Éifeachtaí Néarchosanta Ceithre Ghlicóisídí Feinileatánóideach ar H2O2-Apoptosis Ionduchtaithe ar Chealla PC12 Trí Chosán Nrf2/ARE
Mar 04, 2022
Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com
Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao agus Baiyi Lu 1,*
1. Réamhrá
Spreagann strus ocsaídiúcháin, atá ina éagothroime de homeostasis frithocsaídeach, sárocsaídiú lipid, díobháil do phróitéin agus DNA, aosú cille, agus bás cille. Is dócha go gcuireann an próiseas seo le roinnt neamhoird néar-mheathlúcháin, amhail galar Alzheimer (AD), galar Parkinson (PD), agus ischemia / reperfusion [1]. Is eol go ndéanann sárocsaíd hidrigine (H2O2), atá ar cheann de na príomhspeicis ocsaigin imoibríoch (ROS), sárocsaídiú lipid agus damáiste DNA [2]. Thairis sin, is foinse endogenous de fréamhacha saor in aisce hiodrocsaile é H2O2 a chuireann le leibhéal cúlra strus ocsaídiúcháin cheallacha [3,4]. Mar sin, d’fhéadfadh go mbeadh an poitéinseal ag straitéisí teiripeacha chun apoptosis ocsaídiúcháin de bharr strus a chosc i gcóireáil galair neurodegenerative.
Is fachtóir trascríobh é fachtóir núicléach erythroid 2-fachtóir gaolmhar 2 (Nrf2) a bhfuil baint láidir aige le strus ocsaídiúcháin. Spreagann gníomhachtú Nrf2 tras-scríobh géinte frithocsaídeacha agus díthocsainithe iomadúla, lena n-áirítear heme oxygenase-1 (HO-1), NAD(P)H quinone oxidoreductase 1, frith-athlastach [13], agus inmunomodulatory [14] ] bithghníomhaíochtaí. Is comhábhar coitianta é Osmanthusfragrans i roinnt bianna Áiseacha agus tá sé ite le fada. Léirigh muid roimhe seo gur fheabhsaigh sleachta bláthanna O.fragrans foghlaim spásúil agus cuimhne, chuir siad bac ar damáiste ocsaídiúcháin, agus léirigh siad gníomhaíochtaí neuroprotective in aosú d-galactós-spreagtha i múnla luch ICR [15]. Is iad Salidroside, acteoside, agus isoacteoside an príomh-fhreagairt PhGs do ghníomhaíochtaí frithocsaídeacha sleachta bláthanna O.fragrans [16].
Fuair staidéir ar éifeacht neuroprotective PhG torthaí inmhianaithe. Laghdaigh Salidroside go suntasach apoptosis cille de chealla PC12 a bhí nochta i MPP móide [17,18]. Mhaolaigh Acteoside freisin apoptosis móide-spreagtha MPP agus strus ocsaídiúcháin i gcealla PC12 [19] agus gortú cille SH-SY5Y de bharr A p25-35-[20]. Rinneadh imscrúdú ar Echinacoside ar apoptosis spreagtha necróis meall-a (TNFa) i gcealla SH-SY5Y [21], tocsaineacht dopaminergic spreagtha MPTP i lucha [22], cultúir bunscoile gortaithe glutamáit de chealla cortical francach [23], agus { {19}}Damáiste de bharr OHDA i gcealla PC12 [24]. Léirigh na torthaí gur léirigh PhGanna éifeacht cíteachosanta agus gur gníomhairí féideartha iad chun galair néar-mheathlúcháin a chóireáil. Léirigh staidéir go bhfuil airíonna frithocsaídeacha PhGanna faoi go leor bithghníomhaíochtaí eile do na comhdhúile seo [25]. Mar sin féin, is beag staidéar a rinne imscrúdú ar mheicníocht mhóilíneach PhGanna i gcoinne tocsaineachta ocsaídiúcháin.
Inár staidéar, roghnaigh muid ceithre PhG tipiciúil mar seo a leanas: salidroside (monaisiúicrídí feinileatánóideach), acteoside (déshiúicrídí feinileatánóideach), isoacteoside (déshiúicrídí feinileatánóideach), agus echinacoside (tríshiúicrídí feinileatánóideach). D’fhostaigheamar múnla bás néaránach ag baint úsáide as cealla PC12 difreáilte [26] chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht chosanta agus meicníocht mhóilíneach PhG ar mhúnla cille PC12 spreagtha H2O2-. Léiríomar gur ghníomhaigh PhGanna an cosán Nrf2/ARE trí cheangal a dhéanamh ar phróitéin 1 (Keap1) a bhaineann le ECH mar Kelch. Rinne an próiseas seo na heinsímí frithocsaídeacha a rialáil agus mhéadaigh sé friotaíocht na gcealla PC12 in aghaidh strus ocsaídiúcháin.
Cóireáil neamhoird neurodegenerative:PhGs ón gcistinche
2. Torthaí
2.1. PhGs H2O Shochtadh2-Cíteatocsaineacht Ionduchtaithe i gCealla PC12
Tástáladh éifeachtaí citotocsaineacha H2O2 agus PhG (0.1,1,5, agus 10 卩g/mL) ar chealla PC12. Léirigh na torthaí gur tharla caillteanas H2O2 d’inmharthanacht cille PC12 ar mhodhanna tiúchan-spleách agus am-spleách (Fíor 1A). Mar thoradh ar nochtadh cealla PC12 do 200 H2O2 ar feadh 2 h bhí inmharthanacht cille 57.4 faoin gcéad . Ní raibh aon éifeacht ag réamhchóireáil cealla le PhG ag 0.1,1, 5, agus 10 昭/mL ar inmharthanacht cille (Fíor 1B) agus bhí cosaint shuntasach ar chealla PC12 ó dhamáiste spreagtha H2O trí fheabhas a chur ar an inmharthanacht cille mar 9.549-22.141 faoin gcéad , 12.092-25.289 faoin gcéad , 1.470-9.289 faoin gcéad , agus 3.411-11.441 faoin gcéad , faoi seach ( Fíor 1C). Mar sin féin, níor léirigh réamhchóireáil salidroside (0.1 ^ g / mL), isoacteoside (0.1, 1, 5, agus 10 ^ g / mL), echinacoside (0.1,1, agus 5 ^ g / mL) aon difríocht shuntasach ar chill spreagtha HzOz gortú. Mhéadaigh réamhchóireáil ceall le PhGanna an tréith moirfeolaíoch a chothaíonn H2O2 (Fíor 1D).
Fíor 1 .Shocht PhGanna cíteatocsaineacht spreagtha H2O i gcealla PC12. Braitheadh inmharthanacht cille le measúnacht MTT. Éifeacht citotocsaineach H2O2 (A) agus PhGs (B) ag tiúchan éagsúla ar chealla PC12. (C) Laghdaigh PhGanna H2O{2-de bharr laghdú ar inmharthanacht cille. Goradh cealla PC12 le PhGs (0.1, agus 10 mg/mL) ar feadh 24 h, agus ansin goraíodh iad le 200 pM H2O2 ar feadh 2 eile h tar éis na PhGanna a bhaint. (D) Breathnú moirfeolaíoch. Breathnaíodh cealla tar éis cóireála le micreascóp codarsnachta céime (x100), CK: gnáthghrúpa, H2O2: grúpa cóireáilte H2O2, HL: grúpa cóireáilte dáileog íseal salidroside, HH: grúpa cóireáilte dáileog ard salidroside, ML: grúpa cóireáilte dáileog íseal acteoside, MH: grúpa cóireáilte dáileog ard acteoside, IL: grúpa cóireáilte dáileog íseal isoacteoside, IH: grúpa cóireáilte dáileog ard isoacteoside, SL: grúpa cóireáilte dáileog íseal echinacoside, SH: grúpa cóireáilte dáileog ard echinacoside. ** p < 0.01="" i="" gcoinne="" grúpa="" neamhchóireáilte;="" #="" p="">< 0.05,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2;="" ##="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="">
2.2. PhGanna faoi Shochtadh H2O2-Carnadh Incheallach Ioncheallach ROS, Sárocsaídiú Lipid (MDA), agus Gníomhaíochtaí Méadaithe Superoxide Dismutase (SOD) i gCealla PC12
Mhéadaigh nochtadh cealla PC12 do 200 pM H2O2 ar feadh 2 uair leibhéil ROS, ábhar MDA, agus laghdaigh gníomhaíocht SOD (Fíor 2). Laghdaigh réamhchóireáil PhG leibhéal ROS, salidroside, agus acteoside, agus an dáileog ard de réamhchóireáil isoacteoside agus echinacoside go suntasach maolaithe leibhéal ROS (p < 0.01).="" níor="" léirigh="" réamhchóireáil="" salidroside="" aon="" éifeacht="" ar="" ábhar="" mda,="" ach="" mhaolaigh="" réamhchóireáil="" acteóisíd="" go="" mór="" ábhar="" mda="" (p="">< 0.05).="" laghdaigh="" réamhchóireáil="" isoacteoside="" agus="" echinacoside="" go="" mór="" ábhar="" mda="" go="" dtí="" níos="">
Fíor 2 .Chuir PhGs bac ar charnadh ROS agus MDA agus mhéadaigh siad gníomhaíochtaí SOD i gcealla PC12. Goradh cealla PC12 le PhGs (0.1, agus 10 4g/mL) ar feadh 24 h, agus ansin goraíodh iad le 200 |^M H2O2 le haghaidh ceann eile 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. (A) Chuir PhGanna bac ar charnadh ROS agus MDA. (B) Chuir PhGs bac ar charnadh MDA. (C) Mhéadaigh PhGanna gníomhaíochtaí SOD. CK: gnáthghrúpa, Múnla: grúpa cóireáilte H2O2, Salidroside: grúpa cóireáilte salidroside, Acteoside: grúpa cóireáilte acteoside, Isoacteoside: grúpa cóireáilte isoacteoside, Echinacoside: grúpa cóireáilte echinacoside. ** p < 0.01="" versus="" grúpa="" neamhchóireáilte;="" #="" p="">< 0.05,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="" h2o2,="" ##="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="">
2.3.PhGanna H2O aisiompaithe2-Apoptosis Ionduchtaithe i gCealla PC12
Mhéadaigh cóireáil H2O2 (200 |1M) ar feadh 2 h go suntasach apoptosis i gcealla PC12, le ráta iomlán apoptotic suas le 16.02 faoin gcéad (Fíor 3). Mar sin féin, laghdaigh réamhchóireáil le PhGs (0.1 agus 10 卩g/mL) ar feadh 24 h an ráta apoptosis ar bhealach a bhraitheann tiúchan (p < 0.01).="" laghdaigh="" salidroside,="" acteoside,="" isoacteoside,="" agus="" echinacoside="" an="" céatadán="" apoptosis="" cille="" faoi="" 4.750-6.627="" faoin="" gcéad="" ,="" 4.413-5.800="" faoin="" gcéad="" ,="" 6.593-10.047="" faoin="" gcéad="" ,="" agus="" 1.530-7.510="" faoin="" gcéad="" ,="" faoi="">
Fíor 3. D'aisiompaigh PhGanna apoptóis spreagtha H2O i gcealla PC12. Goradh cealla PC12 le PhG (0.1, agus 10 卩g/mL) ar feadh 24 h, agus ansin goraíodh iad le 2{00 pM H2O2 ar feadh 2 uair eile tar éis an Baineadh PhGanna. Ansin, tomhaiseadh apoptosis trí chiteiméadracht sreafa ag baint úsáide as taiscéalaí fluaraiseacha PI/FITC. CK: gnáthghrúpa, Múnla: grúpa cóireáilte H2O2, Salidroside: grúpa cóireáilte salidroside, Acteoside: grúpa cóireáilte acteoside, Isoacteoside: grúpa cóireáilte isoacteoside, Echinacoside: grúpa cóireáilte echinacoside. ** p < 0.01="" i="" gcoinne="" grúpa="" neamhchóireáilte;="" ##="" p="">< 0.01,="" i="" gcoinne="" grúpa="" cóireáilte="">
2.4. PhGanna Aisiompaithe H2O2-Rialáil Ionduchtaithe ar Léiriú Próitéin HO-1, NQO1, GCLC, agus GCLM
Is einsímí tábhachtacha frithocsaídeacha ceallacha iad HO{{{0}}, NQO1, agus ligáis ghlútamáit-cistéin (GCL), agus tá HO-1, NQO1, agus fo-aonaid chatalaíoch nó modhnaithe GCL (GCLC nó GCLM). Nrf2-géinte iartheachtacha a rialáil[27]. Breathnaíodh léiriú próitéine ar HO{-1, NQO1, GCLC, agus GCLM tar éis cóireála. Fuarthas difríocht shoiléir idir slonn próitéine HO-1 agus NQO1 le H2O2 nó ná bíodh (Fíor 6A-C) (p < 0.01).="" d'aisiompaigh="" phganna="" (0.1="" agus="" 10="" p^g/ml)="" an="" íosrialáil="" spreagtha="" h2o="" ar="" slonn="" próitéine="" de="" chuid="" ho-1="" (seachas="" salidroside="" ag="" {{32}="" }.1="" pg/ml),="" nqo1="" (seachas="" acteoside="" ag="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< {{40}}.01).="" rinne="" h2o2="" íosrialáil="" freisin="" ar="" slonn="" próitéine="" gclc="" agus="" gclm="" (p="">< 0.05)="" (fíor="" 6a,d,e).="" d’aisiompaigh="" phgs="" (0.1="" agus="" 10="" pg/ml)="" h2o2-dí-rialú="" slonn="" próitéine="" gclc="" (seachas="" echinacoside="" ag="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01)="" agus="" gclm="" (seachas="" salidroside="" ag="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" ansin,="" úsáideadh="" na="" coscairí="" ceimiceacha="" le="" haghaidh="" ho{{-1="" chun="" tuilleadh="" meastóireachta="" a="" dhéanamh="" ar="" róil="" na="" n-einsímí="" frithocsaídeacha="" maidir="" le="" cosaint="" phganna="" i="" gcoinne="" cíteatocsaineachta="" spreagtha="" h2o="" a="" rialú.="" chuir="" phgs="" (0.1="" agus="" 10="" pg/ml)="" cosc="" ar="" cíteatocsaineacht="" spreagtha="" h2o,="" ach="" d'aisiompaigh="" an="" t-inhibitor="" ho{{-1="" znpp="" (p="">< 0.01)="" ag="" 20="" pm="" (fíor="" 6f,="" p="">< 0.01)="" an="" éifeacht="" chosanta="" sin.="">
2.5. Léiriú Keap1 agus Anailís Dugtha Mhóilíneach
Faoi choinníollacha fiseolaíocha, gníomhaíonn Keap1 mar phróitéin athbhrúite de Nrf2 trí cheangal a dhéanamh d'fhearann Neh2 de Nrf2 agus díriú ar Nrf2 chuig ligáis ubiquitin E3 bunaithe ar Cul3- le haghaidh uileláithreachta agus díghrádú ina dhiaidh sin ag an proteasome 26S [28]. Rinneadh cumas ceangailteach le Keap1 de PhGanna a mheas trí anailís dhugála mhóilíneach chun imscrúdú a dhéanamh ar an meicníocht faoina n-éifeacht frithocsaídeach.
Éifeacht frithocsaídeach: CistanchePhGs
3. Plé
Rinneamar imscrúdú ar néarchosaint PhGanna ar chiteatocsaineacht spreagtha H2O2 i gcealla PC12. Léiríonn na torthaí gur chuir réamhchóireáil PhGanna cíteatocsaineacht HzOz-spreagtha go suntasach faoi chois, mhaolaigh sé an leibhéal ROS incheallach, d'fheabhsaigh sé leibhéal na n-einsímí frithocsaídeacha intracellular, agus ar deireadh thiar d'aisiompaigh sé cíteatocsaineacht spreagtha H2O i gcealla PC12. Ina theannta sin, mhéadaigh PhGanna gníomhachtú trascríobh Nrf2, aisiompaíodh an íosrialáil HzOz-spreagtha ar an slonn próitéine de HO-1, NQO1, GCLC, agus GCLM. Ina theannta sin, léirigh PhGanna idirghníomhú féideartha le suíomh ceangailteach Nrf2 sa phróitéin Keap1.
Sa ghortú cille PC12 spreagtha H2O, mhéadaigh sárocsaídiú lipid, a thagraíonn do dhíghrádú ocsaídiúcháin lipid, tréscaoilteacht na seicní, rud a fhágann damáiste cille [29]. Úsáidtear foirmiú MDA go forleathan mar innéacs sárocsaídiúcháin lipid [30]. Chuir H2O2 feabhas ar tháirgeadh ROS agus einsímí cosanta frithocsaídeacha ídithe, mar shampla SOD, catalase, agus GPx. Mar thoradh ar an bpróiseas seo tá strus ocsaídiúcháin [31], a bhfuil ról lárnach aige maidir le cúis agus dul chun cinn formhór na neamhoird neurodegenerative. Ag teacht le staidéir roimhe seo, thugamar faoi deara leibhéal méadaithe ROS, laghdaigh einsímí frithocsaídeacha intracellular, agus apoptosis feabhsaithe cealla PC12 tar éis cóireála H2O2. Laghdaigh réamhchóireáil PhG go mór méadú HzOz-spreagtha ar ROS incheallach, einsímí frithocsaídeacha intracellular feabhsaithe, agus ar deireadh thiar d'aisiompaigh sé cíteatocsaineacht HzOz-spreagtha i gcealla PC12.
Tá Kuang et al. [32] thuairiscigh gur léirigh echinacoside éifeacht neuroprotective suntasach ar cíteatocsaineacht spreagtha H2O i gcealla PC12 tríd an cosán apoptotic mitochondrial. Sa staidéar seo, fuaireamar amach gur léirigh echinacoside, salidroside, acteoside, agus isoacteoside éifeachtaí neuroprotective trí ghníomhaíocht frithocsaídeach na gcealla PC12 a fheabhsú toisc gur mhéadaigh siad gníomhachtú tras-scríobhach Nrf2 agus gur uasrialáladh siad an abairt próitéine anuas de HO-1, NQO1, GCLC, agus GCLM. Tá sé léirithe go soiléir ag staidéir iomadúla go gcosnaíonn gníomhachtú spriocghéin Nrf2, go háirithe HO-1, in astrocytes agus néaróin go láidir i gcoinne athlasadh, damáiste ocsaídiúcháin agus bás cille. Tuairiscíodh go bhfuil an córas HO-1 an-ghníomhach sa lárchóras néaróg, agus is cosúil go bhfuil ról ríthábhachtach ag a mhodhnú i bpataiginéis neamhoird néar-mheathlúcháin [33]. Shoiléirigh staidéir le déanaí freisin ról Nrf2 maidir le dul chun cinn agus riosca PD [9] agus Keap1 mar sprioc éifeachtach chun Nrf2 a athghníomhachtú in AD [34]. Tacaíonn na torthaí le fianaise nua do Nrf2 mar sprioc theiripeach i galair néar-mheathlúcháin.
Thaispeáin anailís dhugála mhóilíneach go bhféadfadh PhGanna ceangal le Keap1, leis na cumais cheangailteacha seo a leanas: echinacoside > isoacteoside > acteoside > salidroside. Ag teacht leis na torthaí seo, ba é an toradh a bhí ar réamhchóireáil PhGs ná trasghluaiseacht núicléach Nrf2, leis an slonn Nrf2 seo a leanas sa núicléas: echinacoside > isoacteoside * acteoside > salidroside. Ghlacamar leis go raibh tionchar ag líon na gliocóisídí ar mhodh ceangailteach féideartha PhG agus Keap1, agus ba é an modh ceangailteach ba chúis le scaoileadh Nrf2 ó Keap1 tuilleadh. Ba é an toradh a bhí ar an bpróiseas seo ná gníomhachtú Nrf2 agus na géinte iartheachtacha agus ar deireadh thiar cosnaíonn sé cealla PC12 ó strus ocsaídiúcháin H2 O2 -.
Éifeachtaí neuroprotective de cistanchePhGs
4. Ábhair agus Modhanna
4.1. Comhdhúile Ceimiceacha agus Imoibrithe
Salidroside (Uimh. CAS {{0}}), acteoside (Uimh. CAS 61276-17-3), isoacteoside (Uimh. CAS 61303-13-7), agus echinacoside (Uimh. CAS {{3}). }) a ceannaíodh ó YYuanye Biotechnology Company (Shanghai, an tSín). Díscaoileadh na PhGanna i PBS chun tuaslagán stoic 10 mg/mL a tháirgeadh, a stóráladh ag -20 céim . Ceannaíodh H2O2 ó Aladdin® (Shanghai, an tSín). Ceannaíodh séiream bó meánach agus féatais RPMI-1640 ó Hyclone (Logan, UT, SAM), agus ceannaíodh 0.5 faoin gcéad trypsin EDTA, peinicillin, agus streiptimícin ó Keyi (Hangzhou, an tSín). Ceannaíodh MDA, feisteáin diagnóiseacha SOD, MTT, agus DCFH-DA ó Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime (Nanjing, Jiangsu, an tSín). Ceannaíodh trealamh staining dúbailte Annexin V-FITC/PI ó Solarbio Life Sciences (Beijing, an tSín). Ceannaíodh antasubstaintí go Nrf2, Histone H3, Keap1, HO{-1, NQO1, GCLC, GCLM, agus p-actin, sárocsaíd frith-luiche-capallais (HRP) IgG, agus frith-coinín-HRP-IgG ó Abcam (Londain, an RA). Ceannaíodh bacóirí HO{{-1 agus ZnPP ó Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, SAM). Ceannaíodh RNAiso Plus, PrimeScript™RT imoibrí Kit le gDNA Eraser, agus SYBR® Premix Ex Taq™ II ó Takara (Shiga, an tSeapáin). Ceannaíodh Imoibrí Aistrithe Lipofectamine® RNAiMAX ó Thermo Fisher Scientific (Waltham, RA). Ba iad seo a leanas na sraitheanna siRNA Nrf2: ar aghaidh, CCGAAUUACAGUCUCUUAA; agus droim ar ais, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Idir an dá linn, bhí seichimh siRNA rialaithe mar seo a leanas: ar aghaidh, UUCUCCGAACGUGUCACGU; agus droim ar ais, ACGUACACGUUCGGGAAA.
4.2. Cultúr na Cille
Fuarthas líne pheochromocytoma adrenal luch (cealla PC12) ón Institiúid Bithcheimice agus Bitheolaíochta Cille, SIBS, (CAS, Shanghai, An tSín). Coinníodh na cealla i RPMI-1640 (Hioclone) ina raibh 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais (Hioclone), 100 U/mL peinicillin, agus 0.1 mg/mL streiptimícin ag 37 céim le 5 faoin gcéad CO2. Athraíodh an meán gach lá eile.
4.3. Measúnacht Inmharthanachta Cille
Síolaíodh cealla PC12 i 96-phlátaí tobair ag 2 x 104 cill/tobar. Tar éis ceangal a dhéanamh, rinneadh na cealla a réamhghoiriú le nó gan coscaire ar feadh 20 nóiméad, gortha le nó gan PhG ar feadh 24 h, agus ansin goraíodh iad le H2O2 ar feadh 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. Tar éis goir, déileáladh leis na cealla le 5 mg / mL MTT ar feadh 4 h ag 37 céim , agus baineadh na meáin go cúramach. Rinneadh na criostail formazan a bhí déanta ag cealla marthanacha a thuaslagadh i 150 rL de DMSO chun dath gorm a ghiniúint [35], agus rinneadh an t-ionsúcht a thomhas ag 570 nm ar léitheoir pláta. Bhain na rialuithe úsáid as an tiúchan céanna meán le DMSO amháin. Normalaíodh inmharthanacht na gceall mar chéatadán rialaithe.
Roghnaíodh na tiúchain PhGs (0.1,1,5, agus 10 Rg/mL) ag brath ar an anailís cíteatocsaineachta ar PhGanna agus an éifeacht cítea-chosanta a thuairiscítear ar echinacoside [32]. De réir na tuarascála, níor léiríodh aon éifeacht cíteatocsaineachta faoi bhun 10 Rg/mL, agus tuairiscíodh go léirigh echinacoside éifeacht cíteachosanta sa mhúnla cille gortaithe HzOz.
4.4. Measúnacht Apoptóis
Braitheadh apoptosis le hIarscríbhinnín V-FITC/PI Kit staining dúbailte (Solarbio). Síolaíodh cealla PC12 i 6-plátaí tobair ag 2 x 105 chill/tobar. Tar éis ceangal a dhéanamh, déileáladh le cealla le PhGs (0.1 agus 10 Rg/mL) ar feadh 24 h agus goradh iad le H2O2 ar feadh 2 h tar éis na PhGanna a bhaint. Tar éis gortha, nite na cealla i PBS fuar, lártheifneoirithe faoi dhó ag 1500 rpm ar feadh 10 nóiméad, agus athchuireadh i 500 rL de maolán ceangailteach. Iarscríbhinn V (5 rL) agus iaidíd próipidiam lipéadaithe FITC.
Giorrúcháin
Fo-aonad glutamate-cysteine ligáis-catalytic GCLC
Fo-aonad modhnóra glutamate-cistéin ligáis-catalytach GCLM
Sárocsaíd hidrigine H2O2
HO-1 heme ocsaiginase 1
Próitéin comhlachais Keap1 Kelch ECH 1
NQO1 NAD(P)H quinone ocsaíd-orductase 1
Nrf2 fachtóir núicléach erythroid 2-fachtóir gaolmhar 2
Salidroside PhG, acteoside, isoacteoside, agus echinacoside
Speiceas ocsaigin imoibríoch ROS
Protoporphyrin since ZnPP
Sliocht Cistanche deserticola: PHG de cistanche
Tagairtí
1. Grian, AY; Chen, YM Strus ocsaídiúcháin agus neamhoird neurodegenerative. J. Biomed. Sci. 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]
2. Maheshwari, A.; Micrimhilseogra, MM; Aggarwal, A. ; Sharma, RK; Nandan, D. Conairí a bhaineann le apoptosis gaiméite testicular de bharr H2O2 in vitro. FEBS J. 2009,276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]
3. Halliwell, B. Speicis ocsaigin imoibríoch agus lárchóras na néaróg. J. Neurochem. 1992, 59,1609-1623. [CrossRef] [PubMed]
4. Richardson, JS; Subbarao, KV; Ang, LC Ar an ról a d'fhéadfadh a bheith ag sárocsaídiú radacach saor in aisce arna spreagadh le hiarann i néar-mheathlú i ngalar Alzheimer. Ann. NY Acad. Sci. 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]
5. Zhang, DD Staidéir mheicniúla ar chonair chomharthaíochta Nrf2-Keap1. Metab Drugaí. Ath. 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]
6. Itoh, K. ; Tong, KI; Yamamoto, M. Meicníocht mhóilíneach a ghníomhaíonn cosán Nrf2-Keap1 maidir le freagairt oiriúnaitheach ar leictreafail a rialáil. Radacach saor in aisce,. Biol. Med. 2004, 36,1208-1213. [CrossRef] [PubMed]
7. Cong, AN; Owuor, E. ; Yu, R.; Hebbar, V. ; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Ionduchtú na n-einsímí seineabiótacha ag an chonair kinase léarscáile agus an eilimint frithocsaídeach nó freagartha leictreafile (ARE/EpRE). Metab Drugaí. Ath. 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]
8. Buendia, I. ; Michalska, P.; Navarro, E.; Cluicheiro, I.; Egea, J. ; Leon, R. Nrf2-TÁ cosán: Sprioc atá ag teacht chun cinn i gcoinne strus ocsaídiúcháin agus néar-athlasadh i ngalar néar-mheathlúcháin. Cógaslann. Ther. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]
9. Scibinski, G.; Hwang, V; Agus, DM; Daub, A. ; Laoi, AK; Ravisankar, A.; Modán, S.; Finucane, MM; Shabby, BA; Maolaíonn Finkbeiner, S. Nrf2 LRRK2- agus néar-mheathghiniúint arna spreagadh ag a-synuclein trí phróitostasis a mhodhnú. Proc. Natl. Acad. Sci. SAM 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]
10. Jimenez, C.; Riguera, R. Gliocóisídí feanylthanoid i bplandaí: Struchtúr agus gníomhaíocht bhitheolaíoch. Nat. Táirg. Ionadaí 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]
11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; Orhan, I.; Abrashev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Gníomhaíochtaí coisctheacha frithocsaídeacha agus cholinesterases de Verbascum xanthophoeniceum Griseb. agus a gliocóisídí feinileatánóideach. Ceimic Bhia. 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]
12. Li, N . ; Wang, J.; Ma, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Éifeachtaí Neuroprotective ofCistanches HerbaTeiripe ar Othair a bhfuil Galar Alzheimer/s Measartha orthu. Comhlánú Evid.-Bunaithe. Malartach. Med. 2015, 2015, 103985. [CrossRef] [PubMed]
13. Liu, YL; sé, WJ; Mo, L.; Shi, MF; Zhu, BB; Pan, S.; Li, XR; Xu, QM; Yang, SL Gníomhaíochtaí frithmhiocróbacha, frith-athlastacha agus tocsaineolaíocht gliocóisídí feinileatánóideach ó Monochasma savaterii Franch. ex Maxim. J. Ethnopharmacol. 2013, 149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]
14. Dong, Q. ; Yao, J.; Fang, JN; Ding, K. Tréithriú struchtúrach agus gníomhaíocht imdhíoneolaíoch dhá pholaisiúicrídí inbhainte uisce fuar asCistanche deserticola YC Ma. Carbaihiodráit. Res. 2007, 342,1343-1349. [CrossRef] [PubMed]
15. Xiong, L. ; Mao, S.; Lu, B. ; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Sheáin, C. ; Zhao, Y. Sliocht Bláthanna Osmanthusfragrans agus Cosnaíonn Acteoside In Aghaidh Aosaithe d-Galactós-spreagtha i Múnla Luiche ICR. J. Med. Bia 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]
16. Jiang, Y. ; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B. ; Cai, Z. ; Zhou, F.; Li, M. ; Lú, T.; Zhao, Y. Próifílí Glycoside Phenylthanoid agus Gníomhaíochtaí Frithocsaídeacha de Osmanthusfragrans Lour. Bláthanna le UPLC/PDA/MS agus Múnla Díleá Insamhladh. J. Agric. Ceimic Bhia. 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]
17. Li, X. ; Sea, X.; Li, X. ; Grian, X. ; Liang, Q. ; Tao, L. ; Kang, X. ; Chen, J. Salidroside cosaint i gcoinne MPP móide-spreagtha apoptosis i gcealla PC12 trí chosc ar an cosán NÍL. Brain Res. 2011, 1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]
18. Zhang, L. ; Ding, W.; Grian, H. ; Zhou, Q.; Huang, J. ; Li, X. ; Xie, Y.; Chen, cosnaíonn J. Salidroside cealla PC12 ó apoptosis móide-spreagtha MPP trí ghníomhachtú an chosáin PI3K/Akt. Ceimic Bhia. Tocsain. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]
19. Sheng, GQ; Zhang, JR; Pu, XP; Ma, J.; Li, CL Éifeacht chosanta verbascoside ar 1-meitil-4- néarthocsaineacht ian-spreagtha i gcealla PC12. Eur. J. Cógaslann. 2002, 451,119-124. [CrossRef]
20. Wang, H. ; Xu, Y.; Yan, J.; Zhao, X.; Grian, X. ; Zhang, Y.; Guo, J.; Cosnaíonn Zhu, C. Acteoside cealla neuroblastoma daonna SH-SY5Y i gcoinne díobhála cille béite-amyloid-spreagtha. Brain Res. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]
21. Mín, D. ; Jin, YZ; Yong, J.; Zheng, BL; Tarrtháil Yao, HW Echinacoside na cealla néaránach SHSY5Y ó apoptosis TNFa-spreagtha. smig. Cógaslann. Tarbh. 2005, 505,11-18.
22. Zhao, Q. ; Gao, JP; Li, WW; Cai, DF Éifeachtaí neurotrophic agus neurorescue Echinacoside i múnla luch subacute MPTP de ghalar Parkinson. Brain Res. 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]
23. Koo, KA; Canadh, SH; Páirc, JH; Kim, SH; Laoi, KY; Kim, YC Gníomhaíochtaí neuroprotective in vitro de gliocóisídí feinileatánóideach ó Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]
24. Liu, YG; Li, X. ; Xiong, C. ; Yu, B. ; Pu, X. ; Ye, XS Díorthaigh glycosíde feinileatánóideach sintéiseach mar oibreáin neuroprotective féideartha. Eur. J. Med. Ceimic. 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]
25. Fu, G. ; Pang, H. ; Wong, YH Gliocóisídí feinileatánóideach a tharlaíonn go nádúrtha: Torthaí féideartha le haghaidh teiripe nua. Curr. Med. Ceimic. 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]
26. Greene, LA; Tischler, AS Bunú líne chlónail noradrenergic de chealla pheochromocytoma adrenal francach a fhreagraíonn d'fhachtóir fáis nerve. Proc. Natl. Acad. Sci. SAM 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]
27. Liang, QN; Sheng, YC; Jiang, P.; Ji, LL; Xia, BB; Min, Y. ; Wang, ZT Difríocht an chórais frithocsaídeach glutathione in ae lucha nua-scoite agus óga agus an bhaint atá aige le hepatotocsaineacht a chothaítear isileánach. Áirse. Tocsain. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]
28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okawa, H.; Ótsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T. ; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Braiteoir Strus Ocsaídeach Keap1 Feidhmeanna mar Oiriúnaí do Cul3-Ligáis Bunaithe E3 Chun Díghrádú próitéamómach Nrf2 a Rialáil. Mol. cill. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]
29. Cornelius, C. ; Crupi, R. ; Calabrese, V; Graziano, A. ; Milone, P. ; Pennisi, G. ; Radac, Z.; Calabrese, EJ; Cuzzocrea, S. Gortú inchinne traumatach: Strus ocsaídiúcháin agus neuroprotection. Frithocsaíd. Comhartha Redox. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]
30. Hou, Z.; Luo, W. ; Grian, X. ; Hao, S.; Zhang, Y.; Xu, F.; Wang, Z.; Liu, B. Cosnaíonn saline atá saibhir i hidrigine i gcoinne damáiste ocsaídiúcháin agus easnaimh chognaíoch tar éis gortú inchinne traumatach éadrom. Brain Res. Tarbh. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]
31. Ansari, MA; Roberts, KN; Scheff, SW Cúrsa ama de strus ocsaídiúcháin de bharr contusion agus próitéiní synaptic i cortex i múnla francach de TBI. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]
32. Kuang, R. ; Sun, Y. ; Yuan, W.; Lei, L. ; Zheng, X. Éifeachtaí cosanta echinacoside, ceann de na gliocóisídí feinileatánóideach, ar chiteatocsaineacht H2O i gcealla PC12. Planta Med. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]
33. Scapagnini, G. ; Vato, S.; Abrahám, NG; Caruso, C. ; Zella, D.; Fabio, G. Modhnú cosán Nrf2/ARE ag polyphenols bia: Straitéis neuroprotective cothaitheach le haghaidh neamhoird chognaíoch agus néar-mheathlúcháin. Mol. Neurobiol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]
34. Kerr, F. ; Sofolaadesakin, O.; Ivanov, DK; Gatliff, J. ; Gomez, PB; Bertrand, HC; Mairtinéis, P.; Callard, R. ; Snoeren, I.; Cochem, HM Direct Keap1-cur isteach ar Nrf2 mar sprioc teiripeach féideartha do ghalar Alzheimer/s. PLoS Géinte. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]
35. Hansen, MB; Nielsen, SE; Berg, K. Athscrúdú agus forbairt bhreise ar mhodh ruaimnithe beacht agus tapa chun fás cille/marú ceall a thomhas. J. Imdhíon. Modhanna 1989, 119, 203-210. [CrossRef]
36. Press, C. Scagadh Fíorúil i bhFionnachtain Drugaí; Crc Press: Boca Raton, FL, SAM, 2005.
37. Muigge, I. ; Máirtín, YC; Hajduk, PJ; Fesik, SW Meastóireacht ar scóráil PMF maidir le ligandí laga a dhuáil go dtí an próitéin ceangailteach FK506. J. Med. Ceimic. 1999, 42, 2498—2503. [CrossRef] [PubMed]
38. Kuntz, ID; Blaney, JM; Oatley, SJ; Langridge, R. ; Ferrin, TE Cur chuige geoiméadrach maidir le hidirghníomhaíochtaí macramóilíní-ligand. J. Mol. Biol. 1982, 161, 269-288. [CrossRef]
39. MD, E. ; Murray, CW; Útóin, TR; Paolini, GV; Mee, RP Feidhmeanna scórála eimpíreacha: I. Feidhm scórála tapa eimpíreach a fhorbairt chun cleamhnas ceangailteach ligands i gcoimpléisc gabhdóirí a mheas. J. Comput.-Aided Mol. Des. 1997, 11,425-445.
© 2018 ag na húdair. Ceadúnaí MDPI, Basel, an Eilvéis. Is alt rochtana oscailte é an t-alt seo a dháiltear faoi théarmaí agus choinníollacha an cheadúnais Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).
