Spreagann Córais Vacsaínithe Chlamydia Trachomatis Il-chomhpháirteacha Freagraí Antashubstainte Agus Cille T Agus Luathaíonn siad Imréiteach Ionfhabhtaithe i Múnla Príomháite Neamhdhaonna Ⅱ

abhair agus modhanna

Antaiginí vacsaínithe agus aidiúvach

Baineadh úsáid as antaiginí vacsaíne agus aidiúvach éagsúla sa staidéar seo: Riaradh antaigin vacsaín CTH522, bunaithe ar MOMP (11) tríd an mbealach ionmhatánach (IM) le aidiúvach CAF01 (42) nó hiodrocsaíd alúmanaim (AlOH), nó tríd an mbealach intranasal ( IN) sin aidiúvach. Rinneadh an vacsaín plasma DNA, pcDNA3.1-MOMP, trí MOMP a chlónáil isteach sa veicteoir plasmid pcDNA3.1 (14) agus á riaradh trí bhealach laistigh den deirmeach (ID) le leictreaghníomhú (EP) sa chúl. Rinneadh vacsaín athchuingreach Sheiritíopa Adenovirus Daonna 5 (rHuAd5) ag léiriú MOMP (HuAd5-MOMP) trí chomhthoil MOMP (AAC45154.1) a athcheangal go homalógach i veicteoir E1 agus E2 plasmid pAL1112 a scriosadh agus a riaradh trí bhealach ionmhatánach (14). . Athraithe vaccinia Ankara-MOMP vacsaín déanta agMOMP comhdhearcadh a athcheangal(AAC45154.1) isteach sa veicteoir MVA plasmid agus caolaithe p3186 (14), agus arna riar tríd anbealach ionmhatánach.

Cliceáil Anseo Chun Cistanche a fháil le haghaidh frith-athlastach

C. trachomatis serovar D stoc

Fuarthas Chlamydia trachomatis serovar D (Ct SvD; UW{{{0}/Cx, ATCC® VR-885™) ó American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA) agus iomadaíodh é in HeLa{ {2}} cealla, bainte, agus íonaithe mar a thuairiscítear ag Caldwell et al. (43). Stóráladh an stoc C. trachomatis SvD ag -80 céim i 0.2 M shiúcrós, fosfáit sóidiam 20 mM (pH 7.4), agus aigéad glútamach 5 mM (SPG) agus cinneadh tiúchan na n-aonad foirmithe inclusions (IFUanna) i cealla HeLa agus cealla McCoy.

Príomhaigh neamhdhaonna

Áiríodh tríocha cynomolgus macaques (Macaca fascicularis) ar mheáchan 3 go 5 kg sa staidéar a láimhseáladh i saoráidí NHP bithshábháilteachta leibhéal 3 (ABSL3) de chuid IDMIT ("Samhlacha Galair Thógálacha agus Teiripí Nuálacha" ag an CEA "Commissariat à l'Energie Atomique," Fontenay-aux-Roses, an Fhrainc; uimhir chreidiúnaithe #D92- 032-02). D'fhormheas an coiste institiúideach eitice "Comité d'Ethique en Expé rimentation Animale du Commissariat à l'Energie Atomique et aux Energies Alternatives" na prótacail (CEtEA #44) faoi uimhir ráitis A14-026. D'údaraigh an "Aireacht Taighde, Nuálaíochta agus Oideachais" an staidéar faoin gcláruimhir APAFIS#720-201505281237660. Rinneadh tástáil dhiúltach ar gach ainmhí le haghaidh SIV, SHIV, STLV (víreas Tlymphotropic Simian), víreas herpes B, filovirus, SRV-1, SRV-2 roimh an staidéar agus deimhníodh go raibh siad seronegative le haghaidh ionfhabhtú Clamydia. Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir de réir na dtreoirlínte Eorpacha um chúram ainmhithe ("Journal Officiel de l'Union Europé enne", treoir 2010/63/UE, 22 Meán Fómhair, 2010).

Prótacail vacsaínithe

Roinneadh na 30 macaque go randamach i 6 ghrúpa le 5 ainmhí i ngach ceann acu. Léirítear go mion na réimis phríomthreisiúcháin vacsaínithe éagsúla do na 6 ghrúpa go mion i bhFíor 1. Le linn gach vacsaínithe, bhí na macaques sedated le clóiríhiodráit cetamine (10 mg/kg meáchan coirp ionmhatánach). Tugadh CTH522 (85 µg in aghaidh an ainmhí) ​​tríd an mbealach ionmhatánach (IM) le CAF{{2{0}}1 aidiúvach (625 µg/125 µg) nó aidiúvach AlOH (0.425 mg ), mar a thaispeántar i bhFíor 1. Rinneadh imdhíonta IM de réir toirte 0.6 ml i thigh dheis (M. quadriceps) an ainmhí. CTH522 Intranasal (IN) imdhíonta (30 µg in aghaidh an ainmhí) ​​le feiste Vaxinator ceangailte le steallaire 1 ml le dhá riarachán i ndiaidh a chéile de 0.25 ml, ceann amháin i ngach nostril. Rinneadh an vacsaín DNA-MOMP a riaradh trí bhealach intradermal (ID) le electroporation (EP) i gcraiceann an droma. Instealladh aitheantais 6 imleabhar arís agus arís eile (1 mg san iomlán) agus EP ina dhiaidh sin ag baint úsáide as an gcóras Nepagen™ (socruithe: 6 bhaga earraí cearnógacha de 10 ms le eatraimh 90 ms ag 110V, (300- 700mA)) . Tugadh IM don vacsaín HAd{33}}MOMP le dáileog de 1011 cáithnín víreasach in 1 ml in aghaidh an ainmhí. Tugadh an vacsaín MVA-MOMP IM le dáileog de 4*108 PFU in aghaidh an ainmhí i 0.5 ml toirt **. Níor tugadh aon vacsaíniú don ghrúpa naïve agus measadh gurbh é an grúpa rialaithe é.

Bailiúchán samplach

Le linn na nósanna imeachta samplála go léir, bhí na macaques sedated le clóiríhiodráit cetamine (10 mg/kg meáchan coirp IM). Bailíodh fuil trí venipuncture femoral ag seachtaine 0, 2, 4, 6, 8, 10, 16, 18, 20, 22, 24. Bailíodh sreabhán ceirbheacsach le haghaidh braite antashubstainte le Weck-Cel®spears (Medtronic Oftailmics, Jacksonville, FL , USA) ag seachtainí 4, 8, 16, 18, 20, 22 agus 24. Bailíodh samplaí ceirbheacsacha le haghaidh braite ualach clamaideach le táithíní flatlock rialta (Mast Diagnostic - tag.: 552C/ 10). Tar éis dul i dteagmháil leis an mhúcóis faighne-cheirbheacsach, cuireadh an swab i vial ina raibh meán UTM-RT (Mast Diagnostic – tag.: 330C/6) agus coinníodh ar oighear é.

Ionfhabhtú dúshlán faighne le 5*107 IFU de C. trachomatis SvD

Bhí na hainmhithe sedated le clorhydrate cetamine (10 mg/kg IM), curtha i suanbhreasa ventral agus a cromáin ardaithe agus 1 ml den ionaculum i bhfeidhm go trámach go díreach ar an mhúcóis faighne ag an trasdul faighne-ceirbheacs ag baint úsáide as steallaire 1 ml. Tugadh dáileog 5*107 IFU do gach ainmhí. Bhí cead ag an ainmhí fanacht i ngluaiseacht ventral agus a chromáin ardaithe ar feadh tamaill ghairid tar éis an ionaclaithe.

Measúnacht imdhíonta-nasctha le heinsím

CTH522antasubstaintí sonrachaaimsíodh samplaí i séiream agus swab le ELISA indíreach. Brataíodh plátaí Maxisorp® (NUNC A/S, Roskilde, an Danmhairg) le CTH522 (0.5 µg/ml) thar oíche ag 4 chéim . Braitheadh ​​na isitíopaí IgG agus IgA le hantasubstaintí comhchuingeacha HRP a bhí sonrach i gcoinne príomhaí neamhdhaonna IgG (43R-IG020HRP, Fitzgerald, Acton, MA, USA, 1:75.{{10) }}) agus IgA (43C-CB1631, Fitzgerald, SAM, 1:50.000). Rinneadh na frithghníomhartha a léirshamhlú le tsubstráit TMB PLUS (KemEnTec, Taastrup, an Danmhairg) agus stop le haigéad sulfarach 0.5 M. Léadh na plátaí ar léitheoir ELISA ag 450 nm agus ceartúchán ag 650 nm. Baineadh úsáid as rialú dearfach (séiream ó staidéar roimhe seo) mar chaighdeán inmheánach chun éagsúlacht pláta-go-pláta a cheartú. Ritheadh ​​​​dhá tobar gan foshraith mar rialú diúltach ar gach pláta. Ríomhadh na titers antashubstainte mar chómhalartán an chaolaithe is airde le luach dlús optúil (OD) níos airde ná an scoite. Socraíodh an scoith ón meán sampla lae 0 móide 2*SD.

Eagar agus anailís peptide

Dearadh an t-eagar peiptíde CTH522 le trí chóip de pheiptídí 15m díluailithe forluiteacha ag 14 aimínaigéad a chlóbhualadh ar shleamhnáin ghloine feidhmiúla agus a ghoradh le samplaí serum ag JPT Peptide Technologies, Beirlín. Go hachomair, goraíodh an t-eagar le samplaí séiream a bailíodh ag seachtain 24 agus léiríodh coimpléisc pheptíde IgG ag baint úsáide as IgG frith-moncaí gabhar biotinylated agus Alexa Fluor® 647 Streptavidin. Scanadh sleamhnáin le scanóir ardtaifigh ag 635 nm agus tuairiscíodh sonraí mar aonaid fluaraiseachta treallach. Socraíodh meán na luachanna triarach, má bhí an chomhéifeacht éagsúlachta níos mó ná 0.5, níor úsáideadh ach an 2 luach is gaire. Baineadh úsáid as 10 faoin gcéad den chomhartha déine uasta (65,535) mar scoite le haghaidh afreagra dearfach, agus do mheánchomharthaí faoi bhun na tairsí seo luach a chomhfhreagraíonn do leath luach na tairsí (3277).

Measúnacht neodraithe in vitro

Rinneadh an measúnú neodraithe in vitro chun tástáil a dhéanamh ar chumas na n-antasubstaintí séiream spreagtha ag vacsaín ionfhabhtú Chlamydia i gcealla HaK in vitro a neodrú. Lean an measúnú go príomha ar an bprótacal a thuairiscítear roimhe seo (44). Ar dtús, goraíodh samplaí séiream ó ainmhithe aonair ag 56 céim ar feadh 30 nóiméad chun an comhlánú a dhíghníomhachtú. Meascaíodh stoc Chlamydia (SvD, SvE, agus SvF) agus goraíodh é le caolúchán sraitheach de shéiream neamhghníomhaithe ó gach ceann de na hainmhithe vacsaínithe ar feadh 30 nóiméad agus ansin ionaclaithe ar mhonashraith de chealla HaK i 96-phlátaí bun cothrom i dúbailt. Tar éis 30 uair an chloig goir, socraíodh agus léiríodh cealla agus cuimsiú le serum coinín polyclonal frith-Ct043 agus antashubstaint thánaisteach lipéadaithe fluaraiseacht (Alexa Plúr 488, gabhar-frith-coinín IgG, A11008, Life Technologies) sa caolú 1:500 . Rinneadh comhaireamh na gcuimsiú de láimh i 20 réimse radhairc ag formhéadú 40x (micreascóp fluaraiseachta inbhéartaithe Olympus IX71). Ríomhadh neodrú mar an laghdú céatadáin ar mheánlíon na IFUanna i gcomparáid le linn séiream ó ainmhithe grúpa rialaithe (naive).

staining cítocín PBMC intracellular agus comhchíteiméadracht

Rinneadh PBMCanna a leithlisiú agus ({{0}} x 106 ) athshuíomh i 150 µl de mheán iomlán ina raibh 0.2 µg de gach antasubstaint chomhspreagthach CD28 agus CD49b. Rinneadh spreagadh i 96 toibreacha/pláta ag baint úsáide as 2 µM de gach linn peiptíde nó SEB (mar rialú dearfach) nó meánach amháin (mar rialú diúltach). Cuireadh Brefeldin A le gach tobar ag tiúchan deiridh de 10 µg/ml agus goradh an pláta ag 37 céim C, 5 faoin gcéad CO2 thar oíche. Ansin nite na cealla, daite le dath inmharthanachta (violet, dath imoibríoch fluaraiseacha, Invitrogen), seasta, agus tréscaoilteach leis an imoibrí BD Cytofix/Cytoperm. Stóráladh samplaí cealla tréscaoilteacha ansin ag -80 céim roimh an nós imeachta stainithe. Rinneadh staining antasubstainte in aon chéim amháin tar éis tréscaoilteachta. Gach a úsáidtearantasubstaintíatá liostaithe i dTábla 1. Tar éis 30 nóiméad goir ar oighear sa dorchadas, nite cealla i maolán BD Perm/Wash. Áiríodh cealla le LSR II (BD) díreach tar éis an nós imeachta staining agus úsáideadh bogearraí FlowJo le haghaidh anailíse sonraí.

TÁBLA 1 Antasubstaintí a úsáidtear chun marcóirí cille imdhíonacha agus cítocíní intracheallacha a smálú

DNA clamaidial faighne a bhrath trí PCR cáilíochtúil

Measúnacht in vitro imoibriú slabhrúil polaiméaráise (PCR) is ea measúnacht Abbott RealTime CT/NG (ABBOTT, Rungis, France) chun an DNA plasmid a bhrath go díreach, go cáilíochtúil do ghéanóim CT (C.trachomatis) agus NG (N. gonorrhoeae). . Baineadh aigéad núicléach as samplaí UTM (meáin iompair uilíoch) ar M2000SP agus rinneadh aimpliú ar M2000SP, de réir threoracha an mhonaróra. Cuireadh na torthaí in iúl mar thairseach timthrialla (Ct).

Anailís staitistiúil

Rinneadh na staitisticí go léir le bogearraí GraphPad Prism (leagan 8.1.2). Rinneadh anailís ar na sonraí nár dáileadh de ghnáth le tástálacha neamhpharaiméadracha; Tástáil Kruskal-Wallis agus tástálacha comparáide iolracha Dunn chun tábhacht na difríochta idir grúpaí a chinneadh. Cuireadh cuair a thaispeáin faoin gcéad PCR diúltach d’ainmhithe i gcomparáid le tástáil staitistiúil Log-rang (Mantel-Cox). Measadh go raibh tábhacht staitistiúil ag baint leis na comparáidí má bhí an luach P < 0.05 (P < 1.05). Léirítear leibhéil shuntasacha bhreise le réiltíní *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001.

Ráiteas infhaighteachta sonraí

Tá na bun-ranna a cuireadh i láthair sa staidéar san áireamh san alt/Ábhar Breise. Is féidir fiosrúcháin bhreise a chur chuig an údar comhfhreagrach.

Ráiteas eitice

Rinne "Comité d'Ethique en Expérimentation Animale du Commissariat à l'Energie Atomique et aux Energies Alternatives" (CEtEA #44) athbhreithniú agus faomhadh ar an staidéar ainmhithe faoi ráiteas uimhir A14-026. D'údaraigh an "Aireacht Taighde, Nuálaíochta agus Oideachais" an staidéar faoin gcláruimhir APAFIS#720-201505281237660.

Ranníocaíochtaí údair

Turgnaimh ceaptha agus deartha: JD, FF, EL, PA, RG, RS. Turgnaimh déanta: VC, DD, BD, SL, CD, CJ, ND-B, CB, BB, AT. Vacsaíní táirgthe agus tógálacha antaiginí: IR, PM, AO. Rinneadh anailís ar na sonraí: JD, EL, FF, IR, HJ. Dréachtaíodh agus chuir sé an páipéar in eagar: JD, EL, FF. Chuir gach comh-údair liostaithe go mór leis an saothar trí dhearadh agus coimpeart, agus/nó sealbhú, anailís agus léirmhíniú na sonraí. Chuir na húdair go léir leis an alt agus cheadaigh siad an leagan a cuireadh isteach.

Buíochas

Gabhaimid buíochas leis an Fondation Dormeur, Vaduz as an deonachán don Aonad Éabhlúcháin agus Tarchuir Víreasach le haghaidh ionstraimí saotharlainne a bhaineann leis an tionscadal seo.

Coimhlint leasa Is comh-aireagóirí iad FF, IR, PA agus AWO ar iarratas ar phaitinn ar vacsaíní i gcoinne clamaidia [WO2014146663A1]. Sannadh gach ceart do Statens Serum Institut, institiúid rialtais neamhbhrabúis sa Danmhairg. Dearbhaíonn na húdair eile go ndearnadh an taighde in éagmais aon chaidrimh tráchtála nó airgeadais a d’fhéadfaí a fhorléiriú mar choinbhleacht leasa a d’fhéadfadh a bheith ann.

Nóta ón bhfoilsitheoir Is éilimh na n-údar amháin iad na héilimh go léir a chuirtear in iúl san alt seo agus ní gá gurb ionann iad agus éilimh a n-eagraíochtaí cleamhnaithe, nó éilimh an fhoilsitheora, na n-eagarthóirí, agus na léirmheastóirí. Níl aon táirge a d’fhéadfaí a mheas san Airteagal seo, nó éileamh a fhéadfaidh a mhonaróir a dhéanamh, ráthaithe nó formhuinithe ag an bhfoilsitheoir.

Tagairtí

1. Newman L, Rowley J, Vander Hoorn S, Wijesooriya NS, Unemo M, Íseal N, et al. Meastacháin dhomhanda ar leitheadúlacht agus ar mhinicíocht ceithre ionfhabhtú gnéas-tarchurtha inleigheasta in 2012 bunaithe ar athbhreithniú córasach agus tuairisciú domhanda. PLoS a hAon (2015) 10(12):e0143304. doi: 10.1371/journal.pone.0143304

2. Bun an Long D, Coulter LJ. Clamydioses ainmhithe agus impleachtaí zónóiseacha. J Comp Pathol (2003) 128(4):217–44. doi: 10.1053/jcpa.2002.0629

3. Haggerty CL, Gottlieb SL, Taylor BD, Íseal N, Xu F, Ness RB. Riosca sequelae tar éis ionfhabhtú giniúna clamaidia trachomatis i mná. J Infect Dis (2010) 201 Soláthar 2:S134–55. doi: 10.1086/652395

4. Dodet B. Bacainní, dúshláin agus deiseanna atá ann faoi láthair maidir le vacsaíní éifeachtacha IGT a fhorbairt: dearcadh táirgeoirí vacsaíní, cuideachtaí biteicneolaíochta agus gníomhaireachtaí maoinithe. Vacsaín (2014) 32(14):1624–9. doi: 10.1016/ j.vaccine.2013.08.032

5. Brunham RC, Kuo CC, Cles L, Holmes KK. Comhghaol idir freagairt imdhíonachta an óstaigh agus aisghabháil chainníochtúil Chlamydia trachomatis ón endocervix daonna. Ionfhabhtaigh Imdhíon (1983) 39(3):1491–4. doi: 10.1128/iai.39.3.1491- 1494.1983

6. Cotter TW, Meng Q, Shen ZL, Zhang YX, Su H, Caldwell HD. Éifeachtúlacht chosanta na n-antasubstaintí monaclónacha imdhíon-ghlóbailin A (IgA) agus IgG i múnla murine d'ionfhabhtú conradh giniúna clamaidia trachomatis. Ionfhabhtaigh Imdhíonacht (1995) 63(12):4704–14. doi: 10.1128/iai.63.12.4704-4714.1995

7. Johansson M, Schon K, Ward M, Lycke N. Léiríonn staidéir ar lucha cnagála go n-éilíonn cosaint frith-chlamaídial cealla TH1 a tháirgeann IFN-gáma: an bhfuil sé seo fíor do dhaoine? Scand J Immunol (1997) 46(6):546–52. doi: 10.1046/j.1365- 3083.1997.d01-167.x

8. Gondek DC, Olive AJ, Stary G, Starnbach MN. Tá cealla CD4 móide T riachtanach agus leordhóthanach chun cosaint a thabhairt i gcoinne ionfhabhtú clamaidia trachomatis sa chonair ghiniúna uachtarach murine. J Immunol (2012) 189(5):2441–9. doi: 10.4049/ jimmunol.1103032

9. Armitage CW, O'Meara CP, Harvie MC, Timms P, Wijburg OL, Beagley KW. Meastóireacht ar IgA rúnaithe laistigh agus seach-epithelial in ionfhabhtuithe clamaidial. Imdhíoneolaíocht (2014) 143(4):520–30. doi: 10.1111/imm.12317

10. Armitage CW, O'Meara CP, Harvie MC, Timms P, Blumberg RS, Beagley KW. Torthaí éagsúla tar éis trascytosis IgG a dhíríonn ar antaiginí clamaidial intracellular agus eischeallacha. Biol Cille Imdhíonachta (2014) 92(5):417–26. doi: 10.1038/icb.2013.110

11. Olsen AW, Follmann F, Erneholm K, Rosenkrands I, Andersen P. Cosaint i gcoinne ionfhabhtú Chlamydia trachomatis agus athruithe paiteolaíocha ar chonair na giniúna uachtair trí antasubstaintí neodraithe a chuirtear chun cinn le vacsaín a dhírítear chuig an VD4 den phríomhphróitéin membrane seachtrach. J Infect Dis (2015) 212(6):978–89. doi: 10.1093/infdis/jiv137

12. Nguyen N, Guleed S, Olsen AW, Follmann F, Christensen JP, Dietrich J. Th1/Th17 Méadaíonn imdhíonacht fíocháin-chónaitheach cille an chosaint ach níl sé riachtanach i straitéis vacsaíne i gcoinne ionfhabhtú giniúna le clamaidia trachomatis. Imdhíon Tosaigh (2021) 12:790463. doi: 10.3389/fismu.2021.790463

Iarr tuilleadh:

Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Teil: móide 86 15292862950

Cuir forlíonadh cistanche leis an tralaí:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop