Cuid 3: Cumasaíonn Samhail Uathúil Luiche Cleachtadh Luathsaoil Cuimhne Hippocampal agus Plaisteacht Shionaptach

le haghaidh tuilleadh eolais:ali.ma@wecistanche.com

Pls cliceáil anseo chun Cuid 2

Abhair agus modhanna

Ainmhithe. Ba iad lucha de chineál fiáin an sliocht de dhambaí C57Bl6J, a fuarthas ar dtús ó Jackson Laboratories agus a phóraítear a thuilleadh inár n-áiseanna ainmhithe. Bhí rochtain saor in aisce ag lucha ar bhia agus ar uisce agus coinníodh soilse ar thimthriall 12 uair an chloig éadrom/dorcha. Nuair a scoiteadh iad ar lá iarbhreithe (P) 21, coinníodh lucha i gcliabháin leapa caighdeánacha nó i gcliabháin a raibh roth reatha feistithe orthu. Baineadh úsáid as lucha fireanna agus baineanna le haghaidh gach turgnaimh aclaíochta agus iompair. Níor úsáideadh ach lucha fireanna le haghaidh staidéir leictreifiseolaíocha. Rinneadh gach tástáil iompraíochta le linn an timthriall solais. Rinneadh turgnaimh de réir threoirlínte Institiúidí Náisiúnta Sláinte na SA maidir le cúram agus úsáid ainmhithe agus d'fhormheas Coiste Institiúideach um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Ollscoil California, Irvine, iad.

Cliceáil chunÉifeachtaí cistanche chun cuimhne a fheabhsú

Paradigm roth ag rith. Nuair a scoiteadh iad ar P21, cuireadh lucha i bpéirí i gceachtar de na gnáthchásanna gan roth nó bhí roth reatha soghluaiste nó seasta de chruach dhosmálta feistithe orthu (trastomhas 4.5 cm, 112 gram, Starr Life Sciences). Bhí rochtain saor in aisce ag ainmhithe a raibh rothaí reatha orthu ar feadh tréimhsí réamhshocraithe: seachtain amháin le linn na tréimhse ógánach (P21–27; juv ELE), seachtain amháin le linn na hógántachta (P35–41; Adol ELE), nó trí sheachtain rochtana as a chéile (P21– 41; juv-adol ELE). Coinníodh grúpa lucha breise le roth seasta le linn P21–41 (sta) chun saibhriú comhshaoil ​​a rialú ó láithreacht rotha sa chliabhán. Feistíodh mogalra éadrom polúireatán ar gach roth chun géaga beaga na lucha scoite a chosc ó sleamhnú trí reanna na rothaí. Rinneadh an ghníomhaíocht reatha a rianú trí bhraiteoirí a ndearnadh monatóireacht dhigiteach orthu a bhí ceangailte le port sonraí agus ríomhaire le haghaidh sonraí a fháil i bhfíor-am (Vital View Sofware) trí bhrath maighnéadach na réabhlóidí rotha. Rinne gach roth a ndearnadh monatóireacht dhigiteach air a rianú fad reatha an chliabháin (dhá lucha in aghaidh an chliabháin, agus mar sin is ionann an fad a taistealaíodh in aghaidh an chliabháin agus an fad iomlán idir dhá lucha). Rinneadh réabhlóidí a chainníochtú de réir an nóiméid in aghaidh an lae ar feadh a ré agus aistríodh iad go fad a ritheadh ​​in aghaidh an chliabháin (km).

Suíomh réadcuimhne(OLM) prótacal. Suíomh an réadcuimhnerinneadh an prótacal a úsáideadh sa staidéar seo a oiriúnú agus a mhodhnú ó phrótacail roimhe seo44. Ar lá iarbhreithe 36, tugadh lucha isteach i seomra tástála le gile seomra laghdaithe. Láimhseáladh lucha ar feadh thart ar 2 nóiméad an ceann, ar feadh 5 lá as a chéile san iomlán roimh sheisiún oiliúna OLM (dhá uair sa lá don chéad 2 lá agus uair amháin sa lá ar feadh na 3 lá ina dhiaidh sin). Ba iad na seisiúin ghnáthóige 5 nóiméad, dhá uair sa lá ar feadh 3 lá (P38-P40) agus tharla siad laistigh de sheomraí ina raibh ceithre leideanna spásúlachta uathúla ar gach balla den seomra (línte cothrománacha, dubh X, stiall ingearach, agus balla bán) . Forluí an nós imeachta leis an 2 lá dheireanacha láimhseála. Le linn na céime traenála (P41), cuireadh lucha isteach sna seomraí céanna le dhá rud chomhionanna agus nochtar iad do thréimhse oiliúna fo-thairseach (3 min) nó tairseach (10 nóiméad); dearadh staidéir bunaithe ar réamhobair a thaispeánann nach leor 3 nóiméad oiliúna go hiondúil don fhadtéarmacuimhnefoirmiú45. Maidir le lucha i gcliabháin aclaíochta, cuireadh rothaí reatha faoi ghlas díreach tar éis oiliúint OLM chun aon éifeachtaí géara aclaíochta arcuimhnecomhdhlúthú. Ar lá na tástála (P42; 24 uair tar éis na hoiliúna), aistríodh ceann de na réada go dtí suíomh úrnua taobh istigh den seomra, agus ligeadh do lucha na réada a iniúchadh ar feadh 5 nóiméad. Socraíodh na hamanna a caitheadh ​​le gach réad trí anailís dall trí scóráil láimhe, agus rinneadh na luachanna a fuarthas ar laethanta oiliúna agus tástála araon a thiontú ina Innéacs Idirdhealaithe (DI), bunaithe ar shuíomh nua an ruda le linn tástála: [(am caite réad nua a fhiosrú – am a chaitear ag fiosrú réad aithnidiúil)/(am iomlán ag fiosrú an dá réad) × 100 faoin gcéad ]. Ní raibh aon difríochtaí suntasacha icuimhnefeidhmíocht idir ainmhithe suaite agus iad siúd atá lonnaithe le roth seasta, mar sin cuireadh na grúpaí seo le chéile agus a léiriú mar "gan ELE" i ngach anailís OLM. Rinneadh anailís ar thrialacha gnáthaimh maidir leis an achar a thaistiltear thar na seisiúin ag baint úsáide as bogearraí anailíse iompraíochta AON Maze (Stoelting Co). Eisiata ón anailís lucha a raibh amanna neamhchothrom taiscéalaíochta acu idir an dá réad le linn na céime traenála (DI > 20) nó lucha nár léirigh aon laghdú san achar iomlán a taistealaíodh thar sheisiúin chónaithe.

Is féidir le Cistanche cabhrú le cuimhne a fheabhsú

staidéir leictrifhiseolaíochta. Rinneadh turgnaimh leictrifiseolaíochta mar a thuairiscítear roimhe seo, agus tá foinse na modhanna seo foilsithe in áit eile66. Níor úsáideadh ach lucha fireanna le haghaidh turgnaimh leictreifiseolaíocha. Go hachomair, rinneadh lucha fireanna ó gach grúpa ELE a íobairt idir P42–51, agus bailíodh slisní ón hippocampus rostral. Roinneadh slisní corónacha (Leica VT1{000 S) ag tiús 320um agus cuireadh iad i seomra taifeadta comhéadain le sreabhán ceirbreach saorga réamhthéite (31 ± 1 céim ) (124 mM NaCl, 3 mM KCl, 1.25 mM KH2PO4, 1.5 mM MgSO4, 2.5 mM CaCl2, 26 mM NaHCO3, agus 10 mM d-glúcóis). Bhí slisní perfused go leanúnach ag ráta de 1.75-2 ml in aghaidh an nóiméid agus bhí dromchla na slisní nochta do te, humidified 95 faoin gcéad O2/5 faoin gcéad CO2. Thosaigh taifeadtaí tar éis 2 h goir ar a laghad. Taifeadadh poitéinseal postsynaptic excitatory allamuigh (fEPSPs) ó CA1b stratum radiatum ag baint úsáide as pípéad gloine amháin (2-3 MΩ) eitil le 2 M NaCl. Seachadadh bíoga spreagtha (0.05 Hz) do réamh-mheastacháin comhthaobhachta-coimisiúnta Schafer ag baint úsáide as leictreoid spreagthach dépholach (sreang niocróim twisted, 65 μm) suite i CA1c. Coigeartaíodh an déine reatha chun 50 faoin gcéad den fhreagra fEPSP uasta a fháil. Tar éis bunlíne chobhsaí a bhunú, tionscnaíodh LTP le traein amháin de phléascann téite, inar seachadadh gach pléasctha (ceithre chuisle ag 100 Hz) 200 ms óna chéile (.i. ag minicíocht téite). Níor mhéadaíodh an déine spreagtha le linn TBS. Bailíodh sonraí agus rinne siad digitiú ar an gCóras Fála Neurodata NAC 2.0 (Teta Burst). Rinneadh na sonraí san LTP a normalú go dtí an 10 nóiméad deireanach den bhunlíne agus cuireadh i láthair iad mar mheán ± SE. Rinneadh anailís ar bhearta bonnlíne ar chuair I/O, ar éascú péire-pulse agus LTP ag baint úsáide as ANOVA dhá bhealach agus anailís aischéimniúcháin líneach (bogearraí Graphpad Prism 8).Is féidir le Cistanche cabhrú le cuimhne a fheabhsú.

Anailísí staidrimh. Baineadh úsáid as ANOVAanna aontreo chun anailís a dhéanamh ar éifeacht uainiú an chleachtaidh luath-saoil ar DIanna Sealbhaithe OLM (Fíor 2d, g), DIanna Tástála OLM (Fíor 2e, h) agus Amanna taiscéalaíochta iomlána Tástála OLM (Fíor 2f). , i) laistigh de gach gnéas. Baineadh úsáid as comparáidí iolracha iar-hoc Dunnett chun comparáidí sonracha a dhéanamh leis an ngrúpa "gan ELE" (sedentary) nuair a breathnaíodh torthaí suntasacha ANOVA. Baineadh úsáid as ANOVA dhá-bhealach chun anailís a dhéanamh ar mheáchan luiche a fuarthas le linn na tréimhse ELE (Fíor 1b, fachtóirí grúpa ELE agus gnéas). Baineadh úsáid as bearta débhealaigh arís agus arís eile (RM)-ANOVAanna chun anailís a dhéanamh ar achar reatha laethúil (Fíor 1c–e, fachtóirí lá iarbhreithe agus inscne), seisiúin chónaithe (Fíor 2b, c) agus chun éadáil OLM DI vs tástáil DI a chur i gcomparáid. do gach luch le haghaidh comparáidí laistigh den ghrúpa. Baineadh úsáid as tástálacha post hoc Sidak chun comparáidí sonracha a dhéanamh nuair a breathnaíodh idirghníomhaíochtaí suntasacha nó príomhéifeachtaí grúpa reatha nó seisiún OLM. Ina theannta sin, rinneadh ANOVA trí-bhealach do DIanna Tástála OLM chun aon idirghníomhaíochtaí suntasacha idir trí athróg ainmniúil a chinneadh (fad oiliúna OLM, grúpa ELE, agus gnéas). I gcásanna neamhchoitianta nár taifeadadh sonraí reatha 24 h do lá áirithe, cuireadh luachanna i leith bunaithe ar mheánfhad rith na dtrí lá roimhe sin a thógáil, chun anailísí staitistiúla a dhéanamh. Baineadh úsáid as t-tástálacha Mac Léinn neamhphéireáilte chun anailís a dhéanamh ar achair reatha iomlána gach grúpa ELE (Fíor 1f–h), chomh maith le comparáid a dhéanamh le DIanna tástála OLM idir 3-nóiméad agus 10-nim de lucha sníomhacha oilte. Cuirtear faid reatha charnacha in iúl mar Acmhainn ± SD. Déantar cur síos ar phríomhéifeachtaí agus ar idirghníomhaíochtaí gach ANOVA sna finscéalta téacs agus figiúr, mar aon leis an líon sonrach ainmhithe de gach inscne a úsáidtear i ngach turgnamh. Bhí dhá eireaball ar na hanailísí go léir agus bhí luach 0.05 ag teastáil uathu le haghaidh suntasachta. Seasann barraí earráide i ngach figiúr do SEM. I gcás gach turgnaimh, measadh luachanna ±2 diallais chaighdeánacha ó mheán an ghrúpa mar asluiteacha agus baineadh de na hanailísí iad. Rinneadh na staitisticí go léir le bogearraí GraphPad Prism 8. Líon iomlán na lucha a úsáideadh i dturgnaimh iompraíochta=152.

Is féidir le Cistanche cabhrú le cuimhne a fheabhsú

Faighte: 16 Eanáir 2020; Glactha: 13 Bealtaine 2020;

Foilsithe: xx xx xxxx

Buíochas

Thacaigh an Institiúid Náisiúnta um Neamhoird Néareolaíocha agus Stróc na nInstitiúidí Náisiúnta Sláinte leis an taighde seo, faoin uimhir dhámhachtana K12NS098482 (arna bronnadh ar ASI) agus Scoil an Leighis UC Irvine, An Roinn Péidiatraiceach. Ba mhaith linn buíochas a ghabháil freisin leis an Dr. Marcelo Wood as a bplé eolaíoch agus as a n-ionchur ríthábhachtach ar an tionscadal.

Ranníocaíochtaí údair

Rinne ASI, TY, SP, FS, agus TV turgnaimh aclaíochta agus iompair agus rinne siad anailís ar shonraí; Rinne EK na turgnaimh leictrifiseolaíochta go léir, rinne sé anailís ar na sonraí, agus chuir sé an lámhscríbhinn in eagar; Dhear ASI staidéar, rinne sé anailís ar shonraí, rinne sé léirmhíniú ar thorthaí, agus scríobh sé an lámhscríbhinn.

leasanna iomaíocha

Ní dhearbhaíonn na húdair aon leasanna iomaíocha.

Eolas breise

Ba cheart comhfhreagras agus iarratais ar ábhar a sheoladh chuig ASI

Tá faisnéis maidir le hathchlónna agus ceadanna ar fáil ag www.nature.com/reprints.

Nóta an Fhoilsitheora Tá Springer Nature fós neodrach maidir le héilimh dhlínsiúla i léarscáileanna foilsithe agus i gcleamhnachtaí institiúideacha.