Feabhsaíonn Nicitín Athartha Cuimhne Eagla, Laghdaíonn sé Riarachán Nicitín, Agus Athraíonn Feidhm Ghéiniteach agus Néarach Hippocampal sa Sliocht

Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com

Lisa R. Goldberg1*|Dána Zeid1*|Munir Gunes Kutlu2|Robert D. Cole3|Valeria Lallai4|Aswathy Sebastian5|Istvan Albert5|Christie D. Fowler4|Vinay Parikh6|Tomás J. Gould1

1An Roinn Sláinte Bith-Iomparúil, Ollscoil Stáit Penn, Páirc na hOllscoile, Pennsylvania

2An Roinn Cógaseolaíochta, Scoil Leighis Vanderbilt, Nashville, Tennessee

3Coláiste Cógaisíochta, Ollscoil Kentucky, Lexington, Kentucky

4An Roinn Néar-bhitheolaíochta agus Iompraíochta, Ollscoil California Irvine, Irvine, California

5Bithfhaisnéisíocht, Bithcheimic agus Bitheolaíocht Mhóilíneach, Ollscoil Stáit Penn, Páirc na hOllscoile, PA

6 An Roinn Síceolaíochta, Ollscoil Temple, Philadelphia, Pennsylvania

Teibí

Tá úsáid Nicitín fós an-choitianta i gcás táirgí tobac agus r-toitíní a chaitear ar fud an domhain. Mar sin féin, tugann fianaise mhéadaitheach ar oidhreacht eipigéiniteach trasghlúine le fios go bhféadfadh úsáid nicotín iompar agus néar-bhitheolaíocht a athrú sna glúine ina dhiaidh sin. Rinneamar tástáil ar éifeachtaí nochta nicotín paternal ainsealach i lucha C57BL6 / J ar riochtú eagla i sliocht F1 agus F2, chomh maith le díothú eagla coinníollaithe agus aisghabháil spontáineach, féin-riarachán nicotín, feidhmiú cholinergic hippocampal, léiriú RNA, agus meitile DNA i F1 sliocht. Bhí baint ag nochtadh nicotín atharthachta le riochtú eagla comhthéacsúil agus cued feabhsaithe agus aisghabháil spontáineach ar chuimhní eagla múchta. Ina theannta sin, laghdaíodh atreisiú nicotín i lucha nicotín, mar a measadh i paradigm féin-riaracháin. Cuireadh na feinitíopaí iompraíochta seo i dteannta le freagairt athraithe ar nicotín, ceangailteach receptor acetylcholine hippocampal hippocampal suas-rialaithe, sruthanna cholinergic hippocampal spreagtha laghdaithe, agus meitilation agus léiriú géinte hippocampal a bhaineann le forbairt néar agus plaisteacht. Tugann anailís ar léiriú géine le fios go bhfuil éifeachtaí ilghlúine ar líonraí géine níos leithne a bhféadfadh baint a bheith acu le neuroplasticity agus neamhoird mheabhrach. Tugann na hathruithe ar riochtú eagla mar an gcéanna le fios feinitíopaí cosúil le neamhoird imní cosúil le strus iar-thrámach.

EOCHAIRÍ: colinergic, hippocampus, foghlaim, ilghlúine, nicitín, trasghlúine

éifeachtaí cistanche

1 RÉAMHRÁ

Tugann fianaise carntha le fios go dtéann an tionchar a bhíonn ag nochtadh do dhrugaí mí-úsáide níos faide ná an duine aonair chun cur isteach ar fheinitíopaí fiseolaíocha agus iompraíochta i sliocht neamhnochta.1-3 Tá sé ríthábhachtach éifeachtaí nicotín a thréithriú thar na glúnta ag cur san áireamh leitheadúlacht úsáid táirgí tobac4 agus an t-ardú suntasach. úsáid r-toitíní.5 Trína héifeachtaí ar chórais cholinergacha inchinn, táirgeann nochtadh nicotín athruithe suntasacha ar fheidhm na hinchinne a d'fhéadfadh a bheith mar bhonn le andúile nicotín agus a chuireann le riosca méadaithe do neamhoird shíciatracha, lena n-áirítear dúlagar6 agus imní. cead a thabhairt d’iarmhairtí leanúnacha ar fheidhm cheallacha agus chiorcaid.8,9 Go dtí le déanaí, creideadh gur scriosadh na modhnuithe eipghiniteacha seo nuair a bunaíodh an ghaiméite agus dá bhrí sin forlámhasaíodh iad ó na glúine ina dhiaidh sin. Mar sin féin, is féidir modhnuithe epigenetic, lena n-áirítear meitilation DNA, modhnuithe histone posttranslational, agus RNAs noncoding, a fuarthas i nglúin amháin a oidhreacht sa chéad ghlúin eile. .

Tá tús curtha le staidéir creimirí ó ilsaotharlanna neamhspleácha chun iarmhairtí ilghlúine agus trasghlúine a bhaineann le nochtadh nicotín tuismitheora a shainaithint. D’aithin an obair seo go dtí seo éifeachtaí nochta tuismitheora nicotín ar fheinitíopaí dúlagair agus imníoch, 1 solúbthacht chognaíoch, 2 iompraíochtaí cosúil le neamhord aird-easnaimh hipirghníomhaíochta (ADHD),3 agus léiriú géine.1,2 Iarmhairtí ilghlúine agus trasghlúine. d’fhéadfadh tionchar a bheith ag nochtadh nicotín ar endophenotypes a bhaineann le andúile nicotín agus le meabhairshláinte. Mar shampla, tá sé léirithe againn go modhnaíonn nochtadh nicotín riochtú eagla comhthéacsúil, samhail d’fhoghlaim eagla hippocampus-spleách a bhaineann le leochaileacht do neamhoird meabhairshláinte amhail neamhord struis iarthrámach (PTSD) agus andúil.12-14 Nicitín déanann an hippocampus éifeachtaí ar fhoghlaim eagla comhthéacsúil a mhodhnú.15,16 Tá sé faighte amach againn go gcuireann géar-nochtadh nicotín feabhas ar eagla atá ag brath ar hippocampus, 15,17 bac ar eagla comhthéacsúil,18,19 agus cuireann sé le hathghabháil spontáineach eagla comhthéacsúil ina dhiaidh sin. éag.18 Mar sin féin, níl aon staidéar déanta ar na héifeachtaí ilghlúine agus trasghlúine a bhaineann le nochtadh nicotín atharthachta ar na feinitíopaí seo. Ina theannta sin, níor shainaithin aon staidéir roimhe seo éifeachtaí ilghlúine Nicitín ar fheidhm cholinergic. Tagraíonn oidhreacht ilghlúine d’fheinitíopaí a thagann chun cinn sa ghlúin díreach i ndiaidh daoine aonair nochta, ach is éard atá in oidhreacht trasghlúine ná oidhreacht trí mheán ghaiméite d’fhaisnéis eipigéiniteach idir na glúnta in éagmais tionchair timpeallachta díreacha as a dtagann éagsúlacht feinitíopach.11 Anseo, rinneamar scrúdú ar an dá ghlúin ilghlúine. agus éifeachtaí trasghlúine de nochtadh paternal nicitín ar fhoghlaim eagla comhthéacsúil agus cued sa ghlúin F1 agus F2 chomh maith le féin-riarachán nicotín, ceangailteach receptor acetylcholine nicotinic hippocampal (NAChR), feidhmiú cholinergic hippocampal, léiriú géine hippocampal, agus hippocampal meitile i an ghlúin F1. Tugaimid hipitéis go mbeidh tionchar ag nochtadh paternal nicitín ar riochtú eagla, léiriú géine hippocampal, agus go bhfeidhmeoidh sé i sliocht agus sliocht.

éifeachtaí sliocht cistanche

2 MODHANNA AGUS ÁBHAR

2.1 Ábhair

Ba iad na hábhair ná lucha fireann agus baineann C57BL/6J (8-20 seachtain d’aois, Saotharlann Jackson, Bar Harbor, ME). Cé is moite de thithíocht do phórú harem, tugadh cóiríocht do gach ainmhí le timthriall solais/dorcha 12 uair an chloig agus rochtain ad libitum ar bhia agus ar uisce. Le linn féin-riaracháin, bhí srianadh bia ar na hábhair go 85 faoin gcéad go 90 faoin gcéad dá meáchan coirp saor-bheathú, agus cuireadh uisce ar fáil ad libitum. Tharla gach tástáil iompraíochta idir 9:00 AM agus 6:00 PM. Rinneadh na nósanna imeachta go léir de réir Threoir NIH um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Saotharlainne agus faomhadh ag coistí IACUC Ollscoil Penn State, Ollscoil Temple, nó Ollscoil California Irvine.

2.2 Nochtadh nicotín ag pathar

Fuair ​​fireannaigh (8 seachtaine) 0.9 faoin gcéad salanda steiriúla nó salann tartrate hidrigine nicotín (12.6 mg/kg/lá, bunmheáchan saor in aisce - Fisher Scientific, Waltham, MA nó MP Biomedical, Santa Ana, CA) tuaslagtha i 0.9 faoin gcéad salanda steiriúla, seachadta go subcutaneously trí mionchaidéil osmotic (Alzet, Model 1004, Durect, Cupertino, CA) ar feadh 28 lá. Táirgeann an dáileog seo plasma leibhéil nicotín agus cotinine atá inchomparáide leo siúd a fheictear i daoine a chaitheann tobac measartha.20,21

2.3 Giniúint lucha F1 agus F2

Tá leathré na nicotín i lucha thart ar 6 nóiméad.22 Tá sé léirithe roimhe seo go n-ídíonn tionchair aistarraingt nicotín 4 lá tar éis an nicotín a bhaint.23-25 Mar sin, tá moill ceithre lá idir cóireáil nicotín agus Cuireadh pórú i bhfeidhm chun a chinntiú go ndíothaítear nicitín go córasach roimh phórú. Cuireadh lucha fireanna isteach i gcliabháin le beirt baineannach C57BL/6 J naive (8-20 seachtain d’aois) ar feadh 2 sheachtain chun sliocht F1 a ghiniúint. Gineadh lucha F2 trí lucha F1 fireann naive a chúpláil le baineannaigh naive.

2.4 Eagla aeroiriúnaithe

Tá cur síos mionsonraithe déanta ar nósanna imeachta um riochtú eagla agus díothaithe roimhe seo.19 Go hachomair, cuireadh oiliúint ar lucha agus tástáladh iad i ndlísheomraí maolaithe torainn (18.8 × 20 × 18.3 cm, torann cúlra 65 dB; MED Associates, St. Albans, VT). Bhí eagla ar lucha F1 agus F2 le dhá spreagadh coinníollaithe (CS, 30 s, torann bán 85-dB)–spreagadh neamhchoinníollach (na suaiteanna coise SAM, 2 s, 0.57-mA) scartha le 120 soicind. Chun scrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí géara Nicitín ar aeroiriúnaithe eagla i lucha F1 agus F2, fuair sliocht nicotín géarmhíochaine (0.09 mg/kg, meáchan freebase NIC, ip; salann tartrate hidrigine nicotín, Fisher Scientific) nó saline (SAL) 2 go 4 nóiméad roimh ré. chuig seisiúin oiliúna agus tástála. Fiche ceithre huaire an chloig tar éis na hoiliúna, cuireadh na lucha ar ais chuig an gcomhthéacs oiliúna ar feadh 5 nóiméad chun reo comhthéacs a mheas. Tar éis tástáil chomhthéacsúil, cuireadh na lucha i ndlísheomraí ar leith chun foghlaim le eagla a mheas. Turgnamhóirí dalláilte ar choinníollacha a ndearnadh measúnú orthu ar reo, a shainmhínítear mar easpa gluaiseachta deonach seachas riospráid, trí mhodh samplála ama neamhchlaonta.19 Chun scrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí uasteorainneacha féideartha le linn tástála cued, fuair cohórt ar leith de lucha F1 oiliúint comhionann le CS-US amháin. Rinneadh scrúdú freisin ar phéireáil, agus eagla comhthéacsúil agus téarnamh spontáineach. Tharla múchadh eagla thar chúig sheisiún as a chéile ag tosú an lá tar éis tástáil eagla comhthéacsúil agus cued. Tar éis an tseisiúin díothaithe deiridh, fágadh na lucha gan cur isteach ina gcliabháin tí ar feadh 7 lá agus ansin rinneadh iad a atriall i gcomhthéacs traenála le haghaidh téarnamh spontáineach. Chun a chinneadh an raibh aon difríochtaí breathnaithe i riochtú eagla mar gheall ar dhifríochtaí in íogaireacht turrainge, imní, nó easnaimh foghlama níos leithne, rinneadh tástáil bhreise ar ainmhithe fireanna agus baineanna NIC- agus SAL-Sired i réimse oscailte, íogaireacht turrainge, ardaithe móide lúbra ( EPM), agus paraidímí aitheantais réad nua (féach Faisnéis Tacaíochta le haghaidh modhanna agus torthaí iomlána).

2.5 Féinriarachán nicotín bia agus infhéitheach

A separate cohort of adult SAL‐Sired and NIC‐Sired F1 mice were used for food and nicotine self‐administration studies. Beginning at 6 weeks of age, male F1 mice were weighed, mildly food‐restricted to 85% to 90% of their free‐feeding body weight, and then trained to press a lever in an operant chamber (Med Associates) for food chow pellets (20 mg; TestDiet, Richmond, IN) under a fixed‐ratio 5, time out 20 seconds (FR5TO20 sec) schedule of reinforcement (see Supporting Information for full methods). Once stable responding was achieved (>25 millíní in aghaidh an tseisiúin ar fud trí sheisiún ina dhiaidh sin), bhí na hábhair catheterized vein jugular faoi ainéistéise isoflurane (1 faoin gcéad -3 faoin gcéad ) / gal ocsaigine, mar a thuairiscítear roimhe seo.26 Ceadaíodh lucha níos mó ná nó cothrom le 72 uair an chloig a ghnóthú ó mháinliacht roimh rochtain freagra a thabhairt arís le haghaidh luach saothair bia. Cinntíonn athbhunú an fhreagra bia go bhfuil na lucha tar éis obráid iar-infhéitheach a ghnóthú go leordhóthanach agus go léiríonn siad gnáthfhreagairt oibritheora tar éis moill ar rochtain ar na seomraí oibrithe. Ceadaíodh do na lucha ansin féinriarachán nicotín infhéitheach (IV) a fháil le linn seisiúin laethúla 1 uair an chloig, 6 go 7 lá in aghaidh na seachtaine (salann tartrate hidrigine nicotín tuaslagtha i 0.9 faoin gcéad saline steiriúil, {{1{). {12}}}}.03 mg/kg/insileadh, bunmheáchan saor in aisce; MP Biomedical, Santa Ana, CA). Seachadadh nicotín IV ag caidéal steallaire Razel (Med Associates). Bhí dhá luamhán in-aistarraingthe ag gach seisiún (ceann gníomhach, ceann neamhghníomhach). Mar thoradh ar chríochnú na gcritéar freagartha ar an luamhán gníomhach seachadadh insileadh nicotín IV (0.{{20}} toirt insileadh 3 ml; sceideal FR5TO20 soic). Taifeadadh freagraí ar an luamhán neamhghníomhach ach ní raibh aon iarmhairtí sceidealaithe acu. Tar éis ocht seisiún fála ag 0.03 mg/kg/insileadh, d’athraigh an dáileog insileadh go 0.1 mg/kg/insileadh ar feadh sé sheisiún. I gcás gach dáileog, úsáideadh meán-iontógáil na dtrí sheisiún deiridh le haghaidh anailísí staitistiúla. Rinneadh caititéar a shruthlú go laethúil le saline steiriúil fiseolaíoch (0.9 faoin gcéad w/v) ina raibh heparin (100 aonad USP/ml). Fíoraíodh patency catheter le Brevital (sóidiam Methohexital, Eli Lilly, Indianapolis, IN) tar éis na céime féin-riaracháin nicotín. Chun iompar a bhaineann le hathiompú a mheasúnú, rinneadh tástáil ar na lucha le haghaidh gorlainne craving tar éis an tseisiúin díreach tar éis na dáileog 0.1 mg / kg / insileadh deiridh de fhéinriarachán nicotín IV; sa nós imeachta seo, ceadaítear do lucha freagairt ar an luamhán gníomhach ach ní fhaigheann siad aon insiltí nicotín. Ar an gcéad seisiún gor bunlíne (lá 1), cuireadh lucha i ndlísheomraí oibriúcháin faoin sceideal FR5TO20 soic le gníomhachtú solais cue teagmhasach. Ina dhiaidh sin, cuireadh na lucha i gcliabháin tí ar feadh 20 lá. Ar an 21ú lá den staonadh, scrúdaíodh na lucha le haghaidh gorlainne craving, agus an solas gníomhach luamhán á sheachadadh faoi sceideal soic FR5TO20. Rinne turgnaimh staidéar a bhí dall ar choinníollacha grúpa, agus thaifead bogearraí MedAssociates freagairtí iompraíochta go huathoibríoch.

2.6 Ceangailteach receptor acetylcholine Nicotinic

Rinneadh measúnú ceangailteach radioligand16 ag baint úsáide as hippocampi ó lucha 8 seachtaine NIC-Sired (5 M agus 10F) agus SAL-Sired (9 M agus 6F) F1. Rinneadh samplaí homogenized ag baint úsáide as maolán lysis (5 mM Tris móide 5 mM EDTA móide 5 mM EGTA), lártheifneoirithe ag 100 000 g ar feadh 30 nóiméad ag 4 céim , athchur ar fionraí i maolán lysis, agus lártheifneoirithe arís. Athchóiríodh millíní i maolán siúcrós Tris/10 faoin gcéad agus goraíodh iad le [3 H] Epibatidine ([3 H]EB) (~2 nM bunaithe ar 27,28) (gníomhaíocht shonrach 54.1 Ci/mmol, PerkinElmer, Boston, MA) ar feadh 1 uair an chloig ag teocht an tseomra. [3 H] Roghnaíodh EB le haghaidh ceangailteach nAChR, mar gur léirigh torthaí roimhe seo go ndéanann hippocampal heteromeric 4 2 nAChRs idirghabháil ar éifeachtaí Nicitín ar riochtú eagla.17 Rinneadh measúnú ar cheangal neamhshonrach i láthair 300 μM nicotín (salann tartrate hidrigineach nicotín tuaslagtha i Tris Maolán, tiúchan bonn saor in aisce). [3 H] Rinneadh scagadh ar NAChRanna faoi cheangal EB (buanadóir cille 24-tobar, Brandel Co, Gaithersburg, MD), agus chuntar scintillation leacht (Tri-Carb 2810 TR, Perkin Elmer, Boston, MA) radaighníomhaíocht tomhaiste. Ríomhadh ceangal sonrach arna shloinneadh mar fhíochán fmol/mg mar an difríocht idir ceangailteach iomlán agus neamhshonrach.16

2.7 Taifid cholinergacha amperometric in vivo

Baineadh úsáid as cohórt ar leith de lucha NIC-Sired agus SAL-Sired F1 naive 1{0- go 20 seachtaine d'aois chun athruithe i dtarchur cholinergic hippocampal a mheas ag baint úsáide as amperiméadracht. Micrileictreoidí ceirmeacha-bhunaithe (An Lárionad um Theicneolaíocht Mhicrileictreoid, Lexington, KY), le 4 shuíomh taifeadta platanam (15 × 333 μm) socraithe i mbeirteanna (uachtair agus íochtair), a bhí brataithe leis an choline oxidase (Uimhir CE 1.1.3.17; Sigma- Aldrich, St. Louis, MO), mar a tuairiscíodh roimhe seo.29 Leictripholaiméiríodh leictreoidí le meta-phenylenediamine (m-PD; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) chun roghnaíocht a fheabhsú chun sruthanna choilín a bhrath. Baineadh úsáid as micrileictreoidí le híogaireacht níos mó ná nó cothrom le 3pA/μM agus teorainn braite níos lú ná nó cothrom le 400 nM le haghaidh choilín chun innéacs íogair scaoileadh Acetylcholine (ACh) a sholáthar.30 Rinneadh ainéistéiseach ar ainmhithe le úireatán (1.2-1.5). g/kg, ip), agus micrea-leictreoidí atá brataithe le heinsím, íslíodh go steiréitíteach isteach sa droma (A/P – 1.7 mm, M/L ± 1.5 mm, D/V –2.3 mm) nó ventral (A/P −3.1 mm, M. /L ± 3.0 mm, D/V −4.3 mm) hippocampus. Rinneadh measúnú ar leithligh ar hippocampus ventral agus droma, mar go gcuireann siad go difreálach le riochtú eagla comhthéacsúil: tá ról níos suntasaí ag an hippocampus ventral (vHPC) i gcomhcheangal agus léiriú eagla, agus tá an hippocampus droma (DHCP) ríthábhachtach don chuimhne comhthéacsúil.31 Ag/ Ionchlannaíodh leictreoidí tagartha AgCl isteach sa cortex rostral contralateral.

Rinneadh taifeadtaí amperometric ag 2 Hz trí phoitéinseal seasta de móide 0.7 V a chur i bhfeidhm, agus rinneadh sonraí a dhigitiú (FAST-16 potentiostat, Quainton, Nicholasville, KY). Cobhsaíodh sruthanna cúlra ar feadh 60 nóiméad, ansin cuireadh drugaí isteach sa hippocampus ag baint úsáide as ribeach gloine (trastomhas rinn: 15 μm) ceangailte leis an leictreoid. Tomhaiseadh scaoileadh ACh depolarization-tarraingthe trí bíoga gairide de photaisiam (KCl 70 mM; 100 NL) nó NIC (1 mM freebase, tartrate Nicitín; 100 NL) a chur i bhfeidhm ag 2 go 10 psi gach 2 nóiméad. Rinneadh na taifeadtaí a fhrithchothromú don réigiún hippocampal (dorsal nó ventral) agus drugaí (potaisiam nó NIC). Rinneadh aimplitiúid comhartha choilín a thomhas leis an athrú ar an sruth ar an gcainéal atá brataithe le heinsím ó shruth bunlíne agus a thiontú go coibhéisí μM de choilín bunaithe ar chalabrú in vitro. Glacadh le féintagairt chun déantáin a dhíchur trí shruthanna a dhealú ó chainéil fheighlithe.29 Fíoraíodh socrúchán micrileictreoidí le staining Nissl ar chodanna dobharchampal corónach (Fíor S1). Úsáideadh meán de dhá fhreagra in aghaidh an ionramhála drugaí in aghaidh an ainmhí le haghaidh anailís staitistiúil.

2.8 Anailís staidrimh

Rinneadh comparáidí staitistiúla ag baint úsáide as SPSS (IBM, Armonk, NY) nó GraphPad Prism (La Jolla, CA, SAM). Socraíodh asluitigh ag luachanna 2 dhiall caighdeánach os cionn an mheáin. Má aimsíodh asluiteach, tá an fhaisnéis san áireamh i rannán na dtorthaí. Socraíodh an critéar maidir le tábhacht ag=.05. Rinneadh anailís staitistiúil ar dtús lena n-áirítear gnéas mar thoisc do gach turgnamh a rinne tástáil ar sliocht fireannaigh agus baineanna araon. Thit anailísí trasna gnéis nuair nár aimsíodh idirghníomhaíochtaí trí bhealach nó dhá bhealach le gnéas (P > .05). Rinneadh anailís ar na sonraí trí thástáil t, 1-bhealach, nó 2-bhealach ANOVA, de réir mar is cuí. Ina dhiaidh sin rinneadh comparáidí iar hoc LSD ar phríomhthionchar nó ar idirghníomhaíocht. Leanadh bearta arís agus arís eile ANOVAanna trí chomparáid post hoc Bonferroni le ceartúchán le haghaidh comparáidí iolracha. Má aimsíodh athraithis mhíchothroma, baineadh úsáid as tástáil t Welch le haghaidh athraithis mhíchothroma agus rinneadh céimeanna saoirse a shlánú síos.

2.9 Leithlisiú RNA/DNA

Rinneadh lucha F1 do dhaoine fásta (8 seachtaine d’aois; n=3 M agus 3 F in aghaidh an ghrúpa) a eotánú trí dhíláithriú ceirbheacsach. Rinneadh Hippocampi a roinnt go tapa i gcodanna ventral agus droma (i gcóimheas 1:1), comhthiomsaithe ón taobh clé agus ar dheis, agus splanc reoite ar oighear tirim. Rinneadh DNA agus RNA a chomh-aonrú agus a íonú trí úsáid a bhaint as Kit Mini AllPrep DNA/RNA (Qiagen, Valencia, CA). Rinneadh measúnú ar thiúchan agus ar cháilíocht RNA agus DNA ag baint úsáide as NanoDrop2000 (NanoDrop, Wilmington, DE) agus Agilent Bioanalyzer (Agilent, Santa Clara, CA). I gcás eastóscadh RNA, ba é 8.5 an Uimhir Sláine íosta RNA (RIN).

2.10 Anailís thrascríofa trí

D’ullmhaigh Príomhshaoráid Géanómaíochta Institiúidí Huck na nEolaíochtaí Beatha (Ollscoil Penn State) leabharlanna seicheamhaithe RNA le haghaidh léamh aon-deireadh 150 bp ag baint úsáide as an Illumina TruSeq Stranded mRNA Library Prep Kit (Illumina, San Diego, CA). agus seicheamhú ar an Illumina HiSeq 2500 i mód mear-reatha (trí rith as a chéile le timpeall 10 milliún léamh in aghaidh an tsampla). Seiceáladh cáilíocht comhaid FASTQ trí FASTQC agus bhí meánscóir cáilíochta Phred in aghaidh an léite acu níos mó ná 30 (.i. earráid seicheamhaithe níos lú ná 0.1 faoin gcéad). Rinneadh comhaid FASTQ a ailíniú le géanóm tagartha luiche (mm10; Brabhsálaí Géanóim UCSC) ag baint úsáide as TopHat (v2.1.0)32 ar Galaxy Project33. Baineadh úsáid as Cufflinks agus Cuffmerge (v2.2.1.0)34 chun tras-scríbhinní ó léite léarscáilithe a chur le chéile agus chun comhaid tras-scríbhinne a chumasc le haghaidh an chomhthionóil trascríobh deiridh. Ríomhadh luachanna P coigeartaithe ráta fionnachtana bréagach (FDR) le haghaidh léiriú géine difreálach ó shamplaí NIC-Sired agus SAL-Sired ag baint úsáide as Cuffdiff (v2.2.1.3), 34 le scoite caighdeánach FDR de 0.05.35 taisceadh tacair sonraí Transcriptome chuig Omnibus Léirithe Géine.

2.11 Anailís saibhrithe

Rinneadh anailís ar ghéinte a léiríodh go difreálach agus úsáid á baint as anailís conair intleachta (IPA, arna rith i mí na Nollag 2018; www.qiagen.com/ingenuity; Qiagen, Redwood City, CA, USA)36 chun saibhriú féideartha ar líonraí bitheolaíocha comhthiomsaitheach a nochtadh. Sonraíodh paraiméadair rith uasmhéid de 35 móilín in aghaidh an líonra géine agus anailís theoranta ar fhíochán CNS mamaigh nó línte cille. Cinneadh tábhacht staitistiúil maidir le saibhriú ag baint úsáide as tástáil bheacht Fisher eireabaill ceartaithe le haghaidh tástála iolrach.

2.12 Seicheamh spriocdhírithe déshulfíte

Baineadh úsáid as DNA comh-aonraithe le RNA (féach Roinn 2.9) le haghaidh anailíse meitilation DNA. D’aithin RNA-seq 952 agus 162 géinte a cuireadh in iúl go difreálach i vHPC agus DHCP, faoi seach. Roghnaíodh na 1 01{23}} ghéin uathúla ó na liostaí comhcheangailte seo le haghaidh saibhrithe i bisulfite-seq ag baint úsáide as Córas Saibhrithe SeqCap Epi saincheaptha (Roche, Pleasanton, CA, SAM; Tábla S1).38 Déshulfite spriocdhírithe rinneadh seicheamhú ag Lárshaoráid Géanómaíochta na nEolaíochtaí Beatha de chuid Institiúidí Penn State Huck. Tógadh leabharlanna ag baint úsáide as trealamh KAPA Hyper Prep (Kapa Biosystems, Wilmington, MA). Méadaíodh agus saibhríodh PCR leabharlanna arna dtiontú ag bisulfite sóidiam do réigiúin ghéanómacha roghnaithe ag baint úsáide as sraith taiscéalaithe gabhála saincheaptha (SeqCap Epi Choice Probes; Roche, Pleasanton, CA, USA). Cuireadh DNA gafa in ord ar an Illumina HiSeq 2500 ag baint úsáide as 100 nt léamh péireáilte. Seiceáladh cáilíocht comhaid FASTQ trí FASTQC. Baineadh seichimh cuibheora Illumina agus bearradh bunanna ar chaighdeán íseal ag baint úsáide as Trimmomatic.39 Rinneadh bearradh bonn ar chaighdeán íseal le cur chuige fuinneog sleamhnáin, bearradh nuair a thit an meánchaighdeán laistigh d'fhuinneog ceithre bhonnphéire faoi thairseach 20, le íosfhad léite de 35. Tar éis bearradh, bhí meánscóir cáilíochta in aghaidh an léite ag comhaid FASTQ níos airde ná 30 (ie, earráid seicheamhaithe níos lú ná 0.1 faoin gcéad). Rinneadh léamha bearrtha a mhapáil chuig an ngéanóm tagartha luiche (mm10) ag baint úsáide as Bowtie240 a cuireadh i bhfeidhm i Bismark.41 Baineadh úsáid as sliocht Methyl laistigh de Bismark chun faisnéis meitile CpG a bhaint amach agus chun tuairiscí meitile a chruthú. Baineadh úsáid as MethylKit42 chun anailís a dhéanamh ar réigiúin dhifreálacha meitile (DMRanna). Rinneadh achoimre ar an stádas meitiliúcháin thar fhuinneoga neamhfhorluiteacha de 500 bunphéire agus rinneadh anailís mheitileachán difreálach, le FDR caighdeánach de 0.05.35 Tá tacair sonraí taiscthe chuig Gene Expression Omnibus.

Tairbhe sliocht cistanche

3 TORTHAÍ

3.1 Feabhsaíonn nicotín paternal aeroiriúnaithe eagla comhthéacsúla agus aisiompaíonn sé feabhsú géar-nicitín ar riochtú eagla comhthéacsúil i lucha giniúna F1 agus F2

Bhí eagla ar lucha fireanna agus baineanna NIC-Sired agus SAL-Sired F1 tar éis riarachán géarmhíochaine SAL nó NIC (0.09 mg/kg ip, Fíor 1A). Tá anailís iomlán ar bhonnlíne, réamh-CS, agus reo CS san áireamh san Fhaisnéis Tacaíochta. Nocht ANOVA 3-bhealach de reo comhthéacsúla le cóireáil sire, cóireáil ghéardhrugaí, agus gnéas mar fhachtóirí idirghníomhaíocht shuntasach ó dhuine uasail × cóireáil ghéarmhíochaine (F(1,36)=32.75, P < .{{27="" }}01).="" toisc="" nach="" raibh="" aon="" idirghníomhaíocht="" shuntasach="" idir="" gnéas="" agus="" sire="" nó="" cóireáil="" ghéarmhíochaine="" drugaí,="" rinneadh="" anova="" 2-bhealach="" tite="" trasna="" gnéis="" agus="" nocht="" sé="" cóireáil="" sire="" suntasach="" ×="" idirghníomhaíocht="" cóireála="" drugaí="" géarmhíochaine="" (f(1,40)="20.96" ,="" p="">< .001).="" léirigh="" comparáidí="" post="" hoc="" gur="" léirigh="" lucha="" nic-sired="" f1="" cóireáilte="" salanda="" riochtú="" eagla="" comhthéacsúil="" méadaithe="" i="" gcomparáid="" le="" lucha="" sal-sired="" f1="" cóireáilte="" le="" salanda="" (t20="2.73," p="">< .05).="" ag="" teacht="" le="" torthaí="" roimhe="" seo,="" tháirg="" 43="" nic="" géarmhíochaine="" ag="" 0.09="" mg/kg="" riochtú="" eagla="" comhthéacsúil="" feabhsaithe="" i="" lucha="" sal-sired="" (t22="2.99," p="">< .01).="" mar="" sin="" féin,="" lagaigh="" géar-nic="" ag="" 0.09="" mg/kg="" riochtú="" eagla="" comhthéacsúil="" i="" lucha="" nic-shin="" (t18="3.36," p="">< .01).="" ar="" an="" iomlán,="" bhí="" leibhéil="" reo="" comhthéacs="" i="" lucha="" nic-sired="" nic="" inchomparáide="" leo="" siúd="" a="" breathnaíodh="" i="" lucha="" sal-sired="" sal="" ag="" an="" dá="" 0.09="" mg/kg="" (p=""> .05).

Ina theannta sin, rinneadh tástáil ar ainmhithe fireanna agus baineanna NIC- agus SAL-SAL-Sired i íogaireacht turrainge (Fíor S2), lúbra ardaithe móide (EPM, Fíor S3), páirc oscailte, agus paraidímí aitheantais réad nua (Fíor S4, féach Faisnéis Tacaíochta le haghaidh modhanna iomlána agus torthaí). Cé is moite de baineannaigh NIC-Sired in EPM (a léirigh iompraíochtaí méadaithe cosúil le imní) agus ainmhithe NIC-Sired in íogaireacht turrainge (a léirigh imoibríocht gutha laghdaithe i leith turraing, rud nach gcuirfí isteach ar an bhfeinitíopa ilghlúine foghlama eagla feabhsaithe), gan aon difríochtaí. braitheadh ​​idir lucha NIC- agus SAL-Sired.

FIGIÚR 1 Cuireann nicitín paternal feabhas ar riochtú eagla comhthéacsúil agus maolaíonn sé géarfheabhsú nicotín ar riochtú eagla. Bhí reo comhthéacs i bhfad níos airde i NIC-Sired móide SAL i gcomparáid le rialuithe SAL-Sired móide SAL. Géar-nícín ag 0.09 mg/kg feabhsaithe riochtú eagla comhthéacs i SAL-Sired ach riochtú eagla comhthéacsúla laghdaithe go suntasach in ainmhithe NIC-Sired (n=10-12 in aghaidh an ghrúpa). B, Bhí an reo comhthéacsúil i bhfad níos airde i NIC-grandsire móide SAL i gcomparáid le SAL-grandsire móide rialuithe SAL (n=9-11 in aghaidh an ghrúpa). Léiríonn barraí earráide earráid chaighdeánach an mheáin (SEM), *P <>

Chun a fháil amach ar lean riochtú eagla comhthéacsúil lagaithe isteach sa chéad ghlúin eile (F2), póraíodh lucha F2 fireann agus baineann ó NIC-grandire agus SAL-grandsire fireann agus baineann ó lucha fireann naive F1. Tá anailís iomlán ar bhonnlíne, réamh-CS, agus reo CS san áireamh san Fhaisnéis Tacaíochta. Rinneadh ANOVA 3-bhealach de reo comhthéacsúla le cóireáil grandsire, cóireáil géarmhíochaine drugaí, agus gnéas mar fhachtóirí neamhspleácha (Fíor 1B). Toisc nach raibh aon idirghníomhaíocht shuntasach idir gnéas agus sire nó cóireáil ghéarmhíochaine drugaí, rinneadh ANOVA dhá bhealach a thit trasna gnéis. Thángthas ar phríomhthionchar suntasach de dhuine uasail (F(1,37)=9.88, P < .01),="" agus="" léirigh="" comparáidí="" post="" hoc="" gur="" léirigh="" lucha="" nic-seanathair="" riochtú="" eagla="" comhthéacsúil="" méadaithe="" i="" gcomparáid="" le="" lucha="" móra="" sal="" (t39="3.04," p="">< 0.01).="" ina="" theannta="" sin,="" bhí="" riochtú="" eagla="" comhthéacsúil="" feabhsaithe="" ag="" lucha="" móra="" sal="" a="" riaradh="" nic="" géarmhíochaine="" (t19="2.41," p="0.026)" ach="" níor="" chuir="" géar-nic="" feabhas="" ar="" riochtú="" eagla="" comhthéacsúil="" i="" lucha="">

FIGIÚR 2 Cuireann nicotín atharthachta feabhas ar riochtú eagla cued agus aisghabháil spontáineach cuimhne eagla. Chun éifeachtaí féideartha uasteorainn a scrúdú le linn tástála cued, fuair cohórt ar leith de lucha F1 oiliúint comhionann le péireáil CS-US amháin. Méadaíodh riochtú eagla comhthéacsúil agus cued araon i lucha NIC-Sired i gcomparáid le lucha SAL-Sired oilte le péireáil 1 CS-SAM (n=8-10 in aghaidh an ghrúpa). B, ní raibh tionchar ag nochtadh nicotín athartha ar éag eagla comhthéacsach ach tháinig feabhas ar aisghabháil spontáineach cuimhne eagla 7 lá tar éis an tseisiúin díothaithe deiridh (n=8-10 in aghaidh an ghrúpa). Léiríonn barraí earráide earráid chaighdeánach an mheáin (SEM), *P <>

3.2 Cuireann nicotín paternal feabhas ar riochtú eagla cued i lucha giniúna F1

Chun scrúdú a dhéanamh ar cé acu an raibh éifeacht uasteorainn bac ar dhifríochtaí grúpa a bhrath maidir le riochtú eagla cued (féach Faisnéis Tacaíochta), cuireadh oiliúint ar ghrúpa ar leith de lucha F1 le péireáil CS-SAM amháin. Sa chohórt seo, fuarthas feabhas ar riochtú eagla comhthéacsúil (t7=3.21, P < .05)="" chomh="" maith="" le="" riochtú="" eagla="" cued="" i="" lucha="" nic-sired="" (t6="2.41," p="">< .="" 05;="" fíor="">

3.3 Feabhsaíonn nicotín paternal aisghabháil spontáineach ar chuimhne eagla comhthéacsúla i lucha giniúna F1

Rinneadh tástáil ina dhiaidh sin ar an gcohórt lucha F1 a fuair péireáil CS-US amháin le haghaidh éagtha agus aisghabháil spontáineach cuimhne eagla comhthéacsúla. Léirigh lucha F1 NIC-Sired gnáth-eagla imithe in éag ach léirigh siad aisghabháil feabhsaithe spontáineach cuimhne eagla comhthéacs i gcomparáid le lucha SAL-Sired (t7=3.38, P < 0.05;="" fíor="">

3.4 Laghdaíonn nicotín atharthachta féinriarachán nicotín

Sula bhfuair siad oiliúint le haghaidh féinriarachán nicotín, rinneadh anailís ar na hábhair as a gcumas tasc oibreora a fhoghlaim chun luach saothair bia a fháil, agus níor breathnaíodh aon difríochtaí (Eolas tacaíochta, Fíor S5). Chun éifeachtaí féideartha nochta nicotín sire ar atreisiú nicotín i sliocht F1 a thástáil, rinneadh measúnú ar fhéinriarachán nicotín IV (0.03 mg/kg/insileadh) in ANOVA de dhearadh measctha 2-bhealach, a shainaithin príomhéifeacht seisiúin (F(7,119)=13.60, P < .001)="" agus="" seisiún="" ×="" idirghníomhaíocht="" cóireála="" sire="" (f(7,119)="5.00," p="">< .001).="" mar="" sin="" féin,="" níor="" léirigh="" tástálacha="" post="" hoc="" aon="" difríochtaí="" suntasacha="" staitistiúla="" idir="" na="" grúpaí="" ar="" gach="" ceann="" de="" na="" hocht="" seisiún="" fála="" (fíor="" 3a).="" rinneadh="" anailís="" ansin="" ar="" líon="" na="" mbrúnna="" luamháin="" gníomhacha="" agus="" neamhghníomhacha="" chun="" a="" fháil="" amach="" ar="" choinnigh="" na="" grúpaí="" tosaíocht="" trasna-seisiúin="" don="" luamhán="" gníomhach="" le="" linn="" éadála="" (fíor="" 3b),="" a="" shainaithin="" príomhéifeacht="" an="" tseisiúin="" (f(7,238)="" {{20}="" }.18,="" p="">< .001)="" agus="" seisiún="" ×="" idirghníomhaíocht="" cóireála="" sire="" (f(21,238)="11.40," p="">< .001).="" léirigh="" anailís="" post="" hoc="" go="" raibh="" difríocht="" idir="" na="" grúpaí="" ar="" an="" gcéad="" lá="" den="" fhéinriarachán="" nicotín.="" léirigh="" an="" grúpa="" nic-sired="" brú="" luamhán="" níos="" gníomhaí="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" sal-sired.="" d’fhéadfadh="" go="" léireodh="" an="" éifeacht="" seo="" leibhéal="" níos="" airde="" d’iompar="" cuardaithe="" drugaí="" ar="" an="" gcéad="" lá="" den="" nochtadh,="" buanseasmhacht="" freagairt="" ar="" luaíocht="" bia="" agus/nó="" laghdú="" ar="" sholúbthacht="" chognaíoch="" maidir="" le="" haistriú="" ó="" bhia="" go="" drugaí.="" mar="" sin="" féin,="" níor="" mhair="" an="" difríocht="" seo="" thar="" seisiúin="" eile.="" léirigh="" lucha="" sal-sired="" rogha="" comhsheasmhach="" suntasach="" go="" staitistiúil="" don="" luamhán="" gníomhach="" thar="" a="" luamhán="" neamhghníomhach="" (post="" hoc="" p="">< .01),="" ach="" níor="" léirigh="" lucha="" nic-sired="" an="" rogha="" chothabhála="" seo="" do="" sheisiúin="" 3="" go="">

FIGIÚR 3 Laghdaíonn nicotín paternal féinriarachán nicotín. Ní raibh difríocht idir lucha NIC- agus SAL-SAL-Sired (n=9-10 in aghaidh an ghrúpa) i líon iomlán na n-insiltí a tuilleadh do gach seisiún le linn na tréimhse fála ar an 0 .03 mg/kg/dáileog insileadh. B, Le linn na fála, bhí difríocht shuntasach idir líon na mbrúnna luamháin gníomhacha agus neamhghníomhacha ar an gcéad seisiún, agus léirigh lucha NIC-Sired líon níos mó de phreasaí luamháin gníomhacha i gcomparáid le lucha SAL-Sired. Mar sin féin, thar seisiúin ina dhiaidh sin, tháinig laghdú ar lucha NIC-Sired ag freagairt, rud a d'fhág nach raibh aon difríochtaí suntasacha idir a líon gníomhach agus neamhghníomhach de phreasanna luamháin thar sheisiúin 3 go 8. I gcodarsnacht leis sin, léirigh ainmhithe SAL-Sired rogha suntasach staitistiúil comhsheasmhach don luamhán gníomhach. thar a luamhán neamhghníomhach. C, Ní raibh difríocht shuntasach idir meánlíon na n-insiltí nicotín thar na trí sheisiún fála deiridh idir lucha NIC- agus SAL-Sired. D, Ag dáileog mheasartha de 0.1 mg / kg / insileadh, rinne lucha NIC-Sired féin-riaradh ar líon i bhfad níos ísle insiltí nicotín. E, Léirigh measúnú goir craving méadú suntasach ar fhreagairt ar an luamhán a bhí gníomhach roimhe seo tar éis 21 lá staonadh-amháin do lucha SAL-Sired. Léiríonn barraí earráide earráid chaighdeánach an mheáin (SEM), *P <>

Chun difríochtaí grúpa féideartha a scrúdú a thuilleadh agus rialú á dhéanamh ar inathraitheacht le linn na céime tosaigh sealbhaithe, scrúdaíodh meánlíon na n-insiltí nicotín le haghaidh na dtrí sheisiún dheireanacha, tráth ar léirigh na hábhair freagraí níos comhsheasmhaí maidir le nicotín (Fíor 3C). Ní raibh difríocht shuntasach idir na grúpaí maidir le meánlíon na n-insileadh nicotín (P > .05). Ina dhiaidh sin, aistríodh na lucha go dáileog 0.1 mg/kg/insileadh de nicotín, ar léiríodh roimhe seo gurbh fhearr é i lucha fásta C57BL6/J.44 Ag an dáileog seo, rinne lucha NIC-Sired féin-riaradh líon níos ísle insiltí (t{ {7}}.20, P < .05;="" fíor="" 3d).="" maidir="" le="" gor="" iompar="" cráite,="" a="" mheastar="" a="" bheith="" ina="" thomhas="" ar="" lorg="" méadaithe="" drugaí="" le="" linn="" staonadh,="" d’aithin="" anova="" de="" dhearadh="" measctha="" 2-bhealach="" le="" cóireáil="" seisiúin="" agus="" sire="" príomhéifeacht="" an="" tseisiúin="" (f(1,17)="" {{16}="" }.90,="" p="">< .001).="" cé="" gur="" léirigh="" ainmhithe="" sal-sired="" éifeacht="" goir="" le="" freagraí="" níos="" mó="" ar="" lá="" 21="" den="" staonadh="" i="" gcomparáid="" le="" lá="" 1,="" níor="" léirigh="" lucha="" nic-sired="" méadú="" ar="" iompar="" a="" bhí="" ag="" lorg="" nicotín="" (p=""><>

3.5 Athraíonn nochtadh nicotín atharthachta an ceangal agus an fheidhm cholinergic hippocampal

Rinneadh ceangaltán NAChR hippocampal hippocampal ard-chleamhnas a rialáil i lucha NIC-Sired F1 (t28=2.14, P < .05;="" sal‐sired="1.21" ±="" {{10}="" }.043,="" nic-sired="1.34" ±="" 0.044).="" baineadh="" ábhar="" amháin="" (nic-sired)="" toisc="" go="" raibh="" luachanna="" ceangailteacha="" dhá="" dhiall="" chaighdeánach="" os="" cionn="" an="">

Rinneadh measúnú ar thaifeadtaí amperiméadracha de shruth ACh a bhfuil baint acu le potaisiam agus nicotín in F1 dHPC agus vHPC. Mar gheall ar mhéideanna samplacha éagothroma in aghaidh an inscne, níor cuireadh gnéas san áireamh mar réamhfhachtóir sna hanailísí seo. Ní raibh difríocht idir comharthaí cholinergacha dípolarúcháin KCl idir lucha SAL- agus NIC-Sired i dHPC (P > .05; Fíor 4A); Mar sin féin, tháinig laghdú suntasach ar aimplitiúid comhartha cholinergic i lucha NIC-Sired i lucha NIC-Sired (t8=2.33, P < .05;="" fíor="" 4c).="" i="" vhpc,="" laghdaíodh="" scaoileadh="" ach="" i="" lucha="" nic-sired="" tar="" éis="" kcl="" (t8="2.60," p="">< .05;="" fíor="" 4b)="" nó="" nicitín="" (t8="2.98," p="">< .05)="" a="" chur="" i="" bhfeidhm="" ;="" fíor="">

FIGIÚR 4 Laghdaíonn nicitín paternal comharthaíocht cholinergic sa hippocampus. Comhartha coilín daonra dHPC arna dtarraingt chun cinn ag dípolarú teirminéil spreagtha KCl. Níor aimsíodh aon difríochtaí suntasacha idir ainmhithe NIC- agus SAL-SAL (n=5 in aghaidh an ghrúpa). B, laghdaíodh comharthaí choilín daonra vHPC a léirigh dípolarú teirminéil spreagtha KCl i lucha NIC-Sired. C, laghdaíodh comharthaí choilín dHPC daonra arna dtarraingt ag Nicitín i lucha NIC-Sired. D, laghdaíodh comharthaí choilín vHPC de dhaonra nicotín i lucha NIC-Sired. Níor breathnaíodh aon éifeachtaí gnéis ar chomharthaíocht cholinergic. Léiríonn barraí earráide earráid chaighdeánach an mheáin (SEM), *P <>

3.6 Athraíonn nochtadh na pathar nicotín go difreálach slonn na géine droma agus ventral hippocampal

Léirigh anailís F1 hippocampal transcriptome trí sheicheamhú RNA 952 géinte léirithe go difreálach i vHPC (FDR=0.05; Tábla S2). As na géinte seo, rinneadh íosrialáil ar 612 agus uasrialáladh 340 i lucha NIC-Sired. I dHPC, níor léiríodh ach 162 géin go difreálach i lucha NIC-Sired i gcomparáid le lucha SAL-Sired (FDR=0.05). As na 162 ghéin seo, rinneadh 86 a íosrialáil agus rinneadh 76 géin a rialáil. Céad trí ghéinte le slonn athraithe géine forluiteach idir vHPC agus dHPC.

3.7 Athraíonn nochtadh na n-athair nicotín na bealaí tras-aistrithe a bhaineann le forbairt an néarchórais

I vHPC, d'aithin anailís IPA an líonra barr "Galar Néareolaíoch, Díobhálacha Orgánach agus Neamhghnácha, Bás Cille agus Marthanais" (scór=41, Tábla S3) agus an dara líonra barr "Forbairt agus Feidhm an Chórais Néareolaíoch, Moirfeolaíocht Fíocháin, Néareolaíoch Galar" (scór=23). Ba iad seo a leanas na cúig chatagóir Feidhmeanna Móilíneacha agus Ceallacha is airde: "Moirfeolaíocht na gcealla" (88 móilín), "Comhthionól agus Eagraíocht Cheallach" (79 móilín), "Forbairt Cheallach" (96 móilín), "Feidhm agus Cothabháil Cille" (79 móilín), agus "Fás Ceallach agus Iomadú" (87 móilín). Ba iad "Forbairt agus Feidhm an Chórais Néarógach" (175 móilín) barr Forbairt agus Feidhm an Chórais Fiseolaíochta, agus cuimsíonn cuid de na Feidhmeanna Galair agus Neamhoird barr "Galar Néareolaíoch" (an dara, 191 móilín) agus "Neamhord Síceolaíochta" (ceathrú, 90 móilín. ) (Tábla S4).

Mar chomhlánú ar thorthaí an IPA, chuir anailís saibhrithe ag baint úsáide as Enrichr fianaise bhreise ar fáil maidir le hathruithe ar fhás agus ar fhorbairt cheallacha i vHPC, le téarmaí bitheolaíocha barr GO lena n-áirítear "RNA splicing," "freagra ar phróitéin neamhfhillte," agus "rialachán fás cille" agus " cobhsú próitéin" (Tábla S5). Dá réir sin, aithníodh "coimpléasc spliceosomal" mar théarma barrcheallach GO. Léirigh anailís chosáin KEGG trí Enrichr freisin feidhmiú spliceosome agus comharthaíocht MAPK mar bhealaí a bhféadfadh tionchar a bheith orthu.

In ainneoin go raibh liosta i bhfad níos giorra de ghéinte léirithe go difreálach i dHPC i gcomparáid le vHPC, aithníodh cosáin agus téarmaí saibhrithe dHPC comhchosúla (Táblaí S3 agus S4). D'aithin anailís an IPA an líonra barr "Iompar, Galar Néareolaíoch, Díobhálacha Orgánacha agus Neamhghnácha" (scór=24) agus an dara líonra barr "Galar Néareolaíoch, Díobhálacha Orgánach agus Neamhghnácha, agus Neamhoird Síceolaíocha (scór=20) .

Ba iad na cúig chatagóir Feidhmeanna Móilíneacha agus Ceallacha ba mhó i dHPC ná "Forbairt Cheallach" (29 móilín), "Fás agus Iomadú Ceallach" (29 móilín), "Moirfeolaíocht na Cille" (27 móilín), "Tionól agus Eagraíocht Cheallach" (23 móilín) , agus "Feidhm agus Cothabháil Cheallach" (25 móilín). Aithníodh "Forbairt agus Feidhm an Chórais Néaróg" arís mar théarma saibhrithe is fearr faoi aicmiú Forbairt agus Feidhm an Chórais Fhiseolaíochta (an dara ceann, 44 móilín). I measc na dtéarmaí barr saibhrithe faoi aicmiú Feidhme Galair agus Neamhoird bhí "Galar Néareolaíoch" (1ú, 51 móilín), agus "Neamhoird Shíceolaíocha" (an cúigiú, 31 móilín). D'aithin anailís saibhrithe ag baint úsáide as Enrichr go leor téarmaí bitheolaíocha éagsúla GO le haghaidh dHPC i gcomparáid le vHPC, lena n-áirítear "bás néaróin a rialáil" agus "forbairt inchinne" (Tábla S5), atá comhlántach le feidhm mhóilíneach agus cheallacha an IPA "Bás Cille agus Marthanais".

Chun tuilleadh iniúchta a dhéanamh ar an ról feidhme atá ag tras-scríbhinní sainráite go difreálach atá ag forluí idir an dHPC agus vHPC, rinneadh measúnú ar ghéinte sainráite difreálach atá comónta don dá réigiún (103 san iomlán). Rinneadh ath-rialú nó uasrialú sa treo céanna ar thrascríbhinní forluiteacha idirdhealaitheacha forluiteacha idir an dá réigiún, ag moladh athruithe coitianta ar bhealaí trascríobh trasna réigiúin inchinne i lucha NIC-shin. Ba iad na cúig chatagóir Feidhmeanna Móilíneacha agus Ceallacha ba mhó a d'aithin an IPA ná "Bás agus Marthanais Cille" (17 móilín), "Gluaiseacht Cheallach" (10 móilín), "Comharthaíocht agus Idirghníomhaíocht Cille-go-Cill" (17 móilín), "Fás Cille". agus Iomadú" (18 móilín), agus "Moirfeolaíocht na Cille" (17 móilín) (Tábla S4)

Rinneadh anailís ar leithligh ina dhiaidh sin ar ghéinte sainráite difreálach atá uathúil do dHPC agus vHPC san IPA chun tástáil le haghaidh oiriúnuithe néar-bhitheolaíocha éagsúla idir an dá réigiún (Tábla S6). Ní raibh aon chonairí canónacha saibhrithe forluiteach idir na hanailísí uathúla dHPC vHPC. Ar na conairí canónacha barr saibhrithe a bhí uathúil do vHPC (44 san iomlán) bhí "Comharthaíocht Cailciam" agus "Comharthaíocht receptor Glucocorticoid," agus áiríodh ar na cosáin chanónacha barr dHPC (ocht n-iomlán) "Meitibileacht Hormóin Thyroid" agus "Comharthaíocht Apoptóis Idirghabhála Aigéad Retinoic." I measc na ngalar agus na bhfeidhmeanna saibhrithe a bhí uathúil do vHPC (iomlán 295) bhí “Cruthú [Hippocampus] Corn Ammon” agus “Cainníocht na n-Easchur Ceallacha” agus áiríodh le téarmaí galair agus feidhmeanna saibhrithe dHPC (iomlán 111) “Athlasadh ábhar bán” agus “Demyelination ."

3.8 Athraítear meitilation DNA hippocampal mar gheall ar nochtadh nicotín ag pathar

Rinneadh anailís spriocdhírithe meitilation DNA chun a fháil amach arbh ionann meitilation DNA athraithe i réigiúin rialála comhfhreagracha agus léiriú géine difreálach i sliocht NIC-Sired F1. Áiríodh leis na spriocanna 1114 ghéin léirithe go difreálach a aithníodh i dHPC nó vHPC. I vHPC, braitheadh ​​​​11 réigiún meitile difreálach (DMRs), le hocht ag taispeáint meitilation méadaithe agus trí cinn ag taispeáint meitile laghdaithe (Tábla 1). As na 11 DMR, bhí 10 gcinn lonnaithe i réigiúin a bhaineann le géine a léirigh slonn athraithe i vHPC. Sa dHPC, aimsíodh 30 DMR, le 15 ag taispeáint meitilation méadaithe agus 15 ag taispeáint meitile laghdaithe. As na 30 DMR, bhí 29 lonnaithe i réigiúin a bhaineann le géine a léirigh slonn athraithe i dHPC.

Benéifeacht cistanche echinacoside

4 PLÉ

Thug tuiscint mhéadaithe ar phróisis eipigéiniteacha i gcomhar le sonraí le déanaí, lena n-áirítear na torthaí reatha, dúshlán don tuiscint thraidisiúnta ar oidhreacht. Féadfaidh fachtóirí lasmuigh den ghéinitíopa amháin feinitíopaí a chinneadh sna glúnta ina dhiaidh sin, agus ní fhéadfaidh risíochtaí laistigh de ghlúin a fhorlámhú ón sliocht. Tugann an staidéar reatha le fios go bhféadfadh éifeachtaí díobhálacha sláinte a bhaineann le nochtadh nicotín dul thar nochtadh aonair agus tionchar a imirt ar na glúine ina dhiaidh sin. D'aithníomar éifeachtaí ilghlúine agus trasghlúine de nochtadh réamhghiniúna nicotín athghiniúna i lucha C57BL/6J ar riochtú eagla Pavlovian, rud a d'eascair cuimhní eagla níos láidre i sliocht F1 agus F2. Mar thoradh ar nochtadh nicotín ón athair freisin tháinig laghdú ar fhéinriarachán nicotín agus iompraíochtaí a bhaineann le hathiompú caolaithe, rud a thugann le tuiscint go raibh freagairt níos troime ar nicitín ann. Chun tacú leis na difríochtaí iompraíochta seo, breathnaíodh athruithe ilghlúine ar fheidhm cholinergic hippocampal agus próisis epigenetic. Le chéile, léiríonn na torthaí seo athruithe ar fheidhm an néarchórais i sliocht lucha nicotín-nochta as a dtagann feinitíopaí iompraíochta athraithe.

Léirigh sliocht F1 agus F2 lucha fireanna a bhí faoi lé nicotín comhthéacs feabhsaithe riochtú eagla. In ainneoin nach bhfuil aon difríochtaí i ndíothú eagla comhthéacsúla idir lucha NIC- agus SAL-Sired F1, léirigh lucha NIC-Sired aisghabháil spontáineach feabhsaithe ar chuimhní eagla comhthéacsúla. Rud atá tábhachtach, níor aimsíodh aon difríochtaí in íogaireacht turrainge idir lucha NIC- agus SAL-Sired a d'fhéadfadh a bheith mar chúis le méadú ar riochtú eagla. D’fhéadfadh feabhas ginearálta ar phróisis foghlama a mholadh le riochtú eagla feabhsaithe seachas modhnú próisis atá níos sainiúla don eagla roimh fhoghlaim. Mar sin féin, níor breathnaíodh aon athruithe ar aithint réad núíosach, ar oiliúint bia oibritheoirí, nó ar locomotion páirce oscailte i lucha NIC-Sired, cé gur aithníodh éifeacht gnéas-shonrach d’am lámh oscailte EPM méadaithe i lucha baineann NIC-Sired. Cé nach gcuireann sé seo as an áireamh mionathruithe féideartha ar chórais foghlama eile nó ar phróisis chognaíocha, tugann na torthaí seo le fios le chéile go bhféadfadh eagla a bheith ag foghlaim níos íogaire d’iarmhairtí ilghlúine agus trasghlúine an nochta do nicitín paternal. Ina theannta sin, tugann na torthaí seo le fios go bhfuil feidhm cholinergic athraithe in ainmhithe NIC-Sired. Modhnaíonn Nicitín riochtú eagla comhthéacsúil. De bharr an méid a chuireann géar-nícín le riochtú eagla comhthéacsúil, cuireann 15,45 tarraingt siar ó nicotín ainsealach isteach ar riochtú eagla comhthéacsúil.16,21 Sa staidéar seo, chuir géarmhicitín feabhas ar riochtú eagla comhthéacsúil i lucha F1 agus F2 ó lucha a bhfuil cóireáil orthu le salanda. I gcodarsnacht leis sin, chuir géar-chur isteach ar riochtú eagla comhthéacsúil Nicitín i lucha NIC-Sired agus ní raibh aon éifeacht aige i lucha NIC-mhór, a d'fhéadfadh a bheith ina chúis le feidhmiú cholinergic athraithe sa hippocampus.

Léiríonn éifeachtaí nochtadh nicotín atharthachta ar fhéinriarachán nicotín ina dhiaidh sin sa ghlúin F1 freisin go gcuirfí isteach ar fheidhm cholinergic. Le linn féinriarachán nicotín IV a fháil ag an dáileog níos ísle, ní raibh difríocht idir na grúpaí i líon na n-insiltí nicotín, cé go bhfuarthas méadú ar líon na mbrúnna luamháin gníomhacha sa ghrúpa NIC-Sired. Tugann sé seo le fios go bhféadfadh go raibh buanseasmhacht léirithe ag lucha NIC-Sired ag freagairt ar luaíocht bia agus / nó laghdú ar sholúbthacht chognaíoch agus iad ag aistriú freagairt ó bhia go drugaí. Mar sin féin, is fiú a thabhairt faoi deara freisin nach raibh difríocht idir na grúpaí ar lá 1 de goir craving, rud a léiríonn seisiún díothaithe (m.sh., gan aon insiltí nicotín le linn seisiúin), agus dá bhrí sin, is cosúil go bhfuil an éifeacht seo i láthair nuair a bhíonn athneartaithe. lasctha ach ní in éagmais athneartaithe le linn seisiún díothaithe. Thaispeáin lucha NIC-Sired féinriarachán nicotín laghdaithe ag an dáileog mheasartha, a ailíníonn le hobair le déanaí ag aithint laghduithe i riarachán alcóil, cóicín, agus opioid a bhaineann le halcól tuismitheora, cóicín, agus nochtadh moirfín (m.sh. Vassoler et al,46 mar athbhreithnithe in Goldberg agus Gould47). D’fhéadfaí an laghdú a breathnaíodh ar fhéinriarachán nicotín a chur i leith na híogaireachta laghdaithe d’éifeachtaí tairbheacha nicotín agus/nó íogaireacht mhéadaithe d’iarmhairtí seachanta Nicitín. Go deimhin, bhí difríocht idir na grúpaí ag an dáileog mheasartha nicotín ach ní ag an dáileog nicotín níos ísle, rud a thacaíonn leis an nóisean de fhreagairt chorrach mhéadaithe leis an dáileog níos airde. Rud suimiúil, fuaireamar freisin go raibh easpa gorlainne craving ar an lá 21 i lucha NIC-Sired tar éis féin-riarachán ag an dáileog mheasartha, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh iompar laghdaithe nicotín a bheith bainteach le cuimhne seachanta le haghaidh nicotín. Cé go bhféadfadh foshraitheanna néaracha éagsúla a bheith mar bhonn leis na héifeachtaí seo ar iontógáil nicotín agus freagairt a bhaineann le hathiompú, fuarthas amach i staidéar le déanaí gur laghdaigh laghdú meitiltransferase DNA i réigiún hippocampal CA1 féinriarachán moirfín.48 An toradh seo, mar aon leis an bhfeidhm aitheanta d'fheidhm hippocampal cholinergic i próisis foghlama agus cuimhne, tacaíonn sé a thuilleadh leis an nóisean de phróiseáil isteach ar nicitín-idirghabhála i hippocampus lucha NIC-Sired.

Mar an gcéanna, léirigh lucha NIC-Sired nascacht NAChR ard-chleamhnas hippocampal méadaithe. Fuaireamar freisin laghduithe ar scaoileadh ACh spreagtha potaisiam i vHPC chomh maith le scaoileadh ACh arna dtarraingt suas le nicotín in dHPC agus vHPC ainmhithe a bhfuil NIC-Sired orthu. Léiríonn athruithe ar scaoileadh ACh depolarization-tarraingthe feidhm cholinergic athraithe le sruth ó cheangal gabhdóirí, agus léiríonn athruithe ar scaoileadh ACh Nicitín-dlúithe feidhm NAChR athraithe. Tá na sonraí seo ar aon dul le torthaí roimhe seo maidir le ceangailteach NAChR ard-chleamhnas uasrialaithe tar éis feidhm laghdaithe NAChR.49 Toisc gur athraíodh scaoileadh ACh a tharraingítear le potaisiam agus le nicotín araon i vHPC lucha NIC-Sired, d’fhéadfadh vHPC a bheith níos íogaire do éifeachtaí ilghlúine nochtadh nicotín atharthachta. Is eol go ndéanann DHPC riochtú eagla comhthéacsúil a mhodhnú.31,50 Cuireann cosc ​​ar vHPC isteach ar riocht eagla cued agus comhthéacsúil ing51,52 agus lagaíonn loit cholinergic vHPC riochtú eagla cued.53

Cisteán luibh

Tá sé léirithe againn freisin go gcuireann insileadh díreach nicotín isteach dHPC feabhas ar riochtú eagla comhthéacsúil agus go gcuireann insileadh isteach i vHPC isteach ar riochtú eagla comhthéacsúil.15 Féadfaidh vHPC aisghabháil spontáineach ar chuimhní eagla comhthéacsúla a mhodhnú freisin, de réir mar a laghdaíonn díghníomhú ciorcadra réamhbhreithe vHPC aisghabháil spontáineach ar chuimhní eagla comhthéacsúla. 54 Cé go bhféadfadh tionchar a bheith ag nochtadh nicotín atharthachta ar réigiúin inchinn eile a bhfuil baint acu le riochtú eagla, mar shampla an amygdala,55, tugann na torthaí seo in éineacht leis na sonraí reatha le fios go bhféadfadh athruithe ar fheidhm vHPC a bheith freagrach as riochtú eagla athraithe i lucha NIC-Sired. . Rinneamar hipitéis go bhféadfadh baint a bheith ag na héifeachtaí ilghlúine a bhaineann le nochtadh nicotín atharthachta le hathruithe ar éifeachtóirí tras-scríobhacha a ghníomhaíonn in aghaidh an tsrutha ó na córais néaracha seo. D’aithin seicheamh tras-scríobhach ar fud an ghéinóim i vHPC agus dHPC de lucha giniúna F1 1114 géinte a cuireadh in iúl go difreálach idir lucha NIC- agus SAL-Sired. Bhí an difríocht seo níos airde i vHPC (952) i gcomparáid le dHPC (162), ag teacht leis an athrú níos mó ar vHPC i gcomparáid le feidhm cholinergic dHPC agus athruithe ar riochtú eagla comhthéacsúil agus cued. Mhol anailís conairí ina dhiaidh sin go ndéanfaí athruithe leathana ar bhealaí trascríobh a bhaineann le comharthaíocht glucocorticoide agus forbairt néar/plaisteachas sa dá réigiún hippocampal.

D'fhonn oiriúnuithe féideartha a bhaineann go sonrach le vHPC a shainaithint, rinneadh anailís conairí ag baint úsáide as tras-scríbhinní a bhain go sonrach le ceachtar den dá fho-réigiún hippocampal. Ní raibh aon chonairí canónacha saibhrithe de chuid an IPA forluiteach idir an vHPC agus dHPC, ar fo-réigiúin fheidhmeacha ar leith iad den hippocampus.31 Nuair a baineadh géinte a bhí forluiteach idir dHPC agus vHPC, áiríodh ar na cosáin chanónacha saibhrithe barr a bhí uathúil do vHPC "Glucocorticoid Receptor Signaling," rud a mhol bealach uathúil. , athrú breise ar fheidhmiú glucocorticoid sa réigiún seo i gcomparáid le dHPC. Agus é mar aidhm rialtóirí epigenetic in aghaidh an tsrutha a d'fhéadfadh gníomhú ar léiriú géine a aithint, rinneamar seicheamhú meitile DNA spriocdhírithe ag baint úsáide as an liosta tiomsaithe de ghéinte sainráite dHPC agus vHPC a aithníodh ó sheicheamhú RNA. Is ionadh é nach bhfuaireamar ach 11 DMR in vHPC agus 30 DMR i dHPC idir ainmhithe NIC- agus SAL-SAL. Cé nach bhfuiltear ag súil leis seo mar gheall ar an líon i bhfad níos airde de thrascríbhinní arna gcur in iúl go difreálach i vHPC, níl sa mheitiliú DNA ach ceann amháin de roinnt fachtóirí rialála a d’fhéadfadh tionchar a bheith acu ar léiriú géine agus ní aistrítear go seasta meitilation DNA ina léiriú géine athraithe.56 As na 11 DMR vHPC, seacht gcinn léirigh patrúin meitilation comhsheasmhach le treo an trascríobh difreálach (laghdú ar thrascríobh le meitilation DNA méadaithe agus trascríobh méadaithe le meitilation laghdaithe). Áiríodh Fkbp5, Ksr1, agus Pnpla2 ar na géinte meitiolaithe difreálach sa vHPC. Suimiúil go leor, cuireadh isteach ar thrascríobh Fkbp5 agus Ksr1 i múnla luch iompraíochta amháin de PTSD,57 áit a raibh lucha faoi lé turraing chos leictreach agus ansin chuir siad meabhrúcháin staide i láthair. Ionchódaíonn Fkbp5 gabhdóir glucocorticoid a bhfuil baint aige lena fheidhmiú le freagairt strus fhada maladaptive i ndaoine aonair a bhfuil PTSD agus neamhoird imní eile orthu.58

Go sonrach, léiríonn staidéir dhaonna go bhfuil comhghaolú le meitilation agus trascríobh Fkbp5 le déine na hairíonna PTSD, sa chaoi is go ndéanann meitilation méadaithe agus trascríobh laghdaithe a thuar siomtóim PTSD níos déine. PTSD.59,61 D'fhéadfadh ár dtorthaí ar aisghabháil spontáineach feabhsaithe cuimhne eagla i gcomhar le dírialú conairí trascríobh a bhaineann le comharthaíocht glucocorticoide in ainmhithe NIC-Sired aird a thabhairt ar leochaileacht méadaithe i leith feinitíopaí cosúil le PTSD. I dHPC, bhí patrúin DMR ar neamhréir den chuid is mó le treo na slonn tras-scríbhinní difreálach a aimsíodh trí sheicheamhú RNA, rud a thugann le tuiscint go bhfuil athruithe i meitilation DNA vHPC a tháirgtear trí nochtadh nicotín atharthachta níos iarmhartacha i dtéarmaí tionchar léiriú géine ná iad siúd i dHPC. Tá sé seo ag teacht lenár n-aithint ar líon níos mó tras-scríbhinní arna gcur in iúl go difreálach agus athruithe níos áibhéalacha i dtarchur cholinergic i vHPC NIC-Sired i gcomparáid le dHPC. B’fhéidir gur chuir ár gcur chuige seicheamhaithe spriocdhírithe teorainn leis an gcumas rialáil thrascríobh fhéideartha a bhrath trí sheichimh dhian-mheitilaithe. Soláthróidh imscrúduithe sa todhchaí lena n-áirítear anailís ar mheitiliú DNA géanóm ar fud, modhnuithe histone, agus slonn beag RNA léirmhíniú níos iomláine ar na torthaí seo.

Teorainn a d’fhéadfadh a bheith ar ár ndearadh nochta nicotín is ea an fócas ar nochtadh nicotín atharthachta chun imscrúdú a dhéanamh ar an tionchar ilghlúine agus trasghlúine a bhaineann le nochtadh nicotín. Cé nach bhfuarthas aon difríochtaí i gcúram na máthar i staidéir eile a d’aimsigh feinitíopaí il/trasghlúine tar éis nochtadh do dhrugaí paternal, lena n-áirítear cóicín46 agus moirfín,62, d’fhéadfadh go mbeadh tionchar ag nochtadh nicotín atharthachta ar chúram na máthar. Tá gá le staidéir amach anseo a imscrúdaíonn an tionchar ar chúram máithreachais. Ós rud é go raibh ár bhfócas faoi láthair ar nochtadh na n-athair, ba cheart go ndéanfadh obair amach anseo comparáid a dhéanamh freisin ar thionchair neamhchosaint na hathar agus na máthar. Tríd is tríd, soláthraíonn na torthaí reatha tuiscint nua ar na héifeachtaí ilghlúine agus trasghlúine a bhaineann le nochtadh nicotín, a fhaigheann tacaíocht ó litríocht atá ag dul i méid a shainíonn éifeachtaí ilghlúine agus trasghlúine an nochta drugaí (mar a athbhreithníodh in Goldberg agus Gould47). Ba é an staidéar seo an chéad cheann a rinne tástáil ar riochtú eagla comhthéacsúil i sliocht F1 agus F2 na bhfear a bhí faoi lé nicotín agus shainaithin sé foirmiú feabhsaithe cuimhne eagla agus aisghabháil spontáineach ar chuimhní eagla. Ba é an staidéar seo an chéad cheann freisin a shainaithin féinriarachán nicotín athraithe agus gorlann craving i sliocht F1 atá faoi lé nicotín.

Fuarthas meitilation difreálach i ngéinte a bhaineann le dírialú PTSD agus HPA-ais chomh maith le cur isteach comhthráthach ar bhealaí trascríobh a bhaineann le strus i lucha NIC-Sired. Bhí baint ag nicotín atharthachta freisin le feidhm cholinergic hippocampal laghdaithe agus le ceangal NAChR hippocampal méadaithe. Is díol suntais é go léiríonn othair PTSD nár chaith tobac i bhfad níos airde ceanglas ard-chleamhnas cortical mesiotemporal NAChR63, agus tá baint ag PTSD le riochtú eagla níos mó agus aisghabháil spontáineach ar chuimhní eagla múchta.64 Le chéile, tugann ár dtorthaí le fios go bhféadfadh tionchar ilghlúine a bheith ag nochtadh nicotín. ag méadú so-ghabhálacht an tsleachta do shíomóineolaíocht cosúil le PTSD. Tugann an toradh seo mar aon le torthaí eile le déanaí a thaispeánann éifeachtaí ilghlúine de nochtadh nicotín ar sholúbthacht chognaíoch2 le fios go bhfuil líon níos leithne ag baint le torthaí diúltacha sláinte an nochta do nicotín ná mar a ceapadh roimhe seo.

Sliocht Cistanche

TAGAIRTÍ

1 Dai J, Wang Z, Xu W, et al. Sainmhíníonn nochtadh nicotín pathar iompar difriúil sa ghlúin ina dhiaidh sin trí hyper-meitilation de mmu-miR- 15b. Ionadaí Sci. 2017; 7(1):7286.

2. McCarthy DM, Morgan TJ Jr, Lowe SE, et al. Táirgeann nochtadh Nicitín de lucha fireann lagú iompraíochta i glúnta éagsúla de shliocht. PLoS Biol. 2018; 16(10): 2006497.

3. Zhu J, Lee KP, Spencer TJ, Biederman J, Bhide PG. Hipirghníomhaíocht a tharchur ó ghlúin go glúin i múnla luiche de ADHD. J Neurosci. 2014; 34(8): 2768-2773.

4. Cummings KM, Proctor RN. An íomhá phoiblí athraitheach de chaitheamh tobac sna Stáit Aontaithe: 1964-2014. Bithmharcóirí Eipidéimí Ailse Roimhe Seo 2014; 23(1):32-36.

5. Huang LL, Kowitt SD, Sutfin EL, Patel T, Ranney LM, Goldstein AO. Úsáid leictreonach toitíní i measc daltaí scoile ard agus a chomhlachas le húsáid toitíní agus scor de chaitheamh tobac, North Carolina Youth Tobacco Surveys, 2011 agus 2013. Prev Chronic Dis. 2016; 13:E103.

6. Holliday ED, Nucero P, Kutlu MG, et al. Éifeachtaí fadtéarmacha nicotín ainsealach ar iompraíochtaí mothúchánacha agus cognaíocha agus moirfeolaíocht na gceall hippocampus i lucha: comparáidí idir nochtadh nicotín fásta agus ógánach. Eur J Neurosci. 2016; 44: 2818-2828.

7. Johnson JG, Cohen P, Pine DS, Klein DF, Kasen S, Brook JS. Comhlachas idir caitheamh toitíní agus neamhoird imní le linn na hógántachta agus na luathaoise. JAMA. 2000; 284: 2348-2351.

8. Jung Y, Hsieh LS, Lee AM, et al. Déanann meicníocht epigenetic idirghabháil ar éifeachtaí forbartha nicotín ar struchtúr agus iompar néarónach. Nat Neurosci. 2016; 19(7):905-914.

9. Gitik M, Holliday ED, Leung M, et al. Leasaíonn Choline easnaimh foghlama aosach agus aisiompaíonn sé modhnú epigenetic ar fhachtóirí athmhúnlaithe crómatin a bhaineann le nochtadh nicotín ógánaigh. Neurobiol Foghlaim Mem. 2018; 155: 239-248.

10. Éan A. Tuiscintí epigenetics. Dúlra. 2007; 447: 396-398.

11. Craicne MK. Oidhreacht tras-ghlúin epigenetic comhshaoil ​​​​agus cobhsaíocht mhiotach epigenetic somatic. Epigenetics. 2011; 6:838-842.

12. Davis JA, Gould TJ. Foghlaim chomhthiomsaitheach, an hippocampus, agus andúil nicitín. Curr Drochúsáide Drugaí Ath. 2008;1:9-19.

13. Kutlu MG, Parikh V, Gould TJ. Andúil Nicitín agus neamhoird shíciatracha. Int Rev Neurobiol. 2015; 124: 171-208.

14. Parikh V, Kutlu MG, Gould TJ. Mífheidhm NAChR mar fhoshraith choiteann le haghaidh scitsifréine agus andúile nicotín chomhghalracha: treochtaí agus peirspictíochtaí reatha. Scitsifr Res. 2016; 171:1-15.

15. Kenney JW, Raybuck JD, Gould TJ. Déanann gabhdóirí nicotinacha sa hippocampus droma agus ventral modhnú difreálach ar riochtú eagla comhthéacsúil. Hippocampus. 2012; 22: 1681-1690.

16. Wilkinson DS, Turner JR, Blendy JA, Gould TJ. Bíonn tionchar ag cúlra géiniteach ar éifeachtaí tarraingt siar ó nicotín ainsealach ar fhoghlaim agus ar receptor nicotinic acetylcholine ard-chleamhnas atá ceangailteach sa dobhareach droma agus ventral. Síc-chógaiseolaíocht (Berl). 2013; 225(1): 201-208.

17. Davis JA, Gould TJ. Éifeachtaí DHBE agus MLA ar an bhfeabhsú de bharr nicitín ar riochtú eagla comhthéacsúil i lucha C57BL/6. Síc-chógaiseolaíocht (Berl). 2006; 184:345-352.

18. Kutlu MG, Zeid D, Tumolo JM, Gould TJ. Ní bhíonn lucha réamh-ógánach agus ógánaigh chomh híogair d’éifeachtaí géarmhíochaine nicotín ar dhíbirt agus ar aisghabháil spontáineach. Brain Res Bull. 2018; 138:50-55.

19. Kutlu MG, Gould TJ. Cuireann géarmhíochaine nicotín moill ar éag eagla comhthéacsúil i lucha. Behav Brain Res. 2014; 263: 133-137.

20. Benowitz NL, Hukkanen J, Jacob P 3rd. Ceimic Nicitín, meitibileacht, cinéitic, agus bithmharcóirí. In: Síc-chógaiseolaíocht Nicitín. Beirlín, Heidelberg: Springer; 2009: 29-60.

21. Davis JA, James JR, Siegel SJ, Gould TJ. Cuireann tarraingt siar ó riarachán ainsealach nicotín isteach ar riochtú eagla comhthéacsúil i lucha C57BL/6. J Neurosci. 2005; 25: 8708-8713.

22. Petersen DR, Norris KJ, Thompson JA. Staidéar comparáideach ar dhiúscairt Nicitín agus a mheitibilítí i dtrí chineál lucha inbred. Diúscarthaí Meitibileacha Drugaí. 1984; 12: 725-731.

23. Gould TJ, an Phortaingéil GS, Andre JM, et al. Tá ré na n-easnaimh a bhaineann le haistarraingt nicotín i riochtú eagla comhthéacsúil comhthreomhar le hathruithe i uasrialú gabhdóra acetylcholine nicotinic ard-chleamhnas hippocampal. Néar-chógaiseolaíocht. 2012; 62: 2118-2125.

24. Kutlu MG, Oliver C, Huang P, Liu-Chen LY, Gould TJ. Baineann lagú eagla comhthéacsúla le nicotín ainsealach agus tarraingt siar ó nicotín ainsealach le hathrialú NAChR hippocampal. Néar-chógaiseolaíocht. 2016; 109:341-348. 25. Damaj MI, Kao W, Martin BR. Tréithriú aistarraingt nicotín spontáineach agus deasctha sa luch. J Pharmacol Cait Ther. 2003; 307:526-534.

26. Fowler CD, Lu Q, Johnson PM, Marks MJ, Kenny PJ. Rialaíonn comharthaíocht fo-aonad gabhdóra nicotinic Habenular alpha5 iontógáil nicotín. Dúlra. 2011; 471:597-601.

27. Lomazzo E, MacArthur L, Yasuda RP, Wolfe BB, Kellar KJ. Anailís chainníochtúil ar na gabhdóirí nicotinic néarónacha heiteirmeacha sa hippocampus francach. J Neurochem. 2010; 115: 625-634.

28. Turner JR, Castellano LM, Blendy JA. Éifeachtaí cosúil le himní comhthreomhara agus upregulation gabhdóirí acetylcholine nicotinic neuronal tar éis nicotín ainsealach agus varenicline. Nicitín Tob Res. 2011; 13:41-46.

29. Parikh V, Ji J, Decker MW, Tosaitheoir M. Tá fo-aonaid prefrontal beta2 ina bhfuil agus gabhdóirí acetylcholine nicotinic alfa7 rialaithe go difreálach ar chomharthaíocht glutamatergic agus cholinergic. J Neurosci. 2010; 30: 3518-3530.

30. Parikh V, Starter M. Córais cholinergic agus cognaíocht Forebrain: léargais nua bunaithe ar bhrath tapa spikes choilín ag baint úsáide as bithbhraiteoirí einsím-bhunaithe. I: Bithbhraiteoirí Micrileictreoidí. Totowa, NJ: Humana Press; 2013: 257-277.

31. Fanselow MS, Dong HW. An bhfuil na struchtúir droma agus an hippocampus ventral éagsúil ó thaobh feidhme de? Néaróin. 2010; 65(1):7-19.

32. Kim D, Pertea G, Trapnell C, Pimentel H, Kelley R, Salzberg SL. TopHat2: ailíniú cruinn tras-scríbhinní i láthair ionsáite, scriosta, agus comhleá géine. Géanóim Biol. 2013; 14(4): R36.

33. Afgan E, Baker D, van den Beek M, et al. Ardán an Réaltra d’anailísí bithleighis inrochtana, in-atáirgthe agus comhoibríocha: nuashonrú 2016. Aigéid Núicléacha Res. 2016; 44: W3- w10.

34. Trapnell C, Williams BA, Pertea G, et al. Nochtann cóimeáil agus cainníochtú tras-scríbhinní le RNA-Seq tras-scríbhinní gan nótaí agus aistriú isoform le linn difreáil cille. Biteicneolaíocht Nat. 2010; 28(5): 511-515.

35. Benjamini Y, Drai D, Elmer G, Kafkafi N, Golani I. Rialú ar an ráta fionnachtana bréagach i dtaighde géineolaíocht iompraíochta. Behav Brain Res. 2001; 125(1-2):279-284.

36. Kramer A, Green J, Pollard J Jr, Tugendreich S. Cur chuige anailíse cúisíochta in Anailís Conair Ingenuity. Bithfhaisnéisíocht. 2014; 30(4): 523-530.

37. Kuleshov MV, Jones MR, Rouillard AD, et al. Enrichr: nuashonrú cuimsitheach ar fhreastalaí gréasáin anailíse saibhrithe géine 2016. Aigéid Núicléacha Res. 2016; 44(W1): W90-W97.

38. Wendt J, Rosenbaum H, Richmond TA, Jeddeloh JA, Burgess DL. Seicheamh spriocdhírithe déshulfíte ag baint úsáide as an gcóras saibhrithe epi SeqCap. Modhanna Mol Biol. 2018; 1708: 383-405.

39. Bolger AM, Lohse M, Usadel B. Trimmomatic: trimmer solúbtha le haghaidh sonraí seicheamh Illumina. Bithfhaisnéisíocht. 2014; 30(15): 2114-2120.

40. Langmead B, Salzberg SL. Ailíniú tapa-léamh bearna le Bowtie 2. Nat Methods. 2012; 9(4):357-359.

41. Krueger F, Andrews SR. Bismark: ailíniú solúbtha agus glaoiteoir meitile le haghaidh feidhmchláir Bisulfite-Seq. Bithfhaisnéisíocht. 2011; 27(11): 1571-1572.

42. Akalin A, Kormaksson M, Li S, et al. methylKit: pacáiste R cuimsitheach chun anailís a dhéanamh ar phróifílí meitilation DNA ar fud an ghéanóim. Géanóim Biol. 2012; 13(10): R87.

43. Gould TJ, Lommock JA. Feabhsaíonn Nicitín riochtú eagla comhthéacsúil agus maolaíonn sé easnaimh a chothaítear le eatánól i riochtú eagla comhthéacsúil. Neurosci a iompar. 2003; 117(6): 1276-1282.

44. CD Fowler, Kenny PJ. Féinriarachán infhéitheach nicotín agus athshuíomh cue-spreagtha i lucha: éifeachtaí dáileog nicotín, ráta insileadh drugaí agus oiliúint uirlise roimh ré. Néar-chógaiseolaíocht. 2011; 61(4):687-698.

45. Gould TJ, Wehner JM. Feabhsú Nicitín ar riochtú eagla comhthéacsúla. Behav Brain Res. 1999; 102(1-2):31-39.

46. ​​Vassoler FM, White SL, Schmidt HD, Sadri-Vakili G, Pierce RC. Oidhreacht eipghiniteach feinitíopa frithsheasmhach in aghaidh an chóicín. Nat Neurosci. 2013; 16(1):42-47.

47. Goldberg ó dheas, Gould TJ. Éifeachtaí ilghlúine agus trasghlúine a bhaineann le nochtadh paternal do dhrugaí mí-úsáide ar fheidhm iompraíochta agus néaraíoch. Eur J Neurosci. 2018; 50(3): 2453-2466.

48. Zhang JJ, Jiang FZ, Zheng W, et al. Tá DNMT3a sa hippocampal CA1 ríthábhachtach chun féinriarachán moirfín a fháil i bhfrancaigh. Addict Biol. 2019;▪:▪‐▪.

49. Schwartz RD, Kellar KJ. Suímh cheangailteach gabhdóirí cholinergic nicotinic san inchinn: rialachán in vivo. Eolaíocht. 1983; 220(4593): 214-216.

50. Lógó SF, Paylor R, Wehner JM. Tá loit hippocampal ina gcúis le heasnaimh foghlama i lucha inbred i gcathair ghríobháin uisce Morris agus tasc coinníollaithe-eagla. Neurosci a iompar. 1997; 111(1): 104-113.

51. Zhang WN, Bast T, Feldon J. An hippocampus ventral agus aeroiriúnaithe eagla i bhfrancaigh: amnesias anterograde éagsúla eagla tar éis insileadh de N-meitil-D-aspartate nó a antagonist neamhiomaíoch MK-801 isteach sa hippocampus ventral. Behav Brain Res. 2001; 126(1-2): 159-174.

52. Maren S, Holt WG. Hippocampus agus Pavlovian eagla aeroiriúnaithe i bhfrancaigh: cuireann insiltí muscimol isteach sa hippocampus ventral, ach ní droma, bac ar fháil reo coinníollach chuig spreagadh éisteachta coinníollach. Neurosci a iompar. 2004; 118(1):97-110.

53. Staib JM, Della Valle R, Knox DK. Cuireann cur isteach ar an septum medial agus bannaí trasnánacha de réamh-mheastacháin cholinergic Broca chuig an hippocampus ventral isteach ar chuimhne eagla éisteachta. Neurobiol Foghlaim Mem. 2018; 152:71-79.

54. Vasquez JH, Leong KC, Gagliardi CM, Harland B, Apicella AJ, Muzzio IA. Laghdaíonn gníomhachtú conair-shonrach de chealla hippocampal ventral ag gobadh amach chuig an cortex réamhlimbach athnuachan eagla. Neurobiol Foghlaim Mem. 2019; 161:63-71.

55. LeDoux JE, Cicchetti P, Xagorris A, Romanski LM. An núicléas amygdaloid cliathánach: comhéadan céadfach an amygdala i riochtú eagla. J Neurosci. 1990; 10(4): 1062-1069.

56. Jones PA. Feidhmeanna meitilation DNA: oileáin, láithreacha tosaithe, coirp géinte, agus níos faide i gcéin. Nat Rev Genet. 2012; 13(7):484-492.

57. Tanaka M, Li H, Zhang X, et al. Rialáil géine atá ag brath ar réigiún agus ar am san amygdala agus cortex cingulate anterior de mhúnla luch cosúil le PTSD. Mol Brain. 2019; 12(1):25.

58. Ceanglóir EB. Ról FKBP5, comhchaperone an ghabhdóra glucocorticoid i pataigineas agus teiripe neamhoird mothaitheacha agus imní. Sícneuroendocrinology. 2009; 34(Soláthar 1): S186-S195.

59. Sarapis C, Cai G, Bierer LM, et al. Marcóirí géiniteacha do riosca PTSD agus athléimneacht i measc marthanóirí ionsaithe an Ionaid Trádála Domhanda. Marcóirí Dis. 2011; 30(2-3):101-110.

60. Yehuda R, Daskalakis NP, Desarnaud F, et al. Bithmharcóirí epigenetic mar thuaróirí agus comhghaolú d'fheabhsú siomptóim tar éis síciteiripe i veterans comhraic le PTSD. Síc Tosaigh. 2013; 4:118.

61. Yehuda R, Cai G, Grolier JA, et al. Patrúin slonn géine a bhaineann le neamhord struis posttraumatic tar éis nochtadh d’ionsaithe an Ionaid Trádála Domhanda. Síciatracht Biol. 2009; 66:708-711.

62. Li CQ, Luo YW, Bi FF, et al. Iompar atá cosúil le himní a fhorbairt trí chomharthaíocht hippocampal IGF-2 i sliocht tuismitheora nochta moirfín: éifeacht timpeallachta saibhrithe. Neuropsychopharmacology. 2014; 39(12): 2777-2787.

63. Czermak C, Staley JK, Kasserman S, et al. beta2 Infhaighteacht gabhdóra acetylcholine nicotinic i neamhord struis iar-thrámach. Int J Neuropsychopharmacol. 2008; 11(3):419-424.

64. Milad MR, Pitman RK, Ellis CB, et al. Bunús néar-bhitheolaíoch ar mhainneachtain cuimhne díothaithe a thabhairt chun cuimhne i neamhord strus posttraumatic. Síciatracht Biol. 2009; 66(12): 1075-1082.