Paraisítí, Ionfhabhtuithe, Agus Ionaclú i gCealla Íosta Sintéiseach

Teibí: Soláthraíonn cealla íosta sintéiseacha samhail inrialaithe agus in-innealtóireacht do phróisis bhitheolaíocha. Cé go bhfuil siad i bhfad níos simplí ná aon chill nádúrtha bheo, cuireann cealla sintéiseacha fonnadh ar fáil chun bunsraitheanna ceimiceacha príomhphróisis bhitheolaíocha a imscrúdú. Anseo, léirímid córas cealla sintéiseach le cealla óstacha, ag idirghníomhú le paraisítí agus ag dul faoi ionfhabhtuithe de dhéine éagsúla. Léirímid conas is féidir an t-óstach a innealtóireacht chun ionfhabhtú a chomhrac, déanaimid imscrúdú ar an gcostas meitibileach a bhaineann le frithsheasmhacht a iompar, agus léirímid ionaclú a imdhíonadh an t-óstach i gcoinne pataiginí. Leathnaíonn ár gcuid oibre an bosca uirlisí innealtóireachta cille sintéiseacha trí idirghníomhaíochtaí óstaigh-pataigine a thaispeáint agus meicníochtaí chun díolúine a fháil. Tugann sé seo córais cille sintéiseach céim níos gaire do shamhail chuimsitheach den saol nádúrtha casta a sholáthar.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

RÉAMHRÁ

Le blianta beaga anuas, tá pléascadh tagtha ar réimse na bitheolaíochta sintéiseacha, rud a ligeann do thógáil cealla sintéiseacha atá cosúil le gnéithe den saol bitheolaíoch nádúrtha agus a mhúnlaíonn iad. Tá go leor buntáistí ag baint le samhaltú bealaí agus iompraíochtaí ceallacha i gcealla sintéiseacha thar chealla beo mar thimpeallacht imoibrithe níos simplithe agus níos sainithe, rialú iomlán ar chomhdhéanamh próitéamaíoch agus ceimiceach na cille, an cumas bealaí agus próisis bhitheolaíocha trasnacha a roinnt, chomh maith le cothabháil córais thábhachtacha bhitheolaíocha atá as láthair i gcórais imoibrithe in vitro.1,2 Cheadaigh sócmhainní uathúla na dteicneolaíochtaí cealla sintéiseacha seo cheana féin dálaí agus conairí bitheolaíocha a ionsamhlú laistigh de bhith-imoibreoir in vitro (cill shintéiseach) atá cosúil le beatha agus thug siad tuiscint níos fearr ar go leor réimsí staidéir, lena n-áirítear plódú móilíneach, 3 dinimic próitéine lipid,4 meitibileacht íosta,5 agus go leor gnéithe ríthábhachtacha eile den saol bitheolaíoch.2 Tá na cealla sintéiseacha seo atá cosúil le saolré agus a gcuid sócmhainní uathúla ag éirí ina samhlacha níos fearr agus ag cur níos mó solais isteach oibriú mistéireach inmheánach na beatha ceallacha.6,7 Níl na cinn seo teoranta do phróisis aoncheallacha; Chruthaigh idirghníomhaíochtaí innealtóireachta idir daonraí liposomes teicneolaíocht chumhachtach freisin. Mar shampla, forbraíodh dearadh córais cheallacha sintéiseacha a dhéanann aithris ar chaidreamh creachadóir-creiche ag úsáid solas mar an comhartha idir na daonraí cealla sintéiseacha seo.8 Forbraíodh obair chasta eile a cheadaíonn iomadú comhartha ar fud maitrís braoiníní cille sintéiseacha, ag ligean don fhluaraiseacht leathadh ar bhealach spásúil i measc an daonra.9 Chomh maith le hidirghníomhaíochtaí sintéiseacha cille-cille, rinneadh dul chun cinn le déanaí i gcomhéadain shintéiseacha cille beo-chealla freisin. Mar shampla, tá sé léirithe go bhfuil cill shintéiseach atá deartha chun comhéadan a dhéanamh le gascheall néarach in ann difreáil néarúil a chothú chomh maith le feidhmiú mar fhonnadh ginearálaithe atá in ann comhéadan a dhéanamh le cineálacha cille eile.10 Tá dul chun cinn suntasach déanta san fhorbairt iomadú comhartha agus cealla sintéiseacha ag feidhmiú mar chomhéadain, a ndéantar cuid mhór de a iniúchadh sna hathbhreithnithe seo a leanas.11–13 Go hachomair, tá réimsí iomlána taighde ann a bhaineann le haithris a dhéanamh ar idirghníomhaíochtaí daonraí ceallacha i gcóras múnla na gceall sintéiseach. In ainneoin seo, ní dhearnadh staidéar a úsáideann cealla sintéiseacha chun ionfhabhtú, seadánachas nó ionaclú a shamhaltú. Díreach mar a úsáidtear cealla sintéiseacha go coitianta chun próisis chasta bhitheolaíocha a shamhaltú ar bhealach simplithe agus rialaithe, tá an acmhainneacht ann chun na hidirghníomhaíochtaí casta idir-orgánacha seo a shamhaltú. Is féidir an tábhacht a bhaineann leis seo a fheiceáil sa staidéar ceannródaíoch a d’éirigh le cáithníní phage gníomhacha a tháirgeadh laistigh d’ardán léirithe próitéine saor ó chealla.14 Tá sé mar aidhm againn an coincheap seo a thabhairt chuig an macra-leibhéal trí dhaonraí cille sintéiseacha a dhearadh ar féidir leo a chéile a ionfhabhtú go gníomhach agus fuadach. géanóm cille ósta, díreach mar a dhéanann víris agus paraisítí beo. Is uirlis luachmhar don phobal eolaíoch é a bheith in ann cealla sintéiseacha a chur i bhfeidhm agus a innealtóireacht chun na hiompraíochtaí galair seo a shamhaltú.

Sa saothar seo, cuirimid ár gcóras um shamhaltú galair cille sintéiseacha ar taispeáint. Rinneamar innealtóireacht ar chillín ósta a d'fhéadfadh ionfhabhtú a fháil ón dara daonra de chealla sintéiseacha seadánacha agus rinneamar imscrúdú ar an gcomórtas acmhainne, an fuadach géanóim, agus an t-athúsáid meitibileach a tharlaíonn le linn ionfhabhtú den sórt sin. Déanaimid múnla freisin ar mhodh a cheadaíonn an t-óstach a tharrtháil tar éis ionfhabhtaithe chomh maith le modh ionaclaithe a ligfidh don óstach in aghaidh ionfhabhtú na gceall sintéiseacha is cúis le galair. I mbeagán focal, cuirimid i láthair fonnadh samhail galair agus ionfhabhtaithe nua do chealla sintéiseacha. Leis an teicneolaíocht seo, is féidir tús a chur le cealla sintéiseacha a úsáid mar mhúnlaí bunúsacha le haghaidh galair, ionfhabhtú agus ionaclaithe (Fíor 1).

Fíor 1. Paraisít, ionfhabhtú, agus córas ionaclaithe i gcealla íosta sintéiseacha. (a) Is cill shintéiseach é an "óstach" a shloinneann próitéin fluaraiseacha glas (GFP). Ar dhromchla an scannáin sheachtraigh, iompraíonn an t-óstach clibeanna ssDNA. Is iad na próitéiní amháin a aistrítear go hóstach sláintiúil ná próitéiní an óstaigh féin ó na plasmid a cruthaíodh an t-óstach leo. (b) Is liposome é an "parasite" atá líonta le DNA plasmid a ionchódaíonn géine do phróitéin fluaraiseacha mCherry, agus maisítear dromchla an liposome parasite le clib ssDNA (comhlántach leis an gclib ar dhromchla an óstaigh). Tosaíonn an "ionfhabhtú" le comhleá de liposomes an óstaigh agus parasite, arna idirghabháil ag na clibeanna DNA comhlántacha ar a ndromchla. Tar éis an ionfhabhtaithe, cuireann an t-óstach an géine óstach bunaidh (GFP) agus an ghéine parasite (mCherry) in iúl. (c) Tosaíonn an "ionfhabhtú" le liposóim "pataigine" a iompraíonn géin don einsím srianta MunI a chomhleáíonn leis na liposóim óstacha. Cuireann an t-óstach géine pataigin MunI in iúl agus díolama an einsím srianta MunI DNA óstach. Mar thoradh air seo déantar an genome óstaigh dúchais a dhíleá, ag casadh an chuid is mó den abairt próitéine óstach ó GFP go próitéin ionchódaithe an phataigin, MunI. (d) Is éard atá san "ionfhabhtú marfach" comhleá den liposome óstaigh (leis an géanóm GFP) leis an lipeasóm pataigin a bhfuil an ghéin ionchódaithe aHL ann, próitéin membrane. Tar éis an ionfhabhtaithe, cuireann an t-óstach in iúl aHL, rud a chruthaíonn pores membrane, is cúis le sceitheadh ​​​​cothaithigh óstach agus go héifeachtach stopann meitibileacht an óstaigh. (e) Is éard is "imdhíonadh" ann gor an óstaigh le ssDNA ina bhfuil seicheamh atá comhoiriúnach leis na clibeanna comhleá ar dhromchla na liposóim ósta. Cruthaíonn an DNA imdhíonta déphléacsacha le clibeanna DNA óstaigh, rud a chuireann cosc ​​ar hibridiú oligos DNA eile chuig na clibeanna seo. Cuireann sé seo cosc ​​​​ar chomhleá aon liposomes pataigineach don ósta. Is figiúr cruthúnas coincheap é seo, agus is chun críocha léiriúcháin iad na graif, a léiríonn méideanna coibhneasta próitéine a chuirtear in iúl ón óstach agus pataiginí éagsúla. Soláthraítear fíorshonraí do gach córas sna figiúirí ina dhiaidh sin.

TORTHAÍ AGUS PLÉ

Sa saothar seo, bainimid úsáid as na focail: óstach, seadán, ionfhabhtú, marfach, vacsaíniú, agus ionaclú i gcomhthéacs na gcóras cealla sintéiseacha neamhbheo. Trí ionfhabhtú "marfach", is éard atá i gceist againn laghdú suntasach ar aistriúchán i ndaonra na gcealla sintéiseacha. Rinneadh na turgnaimh go léir san obair seo ar chealla sintéiseacha nach bhfuil beo, nach ndéanann féin-mhacasamhlú, agus nach n-eascraíonn siad. Is córas eiseamláireach é seo le haghaidh airíonna agus próisis bhitheolaíocha nádúrtha.

forlíonadh cistanche sochair-díolúine a mhéadú

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Ionfhabhtú Cille Sintéiseach le Hijacks Cille Sintéiseach Seadánacha Acmhainní Óstach.

Chun tástáil a dhéanamh ar an gcoincheap maidir le córas cille sintéiseach a dhéanfadh aithris ar ionfhabhtú, thosaigh muid ag tógáil córas eiseamláireach do pharasite. D’úsáideamar an coincheap is simplí de pharasite is féidir a athdhéanamh sa chóras bithcheimiceach neamhbheo seo: seadán a dhéanann cuid d’acmhainní an óstaigh a fhuadach. Sa chás seo, déantar meitibileacht an óstaigh a léiriú trí léiriú próitéin GFP, agus déantar an parasite a léiriú le léiriú próitéin mCherry. Maidir leis an gcóras seo, bhaineamar úsáid as an bhfeiniméan a léiríodh roimhe seo maidir le táirgeacht líneach slonn próitéine ag brath ar an tiúchan teimpléad DNA i TxTl.15,16 Ar dtús, leagamar amach an tiúchan plasmid iomlán is fearr a fháil ag a gcomhfhreagraíonn an cóimheas idir GFP agus DNA mCherry. an cóimheas idir an fhluaraiseacht bhreathnaithe ó na próitéiní seo. Sannamar an ghéin GFP go treallach mar an “óstach” agus an ghéin mCherry mar an “parasite”. Ní chiallaíonn na hainmneacha seo aon rud speisialta sa turgnamh áirithe seo ach léireoidh siad an t-óstach agus an parasite i dturgnaimh cille sintéiseacha ina dhiaidh sin. Anseo, bainimid úsáid as na hainmneacha seo chun é a dhéanamh níos éasca na turgnaimh cruthúnas coincheapa seo a cheangal le turgnaimh ionfhabhtuithe cille sintéiseacha ina dhiaidh sin ag baint úsáide as na plasmidanna céanna. Mheasc muid plasmids GFP agus mCherry, leis an dá ghéinte faoi rialú an tionscnóra T7 ag cóimheasa plasmid éagsúla agus tiúchan iomlán plasmid sna samplaí 1, 5, 10, nó 15 nM (Fíor 2b). Lean na torthaí an gaol beagnach líneach a rabhthas ag súil leis idir an tiúchan plasmid agus an déine fhluaraiseachta taifeadta, agus breathnaíodh an meaitseáil is fearr idir cóimheasa fluaraiseachta agus tiúchana plasmid ag iomlán de 10 nM plasmid. Léiríonn an gaol a breathnaíodh go bhfuil na plasmids, agus na próitéiní comhchosúil i méid agus comhdhéanamh aimínaigéad (Fíor S1), san iomaíocht don linn céanna acmhainní TxTl dá léiriú. Mar thoradh ar athrú ar thiúchan coibhneasta an dá plasmid tá athruithe ar an éifeachtúlacht slonn i gcomhréir go garbh le cóimheas na plasmids. Tugann sé seo le fios go mbeadh sé ina mhúnla maith chun aithris a dhéanamh ar ionfhabhtú seadán: beidh an genome parasite (mCherry plasmid) san iomaíocht le genome an óstaigh (GFP plasmid). Ansin, bheartaíomar cás a thástáil ina raibh ceachtar de na plasmaidí faoi smacht tionscnóra níos láidre, rud a dhéanfadh aithris ar chás leithdháilte acmhainní claonta. Chun gné iomaíochta acmhainne na dturgnaimh ionfhabhtaithe "parasite" sa todhchaí a choinneáil, choinnigh muid an dá ghéinte faoin tionscnóir céanna RNA polymerase (an T7 RNA polymerase, T7 RNAP) ach d'athraigh sé a neart. D'úsáideamar tionscnóir láidir T7 RNAP T7Max, a thaispeánann toradh trascríobh i bhfad níos airde, rud a d'eascair torthaí aistriúcháin níos airde dá réir, i TxTl.17 Rinneamar tástáil ar an socrú imoibrithe comhionann leis an gceann a thuairiscítear níos luaithe: dhá phlasmid ag cóimheasa difriúla, arna dtástáil ag iomlán deiridh éagsúil. tiúchan plasmid. Bhí ceann de na plasmids faoi smacht an tionscnóra láidir T7Max, agus bhí an ceann eile faoin tionscnóir canónach T7. Sa dá chás tástála, bhí an léiriú plasmid T7Max láidir go leor nár tháinig méadú suntasach ar fhluaraiseacht na próitéine ó ghéine faoi T7Max le tiúchan iomlán méadaithe an plasmid (Fíor 2c, 2d). Ní raibh sé cuma má bhí T7Max ag tiomáint GFP nó mCherry, d'fhreagair an dá phróitéin leis an tionscnóir níos láidre le méadú coibhneasta den chineál céanna. Sholáthair sé seo samhail a bhfuil gealladh fúthu d’ionfhabhtú le seadán “níos láidre” (seadán a iompraíonn géin faoi T7Max isteach in óstaigh faoi T7) agus an t-óstach droim ar ais níos láidre ag seasamh in aghaidh an pharasite níos laige (ósta le géanóm faoi T7Max agus seadán a iompraíonn géine T7). Spreagtha ag na turgnaimh cruthúnas-ar-phrionsabal seo, bhog muid ar aghaidh go dtí turgnaimh cealla sintéiseacha.

Is é an "ionfhabhtú," i ngach cás, comhleá cille sintéiseacha óstaigh agus parasite. Déantar an comhleá a éascú le clibeanna DNA ar dhromchla na liposomes, ag baint úsáide as an gcóras comhleá DNA-inducible a thuairiscítear roimhe seo.18 Go hachomair, cruthaíodh na cealla sintéiseacha le Escherichia coli TxTl taobh istigh de membrane POPC agus colaistéaról, agus maisíodh an bhileog seachtrach. le DNA singil shnáithe ar ancaire leis an scannán trí mhodhnú colaistéaról. Má thagann péire liposomes le clibeanna comhlántacha le chéile, déantar hibridiú ar na clibeanna DNA, ag tabhairt na seicní le chéile agus ag cur tús le comhleá membrane, agus ina dhiaidh sin déantar meascadh lumen. In ár dturgnaimh, is é an chill shintéiseach óstach an liposome ina bhfuil TxTl le T7 RNAP i dteannta leis an genome de GFP plasmid-ionchódaithe. Monatóireacht a dhéanamh ar fhluaraiseacht GFP feidhmíonn sé mar seachfhreastalaí do "sláinte" an metabolism óstaigh. Tá genome sa pharasít atá ag teacht isteach i bhfoirm mCherry ionchódú plasmid, an córas aistriúcháin iomlán, ach gan aon T7 RNA polymerase. Cinntíonn sé seo go n-eascraíonn aon athruithe a breathnaíodh ar mheitibileacht an óstaigh ó na géinte a thugann an seadán isteach agus ní ó chomhleá na seadán agus na liposomes óstaigh, rud a chaolaíonn cíteaplasma an óstaigh. Rinneadh na turgnaimh maidir le hionfhabhtú seadán leis an scannán óstach lipéadaithe le Marina Blue DHPE, dath gorm lipid lipid. Cheadaigh sé seo dúinn an fhluaraiseacht ghéine óstach agus seadán breathnaithe a normalú go dtí an fhluaraiseacht ghorm, ag normalú na dtorthaí go dtí an méid iomlán d’fhluaraiseacht membrane óstach atá sa sampla. Is éard atá i gceist leis seo ná caoluithe ar thoirt iomlán an tsampla tar éis liposomes seadán a chur leis. Ní raibh na seicní parasite lipéadaithe go fluaraiseacha. Bhí sampla rialaithe ag gabháil leis na turgnaimh go léir, áit nach raibh ach daonra amháin i láthair an t-óstach, ach le mCherry plasmid, chun na leibhéil theoiriciúil uasta léirithe mCherry a thaispeáint dá mba é an t-aon ghéine sa daonra é. Sa chéad sraith turgnaimh, mheascamar an t-óstach agus an parasite le géinte araon faoi rialú an tionscnóra rialta T7mar sin bhí an dá ghéinte ósta agus parasite chomh "láidir." Mheasc muid an t-óstach leis an parasite ionas go raibh an parasite ag 25, 50, nó 75% den daonra iomlán liposome. I ngach cás, tháinig laghdú ar fhluaraiseacht GFP an ósta i láthair an pharasite, leis an méadú comhfhreagrach ar fhluaraiseacht parasite mCherry (Fíor 2e). Níor tháinig aon fhluaraiseacht de cheachtar dath ar shamplaí nach raibh iontu ach an seadán agus gan óstach, mar a bhíothas ag súil leis. I ngach cás, níl an comhleá liposome DNA-idirghabhála 100% éifeachtach;18,19 Dá bhrí sin, ní raibh an laghdú coibhneasta ar fhluaraiseacht óstach agus méadú ar fhluaraiseacht seadán chomh mór leis an luach teoiriciúil ionchais bunaithe ar an gcóimheas idir óstaigh agus parasite. I bhfocail eile, ní raibh an ionfhabhtú 100% éifeachtach. Gné thairbheach den chóras ab ea an cháilíocht serendipteach seo den chóras comhleá spreagtha ag DNA, sa chás seo. Mar a tharla i gcás ionfhabhtú nádúrtha, níor chuir an ionfhabhtú comhleá-idirghabhála cille sintéiseach isteach ar gach óstach agus níor aimsigh gach seadán óstach. Ansin, rinneamar imscrúdú ar dhá chás, nuair nach raibh an t-óstach agus an parasite comhoiriúnaithe go cothrom i neart a ngéanóim. I gcás amháin, bhí an genome óstach faoi rialú an tionscnóra T7 agus bhí an genome parasite faoin tionscnóir T7Max (Fíor 2f), agus sa chás eile, bhí an genome óstach faoi T7Max agus bhí an genome parasite faoin tionscnóir T7. (Fíor 2g). I gcás an t-óstach níos laige a d'ionsaigh seadán níos láidre, bhí an méadú coibhneasta ar fhluaraiseacht mCherry seadánacha agus an laghdú comhfhreagrach ar fhluaraiseacht GFP óstach i bhfad níos láidre ná mar a bhí i gcás roimhe seo d'óstach cothrom agus parasite. De réir mar a bhíothas ag súil leis, nuair a bhí an t-óstach níos láidre ná an parasite, bhí a mhalairt fíor: bhí leibhéil fluaraiseachta mCherry níos ísle agus bhí an laghdú coibhneasta ar fhluaraiseacht GFP níos ísle ná mar a bhí sa chás cothrom. Is fearr é seo a léiriú trí phointe sonraí amháin a chur i gcomparáid faoi na coinníollacha ionfhabhtaithe céanna: ag cóimheas parasite 75%. Bíonn fluaraiseacht na seadán beagán níos mó ná an t-óstach mar thoradh ar dhaonraí ósta agus seadáin atá comhoiriúnaithe go cothrom. Nuair a bhíonn an parasite níos láidre, tá fluaraiseacht an parasite i bhfad níos airde ná an t-óstach. Agus nuair a bhíonn an t-óstach níos láidre, tá fluaraiseacht an parasite beagán níos ísle ná an t-óstach. Tá na pointí sonraí aibhsithe seo marcáilte le réalta bhuí i bhFíor 2e−g. Rinneamar an turgnamh rialaithe ar óstaigh a bhí ionfhabhtaithe le parasite "asimptómach" a bhí ag iompar plasmid leis an tionscnóir T7 ach gan aon seicheamh códaithe próitéine (bhaineamar caiséad mCherry ón plasmid) (Fíor 2h). Laghdaíonn fluaraiseacht GFP an óstaigh go híosach ag leibhéil paraisítí níos airde, rud a thugann le fios go gcaitear roinnt acmhainní óstacha ar an RNA gearr neamhchódaithe ón parasite plasmid a thras-scríobh. Deimhníonn na sonraí seo freisin gurb é an t-ualach meitibileach is mó a bhaineann leis an ionfhabhtú seadán ar an óstaigh ná úsáid a bhaint as acmhainní aistritheacha seachas acmhainní tras-scríbhinne. Tagann an bhreathnóireacht seo le breathnuithe roimhe seo ar aistriúchán mar an acmhainn is athróg agus níos teorannaí i gcórais saor ó chealla.20 Tríd is tríd, soláthraíonn na turgnaimh seo samhail d’ionfhabhtú le seadán a dhéanann fuadach acmhainní meitibileach an óstaigh, agus déantar aithris ar iompraíochtaí sintéiseacha cille. gnéithe de chaidreamh nádúrtha óstaigh-parasite.

Fíor 2. Gabhann ionfhabhtú parasite acmhainní an óstaigh. (a) Tá córas aistriúcháin saor ó chill agus GFP ionchódaithe plasmid sa liposome cille sintéiseach óstaigh. Tá dromchla an óstaigh maisithe le clibeanna ssDNA. Tá ionchódú plasmid mCherry sa liposome parasite, le córas aistriúcháin ach níl aon RNA polaiméaráis ann (mar sin ní féidir leis an seadán mCherry a chur in iúl). Tá dromchla an pharasite maisithe le clibeanna ssDNA atá comhlántach leis na clibeanna ar dhromchla an óstaigh. Éascaíonn na clibeanna DNA comhleá na liposomes óstaigh agus seadán agus cuireann an t-óstach a GFP géanóm féin agus an genome seadánacha ina bhfuil mCherry in iúl. (b−d) Cruthúnas ar phrionsabal do ghéanóim an óstaigh (GFP) agus na seadán (mCherry) atá san iomaíocht do na hacmhainní cealla sintéiseacha céanna. Déantar na turgnaimh seo i dtuaslagán TxTl, ní i liposomes. Meascaíodh dhá phlasmid, ag ionchódú GFP agus mCherry, ag an gcóimheas a léirigh na deilbhíní plasmid ar thaobh na láimhe clé den léarscáil teasa, le tiúchan iomlán DNA an tsampla léirithe sa tsraith os cionn an léarscáil teasa. Tomhaiseadh fluaraiseacht i gcainéil ghlasa (GFP) agus dearg (mCherry). Rinneadh tástáil ar gach plasmid in dhá leagan le tionscnóirí de láidreachtaí éagsúla: le T7 agus leis an tionscnóir T7Max níos láidre. Soláthraítear sonraí aonair do gach léarscáil teasa i bhFíoracha S2-S4. Soláthraítear cúrsaí ama aonair ionadaíocha do léiriú próitéine an óstaigh T7 agus an seadán i bhFíoracha S5-S7 agus don pharasite T7Max i bhFíoracha S8-S10. (e−g) Ionfhabhtú an óstaigh leis an seadán. I ngach turgnamh, déantar liposomes óstach a mheascadh le liposomes parasite. Seachadann comhleá an pharasite chuig an óstach DNA seadánacha mCherry, a chuirtear in iúl taobh le DNA GFP an óstaigh. Rinneadh tástáil ar chóimheasa éagsúla idir an óstaigh agus an seadán, mar atá léirithe ag na deilbhíní faoi bhun na mbarrghraif. Bhí an genome óstach faoin tionscnóir T7 ionfhabhtaithe le parasite lena genome faoin bpainéal tionscnóra T7 (e) agus le parasite lena genome faoi phainéal tionscnóra T7Max (f), rinneadh an t-óstach freisin le genome T7Max agus ionfhabhtaithe. leis an parasite le painéal genome T7 (g). Soláthraítear cúrsaí ama aonair ionadaíocha do léiriú próitéine i bhFíor S11. Soláthraítear turgnaimh chosúla ag tiúchana lipid iomlána níos airde agus níos ísle i bhFíor S12. Soláthraítear rianta íonúcháin méid-eisiaimh a thaispeánann postfusion cobhsaíochta na feiscíní i bhFíor S13. (h) Ionfhabhtú le seadán neamh-chomhoiriúnach: iompraíonn an seadán an tionscnóir T7 ach ní dhéantar é a chódú. Léiríonn barraí earráide SEM, n=3. Déantar luachanna fluaraiseachta i bpainéil (e−h) a normalú go dtí an fhluaraiseacht ghorm de dhath membrane chun na torthaí a normalú go dtí tiúchan na gceall óstach. Is turgnaimh iad na sraitheanna samplacha go léir a bhfuil an lipéad “óstach GFP ionfhabhtaithe” orthu, áit a raibh clibeanna comhlántacha DNA ag an óstaigh agus an parasite ar an dromchla, rud a chuir ar chumas comhleá na liposomes, ar a dtugtar ionfhabhtú. Samplaí de thaispeántais sraith-lipéadaithe "óstach GFP sláintiúil", áit a raibh an t-óstach agus an parasite measctha ag na cóimheasa a thaispeántar, ach nach raibh clibeanna comhleá comhlántacha iontu, rud a fhágann nach féidir ionfhabhtú a dhéanamh. Léiríonn an diamant i bpainéil (e−h) riocht ionfhabhtaithe ar leith amháin a léiríonn is fearr na difríochtaí i láidreachtaí léirithe an óstaigh agus na seadán i bpainéil (e−g) agus na buntáistí a bhaineann le díolúine óstaigh i bpainéal (h). Tugtar comparáid dhíreach i bhFíor S14 idir na luachanna óstaigh agus paraisítí a chomharthaíonn an réalta. Léirítear sonraí maidir le hionfhabhtú le seadán gan aon plasmid i bhFíor S15.

Féadann Ionfhabhtú Cille Sintéiseach an Géanóim Óstach a Scriosadh.

Bhí an parasite a thuairiscítear thuas ag léiriú mCherry genome-ionchódaithe ag baint úsáide as acmhainní an óstaigh, ach choinnigh an t-óstach cuid dá meitibileacht agus lean sé ag cur GFP in iúl in ainneoin an ionfhabhtaithe. Ansin, shocraigh muid imscrúdú a dhéanamh ar chóras ina n-eascraíonn an t-ionfhabhtú go n-iompraíonn an seadán meitibileacht an óstaigh go hiomlán trí ghéanóm an óstaigh a scriosadh (Fíor 3a). Chun cás den sórt sin a innealtóireacht, rinneamar imscrúdú ar díolama einsíme srianta de phlasmid i TxTl. Sna turgnaimh cruthúnas-ar-phrionsabal, cuireadh einsím srianta MunI in iúl i TxTl gan liposomes. Meascadh an plasmid MunI le plasmid GFP ag cóimheasa éagsúla. Mura bhfuil aon láithreáin srianta MunI sa plasmid GFP, is féidir an laghdú measartha beag ar fhluaraiseacht GFP a breathnaíodh a chur i gcuntas ag an iomaíocht a thuairiscítear roimhe seo idir an dá plasmid le haghaidh acmhainní TxTl. Má tá suíomh srianta MunI ag an plasmid GFP, laghdaítear an fhluaraiseacht GFP go suntasach, agus laghdaítear an laghdú go comhréireach le méid méadaithe den plasmid MunI-ionchódaithe (Fíor 3b). Rinneadh monatóireacht ar slonn MunI trí Western Blot agus scálaíodh é go comhréireach leis an tiúchan plasmid (Fíor 3c).

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Arna spreagadh ag na torthaí seo, chuireamar turgnamh ionfhabhtaithe ar bun le cealla sintéiseacha. D'iompair an t-óstach an plasmid GFP agus d'iompair an pataigin an MunI plasmid. Socraíodh an tiúchan de plasmid GFP agus MunI go 2 mM, i bhfad faoi bhun an tiúchan sáithiúcháin plasmid do TxTl.21 Bhí sé beartaithe againn fanacht faoin tiúchan iomlán plasmid ag a mbeadh léiriú óstaigh agus seadán ard go leor chun dul san iomaíocht go díreach le haghaidh acmhainní teoranta ( cosúil leis an gcás thuas-cur síos ar a parasite simplí), ina ionad sin ar intinn a thomhas den chuid is mó ar an éifeacht na heinsíme parasite scrios go gníomhach an genome óstach. Cosúil leis na turgnaimh parasite a ndearnadh cur síos orthu roimhe seo, bhí TxTl agus T7 RNA polymerase baictéarach san ósta, ní raibh ach sliocht cille ag an bpataigin gan T7 RNA polymerase, agus lipéadaíodh an t-óstach agus an pataigin le clibeanna comhleá DNA comhlántacha. Lipéadaíodh an membrane óstach le Marina Blue DHPE chun torthaí fluaraiseachta a normalú go dtí an tiúchan de liposomes óstaigh. Meascadh an t-óstach agus an pataigin ag cóimheasa éagsúla, agus ba é 25, 50, nó 75% den daonra iomlán, an phataigin. Tháinig laghdú ar fhluaraiseacht an óstaigh "ionfhabhtaithe", áit a raibh clibeanna comhleá comhlántacha ar an óstaigh agus ar an bpataigin, le méadú ar an méid pataigin. Níor tháinig laghdú ar fhluaraiseacht GFP ón óstach "sláintiúil", i gcás nach raibh clibeanna comhleá comhlántacha sa phataigin, i láthair aon mhéid pataigin. Ní raibh fluaraiseacht intomhaiste ar bith mar thoradh ar shamplaí nach raibh iontu ach an pataigin (Fíor 3d). Rinneadh an slonn próitéine pataigineach MunI a chainníochtú ag baint úsáide as anailís Western Blot, le sonraí léirithe don tsraith samplach den óstaigh ionfhabhtaithe (Fíor 3e). Ansin, rinneamar imscrúdú ar ionfhabhtú i gcás ósta atá imdhíonachta don phataigin: ní raibh suíomh srianta MunI ag an plasmid GFP óstach (Fíor 3f). Tháinig laghdú ar fhluaraiseacht an óstaigh tar éis an ionfhabhtaithe ach ní raibh sé chomh suntasach agus a bhí i gcás óstach a raibh suíomh MunI sa ghéanóm aige roimhe seo. Cuireadh próitéin pataigin MunI in iúl ag leibhéil atá inchomparáide le turgnaimh ionfhabhtaithe níos luaithe (Fíor 3g), agus mar sin bhí an t-ualach meitibileach ar an ósta cosúil. Is é is cúis leis an laghdú ar fhluaraiseacht óstach ionfhabhtaithe sna turgnaimh seo ná go bhfuil cuid de na hacmhainní óstaigh á bhfuadach ag an bpataigin a léiríonn MunI, ach toisc go bhfuil an tiúchan iomlán plasmid i bhfad níos ísle ná mar a rinneadh i dturgnaimh phataigineacha simplí níos luaithe, níl an laghdú ar fhluaraiseacht an óstaigh chomh suntasach. Deimhníonn an turgnamh seo freisin gur cúrsaí ama léirithe próitéine a chuirtear ar fáil i bhFíor S22 ba chúis leis an laghdú ar fhluaraiseacht an óstaigh le suíomh MunI (Fíor 3d). (g) Rianaíodh slonn MunI trí anailís bhloic thiar tríd an turgnamh le haghaidh na samplaí a thaispeántar sa tsraith “GFP ionfhabhtaithe” i bpainéal (f). Léiríonn barraí earráide ar na painéil go léir SEM, n=3. Déantar luachanna fluaraiseachta i bpainéil (d, f) a normalú go dtí an fhluaraiseacht ghorm den dath membrane a úsáidtear chun na torthaí a normalú go dtí tiúchan na gceall óstach. Déantar fluaraiseacht i bpainéal (b) a normalú go 0 mM Muni plasmid do gach sraith samplach. Leagann na siombailí diamanta i bpainéil (d, f) béim ar riocht ar leith amháin a léiríonn is fearr na difríochtaí i bhfreagraí ar an ionfhabhtú ó óstaigh atá so-ghabhálach don phainéal pataigin (d) agus imdhíonach don phainéal pataigin (f). Is turgnaimh iad na sraitheanna samplacha go léir a bhfuil an lipéad "GFP ionfhabhtaithe orthu", áit a raibh clibeanna DNA comhlántacha ag an ósta agus an pataigin ar an dromchla, rud a chuir ar chumas na liposomes a chomhleá, ar a dtugtar ionfhabhtú. Taispeánann an tsraith lipéadaithe "GFP sláintiúil" samplaí, áit a raibh an t-óstach agus an pataigin measctha ag na cóimheasa a thaispeántar ach nach raibh clibeanna comhleá comhlántacha iontu, rud a fhágann nach féidir ionfhabhtú a dhéanamh.

Figiúr 3. Scriosann ionfhabhtú an genome óstaigh agus hijacks acmhainní óstaigh. (a) Tá GFP ionchódaithe plasmid sna cealla óstacha, le dhá shuíomh srianta MunI; sa phataigin tá plasmid ionchódú an einsím srianta MunI. Tar éis comhleá an óstaigh agus an phataigin, cuireann an t-óstach TxTl an einsím srianta MunI in iúl, a dhíscaoileann an genome óstach ansin. (b) Turgnaimh cruthúnais-phrionsabail don ionfhabhtú: ullmhaíodh plasmid GFP le suíomhanna srianta MunI agus gan iad. Meascadh plasmid GFP le plasmid MunI agus taifeadadh léiriú GFP. Rinneadh na turgnaimh seo i dtuaslagán TxTl gan liposomes. Léirítear cruthúnas ar phrionsabal don turgnamh ionfhabhtaithe, agus an einsím MunI curtha leis go seachtrach in ionad í a shloinneadh i TxTl, i bhFíoracha S16 agus S17. Cuirtear cúrsaí ama léirithe próitéine ar fáil i bhFíor S18. (c) Rinneadh monatóireacht ar léiriú MunI trí anailís blotála an iarthair; rinneadh déine an bhanna MunI a chainníochtú sna samplaí céanna le torthaí fluaraiseachta a thaispeántar i bpainéal (b) don tsraith "MunI site absent". Soláthraítear blot iarthair ionadaíoch d’einsím srianta an MunI i bhFíor S19. (d) fluaraiseacht GFP an óstaigh arna mheascadh le liposomes pataiginí ag an gcóimheas a thaispeántar faoin ngraf sonraí. Tá dhá shuíomh srianta MunI ag an ósta GFP plasmid. Soláthraítear cúrsaí ama léirithe próitéine i bhFíor S20. Tá sonraí maidir le turgnaimh ionfhabhtaithe le clibeanna comhleá neamh-chomhoiriúnacha ar fáil i bhFíor S21. (e) Rinneadh slonn MunI a rianú trí anailís bhloic thiar tríd an turgnamh le haghaidh na samplaí a thaispeántar sa tsraith "GFP ionfhabhtaithe" i bpainéal (d). (f) fluaraiseacht GFP an óstaigh arna mheascadh le liposomes pataiginí ag an gcóimheas a thaispeántar faoin ngraf sonraí. Níl aon láithreáin srianta MunI ag an óstach GFP, rud a thugann díolúine don phróitéin pataigineach. Cuirtear cúrsaí ama léirithe próitéine ar fáil i bhFíor S22. (g) Rianaíodh slonn MunI trí anailís bhloic thiar tríd an turgnamh le haghaidh na samplaí a thaispeántar sa tsraith “GFP ionfhabhtaithe” i bpainéal (f). Léiríonn barraí earráide ar na painéil go léir SEM, n=3. Déantar luachanna fluaraiseachta i bpainéil (d, f) a normalú go dtí an fhluaraiseacht ghorm den dath membrane a úsáidtear chun na torthaí a normalú go dtí tiúchan na gceall óstach. Déantar fluaraiseacht i bpainéal (b) a normalú go 0 mM Muni plasmid do gach sraith samplach. Leagann na siombailí diamanta i bpainéil (d, f) béim ar riocht ar leith amháin a léiríonn is fearr na difríochtaí i bhfreagraí ar an ionfhabhtú ó óstaigh atá so-ghabhálach don phainéal pataigin (d) agus imdhíonach don phainéal pataigin (f). Is turgnaimh iad na sraitheanna samplacha go léir a bhfuil an lipéad "GFP ionfhabhtaithe orthu", áit a raibh clibeanna DNA comhlántacha ag an ósta agus an pataigin ar an dromchla, rud a chuir ar chumas na liposomes a chomhleá, ar a dtugtar ionfhabhtú. Taispeánann an tsraith lipéadaithe "GFP sláintiúil" samplaí, áit a raibh an t-óstach agus an pataigin measctha ag na cóimheasa a thaispeántar ach nach raibh clibeanna comhleá comhlántacha iontu, rud a fhágann nach féidir ionfhabhtú a dhéanamh.

Is féidir Ionfhabhtú Cille Sintéiseach a bheith "Marbh", Ídiú Acmhainní Cille Óstach, agus Ionfhabhtuithe den sórt sin a "Cóireáil" go Feidhm Tarrthála.

Léirigh na turgnaimh paraisítí agus pataigin thuas gur féidir cealla sintéiseacha a úsáid mar mhúnla le haghaidh ionfhabhtaithe, nuair a dhéanann pataigin acmhainní an óstaigh a fhuadach. Ansin, shocraigh muid imscrúdú a dhéanamh ar chás ina n-eascraíonn an t-ionfhabhtú meitibileacht an óstaigh ag feidhmiú tar éis léiriú na próitéine pataigineach. Sa chás seo, tá an pataigin inchomparáide le hionfhabhtú le baictéar a léiríonn tocsain marfach lúide gné macasamhlú an óstaigh nó an pharasite ós rud é nach macasamhail na cealla sintéiseacha seo (Fíor 4a). Chun an córas seo a innealtóireacht, roghnaigh muid hemolysin (aHL), tocsain nádúrtha agus próitéin membrane a úsáidtear go forleathan in innealtóireacht chill shintéiseach chun pores membrane nonspecific a chruthú.22,23 Is mór againn íoróin an rogha seo toisc go gcuirtear aHL in iúl go nádúrtha ag Staphylococcus aureus mar a tocsain, agus leithreasaíodh an phróitéin níos déanaí chun iompar membrane a innealtóireacht agus chun meitibileacht cille sintéiseach a fhadú.24 Anseo, déanaimid ar ais chuig aHL a úsáid dá ról nádúrtha mar thocsain díobhálach a tháirgtear trí ionfhabhtú. Tagann sampla suntasach eile a bhaineann le hinnealtóireacht cille sintéiseacha maidir le tocsaineacht aHL a úsáid chun bás cille nádúrtha a chur faoi deara ó chur i bhfeidhm cealla sintéiseacha mar theicneolaíocht teiripe ailse.25 Mar chruthúnas ar phrionsabal, bhunaíomar go gcuirfí tiúchan ard aHL in iúl i bhféitheacha cille sintéiseacha. mar thoradh ar sceitheadh ​​​​ábhar cille agus laghdú suntasach ar léiriú GFP taobh istigh den chill. Is féidir an éifeacht seo a aisiompú má tá na móilíní beaga go léir atá riachtanach do TxTl (Fíor 4b) ar an taobh amuigh de na liposomes. Inár gcóras samhail-pataigine óstaigh, tá plasmid ionchódaithe GFP san ósta agus tá plasmid ionchódaithe aHL sa phataigin. Tá dearadh na dturgnamh ionfhabhtaithe go léir cosúil leis na cásanna paraisítí agus pataigin a bhfuil cur síos orthu thuas, leis an bpataigin ag iompar aon RNAP T7 agus an t-óstach agus an pataigin araon maisithe le clibeanna comhleá DNA. Rud suimiúil, thugamar faoi deara ag tiúchan níos ísle pataigin (an pataigine a bheith 25 nó 50% den daonra iomlán), nach dtagann laghdú ach beagán ar fhluaraiseacht an óstaigh. Mar sin féin, le méadú ar an tiúchan pataigin go 75% mar thoradh ar laghdú suntasach ar an ósta GFP fluaraiseacht (Fíor 4c). Táimid ag tuairimíocht go bhféadfadh an toradh seo a bheith mar gheall ar sceitheadh ​​measartha mall cothaitheach ó chealla sintéiseacha ag tiúchan aHL níos ísle. Níor thomhaiseadh an fhluaraiseacht GFP ach amháin tar éis 12 h goir agus is próitéin an-chobhsaí é GFP. Mar sin, is féidir i gcás tiúchana aHL níos ísle (méid pataigin níos ísle), go raibh an sceitheadh ​​​​cothaitheach de bharr AHL mall go leor gur bhailigh na cealla óstach méideanna suntasacha GFP sular tháinig éifeachtaí an sceite spreagtha ag aHL chun bheith ag titim amach. an meitibileacht. Chun torthaí iomaíochta simplí maidir le hacmhainní a dhíchúpláil idir na géanóim ósta agus parasite, rinneamar turgnaimh "ionfhabhtú le tarrtháil" ina raibh na móilíní beaga go léir a chomhdhéanann na meascáin fuinnimh TxTl, aimínaigéad agus salainn sa mhaolán lasmuigh. Socraíodh é seo ar an gcaoi chéanna leis an riocht "cothaithigh lasmuigh" a tástáladh i bhFíor 4b. Bhí an laghdú ar fhluaraiseacht óstach sna turgnaimh seo cosúil leis na samplaí "ionfhabhtú gan tarrthála" níos luaithe le leibhéil 25 agus 50% den phataigin. Bhí an laghdú ar fhluaraiseacht óstaigh ag 75% den phataigin i bhfad níos lú ná an laghdú a breathnaíodh ar shamplaí gan tarrtháil (Fíor 4d). Dealraíonn sé go dtacaíonn an difríocht mhór i dtorthaí an turgnaimh le 75% den pharasite, le pointí sonraí i bpainéal Fíor 4 (c, d) le réalta, lenár hipitéis go ndéanann tiúchan aHL níos airde dochar go luath san imoibriú. Ag tiúchan pataigin níos ísle, tá an sceitheadh ​​mall go leor go gcruinníonn an GFP óstach (mar a fheictear le cothaithigh tarrthála agus gan iad), agus mar sin laghdaítear an fhluaraiseacht GFP a breathnaíodh tar éis ionfhabhtaithe den chuid is mó mar gheall ar an iomaíocht le haghaidh acmhainní. Ag comhchruinnithe pataigin níos airde, laghdaítear fluaraiseacht GFP i samplaí le cothaithigh sheachtracha go príomha mar gheall ar iomaíocht acmhainní. Léiríonn na turgnaimh seo gur féidir linn cealla sintéiseacha a innealtóireacht chun ionfhabhtú a shamhaltú, rud a fhágann go bhfuil dhá thoradh éagsúla ann: pionós meitibileach an ionfhabhtaithe féin (laghdú GFP mar gheall ar iomaíocht acmhainne) agus ionfhabhtú níos "marbh" a eascraíonn as deireadh a chur le léiriú próitéine na n-óstach. Arna spreagadh ag an mbreathnóireacht seo, shocraigh muid imscrúdú a dhéanamh ar chóras ina bhféadfadh cealla sintéiseacha seasamh in aghaidh ionfhabhtú pataigineach go gníomhach agus imscrúdú a dhéanamh ar phionós meitibileach freagra den sórt sin.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Is Féidir le Cealla Sintéiseacha Cosain i gcoinne Ionfhabhtaithe Trí Straitéis a Spreagtar le Baictéir.

Arna spreagadh ag feidhm aitheanta na n-endonúicléas srianta chun baictéir a chosaint i gcoinne DNA eachtrach, d'fhéachamar leis an straitéis seo a úsáid laistigh de chealla sintéiseacha. Leathnaíomar ar an gcóras seadán a chuirtear i láthair i bhFíor 2: chomh maith le GFP, chuireamar MunI-ina bhfuil plasmid leis an óstach. Bhí mCherry sa pharasite, mar a rinneadh i dturgnaimh roimhe seo. Tá suíomh srianta MunI sa plasmid mCherry (Fíor 5a). Ar dtús, rinneamar turgnaimh cruthúnas-ar-phrionsabal chun measúnú a dhéanamh ar an ualach meitibileach a bhaineann le MunI a chur in iúl ar an óstach. Sna turgnaimh TxTl neamh-capsulated seo, rinneamar monatóireacht ar léiriú GFP agus léiriú mCherry, gach ceann díobh measctha le méid méadaitheach de plasmid MunI nó EcorI. Bhí na géinte go léir faoi rialú an tionscnóra T7 céanna. Bhí suíomh srianta EcorI ag an ghéin GFP ach ní suíomh srianta MunI é agus bhí MunI ach ní láithreán srianta EcorI ag géine mCherry. Nuair a bhí an plasmid einsím srianta measctha le plasmid próitéin fluaraiseacha gan láithreán aitheantais don einsím srianta sin, laghdaigh an abairt próitéine fluaraiseacha go comhréireach le méadú einsím plasmid srianta, rud a léiríonn iomaíocht idir an dá plasmid le haghaidh acmhainní TxTl, mar a léiríodh níos luaithe do GFP agus mCherry i bhFíor 2. Ba iad na péirí neamhghearrtha seo ná GFP le MunI (Fíor 5b) agus mCherry le EcorI (Fíor 5e). Nuair a rinneadh próitéin fluaraiseacha a phéireáil le heinsím srianta a bhí in ann an ghéin a ghearradh don phróitéin fluaraiseacha sin, tháinig laghdú suntasach ar an bhfluaraiseacht go dtí beagnach leibhéil chúlra ag tiúchana einsímí srianta níos airde. Ba iad na péirí gearrtha seo ná GFP le EcorI (Fíor 5c) agus mCherry le MunI (Fíor 5d). Léirigh sé seo laghdú ar fhluaraiseacht go mór thar an iomaíocht shimplí le haghaidh acmhainní agus cosúil leis an gcás ionfhabhtaithe a léirítear i bhFíor 3. Laghdaíonn léiriú MunI i láthair GFP léiriú GFP. Má úsáidimid GFP mar seachfhreastalaí do mheitibileacht "bunlíne" óstach, ansin is féidir MunI a fheiceáil mar ualach meitibileach ar an óstach.

Fíor 4. Tá an t-óstach so-ghabhálach d'ionfhabhtú "marbh", ach is féidir an t-óstach a tharrtháil. (a) Tá GFP plasmid san ósta, agus tá plasmid sa phataigin a ionchódaíonn an cainéal membrane hemolysin (aHL). Tar éis an ionfhabhtaithe, cuireann an t-óstach in iúl aHL, rud a chruthaíonn pores sa membrane, is cúis le sceitheadh ​​​​cothaithigh agus mar thoradh ar laghdú ar ghníomhaíocht meitibileach an óstaigh. (b) Cruthúnas ar phrionsabal le haghaidh óstaigh a chuireann in iúl AHL (gan ionfhabhtú, cruthaíodh óstaigh le 5nM GFP agus leis an méid sonraithe de aHL plasmid). Goradh an t-óstach i maolán le cothaithigh nó gan iad (gach comhpháirt den mheascán fuinnimh, salainn agus aimínaigéad a úsáideadh chun an córas aistriúcháin saor ó chealla ósta a ullmhú). Bunaíodh an tiúchan cothaitheach tarrthála is fearr go turgnamhach, sonraí a thaispeántar i bhFíor S23. (c) Ionfhabhtú an óstaigh leis an bpataigin, le méideanna éagsúla pataigin in aghaidh na cille óstaigh. Rinneadh sceitheadh ​​móilíní beaga ó na cealla "sláintiúla" agus "ionfhabhtaithe" a thomhas go díreach ag baint úsáide as lí móilín beag, taispeántar sonraí i bhFíoracha S24 agus S25. (d) Taispeántar turgnaimh cosúil leo seo i bpainéal (c), ach tá cothaithigh mhóilíní beaga sa mhaolán lasmuigh atá cosúil le coinníollacha turgnamhacha "cothaithigh lasmuigh" a léirítear i bpainéal (b). Léiríonn barraí earráide ar na painéil go léir SEM, n=3. Déantar na luachanna fluaraiseachta i bpainéil (b−d) a normalú go fluaraiseacht ghorm an ruaim scannáin a úsáidtear chun an comhartha a normalú go dtí tiúchan na gceall óstach. Leagann na siombailí diamanta i bpainéil (c, d) béim ar choinníoll áirithe amháin a léiríonn is fearr na difríochtaí mar fhreagra ar an ionfhabhtú ó óstach gan phainéal cothaithigh lasmuigh (c) agus imdhíonacht don phataigin de bharr láithreacht an phainéil cothaithigh lasmuigh (d). I gcás painéil (c, d), is é an tsraith "GFP ionfhabhtaithe" an t-óstach atá comhleádh leis an bpataigin a iompraíonn próitéin aHL, agus is é "GFP sláintiúil" an t-óstach atá comhleádh leis an bpataigin ag iompar aon plasmid.

Téann muid ar aghaidh chuig na turgnaimh ionfhabhtaithe, ag meascadh an ósta (le plasmids GFP agus MunI) le parasite (le mCherry plasmid). Mar a bhí roimhe seo, rinneamar imscrúdú ar chásanna ina raibh méadú ar líon na seadán sa daonra (Fíor 5f). Chruthaigh rialú dearfach mCherry óstach amháin (le EcorI in ionad MunI chun an t-ualach meitibileach a chothromú) tagarmharc don uasmhéid teoiriciúil de phróitéin pataigin is féidir a chur in iúl san óstach (Fíor 5f). De réir mar a mhéadaigh an méid parasite, tháinig laghdú ar fhluaraiseacht GFP an óstaigh, ach bhí an laghdú ar fhluaraiseacht óstach ionfhabhtaithe i bhfad níos lú ná an laghdú ar léiriú GFP a breathnaíodh i dturgnaimh níos luaithe leis an parasite céanna. Is féidir comparáid dhíreach a dhéanamh idir fluaraiseacht GFP agus paraisítí mCherry den óstach MunI seo lena gcuirtear in iúl (pointe sonraí atá lipéadaithe le réalta i bhFíor 5f) le hóstach ionfhabhtaithe comhchosúla gan MunI (pointe sonraí lipéadaithe le réalta i bhFíor 2e). Sa óstach ag cur in iúl MunI, thosaigh an GFP óstach le leibhéal iomlán níos ísle agus é sláintiúil (toisc go ndéantar roinnt acmhainní a atreorú chuig MunI a chur in iúl) ach tar éis an ionfhabhtaithe, tá an laghdú fluaraiseachta óstach i bhfad níos lú suntasach, agus déanann an t-óstach próitéin i bhfad níos lú parasite mCherry. ná i gcás an óstaigh nach bhfuil in iúl MunI. Léiríonn an turgnamh seo an buntáiste a bhaineann leis an óstaigh a bheith ag caitheamh roinnt acmhainní ar chosaint i gcoinne paraisítí. D’fhéadfaí breathnú ar an gcóras seo mar shamhail bithcheimiceach an-simplí d’orgánaigh a chuireann próitéiní in iúl chun cosaint a thabhairt in aghaidh ionfhabhtuithe sa todhchaí nó fiú fachtóirí díobhálacha comhshaoil. Níl an t-óstach chomh láidir ar dtús (má ghlacaimid le léiriú GFP mar thagarmharc do shláinte an óstaigh), ach i gcás ionfhabhtaithe, íocann na hacmhainní breise a chaith an t-óstach ar phróitéiní cosantacha a chur in iúl, rud a thugann cosaint i gcoinne an pharasít ionfhabhtaíoch. Mar sin, sa chill shintéiseach simplí neamhbheo seo, rinneamar sampla de bhun-rás arm bitheolaíoch a athdhéanamh.

Fíor 5. Cosnaíonn cealla óstaigh ar ionfhabhtú. (a) Tá dhá phlasmid sna cealla óstacha: ceann amháin ag ionchódú GFP (gan láithreán srianta MunI) agus an ceann eile ag ionchódú an einsím srianta MunI (an ghéin "friotaíocht parasite"). Tá mCherry plasmid sa pharasite, i gcóras cosúil leis na turgnaimh a léirítear i bhFíor 2. Déantar an ionfhabhtú a idirghabháil trí chomhleá trí chlibeanna DNA ar dhromchla an óstaigh agus an pharasít. Tar éis an ionfhabhtaithe, déantar an plasmid mCherry a thugann an parasite a dhíleá le heinsím srianta MunI an óstaigh. (b−e) An costas meitibileach a bhaineann le friotaíocht na seadán a léiriú a thomhas. Tá na turgnaimh i gcóras TxTl toirtithe, nach bhfuil cuimsithe i vesicles. I ngach turgnamh, rinneadh an plasmid próitéin fluaraiseacha (GFP nó mCherry) a mheascadh le plasmid einsím srianta (MunI nó EcorI) ag an gcóimheas atá léirithe ar an x-ais don tiúchan iomlán plasmid de 10 mM. Tá suíomh srianta EcorI ag GFP ach ní suíomh MunI é, agus tá MunI ach ní láithreán srianta EcorI ag mCherry. Is treoir amhairc an treochtlíne ach ní oiriúnach sonraí. Léiríonn barraí earráide SEM, n=3. Soláthraítear turgnaimh rialaithe le heinsímí srianta íonaithe, in ionad iad a chur in iúl ó plasmid, i bhFíor S26. Rinneadh cobhsaíocht liposomes le méid méadaithe plasmid parasite a thomhas freisin, sonraí a léirítear i bhFíor S27. (f) Ionfhabhtú an óstaigh le méadú ar líon na seadán. Is é "Óstach GFP sláintiúil" an abairt GFP ó chealla óstacha comhleádh leis an parasite gan aon plasmid. Is é "Host GFP ionfhabhtaithe" an t-óstach atá comhleádh leis an parasite a iompraíonn mCherry. Is é an fhluaraiseacht dearg ná fluaraiseacht mCherry ón seadán atá comhleádh leis an óstaigh (níl ach sonraí ón ósta ionfhabhtaithe ar fáil. Ní raibh mCherry plasmid ar na samplaí óstaigh sláintiúil). Léiríonn barraí earráide ar na painéil go léir SEM, n=3. Déantar luachanna fluaraiseachta a normalú go fluaraiseacht ghorm an dath membrane a úsáidtear chun na torthaí a normalú go tiúchan na gceall óstach. Léiríonn an tsiombail Diamond léiriú na próitéine parasite faoi choinníollacha ionfhabhtaithe ar leith, atá inchomparáide go díreach leis an bpointe sonraí chun suntais le réalta i bhFíor 2e turgnamh faoi na coinníollacha céanna, ach leis an ósta easpa géine friotaíochta MunI.

Fíor 6. Soláthraíonn ionaclú cosaint in aghaidh ionfhabhtuithe. (a) Tá plasmid GFP san ósta. Tá an pataigin sna turgnaimh seo ar cheann de na trí scéim ionfhabhtaithe a léirítear sa pháipéar seo: parasite (mar a thaispeántar i bhFíor 2), pataigin leis an einsím srianta MunI ag díleá genome GFP an óstaigh (mar a thaispeántar i bhFíor 3), nó pataigin. ag iompar an chainéil membrane aHL is cúis le sceitheadh ​​cothaithigh ón ósta (mar a thaispeántar i bhFíor 4). I ngach cás, tá clibeanna comhleá DNA comhlántacha san óstach agus sa phataigin. Sula dtabharfar isteach an phataigin, déantar an t-óstach a “ionaclú”: gortha é le breis oligos ssDNA atá comhlántach leis na clibeanna comhleá DNA ar dhromchla an óstaigh (clibeanna atá comhionann leo seo ar an bpataigin lúide an taise colaistéaróil a úsáidtear chun an chlib a cheangal leis an scannán de an pataigin). De bharr an ionaclaithe déantar na clibeanna comhleá ar dhromchla an óstaigh a shnáithe faoi dhó, rud a fhágann go bhfuil an comhleá leis an bpataigin dodhéanta. (b) Cruthúnas ar phrionsabal na scéime ionaclaithe. Tá daonra na liposomes a iompraíonn GFP faoi rialú an tionscnóra T7 RNA, ach gan T7 RNA polymerase, comhleádh le liposomes ina bhfuil T7 RNA polymerase. Ní féidir an próitéin GFP a chur in iúl ach amháin má chomhcheanglaíonn an dá dhaonra. Rinneadh "ionaclú" ar cheann amháin nó an dá chomhpháirtí meascaithe trí gor le clib DNA a bhí ag luí leis na clibeanna comhleá ar dhromchla an liposome, rud a d'fhág go raibh na clibeanna comhleá dhá shnáithe agus mar sin nach raibh siad ag luí leis an gcomhleá. Léirítear cúrsa ama ionadaíoch do léiriú próitéine i bhFíor S28. Tá turgnaimh rialaithe gan aon chlibeanna comhleá i bhFíor S29, agus soláthraítear rialuithe le clibeanna comhleá neamh-chomhoiriúnacha i bhFíor S30. Bunaíodh an tiúchan oligo ionaclaithe go turgnamhach, sonraí a thaispeántar i bhFíor S31. (c) Turgnaimh ar ionfhabhtú seadán. Comhleascadh ósta a bhí ag iompar GFP le seadán a bhí ag iompar mCherry, mar a thuairiscítear i bhFíor 2. Meascadh an t-óstach agus an seadán le cóimheas éagsúil idir an óstaigh agus an seadán; rinneadh ionaclú ar chealla óstaigh (le clibeanna comhleá DNA dúbailte-snáithe nach bhfuil ag luí leis an gcomhleá) nó níor ionaclaithe (mar sin so-ghabhálach i leith comhleá leis an seadán). Ní thuairiscítear fluaraiseacht mCherry ach amháin i gcás samplaí nach bhfuil an t-óstach ionaclaithe toisc nach raibh aon fhluaraiseacht mCherry intomhaiste sna samplaí óstaigh ionaclaithe. Rinneadh tástáil ar ionaclú droim ar ais tríd an seadán a ionaclú in ionad an óstaigh, sonraí a léirítear i bhFíor S32. (d) Turgnaimh ionfhabhtuithe leis an ngéanóm óstach atá so-ghabhálach don phataigin a iompraíonn an einsím srianta MunI, mar a thuairiscítear i bhFíor 3. Léiríonn an tsraith sonraí ionfhabhtaithe ósta gan ionaclú, agus seasann an tsraith sonraí ionaclaithe samplaí leis an ósta atá gortha le oligos ionaclaithe, mar sin níl sé so-ghabhálach do chomhleá leis an bpataigin. (e) Mar thoradh ar thurgnaimh ionfhabhtuithe leis an bpataigin a iompraíonn géine aHL, sceitheann bealaí aHL cothaithigh as na cealla óstaigh tar éis an ionfhabhtaithe, mar a thuairiscítear i bhFíor 4. Léiríonn an tsraith sonraí ionfhabhtaithe an t-óstach gan ionaclú agus seasann an tsraith sonraí ionaclaithe do shamplaí leis an. óstach gortha le oligos ionaclaithe, dá bhrí sin ní so-ghabhálach comhleá leis an pataigin. Léiríonn barraí earráide ar na painéil go léir SEM, n=3. Déantar luachanna fluaraiseachta i bpainéil (c−e) a normalú go dtí an fhluaraiseacht ghorm den dath membrane a úsáidtear chun na torthaí a normalú go dtí tiúchan na gceall óstach. Is éard atá i gcuid de na sonraí a thaispeántar san fhigiúr seo ná turgnaimh le socrú comhionann leis na turgnaimh a thaispeántar i bhfigiúirí níos luaithe (mar a léirítear i ngach fotheideal). Rinneadh na turgnaimh seo arís don fhigiúr seo chun sonraí a tháirgeadh ag baint úsáide as an mbaisc chéanna de TxTl chun na torthaí a chur i gcomparáid go díreach, ag fáil réidh le héagsúlacht bhaisc-go-baisc ullmhóidí TxTl.

Coscann Ionaclú Cealla Sintéiseach Ionfhabhtú.

Sa sampla a gcuirtear síos air thuas, léirigh muid an t-óstach ag cosaint i gcoinne thionchar ghéanóim pataigin trí phróitéin bhreise a chur in iúl. Ansin, d’fhiafraigh muid an féidir cás a shamhaltú, áit a fhágann idirghabháil éigin ósta a bhí so-ghabhálach roimhe seo díolmhaithe ó ionfhabhtú ar an gcéad dul síos. Thugamar múnla ionaclaithe air. Cé go n-aithnítear gur analaí foirfe é seo, is í an ghné ar dhírigh muid uirthi ná nach gcaitheann an chill shintéiseach óstaigh aon acmhainní ar dhíolúine a ghiniúint. Inár múnla imdhíonta, dhearamar cóireáil a iompaíonn an chill shintéiseach óstaigh atá so-ghabhálach i leith ionfhabhtaithe ina cealla nach féidir le pataigin a chomhleá. Tá an córas comhleá cille sintéiseach a úsáidtear ar fud an pháipéir seo ag brath ar chlibeanna DNA aon-shnáithe chun comhleá membrane liposome a spreagadh. Chun ionaclú i gcoinne comhleá le pataigin, ghoradh muid na cealla le oligonucleotide DNA comhlántach leis an oligo comhleá ar dhromchla na gceall (Fíor 6a). Ar an gcéad dul síos, b'éigean dúinn a dhearbhú go n-oibríonn ionaclú trí ghor le oligo comhlántach chun deireadh a chur le comhleá. Sna turgnaimh cruthúnas-ar-phrionsabal, ullmhaíodh dhá dhaonra liposomes: bhí TxTl ag daonra amháin le GFP ionchódú plasmid faoi rialú an tionscnóra T7 agus bhí TxTl agus T7 RNA polymerase ag an daonra eile ach gan aon plasmid. Tar éis comhleá an dá dhaonra seo, mheasc an plasmid GFP le T7 RNA polymerase agus léiriú GFP spreagtha. Má bhí clibeanna comhleá aonshnáithe agus comhlántacha ag an dá dhaonra, tharla comhleá agus braitheadh ​​fluaraiseacht GFP. Más rud é goraíodh daonra amháin nó an dá cheann le oligonucleotide comhlántach leis an gclib comhleá, níor tharla an comhleá liposome agus níor cuireadh GFP in iúl (Fíor 6b). Tar éis dúinn an córas ionaclaithe a bhunú, thugamar ar aghaidh le hionaclú a thabhairt isteach chun cealla sintéiseacha óstaigh a chosaint i dtrí cinn de na cásanna ionfhabhtaithe ar cuireadh síos orthu níos luaithe san obair seo. Ar dtús, d'úsáideamar an cás parasite a thuairiscítear i bhFíor 2. Rinneadh na cealla óstacha, ina raibh genome GFP, a ionaclú le oligo comhlántach leis an gclib comhleá ar dhromchla an óstaigh, agus rinneadh an t-óstach a mheascadh leis an parasite mCherry. Mheasc muid an t-óstach leis an parasite ag cóimheasa éagsúla. Faoi na coinníollacha ionfhabhtaithe go léir, ní raibh an fhluaraiseacht parasite mCherry inbhraite dá ndéanfaí an t-óstach a ionaclú agus nár tháinig laghdú ar fhluaraiseacht GFP an óstaigh ionaclaithe. Léirigh na turgnaimh rialaithe leis an óstach noninoculated laghdú ar an abairt GFP óstach agus méadú ar an comhartha parasite mCherry, mar a bhíothas ag súil (Fíor 6c). Ina dhiaidh sin, chuireamar an córas ionaclaithe i bhfeidhm ar chás ósta a bhí ionfhabhtaithe le pataigin a iompraíonn einsím srianta MunI ionchódaithe géanóm atá in ann genome GFP na n-óstach a dhíleá, mar atá i dturgnaimh a thaispeántar i bhFíor 3. Níor léirigh an t-óstach ionaclaithe laghdú. i bhfluaraiseacht GFP tar éis a mheascadh le méideanna méadaithe na pataigin, cé go raibh an t-óstach neamh-inoclaithe ionfhabhtaithe agus laghdaigh fluaraiseacht GFP an ósta go comhréireach leis an méid méadaithe pataigin (Fíor 6d). Bhí ionaclú éifeachtach freisin i gcoinne na pataigin AHL. Níor léirigh na hóstach ionaclaithe aon laghdú ar fhluaraiseacht ar mheascadh leis an pataigine, agus tháinig laghdú suntasach ar fhluaraiseacht GFP an óstaigh neamh-inoculated le hionfhabhtú (Fíor 6e). I ngach cás, bhí an nós imeachta ionaclaithe simplí seo, a chothaigh an t-óstach le oligo DNA comhlántach leis an oligo comhleá ar dhromchla an óstaigh, leordhóthanach chun deireadh a chur le cumas na gcealla sintéiseacha pataigineacha chun na cealla óstaigh a ionfhabhtú. Dá bhrí sin, léirigh muid múnla simplí fisiciceimiceach idirghabhála a chosnaíonn cealla óstaigh ó ionfhabhtú.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

CONCLÚIDÍ

Sa pháipéar seo, léirímid modhanna chun mionchealla sintéiseacha a úsáid chun ionfhabhtuithe seadánacha agus pataigineacha a shamhaltú. Bhí dhá spreagadh taobh thiar dár gcuid oibre. Theastaigh uainn iompar coimpléascach cosúil le beatha a innealtóireacht i gcealla sintéiseacha, ag éascú an sprioc chun cealla sintéiseacha a innealtóireacht atá cosúil níos dlúithe le cealla beo nádúrtha. Theastaigh uainn freisin leas a bhaint as an gcóras cille sintéiseach simplí agus inrialaithe chun bun-airíonna an ionfhabhtaithe, an ionaclaithe agus na bpróiseas frithsheasmhachta a shamhaltú. Cé nach n-athraíonn cealla sintéiseacha nó nach ndéanann siad féin-mhacasamhlú, ceadaíonn an córas seo staidéar a dhéanamh ar dhinimic ionfhabhtaithe i múnla simplí agus éasca le hanailís a dhéanamh. Tá súil againn go gcuideoidh prionsabail an ionfhabhtaithe a bhfuil cur síos orthu anseo le samhlacha praiticiúla agus infheidhme a chruthú do phataiginí éagsúla agus do mhaolú ionfhabhtuithe. Le staidéar a dhéanamh ar an gcóras cille sintéiseach simplithe seo, leagadh béim ar na hidirghníomhaíochtaí bunúsacha idir an seadán agus an pataigin. Cé nach bhfuil cealla sintéiseacha (fós) beo, agus nach bhfuil an cumas acu dul faoi éabhlóid Darwinian, ceadaíonn an córas seo dúinn breathnú ar idirghníomhaíochtaí pataigin agus óstach gan an cumas a fhorbairt díolúine nádúrtha nó a athrú ar virulence na pataigin. Cé go n-úsáideann dinimic an ionfhabhtaithe óstaigh a chuirtear i láthair anseo cealla sintéiseacha atá bunaithe ar bhaictéir, níl an córas seo teoranta ó dhúchas do TxTl baictéarach. D’fhéadfaí a shamhlú fiú go n-úsáidfí an córas a chuirtear i láthair anseo chun dinimic ionfhabhtaithe a shamhaltú i ndaonraí atá cosúil le héiceachórais nádúrtha, ag baint leasa as an tsimplíocht is gné dhílis de chealla sintéiseacha chun na hidirghníomhaíochtaí idir baill éagsúla de dhaonraí móra a rialú agus staidéar iomlán a dhéanamh orthu.

TAGAIRTÍ

(1) Iarratais. Mater. Inniu 2016, 19, 516−532.

(2) Gaut, NJ; Adamala, KP Eilimintí Cille Nádúrtha i gCealla Sintéiseacha a Athdhéanamh. Adv. Biol. 2021, 5, Uimh. 2000188.

(3) Tan, C. ; Sábh, S.; Bruchez, MP; Schwartz, R.; Leduc, P. Cruthanna Sluaite Móilíneach Léiriú Géine i Nanachórais Cheallacha Shintéiseacha. Nat. Nanaitheicneolaíocht. 2013, 8, 602–608.

(4) Glantz, ST; Beirlew, EE; Chow, BY Comhéadain Shintéiseacha Membrane atá cosúil le Cealla chun Idirghníomhaíochtaí Dinimiciúla Próitéin-Lípid a Scrúdú, 1ú eag.; Elsevier Inc, 2019; Iml. 622.

(5) Zhao, J. ; Zhang, Y.; Zhang, X. ; Li, C. ; Du, H.; Sønderskov, SM; Mu, W. ; Dong, M. ; Han, X. Meitibileacht Ceallach a Dhéanamh i gCealla Saorga: Iompar Móilín Uilíoch ar fud an Scannáin trí Chomhleá Vesicle. Anal. Ceimic. 2022, 94, 3811–3818.

(6) Damiano, L. ; Stano, P. Ar "Cosúlacht Saoil" na gCeall Sintéiseach. Tosaigh. Bioeng. Biteicneolaíocht. 2020, 8, Uimh. 953.

(7) Salehi-Reyhani, A.; Ces, O.; Elani, Y. Mímics Cille Saorga mar Mhúnlaí Simplithe le haghaidh Staidéar ar Bhitheolaíocht na gCeall. Cait. Biol. Med. 2017, 242, 1309−1317.

(8) Chakraborty, T.; Wegner, SV Cell to Cell Comharthaíocht trí Solas i bPobail Saorga Cille: Clowing Creachadóir Lures Prey. ACS Nana 2021, 15, 9434−9444.

(9) Dupin, A. ; Simmel, Comharthaíocht FC agus Difreáil i gCiorcaid Ilroinnteacha Eibleachtbhunaithe i gCiorcaid Ghéin Vitro. Nat. Ceimic. 2019, 11, 32−39.

(10) Toparlak, OD; Zasso, J. ; Bríde, S.; Serra, MD; Macchi, P.; Conti, L. ; Baudet, M.-L.; Mansy, SS Tiomántán Cealla Saorga Difreáil Néarrach. Sci. Adv. 2020, 6, Uimh. eabb4920.

(11) Bean Mhic Róibín, AO; Venero, OM; Adamala, KP I dtreo Saol Sintéiseach: Cumarsáid Cealla Sintéiseach Bithimiméadach. Curr. Tuairim. Ceimic. Biol. 2021, 64, 165−173.

(12) Smith, JM; Chowdhry, R. ; Booth, MJ Cumarsáid Shintéiseach Cille-Cill a Rialú. Tosaigh. Mol. Bitheolaíocht. 2022, 8, Uimh. 1321 .

(13) Elani, Y. Comhéadan Beo agus Cealla Sintéiseach mar Theorainn atá ag Teacht Chun Cinn sa Bhitheolaíocht Shintéiseach. Aingeal. Ceimic., Int. Ed. 2021, 60, 5602− 5611.

(14) Rustad, M. ; Eastlund, A. ; Gairdín, P.; Noireaux, V. Sintéis TXTL Saor ó Chille de Bhaictéariophage Ionfhabhtaithe T4 i Imoibriú Feadán Tástála Aonair. Sintéis. Biol. 2018, 3, Uimh. ysy002.

(15) Marshall, R. ; Noireaux, V. Samhaltú Cainníochtúil Trascríobh agus Aistriúcháin Uile-E. coli Córas saor ó chealla. Sci. Ionadaí 2019, 9, Uimh. 11980.

(16) Garamella, J. ; Marshall, R. ; Rustad, M. ; Noireaux, V. Bosca Uirlisí TX-TL All E. coli 2.0: Ardán do Bhitheolaíocht Shintéiseach Gan Cille. Sintéis ACS. Biol. 2016, 5, 344–355.

(17) Deich, C. ; Airgead Tirim, B. ; Sato, W. ; Sharon, J.; Aufdebrink, L.; Gaut, NJ; Heili, J. ; Stokes, K. ; Engelhart, AE; Adamala, Córas Trascríobh KP T7Max. 2021, 1−28.

(18) Gaut, NJ; Gomez-Garcia, J.; Heili, JM; Airgead Tirim, B. ; Han, Q. ; Engelhart, AE; Adamala, KP Comhleá In-ríomhchláraithe agus Difreáil na gCeall Íosta Sintéiseach. Sintéis ACS. Biol. 2022, 11, 855− 866.

(19) Stengel, G. ; Zahn, R.; Höök, F. Comhleá In-ríomhchláraithe de chuid Fosfailipidí de bharr DNA. J. Am. Ceimic. Soc. 2007, 129, 9584− 9585.

(20) Chizzolini, F. ; Forlin, M. ; Sea, Máirtín, N.; Berlofa, G. ; Cecchi, D.; Tá Aistriúchán Gan Cille Mansy, SS Níos Athróg ná Trascríobh. Sintéis ACS. Biol. 2017, 6, 638−647.

(21) Shin, J. ; Noireaux, V. Bosca Uirlisí Slonn Gan Cille E. coli: Feidhm maidir le Ciorcaid Ghéin Shintéiseacha agus Cealla Saorga. Sintéis ACS. Biol. 2012, 1, 29−41.

(22) Noireaux, V. ; Libchaber, A. Bith-imoibreoir Feithicle mar Chéim i dtreo Comhthionól Cille Saorga. Proc. Natl. Acad. Sci. SAM 2004, 101, 17669–17674.

(23) Adamala, KP; Máirtín-Alarcon, DA; Guthrie-Honea, KR; Boyden, Innealtóireacht ES Idirghníomhaíochtaí Ciorcaid Ghéiniteacha laistigh agus idir Cealla Íosta Shintéiseacha. Nat. Ceimic. 2017, 9, 431−439.

(24) Noireaux, V. ; Bar-Ziv, R.; Godefroy, J. ; Salman, H. ; Libchaber, A. I dtreo Cille Saorga Bunaithe ar Léiriú Géine i Veicil. Fis. Biol. 2005, 2, P1−P8.

(25) Krinsky, N. ; Kaduri, M. ; Zinger, A.; Shainsky-Roitman, J.; Goldfeder, M.; Benhar, I.; Hershkovitz, D.; Schroeder, A. Cealla Shintéiseacha Sintéis Próitéiní Teiripeacha taobh istigh Tumors. Adv. Mater Cúram Sláinte. 2018, 7, Uimh. 1701163.

(26) Kwon, YC; Jewett, MC Modhanna Ullmhúcháin Ard-Thréimhsí de Sliocht Amhola le haghaidh Sintéis Próitéine Láidir Gan Cille. Sci. Ionadaí 2015, 5, Uimh. 8663.

(27) Sun, ZZ; Hayes, CA; Shin, J. ; Caschera, F.; Murray, RM; Noireaux, V. Prótacail chun Córas Léirithe Gan Cille TXTL Bunaithe ar Escherichia Coli a Chur i bhFeidhm don Bhitheolaíocht Shintéiseach. J. Vis. Cait. 2013, 79, 1−15.

(28) Fujii, S.; Matsuura, T. ; Súnámaí, T. ; Nishikawa, T.; Kazuta, Y.; Yomo, T. Taispeántas Liposome do Roghnú in Vitro agus Éabhlóid Próitéiní Membrane. Nat. Prótacal. 2014, 9, 1578−1591.

(29) Löffler, PMG; Rís, O.; Rabe, A. ; Okholm, AH; Thomsen, RP; Kjems, J.; Vogel, S. Cascáid Chomhleá Liposome DNA-Cláraithe. Aingeal. Ceimic., Int. Ed. 2017, 56, 13228−13231.