Cuid 1 Éifeachtaí Coisctheacha Gliocóisídí Feinileatánóil Ó Cistanche Tubulosa ar Shéiream Bólachta ar Fhiobróis Hepatic a Spreagtar le halbaimin i bhFrancaigh

Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com

Teibí

Cúlra:Cistanche tubulosa Is leigheas luibhe traidisiúnta Síneach é a úsáidtear go forleathan chun díolúine a rialáil.Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche(CPhGanna) ón monarcha seo na hábhair éifeachtacha go príomha. Ba é aidhm an staidéir seo measúnú a dhéanamh ar éifeachtaí coisctheacha agus teiripeacha CPhGanna ar fhiobróis heipteach arna spreagadh ag BSA i bhfrancaigh agus ar mheicníochtaí móilíneacha gaolmhara a bhaineann le cealla stellate hepatic. Baineadh úsáid as Biejiarangan (BJRG), leigheas luibhe traidisiúnta Síneach eile, mar rialú dearfach. Modhanna: I dturgnaimh in vivo, rinneadh 75 francach SD a roinnt go randamach i 6 ghrúpa: gnáth (driogadh le huisce driogtha), múnla (BSA-chóireáilte), druga dearfach (BSA-cóireáilte móide BJRG 60{{29} } mg/kg/lá), agus CPhGanna arna gcóireáil ag BSA móide (125, 250, agus 500 mg/kg/lá). Innéacsanna an ae agus an spleen, leibhéil serum aminotransferase aspartate (AST), alanine aminotransferase (ALT), aigéad heicsadecenoic (HA), laminin (LN), cineál III procollagen (PCIII), cineál IV collagen (IV-C), hydroxyproline ( Hyp), agus fachtóir fáis claochlaitheach 1 (TGF- 1) a thomhas in aenna francacha. Rinneadh measúnú ar ghráid histeapaiteolaíocha le haghaidh fiobróis ae do gach grúpa ag baint úsáide as H&E agus staining trichrome Masson. Cinneadh an léiriú ar TGF- 1, collagen I (Col-I), agus collagen III (Col-III) trí mhodh staining imdhíon-histochemical. Rinneadh measúnú breise ar na héifeachtaí seo in vitro trí leibhéil léirithe NF-κB p65 agus Col-I a chinneadh trí anailísí cainníochtúla PCR fíor-ama. Scrúdaíodh léiriú próitéin Col-I freisin ag blotáil an iarthair. Torthaí: Laghdaigh gach grúpa dáileog (125, 25{0, agus 500 mg/kg/lá) de CPhG go suntasach an t-innéacs ae agus spleen, laghdaigh leibhéil serum ALT, AST, HA, LN, PCIII, IV-C, Ábhar TGF- 1 (P < 0.01,="" p="">< 0.01,="" agus="" p="">< 0.01),="" agus="" ábhar="" hyp.="" mhaolaigh="" cphganna="" go="" suntasach="" freisin="" an="" t-at="" i="" gcealla="" ae="" agus="" chuir="" siad="" cosc="" ​​go="" héifeachtach="" ar="" neacróis="" heipiticítí="" agus="" ar="" insíothlú="" cille="" athlastach.="" léirigh="" torthaí="" imdhíon-aisticeimiceacha="" gur="" laghdaigh="" cphg="" go="" suntasach="" slonn="" tgf-="" 1="" (p=""><0.01, p=""><0.01, agus="" p=""><0.01), col-i,="" agus="" col-iii.="" léirigh="" éifeachtaí="" in="" vitro="" cphgs="" (100,="" 75,="" 50,="" agus="" 25="" ug/ml)="" ar="" hsc-t6="" gur="" laghdaigh="" cphganna="" go="" suntasach="" léiriú="" mrna="" de="" nf-κb="" p65="" agus="" col-i,="" agus="" rinne="" cphgs="" íosrialáil="" freisin="" ar="" léiriú="" próitéin="" col-i.="" conclúidí:="" tá="" éifeacht="" shuntasach="" fiobróis="" fhrith-hepatic="" ag="" cphg,="" agus="" féadfar="" iad="" a="" úsáid="" mar="" ghníomhairí="" hepatoprotective="" le="" haghaidh="" cóireáil="" fiobróis="">

Eochairfhocail: Fiobróis hepatic, Cistanche tubulosa, glycosíd Phenylethanol, Chemokine BSA, Cosc agus teiripe.

Cúlra

Is freagra leighis créachta é fiobróis hepatic ar ghortú dian ae a tharlaíonn i bpataigineas heipitíteas ainsealach de bharr fachtóirí éagsúla. Is iad na fachtóirí seo ná ionfhabhtú víreasach, mí-úsáid alcóil, cholestasis, agus galair meitibileach agus uath-imdhíonachta [1-3]. Cuireann carnadh forásach maitrís extracellular (ECM) agus athmhúnlú laghdaithe isteach ar ghnáth-ailtireacht an ae, rud a fhágann go bhfuil fiobróis hepatic ann [4]. Tá fiobróis hepatic ríthábhachtach i ngalar ainsealach ae agus is minic a fhorbraíonn cioróis agus carcanaigineas do-aisiompaithe. Faoi láthair, níl aon mhodhanna ná drugaí éifeachtacha ann le haghaidh cóireáil fiobróis hepatic. Dá bhrí sin, tá sé práinneach druga frith-hepatic fiobróis a aimsiú a mhaolóidh dul chun cinn díobhála ae don fhiobróis agus don ailse.Cistanche tubulosaIs planda seadánacha é W (den teaghlach Orobanchaceae) a fhástar go forleathan i réigiún theas Xinjiang sa tSín [5]. Is gnách go n-úsáideann daoine é chun na duáin a fhuinneamh, chun an fhuil a chothú, chun an bputóg a mhaolú, agus chun moill a chur ar sheanaoise. Tá sé liostaithe go hoifigiúil sa Pharmacopoeia Síneach [6]. Tá éagsúlacht de chomhpháirteanna gníomhacha ag C. tubulosa. Ina measc seo táGliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche(CPhGanna), iridoids, agus polaisiúicrídí. Mar cheann de go leor comhpháirteanna gníomhacha iC. tubulosa, Tá éifeachtaí áititheacha frithocsaídeacha, frith-tuirse, neuroprotective, agus frith-athlastacha léirithe ag CPhGanna i staidéir in vivo agus in vitro [7]. Le blianta beaga anuas, tá sé tugtha le fios go bhfuil CPhGs(Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche) éifeachtaí hepatoprotective a bheith acu. Is iad na meicníochtaí féideartha atá mar bhunús leis na héifeachtaí seo ná fréamhacha saor in aisce a scavening, seicní hepatic a chosaint, imdhíonrialú, cosc ​​ar apoptosis, cosc ​​ar léiriú HBsAg agus HBeAg, agus cosc ​​ar mhacasamhlú DNA HBV agus daoine eile [8-11]. Mar sin féin, is beag staidéar sa litríocht a thugann aghaidh ar éifeacht fiobróis fhrith-hepatic na grafaicí. Dá bhrí sin, bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht fiobróis fhrith-hepatic na GPhCanna trí úsáid a bhaint as samhail de shéiream-albaimin buaibheach (BSA) fiobróis hepatach spreagtha i bhfrancaigh. Rinneadh imscrúdú ar mheicníochtaí móilíneacha gaolmhara i gcealla HSC-T6.

Modhanna

Ceimiceáin agus imoibrithe

Ceannaíodh trealamh Hidroxyproline (hidrealú alcaileach) (Lot: 20140616) ó Institiúid Bithinnealtóireacht Nanjing Jiancheng (An tSín). Ceannaíodh feisteáin ELISA ceapaire Rat TGF- 1 (Lot: 238240615) ó Lianke Biotech Co., Ltd. (An tSín). Sholáthair Beijing Biosynthesis Biotechnology Co. antashubstaint Rabbit Anti-Collagen I (Lot: 140619), antasubstaint Rabbit Anti-Collagen III (Lot: 980788 W), agus Rabbit Anti-TGF- 1 antasubstainte (Lot: 140619), TEO (tSín). Iniata le gnáthshéiream caorach (sreabhán oibre) (Lot: WP141214), PV-6000 (Lot: WK141225), agus ceannaíodh trealamh DAB (Lot: K136621D) ó Zhongshan Golden Bridge Biotech Co., Ltd. (An tSín) . Rinneadh antasubstaintí príomhúla a bhrath trí úsáid a bhaint as 2. Tuaslagán antashubstainte (Alc-Phos. Comhchuingeach, Frith-coinín) agus 2. Tuaslagán antashubstainte (Alc-Phos. Comhchuingeach, Frith-luch) (go leor: 272387) a ceannaíodh ó Invitrogen Company (SAM. ). Ceannaíodh albaimin séiream buaibheach (BSA) (Lot: SLBG8239V) ó Sigma (SAM). Sula n-úsáidtear é, ullmhaíodh BSA ag 18 g/L i ngnáth-seile, baineadh na baictéir trí scagachán, agus stóráiltear BSA ag 4 céim . Measctha aidiúvach neamhiomlán Freund ina bhfuil 1 g de lipid ó ghruaig chaorach (Lot: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (tSín,) le 2 g pairifín leachtach (Lot: 20130815, Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd (tSín,), aimridithe in autoclave gaile, agus a stóráil ag céim 4. Fuarthas an BJRG drugaí dearfach mar táibléad Biejiarangan ó Istigh Mhongóil Furui Eolaíocht Leighis Co, Ltd (An tSín) Ullmhaíodh stoic drugaí BJRG trí thuaslagadh Táibléad BJRG in uisce driogtha ag tiúchan 600 mg/kg.

Ábhair phlandaí

C. tubulosa(teaghlach Orobanchaceae) ó réigiún Minfeng i Xinjiang na Síne. Fíordheimhnigh an taighdeoir Jun Zhao, Príomh-Saotharlann um Leigheas Uighur, Institiúid Materia Medica Xinjiang an t-ábhar. Taisceadh eiseamail dearbháin in Institiúid Materia Medica Xinjiang.

CPhGanna a ullmhú(Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche)

Riosóim triomaithe agus slisnithe deC. tubulosa(6.0 kg) as a chéile faoi aife trí huaire le 70 faoin gcéad eatánól, agus baineadh an tuaslagóir chun an t-eastóscán eatánóil a tháirgeadh. Rinneadh eastóscáin eatánóil a íonú trí roisín AB-8 a úsáid chun gliocóisídí eatánóil feinile (CPhGanna) a fháil. Rinneadh réitigh stoic de CPhGanna a úsáidtear le haghaidh grúpaí dáileoga éagsúla i staidéir ar ainmhithe (500 mg/kg, 250 mg/kg, agus 125 mg/kg, faoi seach) a thuaslagadh i 0.5 faoin gcéad (5 g/L) carboxymethyl ceallalós (salann sóidiam).

CPhGanna a chainníochtú(Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche)

Chinn HPLC ábhar dhá chomhpháirt (echinacoside agus acteoside) sna CPhG ag baint úsáide as modh a tuairiscíodh roimhe seo (Zhang et al. 2004) [12]. Rinneadh HPLC trí úsáid a bhaint as Shimadzu LC-10A HPLC atá feistithe le brathadóir UV. Bhí colún HPLC ina cholún Phenomenex Gemini ODS (250 × 4.6 mm, 5 μm). Is éard a bhí sa chéim shoghluaiste isocratach ná meatánól-aicéatóintríle-1 faoin gcéad d’aigéad aicéiteach (15:10:75, v/v/v). Bhí Elution ar feadh 40 nóiméad agus coinníodh an ráta sreafa ag 0.6 mL/nóim. Coinníodh teocht an cholúin tairiseach ag 30 céim. Bhí braite UV ag 334 nm.

Ainmhithe agus líne chill HSC-T6

[Grád SPF] fireann fásta sláintiúil Ceannaíodh francaigh Sprague-Dawley (SD) (180-220 g) ó Xinjiang Leighis Ollscoil Ainmhithe Center, Ceadúnas Uimh.: SCXK (Nua) 2011-0004. Cothaíodh francaigh chow sainiúil saor ó phataigin (SPF). D'fhormheas Coiste Eitice Ainmhithe an Chéad Ospidéal Cleamhnaithe in Ollscoil Leighis Xinjiang na nósanna imeachta go léir a bhaineann leis na turgnaimh ainmhithe. Cuireadh na francaigh i gcliabháin faoi choinníollacha timpeallachta rialaithe (25 céim agus timthriall 12 h éadrom/dorcha) agus bhí rochtain saor in aisce acu ar ghnáthbhia millíní francaigh agus uisce sconna. Bhí acclimated francaigh roimh chóireáil. Fuarthas líne ceall stellate hepatic francach neamhbhásaithe, HSC-T6, ó Wuhan Procell Gene Biotechnology Co., LTD. (Wuhan, an tSín). Saothraíodh cealla HSC-T6 i Meánmhéid Athraithe Eagle (Ard-ghlúcóis) Dulbecco (DMEM, Beijing, an tSín) arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais (Gibco, Meiriceá Theas), peinicillin 100 IU/ml, agus streiptimícin 100 ug/ml (Beijing). , An tSín) i gorlann humidified ag 37 céim le 5 faoin gcéad CO2.

Gortú ae de bharr BSA agus cóireálacha

Roinneadh seachtó a cúig francach SD go randamach i sé ghrúpa: Gnáth (uisce-chóireáilte driogtha), múnla (BSAtreated), druga dearfach (BSA-cóireáilte móide BJRG 600 mg/kg/ lá), agus cóireáilte le BSA móide CPhGanna.(Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche)(125, 250, 5{{2{0}}0 mg/kg/ lá). Bhí 13 francach i ngach grúpa i ngrúpaí cóireáilte BSA móide CPhG (125, 250, 500 mg/ kg/lá), agus bhí 12 francach ag an ngrúpa eile i ngach grúpa. Tá an tsamhail díobhála ae spreagtha ag BSA roinnte ina íogrú bunscoile agus ionsaí imdhíoneolaíoch ina dhiaidh sin) [13]. Seachas an gnáthghrúpa, tugadh instealltaí subcutaneous iolracha do na grúpaí eile le 0.5 ml (9 mg/ml) aidiúvach neamhiomlán BSA Freund ar lá 1, lá 15, lá 22, lá 29, agus lá 36 le haghaidh íogrú príomhúil. Seacht lá tar éis an cúigiú instealladh, fuarthas fuil tríd an plexus vein reitineach francach agus tástáladh le haghaidh serum albaimin frith-chomhlachtaí. Braitheadh ​​antashubstaint BSA i séiream francach trí mhodh idirleathadh agair dúbailte. Rinneadh an t-instealladh ionsaí trí 0.4 ml de BSA a riaradh i ngnáth-seile a bhí tríd an vein eireaball i bhfrancaigh antasubstainte-dearfach BSA dhá uair sa tseachtain ar feadh deich n-uaire. Ba iad na tiúchain agus amanna instealltaí ná 5.00, 5.50, 6.00, 6.50, 7.00, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 agus 10.00 g/L ag an lá 46, lá 50, lá 53, lá 57, lá 60, lá 64, lá 67, lá 71, lá 74 agus lá 78, faoi seach. Sa ghnáthghrúpa, baineadh úsáid as gnáth-seile le haghaidh instealltaí imdhíoneolaíocha bunscoile (íogrú) agus tánaisteacha (ionsaí) in ionad BSA, agus bhí coinníollacha eile mar an gcéanna leo siúd sa ghrúpa múnla. Tugadh uisce driogtha ó bhéal don ghnáthghrúpa le dáileog de 10 ml/kg/lá. Tugadh tuaslagán CMC-Na 10 ml/kg/lá 0.5 faoin gcéad don tsamhailghrúpa. Tugadh BJRG 600 mg/kg/lá don ghrúpa drugaí dearfach ó bhéal. Na CPhGanna arna gcóireáil ag an BSA móide (125,

250, agus 500 mg/kg/lá) de CPhGs ó bhéal a riaradh 125, 250, agus 500 mg/kg/lá(Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche), faoi seach. Leanadh le dáileoga laethúil ar fhrancaigh ar feadh dhá sheachtain tar éis an insteallta deiridh. Tar éis na tréimhse turgnamhacha, troscadh francaigh ar feadh 12 u roimh hiodráit chlórach 10 faoin gcéad agus ansin eotanaíodh láithreach iad. Bailíodh samplaí séirim ó gach francach agus úsáideadh iad láithreach. Baineadh aenna le haghaidh dhá chuspóir: (1) caomhnú i nítrigine leachtach le haghaidh feisteáin Hyp agus (2) fosúchán i 10 faoin gcéad formaildéad le haghaidh scrúduithe histeolaíocha agus imdhíon-histochemical. Ba é 93 lá ré iomlán na staidéar ar ainmhithe.

Innéacsanna ae agus spleen

Rinneadh an t-ae agus an spleen a dháileadh le laparotomy agus a ní le gnáth-shalainn 4 céim. Tar éis an barraíocht uisce a ionsú le scagpháipéar, rinneadh an t-ae agus an spleen a mheá chun na hinnéacsanna comhfhreagracha a ríomh: Meáchan coibhneasta orgán=mais orgán (g)/mais choirp aonair (g) × 100 faoin gcéad [14].

Turgnaimh cille

Plátáladh cealla HSC-T6 i 96-phláta tobair. Ar dtús, saothraíodh cealla le DMEM ina raibh 10 faoin gcéad FBS ar feadh 48 h. Ansin cuireadh DMEM gan FBS in ionad an mheán chun na cealla a ocras ar feadh 12 uair an chloig. Saothraíodh na cealla ansin le DMEM ina raibh 5.0 ng/mL TGF- 1 (gan FBS) ar feadh 24 h. Ar deireadh, comhchruinnithe éagsúla de CPhGanna(Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche)(100ug/ml, 50ug/ml, agus 25ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, agus 1.5 ug/ml), agus echinacoside (500ug/ml, 250ug/ml, agus 125ug/ml) Rinneadh sa phláta i toibreacha ceathrúpacha agus gor le haghaidh 48 u.

Anailís PCR fíor-ama

Cinneadh an leibhéal slonn mRNA de NF-κB, p65, agus collagen I ag PCR fíor-ama. Chun nathanna mRNA a chinneadh i gcealla HSC-T6, rinneadh na cealla (4 × 105 cealla) a shíolrú i bplátaí sé-tobair le 3 mL DMEM le 10 faoin gcéad FBS agus goraíodh iad thar oíche ag 37 céim agus 5 faoin gcéad CO2, tar éis sin na meáin chultúir cille. athraíodh iad go DMEM saor ó serum. Ar aghaidh, CPhGs(Gliogóisídí eatánóil feanile ón gcistanche)(100 ug/ml, 50 ug/ml, agus 25 ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml, agus 1.5 ug/ ml), agus echinacoside (500 ug/ml , 250 ug/ml, agus 125 ug/ml) leis na toibreacha. Tar éis 48 h de gor le CPhGanna nó cumadóireachta monaiméireacha, baineadh RNA iomlán ag baint úsáide as imoibrí TRIzol (Invitrogen, SAM) agus corraithe go bríomhar le clóraform ar feadh 15 s. Tar éis suí ag teocht an tseomra ar feadh 3 nóiméad, lártheifneoiríodh an lysate ag 12,000 × g ar feadh 15 nóiméad ag 4 céim . Cuireadh deascadh RNA sa chéim uiscí le isopropanol, agus aistríodh an chéim uiscí uachtarach chuig feadán microcentrifuge nua. Bhí deascadh RNA trí eatánól 0.75 faoin gcéad a chur leis, tar éis an fheadáin microcentrifuge agus lártheifneoiriú ag 12,000 × g ag 4 céim ar feadh níos mó ná 5 nóiméad. Baineadh an súthach agus triomaíodh an RNA ag teocht an tseomra ar feadh 5-10 nóiméad. Tacair shonracha primers (Sangon, Shanghai, An tSín) a úsáideadh chun aimpliú francach -actin [GenBank: NM_031144.3], Collagen I [GenBank: NM_ 053304.1], agus NF -κB p65 [GenBank: NM_199267.2] géinte deartha ag baint úsáide as Baisc Primer 3. Bhí na primers ar aghaidh (fw) agus droim ar ais (rv) mar seo a leanas: Collagen I (fw: GGA GAG AGC ATG ACC GAT GG , rv: GGG ACT TCT TGA GGT TGC CA), NF-κB p65 (fw: CAT ACG CTG ACC CTA GCC TG, rv: TTT CTT CAA TCC GGT GGC GA), -actin (fw: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GAT G, rv: AGA GGC ATA CAG GGA CAA CAC A). Rinneadh na torthaí a normalú go mRNA na géine coimeádta tí -actin mar rialú inmheánach agus cuirtear i láthair iad mar leibhéil choibhneasta mRNA. Rinneadh frithghníomhartha le 8 μL iQ SYBR Green Supermix, 1 μL 10 pM péire primer, 8.5 μL uisce driogtha, agus 2.5 μL cDNA. Rinneadh gach imoibriú slabhra polaiméaráise faoi na coinníollacha seo a leanas: 95 céim ar feadh 3 nóiméad, ansin 40 timthriall de 10 s ag 95 céim, 30 s ag 55 céim, agus 10 s ag 55 céim - 95 céim le síneadh, agus ansin tomhas fluaraiseachta aonair . Cuireadh síos ar na torthaí deiridh leis na luachanna coibhneasta (2-ΔΔCt). Rinne Córas Braite PCR Fíor-Ama iQ5 ríomh agus anailís.

Anailís blot an Iarthair

Socraíodh leibhéil slonn próitéine Collagen I (Abcam, Cambridge, UK, Art No: ab34710) le blotting an Iarthair [le -actin (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, China) mar rialú bainistíochta tí. Ullmhaíodh sleachta lánchealla trí úsáid a bhaint as maolán measúnuithe Radioimmunoprecipitation (RIPA) (Thermo Scientific, USA) le 1 faoin gcéad manglam coscaire protease Halt (Thermo Scientific, USA) agus 1 faoin gcéad mhanglaim coscaire Halt phosphatase (Thermo Scientific, USA). Rinneadh an tiúchan próitéine a thomhas agus a chainníochtú ag modh Bradford [18]. Scaradh próitéin (10-50 ug) ar fhoirmiú SDS-PAGE 10 faoin gcéad agus aistríodh go seicní PVDF (Millipore, SAM). Cuireadh bac ar scannáin ar feadh 1 h ag teocht an tseomra le 5 faoin gcéad BSA, agus goraíodh na hantasubstaintí príomhúla (antashubstaint Frith-Colla gen I, caolú 1:200 nó luch mAb de -actin, caolú 1:5000) ag 4 céim thar oíche. An Alk-Phos comhfhreagrach. goraíodh antasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha ag teocht an tseomra. Ar deireadh, nite na seicní trí huaire le saline 1 × Tris-HCl le 0.1 faoin gcéad Tween 20, agus rinneadh comharthaí a scanadh agus a léirshamhlú ag GEL DOC XR Íomháithe System (Bith-Rad). Rinneadh anailís densitometric ar phróitéiní spéise agus normalaíodh go -actin le bogearraí GEL DOC Image Studio (Bith-Rad). Baineadh úsáid as -actin mar an rialú inmheánach.

Anailís staitistiúil

Cuireadh tástáil normáltachta Shapiro-Wilk agus tástáil aonchineálachta athraithis Levene i bhfeidhm chun an normáltacht a fhíorú agus cuireadh You et al. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences (2015) 23:52 Leathanach 4 de 13aonchineálacht athraithis. Baineadh úsáid as anailís ar athraithis (ANOVA) agus tástáil post hoc Tukey ina dhiaidh sin chun difríochtaí staitistiúla a shainaithint, sonraí neamhaonchineálacha, a dháiltear de ghnáth. Baineadh úsáid as tástáil neamhpharaiméadrach Kruskal-Wallis chun anailís a dhéanamh ar shonraí nach bhfuil dáileadh de ghnáth nó aonchineálach. Cuireadh na torthaí in iúl mar mheán ± SD. Socraíodh an tábhacht ag P < 2015.05.="" rinneadh="" anailís="" ar="" na="" sonraí="" go="" léir="" ag="" bogearraí="" spss="" 16.0="" (ollscoil="" leighis="">

Torthaí

Cinneadh cainníochtúil ar CPhGanna

Tá dhá glycosídí alcóil feinileitile, echinacoside, agus acteoside i CPhG i C. }}.18 faoin gcéad , faoi seach.

Innéacsanna ae agus spleen

Mar a léiríodh i dTábla 1, ardaíodh innéacsanna ae agus spleen an ghrúpa mhúnla go suntasach [P < 0.01,="" p="">< 0.05].="" laghdaíodh="" innéacsanna="" ae="" agus="" spleen="" na="" ndrugaí="" deimhneacha="" bjrg="" agus="" cphg="" ag="" grúpaí="" dáileoga="" éagsúla="" go="" suntasach="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" samhail="" [pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0." 004,="" piver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024," pspleen="0.070," faoi="" seach].="" bhí="" innéacsanna="" an="" ae="" agus="" an="" spleen="" níos="" ísle="" ná="" innéacsanna="" an="" ghrúpa="">

Éifeachtaí CPhG ar ALT, gníomhaíochtaí AST, agus marcóirí fiobróis ae

Sa staidéar reatha, méadaíodh leibhéil serum na n-einsímí hepatic AST agus ALT go suntasach sa mhúnlaghrúpa, rud a léiríonn damáiste hepatocellular i bhfrancaigh fiobróis ae spreagtha ag BSA. Mar sin féin, na turgnaimh.

léirigh an chóireáil le BJRG (600 mg/kg) agus CPhGs (125, 250, agus 5{{10}}0 mg/kg) laghdaithe go suntasach AST [PAST < 0.0{{60}}="" 1,="" tádta="">< 0.001,="" táthair="">< 0.001,="" taistealaithe="">< 0.001="" ,="" re="" spectively]="" agus="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189," palt="0.255," faoi="" seach]="" leibhéil="" i="" bhfrancaigh="" fiobróis="" hepatic="" .="" (tábla="" 2).="" méadaíodh="" na="" leibhéil="" ha,="" ln,="" pc="" agus="" iv-c="" i="" francaigh="" mhúnla="" go="" suntasach="" [pha="">< 0.001,="" pln="">< 0.001,="" ppciii="0.002," piv-c="">< 0.001,="" faoi="" seach].="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" múnla,="" tá="" na="" leibhéil="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023," faoi="" seach],="" ln="" [pln="0.011," p="" ln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," faoi="" seach],="" pc="" iii="" [p="" pciii="" {="" {47}}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296," faoi="" seach],="" agus="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" p="" iv-c="">< 0.001,="" faoi="" seach]="" i="" bhfrancaigh="" tháinig="" laghdú="" suntasach="" ar="" bjrg="" (600="" mg="" kg)="" agus="" cphg="" ag="" grúpaí="" dáileoga="" éagsúla="" (125,="" 250,="" agus="" 500="" mg/kg)="" (tábla="" 3).inneachar="" hyp="" agus="" tgf-="" 1="" braitheadh="" ​​ábhar="" collagen="" freisin="" trí="" leibhéil="" hyp="" i="" bhfíochán="" ae="" a="" thomhas.="" mar="" a="" léirítear="" i="" dtábla="" 4,="" tá="" an="" meán="">Bhí an leibhéal sa mhúnlaghrúpa i bhfad níos airde ná an gnáthghrúpa, ach tháinig laghdú suntasach air sa ghrúpa BJRG agus sna grúpaí dáileoga éagsúla CPhG. Méadaíodh go suntasach an tiúchan hepatic de TGF{{0}} den ghrúpa múnla i bhfrancaigh [P < 0.001].="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" múnla,="" tháinig="" laghdú="" suntasach="" ar="" leibhéil="" tgf-="" 1="" den="" druga="" deimhneach="" agus="" sna="" grúpaí="" dáileoga="" éagsúla="" cphg="" [p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" ptgf-="" 1="">< 0.001,="" faoi="" seach].="" tá="" achoimre="" ar="" na="" torthaí="" i="" dtábla="">

Scrúdú histeapaiteolaíochta

Léiríonn breathnuithe ar ghnáthchodanna fíocháin ae atá daite le H&E agus tríchrome Masson lobules hepatic ar leith agus sinusoids hepatic. Rinneadh neamhord ar struchtúr fíocháin ae sna francaigh mhúnla, agus cuireadh líon mór fíochán nascach in ionad an fhíocháin ae agus na sinusoids hepatic. Mar sin féin, braitheadh ​​​​ciotoailtireacht níos gnách agus níos lú fíocháin nascacha sa ghrúpa cóireála ná iad siúd sa ghrúpa múnla.

staining H&E

Sa ghnáthghrúpa, breathnaíodh sláine struchtúrach lobule hepatic gan limistéir tairseach neamhghnácha agus sinusoids hepatic. Socraíodh na cordaí hepatic go hordúil, leis an gcroí cruinn agus soiléir. Tá na núicléis suite i lár na cille, le cíteaplasma flúirseach. Níl ach méid beag fíochán snáithíneach i limistéar an tairseach (Fíor 2a). Sa ghrúpa múnla, rinneadh damáiste mór don struchtúr lobular. Léirigh cealla ae meath éadrom uisceach, díghiniúint balún den chuid is mó agus/nó meathlú sailleacha. Breathnaíodh freisin foirmiú insíothlú cille athlastach, hipearpláis fíocháin snáithíneach fairsing, foirmiú líon mór den septum snáithíneach, lobules scoilte, agus iomadú suntasach cealla ae. Dheimhnigh na breathnuithe seo rathúlacht bhunú an mhúnla ainmhithe díobhála imdhíonachta francaigh d’fhiobróis hepatic (Fíor 2b). I gcomparáid leis an ngrúpa múnla, bhí laghdú ar insíothlú cealla athlastacha sna CPhGanna éagsúla. Chomh maith leis sin breathnaíodh níos lú neacróis agus meath sailleacha de chealla ae chomh maith le maolú ar fhiobróis. Mhaolaigh CPhG go mór paiteolaíocht na fiobróis hepatic spreagtha ag BSA i bhfrancaigh, mhaolaigh siad at na gcealla ae, agus chuir siad cosc ​​​​go héifeachtach le neacróis heipiticítí agus insíothlú cealla athlastacha, rud a thugann le tuiscint go bhfuil éifeacht chosanta ag CPhGanna ar fhiobróis hepatic francach arna spreagadh ag BSA. (Fig. 2c–f ). staining trichrome Masson Sa ghnáthghrúpa, bhí an fíochán ae gnáth. Léirigh an limistéar tairseach hepatic líon beag snáithíní collagen gorm, agus bhí an fíochán ae struchtúrtha de ghnáth (Fíor 3a). I gcomparáid leis an fíochán ae an ghrúpa gnáth, fíochán snáithíneach iomadú ag an bhileog lárnach agus a leathnú isteach sa parenchyma ae. Snáithíní collagen leathnaithe agus nasctha agus

clúdach an lobule ar fad agus timpeallaithe an vein lárnach. Chuir na héifeachtaí seo, chomh maith le fiobróis heipitocyte, damáiste struchtúrach lobular, fiobróis periportal, agus foirmiú pseudolobule (Fíor 3b) fianaise ar fáil gur bunaíodh an tsamhail. I gcomparáid leis an ngrúpa múnla, leathnaíodh na snáithíní collaigine sa ghrúpa rialaithe drugaí dearfach go beag amach as an limistéar tairseach forimeallach (Fíor 3c). I gcomparáid leis an ngrúpa múnla, laghdaíodh na snáithíní collaigine sna grúpaí dáileoga éagsúla CPhG go suntasach, cuireadh bac ar iomadú snáithíní, agus laghdaíodh go suntasach ar iomadú fíocháin shnáithíneacha laistigh den parenchyma ae. Thug na torthaí seo le tuiscint gur chosain CPhGanna francaigh ó fhiobróis heipteach arna spreagadh ag BSA (Fíor 3d–f ).

Staining inmunohistochemical

Tá sé tábhachtach go n-imríonn léiriú collagen cineál I agus collagen cineál III róil riachtanacha i bhforbairt fiobróis hepatic, agus d'fhéadfadh a nginiúint agus a dtaisceadh i bhfíochán ae feidhmiú mar chinntitheach tábhachtach ar éifeachtúlacht fiobróis frith-hepatic. Tá achoimre ar na torthaí i dTábla 5

Collagen cineál I

Chuir an gnáthghrúpa in iúl cineál collagen I go príomha sna soithigh fola agus sa limistéar tairsí. Chuir an grúpa múnla fiobróis soithíoch cineál I collagen in iúl go mór i limistéir thairseach. I spás Disse, breathnaíodh staining collagen de chineál I stríoca nó mar dháileadh fánach. Chlúdaigh Collagen septa snáithíneach chun pseudolobule a dhéanamh. Sna turgnaimh seo, foirmíodh níos lú septa snáithíneach do BJRJ (600 mg/kg) agus do ghrúpaí dáileoga éagsúla de CPhG s (125, 250, agus 500 mg/kg) [PCol I=0.002, PCol I {{ 6}}.001, PCol I=0.023, agus P Col I=0.044, faoi seach]. Léirigh na torthaí leathchainníochtúla go raibh léiriú a gcineál collaigine I i bhfad níos ísle i gcomparáid leis an ngrúpa samhail (Fíor 4).

Collagen cineál III

Cuireadh collagen cineál III in iúl go lag sa ghnáthghrúpa, agus léirigh na limistéir imeallacha timpeall ar an tairseach agus veins hepatic méid beag buí fíneáil in ionad snáithíní leanúnacha (Fíor 5a). Sa ghrúpa múnla, léirigh snáithíní collagen cordaí leathan agus tiubh, rud a léiríonn léiriú láidir, atá lonnaithe go príomha sna réimsí tairseach agus fíocháin shnáithíneacha (Fíor 5b). Bhí snáithíní collagen de BJRJ (600 mg/kg) agus grúpaí dáileoga éagsúla de CPhGs (125, 250, agus 500 mg/kg) filamentous agus dáileadh timpeall na limistéar vein lárnach agus tairseach. I gcomparáid leis an ngrúpa múnla, laghdaíodh na snáithíní collaigine go suntasach, bhí staining pale agus tanaí, agus bhí staining imdhíon-cheimiceach lag dearfach ( Fíor. 5c - f ). Léiríonn na torthaí leathchainníochtúla seo go bhfuil na cealla in iúl go dearfach sna grúpaí dáileog dearfacha agus difriúla [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PCol III=0.010, agus Bhí P Col III=0.037, faoi seach] difriúil leo siúd sa mhúnlaghrúpa.

TGF- 1

Is beag léiriú ar TGIF{{{{0}} i ngnáthchealla ae francaigh. Bhí an slonn teoranta do líon beag cealla interstitial (Fíor 6a). Sa ghrúpa múnla, scaipeadh léiriú TGF- 1 go forleathan sa limistéar tairseach, spásanna snáithíní, cealla stellate hepatic, cealla athlastacha, an balla sinusoidal agus cíteaplasma. Léirigh limistéar tairsí ar leith léiriú an-dearfach le staining donn-buí (Fig. 6b). Bhí méid beag léirithe sa limistéar tairsí agus septa snáithíneach BJRJ (600 mg/kg) agus grúpaí dáileoga éagsúla de CPhGs (125, 250, agus 500 mg/kg). Laghdaíodh go mór an smálú dearfach sna grúpaí seo i gcomparáid leis an múnlaghrúpa. Tháinig laghdú ar staining sna cealla interstitial sa septa snáithíneach agus cíteaplasma na gcealla athlastacha ( Fíor. 6c - f ). Léirigh torthaí leathchainníochtúla go raibh BJRJ agus grúpaí dáileoga éagsúla de CPhGanna [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0" .004,="" faoi="" seach]="" suntasach="" i="" gcomparáid="" leis="" an="" ngrúpa="" samhail.="" mar="" a="" luadh="" níos="" luaithe="" san="" alt,="" is="" cítocín="" tábhachtach="" é="" tgf="" i="" bpaitifiseolaíocht="" an="">

fiobróis, ag spreagadh táirgeadh maitrís extracellular [19]. Léiríomar gur mhéadaigh leibhéal an TGF- 1 sa ghrúpa samhail ar bhealach a bhí comhsheasmhach le déine na fiobróis ae. Bhí leibhéil slonn TGF- 1 san ae comhsheasmhach le leibhéil serum TGF- 1. Léiríonn sé seo gur féidir le CPhGanna fiobróis ae a laghdú go suntasach de bharr slonn TGF- 1 trí pháirt a ghlacadh i sintéis agus díghrádú ECM. Is féidir le léiriú collagen cineál I, collagen cineál III, agus TGF- 1 próiseas paiteolaíoch na fiobróis hepatic a bhrath. Tháinig laghdú suntasach ar a leibhéil léirithe sna grúpaí cóireála agus léirigh siad gur féidir le CPhGanna gníomhaíocht collagenase a fheabhsú, cothromaíocht dhinimiciúil shintéis agus díghrádú ECM ae a chothabháil, rud a chuir moill agus cosc ​​​​ar fhoirmiú fiobróis ae.