Conas a Imríonn Glicóisídí Feinileatánóideach, Comhábhar Gníomhach na gCistanche, Ról Néarchosanta?

Xue Gong†a, Yan Xu†b, Kai Renc, Xiaorong Baid, Chunhong Zhanga

TeibíSa staidéar seo, scoite muid ochtarfeinileatánóideachgliocóisídíó Paraboea martini den chéad uair agus rinne sé measúnú ar an meicníocht is bun leoneuroprotectiveéifeachtaíin aghaidh gortú spreagtha H2O{2- i gcealla PC12. Baineadh úsáid as an modh MTS chun scagadh a dhéanamh ar anfeinileatánóideachgliocóisídíle haghaidh cumas cosanta. Ina dhiaidh sin, baineadh úsáid as qRT-PCR agus anailís blotála an iarthair chun leibhéil trascríobh HO-1 agus GCLC a bhrath, atá á rialú ag Nrf2. Baineadh úsáid as an coscaire ZnPP chun anailís a dhéanamh ar rannpháirtíocht Nrf2 i slonn HO-1. Léirigh anailísí go ndearna caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II an abairt HO-1 a rialú freisin, ach níor léirigh aon éifeacht soiléir ar GCLC. Pretreatment le ZnPP laghdú suntasach ar anneuroprotectiveéifeachtaí. Mar sin, chosain gliocóisídí feanileatánóideacha scoite ó P. martini cealla PC12 ó dhamáiste a tharlódh H2O trí HO-1 a rialáil. Chuir na torthaí fianaise ar fáil go bhféadfadh P. martini a bheith ina oibreán teiripeach féideartha chun cóireáil a dhéanamh arneurodegenerativetinneas.

STAIR AIRTEAGALArna fháil 8 Aibreán 2019 Glactha 30 Iúil 2019

EOCHAIRFHOCALParaboea martini;gliocóisídí feinileatánóideach; éifeachtaí neuroprotective; protoporphyrin since; HO-1

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Meicníocht éifeacht neuroprotective Cistanche deserticola, cliceáil anseo chun tuilleadh a fhoghlaim

Is eol go bhfuil ról ríthábhachtach ag strus ocsaídiúcháin i bpataigineas roinnt galair. Tá sé nasctha le etiology ofGalar Alzheimer(AD), galar Parkinson (PD), titimeas, agus galair eile [1-3]. Faoi láthair, tá dul chun cinn leanúnach déanta maidir le staidéar a dhéanamh ar phataigineas AD, PD, agus galair eile. Mar sin féin, mar gheall ar an eolas teoranta ar na meicníochtaí móilíneacha is bun le AD, PD, agus galair eile, níor baineadh amach straitéisí coisctheacha nó leigheasacha éifeachtacha do na galair seo [4]. Is comhpháirt thábhachtach de speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) é H2O2. Dá réir sin, is é gortú cille PC12 spreagtha H2O an tsamhail is coitianta a úsáidtear de strus ocsaídiúcháin agus úsáidtear go forleathan é i staidéir thurgnamhach ar éifeachtaí neuroprotective [5]. Is einsímí tábhachtacha frithocsaídeacha ceallacha iad Heme oxygenase 1 (HO-1) agus fo-aonad glutamate-cysteine ​​ligase-catalytic (GCLC), agus déantar an dá ghéinte a rialáil le sruth ó fhachtóir núicléach erythroid 2 (Nrf2), atá ag teacht chun cinn mar theiripeach geallta. sprioc le haghaidh neuroprotection [6,7].Feinileatánóideachgliocóisídí, díorthaithe ón aonad C-6-C-3, tá go leor grúpaí hiodrocsaile feanólacha iontu agus tá gníomhaíochtaí suntasacha frithocsaídeacha agus frith-aosaithe acu. Le blianta beaga anuas, tá staidéir tugtha le fios go bhfuil gliocóisídí feinileatánóideacha ag go leor plandaí íocshláinte a léiríonn gníomhaíocht shuntasach frithocsaídeach. Mar shampla, is eol go n-imríonn gliocóisídí feinileatánóideach a dhíorthaítear ó Herba cistanche éifeachtaí cosanta ar easnaimh chognaíocha in AD. Rinne an staidéar sin imscrúdú ar an meicníocht chosanta ghaolmhar ag baint úsáide as samhail luch seans maith AD 8 (SAMP8) a luathaíodh le seanógacht. Léirigh na torthaí go bhféadfadh baint a bheith ag cumas gliocóisídí feinileatánóideach chun easnaimh chognaíocha i lucha SAMP8 a mhaolú le plaisteacht shionaptach a bhaineann le próisis frithocsaídeacha a chur chun cinn [8]. Sa staidéar seo, rinneadh dhá ghlocóisídí feinileatánóideach a scaradh agus a íonú ó snaidhmeanna adhmaid Tectona grandis (teak); léirigh na comhdhúile seo éifeachtaí frithocsaídeacha suntasacha a cinneadh trí mhodh amperometric [9]. Ina theannta sin, cuireann comhdhúile glycosíde feinileatánóideach caffeoyl ó Lindernia ruellioides éifeachtaí frithocsaídeacha atá ag brath ar dháileog agus superoxide saor ó anion in vitro [10]. Tá baint ag meicníochtaí gníomhaíochta gliocóisídí feinileatánóideach le rialáil cosán comharthaíochta Nrf2/ARE, a mbíonn tionchar aige ar shintéisiú SOD, CAT, GSH-PX, agus einsímí frithocsaídeacha eile [11]. Tá an teaghlach Gesneriaceae, ina bhfuil 150 genera agus thart ar 3700 speiceas, scaipthe go príomha i réigiúin trópaiceacha agus mheasartha oirthear agus theas na hÁise, Aigéine, Meiriceá Theas, san Afraic, i nDeisceart na hEorpa, agus i Meicsiceo [12]. Tá 54 genera agus thart ar 463 speiceas a bhaineann le Gesneriaceae sa tSín. Tuairiscíodh go bhfuil éifeachtúlacht leighis ag thart ar 100 speiceas agus déantar an chuid is mó díobh seo a dháileadh go príomha i gcúigí Guangxi agus Guizhou [13]. Le blianta beaga anuas, tá méadú tagtha ar thaighde ar phlandaí Gesneriaceae de réir a chéile i réimsí éagsúla den domhan, agus fuarthas roinnt comhábhair nua le gníomhaíochtaí fiseolaíocha [14]. Paraboea martinii (Levl.) Baineann Burtt le Parabola (Gesneriaceae) agus is planda luibheach é. Bunaithe ar "Taifid Acmhainne Leigheas Traidisiúnta na Síne", taifeadadh go n-úsáidtear an gléasra iomlán mar leigheas. Thairis sin, féadann sé go leor gníomhaíochtaí cógaseolaíochta a fheidhmiú ar choinníollacha cosúil le hematemesis, éidéime, dysentery, gortú trámach, agus briste [15]. Bai chruthú gofeinileatánóideachgliocóisídíar cheann de na príomh-chomhábhair cheimiceacha de phlandaí Gesneriaceae [16]. Fuair ​​​​roinnt taighdeoirí amach freisinfeinileatánóideachgliocóisídíhave significant antioxidant activities [17]. Li demonstrated that phenylethanoid glycosides of Cistanche deserticola have significant antioxidant activity [18]. In addition, Ju systematically studied the neuroprotective activities of phenylethanoid glycosides using PC12 cell models. The results indicated that phenylethanoid glycosides significantly attenuate the damage induced by Aβ1-42 [19]. In our studies, we isolated eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) from P. martini [20]. All compounds were isolated from the genus Parabola for the first time, and the compounds paraboside A, paraboside B, p paraboside I, paraboside II, and paraboside III were new compounds [20]. In a continuing search for molecules with antioxidant properties, phenylpropanoid glycosides were examined. However, whether these phenylpropanoid glycosides from P. martini could protect against H2O2-induced PC12 cell injury was previously unclear. In this study, we examined the protective effects of phenylpropanoid glycosides on H2O2-induced damage to PC12 cells. We also examined the effects and preliminary mechanism underlying the activity of phenylpropanoid glycosides with respect to the activation of HO-1 and GCLC in vitro. Materials and methods Materials Paraboea martini (Level.) Burtt was collected from Daxin County, Guangxi Autonomous Region in August 2014 and verified by Dr. Minhui Li (Baotou Medical College). Voucher specimens were deposited at the Laboratory of Pharmacognosy and Phytochemistry. Eight phenylpropanoid glycosides (paraboside A, paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, isonuomioside A) were extracted and separated from P. martinii (Levl.) Burtt by prof. Xiaoqin Wang [20]. The purity (>Rinneadh 98 faoin gcéad ) d'ocht gliocóisídí feinilpropanoid a thomhas trí mhodh normalaithe buaiclimistéir HPLC. Mar shampla, léirítear na cairteacha crómatagrafaíochta de paraboside B agus paraboside II i bhFíor 1, agus fuarthas amach go raibh a n-ábhar coibhneasta 98.23 faoin gcéad agus 99.20 faoin gcéad, faoi seach. Ceannaíodh an líne chill pheochromocytoma adrenal francach drochdhifreáilte (PC12) ón mBanc Cille ag Acadamh Eolaíochta na Síne (Shanghai, an tSín). Ceannaíodh meán modhnaithe Eagle's (DMEM) agus séiream capall Dulbecco ó Gibco (Gaithersburg, MD, SAM). Ceannaíodh séiream bó féatais (FBS) ó Thermo Fisher Scientific (Hyclone, Waltham, MA, SAM). Fuarthas H2O2 ó Tianjin Fu Yu Reagent Co., Ltd (Tianjin, an tSín). Ceannaíodh Trizol ó Invitrogen (Carlsbad, CA, SAM). Fuarthas Kit imoibrí PrimeScriptTM RT (Perfect Real Time) ó TaKaRa Biotechnology Co. (Dalian, an tSín). Rinne Sangon Biotech (Shanghai, an tSín) na primers do HO{-1, GCLC, agus GAPDH a shintéisiú. Fuarthas an trealamh Measúnaithe Cille um Iomadú Cealla Réitigh Uisciúla 96® a hAon (MTS) CellTiter 96® ó Promega Corp. (Madison, SAM). Ceannaíodh coscairí prótaporphyrin since HO{{1 (ZnPP) ó Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, SAM). Úsáideadh gorlann Thermo311 CO2 (Thermo, SAM), StepOnePlusTM Fíor-Ama PCR Bloc Rothaíochta Teirmeach Ionstraim (Thermo), Thermo Scientific Multiskan FC (Thermo), agus xCELLigence RTCA DPlus Analyzer agus E-Plate 16 (ACEA Biosciences, USA) freisin. .

Cultúir agus cóireáil cille

Fásadh cealla PC12 i DMEM ina raibh 5 faoin gcéad FBS agus 5 faoin gcéad serum capall ag 37 céim in atmaisféar humidified 5 faoin gcéad CO2. Roinneadh cealla PC12 i dtrí ghrúpa mar seo a leanas: grúpa rialaithe, grúpa múnla, agus grúpa cóireála. Tuaslagadh ocht gliocóisídí feinilpropanoid i DMSO (< 0.01%)="" and="" then="" diluted="" with="" a="" complete="" culture="" medium.="" to="" study="" the="" effects="" of="" the="" eight="" phenylpropanoid="" glycosides="" on="" h2="" o2-induced="" cell="" injury,="" pc12="" cells="" were="" cultured="" with="" the="" eight="" compounds="" at="" concentrations="" of="" 3.125,="" 6.25,="" 12.5,="" 25,="" and="" 50="" μm="" for="" 12="">

H2O2 a chinneadh

samhail, Chinneamar an tiúchan cuí de H2 O2 ag baint úsáide as anailís cheallacha fíor-ama (RTCA). Síolaíodh cealla PC12 i micreaphláta CIM-16 ag toirt 100 µL agus ansin goraíodh iad ar feadh 12 h ag 37 céim in atmaisféar 5 faoin gcéad CO2. Roinneadh na cealla PC12 i ngrúpaí rialaithe agus múnla. Ar aghaidh, cuireadh 10 μL H2O2 (50, 100, 200, agus 400 μM) leis na grúpaí múnla, agus déileáladh leis na grúpaí rialaithe le 10 μL DMEM iomlán, a bunaíodh i dtrí tobar casta. Cuireadh an E-Pláta 16 sa xCELLigence RTCA, rinneadh monatóireacht air gach 15 nóiméad, agus taifeadadh na torthaí ar feadh 32 h. Rinneadh anailís ar éifeacht H2O2 ar chealla PC12 ag baint úsáide as bogearraí anailíse sonraí xCELLigence RTCA. Baineadh úsáid as an luach innéacs cille (CI) chun an tiúchan H2O2 is fearr agus fad na gníomhaíochta a chinneadh.

Eastóscadh cumaisc agus leithlisiú

Scaradh codáin bunaithe ar a bpolúlacht trí úsáid a bhaint as modhanna a ndearnadh cur síos orthu roimhe seo. Baineadh P. martinii (4 kg) aer-triomaithe, púdaraithe trí huaire as a chéile le tuaslagán eatánóil uiscí 75 faoin gcéad [24]. Ansin comhchruinníodh na sleachta a fuarthas ag baint úsáide as evaporator rothlach chun eatánól a bhaint, agus fuarthas sleachta amh. Tuaslagadh na samplaí in uisce dí-ianaithe agus ansin eastósctar iad i ndiaidh a chéile le héitear peitriliam, aicéatáit eitile, n-butanol, agus uisce. Rinneadh an sliocht n-butanol (400 g) a chodánú trí úsáid a bhaint as colún roisín macraporous AB-8 agus tuaslagán eatánóil-H2O2 (0, 1{{47} }, 30, 50, 70, agus 95 faoin gcéad ). Fuarthas sé chodán (codáin 1–6) sa deireadh. Cuireadh codáin 3 agus 4 faoi réir scaradh ag baint úsáide as colún MCI le céim-ghrádán de MeOH-H2O2 (10-100 faoin gcéad ). Ansin, rinneadh na táirgí a leithlisiú trí úsáid a bhaint as Sephadex LH-20 le 50 faoin gcéad MeOH mar an eluent. Bhí comhdhúile 1 (41.0 mg) agus 6 (15.6 mg) scoite ó chodán 3. Fuarthas comhdhúile 2 (62.0 mg), 3 (34.7 mg), 7 (11.0 mg), agus 8 (26.0 mg) ó chodán 4 ag baint úsáide as Sephadex LH-20 crómatagrafaíocht le 50 faoin gcéad MeOH mar an eiliminteach. Rinneadh aonrú deiridh ag HPLC leath-ullmhaithe, céim droim ar ais (Merck LiChrosorb, RP-18, RP-18, 250 × 10 mm) le 50 faoin gcéad MeOH agus braite UV ag 280 nm chun comhdhúile a tháirgeadh 4 (39.0 mg) agus 5 (9.0 mg) [20].

Measúnú inmharthanachta cille

Síolaíodh cealla PC12 i 96-plátaí tobair ag dlús 2 × 1{{10}}4 chealla/tobar ag toirt deiridh 100 µL . Goradh cealla PC12 ag 37 céim le 5 faoin gcéad CO2 ar feadh 12 h. Ansin, déileáladh leis na cealla le tiúchain éagsúla d'amhshleachta (0.025, 0.05, 0.1, 0.2, agus 0.4 mg/mL) agus comhdhúile 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, agus 8 ag cúig chomhchruinniú (3.125, 6.25, 12.5, 25, agus 50 μM). Tar éis réamhchóireáil ar feadh 24 h, socraíodh inmharthanacht na gceall ag measúnachtaí MTS. Réamhghortaíodh cealla PC12 le nó gan an t-inhibitor HO{-1 gan ZnPP (15 μM) ar feadh 30 nóiméad, ansin gortha iad le nó gan caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II (3.125 μM) ar feadh 12 h, agus ar deireadh goradh le 400 μM H2O2 le haghaidh 6 h eile. Tar éis cóireála, socraíodh líon na gceall marthanach le measúnacht MTS [6].

Éifeachtaí cosanta na n-amhábhar agus na gcomhdhúile monaiméireacha ar chealla cóireáilte H2O{2-PC12

Saothraíodh na cealla i {{0}}pláta tobair ag toirt deiridh 100 µL. Cuireadh caoluithe sraithe d'amhshleachta (0.025, 0.05, 0.1, 0.2, agus 0.4 mg/mL) leis an ngrúpa cóireáilte. Tar éis pretreatment ar feadh 12 h, cuireadh 400 μM de thuaslagán H2O2 (tiúchan optamaithe) leis an ngrúpa cóireáilte agus an grúpa H2O2 de gach tobar ar feadh 6 h. Ansin cuireadh réiteach MTS le gach tobar, agus goraíodh na plátaí ar feadh 3 h ag 37 céim C. Ascalaíodh na plátaí ar luas íseal ar feadh 5 nóiméad ag teocht an tseomra go dtí go raibh na criostail go léir tuaslagtha go hiomlán. Socraíodh cosaint cille bunaithe ar thorthaí measúnachta MTS de réir 2204 X. GONG ET AL an mhonaróra. Íoslódáil ó https://academic.oup.com/bbb/article/83/12/2202/6044145 by aoi ar 27 Lúnasa 2021treoracha. Socraíodh an dlús optúil ag tonnfhad ionsúcháin de 490 nm. Rinneamar rianú breise ar ghníomhaíocht chomhdhúile 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, agus 8 scoite amach ó chodáin 3 agus 4. Caoluithe sraitheacha de chomhdhúile 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, agus 8 (3.125, 6.25, 12.5, 25, agus 50 μM) leis an ngrúpa cóireáilte chun a n-éifeachtaí cosanta faoi seach ar chealla PC12 spreagtha H2O a chinneadh.

PCR fíor-ama cainníochtúil (qRT-PCR)

Baineadh cealla PC12 ag 12 h tar éis cóireála le 3.125 μM caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II. Baineadh úsáid as imoibrí TRIzol ar an RNA iomlán, agus rinneadh slánchuid den RNA iomlán a thras-scríobh ar ais ag baint úsáide as Máistirfheisteas Primescript RT de réir threoracha an mhonaróra. Fostaíodh na primers seo a leanas le haghaidh na dturgnaimh de réir tuarascála roimhe seo [21]. HO-1: Ar aghaidh 5′ -GC CTGCTAGCCTGGTTCAAG-3′, Droim ar ais 5′ -AGC GGTGTCTGGGATGAACTA-3′; GCLC: Ar Aghaidh 5′ - GTCCTCAGGTGACATTCCAAGC-3′, Droim ar ais 5′ -TG TTCTTCAGGGGCTCCAGTC-3′; GAPDH: Ar Aghaidh 5′-AAGCTGGTCATCAACGGGGAAAC-3′, Droim ar ais 5′- GAAGAGGCCAGTAGACTCCACG-3′. Ansin mhéadaigh PCR slánchuid na cDNA a fuarthas. Ba iad seo a leanas na coinníollacha imoibrithe: dínádúrú tosaigh ag 95 céim (30 s), agus 40 timthriall ina dhiaidh sin ag 95 céim (5 s), 60 céim (34 s), agus 72 céim (35 s). Rinneadh tástáil ar gach primer agus aimsíodh an comhartha fluaraiseacha FL; ansin, ríomhadh an luach △Ct agus cuireadh na luachanna coibhneasta i gcomparáid le luachanna an ghrúpa rialaithe ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas: △Ct=Ct (sampla) − Ct (rialú inghineach), △△Ct {{36} } △Ct (sampla) −△Ct (gan chóireáil), agus athrú fillte=2−△△Ct. Baineadh úsáid as glicearaildéad-3-fosfáit díhidriginease (GAPDH) mar rialú inmheánach.

Eastóscadh próitéin

Síolaíodh cealla PC12 ar 100-miasa mm ag 1 × 107 cill/mhias. Tar éis gabháil, déileáladh leis na cealla faoi seach le caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II (3.125 µM) ar feadh 12 h. Baineadh na gliocóisídí ansin, agus goradh na cealla le H2O2 ar feadh 6 h eile. Tar éis goir, nite na cealla faoi dhó le PBS fuar agus scríobadh ó na miasa le 1 ml de PBS. Rinneadh aonchineálacha cille a lártheifneoiriú ag 1500 rpm ar feadh 10 nóiméad. Tar éis cóireála, baineadh próitéiní ceallacha ag baint úsáide as maolán lysis cille Beyotime RIPA le PMSF 1 mM de réir threoracha an mhonaróra. Ina theannta sin, rinneadh próitéiní cíteaplasmacha agus núicléacha a leithlisiú mar a thuairiscítear i bprótacal trealamh eastósctha núicléach agus cíteaplasma Beyotime. Braitheadh ​​tiúchain próitéine na samplaí ag baint úsáide as trealamh measúnaithe próitéin Beyotime BCA, agus stóráladh na samplaí go léir ag −80 céim le haghaidh anailíse blotála an iarthair [6].

Anailís blot an Iarthair

Rinneadh leictreafóiréis SDS-PAGE tar éis eastóscadh agus dínádúrú próitéine iomlán ó ghrúpaí éagsúla ina dhiaidh sin. Tar éis leictreafóiréis, aistríodh an próitéin chuig seicní PVDF, a cuireadh bac orthu ansin le púdar bainne bearrtha 5 faoin gcéad ar feadh 4 h. Tar éis níocháin, antashubstaint phríomhúil (gAPDH antasubstaint pholaclónach coinín (1:10,000 caolú), antasubstaint polaclónach coinín HO-1 (caolú 1:1000), nó antasubstaint polaclónach coinín GCLC (caolú 1:1000) Cuireadh leis na seicní, a gor thar oíche ag céim 4. An lá dár gcionn, nite na seicní PVDF trí huaire i TTBS.Ar Aghaidh, antasubstainte tánaisteach (cleamhnas comhchuingeach gabhar íon frith-coinín IgG (caolú 1:1000) lipéadaithe le horseradish). Cuireadh peroxidase leis na seicní, a bhí gortha ansin ag teocht an tseomra ar feadh 2 h.Nitear na seicní PVDF agus cuireadh faoi réir imoibrí braite cemiluminescence ECL le haghaidh nochtadh comharthaíochta ar scannán X-gha, a socraíodh agus a scanadh ansin [22].

Anailís staitistiúil

Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as SPSS 19.0, agus cuirtear na torthaí i láthair mar mhodh le diall caighdeánach (SD) de thrí thurgnamh neamhspleácha. Measadh go léiríonn luachanna p < 0.05="" difríochtaí="" suntasacha="">

Torthaí Bunú samhail H2O2

Mar a thaispeántar i bhFíor 2, ní raibh H2O2 ag 50, 100, agus 200 μM ina chúis le leibhéal cuí bás cille. Mar sin féin, d'fheidhmigh 400 μM H2O2 ar chealla PC12 laistigh de 2-6 h, agus bhí an claonadh ann go raibh an damáiste ocsaídiúcháin do chealla cobhsaí. Dá bhrí sin, mheasamar go raibh ionduchtú le H2O2 ag tiúchan 400 μM ar feadh 6 h oiriúnach chun gortú ocsaídiúcháin de bharr strus do chealla PC12 a aithris.

Éifeachtaí cosanta na n-amhábhar ar chealla PC12 atá cóireáilte le H2O2

I gcomparáid leis sin sa ghrúpa múnla H2O2 (Fíor 3), sliocht n-butanol ag tiúchan de 0.05, 0.1, {{10} }.2, agus 0.4 mg/mL feabhas suntasach ar an damáiste ocsaídiúcháin do chealla PC12 a tharlódh ó H2O2 (p < 0.05)="" ar="" bhealach="" a="" bhraitheann="" ar="" thiúchan.="" thug="" na="" sonraí="" seo="" le="" fios="" go="" raibh="" gníomhaíocht="" chosanta="" níos="" cumhachtaí="" sa="" chodán="" n-butanol.="" mar="" sin="" féin,="" léirigh="" eastóscáin="" éitear="" peitriliam="" agus="" aicéatáit="" eitile="" gníomhaíocht="" chosanta="" ag="" tiúchan="" arda="" amháin="" (éitear="" peitriliam:="" 0.1="" agus="" 0.2="" mg/="" ml,="" p="">< 0.{{31}="" }="" 5;="" aicéatáit="" eitile:="" 0.2="" agus="" 0.4="" mg/ml,="" p="">< 0.05).="" ina="" theannta="" sin,="" níor="" léirigh="" tiúchain="" éagsúla="" eastóscáin="" chéim="" uiscí="" aon="" éifeachtaí="" cosanta="" (p=""> 0.05). Ina theannta sin, tá sonraí ó staidéar bailíochtaithe curtha againn ag baint úsáide as línte cille neuroblastoma daonna SH-SY5Y (SH-SY5Y) sa Chomhad Forlíontach. Mar thoradh ar chóireáil le 250 μM H2O2 tháinig laghdú ar inmharthanacht cille; áfach, mhaolaigh cóireáil caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II (3.125, 6.25, 12.5, 25, agus 50 μM) bás cille SH-SY5Y go suntasach. Chruthaigh torthaí an turgnaimh gur chosain caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II cealla SHSY5Y ó ghortú cille spreagtha H2O.

Struchtúir na gcomhdhúile atá scoite amach ón gcodán n-butanól

Chun a dheimhniú go raibh comhpháirteanna gníomhacha sa sliocht n-butanol, rinneamar ocht gcomhdhúil ón eastóscadh a chodánú tuilleadh. Aithníodh struchtúir chomhdhúile 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, agus 8 le sonraí speictreach difreálach (1 H-NMR, 13C-NMR, agus ESI-MS) bunaithe ar chomparáidí le sonraí foilsithe le haghaidh paraboside A. , paraboside B, paraboside I, paraboside II, paraboside III, nuomioside A, caleolarioside B, agus isonuomioside A, faoi seach [20]. Mar shampla, bhí na sonraí le haghaidh paraboside B mar seo a leanas: guma donn; ½ 20 D −55.7 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH max nm (logε): 220 (3.61), 291 (3.54), 330 (3.66) [20]; IRKBr uas cm−1 : 3392, 2943, 2885, 1699, 1683, 1606, 1521, 1361, 1282, 1163, 1114, 1039, 995, 817 cm−; le haghaidh sonraí mionsonraithe speictreascópacha NMR 1 H agus 13C a thaispeántar i dtagairt 20; HR-ESI-MS (diúltach) m/z 741.2231 [MH] - (calc. do C33H41O19, 741.2242) [20]. Ba iad seo a leanas na sonraí le haghaidh paraboside II: púdair amor phous bán; ½ 20 D −80.5 (c 0.05, CH3OH) [20]; UVMeOH max nm (logε): 229 (3.74), 322 (3.73) [20]; IRKBr uas cm−1 : 3419, 1699, 1625, 1596, 1515, 1456, 1419, 1263, 1159, 1139, 1068, 1022, 808 cm−1 [20]; le haghaidh sonraí mionsonraithe speictreascópacha NMR 1 H agus 13C a thaispeántar i dtagairt 20; ESI-MS (diúltach) m/z 637

Éifeachtaí cosanta comhdhúile leithlisithe i gcoinne H2 O2-thocsaineacht spreagtha i gcealla PC12

Baineadh úsáid as measúnachtaí MTS chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht chomhdhúile leithlisithe ar inmharthanacht chealla PC12 a nochtar do thocsaineacht spreagtha H2O. Mar a léirítear i bhFíor 5, i gcomparáid leis sin sa ghrúpa rialaithe, rinne cealla PC12 réamhchóireáil le cúig thiúchan éagsúla de caleolarioside B, paraboside B, paraboside II, nó paraboside A (3.125, 6.25, 12.5, 25, agus 50 μM) le haghaidh 24 h níor léirigh aon difríochtaí suntasacha in inmharthanacht cille (p> 0.05). Mar sin, ní raibh aon chiteatocsaineacht mar thoradh ar réamhchóireáil cealla PC12 le caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II. Mar a léirítear i bhFíor 6, laghdaigh 400 µM H2O2 inmharthanacht cille go suntasach i gcomparáid leis sin sa ghrúpa rialaithe. Ina theannta sin, tháinig méadú suntasach ar inmharthanacht cille cealla PC12 cóireáilte H2O tar éis réamhchóireáil cealla PC12 le tiúchain éagsúla caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II; ina theannta sin, bhí inmharthanacht na gceall ar an gcóireáil ab airde ina dhiaidh sin le 50 µM caleolarioside B, 50 µM paraboside B, agus 12.5 µM paraboside II. Níor léirigh na cúig chomhdhúil eile aon éifeachtaí cosantacha suntasacha ar chealla cóireáilte H2O{{{{{{5}PC12). Chun an toradh seo a léiriú, déanaimid plé ar cheann amháin díobh seo mar shampla, ach ní dhéantar cur síos ar na cinn eile sa lámhscríbhinn.

Leibhéil trascríobh HO-1 agus GCLC

An chéad uair eile rinneamar tástáil ar na leibhéil tras-aistrithe de HO-1 agus GCLC i gcealla PC12 atá cóireáilte le caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II. Bailíodh mRNA iomlán ó chealla PC12 cóireáilte agus neamhchóireáilte ar feadh 12 h, agus ansin cuireadh faoi réir anailíse slonn ag qRT-PCR. Mar a léirítear i bhFíor 7(a,c,e), tháinig méadú suntasach ar leibhéil tras-scríobhacha HO-1 tar éis

Rinneadh réamhchóireáil ar chealla PC12 leis na tiúchain léirithe de caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II ar feadh 12 h (p < 0.{{1{0}}5).="" mar="" a="" léirítear="" i="" bhfíor="" 7(b),="" tháinig="" méadú="" suntasach="" freisin="" ar="" leibhéil="" tras-scríobhacha="" gclc="" i="" gcealla="" pc12="" a="" réamhchóireáil="" leis="" na="" tiúchain="" in="" iúl="" de="" caleolarioside="" b="" ar="" feadh="" 12="" h.="" mar="" sin="" féin,="" tháinig="" laghdú="" suntasach="" ar="" leibhéil="" gclc="" i="" gcealla="" pc12="" réamhchóireála="" le="" paraboside="" b="" ar="" feadh="" 12="" h="" i="" gcomparáid="" leo="" siúd="" sa="" mhúnlaghrúpa="" (p="">< 0.05;="" fíor="" 7(d)).="" ina="" theannta="" sin,="" le="" cóireáil="" paraboside="" ii,="" ní="" raibh="" na="" leibhéil="" gclc="" i="" gcealla="" pc12="" mórán="" difriúil="" i="" gcomparáid="" leo="" siúd="" sa="" mhúnlaghrúpa="" (p=""> 0.05; Fíor 7(f)).

Léiriú HO-1 agus GCLC

Is einsímí tábhachtacha frithocsaídeacha ceallacha iad HO{{{{{{{0}}} agus GCLC, agus is géinte iartheachtacha rialaithe Nrf iad an dá cheann. Breathnaíodh léiriú próitéin HO-1 agus GCLC freisin tar éis cóireála [6]. Léiríonn Fíor 8 na leibhéil próitéine de HO-1 agus GCLC i gcealla PC12 tar éis cóireála le 400 μM H2O2; léirigh na torthaí go raibh na déine fluaraiseacha FL de HO{-1 sna grúpaí caleolarioside B agus paraboside B níos airde ná iad siúd sna grúpaí cóireáilte H2O (Fíor 8(a,c)). Mar sin féin, níor athraigh na comhdhúile slonn GCLC go suntasach, ach amháin i gcás caleolarioside B (Fíor 8(b)). Ina dhiaidh sin, úsáideadh coscairí ceimiceacha HO{-1 chun tuilleadh meastóireachta a dhéanamh ar róil na n-einsímí frithocsaídeacha maidir le rialú a dhéanamh ar na héifeachtaí cosanta a chuireann caleolarioside B, paraboside B, nó paraboside II in aghaidh cíteatocsaineachta spreagtha H2O{{{{2-}). Chuir Caleolarioside B, paraboside B, agus paraboside II (3.125 µM) cosc ​​ar chiteatocsaineacht spreagtha H2O, ach d'aisiompaigh an t-inhibitor HO-1 ZnPP (p < 0.01)="" éifeachtaí="" cosanta="" ag="" 15="" µm="" (fíor="" 8).="">

Plé

Is fadhb thromchúiseach dhomhanda é aosú an daonra. Baineann go leor galair le senility, mar AD agus PD, ar bagairtí tromchúiseacha iad do shláinte an phobail. Tá AD agus PD tagtha chun cinn mar an tríú galar is marfach ar fud an domhain, tar éis galar cardashoithíoch agus ailse. Dá bhrí sin, tá neurodegeneration ina ábhar taighde práinneach ar fud an domhain. Mar sin féin, tá an pathogenesis AD agus PD, galair neurodegenerative an lárchóras na néaróg, fós doiléir go dtí seo. Ina theannta sin, níl ach cúpla druga ann ar féidir leo AD nó PD a chóireáil go héifeachtach mar gheall ar a meicníochtaí casta pataigineacha [23]. Léirigh staidéir roimhe seo gurb iad ROS, mar anion superoxide (O2−) agus H2O2, na príomhfhachtóirí a chuireann le galair neurodegenerative. I measc na n-athruithe paiteolaíocha le linn PD tá degeneration neuronal agus bás an substantia nigra agus dopamine striatal [24,25]. Dá réir sin, tá sé tábhachtach drugaí frithocsaídeacha éifeachtacha a fhorbairt chun PD a chóireáil, agus tá fionnachtain drugaí den sórt sin tar éis éirí mar threoir taighde tábhachtach [26]. Faoi láthair, is cosúil gurb é cosán comharthaíochta Nrf2/ARE an cosán strus frithocsaídeach ingenous is tábhachtaí [27]. Tá AREanna suite i réigiúin cliathánach 5′-ghéinte, mar HO-1 agus GCLC [28,29]. Is géinte a bhaineann le Nrf iad HO{-1 agus GCLC a rialaítear le sruth ón bpróitéin seo [6]. Is féidir le AREanna tionchar a imirt ina dhiaidh sin ar leibhéil frithocsaídeoirí agus an abairt anuas de HO{-1 agus géinte cosanta eile a ghníomhachtú, rud a d'fhéadfadh gníomhaíochtaí cosanta cille a fheabhsú [30,31]. Ina theannta sin, thug torthaí le tuiscint go dtarlaíonn éifeachtaí cosanta resveratrol i gcoinne tocsaineachta spreagtha A 1-42- i gcealla PC12 trí uasrialú slonn HO-1 trí ghníomhachtú chonair chomharthaíochta incheallach Nrf2 [32].

Is múnla glactha de chealla neural iad cealla PC12 agus úsáidtear iad go forleathan i staidéir éifeacht neuroprotective [33]. Is féidir le H2O2 pas a fháil go héasca tríd an scannán cille agus a chomhcheangal le hiarann ​​​​chun fréamhacha saor in aisce an-ghníomhach a fhoirmiú, rud a chothaíonn strus ocsaídiúcháin agus gortú cille [34]. Is ROS tábhachtach é H2O2, agus tá fréamhacha saor in aisce á ghiniúint go héasca agus sách cobhsaí, dá bhrí sin, úsáidtear iad de ghnáth chun múnla strus ocsaídiúcháin a bhunú ag baint úsáide as cealla PC12 [5]. Sa staidéar seo, rinne réamhchóireáil cealla PC12 le tiúchain neamhthocsaineacha den eastóscán plandaí cealla a chosaint ó H2O{2-chíteatocsaineacht trí ghiniúint ROS a laghdú. Tá go leor grúpaí hiodrocsaile feanólacha ag gliocóisídí feinileatánóideach a bhfuil gníomhaíochtaí frithocsaídeacha agus frith-aosaithe acu. Sa staidéar seo, fuair muid amach gur tháirg eastóscadh n-butanol cosaint níos fearr ná codáin polaraíochta eile (Fíor 3). Mar sin, rinneamar scagadh breise ar ghníomhaíochtaí cosanta ocht gcomhdhúil atá scoite amach ón gcodán n-butanol. Léirigh na torthaí don chéad uair go raibh Fíor 8. Anailís ar leibhéil próitéin HO{-1 agus GCLC ar chealla PC12. (a) Baineadh úsáid as anailís blotting an iarthair ar slonn HO{-1 agus GCLC agus GAPDH mar rialú lódála. (b) Anailís blotála thiar slonn próitéin GCLC. (c) Anailís buille an iarthair HO{{2{0}} slonn próitéine. (d) Laghdaigh HO{-1 coscaire ZnPP an éifeacht néarchosanta. Cuirtear sonraí i láthair mar acmhainn ± SD, n=3. ***p < 0.001="" in="" aghaidh="" grúpa="" rialaithe;="" #p="">< 0.05="" versus="" grúpa="" h2o2="" (gan="" znpp="" cóireáilte),="" ##p="">< 0.01="" versus="" grúpa="" h2o2="" (gan="" znpp="" cóireáilte),="" ###p="">< 0.001="" versus="" grúpa="" h2o2="" (gan="" znpp="" cóireáilte);="" agus="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" h2o2="" (le="" znpp="" cóireáilte),="" agus="" &p="">< 0.001,="" i="" gcoinne="" grúpa="" h2o2="" (le="" znpp="" cóireáilte).="" (grúpa="" rialaithe;="" grúpa="" múnla:="" h2o2;="" grúpa="" diúltach="" znpp:="" caleolarioside="" b="" móide="" h2o2,="" paraboside="" b="" móide="" h2o2,="" paraboside="" ii="" móide="" h2o2;="" grúpa="" dearfach="" znpp:="" znpp="" móide="" caleolarioside="" b="" móide="" h2o2,="" znpp="" móide="" paraboside="" b="" móide="" h2o2,="" znpp="" móide="" paraboside="" ii="" móide="" h2o2).="" 2210="" x.="" gong="" et="" al.="" arna="" íoslódáil="" ag="" aoi="" an="" 27="" lúnasa="" 2021="" tá="" éifeachtaí="" suntasacha="" cosanta="" agcaleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" agus="" paraboside="" ii="" i="" gcoinne="" damáiste="" ocsaídiúcháin="" spreagtha="" h2o="" i="" gcealla="" pc12.="" léirigh="" na="" torthaí="" freisin="" gur="" tharraing="" cóireáil="" h2o2="" gortú="" suntasach="" cille="" pc12="" agus="" laghdaigh="" inmharthanacht="" cille,="" ach="" mhaolaigh="" cóireáil="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" agus="" paraboside="" ii="" na="" héifeachtaí="" seo="" go="" suntasach="" (fíor="" 6).="" thuairiscigh="" staidéar="" roimhe="" seo="" go="" bhfuil="" an="" cosán="" nrf2/are="" ar="" cheann="" de="" na="" conairí="" frithocsaídeacha="" ingineacha="" is="" tábhachtaí,="" agus="" is="" féidir="" leis="" léiriú="" marcóirí="" iartheachtacha,="" mar="" ho-1,="" a="" rialáil="" chun="" cealla="" a="" chosaint="" [7].="" léirigh="" torthaí="" qrt-pcr="" agus="" anailísí="" blotála="" an="" iarthair="" go="" ndearna="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" agus="" paraboside="" ii="" leibhéil="" ho-1="" a="" uasrialáil="" go="" suntasach.="" mar="" sin="" féin,="" tháinig="" méadú="" suntasach="" ar="" leibhéil="" trascríobh="" gclc="" i="" gcealla="" pc12="" réamhchóireáilte="" le="" caleolarioside="" b="" ach="" tháinig="" laghdú="" orthu="" siúd="" a="" réamhchóiríodh="" le="" paraboside="" b="" i="" gcomparáid="" leo="" siúd="" sa="" ghrúpa="" samhail.="" ina="" theannta="" sin,="" níor="" athraigh="" arabinoside="" ii="" slonn="" an="" mharcóra="" seo,="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" múnla="" sa="" ghrúpa="" (fíoracha="" 7="" agus="" 8(a–c)).="" ina="" theannta="" sin,="" aisiompaíodh="" éifeachtaí="" cosanta="" caleolarioside="" b,="" paraboside="" b,="" agus="" paraboside="" ii="" i="" gcoinne="" gortú="" cille="" pc12="" spreagtha="" h2o="" ag="" an="" inhibitor="" ho{{-1="" znpp="" (fíor="" 8(d)).="" mar="" fhocal="" scoir,="" rinne="" na="" gliocóisídí="" feinileatánóideacha="" caleo="" larioside="" b,="" arabinoside="" b,="" agus="" paraboside="" ii="" cealla="" pc12="" a="" chosaint="" go="" héifeachtach="" ó="" dhamáiste="" ocsaídiúcháin="" h2o.="" dá="" réir="" sin,="" d'fhéadfadh="" na="" comhdhúile="" seo,="" atá="" scoite="" ó="" p.="" martini,="" ionadaíocht="" a="" dhéanamh="" ar="" iarrthóirí="" féideartha="" drugaí="" do="" chóireáil="" galair="">

Ranníocaíochtaí údairLM, agus ZC a cheap agus a dhear na turgnaimh. Rinne GX, RK, agus BX na turgnaimh. Scríobh GX agus XY an páipéar. Phléigh GX, XY, RK, BX, ZC, agus LM na torthaí, rinne siad trácht ar an lámhscríbhinn. Léigh na húdair go léir an lámhscríbhinn deiridh agus d'fhaomh siad.

Ráiteas nochtaNíor thuairiscigh na húdair aon choinbhleacht leasa féideartha. Maoiniú Thacaigh Cistí Taighde Choláiste Leighis Baotou leis an obair seo [uimhir an deontais: BYJJ-YF 201727], agus fóirdheontas speisialta seirbhíse sláinte poiblí leighis na Síne 2018 "an ceathrú suirbhé ar acmhainn medica materia na Síne" [uimhir deontais: Cumann Airgeadais [2018 ] 43].

Tagairtí

[1] Butterfield DA. Peirspictíochtaí ar strus ocsaídiúcháin i ngalar Alzheimer agus béim ar thuar taighde sa todhchaí. J Alzheimers Dis. 2018; 64:1–11.

[2] Chignon C, Tomas M, Bonnefontrousselot D, et al. Strus ocsaídiúcháin agus an peptide amyloid-béite i ngalar Alzheimer. Redox Biol. 2018; 14:450–464.

[3] Guo JD, Zhao X, Li Y, et al. Damáiste do néaróin dopaminergic ag strus ocsaídiúcháin i ngalar Parkinson (athbhreithniú). Int J Mol Med. 2018; 41: 1817-1825.

[4] Bai Y, Dong LH, Huang XH, et al. Comhlachas ilmorphisms rs823128, rs1572931, agus rs823156 le rioscaí laghdaithe galar Parkinson. Néar-thuairisc. 2017; 27: 936-941.

[5] Han XH, Zhu SL, Wang BX, et al. Cosnaíonn gníomh frithocsaídeach de 7,8-déhidroxyfllavone cealla PC12 ar 6-chíteatocsaineacht spreagtha le hidreacsadópamine. Neurochem Int. 2014; 64:18-23.

[6]             Li MQ, Xu T, Zhou F, et al. Éifeachtaí néarchosanta ag ceithre ghliogóisídí feinileatánóideach ar apoptóis spreagtha H2O ar chealla PC12 tríd an gcosán Nrf2/ARE. Int J Mol Sci. 2018; 19: 1135.

[7]             Buendia I, Michalska P, Navarro E, et al. Nrf2-TÁ cosán: sprioc atá ag teacht chun cinn i gcoinne strus ocsaídiúcháin agus néar-athlasadh i ngalar néar-mheathlúcháin. Teiripe Pharmacol. 2016; 157:84-104.

[8]             Jia XJ, Yan XS, Cai ZP, et al. Éifeachtaí gliocóisídí feinileatánóideach, a dhíorthaítear ó Herba cistanche, ar easnaimh chognaíocha agus ar ghníomhaíochtaí frithocsaídeacha i lucha fireann SAMP8. J Toxicol Env Heal A. 2017; 80:1180–1186.

[9]             Tsvetkov DE, Dmitrenok AS, Tsvetkov YE, et al. Gliogóisídí feanylthanoid ó snaidhmeanna adhmaid teak agus a ngníomhaíocht frithocsaídeach. J Biol Gníomhach Prod Nat. 2016; 6:272–281.

[10] Zhang YQ, Gao EY, Liang CQ, et al. Gníomhaíocht frithocsaídeach de chomhdhúile glycosíde caffeoyl phenylethanoid ó Lindernia ruellioides in vitro. Cent South Pharm. 2017; 15: 1687-1690.

[11]             Wu ZH, Ma YF, Zhao L, et al. Ról Nrf2-ARE conair i gortú struis ocsaídiúcháin agus a ghaol le conairí comharthaíochta eile. Anim Husbandry Feed Sci. 2016; 37:42–48.

[12]             Zheng XK, Li J, Feng WS, et al. Dul chun cinn i staidéar Gesneriaceae. Chin J Drugaí Nua. 2003; 12:261–263.

[13] Wen F, Li ZD. Dul chun cinn taighde ar phlanda Gesneriaceae. Smig Acmhainn Plandaí Fiáin. 2006; 25:1–6.

[14]             Yan WY, Chen L, Wang JM, et al. Dul chun cinn taighde triterpenoids de phlandaí Gesneriaceae. Nat Prod Res Dev. 2012; 24:698–701.

[15] Cuideachta leighis luibhe na Síne. Na taifid acmhainne leigheas traidisiúnta Síneach. An tSín: Science Press; 1994.

[16] Bai ZF, Wang XQ, Xiao PG, et al. Dáileadh gliocóisídí phenylthanoid i bplandaí míochaine Gesneriaceae. Chin J Chin Mater Med. 2013; 38:4267–4270.

[17] Dúirt sé ZD, Lau KM, Xu HX, et al. Gníomhaíocht frithocsaídeach de gliocóisídí feinileatánóideach ó Brandisia hancei. J Eitnopharmacol. 2000; 71:483–486.

[18]             Li L, Shi DF, Gui YG, et al. Staidéar ar Ghníomhaíochtaí frithocsaídeacha na gliocóisídí feinileatánóideach ó Cistanche deserticola. J Anhui Agrai Sci. 2009; 32: 15835-15836.

[19]             Ju BW, Yang JH, Yan Y, et al. Éifeachtaí cosanta gliocóisídí cistéise ar dhamáiste cealla PC12 PARABOLA MARTINI COSANTA PC12 CILLE Ó H2O2-DÍOBHÁIL TIONCHAIR 2211