CUIDⅠ:Iarmhairtí Cosanta Úrscéalta Sliocht Cistanche Tubulosa i gCoinne Reitineapaite Meathlaithe Gorma Solais Íseal

Déan teagmháil le: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Man-Ru Wu Cheng-Hui Lin Jau-Der Hob George Hsiao, Yu-Wen Cheng

Scoil na Cógaisíochta, Coláiste na Cógaisíochta, Ollscoil Leighis Taipei, Taipei, Roinn na Oftailmeolaíochta, Ollscoil Leighis Taipei, Taipei, Roinn na Cógaseolaíochta, Scoil an Leighis, Coláiste an Leighis, Ollscoil Leighis Taipei, Taipei, Institiúid Iarchéime na nEolaíochtaí Leighis, Coláiste na hOllscoile, Gaillimh. Leigheas, Ollscoil Leighis Taipei, Taipei, Ph.D. Clár i dTaighde agus Forbairt Biteicneolaíochta, Coláiste na Cógaisíochta, Ollscoil Leighis Taipei, Taipei, Taiwan

Teibí

Cúlra/Aidhmeanna:Tá ról tábhachtach ag fótatocsaineacht dé-óid astaithe solais ghorm (BLL) i ngalar súlach agus is cúis le díghiniúint reitineach agus apoptosis i gcealla epithelial lí reitineacha daonna (RPE).Sliocht Cistanche tubulosa (CTE)is leigheas traidisiúnta Síneach é a bhfuil go leor airíonna cosanta tairbhiúla aige; áfach, is beag staidéar a rinne scrúdú ar róil chosanta súl CTE. Sa staidéar seo, rinneamar imscrúdú ar na meicníochtaí is bun le héifeachtaí CTE ar apoptosis in vitro agus in vivo de bharr BLL. Modhanna: Cuireadh cealla RPE i bhfeidhm sa staidéar in vitro reatha agus socraíodh inmharthanacht na gceall le 3-(4,5-démheitilthiazol- 2-il)-2,{6} }measúnacht bróimíde défheiniltetrasóiliam. Socraíodh léiriú próitéine a bhaineann le apoptosis trí anailís blot an iarthair agus staining inmunofluorescence. Baineadh úsáid as francaigh Donn na hIorua chun nochtadh do BLL in vivo atá ar fáil ar bhonn tráchtála a scrúdú. Baineadh úsáid as staining hematoxylin agus eosin, lipéadú deiridh leasainm deoxynucleotidyl transferase dUTP (TUNEL), agus measúnuithe blot an iarthair chun dífhoirmiúchán moirfeolaíoch reitineach a scrúdú. Torthaí: Chuir CTE bac suntasach ar shárocsaíd hidrigine-, tertbutyl hydroperoxide-, sóidiam azide-, agus damáiste RPE de bharr BLL. Ina theannta sin, laghdaigh CTE léiriú marcóirí apoptotic cosúil le caspase scoilte-3 agus staining TUNEL tar éis nochtadh BLL trí chonairí apoptotic a dhíghníomhachtú, mar a léirítear trí staining imdhíonfluaraiseacha. Ina theannta sin, chuir CTE bac ar fhosphorylation BLL-spreagtha de c-Jun N-críochfort kinase, kinases breise a bhaineann le comhartha 1/2, agus p38 i gcealla RPE. In vivo, tharrtháil riarachán béil CTE 60-lá tréimhsiúil BLL laghduithe de bharr nochtadh i dtiús reitineach agus laghdaigh sé líon na gceall TUNEL-dearfach i múnla francach donn na hIorua. Conclúid: Is oibreán próifiolacsach ionchasach é CTE i gcoinne fótatocsaineacht a tharchuirtear le BLL

Cistanche tubulosa

Réamhrá

Thuairiscigh staidéir ar dhíghiniúint macúlach a bhaineann le haois (AMD) go bhfuil 8.7 faoin gcéad de dhaonra an domhain ag fulaingt ón ngalar seo [1]. Is galar neurodegenerative é AMD a fhágann dífhoirmiúchán photoreceptor, atrophy epithelial lí reitineach (RPE), apoptosis cille ganglion, agus caillteanas fís lárnach sa daonra scothaosta, agus tá sé ag éirí ina ualach sóisialta domhanda. Aicmítear AMD i bhfoirm thirim nó fliuch [2, 3]. Mar thoradh ar fheabhsuithe sa teicneolaíocht tá daoine ag caitheamh níos mó ama ag baint úsáide as gléasanna digiteacha nua-aimseartha, agus dá bhrí sin, tá daoine faoi lé astuithe solas gorm (BL) thar thréimhsí fada. Mar sin féin, níl an cheist maidir le fótathocsaineacht BL-spreagtha sa reitine déanta go maith. Is é an toradh a bhíonn ar rónochtadh do BL tonnfhad gearr (450–495 nm) ná giniúint speiceas ocsaigine imoibríoch (ROS), amhail sárocsaíd agus radacacha hiodrocsaile, rud a chuireann le méadú ar thomhaltas ocsaigine agus a chothaíonn damáiste DNA miteachondrial. Mar thoradh ar carnadh ROS tá strus ocsaídiúcháin agus carnadh fairsing adducts retinoid, rud a dhéanann damáiste don reitine a thuilleadh [4]. Tá sé léirithe ag taighde go bhfuil strus ocsaídiúcháin ina fhachtóir tosaigh maidir le pataigineas AMD tirim [5]. Ina theannta sin, laghdaíonn ionradaíocht BL léiriú einsímí frithocsaídeacha reitineacha, mar superoxide dismutase agus catalase, trí idirghníomhaíochtaí próitéin Bax/Bcl-2 a idirghabháil agus táirgeadh ROS inghineach a chur chun cinn. Mar sin, tá cealla RPE agus mitochondria deighleog seachtrach na bhfótareceptors ag fulaingt ó ghortú ionradaíochta BL [6, 7]. Chomh maith le giniúint ROS, gníomhaíonn ionradaíocht BL kinases próitéine gníomhachtaithe mitogen (MAPKs), a bhfuil ról tábhachtach acu i marthanais cille agus apoptosis. Déantar próitéiní pro-apoptotic a bhaineann le mitochondria-spleách a bhaineann le apoptosis, mar Bax agus caspase-3, a ghníomhachtú trí ionradaíocht dé-óid astaithe BL (BLL) trí na bealaí c-Jun N-terminal kinase (JNK) agus p38 i RPE agus cealla ganglion reitineach [8]. Ina theannta sin, is comhpháirteanna de chóras cosanta na gceall RPE iad na cosáin fhrith-ocsaídiúcháin atá ag brath ar fosfatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt agus fachtóir núicléach erythroid 2 (Nrf2) [{{34} }].

Sliocht Cistanche tubulosa (CTE)tá díorthaigh glycosíde feinileatánóideach ann agus tá sé in úsáid mar leigheas traidisiúnta Síneach le blianta fada. Is iad Echinacoside, acteoside, agus isoacteoside trí chomhdhúile gníomhacha móra CTE arb iad is sainairíonna go bhfuil airíonna neuroprotective, feabhsaithe cuimhne, imdhíonachta-rialaithe, agus frith-ae fiobróis [13, 14]. Is scavenger ROS é Echinacoside agus cosnaíonn sé i gcoinne 1-meitil-4-ian phenylpyridinium (MPP plus ) apoptosis spreagtha i múnlaí ainmhithe de ghalar Parkinson [15, 16]. Cosnaíonn Acteoside in aghaidh néarthocsaineacht spreagtha amyloid agus laghdaíonn sé athlasadh spreagtha lipopolysaccharide, atá inchurtha i leith traslonnú Nrf2 ón gcíteaplasma go dtí an núicléas agus atá ceangailteach d'eilimintí freagartha frithocsaídeacha. Úsáidtear na teiripí atá ar fáil faoi láthair le haghaidh AMD fliuch, mar shampla pegaptanib, ranibizumab, bevacizumab, agus aflibercept, chun angiogenesis iomarcach a chosc [17, 18]. Mar sin féin, níl aon chóireálacha éifeachtacha ann le haghaidh AMD tirim, mar gheall ar aimhréití iomadúla paiteolaíocha an ghalair seo.

Sa staidéar seo, léirímid éifeachtaí cosanta CTE i gcealla RPE agus i bhfrancaigh Brown Norway (BN). Ina theannta sin, chuireamar nochtadh BLL íseal-luminance fadtéarmach i bhfeidhm ar mhúnlaí in vitro agus in vivo araon chun éifeachtaí cosanta CTE a mheas. Fuaireamar amach gur laghdaigh CTE léiriú próitéiní a bhaineann le apoptosis tar éis nochtadh do BLL. Thairis sin, laghdaigh CTE líon na gcealla deoxynucleotidyl transferase teirminéil lipéadaithe leasainm dUTP (TUNEL) - cealla dearfacha i reitine francaigh BN tar éis nochtadh fadtéarmach do BLL luminance íseal. Soláthraíonn an staidéar seo léargais bhreise ar éifeachtaí frith-apoptotic úra CTE agus faisnéis maidir le straitéis nua chun cóireáil a dhéanamh ar dhíghiniúint reitineach.

Sliocht cistanche tubulosa (CTE): glycosíd feinileatánóideach

Abhair agus modhanna

Ceimiceáin agus táirgí

Chuir Sinphar Pharmaceutical Company (Yilan, Taiwan) CTE ar fáil go fial. Ceannaíodh feisteáin braite báis cille in situ (Cait. Uimh. 11-684-817-910) ó Roche (Mannheim, an Ghearmáin).

Cultúr cealla RPE

Ceannaíodh cealla RPE (ARPE{{{-2302}} agus ATCC® CRL-2302™) ón mBailiúchán Cultúir Cineál Meiriceánach (Manassas, VA) agus saothraíodh iad i meán modhnaithe Eagle’s Dulbecco (Gibco, Grand Island, NY) arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais in atmaisféar tais de 5 faoin gcéad CO2 ag 37 céim . Coinníodh cealla ARPE-19 ag sliocht 19–3{0 ar 10-miasa saothraithe cille cm (Orange Scientific, Braine-l'Alleud, an Bheilg). Nuair a bhíothas ag taisteal le 0.05 faoin gcéad d'aigéad tetraaicéiteach trypsin-ethylenediamine (Gibco), athphlátáladh na cealla ag cóimheas 1:4. Roimh an tástáil, cuireadh cealla ARPE-19 ar 48-phlátaí tobair (Orange Scientific) le haghaidh anailísí inmharthanachta cille ag dlús 1.0 ×105 cill/mL agus ar 6-miasa cm (Orange Scientific ) le haghaidh anailísí blotála thiar ag dlús 2.0 × 105 cill/mL ar feadh 24 h. Tar éis do chealla ARPE 80 faoin gcéad comhlí a bhaint amach, rinneadh na turgnaimh seo a leanas.

Cóireáil drugaí agus measúnú inmharthanachta cille

Síolaíodh cealla RPE ag pasáiste 19–30 ar 48-phlátaí tobair agus comhchóireáladh iad ar feadh 24 h le tiúchain éagsúla CTE, sárocsaíd hidrigine (H2O2), hidreaoirocsaíde tert-bhúitile (t-BHP), agus azide sóidiam ( NaN3). Saothraíodh na cealla ansin le 3-(4, 5-démheitilthiazol-2-il)-2, 5-bróimíd défheiniltetrasóiliam (MTT) ag tiúchan deiridh 1 mg /mL agus gortha ar feadh 30 nóiméad. Cuireadh sulfocsaíd démheitiol (200 µL) le gach tobar ansin chun na cealla a thuaslagadh. Tomhaiseadh ionsú ag 570 nm ag baint úsáide as léitheoir measúnachta imdhíon-ionsorbentach einsím-nasctha le Sunrise™ (MRX-TC; Dynex Technologies, Chantilly, VA). Ceartaíodh luachanna maidir le hionsú cúlra trí na bearnaí cuí a dhealú. Tagann na sonraí ó chúig mheasúnú neamhspleácha.

Prótacal nochta in vitro BL

Cuireadh an fhoinse solais agus na plátaí cille 25 cm óna chéile, mar a thuairiscítear inár staidéar roimhe seo [19]. Tomhaiseadh luminance le méadar solais (LM-81LX; Lutron Electronic Enterprise, Taipei, Taiwan). Bhí buaic BLL ag 460 nm (60 lux) don am sonraithe (0–48 h), ag brath ar dhearadh an turgnaimh.

Blotting an Iarthair

Tar éis 0–48-h comhchóireála le nochtadh CTE agus BLL, nite na cealla faoi dhó le salanda maolánach fosfáite-fuar oighir (PBS) agus cuireadh ar fionraí arís iad i maolán lysis mheasúnacht radai-imdhíonachta (1 faoin gcéad Nonidet P-40, 50 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM Na3VO4, 1 mM glycol-bis eitiléine (-aminoethylether)-N, N,N′,N′-aigéad teitrea-aicéiteach, 1 mM NaF , agus manglam coscaire protease/fosfatase). Fuarthas an lysate cille trí lártheifneoiriú ag 12, 000 × g ar feadh 35 nóiméad, agus bailíodh an supernatant chun tiúchan próitéine a chinneadh tríd an imoibrí Bradford (Saotharlanna Bith-Rad, Hercules, CA). Rinneadh méideanna comhionanna de shamplaí próitéine a scartha le leictreafóiréis glóthach dodeicile sulfáit-polyacrylamide sóidiam 10-12 faoin gcéad agus ansin aistríodh iad go membrane défhluairíd pholaiviniledéine. Tar éis an scannán a bhlocáil le 5 faoin gcéad de bhainne neamhshaille agus a ghoradh i saline maolánach Tris le Tween 20 (TBST) ar feadh 1 h, rinneadh imdhíonadh le príomhantasubstaintí a bhaineann go sonrach le caspase scoilte-3, phospho-JNK, JNK , phospho-p38, p38, kinase a bhaineann le comhartha fosfa-eascheallach (ERK), ERK, Bcl-2, Bax, próitéin Fas-ghaolmhar le fearann ​​báis (FADD), caspase-8 (GeneTex, Irvine , CA), Fas-ligand (Abcam, Cambridge, RA), agus b-actin (Sigma- Aldrich, St. Louis, MO). Ansin goradh na blotaí le antasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha de raidis capall-peroxidase (1:6000 in TBST; Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) ar feadh 1 h ag teocht an tseomra. Ag baint úsáide as trealamh feabhsaithe cemiluminescence (Millipore, Billerica, MA), rinneadh anailís ar dhéine na mbannaí ar gach blot le bogearraí Image J tar éis normalú go b-actin.

Imdhíonfluaraiseacht

Socraíodh cealla RPE le paraformaildéad 4 faoin gcéad i PBS ar feadh 15 nóiméad. Cuireadh Triton X-100 i PBS (0.2 faoin gcéad) leis na cealla ansin ar feadh 15 nóiméad, agus ina dhiaidh sin 5 faoin gcéad de shéiream bó féatais i PBS ar feadh 30 nóiméad; goradh na cealla ansin le antashubstaint frith-scoilteachta-3 ag cóimheas 1:250 ar feadh 24 h (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Baineadh úsáid as antashubstaint tánaisteach IgG frith-choine gabhar (Dylight 594) ag cóimheas 1:200 (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Rinneadh núicléis cille a dhathú le 4′-6-diamidino{-2-phenylindole (DAPI; AAT Bioquest, Sunnyvale, CA). Breathnaíodh athruithe ar fhluaraiseacht le córas íomháithe micreascóp comhfhócasach léasair CS SP5 (Leica, Teban Gardens, Singeapór).

staining TUNEL

Is sainmharc suntasach de apoptosis iad blúirí DNA, ar féidir iad a bhrath trí mheasúnacht TUNEL. D'úsáideamar Fearas Braite Báis Cille In Situ (Cat. Uimh. 11-684-817-910; Roche) chun bás cille RPE ríomhchláraithe apoptotic a thomhas de réir phrótacal an déantóra. Go hachomair, shocraigh muid cealla RPE le paraformaildéad 4 faoin gcéad agus lipéadaigh muid na sosanna snáithe DNA in imoibriú einsímeach chun cealla TUNEL-dearfach a bhrath, a raibh stain fluaraiseach glas orthu. Ansin rinneadh na cealla dhaite a scanadh agus a anailísiú le Córas Íomháithe FAXS-móide Fíocháin (TissueGnostics, Vín, an Ostair). Áiríodh deich míle imeacht sa réigiún geataithe RPE, agus rinneamar anailís ar na híomhánna le haghaidh líon na gceall TUNEL-dearfach le bogearraí TissueQuest/HistoQuest (TissueGnostics).

Turgnaimh ainmhithe

Ceannaíodh francaigh fireanna BN (300–350 g meáchan coirp) ó Lárionad Náisiúnta Ainmhithe na Saotharlainne (Taipei, Taiwan) agus coinníodh iad ar feadh 2-3 mhí. Coinníodh na francaigh i dtimthriall éadrom/dorcha 12-h/12-h ag 26 ± 1 céim , cóimheas taiseachais choibhneasta 35–47 faoin gcéad, agus rochtain ad libitum ar uisce agus bia. Coinníodh francaigh neamhchóireáilte sa dorchadas chun feidhmiú mar rialuithe. D'fhormheas an Coiste Institiúideach um Úsáid Chúram Ainmhithe in Ollscoil Leighis Taipei na prótacail staidéir (uimhir cheadaithe: LAC-2016-0442). Chomhlíon na nósanna imeachta turgnamhacha go léir a bhain le húsáid ainmhithe ráitis an Chomhlachais um Thaighde i bhFís agus Oftailmeolaíocht maidir le húsáid ainmhithe i dtaighde trialach oftalmacha agus fís.

Samhail francach spreagtha BLL de mheathlú reitineach

D'úsáideamar múnla tréimhsiúil íseal-luminance fadtéarmach BLL nochta-spreagtha de dhíghiniúint reitineach, mar a thuairiscítear inár staidéar roimhe seo [19]. Go hachomair, roinntear francaigh BN i dtrí ghrúpa: grúpa rialaithe, a coinníodh faoi choinníollacha dorcha; grúpa BLL-nochta, a bhí faoi lé BLL tréimhsiúil sa dorchadas gan dilation dalta (460 nm, 150 lux) ar feadh 3 h in aghaidh an lae ar feadh 60 lá; agus grúpa CTE-cóireáilte móide BLL-nochta, a réamhchóireáil le CTE (100 mg/kg meáchan coirp) ar feadh 14 lá agus ansin comhchóireáilte le nochtadh tréimhsiúil BLL ar feadh 3 h in aghaidh an lae ar feadh 60 lá. Tugadh na francaigh go léir ar ais chuig na coilíneachtaí ainmhithe agus athchromadh ar an ngnáth-thimthriall éadrom/dorcha (250 lux, 12 h/12 ​​h) ag deireadh na tréimhse turgnamhacha.

Anailís staitistiúil

Ríomhadh difríochtaí suntasacha trí úsáid a bhaint as anailís aontreo ar athraithis agus tástáil iar hoc Tukey agus tástáil chomparáidí iolracha ina dhiaidh sin. Socraíodh tábhacht staitistiúil ag p-luachanna de<>

Táirgí cistanche tubulosa

Torthaí

Cosnaíonn CTE cealla RPE ó dhamáiste strus ocsaídiúcháin

Chun cíteatocsaineacht CTE a mheas tríd an measúnú MTT, cuireadh roinnt tiúchan CTE ({{{{20}}}}–500 ug/mL) i bhfeidhm ar chealla RPE. Ní raibh aon éifeachtaí tocsaineacha soiléire ag cóireáil CTE ar inmharthanacht cille RPE ag aon cheann de na tiúchan a tástáladh (Fíor 1A). Mar sin, baineadh úsáid as 50 agus 100 ug/mL CTE sna turgnaimh ina dhiaidh sin. Chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí frith-apoptotic CTE, rinneadh ionduchtóirí ocsaídiúcháin éagsúla (H2O2, t-BHP, agus NaN3) a chomh-riar le cealla CTE go RPE ar feadh 24 h. Laghdaigh H2O2, NaN3, agus t-BHP inmharthanacht cille agus rinne damáiste do chealla RPE ar bhealach dáileog-spleách (barraí slais, Fíor 1B, 1C, agus 1D); Bhí inmharthanacht cille i bhfad níos ísle i gcealla cóireáilte le 0.03 mM H2O2, 0.3 mM NaN3, agus 0.3 mM t-BHP ná sa ghrúpa rialaithe.

Mar sin féin, mhaolaigh comhchóireáil le 50 agus 100 ug/mL CTE damáiste cille H2O2-, NaN3-, agus t-BHP-spreagtha RPE agus d’aisiompaigh sé an laghdú ar inmharthanacht cille (barraí dubha, Fig. .1B, 1C, agus 1D). Tugann na sonraí thuas le fios go ndéanann CTE cealla RPE a tharrtháil ó dhamáiste strus ocsaídiúcháin.

Cuireann CTE bac ar bhás cille RPE de bharr BLL

Inár staidéar roimhe seo, fuaireamar amach go bhfuil BLL citotocsaineach do chealla RPE, rud a bhí inchurtha i leith athruithe ar shloinneadh Bcl-2 agus Bax. Sa staidéar seo, rinneamar scrúdú breise ar éifeachtaí cosanta CTE ar dhamáiste cealla RPE de bharr BLL. Chuireamar dhá phláta stiúir gorm leictreacha i gorlann chultúir cille. Ba é 25 cm an t-achar idir an fhoinse solais agus na plátaí cille, agus bhí an déine BLL 60 lux, arna thomhas ag méadar solais (Fíor 2A). Léirigh measúnacht MTT go raibh nochtadh BLL ar feadh tréimhsí éagsúla ama (6-48 h) ina chúis le bás cille RPE ar bhealach ag brath ar am ( Fíor. 2 B ). Na laghduithe BLL-spreagtha in inmharthanacht cille tar éis 24 agus 48 h bhí maolaithe suntasach nuair a bhí na cealla comh-cóireáilte le CTE (100 ug / ml) ( Fíor. 2 C ). Tugann na sonraí seo le tuiscint go gcosnaíonn CTE cealla RPE ó fhóta-tocsaineacht spreagtha BLL.

Coscann CTE apoptosis BLL-spreagtha i gcealla RPE trí na conairí Bcl-2/Bax agus Fas/FasL a rialú

Ar bhonn na n-éifeachtaí cosanta a d’fhéadfadh a bheith ag CTE i gcealla RPE, rinneamar imscrúdú breise ar rannpháirtíocht ionchasach CTE sa phróiseas seo. Scrúdaíodh dhá chonair chomharthaíochta apoptotic, .i. na conairí Bax/Bcl{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{0))))3)) 43}})

Coscann CTE fosfarú próitéiní freagartha struis i gcealla RPE de bharr BLL

Léirigh staidéir roimhe seo go gcuirtear cosáin MAPK, mar shampla ERK, JNK, agus p38 MAP, i ngníomh i gcealla RPE agus sa reitine tar éis nochtadh do solas ultraivialait nó BL [21, 22]. Mar sin, chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí rialála CTE ar an gcosán freagartha struis MAPK tar éis nochtadh BLL, cuireadh 100 µg/ml CTE i bhfeidhm ar chealla RPE faoi amanna nochta BLL éagsúla (Fíor 5 A). Léirigh anailís blot an Iarthair go raibh ERK fosfarlaithe, JNK, agus p38 i ngníomh ar nochtadh BLL, ach cuireadh bac suntasach orthu ar chomhchóireáil le CTE i gcealla RPE (Fíor 5 B). Tugann na torthaí thuas le fios go gcuireann CTE bac ar dhamáiste cille RPE de bharr BLL, a d’fhéadfadh a bheith bainteach le cosc ​​ar MAPK i gcealla RPE.

Tarrthálann CTE damáiste reitineach de bharr BLL tar éis nochtadh tréimhsiúil fadtéarmach i múnla francach

Chun éifeachtaí cosanta CTE a mheas, nochtamar francaigh BN do nochtadh fadtéarmach BLL ar feadh 60 lá agus rinneamar measúnú ar éifeachtaí CTE. Mar a léirítear sa scéimreach a chuirtear i láthair i bhFíor 6 A, roinneadh francaigh BN i dtrí ghrúpa: grúpa rialaithe, grúpa BLL-nochta, agus grúpa CTE móide BLL (Fig. 6 A). Sa ghrúpa CTE móide BLL, rinneadh forlíonadh leanúnach ar francaigh BN le CTE (meáchan coirp 100 mg/kg) le gavage béil uair amháin sa lá ar feadh 14 lá roimh nochtadh BLL. Ar lá 0, rinneadh comhchóireáil ar francaigh BN le CTE (meáchan coirp 100 mg/kg) agus nochtaíodh iad do BLL ar feadh 3 h in aghaidh an lae ar feadh 60 lá. Tar éis 60 lá de nochtadh BLL, íobairt na hainmhithe le haghaidh anailíse blot an iarthair agus staining immunohistochemistry. Sa ghrúpa CTE móide BLL, bhí slonn na próitéine procaspase in aonchineálach súl francach níos airde tar éis cóireála CTE ná sa ghrúpa BLL (Fíor 6B agus 6C). Léiríonn na sonraí seo go gcuireann CTE cosc ​​ar fhótatocsaineacht reitineach agus apoptosis íseal-luminance fadtéarmach de bharr BLL trí chosc a chur ar ghníomhachtú caspase scoilte-3. Chuir staining immunohistochemistry níos mó fianaise ar fáil maidir le héifeachtaí cosanta CTE ar struchtúr agus cosáin fiseolaíocha an reitine (Fig. 7). Thairis sin, tar éis nochtadh BLL fuaireamar amach go raibh an ciseal néaróin istigh laghdaithe agus breathnaíodh dífhoirmíochtaí moirfeolaíocha ag an gciseal néaróin sheachtrach (ONL), lena n-áirítear an deighleog inmheánach / deighleog sheachtrach sa reitine lárnach agus imeallach araon, atá ag teacht lenár staidéar roimhe seo. Fíor 7B). Rud atá tábhachtach, chuir CTE cosc ​​ar dhífhoirmiú cille RPE, damáiste cille néarónach, agus tanú foriomlán an reitine sa ghrúpa CTE móide BLL (Fíor 7C). Thairis sin, níor thugamar faoi deara cealla TUNEL-dearfach i reitine lárnach agus imeallach na bhfrancaigh gnáth (Fíor 8Ab agus 8Bb). Os a choinne sin, tar éis nochtadh BLL ar feadh 60 lá, braitheadh ​​​​cealla TUNEL-dearfach go minic san ONL den reitine lárnach agus forimeallach (Fíor 8Ae agus 8Be). Tháinig laghdú suntasach ar staining DAPI ar ONL an reitine lárnach sa ghrúpa BLL (Fíor 8Ad). Mar sin féin, maolaíodh láithreacht cealla TUNEL-dearfach agus méadaíodh staining DAPI ar an reitine lárnach agus forimeallach ONL sa ghrúpa CTE móide BLL (Fíor 8Ai agus 8Bi).

Táirgí cistanche tubulosa

An chéad chuid eile Ⅱ le leanúint