Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Pls cliceáil anseo chun Cuid 2

Tá éifeacht neuroprotective an-mhaith ag Cistanche

Gabriel Gonzalez 1,2 , Jiˇrí Grz 1, Cosimo Walter D’Acunto 1, Petr Ka ˇnovsk2 agus Miroslav Strnad1,2,*

1. Saotharlann na Rialálaithe Fáis, Institiúid Luibheolaíochta Turgnamhach Acadamh Eolaíochtaí na Seice,

agus Dámh na hEolaíochta, Ollscoil Palacký, Šlechtitel ˚u 27, CZ-78371 Olomouc, Poblacht na Seice;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (GG); jiri.gruz@upol.cz (JG); waldacun@gmail.com (CWD)

2. An Roinn Néareolaíochta, Ospidéal Ollscoile Olomouc agus Dámh an Leighis agus na Fiaclóireachta,

Ollscoil Palacký Olomouc, CZ-775 20 Olomouc, Poblacht na Seice; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* Comhfhreagras: miroslav.strnad@upol.cz; Teil.: móide 420-585-634-850

Teibí: Cytokininsfítea-hormóin atá bunaithe ar adenín a rialaíonn príomhphróisis i bplandaí, mar chillroinnt agus difreáil, fás fréimhe agus púca, ceannas aipiciúil, brainseach, agus péacadh síolta. I réamhstaidéir, léirigh siad freisin gníomhaíochtaí cosanta i gcoinne galair néar-mheathlúcháin daonna. Chun eolas ar an gcosaint (gníomhaíocht chosanta) a thairgeann siad a leathnú, rinneamar imscrúdú ar ghníomhaíochtaí nádúrthacítocíníni gcoinne tocsaineachta salsalinol (SAL)-spreagtha (agalar Parkinsonsamhail) agus glutamáit (Glu)-bás spreagtha denéaróin-cosúil le cealla dopaminergic SH-SY5Y. Fuaireamar amach go raibh cinétin-3-glucoside, cis-zeatin riboside, agus N6-isopentenyl adenosine gníomhach sa tsamhail PD spreagtha SAL. Ina theannta sin, laghdaigh tras-, cis-zeatin, agus cinéitín mar aon leis an iarann ​​chelator deferoxamine (DFO) agus an t-inhibitor necroptosis necrostatin 1 (NEC-1) rátaí báis cille go suntasach sa mhúnla spreagtha Glu-spreagtha. Léirigh measúnachtaí dehydrogenase lactate go bhfuil ancítocínínar fáil níos ísleneuroprotectivegníomhaíocht ná DFO agus NEC-1. Ina theannta sin, laghdaigh siad gníomhaíochtaí caspase apoptotic-3/7 chomh láidir céanna le DFO. Mar sin féin, tá ancítocínínbhí éifeachtaí an-chosúil le DFO agus NEC-1 ar tháirgeadh radacach sárocsaíd. Ar an iomlán, thaispeáin siad gníomhaíocht chosanta sa tsamhail de bharr SAL-spreagthapáirceannachnéaránachbás cille agus an múnla glu-spreagtha de dhamáiste ocsaídiúcháin go príomha trí strus ocsaídiúcháin a laghdú.

Keywords: cítokinin; fíteashormóin; neuroprotection; cealla néaróin SH-SY5Y; cíteatocsaineacht; salsailín; glutamáit; strus ocsaídiúcháin; galar Parkinson

planda cistanchear na héifeachtaí arNéarchosaint

1. Réamhrá

galar Parkinson(PD) an dara galar néar-mheathlúcháin is coitianta a bhaineann le mótair, agus meastar go n-ardóidh líon na gcásanna a diagnóisíodh go domhanda ó 6 milliún in 2015 go dtí níos mó ná 12 milliún faoi 2040 [1]. Tá sé tréithrithe ag comharthaí mótair atá nasctha le meathlú sonrach agus caillteanas de thart ar 30-70 faoin gcéad de dopaminergic (DA).néaróinsa substantia nigra pars compacta agus a réamh-mheastacháin chuig an striatum [2,3]. I measc roinnt sainmharcanna móilíneacha aitheanta go leor de PD tá strus ocsaídiúcháin agus níotrósaithe feabhsaithe, mífheidhm mitochondrial [4-7], excitotoxicity [8], mífheidhmiú an chórais ubiquitin / próitéamach [9], agus néar-athlasadh [10]. Tá fo-iarmhairtí díobhálacha éagsúla ag cóireálacha reatha agus ní thairgeann siad ach faoiseamh siomptómach [11], agus mar sin tá dian-iarrachtaí chun drugaí a fhorbairt a bhfuil éifeachtaí leigheasacha éifeachtacha acu ar dhíghiniúint DA.néaróin. I measc na n-acmhainní a d'fhéadfadh cabhrú le hiarrachtaí den sórt sin tá comhdhúile nádúrtha a mbíonn níos lú fo-iarmhairtí acu de ghnáth. Inter alia, tá gníomhaíocht chosanta leathan léirithe ag substaintí ó Ginkgo biloba (ginkgetin, ginkgolide, bilobalide), ginseng (ginsenosides), agus flavonoids (baicalein, kaempferol, rutin, agus luteolin) i roinnt samhlacha in vitro (lena n-áirítear an chilllíne neuroblastoma daonna SH). -SY5Y) agus samhlacha in vivo de PD arna tharlú ag déchlóiríd 1,1'-démheitil-4,4'-déchlóiríd dhéphiridiniam (paraquat), 1-meitil- 4-feinil-1, 2,3,6-teitrihidrea-piridín (MPTP), 1-meitil-4-phenylpyridinium (MPP plus ), agus 6-hiodrocsadopamine (6-OHDA) [12].

Dhírigh an staidéar a chuirtear i láthair anseo ar éifeachtaí aicme fítea-hormóin nádúrtha ar a dtugtarcítocínín(CKs), agus a gcuid meitibilítí, ar rialtóirí aitheanta iad de rannán cille, fás, difreáil, agus senescence duille i bplandaí [13]. Go struchtúrach, is díorthaigh adenine iad CKanna a chuirtear in ionad an N6-le prenyl (isopentenyl) nó sidechain aramatacha. Áirítear le foirmeacha nádúrtha 6-(E)-4-hiodrocsa-3-meitil ach-2-enylaminopurine (tras-zeatin, tZ), a 6-(Z)-isiméir ( cis-zeatin, cZ), N6-isopentenyl adenine (iP), 6-beinsile aimíníonán (BAP), 6-furfurylaminopurine (kinetin, K), agus orta-, meitea-, agus díorthaigh para-hiodrocsaileáilte nó meiteocsailithe de CGB, ar a dtugtar topailin (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT). Faightear go coitianta 9-ribóisídí, 9-núicléatídí, chomh maith le 7-, 9, agus O-glúcóisídí de na foirmeacha seo freisin, mar a léirítear i dTábla 1. Chomh maith lena róil dhúchais i plandaí, léirigh CKanna gníomhaíocht fhrithocsaídeach cumhachtach i dtreo speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) a sholáthraíonn cosaint i roinnt samhlacha strus in vitro de neamhoird a bhaineann le dul in aois [14].

Tábla 1. Struchtúir ancítocínínagus na gníomhairí rialaithe dearfacha.

Go háirithe, tuairiscítear go bhfuil gníomhaíocht cytoprotective ag CKanna i múnlaí cosúil le bás cille spreagtha H2O ó fibroblasts daonna [15] agus strus glycocsaídeach spreagtha D-galactose i astrocytes francach [16]. Níos tábhachtaí fós, sa chomhthéacs seo, léirigh siadneuroprotectiveéifeachtaí i múnlaí a bhaineann le galair néar-mheathlúcháin ar nós PD teaghlaigh, coscaire proteasome MG 132-spreagtha nó H2O2-tocsaineacht spreagtha i gcealla SH-SY5Y [17], damáiste ocsaídiúcháin glu-spreagtha ar hippocampal luiche HT22néaránachcealla [18], agus an tsamhail cille PC12 de ghalar Huntington [19]. Léiríonn staidéir eile go bhfuil modhnú díreach [20,21] agus indíreach [15,16,22] ar chórais cheallacha redox i gceist le gníomhaíochtaí cosanta CKanna. Chomh maith le sainghníomhaíochtaí frithocsaídeacha CKs, tuairiscítear go bhfuil éifeachtaí rialála acu i mitochondria a fheabhsaíonnnéaránachinmharthanacht [17]. Thairis sin, is féidir le K acmhainneacht membrane mitochondrial a chobhsú agus táirgeadh ATP a mhéadú, rud a mhaolaíonn bás cealla HT22 de bharr Glu-spreagtha [18]. Mar sin féin, in ainneoin fionnachtana maidir lena n-éifeachtaí i roinnt samhlacha, tá eolas teoranta ar ghníomhaíocht chosanta CKanna san fhoirm PD is coitianta (trealamh).

Chun dul i ngleic leis an mbearna eolais a bhfuil cur síos déanta uirthi thuas, rinneamar measúnú córasach ar éifeachtaí CKanna nádúrtha agus a gcuid meitibilítí in dhá mhúnla in vitro: Samhail de damáiste ocsaídiúcháin PD agus glutamáit (Glu) arna spreagadh le salsolinol (SAL).néaróin-cosúil le cealla SH-SY5Y. Baineadh úsáid as an líne seo mar gheall ar a feinitíopa dopaminergic, íogaireacht do tocsainí dopaminergic cosúil le SAL, agus foirmiú áisiúil de dhaonraí measartha cobhsaí de dhifreálaithenéaránachcealla le rátaí laghdaithe iomadú tar éis nochtadh 48 h d'aigéad retinoic uile-tras 10 uM (ATRA) [23-25].

Néaróin-nochtadh cealla cosúil leis an endo / exotoxin SAL chun aithris a dhéanamh ar phaiteolaíocht PD trí mhífheidhm an chórais cheallaigh redox: ídiú an glutathione (GSH), agus cosc ​​ar ghníomhaíochtaí einsíme frith-ocsaídeacha (Cu/Zn superoxide dismutase and catalase) agus mitochondrial araon. coimpléisc (I agus II), as a dtiocfaidh apoptosis agus necróis [26]. Sa tsamhail eile, spreagann Glu damáiste ocsaídiúcháin a d'fhéadfadh a bheith marfach trí chur isteach ar an gcóras ocsaí. Úsáideadh an dá mhúnla i líne cille SH-SY5Y roimhe seo i staidéir neuroprotection [26,27].

Tá tástáil déanta ar ghníomhaíochtaí cytoprotective agus/nó frithocsaídeacha a bhaineann le neamhoird meathlúcháin K, iP, BAP, iPR, tZR, agus a mbunáiteanna saor in aisce, agus (mar a leagtar amach thuas) fuarthas go bhfuil gníomhaíochtaí cosanta ag roinnt CKanna i.néaránachcealla. Mar sin féin, níor scrúdaigh aon staidéir a foilsíodh roimhe seo an struchtúr-neuroprotectivecaidreamh gníomhaíochta (SAR) de CKanna nádúrtha (Tábla 1). Mar sin, rinneadh an staidéar seo chun scrúdú a dhéanamhneuroprotective(frith-páirceannach) gníomhaíochtaí beagnach gach CK atá ar eolas a tharlaíonn go nádúrtha sna samhlacha néarmheathghiniúna roghnaithe SAL- agus Glu-spreagtha. Ar dtús, rinneamar measúnú ar chumas ionsúcháin radacach ocsaigine (ORAC) agus (i dtástálacha sábháilteachta) cíteatocsaineacht i dtreo gach ceann de na CKanna.néaróin-cosúil le cealla SH-SY5Y. Ansin, rinneamar measúnú ar éifeachtaí agus ar thionchar neuroprotective na gcomhdhúile ar leibhéil struis ocsaídiúcháin trí tháirgeadh sárocsaíd (O2 .) (dé-droethidium, measúnacht DHE) agus gníomhaíochtaí caspase apoptotic,7 a thomhas. Soláthraíonn na torthaí na chéad tásca córasacha tuairiscithe ar na caidrimh idir struchtúir nádúrtha CKanna agusneuroprotectivegníomhaíochtaí.

Cistanche luibhTá an-mhaithneuroprotectiveéifeacht

2. Torthaí agus Plé

2.1. Cumas Ionsúite Ocsaiginí Cytokinins (ORAC)

Toisc go bhfuil baint ag galair neurodegenerative le strus ocsaídiúcháin ardaithe, tá ról lárnach ag gníomhaíocht frithocsaídeach i gcosaintínéaránachcealla. Chun acmhainneacht bhitheolaíoch CKs a mheas maidir leis seo, chinn ORAC an cumas frithocsaídeach, a úsáidtear go coitianta chun cumas frithocsaídeach substaintí a chinneadh [28]. Cuireadh cumas frithocsaídeach in iúl mar choibhéisí Trolox (TE), a chinneann éifeachtacht (níos ísle go dtí níos airde) na gcomhdhúile ná Trolox ar bhonn comhionann. Léiríonn na torthaí, a chuirtear i láthair i dTábla 1, go bhfuil ardghníomhaíochtaí frithocsaídeacha ag topailin (oT, mT, agus pT) agus a ribosides (oTR, mTR, pTR), ar dócha go bhfuil dlúthbhaint acu le córas leictreon-saibhir a C{{ 3}}ionadaí aimín hiodrocsa beinsile. In ainneoin a luachanna arda ORAC, ní raibh na topail ardneuroprotectiveghníomhaíocht. Mar sin féin, tá roinnt CKanna heitrea-aramatacha lena n-áirítear K (N{0}}furfurylaminopurine) agus cis-zeatin-O-glucoside neamh-aramatacha (cZOG), a bhfuil 4-hiodrocsa-3-meitilbúit{{7} }en-1-il)ionadaí aimín, léirigh cumas frithocsaídeach ard freisin (Tábla 2). Meitibilítí CK eile – lena n-áirítear cinéitín-3-glúcósíd (K3G), cinéitín riboside 5<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

sochair gas cistancheargalar frith-Alzheimer

2.2. Difreáil Cealla SH-SY5Y

Chun staidéar a dhéanamh ar CKs'neuroprotectiveéifeachtaí, cealla neuroblastoma SH-SY5Y (roghnaithe ar chúiseanna a thuairiscítear cheana [23]) a dhifreáil trí nochtadh do 10 uM ATRA ar feadh 48 h mar a thuairiscítear roimhe seo [23,24]. Rinneadh iad a dhathú ansin ag baint úsáide as trealamh ruaimnithe membrane chun difríochtaí moirfeolaíocha idir cealla neamhdhifreáilte agus difreáilte a scrúdú. Mar a léirítear i bhFíor 1A, tá annéaróin- d'fhás cealla difreáilte cosúil le níos lú dlúithe, bhí siad níos faide, agus tháirg siad níos mó neurites (léirithe ag saigheada buí san fhigiúr) ná na cealla neamhdhifreáilte. Breathnaíodh na hathruithe moirfeolaíocha seo a bhaineann le difreáil roimhe seo, fiú tar éis nochtadh níos giorra (24 h) do ATRA [24,30]. Níos tábhachtaí fós, ardaíonn líon na néaráití go mór go leibhéal nuair is féidir leo líonra néaraíoch a chruthú. Ar an gcúis seo, rinneadh inmharthanacht cille a thomhas chun comparáid a dhéanamh idir ráta iomadú cealla SH-SY5Y neamhdhifreáilte agus difreáilte. Glacadh le hinmharthanacht SH-SY5Y neamhdhifreáilte mar an ráta uasta iomadaithe. Tá na torthaí i láthair i

Léiríonn Fíor 1B gur laghdaíodh an ráta iomadú (arna mheasúnú ag measúnacht inmharthanachta Calcein AM) de SH-SY5Y 23 faoin gcéad tar éis cóireála ATRA 48 h.

Fíor 1. (A) Micreagraif fhluaraiseacha de chealla SH-SY5Y le seicní daite ag baint úsáide as trealamh eisfhás Neurite (Invitro- gen™): Cealla rialaithe, neamhdhifreáilte (nochtar do réiteach cóireála bréige:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p="" <="">

Tábla 2. Cumas ionsúcháin radacach ocsaigine (ORAC) an tástálaithecítocínín(CKanna) arna shloinneadh mar choibhéisí Trolox (TE) ar bhonn comhionann. Cuirtear ainmneacha, giorrúcháin, agus struchtúir na CKanna i láthair i bhFíor 1.

2.3. Cieattocsaineacht na gCítocínín i dtreo Cealla SH-SY5Y atá cosúil le Néaróin

I dtástálacha ar chiteatocsaineacht ionchasach na CKanna le measúnacht inmharthanachta Calcein AM [31] léirigh an chuid is mó díobh tocsaineacht íseal i dtreo annéaróin-cosúil le cealla SH-SY5Y. Measadh gur tairseach d’éifeacht néarthocsaineach an laghdú inmharthanachta faoi bhun 90 faoin gcéad. Ba iad KR ( 11.9 faoin gcéad ) agus pTR ( 10.5 faoin gcéad ) an t-aon dá eisceacht , de réir thorthaí roimhe seocítocínínd'fhéadfadh éifeachtaí citotocsaineacha a bheith ag meitibilítí, go háirithe ribosides [32]. Níor tháinig aon laghdú dealraitheach ar ribeasídí eile, mar shampla cZR, iPR, oTR, mTRnéaróin-cosúil le hinmharthanacht cealla SH-SY5Y (Tábla 3). Chruthaigh staidéir eile ar chealla SH-SY5Y freisin go raibh DFO [33,34] agus NEC-1 [35,36] a úsáideadh mar rialuithe dearfacha inár múnla in vitro neamh-tocsaineach. Mar fhocal scoir, léirigh díorthaigh KR agus pTR den chuid is mó inmharthanacht níos ísle ná 90 faoin gcéad agus measadh mar sin nach raibh siad chomh suimiúil le haghaidh tuilleadh meastóireachta sa dá mhúnla in vitro de néar-mheathlú.

Tábla 3. Inmharthanacht cille denéaróin-cosúil le cealla SH-SY5Y tar éis nochtadh docítocínínar feadh 24 h. Cuirtear inmharthanacht in iúl mar chéatadán de rialú DMSO.

2.4. Aithint Cytokinins Néarchosanta sa Mhúnla PD de bharr SAL

Le haghaidh na dtrialacha seo,néaránachRinneadh cealla SH-SY5Y a dhifreáil ar feadh 48 h ansin comhchóireáil le 500 uM SAL agus gach CK ag trí thiúchan (0.1, 1, 10 uM). Mar atá léirithe ag an líne poncaithe i bhFíor 2A, laghdaigh cur i bhfeidhm an neurotoxin SAL ag 500 uM inmharthanacht na gcealla difreáilte SH-SY5Y, de réir mheasúnacht Calcein AM, faoi 30 faoin gcéad. Baineadh úsáid as N-acetylcysteine ​​​​(NAC) mar rialú dearfach sna tástálacha seo mar gheall ar a éifeacht neuroprotective a tuairiscíodh roimhe seo sa tsamhail in vitro cill-bhunaithe céanna SH-SY5Y [37]. Úsáideadh comhchruinnithe de 10, 100, agus 1000 uM NAC chun téarnamh páirteach nó beagnach iomlán a spreagadh sa tsamhail SAL. Bhí NAC in ann inmharthanacht cille a mhéadú ag tiúchan 100 uM agus 1 mM, a fhreagraíonn do 83.39 ± 1.74 faoin gcéad agus 89.21 ± 2.89 faoin gcéad, faoi seach. Baineadh úsáid as gníomhaíocht chosanta NAC ag 100 uM (léirithe ag an líne briste i bhFíor 2A) mar thairseach inniúlachta chun CKanna a roghnú le haghaidh tástálacha breise. De réir an tsocraithe seo, breathnaíodh na gníomhaíochtaí néar-chosanta atá suntasach go bitheolaíoch le K3G ag 10 uM (81.84 ± 2.36 faoin gcéad ), cZR ag 0.1 uM (81.14 ± 2.30 faoin gcéad) agus 1 uM (81.53 ± 2.3 faoin gcéad) agus 1 uM (81.53 ± 2.3 faoin gcéad) agus 1 uM (81.53 ± 2.3 faoin gcéad). uM (82.43 ± 2.51 faoin gcéad ). Mar sin, bhí iPR agus cZR ina neuroprotectants éifeachtach ag tiúchain micrea nó fo-mhiocrólaracha níos ísle ná NAC. Tá ancítocínínléirigh scagadh freisin gur féidir le go leor meitibilítí eile méadú measartha a dhéanamh ar inmharthanacht na gceall SH-SY5Y difreáilte a nochtar do SAL. Mar sin féin, bhí éifeacht chosanta an-bheag ag roinnt CKanna a ndearnadh tástáil orthu (lena n-áirítear tZR, tZMP, mT, mTR, pT, agus pTR).

Fíor 2. (A)Neuroprotectivegníomhaíocht decítocínínagus N-aicéitilcysteine ​​​​(NAC) i múnla PD spreagtha SALnéaróin-cosúil le cealla SH-SY5Y. Taispeánann an líne briste an tairseach éifeachta NAC ag a bhfuilcítocínínroghnaíodh iad le haghaidh tuilleadh tástála; ansin déanann an líne poncaithe líon na gceall beo i measúnacht Calcein AM a chomhaireamh tar éis na cealla a chóireáil le 500 uM SAL; cealla rialaithe sláintiúla (CTR, DMSO < 0.1="" faoin="" gcéad="" ).="" trioblóidí="" i="" dtrí="" lá="" scartha="" ar="" a="" laghad.="" (b)="" bás="" cille="" normalaithe="" sh-sy5y="" tar="" éis="" staining="" iaidíde="" propidium.="" déantar="" faoi="" thrí="" i="" gcúig="" lá="" neamhspleácha="" ar="" a="" laghad.="" *="" p="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" bhfeithicil="" le="" 500="" um="" sal,="" #="" p="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" bhfeithicil="" gan="" 500="" um="">

Chun a dhearbhú, na gníomhaíochtaí frith-PD CKs nádúrtha is gníomhaí, rinneadh rátaí báis cille foriomlána a chainníochtú trí staining iaidíde propidium (PI), a dhéanann (i gcodarsnacht le tástálacha inmharthanachta atá bunaithe ar mheitibileacht cille) a lipéadaítear ach ar chealla a bhfuil sláine membrane lagaithe acu, cealla ag fáil bháis. , agus cealla marbha cheana féin [38]. Normalaíodh na torthaí maidir leis an ráta báis cille tar éis cóireála le SAL amháin (socraithe mar 100 faoin gcéad ). Mar a léirítear i bhFíor 2B, laghdaigh an tsubstaint rialaithe deimhneach NAC go suntasach rátaí báis cille ag 100 agus 1000 uM araon (go 77.3 ± 2.21 faoin gcéad agus 77.5 ± 4.44 faoin gcéad, faoi seach). Tríd is tríd, bhí NAC aneuroprotectivegníomhaire le gníomhaíochtaí inchomparáide leo siúd a taifeadadh i staidéir eile ar bhealach dáileog-spleách (sa 50-500 uM raon) do chealla SH-SY5Y [37]. Léirigh an measúnú PI freisin go bhfuil gníomhaíochtaí cosanta ag na CKs cZR, K3G, agus iPR, go háirithe cZR, rud a laghdaigh an ráta báis cille go 71.6 ± 5.08 faoin gcéad ag 0.1 uM. I gcodarsnacht le cZR, bhí éifeachtaí dáileog-spleách droim ar ais ag K3G, le gníomhaíocht uasta ag 10 uM (laghdú an ráta báis cille go 75.0 ± 3.69 faoin gcéad) agus tháinig buaic ghníomhaíocht NPR ag 1 uM (laghdú an ráta go 73.9 ± 4.99 faoin gcéad). Nuair a chuirtear le chéile iad, mar a léirítear i bhFíor 2, chuir CKanna inchomparáide ar fáilneuroprotectivegníomhaíocht go 100 uM NAC de réir na dtástálacha inmharthanachta agus cíteatocsaineachta araon. Ina theannta sin, bhí tiúchain éifeachtacha CKanna ar nós cZR agus iPR i bhfad níos ísle ná iad siúd de NAC, sna raonta fo-mhicreamolar agus micromolar. Léiríonn breathnuithe roimhe seo a fuarthas tar éis staining dhúbailte le PI agus iarscríbhinn V/PI go bhféadfadh K apoptosis a laghdú [39], dá bhrí sin rinneamar imscrúdú freisin ar éifeachtaí CKanna agus NAC ar strus ocsaídiúcháin agus caspase-3,7 (a-. marcóir apoptosis ar a dtugtar).

2.5. Laghdaíonn Cytokinins Foirmiú Radacach Superocsaíde SAL-spreagtha

Cuireann strus ocsaídiúcháin (OS) go mór le roinnt galair néar-mheathlúcháin, agus tá SAL (ag > 100 uM) agus tetrahydroisoquinolines araon ina n-ionduchtóirí cumhachtacha OS [26,40]. Mar sin, thomhaiseamar freisin foirmiú superoxide (marcóir ROS agus OS tábhachtach) i láthair SAL le agus gan CKanna nó NAC roghnaithe. Chun a chinntiú go ndearna SAL damáiste leordhóthanach OS i gcealla SH-SY5Y chun freagraí a bhrath, nochtaíodh cealla do 500 uM SAL ar feadh 24 h, mar atá in obair roimhe seo [37] agus de réir na dtorthaí a cuireadh i láthair thuas. Rinneadh na cealla a dhaite ansin le dihydroethidium (DHE) chun foirmiú radacach superoxide a bhrath [41,42]. Mar atá le feiceáil i bhFíor 3A, breathnaíodh cealla go radhairc tar éis lipéadaithe le DHE (a sholáthraíonn comharthaí dearga fluaraiseachta tar éis imoibriú le sárocsaíd). Spreag SAL ardú soiléir ar fhluaraiseacht DHE, i gcoibhneas le leibhéil rialaithe agus cealla arna gcóireáil ag NAC. Ina theannta sin, bhí éifeachtaí amhairc comhchosúla ag trí CK (cZR, K3G, agus iPR) le NAC (100 uM) ar fhluaraiseacht DHE. Ina theannta sin, bhí an cainníochtú speictrophotiméadrach maidir le leibhéil a braitheadh ​​​​i gcealla arna gcóireáil ag SAL amháin (socraithe mar 100 faoin gcéad), ag teacht le breathnóireacht micreascópachta. Mar a léirítear i bhFíor 3B, bhí an leibhéal superoxide normalaithe i gcealla rialaithe sláintiúla (CTR) níos lú ná 39 faoin gcéad, agus sholáthair an tsubstaint rialaithe dearfach NAC laghdú measartha-go-iomlán ar tháirgeadh ROS spreagtha ag SAL ag 100 agus 1000 uM (go 76.3 ± 4.33 agus 44.3 ± 5.12 faoin gcéad ), rud a thugann le tuiscint go bhfuil ról lárnach ag ídiú glutathione (GSH) sa mhúnla [26]. Rud suimiúil, spreag SAL laghduithe suntasacha ar ábhar GSH de chealla SH-SY5Y in éineacht le ingearchló OS, go leibhéil cosúil leo siúd a breathnaíodh roimhe seo i staidéar a thaifead éifeachtaí NAC-idirghabhála ar inmharthanacht cille, bás cille, agus inneachar glutathione [43] . Léiríonn na torthaí a chuirtear i láthair anseo gur laghdaigh NAC foirmiú radacach sárocsaíd go leibhéil bhunúsacha (ie, leibhéil i rialuithe cóireáilte DMSO). Tástáladh ribosides CK ag comhchruinnithe gníomhacha (0.1–1 uM) in éineacht le K3G, agus laghdaigh siad go suntasach inneachar sárocsaíd radacach na gceall go dtí na leibhéil seo a leanas (i gcoibhneas leo siúd de chealla atá cóireáilte le SAL amháin): cZR 80.34 ± 5.99 faoin gcéad ag 0.1 uM ; K3G 77.1 ± 4.89 faoin gcéad ag 10 uM; iPR 79.2 ± 5.91 faoin gcéad ag 1 uM, inchomparáide le héifeachtaí 100 uM NAC. I dteannta a chéile, tugann na taispeántais orthogonal le fios go láidir go bhfuil ról lárnach ag gníomhaíocht fhrith-OS cumhachtach in éifeachtaí cosanta NAC agus CKanna sa tsamhail PD spreagtha SAL. Tá comhghaol idir maolú OS agus neuroprotection tugtha faoi deara freisin ag údair eile [29], agus fuair roinnt staidéir gur féidir le K agus BAP gníomhaíochtaí OS a fheabhsú go díreach [44] trí choimpléisc a fhoirmiú le hiain Cu2 móide, agus mar thoradh air sin tá superoxide dismutase-. gníomhaíocht cosúil le [45,46]. Mar sin féin, tá cur síos déanta freisin ar CKanna mar frithocsaídeoirí indíreacha le héifeachtaí a idirghabháil trí ionduchtú cosán freagartha frithocsaídeach fachtóir núicléach erythroid 2-fachtóir 2 (NRF2) (iPR) [22] nó athchóiriú páirteach ar ghníomhaíochtaí glutathione peroxidase agus SOD ( K) [16]. Ina theannta sin, tá K reportedlyneuroprotectivegníomhaíochtaí i gcoinne díobhála OS a tharlódh H2O2 i gcealla SH- SY5Y [17]. D'fhéadfadh an dá chineál gníomhaíochta frith-ROS tuairiscithe de CKanna míniú a thabhairt ar éifeachtaí cZR, K3G, agus iPR maidir le laghdú radacach superoxide i múnla PD cille SH-SY5Y SH-SY5Y spreagtha SAL [47-50].

Figiúr 3. (A) Micreafótagraif a thaispeánann strus ocsaídiúcháin de chuid SAL-spreagtha agus gníomhaíochtaí ocsaídiúcháin a laghdaíonn struscítocínínsa duine difreáiltenéaróin-cosúil le cealla SH-SY5Y arna léirshamhlú ag micreascópacht fhluaraiseachta tar éis lipéadú déhidridiam (DHE). Barraí=50 um. Taispeánann na híomhánna cealla cóireáilte le réiteach DMSO (rialuithe), 500 uM salsolinol (SAL) ina n-aonar, agus teaglaim de 500 uM SAL agus 1000 uM NAC (móide NAC), 0.1 uM cZR (móide cZR); 10 uM K3G (móide K3G), 1uM iPR (móide iPR) ar feadh 24 h roimh staining le DHE. (B) foirmiú radacach sárocsaíde SAL-spreagtha aguscítocínínnó gníomhaíocht chosanta N-aicéitilcysteine ​​(NAC). Taispeánann an graf cainníochtú cealla daite DHE ag baint úsáide as an léitheoir micreaphláta Infinite M200 Pro (Tecan, an Ostair). Déantar faoi thrí i gcúig lá neamhspleácha ar a laghad. * P i gcomparáid leis an bhfeithicil le 500 uM SAL, # P i gcomparáid leis an bhfeithicil gan 500 uM SAL.