Cistanche:Táirgeadh Ocsaíd Nítreach spreagtha ag Echinacoside i gCealla Endothelial: Róil an Ghlacdóra Androgen agus an Conair PI3K-Akt

Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com

LI GU, danHONG LIAN, YIMEI ZHENG, WEI ZHOU, JINLEI GU agus XIN LIU

Réamhrá

CistancheHoffmg. Is luibh seadán ilbhliantúil é Et Link de ghéineas den teaghlach Orobanchaceae. LuibhCistanche, an gas deCistanche fásachY. c. MA agusCistanche tubulosa(Schenk) R. Meáchan, a bheith in úsáid mar ghníomhaire tonic chun easnamh duáin, impotence, leukorrhea morbid agus constipation senile (1) a chóireáil, a d'fhéadfadh a bheith mar gheall ar a éifeacht rialála hormóin androgen-mhaith nó gnéas (2).Echinacoside(EcH; c35H46O20;

meáchan móilíneach, 786.73; Fíor 1), ar cheann de na gliocóisídí feinileatánóideach (PhGanna) atá scoite amach ó gais HerbaCistanche, agus taispeánann sé airíonna bitheolaíocha iomadúla, lena n-áirítear éifeachtaí frithocsaídeacha, frith-aging, frith-athlastacha, hepatoprotective agus neuroprotective (3). Tá sé léirithe ag imscrúduithe nua-aimseartha cógaseolaíochta go bhfuil comhábhair éagsúla de HerbaCistanche, lena n-áirítear EcH, acteoside, kankanose, kankanoside F agus cistanoside F, gníomhaíocht vasorelaxant taispeáint (4).

Is rialtóir ríthábhachtach é an endothelium ar an soithíoch, agus tá ocsaíd nítreach (NO) ina fhachtóir scíthe tábhachtach a scaoileann cealla endothelial. Trí idirleathadh isteach i gcealla muscle réidh, gníomhaíonn NÍL guanylate cyclase, méadaíonn sé leibhéil timthriallach guanosine monophosphate (cGMP), agus ansin gníomhaíonn sé kinases próitéin cGMP-spleách (PKGanna) chun scíthe muscle réidh a chur chun cinn (5). Léiríodh roimhe seo go ngníomhaíonn EcH ag 350-400 µM go díreach ar mhatán mín soithíoch agus go gcuireann sé cosc ​​ar iomadú hypoxia-spreagtha i gcealla matán míne artaire scamhógach (6), agus ba chúis le 30-300 µM EcH géar-vasorelaxation in endothelium- fáinní slán ar bhealach tiúchan-spleách, agus táirgeadh cGMP feabhsaithe i corpus cavernosum muscle réidh fáinní Aortach conraithe ag feinilephrine (7). Trí na bealaí NO-cGMP-PKG-BKca a oscailt i gcealla matán mín, chuir 100 nó 300 µM EcH crapadh noradrenaline-spreagtha faoi chois i hartairí scamhógacha na bhfrancaigh, go háirithe i fáinní endothelium-denuded (8). Tá cealla endothelial ina bpríomhrialóirí ar fheidhm cardashoithíoch agus, i gcásanna éagsúla, fuarthas amach go raibh an scíthe endothelial-chleithiúnach mar gheall ar shubstaint inaistrithe, mar shampla NÍL, a scaoileadh ón endothelium (9). Mar sin féin, tá gá le himscrúdú breise ar mheicníocht mhóilíneach in aghaidh an tsrutha de tháirgeadh NÍL spreagtha ag EcH i gcealla endothelial soithíoch.

Sa endothelium soithíoch, déantar giniúint NÍL a idirghabháil go príomha trí endothelial NO synthase (eNOS). Tá sé léirithe ag go leor grúpaí go ngníomhaíonn cosán fosfatidylinositol 3-kinase (PI3K) an próitéin serine threonine kinase B (Akt), rud is cúis le fosfar díreach eNOS ag serine 1177 (Ser1177) (10). Tá an receptor androgen (AR) ina bhall den fhotheaghlach receptor núicléach s3, a athraíonn léiriú géine go canónach. Tá baint ag logánú AR chuig na caveolae sa chillscannán

an rialáil neamh-genomic na feidhme cille endothelial nó léiriú géine ag a chuireann faoi deara an c-Src/PI3K/Akt easghluaiseachta, as a dtagann deireadh thiar i fosfarylation eNOS agus NÍL táirgeadh (11). I gcealla endothelial Aortach daonna, tá testos- terone tuairiscithe a ghníomhachtú PI3K / Akt comharthaíochta agus go tapa aslú NÍL táirgeadh mar gheall ar an idirghníomhú díreach AR agus an subunit p85 de PI3K ar an gcóras cardashoithíoch (12). Tuairiscíodh go méadaíonn EcH comharthaí a bhaineann le heasnamh hormóin agus go gcuireann sé a éifeachtaí cosúil le androgen i bhfeidhm mar gheall ar cheangal iomaíoch leis an AR in ionad testosterone (2). Mar sin, bhí hipitéis sa staidéar seo go bhféadfadh baint a bheith ag an gcosán PI3K/Akt le táirgeadh NÍL trí fhosfarylation AR-spleách eNOS arna tharlú ag EcH. Ba é aidhm an staidéir seo na héifeachtaí seo a leanas a bhaineann le EcH a mheas: i) Ionduchtú táirgeadh NÍL agus fosfarylation eNOS; ii) baint AR in eNOS fosfarylation; agus iii) gníomhachtú an cosán PI3K / Akt i daonna umbilical vein cealla endothelial (HUVEcs), samhail turgnamhach-aitheanta go maith chun staidéar a dhéanamh ar rialáil feidhmeanna cille endothelial agus angiogenesis ( 13 ).

Ábhair agus modhanna

Ceimiceáin agus imoibrithe.Fuarthas EcH (íonachta, 92.5 faoin gcéad ) ó na Caighdeáin Náisiúnta Tagartha drugaí san Institiúid Náisiúnta um Rialú Bia agus drugaí. Ceannaíodh antasubstaintí i gcoinne p-Akt (Ser473; cat. uimh. ab8805), Akt (cat. uimh. ab81283), p-eNOS (Ser1177; cat. uimh. ab184154) agus eNOS (cat. uimh. ab76198) ó Abcam. Fuarthas coscairí nilutamide agus IcI 182780 ó Sigma-Aldrich; Merck KGaA. Ceannaíodh L-NAME ó Adamas-Beta, Ltd., agus ceannaíodh wortmannin ó Pribolab.

cill cultúr anddruga cóireáil.Fuarthas HUVEcs ó Sciencell Research Laboratories Inc. agus saothraíodh iad i meán cille endothelial (EcM; Saotharlanna Taighde Sciencell) le 5 faoin gcéad (v/v) séiream bó féatais (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) agus 1 faoin gcéad de chill endothelial forlíonadh fáis (ECGS) ag 37˚C (5 faoin gcéad CO2 agus 95 faoin gcéad taise) (14). Tar éis an cumar a bhaint amach, rinneadh na cealla a dhíleá le trypsin agus plátáilte in EcM le 1 faoin gcéad FBS agus 1 faoin gcéad EcGS. I gcás gach turgnaimh, plátáladh HUVEcs ag tiúchan 1x104/ml agus fásadh iad go dtí gur shroich siad an cumar. Roimh chóireáil le EcH nó spreagthóirí eile, goradh na cealla in EcM saor ó fheanól gan FBS agus EcGS ar feadh 6 h chun aslú

gabháil fáis. Sna turgnaimh coisctheacha, rinneadh HUVEcs a réamh-ghlais le antagonists nó coscairí éagsúla, lena n-áirítear 10 µM nilutamide, 10 µM IcI 182780, 0.5 mM L-NAME nó 5 µM wortmannin, ar feadh 30 nóiméad, le ECH nó gan ECH, ag 37˚C. I ngach grúpa, lena n-áirítear an rialú, baineadh úsáid as dMSO mar thuaslagóir ag tiúchan comhionann 0.001 faoin gcéad .

Tomhas intracellular NOproduction.

Rinneadh monatóireacht ar athruithe coibhneasta i dtiúchan cítosólach NÍL in HUVEcs ag baint úsáide as an taiscéalaí fluaraiseacha NO DAF-FM (Cayman Chemical Company), mar a tuairiscíodh roimhe seo (12). Go hachomair, luchtaíodh na cealla le diacetate 5 µM DAF-FM ar feadh 20 nóiméad ag 37˚C i pláta microtiter dubh agus rinsíodh arís agus arís eile iad le PBS (pH 7.4). Socraíodh an fhluaraiseacht ag tonnfhaid excitation agus astaithe de 495 agus 515 nm, faoi seach, ag baint úsáide as léitheoir microplate fluaraiseacha (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) agus micreascóp inbhéartaithe dlúth (Nikon eclipse Ts2R; corparáid Nikon).

iartharach blot anailís.Mar a tuairiscíodh roimhe seo (15), nitear monashraitheanna comhfhiúcha na gceall faoi dhó i PBS le fuar oighir agus lísíodh iad le maolán RIPA (P0013d; Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime). Rinneadh an tiúchan próitéine sa supernatant a thomhas ag baint úsáide as an modh measúnaithe aigéad bicinchoninic (16). Ina dhiaidh sin, rinneadh 30 µg de phróitéin a luchtú in aghaidh an lána, scartha ag baint úsáide as glóthacha polyacrylamide 10 faoin gcéad agus aistríodh go seicní défhluairíd polaivi- neilideéin. Cuireadh bac ar na seicní le bainne bearrtha 5 faoin gcéad ar feadh 1 h ag 25˚C. Tar éis gortha le antasubstaintí monaclónacha i gcoinne Akt (1:1,000 caolaithe), p-Akt (caolú 1:500), eNOS (1:2,000 caolaithe), nó p-eNOS (1 :1,000 caolú) ag 4˚C thar oíche, nite na seicní le TBST (ina raibh 0.1 faoin gcéad Tween-20) 4 huaire ar feadh ~15 nóiméad in aghaidh an nigh ag 25˚C. Ina dhiaidh sin, goraíodh na seicní le antasubstaintí tánaisteacha comhchuingeacha horseradish peroxidase (1:5, caolú 000; antashubstaint frith-luch, cat. uimh. A0216, nó antashubstaint frith-choine, cat. uimh. A0208, Institiúid Beyotime). na biteicneolaíochta) ar feadh 1 h ag 25˚C, agus braitheadh ​​é ag baint úsáide as trealamh feabhsaithe ceimiceacha (cat. uimh. 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Rinneadh déine bannaí a chainníochtú trí úsáid a bhaint as bogearraí anailíse glóthacha Image J, leagan 1.8.0_112 (Institiúidí Náisiúnta Sláinte).

Beaga ag cur isteach (si) RNA ullmhúcháin agus aistriú.Rinneadh na RNAanna fada dúbailte-snáithe a shintéisiú ag an sprioc-mRNA den receptor AR agus estrogen (ER) le seichimh a thaispeántar i dTábla I. Bhain na coinníollacha le haghaidh leagadh siRNA le haistriú HUVECanna ag cumar 70 faoin gcéad a coinníodh i neamh-fhrithmhiocróbach. mheán cultúir i miasa cultúir 60 mm atá brataithe le collagen. Rinneadh aistriú 5 nM AR-siRNA nó 10 nM ER -siRNA le himoibrí Lipofectamine 3000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ar leithligh, de réir prótacail an mhonaróra. Transfection éifeacht- ciency Rinneadh meastóireacht ar ais trascríobh cainníochtúla-PcR anailís (RT-qPcR), mar a tuairiscíodh roimhe seo (17). Ba iad seo a leanas na coinníollacha teirm-rothaíochta: 10 nóiméad ag 95˚C; 40 timthriall de 95˚C ar feadh 5 soicind agus 60˚C ar feadh 1 nóiméad, agus cuar leá ag 95˚C ar feadh 15 soicind, 60˚C ar feadh 1 nóiméad agus 95˚C ar feadh 15 soicind; rinneadh trí mhacasamhlú bitheolaíocha neamhspleácha do gach sampla. Rinneadh na turgnaimh ina dhiaidh sin 48 h tar éis aistrithe. Dearadh péirí primer ag baint úsáide as bogearraí Primer Premier v5.0 (PREMIER Biosoft) leis na seichimh seo a leanas: AR ar aghaidh, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' agus droim ar ais, 5'-GAcTTGTAGAGAGAcAGGGTAGA-3'; ER ar aghaidh, 5'-ccAGTAccA ATGAcA AGG GAAG -3' agus droim ar ais, 5'-TcAcAGGAccAGAcTccATAA-3'; agus GAPdH ar aghaidh, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' agus droim ar ais, 5'-GGGTGGAATcATTGGAAcATTT-3'.

Staidrimh anailís.Cuirtear na sonraí go léir i láthair mar an meán ± diall caighdeánach. Rinneadh comparáidí staitistiúla idir grúpaí agus úsáid á baint as tástáil Kruskal-Wallis nó ANOVA déthreo le tástáil iar hoc Tukey le haghaidh comparáidí iolracha. p<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Torthaí

ECH aslú NÍL táirgeadh agus eNOSfosfaralú.Mar a léirítear i bhFíor 2A agus B, mhéadaigh 1 µM ECH táirgeadh NÍL intéireallach go suntasach i HUVEcs i gcomparáid leis na cealla rialaithe diúltacha, agus maolaíodh éifeacht spreagthach EcH go dtí an leibhéal rialaithe trí réamhchóireáil le L-NAME. Chun an tiúchan is fearr a fháil, rinneadh tástáil ar phosphorylation eNOS ag 60 nóiméad tar éis cóireála le EcH ag tiúchan

de {{0}}, 0.01, 0.1, 1 agus 10 µM. Léirigh na torthaí go bhféadfadh EcH ag tiúchain 0.01-10 µM fosfarylation eNOS a tharlú go suntasach ag Ser 1177 ar bhealach atá ag brath ar thiúchan, agus an fosfarylation eNOS uasta a breathnaíodh ag ionduchtúchán 10 µM EcH (Fíor 2c agus d). Ina theannta sin, scrúdaíodh fosfarylation eNOS ag Ser1177 le hanailís blot an iarthair ag 0, 5, 15, 30, 60 agus 120 nóiméad tar éis gor le 1 µM EcH. Tugadh faoi deara gur spreag EcH fosfarylation eNOS go tapa ag 5 min, agus lean sé ag méadú go dtí 30 nóiméad goir (Fíor 2E agus F). Ina dhiaidh sin, in ainneoin cóireáil EcH, d'fhan méid choibhneasta phosphorylation eNOS cobhsaí ó 30 nóiméad ar aghaidh; mar sin, níor chuir EcH isteach ar shloinneadh iomlán eNOS (Fíor 2c agus E).

AR idirghabhálaí ECH-spreagtha NÍL táirgeadh agus eNOSBa iad na héifeachtaí trasnaíochta AR-siRNA-1 agus ER -siRNA-2 na cinn is rathúla maidir le cosc ​​a chur ar léiriú AR agus ER in HUVEcs sa staidéar reatha (Fíor 3). Ina dhiaidh sin, cuireadh antagonist d’anailís ar chosc ar fheidhm AR agus siRNA d’anailís caillteanas-feidhme AR i bhfeidhm chun rannpháirtíocht AR i ngníomhachtú eNOS arna spreagadh le EcH agus i dtáirgeadh NÍL a mheas. Mar a léirítear i bhFíor 4A, tháinig méadú suntasach ar 1 µM ECH NÍL táirgeadh in HUVEcs (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH gníomhachtaithe an PI3K/Gníomh cosán.Sa staidéar reatha, tástáladh fosfarylation Akt ag Ser473 60 nóiméad tar éis gor EcH ag tiúchan de 0, 0.01, 0.1 , 1 agus 10 µM. Thug na torthaí le fios go bhféadfadh EcH (0.01-10 µM) fosfarylation Akt a chothú go suntasach. Bhain na leibhéil slonn coibhneasta de p-Akt buaic ag 1 agus 10 µM de chóireáil EcH (Fíor 5A agus B). Ina theannta sin, scrúdaíodh Akt fosfarylation le hanailís blot an iarthair ag 0, 5, 15, 30, 60 agus 120 nóiméad tar éis 1 µM EcH a chur le cultúir HUVEc. Mar a léirítear i bhFíor 5c agus d, mhéadaigh EcH fosfar Akt go tapa tar éis 5 nóiméad goir, agus breathnaíodh an t-uasleibhéal próitéine de p-Akt ag 60 nóiméad. I gcodarsnacht leis sin, níor chuir EcH isteach ar an slonn Akt iomlán (Fíor 5A agus c). Ina theannta sin, chun imscrúdú a dhéanamh ar an éifeacht a d'fhéadfadh a bheith ag cosán PI3K ar phosphorylation eNOS, rinneadh réamhchóireáil ar HUVEcs leis an inhibitor PI3K wortmannin roimh iarratas EcH. Fuarthas amach go laghdaigh Wortmannin táirgeadh NÍL spreagtha ag EcH go leibhéil bonnlíne (Fíor 5E). Breathnaíodh feiniméan den chineál céanna ag baint úsáide as micreascópacht fhluaraiseachta nuair a rinneadh scrúdú ar fhluaraiseacht DAF-FM de bharr EcH (Fíor 5 F). Ina theannta sin, d'fhéadfadh go mbeadh an cumas ag wortmannin deireadh a chur le fosfarú eNOS tapa i HUVEcs (Fíor 5G agus H). Tugann na torthaí thuasluaite le fios go bhféadfadh EcH fosfarylation eNOS agus táirgeadh NÍL a ghníomhachtú tríd an gcosán PI3K/Akt.

Plé

Is comhdhúil nádúrtha é EcH atá scoite ó HerbaCistanche, le hairíonna cógaseolaíochta éagsúla. Léiríodh roimhe seo go ndearna EcH éifeacht scíthe soithíoch ag brath ar an endothelium trí chainéil NO-cGMP-PKG-BKca a oscailt i gcealla matán mín soithigh fola (7,8). Soláthraíonn na torthaí reatha fianaise go ndearna ECH gníomhachtú AR-spleách eNOS chun táirgeadh NÍL a spreagadh le rannpháirtíocht chonair chomharthaíochta PI3K/Akt i gcealla endothelial soithíoch.

Mar an ciseal is faide istigh de bhalla an tsoithigh, is féidir leis an endothelium athruithe sa sreabhadh fola a mhothú agus freagairt go tapa, rud a fhágann go dtarchuirtear comhartha chuig na cealla matán mín bunúsacha chun ton soithíoch a rialáil (18). Tuairiscíodh go forleathan go bhfuil iolraí de chomhdhúile vasodila-díorthaithe inotelial ann, a bhfuil an tsubstaint is fréamhshamhla acu.a bheith NÍL, déanta as an isoform endothelial de eNOS, a eascraíonn i fosfarylation (19). Faoi ghnáthchoinníollacha, fanann eNOS neamhghníomhach nuair a bhíonn sé ceangailte le caveolin, agus cuirtear i ngníomh é leis na himeachtaí seo a leanas in endothelialcealla: i) dícheanglaíonn eNOS ó caveolin-1 agus comhlaigh le ca2 móide /caM; ii) cuireann próitéin turraing teasa (HSP)90 eNOS chun cinndimerization agus i bhfabhar foirmiú steiriúla chun Akt a earcú; agus iii) dephosphorylates calcineurin Thr495 chun an stát gníomhachtaithe a neartú (20). Sa staidéar reatha, tháinig méadú suntasach ar tháirgeadh NÍL sna HUVECanna a cóireáladh le 1 µM ECH. Bhí an feiniméan seo cosúil le torthaí roimhe seo, nuair a mhéadaigh EcH NÍL scaoileadh agus spreag sé sintéis cGMP i fáinní aortach thoracacha francach (7). Ina theannta sin, is cosúil go bhfuil tábhacht ar leith ag baint le dhá shuíomh fosfair, Ser1177 agus Thr495, chun gníomhaíocht eNOS a rialáil (20), agus léirigh an staidéar reatha gur spreag EcH fosfarylation géarmhíochaine eNOS ag Ser1177 ar bhealach a bhraitheann tiúchan. Ina theannta sin, is iad na spreagthaigh a bhaineann leis na héifeachtaí ar leibhéil próitéine eNOS a chinneann cobhsaíocht eNOS mRNA den chuid is mó, agus má choinnítear an spreagadh ar feadh tréimhse níos faide ama, tarlaíonn trascríobh mRNA eNOS trí kinase próitéine mitogen-gníomhachtaithe agus fachtóir núicléach κB (20). Nuair a chuirtear le chéile iad, tugann na breathnuithe seo le fios go bhfuil gníomhachtú eNOS ag Ser1177 freagrach as NÍL sintéis arna spreagadh ag EcH.

Ina theannta sin, tá méadú tagtha ar líon na staidéar a léirigh go gcuirtear AR in iúl i gcealla endothelial i roinnt fíocháin daonna, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh ról féideartha a bheith ag androgens agus a n-analógacha, a ghníomhaíonn trí phróisis AR-idirghabhála, i modhnú inotelial daonna. hoiméastáis cille (21). Sa chonair PI3K/Akt neamhchlasaiceach, féadfaidh AR PI3K a ghníomhachtú trí idirghníomhú go díreach le fo-aonad rialála PI3K p85 (22). Léiríodh sa staidéar reatha gur laghdaigh frithghníomhaí AR nó AR siRNA an táirgeadh NÍL agus fosfarylation eNOS a tharlódh de bharr EcH in HUVEcs. Tuairiscíodh roimhe seo go gcothaíonn estrogens fosfarylation eNOS agus go spreagann siad táirgeadh NÍL trí ghníomhachtú clasaiceach ER i gcealla endothelial (23), agus cuireann riaradh ECH go mór le léiriú ER san uterus (24). Mar sin féin, sa staidéar seo, bhí éifeacht AR níos suntasaí i gcomparáid le tionchar ER ar ghníomhachtú eNOS arna spreagadh ag EcH agus ar tháirgeadh NÍL. Ina theannta sin, tugadh faoi deara go ndearna EcH táirgeadh géar NÍL laistigh de nóiméid trí ghníomhachtú eNOS bainteach le AR in HUVEcs, atá ag teacht le nádúr neamh-genomic an fhreagra i gcealla endothelial. Tá baint ag an AR le próitéiní scafall, lena n-áirítear HSP90, HSP70 agus kinase Src, sa cíteaplasma, agus is féidir é a iompar chuig an membrane ón gcoimpléasc AR laistigh de 5 nóiméad de chóireáil testosterone (23). Bunaithe ar an straitéis 'spriociascaireachta', aithníodh HSP90 mar an sprioc atá nasctha le PhGs, a léirigh go bhféadfadh EcH éascú a dhéanamh ar dhíthiomsú AR ó na próitéiní scafall (25). Mhol staidéar eile, sa hypothalamus, go bhféadfadh EcH comhcheangal leis an bpóca AR ag aimínaigéid Met-894 agus Val{-713 agus bac a chur ar iompar AR cíteaplasmach chuig an núicléas (26). Mar sin féin, tá gá le himscrúdú breise ar an meicníocht bhunúsach trína ndéanann EcH idirghabháil ar thraslonnú AR cíteaplasma chuig an scannán. Dá bhrí sin, tá gá le tuilleadh taighde chun an mheicníocht trína mbaineann EcH amach gníomhachtú eNOS AR-spleách a shoiléiriú agus conas a d'fhéadfadh sé a bheith bainteach le ceangal le HSP90 i gcealla endothelial soithíoch.

Tá an cosán PI3K/Akt ar cheann de na cascáidí comharthaíochta is tábhachtaí, a spreagtar a ghníomhachtú trí phosphatidylinositol-3,4,5-trisfhosfáit a tháirgeadh chun fearann ​​homaleolaíochta pleckstrin N-teirminéal an Ser/ a cheangal. Trí kinase Akt. Éascaíonn sé seo earcú Akt chuig an scannán plasma (27). D’fhéadfadh go mbeadh ról tábhachtach ag cosán PI3K/Akt i rialú scíthe NÍL-spleách a tharlódh de bharr EcH.

Léirigh an staidéar reatha gur laghdaíodh táirgeadh NÍL spreagtha EcH go suntasach nuair a goradh na cealla leis an inhibitor PI3K wortmannin. Léirigh tuarascáil roimhe seo gur ghníomhaigh 15 mg/kg EcH an cosán comharthaíochta PI3K/Akt i gcealla smeara faoi chois 5-fluorouracil (28). Sa staidéar reatha, laghdaigh coscairí PI3K go suntasach fosfarylation eNOS de bharr EcH ag Ser1177. Thairis sin, bhí gníomhaíocht Akt rialaithe den chuid is mó ag cosáin in aghaidh an tsrutha, go háirithe fosfarylation PI3K-spleách ag Ser473 (20). Sa staidéar seo, d'eascair EcH Akt phosphorylation ag Ser473 ar bhealach dáileog-spleách; mar an gcéanna, léirigh staidéar a rinneadh roimhe seo go ndearna 5, 10 nó 20 µM EcH éifeacht chardachosanta i gcoinne cóireáil anocsa/athfhriotú ar bhealach dáileog-spleách trí p-Akt agus SLc8A3 (29) a uasrialú. Tá rialáil trascríobh na géine Akt fós anaithnid den chuid is mó (30); dá bhrí sin, dhírigh an staidéar seo ar éifeachtaí rialála iar-thscríbhinne EcH ar Akt. Agus na torthaí thuasluaite á gcur san áireamh, fuarthas amach go bhféadfadh sé go n-eascródh an cosán PI3K/Akt, a dhéanann fosfarylates eNOS agus, ina dhiaidh sin, a mhéadaíonn táirgeadh NÍL, mar thoradh ar chur i bhfeidhm EcH ar HUVEcs.

Mar fhocal scoir, is táirge nádúrtha é EcH atá scoite amach go príomha ó HerbaCistanche.Féadfaidh an méid seo a leanas a bheith san áireamh sa mheicníocht poitéinsil is bun le táirgeadh NÍL spreagtha EcH i gcealla endothelial (Fíor 6): i) Feidhmíonn EcH mar ligand feidhmiúil AR atá logánaithe chuig na caveolae sa chillscannán; ii) nascann PI3K le fearann ​​hidreafóbach Akt ag Ser473 agus éascaíonn sé earcú Akt chuig an gcillscannán; iii) spreagann earcú na gcascáidí PI3K/Akt fosfarylation eNOS-spleách ar AR; agus iv) déantar giniúint NO a idirghabháil ag eNOS i gcealla inotelial. D’fhéadfadh an bhreathnóireacht go spreagann EcH táirgeadh NÍL trí fhosfarylation AR-spleách eNOS le rannpháirtíocht an chosáin PI3K/Akt cur le tuiscint bhreise ar éifeachtaí vasorelaxant EcH. Ina theannta sin, d’fhéadfadh an EcH a dhíríonn ar na cosáin NÍL díorthaithe inotelial a bheith mar thoradh ar éifeachtaí neamhghéanómacha. Mar sin, d’fhéadfadh an staidéar reatha cuidiú leis na meicníochtaí a shoiléiriú trína bhfeidhmíonn EcH a éifeachtaí cógaseolaíochta chun galar cardashoithíoch a chosc.

Buíochas

Neamhbhainteach.

Maoiniú

Thacaigh Fondúireacht Náisiúnta Eolaíochta Nádúrtha na Síne leis an staidéar seo (deontas uimh. 81503333).

Infhaighteacht de sonraí agus ábhair

Tá na tacair sonraí a ghintear agus a ndearnadh anailís orthu le linn an staidéir seo ar fáil ón údar comhfhreagrach ar iarratas réasúnach.

Údair' ranníocaíochtaí

LG agus XL a cheap agus a dhear na turgnaimh. rinne dL agus YZ na turgnaimh. Rinne WZ agus JG anailís ar na sonraí. Dhréachtaigh LG an lámhscríbhinn. Rinne XL athbhreithniú agus eagarthóireacht ar an lámhscríbhinn. Léigh na húdair go léir an lámhscríbhinn deiridh agus d'fhaomh siad.

1202 GUet al: TÁIRGÍ OCSAÍDÍ EITRICIGH DE CHUID PI3K/AKT AR-spleách

Eitic ceadú agus toiliú chun páirt a ghlacadh

Neamhbhainteach.

Othar toiliú le haghaidh foilsiú

Neamhbhainteach.

Ag iomaíocht leasanna

Dearbhaíonn na húdair nach bhfuil aon leasanna iomaíocha acu.

Tagairtí

1. Coimisiún Pharmacopoeia na Síne:CistancheLuibh. In: Pharmacopoeia of the People's Repulic of china 1. smig. Med. Sci. Press, Beijing, lgh 135, 2015.

2. Jiang Z, Wang J, Li X agus Zhang X: Echinacoside agusCistanche tubulosa(Schenk)R. wight feabhas a chur ar dhamáiste testicular A-spreagtha bisphenol agus sperm i bhfrancaigh trí einsímí stéaróideacha rialaithe ais gonad. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016.

3. Liu J, Yang L, dong Y, Zhang B agus Ma X: Echinacoside, táirge nádúrtha neamh-mheasta i gcóireáil neamhoird néareolaíocha agus eile. Móilíní 23: piiE1213, 2018.

4. Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S agus Muraoka O: Oligoglycosides phenylethanoid agus oligosugars acylated le gníomhaíocht vasorelaxant óCistanche tubulosa. Bioorg Med ceimic 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal cK, Katsuki S agus Murad F: Gníomhaíonn ocsaíd nítreach cyclase guanylate agus méadaíonn sé leibhéil monafosfáit guanóisín 3':5'-timthriallach in ullmhóidí fíocháin éagsúla. Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977.

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wuren TN, Lu dX, Zhou Y agus Ge RL: Éifeacht antiproliferative taobh echinaco- ar artaire scamhógach francach cealla muscle mín faoi hypoxia. J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014.

7. He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ agus Tu PF: Faigheann Echinacoside scíthe spleách ar an endothelium i bhfáinní aortach francach trí chonair NO-cGMP. Planta Med 75: 1400-1404, 2009.

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wuren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y agus Ge RL: Echinacoside induces francach artaire scamhógach vasorelaxation ag oscailt an NO-cGMP-PKG- cainéil BKca agus leibhéil ca2 móide intracellular a laghdú. Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015.

9. Maruhashi T, Kihara Y agus Higashi Y: Measúnú ar vasodilation endothe- lium-neamhspleách: Ó mhodheolaíocht go peirspictíochtaí cliniciúla. J Hipirtheannas 36: 1460-1467, 2018.

10. Ahmad KA, Ze H, chen J, Khan FU, chen X, Xu J agus díorthach ar chealla endothelial vein imleacáin daonna i gcoinne gortú ocsaídiúcháin de bharr strus: Rannpháirtíocht frithocsaídiúcháin agus cosáin chomharthaíochta PI3k/Akt/eNOS/NO. Cógaiseoir Bithmhínithe 106: 1734-1741, 2018.

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y agus Okabe T: Src kinase-mediates gníomhachtú neamh-genomic receptor androgen-spleách ar easghluaiseachta comharthaíochta as a dtiocfaidh synthase ocsaíd nítreach endothelial. . Biochem Bioph Res commun 424: 538-543, 2012.

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Son B, Kato S, Ouchi Y agus Okabe T: Gníomhachtú receptor-spleách Androgen de endothe- lial ocsaíd nítreach synthase i gcealla endothelial soithíoch: Ról fosfatidylinositol {{3} }cosán kinase/Akt.Inchríneolaíocht 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F agus Reno F: Iomadú agus imirce NÍL spleách de bharr vitimín d in HUVEc. J Steroid Biochem 149: 35-42, 2015.

14. He Y, Luan Z, Fu X agus Xu X: Cuireann ró-eisiúint próitéine díchúplála 2 bac ar an apoptosis ard glúcóis-spreagtha i gcealla umbilical vein endothelial daonna. Int J Mol Med 37: 631-638, 2016.

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X , Jian-Hua H , Wen-Jiang Z agus Bing S: Cuireann Icariin moill ar sheanaoise ceallacha endothelial homocysteine-spreagtha a bhaineann le gníomhachtú an chosáin chomharthaíochta PI3K/AKT-eNOS. Pharm Biol 51: 433-440, 2013.

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ agus Klenk dc: Tomhas próitéine ag baint úsáide as aigéad bicinchoninic. Bithcheimic Anal 150: 76-85, 1985.

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H agus Liu X: biosintéis triterpenoid agus an freagra trascríobh a fhaigheann ocsaíd nítreach i gcoipeadh báiteGanoderma luicidum. Próiseas Biochem 60: 19-26, 2017.

18. Ellinsworth dc , Sandow SL, Shukla N, Liu Y, Jeremy JY agus Gutterman dd: Hyperpolarization díorthaithe de bharr endothelium agus vasodilation corónach: róil éagsúla agus chomhtháite aigéid eapocsa-ícosatrienóch, sárocsaíd hidrigine, agus acomhail bhearna. Micreachiorclú 23: 15-32, 2016.

19. Freed JK agus Gutterman dd: tá an chumarsáid ríthábhachtach: Meicníochtaí na comharthaíochta idircheallacha in vasodilation. J cardashoithíoch Pharm 69: 264-272, 2017.

20. Quillon A, Fromy B agus díbrít R: Braite micrea-chomhshaoil ​​an endothelium as a dtiocfaidh vasodilation idirghabhála ocsaíd nítreach: Athbhreithniú ar chomharthaí néarógacha agus bithmheicniúla. Ocsaíd Nítreach 45: 20-26, 2015.

21. Torres-Estay V, carreno dV, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS agus Smith GJ: Gabhdóir androgen i gcealla endothe-lial daonna. J Endocrinol 224: 131-137, 2015.

22. deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H agus Gui YT: Déantar gníomh neamhgenomic an androgens a idirghabháil trí gháinneáil ar ghabhdóirí androgen a fhosfarú agus a rialáil go tapa. Bithcheimic Physiol Cill 43: 223-236,2017.

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP agus Ghedini Pc: Gníomhachtaithe conair PI3K/Akt arna idirghabháil ag gabhdóirí estrogen cuntais ar spreagtha ag estrone gníomhachtú soithíoch comharthaíocht cGMP. Cógaslann Vascul 110: 42-48, 2018.

24. Li F, Yang X, Yang Y, Guo c, Zhang c , Yang Z agus Li P: Gníomhaíocht antiosteoporotic de echinacoside i bhfrancaigh ubhagánacha. Fítea-leigheas 20: 549-557, 2013.

25. Zeng KW, Liao LX, Wan YJ, Jiang Y agus Tu PF: Sainaithint spriocanna cógaseolaíochta agus anailís éifeachtúlachta ar gliocóisídí feinileatánóideach ócistéirHerba bunaithe ar straitéis 'spriociascaireachta'. smig Tradit Drugaí luibhe 49: 173-178, 2018.

26. Jiang Z, Zhou B, Li X, Kirby GM agus Zhang X: Méadaíonn Echinacoside cainníocht sperm i bhfrancaigh trí dhíriú ar an receptor androgen hypothalamic. Sci Rep 8: 3839-3850, 2018.

27. coffer PJ, Jin J agus Woodgett JR: Próitéin kinase B (c-Akt): Idirghabhálaí ilfheidhmeach fosfatidylinositol 3-gníomhaíocht kinase. Biochem J 335, 1-13, 1998.

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y agus Qian J: Feabhsaíonn Echinacoside feidhm hematopoietic i 5-lucha myelosuppression spreagtha ag Fu. Life Sci 123: 86-92, 2015.

29. chen M, Wang X, Hu B, Zhou J, Wang X, Wei W agus Zhou H: Éifeachtaí cosanta an echinacoside i gcoinne gortú anocsa/athfhriotaithe i gcealla H9c2 trí p-AKT agus SLc8A3 a rialú suas. Cógaiseoir Bithmhínithe 104: 52-59, 2018.

30. Abeyrathna P agus Su Y: Ról criticiúil Akt san fheidhm chardashoithíoch. Vascul Pharmacol 74: 38-48, 2015.