mhaolaigh sé an leibhéal ROS incheallach, d'fheabhsaigh sé leibhéal na n-einsímí frithocsaídeacha intracellular, agus ar deireadh thiar d'aisiompaigh sé cíteatocsaineacht spreagtha H2O i gcealla PC12. Ina theannta sin, mhéadaigh PhGanna gníomhachtú trascríobh Nrf2, aisiompaíodh an íosrialáil HzOz-spreagtha ar an slonn próitéine de HO-1, NQO1, GCLC, agus GCLM. Ina theannta sin, léirigh PhGanna idirghníomhú féideartha le suíomh ceangailteach Nrf2 sa phróitéin Keap1.

Sa ghortú cille PC12 spreagtha H2O, mhéadaigh sárocsaídiú lipid, a thagraíonn do dhíghrádú ocsaídiúcháin lipid, tréscaoilteacht na seicní, rud a fhágann damáiste cille [29]. Úsáidtear foirmiú MDA go forleathan mar innéacs sárocsaídiúcháin lipid [30]. Chuir H2O2 feabhas ar tháirgeadh ROS agus einsímí cosanta frithocsaídeacha ídithe, mar shampla SOD, catalase, agus GPx. Mar thoradh ar an bpróiseas seo tá strus ocsaídiúcháin [31], a bhfuil ról lárnach aige maidir le cúis agus dul chun cinn formhór na neamhoird neurodegenerative. Ag teacht le staidéir roimhe seo, thugamar faoi deara leibhéal méadaithe ROS, laghdaigh einsímí frithocsaídeacha intracellular, agus apoptosis feabhsaithe cealla PC12 tar éis cóireála H2O2. Laghdaigh réamhchóireáil PhG go mór méadú HzOz-spreagtha ar ROS incheallach, einsímí frithocsaídeacha intracellular feabhsaithe, agus ar deireadh thiar d'aisiompaigh sé cíteatocsaineacht HzOz-spreagtha i gcealla PC12.

Tá Kuang et al. [32] thuairiscigh sé sinechinacosideléirigh sé éifeacht néarchosanta suntasach ar chiteatocsaineacht spreagtha H2O i gcealla PC12 tríd an gcosán apoptotic miteachondrial. Sa staidéar seo, fuaireamar amach gur léirigh echinacoside, salidroside, acteoside, agus isoacteoside éifeachtaí neuroprotective trí ghníomhaíocht frithocsaídeach na gcealla PC12 a fheabhsú toisc gur mhéadaigh siad gníomhachtú tras-scríobhach Nrf2 agus gur uasrialáladh siad léiriú próitéine anuas de HO-1, NQO1, GCLC, agus GCLM. Tá sé léirithe go soiléir ag staidéir iomadúla go gcosnaíonn gníomhachtú spriocghéin Nrf2, go háirithe HO-1, in astrocytes agus néaróin go láidir i gcoinne athlasadh, damáiste ocsaídiúcháin agus bás cille. Tuairiscíodh go bhfuil an córas HO-1 an-ghníomhach sa lárchóras néaróg, agus is cosúil go bhfuil ról ríthábhachtach ag a mhodhnú i bpataigineas neamhoird neurodegenerative [33]. Shoiléirigh staidéir le déanaí freisin ról Nrf2 maidir le dul chun cinn agus riosca PD [9] agus Keap1 mar sprioc éifeachtach chun Nrf2 a athghníomhachtú in AD [34]. Tacaíonn na torthaí le fianaise nua do Nrf2 mar sprioc theiripeach i galair néar-mheathlúcháin.

Léiríodh le hanailís dhugála mhóilíneach go bhféadfadh PhGanna ceangal a dhéanamh le Keap1, leis na cumais cheangailteacha seo a leanas:echinacoside>isoacteoside > acteoside > salidroside. Ag teacht leis na torthaí seo, bhí traslonnú núicléach Nrf2 mar thoradh ar réamhchóireáil PhG, leis an slonn Nrf2 seo a leanas sa núicléas:echinacoside>isoacteoside * acteoside > salidroside. Ghlacamar leis go raibh tionchar ag líon na gliocóisídí ar mhodh ceangailteach féideartha PhG agus Keap1, agus ba é an modh ceangailteach ba chúis le scaoileadh Nrf2 ó Keap1 tuilleadh. Ba é an toradh a bhí ar an bpróiseas seo ná gníomhachtú Nrf2 agus na géinte le sruth agus ar deireadh thiar cosnaíonn sé cealla PC12 ó strus ocsaídiúcháin H2 O.

4. Ábhair agus Modhanna

4.1. Comhdhúile Ceimiceacha agus Imoibrithe

Salidroside (Uimh. CAS 10338-51-9), acteoside (Uimh. CAS 61276-17-3), isoacteoside (Uimh. CAS 61303-13-7), agusechinacoside(Uimh. CAS {{0}}) ó YYuanye Biotechnology Company (Shanghai, an tSín). Díscaoileadh na PhGanna i PBS chun tuaslagán stoic 10 mg/mL a tháirgeadh, a stóráladh ag -20 céim . Ceannaíodh H2O2 ó Aladdin® (Shanghai, an tSín). Ceannaíodh séiream bó meánach agus féatais RPMI-1640 ó Hyclone (Logan, UT, SAM), agus ceannaíodh 0.5 faoin gcéad trypsin EDTA, peinicillin, agus streiptimícin ó Keyi (Hangzhou, an tSín). Ceannaíodh MDA, feisteáin diagnóiseacha SOD, MTT, agus DCFH-DA ó Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime (Nanjing, Jiangsu, an tSín). Ceannaíodh trealamh staining dúbailte Annexin V-FITC/PI ó Solarbio Life Sciences (Beijing, an tSín). Ceannaíodh antasubstaintí go Nrf2, Histone H3, Keap1, HO{-1, NQO1, GCLC, GCLM, agus p-actin, sárocsaíd frith-luiche-capallais (HRP) IgG, agus frith-coinín-HRP-IgG ó Abcam (Londain, an RA). Ceannaíodh bacóirí HO{{-1 agus ZnPP ó Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, SAM). Ceannaíodh RNAiso Plus, PrimeScript™RT imoibrí Kit le gDNA Eraser, agus SYBR® Premix Ex Taq™ II ó Takara (Shiga, an tSeapáin). Ceannaíodh Imoibrí Aistrithe Lipofectamine® RNAiMAX ó Thermo Fisher Scientific (Waltham, RA). Ba iad seo a leanas na sraitheanna siRNA Nrf2: ar aghaidh, CCGAAUUACAGUCUCUUAA; agus droim ar ais, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Idir an dá linn, bhí seichimh siRNA rialaithe mar seo a leanas: ar aghaidh, UUCUCCGAACGUGUCACGU; agus droim ar ais, ACGUACACGUUCGGGAAA.

4.2. Cultúr na Cille

Fuarthas líne pheochromocytoma adrenal luch (cealla PC12) ón Institiúid Bithcheimice agus Bitheolaíochta Cille, SIBS, (CAS, Shanghai, An tSín). Coinníodh na cealla i RPMI-1640 (Hioclone) ina raibh 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais (Hioclone), 100 U/mL peinicillin, agus 0.1 mg/mL streiptimícin ag 37 céim le 5 faoin gcéad CO2. Athraíodh an meán gach lá eile.

4.3. Measúnacht Inmharthanachta Cille

Síolaíodh cealla PC12 i 96-phlátaí tobair ag 2 x 104 cill/tobar. Tar éis ceangal a dhéanamh, rinneadh na cealla a réamhghoiriú le nó gan coscaire ar feadh 20 nóiméad, gortha le nó gan PhG ar feadh 24 h, agus ansin goraíodh iad le H2O2 ar feadh 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. Tar éis goir, déileáladh leis na cealla le 5 mg / mL MTT ar feadh 4 h ag 37 céim , agus baineadh na meáin go cúramach. Rinneadh na criostail formazan a bhí déanta ag cealla marthanacha a thuaslagadh i 150 rL de DMSO chun dath gorm a ghiniúint [35], agus rinneadh an t-ionsúcht a thomhas ag 570 nm ar léitheoir pláta. Bhain na rialuithe úsáid as an tiúchan céanna meán le DMSO amháin. Normalaíodh inmharthanacht na gceall mar chéatadán rialaithe.

Roghnaíodh na tiúchain PhGs (0.1,1,5, agus 10 Rg/mL) ag brath ar an anailís cíteatocsaineachta ar PhGanna agus an éifeacht cítea-chosanta a thuairiscítear ar echinacoside [32]. De réir na tuarascála, níor léiríodh aon éifeacht cíteatocsaineachta faoi bhun 10 Rg/mL, agus tuairiscíodh go léirigh echinacoside éifeacht cíteachosanta sa mhúnla cille gortaithe HzOz.

4.4. Measúnacht Apoptóis

Braitheadh ​​apoptosis le hIarscríbhinnín V-FITC/PI Kit staining dúbailte (Solarbio). Síolaíodh cealla PC12 i 6-plátaí tobair ag 2 x 105 chill/tobar. Tar éis ceangal a dhéanamh, déileáladh le cealla le PhGs (0.1 agus 10 Rg/mL) ar feadh 24 h agus goradh iad le H2O2 ar feadh 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. Tar éis gortha, nite na cealla i PBS fuar, lártheifneoirithe faoi dhó ag 1500 rpm ar feadh 10 nóiméad, agus athchuireadh i 500 rL de maolán ceangailteach. Iarscríbhinn V (5 rL) agus iaidíd próipidiam lipéadaithe FITC.

4.5. Tomhas ROS intracellular, Táirgeadh MDA, agus SOD

Cinneadh an leibhéal ROS incheallach ag baint úsáide as taiscéalaí fluaraiseacha íogair ó ROS, is é sin, 2,7-dé-aicéatáit fluaraiseacha déchlórodihidre (DCFH-DA). Síolaíodh cealla PC12 i 6-plátaí tobair ag 2 x 105 chill/tobar. Tar éis ceangal a dhéanamh, déileáladh le cealla le PhGs (0.1 agus 10 卩g/mL) ar feadh 24 h agus goradh iad le H2O2 ar feadh 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. Tar éis goir, nite na cealla le PBS faoi thrí agus ina dhiaidh sin gortha le 10 卩M DCFH-DA. Tar éis goir ag 37 céim ar feadh 20 nóiméad, nitear na cealla le PBS agus bailíodh iad le lártheifneoiriú milis. Tomhaiseadh ROS intracellular ag baint úsáide as cítoiméadar sreafa Gallios™ (Beckman Coulter, Brea, CA, SAM).

Rinneadh MDA agus SOD a thomhas le feisteáin mheasúnachta (Beyotime Biteicneolaíocht, Nanjing, Jiangsu, an tSín). Chomhlíon na nósanna imeachta go léir treoracha na monaróirí go hiomlán. Rinneadh normalú ar ábhar MDA agus SOD leis an gcion iomlán próitéine comhfhreagrach.

4.6. Nrf2 Traslonnú Núicléach Imdhíonfhluaraiseacht

Síolaíodh na cealla PC12 i 6-sleamhnáin ghloine tobair ag dlús 2 x 105 in aghaidh an tobair. Tar éis ceangal a dhéanamh, déileáladh leis na cealla le PhGs (0.1 agus 10 卩g/mL) ar feadh 24 h agus goraíodh iad le H2O2 ar feadh 2 uair eile tar éis na PhGanna a bhaint. Tar éis goir, nitear na cealla i PBS fuar agus socraíodh iad i paraformaildéad 4 faoin gcéad ar feadh 15 nóiméad ag teocht an tseomra, agus ina dhiaidh sin tréscaoilteacht membrane ag baint úsáide as 0.5 faoin gcéad Triton X-100 i PBS ar feadh 5 nóiméad. Goradh na cealla le frith-Nrf2 Coinín IgG (Abcam) le 5 faoin gcéad FBS thar oíche ag 4 céim . Ansin, cuireadh na hantasubstaintí frith-choine tánaisteacha comhchuingeach le FITC i bhfeidhm ar na cealla ar feadh 20 nóiméad ag teocht an tseomra. Rinneadh na núicléis a dhathú le 4z,6-diamidino{-2-phenylindole (DAPI) ag an gcéim ullmhúcháin deiridh. Rinseodh na sleamhnáin go hachomair le PBS, triomaíodh iad san aer, agus gléasadh iad i bhfrith-fhluaraiseacht i meán fading. Rinneadh na sleamhnáin a léirshamhlú faoi mhicreascóp comhfhócasach léasair (LMS780, Zeiss, an Ghearmáin).

4.7. Eastóscadh Próitéin

Síolaíodh na cealla PC12 i miasa 100 mm ag 1 x 107 cill/mhias. Tar éis ceangal a dhéanamh, déileáladh leis na cealla le PhGs (0.1 agus 10 卩g/mL) ar feadh 24 h agus ansin goraíodh iad le H2O2 ar feadh 2 h eile le baint PhGs. Tar éis goir, nite na cealla faoi dhó le PBS fuar agus scríobadh ó na miasa le 1000 卩L de PBS. Rinneadh aonchineálacha cille a lártheifneoiriú ag 1500 rpm ar feadh 10 nóiméad. Tar éis cóireála, baineadh próitéiní ceallacha ag baint úsáide as maolán lysis cille Beyotime RIPA le PMSF 1 mM de réir threoracha an mhonaróra. Ina theannta sin, rinneadh próitéiní cíteaplasma agus núicléacha a leithlisiú mar a thuairiscítear i bhfearas eastósctha núicléach agus cíteaplasma Beyotime. Braitheadh ​​an tiúchan próitéine sna samplaí le trealamh measúnaithe próitéine BCA Beyotime, agus stóráladh na samplaí go léir ag -80 céim le haghaidh anailíse blotaí an Iarthair.

4.8. Anailís Blot an Iarthair

Rinneadh anailís ar bhloic an Iarthair ag baint úsáide as modhanna caighdeánacha. Go hachomair, scartha samplaí próitéine (20 nó 30 卩g) le SDS-PAGE agus aistríodh iad chuig seicní PVDF. Cuireadh bac ar scannáin i mbainne 5 faoin gcéad-TBST agus goraíodh iad thar oíche ag 4 chéim san antashubstaint phríomhúil. I measc na n-antasubstaintí a úsáideadh bhí Nrf2 (Abcam), Keap1 (Abcam), HO-1 (Abcam), NQO-1 (Abcam), GCLC (Abcam), GCLM (Abcam), Histone H3 (Abcam), agus p-actin (Abcam). Baineadh úsáid as IgG frith-luiche comhchuingeach peroxidase (Abcam) nó frith-coinín IgG (Abcam) mar antasubstaint thánaisteach. Rinneadh na bandaí próitéine a léirshamhlú ag baint úsáide as an tsraith ChemiScope (Clinx Science Instruments, Shanghai, An tSín). Rinneadh luach liath na mbandaí próitéine a chainníochtú trí úsáid a bhaint as ImageJ (Institiúidí Náisiúnta Sláinte, Bethesda, MD, SAM).

4.9. PCR Fíor-Ama Cainníochtúil

Baineadh RNA iomlán amach ag baint úsáide as an RNAiso Plus (Takara, Shiga, an tSeapáin), ag leanúint treoracha an mhonaróra. Trascríobhadh samplaí RNA iomlána ar ais le Kit imoibrí PrimeScript™RT le gDNA Eraser (Takara, Shiga, an tSeapáin) de réir threoir an mhonaróra. Rinneadh PCR fíor-ama cainníochtúil ag baint úsáide as SYBR® Premix Ex Taq™ II (Takara, Shiga, an tSeapáin) i mBithchórais Fheidhmeach ViiA™ 7 Córas PCR Fíor-Ama. Normalaíodh slonn coibhneasta sprice ghéinte go p-Actin agus rinneadh anailís air tríd an modh 2-AACt. Seo a leanas na sraitheanna primer do Nrf2: ar aghaidh, ACAGTGCTCCTATGCGTGAA agus droim ar ais, TCTGGGCGGCGACTTTAT. Seo a leanas na sraitheanna primer do p-Actin: ar aghaidh, GCTGTCCCTGTATGCCTCT; agus droim ar ais, TTGATGTCACGCACGATTT.

4.10. siRNA Aistriú

Saothraíodh cealla PC12 i 6-sleamhnáin ghloine tobair ar dhlús 2 x 105 in aghaidh an tobair (le haghaidh anailíse blot an Iarthair) nó i 96-sleamhnáin ghloine tobair ag dlús 2 x 104 in aghaidh an tobair (do chill anailís inmharthanachta). Aistríodh siRNA rialaithe agus Nrf2 siRNA i gcealla ag baint úsáide as Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SAM) de réir threoracha an mhonaróra. Tar éis 24 h goir, déileáladh leis na cealla le nó gan PhG agus H2O2 ar feadh na n-amanna a shonraítear agus ansin úsáideadh iad in anailís blot an Iarthair, qRT-PCR, nó anailís inmharthanachta cille mar a thuairiscítear thuas.

4.11. Anailís Dhó Mhóilíneach

Molecular docking analysis was performed to investigate the possible binding mode of PhGs to Keap1. The 3D structure of ligands was obtained from NCBI. The crystallized structure of Keap1 (PDB Code: 4L7B) was prepared using correcting structure issues (such as break bond and miss loop) using SYBYL-X 2.0. In this software simulation, crash represents the inadequate penetration between the protein and the ligand. Polar represents the hydrogen bonding and electrostatic interactions between the protein and the ligand. G-score [36] represents the hydrogen bonding, complex (ligand-protein), and internal (ligand-ligand) energies between the protein and the ligand. PMF-score [37] represents the Helmholtz free energy between the protein and the ligand. D-score [38] represents the charge and van der Waals interactions between the protein and the ligand. Chem-score [39] represents the hydrogen bonding, metal-ligand interaction, lipophilic contact, and rotational entropy, along with an intercept term between the protein and the ligand. C score represents the consensus score between the protein and the ligand, comprehensively reflecting the G, PMF, D, and Chem-scores. Tota-score reflects the binding capacity of the ligand to the protein. The best modes were generated and evaluated using the Total-score (>6) and C-score (>4).

4.12. Anailís staitistiúil

Rinneadh anailís ar shonraí ag baint úsáide as ANOVA aontreo agus anailísí LSD ag baint úsáide as SPSS. Deimhníodh na torthaí go léir ó thrí thurgnaimh neamhspleácha. Cuireadh sonraí in iúl mar mhodh 土 SD. Breithníodh difríochtaí suntasacha staitistiúla ag p <>

Buíochas: Thacaigh an Príomhchlár T & F Náisiúnta na Síne (Uimh. 2017YFD0400200), Fondúireacht Eolaíochta Nádúrtha Cúige Zhejiang na Síne (Uimh. R15C200002), agus an Tionscadal Speisialta um Measúnú Riosca Sábháilteachta Cáilíochta Táirge Talmhaíochta na Síne (Uimh. GJFP2018015), Aireacht Talmhaíochta agus Gnóthaí Tuaithe na Síne.

Ranníocaíochtaí Údair:Baiyi Lu agus Maiquan Li a dhear an staidéar. Rinne Maiquan Li an obair saotharlainne, anailís sonraí agus scríobh an páipéar. Rinne Maiquan Li, Tao Xu, Fei Zhou, Mengmeng Wang, Huaxin Song, Xing Xiao, agus Baiyi Lu athbhreithniú ar an lámhscríbhinn.

1 An tSaotharlann Náisiúnta Innealtóireachta um Theicneolaíocht agus Trealamh Bia Chliste,

Príomh-Saotharlann le haghaidh Agrai-Táirgí Láimhseáil Postharvest na hAireachta Talmhaíochta agus Gnóthaí Tuaithe, Príomh-Saotharlann le haghaidh Agrai-Tháirgí Meastóireacht Chothaitheach ar an Aireacht Talmhaíochta agus Gnóthaí Tuaithe, Príomh-Saotharlann Zhejiang do Phróiseáil Agro-Bia, Institiúid Eolaíochta Bia Fuli, Coláiste na mBithchórais Innealtóireacht agus Eolaíocht Bhia, Ollscoil Zhejiang, Hangzhou 310058, an tSín;

2 Coláiste an Chéad Leighis Chliniciúil, Ollscoil Leighis na Síne Guangzhou,

Tagairtí

1. Grian, AY; Chen, YM Strus ocsaídiúcháin agus neamhoird neurodegenerative. J. Biomed. Sci. 1998, 5, 401-414.

2. Maheshwari, A.; Misro, MM; Aggarwal, A. ; Sharma, RK; Nandan, D. Conairí a bhaineann le apoptosis gaiméite testicular de bharr H2O2 in vitro. FEBS J. 2009,276, 870-881.

3. Halliwell, B. Speicis ocsaigin imoibríoch agus lárchóras na néaróg. J. Neurochem. 1992, 59,1609-1623.

4. Richardson, JS; Subbarao, KV; Ang, LC Ar an ról a d'fhéadfadh a bheith ag sárocsaídiú radacach saor in aisce arna spreagadh le hiarann ​​i néar-mheathlú i ngalar Alzheimer. Ann. NY Acad. Sci. 1992, 648, 326-327.

5. Zhang, DD Staidéir mheicniúla ar chonair chomharthaíochta Nrf2-Keap1. Metab Drugaí. Ath. 2006, 38, 769-789.

6. Itoh, K. ; Tong, KI; Yamamoto, M. Meicníocht mhóilíneach a ghníomhaíonn cosán Nrf2-Keap1 maidir le freagairt oiriúnaitheach ar leictreafail a rialáil. Radacach saor in aisce,. Biol. Med. 2004, 36,1208-1213.

7. Cong, AN; Owuor, E. ; Yu, R.; Hebbar, V. ; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Ionduchtú na n-einsímí seineabiótacha ag an chonair kinase léarscáile agus an eilimint frithocsaídeach nó freagartha leictreafile (ARE/EpRE). Metab Drugaí. Ath. 2001, 33, 255-271.

8. Buendia, I. ; Michalska, P.; Navarro, E.; Cluicheiro, I.; Egea, J. ; Leon, R. Nrf2-TÁ cosán: Sprioc atá ag teacht chun cinn i gcoinne strus ocsaídiúcháin agus néar-athlasadh i ngalar néar-mheathlúcháin. Cógaslann. Ther. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]

9. Scibinski, G.; Hwang, V; Agus, DM; Daub, A. ; Laoi, AK; Ravisankar, A.; Modán, S.; Finucane, MM; Shabby, BA; Maolaíonn Finkbeiner, S. Nrf2 LRRK2- agus néar-mheathghiniúint arna spreagadh ag a-synuclein trí phróitostasis a mhodhnú. Proc. Natl. Acad. Sci. SAM 2016, 114, 1165-1170.

10. Jimenez, C.; Riguera, R. Gliocóisídí feanylthanoid i bplandaí: Struchtúr agus gníomhaíocht bhitheolaíoch. Nat. Táirg. Ionadaí 1994, 11, 591-606.

11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; Orhan, I.; Abrashev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Gníomhaíochtaí coisctheacha frithocsaídeacha agus cholinesterases de Verbascum xanthophoeniceum Griseb. agus a gliocóisídí feinileatánóideach. Ceimic Bhia. 2011, 128, 100-105.

12. Li, N . ; Wang, J.; Ma, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Éifeachtaí Néarchosanta Teiripe Luibhe Cistánach ar Othair a bhfuil Galar Alzheimer/s Measartha orthu. Comhlánú Evid.-Bunaithe. Malartach. Med. 2015, 2015, 103985.

13. Liu, YL; sé, WJ; Mo, L.; Shi, MF; Zhu, BB; Pan, S.; Li, XR; Xu, QM; Yang, SL Gníomhaíochtaí frithmhiocróbacha, frith-athlastacha agus tocsaineolaíocht gliocóisídí feinileatánóideach ó Monochasma savaterii Franch. ex Maxim. J. Ethnopharmacol. 2013, 149, 431-437.

14. Dong, Q. ; Yao, J.; Fang, JN; Ding, K. Tréithriú struchtúrach agus gníomhaíocht imdhíoneolaíoch de dhá pholaisiúicrídí inbhainte uisce fuar ó Cistanche deserticola YC Ma. Carbaihiodráit. Res. 2007, 342,1343-1349.

15. Xiong, L. ; Mao, S.; Lu, B. ; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Sheáin, C. ; Zhao, Y. Sliocht Bláthanna Osmanthusfragrans agus Cosnaíonn Acteoside In Aghaidh Aosaithe d-Galactós-spreagtha i Múnla Luiche ICR. J. Med. Bia 2016, 19, 54-61.

16. Jiang, Y. ; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B. ; Cai, Z. ; Zhou, F.; Li, M. ; Lú, T.; Zhao, Y. Próifílí Glycoside Phenylthanoid agus Gníomhaíochtaí Frithocsaídeacha de Osmanthusfragrans Lour. Bláthanna le UPLC/PDA/MS agus Múnla Díleá Insamhladh. J. Agric. Ceimic Bhia. 2016, 64, 2459-2466.

17. Li, X. ; Sea, X.; Li, X. ; Grian, X. ; Liang, Q. ; Tao, L. ; Kang, X. ; Chen, J. Salidroside cosaint i gcoinne MPP móide-spreagtha apoptosis i gcealla PC12 trí chosc ar an cosán NÍL. Brain Res. 2011, 1382, 9-18.

18. Zhang, L. ; Ding, W.; Grian, H. ; Zhou, Q.; Huang, J. ; Li, X. ; Xie, Y.; Chen, cosnaíonn J. Salidroside cealla PC12 ó apoptosis móide-spreagtha MPP trí ghníomhachtú an chosáin PI3K/Akt. Ceimic Bhia. Tocsain. 2012, 50, 2591-2597.

19. Sheng, GQ; Zhang, JR; Pu, XP; Ma, J.; Li, CL Éifeacht chosanta verbascoside ar 1-meitil-4- néarthocsaineacht ian-spreagtha i gcealla PC12. Eur. J. Cógaslann. 2002, 451,119-124.

20. Wang, H. ; Xu, Y.; Yan, J.; Zhao, X.; Grian, X. ; Zhang, Y.; Guo, J.; Cosnaíonn Zhu, C. Acteoside cealla neuroblastoma daonna SH-SY5Y i gcoinne díobhála cille béite-amyloid-spreagtha. Brain Res. 2009, 1283, 139-147.