Éifeachtaí reno-chosanta EphrinB2 (EphB2)

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Zhimin Huang, Simeng Liu, Anna Tang, Laith Al-Rabadi, Mark Henkemeyer, Patrice N. Mimche agus Yufeng Huang

Réamhrá

Is sainairíonna é galar duáin ainsealach (CKD) ná athlasadh leanúnach agus méadú de réir a chéile ar fhiobróis lena n-áirítear glomerulosclerosis agus fiobróis tubulointerstitial, as a dtagann deireadh thiar.galar duánach céim deiridh(ESRD)beag beann ar an mbun-neamhord|1]. Léiríonn sé seo conair choiteann deiridh don ESRD. D’fhéadfadh go gcruthófar teiripí níos spriocdhírithe chun dul chun cinn CKD a chosc nó a aisiompú de bharr tuiscint níos fearr ar phríomh-idirghabhálaithe an chosáin choitinn seo.

Cruthaíonn erythropoietin a tháirgeann kinases tyrosine receptor hepatocellular (Eph) agus a gcuid ligands comhfhreagracha receptor-idirghníomhaithe Eph (Ephrin) teaghlach mór de phróitéiní comharthaíochta an-chaomhnaithe membrane-ancaire a rialaíonn idirghníomhaíochtaí éagsúla cille-chealla le linn na forbartha agus sa saol fásta [2]. Ar theagmháil cille-chealla, go háirithe idirghníomhaíochtaí EphB-EphrinB toradh dimers, tetramers, agus braislí próitéine ard-ord, as a dtiocfaidh gníomhachtú cascades comharthaíochta déthreo a iomadaítear isteach sa chill léirithe gabhdóirí (comhartha ar aghaidh) agus an ligand- cill léirithe (comharthaíocht droim ar ais)[3-5]. Ós rud é go gceaptar go bhfuil comharthaíocht déthreoch Eph-Ephrin rannpháirteach i raon leathan idirghníomhaíochtaí cille-chealla, imirce, agus teagmhais greamaitheachta le linn forbairt suthach agus le linn deisiú fíocháin fiseolaíocha 2,6-10], ní haon ionadh é go bhfuil dírialú ann. de na móilíní seo tá baint acu le fiobróis fíocháin. Go deimhin, tá róil le haghaidh comharthaíochta EphB-EphrinB i fibrogenesis fíocháin aimsithe i múnlaí luiche iolracha de soithíoch [11], cairdiach [12], craiceann [13], scamhóg [14], agus fiobróis ae [15,16]. Mar sin féin, ní fios go mór cé na feidhmeanna a d'fhéadfadh a bheith ag na gabhdóirí agus na ligands seo maidir le paiteolaíocht na duáin.

Sna glomeruli duánach fásta, tá EphrinB1 logánta ag scairt scoilte an podocyte i glomeruli[17], cuirtear EphrinB2 in iúl go príomha i gcealla endothelial glomerular (ECs) agus i matán réidh artaireach [18], ach is ar éigean atá EphrinB3 inbhraite19]. Níl léiriú glomerular nó dáileadh gabhdóirí Eph soiléir fós cé gur léirigh cúpla staidéar go gcuireann ceall annamh in iúl EphB4 i glomeruli aibí [18]. I tubules duánach, braitheadh ​​​​EphrinB1 ar fud an nephron ar fad agus d'fhéadfadh tionchar a bheith aige ar cytoarchitecture cealla epithelial feadánacha [19]. Chomh maith le bheith in iúl i gcealla matán réidh artaireach agus ECS, fuarthas EphrinB2 go flúirseach freisin i tubules a nascadh agus duchtanna bailithe cortical agus medullary de na duáin atá ag forbairt agus na duáin fásta [18].EphrinB2 (EphB2) fuarthas amach go raibh an receptor in iúl go flúirseach i tubules an medulla laistigh agus lasmuigh, lena n-áirítear na feadáin dhíreacha distal agus géag tanaí lúb Henle áit a bhfuil sé comhchruinnithe ar thaobh basal na gcealla. Tá léiriú EphB4 teoranta do na ribeadáin sa medulla. Cuirtear EphB6 in iúl go fabhrach i gcorpascail agus tubules duánach an choirtéis agus an mheidula sheachtraigh, lena n-áirítear na feadáin chóngaracha agus distal. Mar sin féin, níl gníomhaíocht chatalaíoch ag EphB6 féin agus ní dócha go n-oibreoidh sé mar ghabhdóir neamhspleách ach comharthaí mar chuid de choimpléasc comharthaíochta heitrea-oligomeric le gabhdóirí EphB eile in vivo [20].

Tuairiscíodh roimhe seo go raibh comharthaí droim ar ais EphrinB2 cosanta i gcoinne neamhchoitiantacht ribeach agus fiobróis tar éis gortú duánach de bharr bac aontaobhach ureteral (UUO) nó gortú ischemia-reperfusion (IR) ós rud é go raibh comhartha níos déine ag lucha a bhí in easnamh ar EphrinB2-spleách ar PDZ. gortú soithíoch agus fiobróis fheabhsaithe tar éis gortú duáin [21]. Mar sin féin, is féidir freisin go bhfeidhmíonn an próitéin PDZ-marbh EphrinB2 mar ligand níos láidre chun comharthaíocht ar aghaidh EphB a spreagadh, agus d'fhéadfadh gurb é seo an chúis leis an bhfiobróis duánach iomarcach a breathnaíodh sa staidéar thuas. Thairis sin, níor chinn an staidéar thuas cé acu gabhdóir EphB, más ann dó, a ghlacann páirt i bpaiteolaíocht na nduán tar éis gortú. Mar gheall ar an ról tábhachtach brabúsach atá ag EphB2 (EphB2)comharthaíocht a breathnaíodh le déanaí i bhfiobróis ae[15,16] agus an slonn is flúirseach ar EphB2 (EphB2)i gcealla feadánacha duánach[19], déanaimid hipitéis a thabhairt don EphB2 (EphB2)is dócha go bhfuil baint aige leduánachfiobróis. Sa staidéar seo, rinneamar imscrúdú ar cé acu ardaithe EphB2 (EphB2)Tá sé faoi deara freisin i galair duáin éagsúla agus cibé an léiriú agus comharthaíocht EphB2 (EphB2)baint acu le forbairt naduánachag bus EphB2 (EphB2)knockout(KO) agus lucha rialaithe bruscair le fáil aontaobhachduánachGortú IR. Thaispeáin muid go EphB2 (EphB2)déantar cumas cainte agus comharthaíochta a uasghrádú go suntasach tar éis gortú IR i múnla luiche agus sna duáin ó mhúnlaí turgnamhacha hipirtheannas agus diaibéitis luiche CKD agus othair atá ag fulaingt ó CKD. Thairis sin, caillteanas géiniteach EphB2 (EphB2)i lucha KO thug cosaint láidir do na duáin ó ghortú IRduánachdamáiste, mífheidhmiú, agus fiobróis, rud a shainaithníonn ról ríthábhachtach don ghabhdóir seo in idirghabháil a dhéanamh ar na teagmhais cheallacha díobhálacha a mbíonn tionchar acu ar an duán le linn dul chun cinn an ghalair.

sochair cistanche fireannle haghaidhduán

Torthaí

EphB2 (EphB2)a uas-rialaítear agus a ghníomhachtú sa duán tar éis gortú

Rinne RT-PCR (Figiúr Forlíontach S1A) measúnú ar thrascríbhinní do gach móilín EphB agus Ephrin-B sa ghnáthdhuán luiche aosach, rud a léirigh gurbh iad EphB2 na táirgí aimpliúcháin is suntasaí. (EphB2), EphB4, EphrinB1, agus EphrinB2. Tá sé léirithe go gcuirtear EphB4 in iúl go príomha ar ECanna soithíoch agus go bhfuil gá leo le haghaidh sláine struchtúrach na soithigh fola, agus ní aimsítear é i gcealla móra duáin a bhfuil baint acu le fiobróis [21,26]. Ina theannta sin, léirigh ár gcuid sonraí go léiríonn cealla epithelial feadánacha duáin agus fibroblasts tubular an EphB2 (EphB2)gabhdóir agus EphrinB1 agus EphrinB2ligands gaolmhar (féach Fíor Forlíontach S1B). Rinneamar imscrúdú ansin ar athruithe féideartha sa chaint tar éis gortú IR agus fuaireamar amach go raibh EphB2 (EphB2)Rinneadh leibhéil mRNA agus próitéin a uasghrádú go suntasach sa duán WT IR-ghortaithe i gcomparáid leis an duán rialaithe neamhghortaithe (CTL) (Fíor 1A-C). Ag teacht leis seo, imdhíon-blots ag baint úsáide as antashubstaint fosfa-shonrach do EphB1/EphB2 (EphB2)a sholáthraíonn léamh amach le haghaidh gabhdóir gníomhach catalaíoch tyrosine kinase (p-EphB1/2) braitheadh ​​méadú suntasach ar an duán luiche WT gortaithe ag IR (Fíor 1B, D).IF anailís ar chodanna fíocháin ag baint úsáide as frith-EphB2 (EphB2)dheimhnigh antasubstaintí méadú ar léiriú próitéine gabhdóra sa leanbh WT-gortaithe IR, go háirithe sna cealla epithelial feadánacha agus cealla tubulointerstitial (Fíor 1E). Rud atá tábhachtach, níl aon EphB2 (EphB2)braitheadh ​​​​comharthaí in imdhíonoblots nó IF sna duáin ó EphB2 (EphB2)Lucha KO(EphB2-/)a thaispeánann sainiúlacht na n-imoibrithe antashubstainte. Ar deireadh, braitheadh ​​​​méadú suntasach ar léiriú próitéin EphrinB2 freisin i duáin gortaithe IR ó lucha WT, cé go suimiúil níor aimsíodh an méadú seo i duáin gortaithe ó EphB2 (EphB2)lucha KO (Fíor 1B, F).

Fíor 1.EphB2 (EphB2)méaduithe léiriú i duáin na lucha tar éis gortú IR ar feadh 2 sheachtain

(A) Rinneadh anailís ar leibhéil mRNA receptor EphB2, EphrinB1, EphrinB2 i duáin lucha ag baint úsáide as RT-PCR fíor-ama. Taispeántar na torthaí mar athrú fillte i gcomparáid leis na duáin chontrathaobhacha (CTL). Léiríonn barraí earráide meán ± SD, n=5 ainmhí.

(B) Bloic an iarthair de lucha EphB2, fosfar-EphB2 (pEphB21594), EphrinB2, agus GAPDH ó na duáin de lucha EphB2 móide / móide (WT agus EphB2-/(KO). Bhí an meáchan móilíneach lipéadaithe ar dheis.

Déanann na graif achoimre ar thorthaí tomhais dlús banda do EphB2(C), p-EphB2(D), agus EphrinB2 (F).*P<0.05 vs.ephb2+/+="">

(E) Bhí codanna duáin reoite ó EphB2 móide / móide agus lucha EphB2-/- tar éis gortú IR dhaite le EphB2 (dearg) agus DAPI/DNA (gorm). Formhéadú, ×200.Níor aimsítear EphB2 i mblotaí imdhíon nó MÁ sileadh sna duáin ó lucha EphB2 KO.

luibh cistánachis féidir a chóireáilduángalarfeabhasfeidhm duánach

Chun a fháil amach an slonn uas-rialaithe EphB2 (EphB2)agus d'fhéadfaí géinte EphrinB a fheiceáil freisin i múnlaí ainmhithe eile de ghalair duáin, chuireamar duáin faoi lucha diaibéitis db / db cineál 2 [27] agus aicéatáit deoxycorticosterone (DOCA) salann agus lucha hipirtheannas insileadh angiotensin (Ang) II [22] go Anailís RT-PCR. Léiríonn na sonraí go bhfuil EphB2 (EphB2), EphrinB1, agus tras-scríbhinní EphrinB2 go léir méadaithe go suntasach sna duáin sa dá mhúnla (Figiúr Forlíontach S2). Rinneamar staining IF do EphB2 ansin (EphB2)i bithóipsí duánach in othair CKD le diagnóis nephropathy lgA (IgAN) le glomerulosclerosis, atrophy feadánacha, agus fiobróis interstitial arna chinneadh ag staining PAS (Fíor 2A). I gcomparáid le gnáth-ábhair, tá patrún buailte de EphB2 ardaithe (EphB2)braitheadh ​​​​próitéin agus comharthaíocht chun tosaigh (staining le antasubstaintí p-EphB1/2) ní hamháin sa glomeruli ghalraithe ach freisin sa limistéar feadánacha a bhaineann le galair sna duáin ó na hothair IgAN seo, (Fíor 2B, C). Nochtadh staining imdhíon-cheimice ag baint úsáide as an antashubstaint frith-p-EphB2 céanna agus a úsáidtear le haghaidh staining IF go raibh staining láidir p-EphB2 le feiceáil go príomha i gcealla feadánacha agus cuid acu i gcealla tubulointerstitial sna hothair IgAN seo (Fíor 2D). I gcodarsnacht leis sin, níor dhaite ach cúpla cealla feadánacha go lag le haghaidh p-EphB2 sa ghnáth-duáin (Fíor 2D). Na leibhéil dlús comhtháite leathchainníochtaithe do EphB2 (EphB2)nó p-EphB2 staining sa limistéar tubulointerstitial duánach arna chinneadh ag ImageJ ar dheis faoi seach. Tugann na sonraí seo le fios go bhfuil léiriú uas-rialaithe EphB2 agus gníomhachtú féideartha na comharthaíochta ar aghaidh mar ghné shuntasach deduánachfiobróis.

Fíor 2. EphB2 (EphB2)méaduithe léiriú i bhfíochán bithóipse duáin daonnale CKD i gcomparáid le gnáthábhair Codanna bithóipse duán ó ghnáthchuid na duáin (NC, n=3) agus na hothair lgAN (cineál paiteolaíochta Oxford T=1 [38]) (n=7) ó Ollscoil Leighis Nanjing a dhaite le PAS (A), EphB2 (dearg)(B), agus fosfar-EphB2 (p-EphB2) (dearg) (C). D'fheidhmigh an formhéadú, × 200.DNA (gorm) daite DAPI mar núicléas rialú staining do staining IF (IFS staining rinneadh mar a thuairiscítear le haghaidh fíochán luiche). Cheadaigh an bord athbhreithnithe eiticiúil áitiúil úsáid an ábhair dhaonna. Méadú ×200. Léirigh na saigheada fiobróis sa limistéar glomerulus agus tubulointerstitial. (D) staining imdhíoncheimiceach do p-EphB2 (dhaite i donn) (ag baint úsáide as an antashubstaint frith-pEphB2 céanna mar an príomh-antasubstaint mar a úsáidtear do staining IF agus an peroxidase-chomhchuingeach frith-coinín lgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.) mar an tánaisteach forbraíodh antashubstaint agus staining dhearfach trí úsáid a bhaint as 3,3'-diaminobenzidine) a thuilleadh ar 3- ranna μm de na fíocháin bithóipse duán seo atá leabaithe le pairifín agus rinneadh é a dhaiteadh le Hematoxylin. Mar rialú diúltach, cuireadh lgG réamh-imdhíonachta in ionad an antashubstaint phríomhúil agus níor tugadh faoi deara aon staining ar leith. Méadú ×400. Taispeánadh an dlús picteilín coibhneasta coibhneasta de smálú an EphB2 nó p-EphB2 go háirithe sa limistéar tubulointerstitial duánach, arna chainníochtú ag ImageJ, ar dheis gach grianghraf staining.*P<0.05 vs.="" normal="" kidney="">

Fíor 3.EphB2 (EphB2)-Taispeánann lucha KO feidhm dhuánach feabhsaithe agus atrophy agus gortú tubular laghdaithe agus fiobróis tubulointerstitial tar éis gortú IR (AC) Séiream BUN (A), leibhéil Cr (B), agus meáchan duáin (C) (n=5/grúpa).*P<0.05 vs.ephb2+/+="" mice.="" (d,="" e)representative="" microscopic="" images="" showing="" pas="" staining="" (d)="" and="" masson's="" trichrome="" staining="" (e)="" of="" the="" kidney="" sections="" were="" used="" to="" detect="" tubular="" injury,="" inflammation,="" and="" collagen="" deposition="" (stained="" blue).="" magnification,×200.(f,="" g).="" the="" graphs="" summarized="" the="" results="" of="" tubular="" injury="" (f="" and="" collagen="" deposition="" (g)="" quantified="" by="" imagej.(h,="" d)="" mrna="" expression="" of="" tubular="" injury="" markers,="" ngal(h)="" and="" kim-1="" ()="" in="" the="" kidney="" following="" ir=""><0.05 vs.ephb2+/="" contralateral="" kidney=""><0.05 vs.ephb2+/+="" ir-injured="">

EphB2 (EphB2)Cosnaíonn KO an duán ó ghortú IR-spreagtha agus fiobróis

Sa tsamhail IR de ghortú duán agus fiobróis, rinne prótacal 35-min ischemia i lucha WT damáiste duán aontaobhach tromchúiseach ainsealach tipiciúil tar éis 2 sheachtain, lena n-áirítear feidhm lagaithe duán mar is léir ó leibhéil serum BUN agus Cr méadaithe (Fíor 3A, B)(cé nach léiríonn na leibhéil serum BUN nó Cr a thomhaistear anseo ach go páirteach feidhm lagaithe na duán IR-ghortaithe, leibhéil serum BUN agus Cr i lucha WT le haontaobhachdíobháil IR duánachméadaithe go suntasach i gcomparáid le gnáth-lucha WT gan aon ghortú (BUNvs. Gnáth: 26.81 ± 4.25 vs.17.3±0.37 mg/dl; Cr:0.3{{1{{12} }}}1±0.029 vs.0.158±0.064 mg/dl)) agus atrophy duánach mar is léir ón innéacs laghdaithe meáchain duánach (cóimheas meáchain duánach IR-ghortaithe thar smacht, meáchan duáin neamhghortaithe)(Fíor 3C ). Go hineolaíoch, léirigh an duán IR-ghortaithe i lucha WT insíothlú cille mononuclear tubulointerstitial tipiciúil agus sil-leagan collagen carntha mar a chinntear ag staining PAS agus staining Trichrome Masson (Fíor 3D-G). Léirigh na lucha IR-ghortaithe EphB2-/- laghdú láidir ar leibhéil BUN agus Cr i gcomparáid le lucha gortaithe WT, agus i bhfad níos lú atrophy duán, gortú feadánacha, agus fiobróis tubulointerstitial. Rinneadh measúnú freisin ar thrascríbhinní duánach do lipocalin a bhaineann le neutrophil gelatinase (NGAL) agus móilín gortú duánach-1(KIM-1) mRNA ós rud é go bhfuil an dá cheann bailíochtaithe mar luathmharcóirí réamh-mheastacháin ar ghortú tubular duánach. Thug na sonraí le fios, cé gur tháinig NGAL agus KIM-1 in iúl go han-ard sa duán IR-ghortaithe ó lucha WT, laghdaíodh a léiriú go suntasach faoi 77.2 agus 88.5 faoin gcéad, faoi seach, sna duáin gortaithe ó EphB{{33} }/ lucha mutant (Fíor 3H-I). Léiríonn sé seo gur laghdaíodh damáiste feadánacha tar éis gortú IR go mór i lucha nach raibh an EphB2 in iúl dóibh (EphB2)gabhdóir.

Fíor 4.EphB2 (EphB2)-Laghdaigh lucha KO staining feadánacha -SMA agus leibhéil próitéin duánach de mharcóirí snáithíneacha tar éis gortú IR

(A) Rinneadh codanna duáin reoite ó EphB2 móide / móide t agus EphB2-/- lucha tar éis gortú IR a dhathú le -SMA (dearg) agus DAPI/DNA (gorm) agus rinneadh anailís orthu ag baint úsáide as micreascópacht chomhfhócasach. Formhéadú, × 200.

(B) Rinne na graif achoimre ar thorthaí -SMA de thaisce arna chainníochtú ag ImageJ.*P<0.05 vs.ephb2+/t="" contralateral="" kidney="">

(C) Bloic thiar de lucha FN, -SMA, N-cadherin, agus GAPDH ó CTL agus IR-ghortaithe de lucha EphB2 móide / plus agus EphB2-/7-. Lipéadaíodh meáchan móilíneach ar dheis.n=5 ainmhithe/grúpa.

(DF) Rinne na graif achoimre ar thorthaí tomhais dlús banda do FN (D), -SMA (E), agus N-cadherin (F).*P<0.05 vs.="" ephb2+/+=""><0.05 vs.="" ephb2+/+="" ir-injured="">

sochair cistanche desertarduán

-Méadaíonn SMA de ghnáth le linn difreáil na gcealla feadánacha isteach i fibroblasts nó gníomhachtú fibroblasts go myofibroblasts nó athmhúnlú soithíoch. Ag baint úsáide as anailís IF ar na hailt duáin, bhraitheamar méadú suntasach ar -SMA staining sna cealla feadánacha i duáin IR-ghortaithe ó lucha WT, freagra a aisghaireadh go mór in EphB2 (EphB2)-/- lucha (Fíor 4A, B). Tugadh tacaíocht bhreise don bhreathnóireacht seo ag anailísí imdhíon-bhloit a thaispeánann laghdú suntasach ar na leibhéil ardaithe próitéine de -SMA chomh maith le feinitíopa mesenchymal/fibrotic arb iad is sainairíonna é N-cadherin a chur in iúl, agus FN i nduáin IR-ghortaithe ó EphB2. (EphB2)-/- lucha i gcomparáid leis na rialuithe WT (Fíor 4C-F). Léirigh anailís bhreise gur laghdaíodh leibhéil mRNA méadaithe de na marcóirí fibrotic lena n-áirítear cineál collaigine Iol (Col-Io1), Col-II 1, Col-IVcl, agus FN sa duán IR-ghortaithe go suntasach san EphB2. (EphB2)-/- sócháin (Fíor 5). Léiríonn na sonraí seo go bhfuil EphB2 (EphB2)Cosnaíonn KO na duáin ó EMT tubular IR-spreagtha agus fiobróis.

Fíor 5. Cainníochtúil RT-PCR le haghaidh anailíse léiriú géine ar na marcóirí próibrotach agus athlastacha

Ullmhaíodh RNA iomlán ó duáin contralateral (CTL) nó IR-ghortaithe deEphB2móide móide agusEphB2-/- Is ionann lucha.Sonraí agus meán± SD, n=5 ainmhithe in aghaidh an ghrúpa.*P<0.05>EphB2móide / móide CTL, #P<0.05>EphB2móide/móide duáin IR-ghortaithe.

EphB2 (EphB2)Maolaíonn KO freagairtí láidre athlastacha duánach, strus ocsaídiúcháin, agus iomadú tar éis gortú IR

Mar phríomh-mhodhnóirí fiobróis fíocháin, tá ról tábhachtach ag TGF 1, inhibitor plasminogen-activator type 1(PAI-1), receptor fachtóir fáis díorthaithe pláitíní- (PDGFR ), agus coscaire fíocháin metalloproteinase (TIMP1) iduánachfiobróis. De réir mar a bhíothas ag súil leis, méadaíodh leibhéil mRNA duánach TGF 1, PAI-1, PDGFR- , agus TIMP1 i nduáin WT a gortaíodh go suntasach i nduáin WT, i gcomparáid lena n-duáin inmheánacha neamhghortaithe CTL (Fíor 5). Mar sin féin, bhí léiriú mRNA de na modhnóirí próibrotach seo maolaithe go mór i nduáin IR-ghortaithe i lucha EphB. Tá na torthaí seo comhsheasmhach le laghdú naduánachfiobróischonaiceamar i lucha EphB tar éis gortú IR.

Chun éifeacht EphB2 a fhíorú tuilleadh (EphB2)KO ar bhealaí comharthaíochta iartheachtach ceallacha gaolmhara, thugamar faoi deara go raibh tras-scríbhinní RNA duánach le haghaidh NF-kB-p65, próitéin chemoattractant monocyte-1(MCP-1), interleukin (IL)-1B, agus Méadaíodh Nox2 ar fad i nduáin IR-ghortaithe de lucha WT (Fíor 5). Ina theannta sin, bhí táirgeadh próitéin duánach NF-KB-p65, Nox2, agus a cofactor, p47Phox i bhfad níos mó i duáin IR-ghortaithe de lucha WT i gcomparáid le CTLkidneys, rud a léiríonn gníomhachtú cosán athlastach NF-kB-idirghabhála agus Nox2 sa IR- duáin gortaithe. Mar sin féin, rinneadh leibhéil na n-idirghabhálaithe seo a fheabhsú nó a aisiompú gar do na gnáthleibhéil i lucha KO nach raibh EphB2 iontu (EphB2)slonn (Fíor 6A-D). Méadaíodh fosfarylation agus comharthaíocht serine / threonine kinase (Akt) agus cosáin MAPK / ERK i duáin IR-ghortaithe de lucha WT, a laghdaíodh go suntasach, ag druidim le gnáthleibhéil, in EphB2-/- lucha (Fíor 6A, E, F). Léirigh an t-antasubstaint F4/80, ar a dtugtar macrophages lipéadaithe, méadú suntasach ar an líon iomlán cealla F4/80 móide sa limistéar tubulointerstitial i duáin IR-ghortaithe de lucha WT, agus bhí cealla F4/80 móide gann i soithí duánach i. CTL duáin, rud a léiríonn carnadh macrophages agus athlasadh i duáin damáiste. Mar sin féin, laghdaíodh líon na gceall F4/80 móide go mór i lucha EphB, ag druidim le gnáthleibhéil a breathnaíodh i nduáin neamhghortaithe (Fíor 7A, B). Ina theannta sin, rinneamar tástáil le haghaidh Ki-67, próitéin núicléach a fheidhmíonn mar mharcáil cheallacha iomadú. Ag teacht le gníomhachtú Akt agus ERK1/2 sna duáin IR-ghortaithe de lucha WT, MÁ aimsíodh méadú suntasach ar líon cille dearfach Ki sa limistéar tubulointerstitial le staining. I gcodarsnacht leis sin, léirigh lucha EphB2-7-líon i bhfad níos ísle agus níos lú déine staining Ki-67 i nduáin IR-ghortaithe a bhí níos cosúla leis an ngnáth-duáin neamhghortaithe (Fíor 7C, D). Léiríonn na sonraí seo gur scriosadh EphB2 (EphB2)cuireann sé bac ar athlasadh NF-kB-idirghabhála, giniúint agus gníomhachtú oxidase oxidase-idirghabhála NADPH, agus iomadú cille idirghabháil Akt- agus ERK1 /2- sa duán IR-ghortaithe i lucha. Mar sin, EphB2 (EphB2)d'fhéadfadh a bheith ag teastáil le haghaidh an tsubstaintiúilduánachathlastachagus freagraí iomadaithe a chuireann le fiobróis.

Fíor 6. Leibhéil próitéine duánach de athlastach, strus ocsaídiúcháin, agus marcóirí proliferative

(A) Blots an iarthair de NF-kBp65, Nox2, p47phox, p-Akt, pERK1/2, t-ERK1/2, agus GAPDH ó dhuáin chodarsnacha (CTL) agus IR-ghortaithe deEphB2 (EphB2)/ agusEphB2-/- lucha. Bhí meáchan móilíneach lipéadaithe ar dheis. n=5 ainmhí/grúpa.

(BF) Rinne na graif achoimre ar thorthaí tomhais dlús banda do NF-kB-p65 (B), Nox2 (C), p47Phox(D), p-Akt (E), pERK1/2/t-ERK1/2 (F ), faoi seach. *P<0.05 vs.="">EphB2móide / móide CTL.#P<0.05 vs.="">EphB2*/ móide duáin IR-ghortaithe.

Laghdú apoptosis i duáin EphB2 (EphB2)-/- lucha tar éis gortú IR

Is sainairíonna iad na duáin atá faoi ghortú IR freisin ag apoptosis fairsing cille epithelial tubular duánach. Léirigh staining TUNEL ardú suntasach in apoptosis i gcodanna duán IR-ghortaithe de lucha WT, i gcomparáid leis na duáin CTL (Fíor 8A, B), a laghdaíodh go mór i lucha EphB2-7. Tacaíonn na torthaí seo le ról EphB2 (EphB2)KO maidir le apoptosis agus meicníochtaí deisiúcháin a shochtadh ar ghortú duánach. Éifeacht bhreise den sórt sin ag EphB2 (EphB2)Féadfaidh sé freisin an fiobróis theoranta a tharlaíonn i lucha EphB a mhíniú tar éis gortú ainsealach IR-spreagtha.

costanche ar na duáin

EphB2 (EphB2)cosán próifíle a bhaineann le comharthaíocht

I measc na 760 géinte a tástáladh ag léiriú géine NanoString (léirithe i bhFíor 9A, léarscáil teasa léiriú géine), bhí fianaise ar léiriú géine difreálach (P coigeartaithe).<0.05)in the="" ir-injured="" kidney="" of="" wt="" mice="" relative="" to="" the="" wt="" ctl="" kidney="" (wt-ir="" vs.="" wt-ctl)="" for="" 506="" genes(356genes="" were="" up-regulated="" and="" 150="" genes="" were="" down-regulated)with="" an="" estimated="" false="" discovery="" rate="" of="" 5%.="" the="" up-regulated="" 356="" genes="" include="" all="" molecules="" that="" we="" have="" observed="" in="" their="" rna="" expression="" or="" protein="" production="" using="" real-time="" rt-pcr="" or="" western="" blot="" assay="" described="" above="" and="" these="" genes="" encode="" for="" fibrotic="" markers="" such="" as="" col-iol,="" col-iiol,="" col-ivαl,="" and="" fn;="" emt="" markers="" such="" as="" α-sma="" and="" vimentin;="" inflammatory="" factors="" and="" oxidative="" enzymes="" such="" as="" nf-kb,="" mcp-1,="" il-1β,="" and="" nox2;="" growth="" factors="" and="" proliferation="" markers="" such="" as="" tgfβ1,="" pai-1,="" pgdfrβ1,="" timp-1,="" mek="" kinase,="" akt-1="" and="" ki-67,="" and="" caspase-3,="" -4,="" and-12="" that="" regulate="" inflammation="" and="" apoptosis.="" however,="" all="" those="" increased="" markers="" that="" were="" significantly="" attenuated="" in="" the="" ir-injured="" kidney="" of=""> (EphB2)Deimhníonn measúnacht slonn géine NanoString lucha KO i gcomparáid le lucha WT (KO-IR vs. WT-IR) arna gcinneadh ag RT-PCR fíor-ama nó measúnacht blot an Iarthair a gcuirtear síos orthu thuas. Áirítear leis na géinte síos-rialaithe superoxide dismutase 1(SOD1)[28], heme oxygenase 1(Hmox1)[29], agus thioredoxin 1,2(Txn1,2)[30] ar dealraitheach go bhfuil siad sa teaghlach frithocsaídeach. Tá baint ag laghdú ar na géinte seo leis an strus ocsaídiúcháin feabhsaithe a breathnaíodh sa duán WT gortaithe IR. Mar sin féin, níor tharla an laghdú sin ar SOD1 agus Txn1, 2 san EphB2 IR-ghortaithe (EphB2)KO duáin. De réir dealraimh, thángthas ag an am céanna ar mheasúnú géine NanoString géinte iarrthóra iolracha a bhfuil baint acu le IR-spreagthaduánachgortúagus fiobróis. Go háirithe, laghdaíodh 230 de 356 géin uas-rialaithe (64.6 faoin gcéad san iomlán , le P coigeartaithe<0.05)and 129="" of="" 150="" down-regulated="" genes="" were="" reversed="" to="" varying="" degrees（total="" 86%个,="" with="" adjusted=""><0.05）in the="" ir-injured="" kidney="" of="" ephb2-/-mice="" compared="" with="" wt="" mice(ko-ir="" vs.="" wt-ir).="" all="" those="" ameliorated="" molecules="" are="" involved="" in="" 50="" ameliorated="" annotated="" pathways="" (shown="" in="" figure="" 9b,="" a="" heatmap="" of="" pathway="" scores).="" among="" those,="" the="" common="" profibrotic="" pathways,="" shown="" in="" figure="" 9c,="" that="" will="" contribute="" to="" the="" development="" of="">duánachfiobróis, mar an EMT agus na cosáin athlastacha agus iomadúla, gníomhachtaithe nó uasrialaithe go suntasach sa duán IR-ghortaithe, ach feabhsaithe go suntasach san EphB2 a ghortaítear le IR (EphB2)KO duáin. Is ionadh é, léirigh an anailís seo freisin go bhfuil meitibileacht fuinnimh cille tubular duánach cosúil le de novo lipogenesis, gluconeogenesis, meitibileacht colaistéaróil, comharthaíocht an ghabhdóra iomadúcháin peroxisome-gníomhaithe (PPAR), agus go háirithe meitibileacht aigéid shailligh chomh maith le léiriú mRNA laghdaithe frithocsaídeoirí (mar a liostaithe mar chonair struis ocsaídiúcháin sa léarscáil teasa, Fíor 9B), scriosta den chuid is mó sa duán IR-ghortaithe, go mór leanúnach san EphB2 gortaithe ag IR (EphB2)Duán KO (mar a thaispeántar i bhFíor 9D). Tugann na torthaí seo le fios freisin go bhfuil formhór na móilíní a bhfuil baint acu leduánachgortúagus tá fiobróis á rialú ag an EphB2 nó bainteach leis (EphB2)comharthaíochta. Go háirithe, an EphB2 (EphB2)d'fhéadfadh baint a bheith ag comharthaíocht le nó idirghabháil a dhéanamh ar mheitibileacht fuinnimh miteachondrial de chill tubular duánach amhail ocsaídiú aigéid shailligh miteachondrial agus lipotocsaineacht i ngalar duáin.

Fíor 7.EphB2 (EphB2)Laghdaíonn KO insíothlú macrophage agus iomadú cille feadánacha sa duán tar éis gortú IR Rinneadh codanna duán ó lucha EphB2 móide / móide agus EphB2-7(n=5/each) tar éis gortú IR a dhathú le F4/80 (dearg)(A), Ki-67 (dearg) (C), agus DAPI/DNA (gorm) agus anailís déanta orthu ag baint úsáide as micreascópacht chomhfhócasach. Formhéadú,×200. Thug na graif achoimre ar thorthaí F4/80 móide (B) agus Ki-67 móide cealla (D) arna chainníochtú ag ImageJ.*P<0.05 vs.ephb2+/+="" contralateral="" kidney=""><0.05 vs.ephb2+/+="" ir-injured="">

Fíor 8.EphB2 (EphB2)Laghdaíonn KO apoptosis cille tubular sa duán tar éis gortú ischemia-reperfusion (IR). (A)Radhadh codanna duán ó EphB2 móide / móide agus EphB2-7- lucha ((n=5/each) tar éis gortú IR le TUNEL(green), agus DAPI/DNA(gorm) agus rinneadh anailís orthu ag baint úsáide as micreascópacht chomhfhócasach Formhéadú, × 200. (B) Rinne na graif achoimre ar thorthaí TUNEL móide cealla arna gcainníochtú ag ImageJ.*P<0.05 vs.ephb2++="" contralateral="" kidney=""><0.05 vs.="" ephb2+="" ir-injured="">

Cliceáil anseo LE CUID Ⅰ Ⅱ