Nochtann Próitéiní Mitochondrial an Mheicníocht Trína bhFeabhsaíonn Cleachtadh Fisiciúil Cuimhne, Foghlaim agus Gníomhaíocht Mhótair i Samhail Rata Einceifileapaite Isceimiceach Hypocsaí Cuid 3

4. Ábhair agus Modhanna

4.1. Ainmhithe agus Grúpaí Turgnamhach

Baineadh úsáid as tríocha sé francach Sprague-Dawley don staidéar seo. Coinníodh na hainmhithe ag 22 ± 1◦C le timthriallta éadrom / dorcha de 12 h agus bhí rochtain saor in aisce acu ar bhia agus ar uisce. Rinneadh nósanna imeachta turgnamhacha le ceadú an Choiste Institiúideach Eiticiúil um Chúram Ainmhithe agus Taighde Ollscoil Zhengzhou.

Tagraíonn an timthriall dorcha don tréimhse nuair a chodlaíonn daoine san oíche, agus tá dlúthbhaint aige le cuimhne. Don chuid is mó daoine, feabhsaíonn oíche mhaith codlata sláinte fhisiciúil agus feidhm na hinchinne. Ag an am céanna, tá baint ag codlata freisin le próiseas cuimhne na hinchinne.

Nuair a chodlaíonn muid, téann ár gcomhlachtaí isteach i gcéimeanna éagsúla codlata, lena n-áirítear codlata mearghluaiseacht súl (REM) agus codlata neamh-mhearghluaiseacht súl (NREM). Tá ról tábhachtach ag na céimeanna seo maidir le comhtháthú faisnéise na hinchinne agus comhdhlúthú cuimhne a rialú.

Faigheann an chuid is mó daoine taithí ar éifeachtaí dearfacha codlata ar thiúchan agus ar chuimhne. Léiríonn taighde gur féidir le codladh cabhrú linn ár gcuimhní cinn a chomhdhlúthú agus a neartú agus fiú ár gcumas foghlama a fheabhsú. Le linn codlata, comhtháthaíonn an inchinn faisnéis nua leis an eolas atá ann cheana féin, rud a fheabhsaíonn an cumas cuimhne a stóráil agus a úsáid.

Os a choinne sin, d’fhéadfadh caillteanas cuimhne agus deacrachtaí foghlama a bheith mar thoradh ar easpa codlata imleor. Féadfaidh insomnia fadtéarmach a bheith ina chúis le fadhbanna éagsúla sa chorp agus san inchinn, rud a dhéanann difear don saol laethúil agus d'inoibritheacht. Dá bhrí sin, tá straitéis codlata ceart agus stíl mhaireachtála réasúnta ríthábhachtach chun cuimhne mhaith a choinneáil.

Tríd is tríd, tá nasc idir timthriallta dorcha agus cuimhne. Is féidir le codladh leordhóthanach comhtháthú faisnéise inchinn agus comhdhlúthú cuimhne a chur chun cinn, agus féadfaidh neamhoird codlata fadtéarmacha difear a dhéanamh ar fheidhm na hinchinne agus ar an gcuimhne. Dá bhrí sin, ba cheart dúinn aird a thabhairt ar chaighdeán codlata inár saol laethúil agus stíl mhaireachtála shláintiúil a chothabháil, chun ár gcumas cuimhne agus foghlama a thacú agus a fheabhsú go héifeachtach. Is féidir a fheiceáil go gcaithfimid cuimhne a fheabhsú, agus is féidir le Cistanche deserticola feabhas mór a chur ar chuimhne, mar is féidir le Cistanche deserticola cothromaíocht neurotransmitters a rialáil freisin, mar shampla leibhéil acetylcholine agus fachtóirí fáis a mhéadú. Tá na substaintí seo an-tábhachtach don chuimhne agus don fhoghlaim. Ina theannta sin, is féidir le Cistanche deserticola feabhas a chur ar an sreabhadh fola agus seachadadh ocsaigine a chur chun cinn, rud a d'fhéadfadh a chinntiú go bhfaigheann an inchinn go leor cothaithigh agus fuinnimh, rud a fheabhsóidh beogacht agus seasmhacht na hinchinne.

Cliceáil a fhios 10 bealaí chun cuimhne a fheabhsú

Rinneadh gach iarracht líon na n-ainmhithe a laghdú agus fulaingt ainmhithe a íoslaghdú le linn na dturgnaimh. Roinneadh ainmhithe go randamach i gceithre ghrúpa (Fíor 8). (1) Bhí HIE, NT (grúpa hypoxia-ischemiaencephalopathy gan oiliúint aclaíochta) comhdhéanta d'ainmhithe a múnlaíodh le haghaidh einceifileapaite hypoxic-ischemic ar lá iarbhreithe 7 trí ainéistéisiú a dhéanamh ar na laonna leisoflurane (5% ionduchtaithe, cothabháil 1.5%).

Ansin ligeadh an t-artaire carotid coitianta ar chlé go buan, agus cuireadh na laonna ar an tolg athshlánaithe te ar feadh 30 nóiméad sular aistríodh iad chuig seomra hypoxic le sreabhadh leanúnach den ghás-mheascán hypoxic de 92% N2 agus 8% O2 ar feadh 90 nóiméad agus ansin. ar ais chuig na cages suas go dtí an 10ú seachtain gan iad a chur faoi réir aclaíochta snámha. (2) Bhí HIE, T (grúpa einceifileapaite hypoxia-ischemia le hoiliúint aclaíochta) comhdhéanta d'ainmhithe a múnlaíodh le haghaidh einceifileapaite hypoxic-ischemic mar atá i (1) agus a d'fhill ar na cages suas go dtí an 6ú seachtain den saol agus ansin faoi réir 90 nóiméad de. cleachtadh snámha laethúil ar feadh cúig lá le 2 lá scíthe in aghaidh na seachtaine ar feadh 4 seachtaine, (3) SHAM, NT (grúpa rialaithe) san áireamh ainmhithe nach raibh faoi réir aon chóireáil ach a mhair gnáthshaol sna cages ón lá iarbhreithe 1 go dtí an 10ú seachtain gan oiliúint aclaíochta, agus (4) Is éard a bhí i SHAM, T ná ​​ainmhithe nach ndearnadh aon chóireáil orthu ach a raibh gnáthshaol acu sna cages ón lá iarbhreithe1 suas go dtí 6 seachtaine, agus ina dhiaidh sin bhí siad faoi réir aclaíochta snámha ar feadh 4 seachtaine.

Rinneadh na brains ainmhithe ó na grúpaí éagsúla a bhaint ansin agus ullmhaíodh iad le haghaidh sníomh an iarthair (hippocampus agus cortex cerebral) agus imdhíonfhluaraiseacht (cortex mótair).

4.2. Paradigm Cleachtadh

Cuireadh lóistín ar ainmhithe le bia agus uisce ad libitum agus coinníodh iad ar 12-timthriall éadrom/dorcha. Roinneadh iad ina dhá ghrúpa: ainmhithe sedentary (HIE, NT agusSHAM, NT) agus ainmhithe aclaíocht (HIE, T agus SHAM, T). Bhí na hainmhithe aclaíochta faoi réir oiliúint aclaíochta snámha tar éis seachtaine iarbhreithe 6 ar feadh 4 seachtaine; bhí siad faoi réir aclaíocht snámha ar feadh 5 lá sa tseachtain le 2 lá de scíthe. Mhair gach seisiún snámha ar feadh 90 nóiméad. Líonadh an linn go doimhneacht 50 cm chun cosc ​​a chur ar na hainmhithe teagmháil a dhéanamh le bun an umair.

Bhí cead ag na hainmhithe snámh gan stró, gan aon ualach breise, agus spreagtar iad go réidh le linn snámha. Triomaíodh na francaigh go cúramach tar éis na haclaíochta agus d'fhill siad ar na cages.

4.3. Vertica! Tástáil Mótair Cuaille

Cuireadh na hainmhithe i ngach grúpa aghaidh ar a chéile ar chuaille éadach clúdaithe le téip (trastomhas 3.0 cm agus fad 150 cm), a coinníodh i suíomh cothrománach, ansin a ardaíodh de réir a chéile go dtí a. seasamh ingearach, agus taifeadadh an t-am a d'fhan an francach ar an cuaille ar feadh 2 nóiméad ar a mhéad (120 s). Sa tástáil seo, titeann an t-ainmhí a bhfuil easnamh i gcomhordú agus cothromaíocht mótair as an cuaille.

4.4. Tástáil Maze Uisce Morris (MWM)

Cuireadh francaigh (10 seachtaine d'aois) faoi MWM tar éis dóibh dul faoi 4 seachtaine de phrótacal oiliúna aclaíochta (SHAM, 'T agus HlE, T). Taifeadadh na sonraí lúbra uisce go léir ag baint úsáide as córas rianaithe físeán Panjab SMART (Panlab Howo Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.) (Shanghai, an tSín). Baineadh úsáid as an MWM mar a thuairiscítear ag l32]. Go hachomair, bhain francaigh úsáid as leideanna amhairc a cuireadh ar theorainneacha linn snámha chun ardán i bhfolach a bhaint amach agus éalú ón uisce. Rinneadh measúnú ar an bhfoghlaim thar 7 lá. Roimh an measúnú foghlama, tugadh francaigh isteach sa linn ina raibh uisce glan agus ardán infheicthe. Le linn na hoiliúna, tugadh cleachtaí snámha trialacha do na francaigh chun dul i dtaithí ar an tasc.

Le linn na céime foghlama, rinneadh smeartha ar fhrancaigh le dath dubh chun físeáin a rianú go héasca agus cuireadh an t-ardán faoi uisce. Bhí gach francach faoi réir ceithre thriail ó phointí tosaithe éagsúla (ceathrú). Rinne Córas Rianaithe Físeáin SMART Panlab taifead ar fholaigh nó ar an am a theastaíonn chun an t-ardán a bhaint amach. Ar lá deiridh an turgnaimh, baineadh an t-ardán, agus tugadh isteach gach francach isteach san uisce arís an líon uaireanta a thrasnaigh na hainmhithe suíomh an ardáin i bhfolach sa cheathrú a raibh an t-ardán ann roimhe seo (sprioccheathrú).

4.5. Blotting an Iarthair

Roghnaíodh sé francach go randamach ó gach grúpa don turgnamh ar leibhéal próitéine. Baineadh próitéiní as an hippocampus agus cortex agus rinneadh iad a aonchineálú in imoibrí RIPA (CW2333S, CoWin Biosciences, Cambridge, MA, SAM) agus scartha iad ina próitéiní cíteaplasmacha agus núicléacha. Cinneadh na tiúchan próitéine ag baint úsáide as an measúnú bicinchoninicacid (BCA) (CW0014S, CoWin Biosciences, Cambridge, MA, SAM), agus scartha iomlán de 20 g próitéine ag leictreafóiréis ar glóthacha uilíoch SDS-PAGE (CFAS AnyKD PAGE) # PE008, Zhonghui Hecai Bith-chógaisíochta Teicneolaíocht Co, Ltd, Shaanxi, an tSín.

Aistríodh próitéiní ansin chuig seicní fluairíde polaivinileideéin, (PVDF)(R1CB12934, Merck Millipore Ltd., (Burlington, MA, SAM) Cuireadh bac ar na seicní ar feadh 2 uair le 5% de sheirim-albaimin bó-ainmhithe (BSA) (#A8020, Solarbio Life Sciences , Beijing, an tSín) ag teocht an tseomra agus gortha leis na príomhantasubstaintí seo a leanas ó Theicneolaíocht Comharthaíochta Cille (Danvers, MA, SAM): AIF (D39D2, 1:1000), Cytochrome C (136F3, 1:1000), caspase scoilte{{ 13}} (Asp175, 1:1000), Smac/Diablo (D553R, 1:1000), agus OPA1 (D7C1A,1:1000).

GAPDH ó Servicebio, Wuhan, an tSín (GB11002, 1:2000), agus H3 ó Proteintech (17168-1-AP, 1:1000) ag 4 ◦C thar oíche agus antasubstaint thánaisteach comhchuingeach HRP SA00001-2 ó Proteintect ina dhiaidh (1:5000) gor ar feadh 2 uair ag teocht an tseomra. Rinneadh na bandaí próitéine a léirshamhlú le trealamh feabhsaithe ceimiceach #KF005 ó Affinity Biosciences agus íomháíodh iad leis an gcóras Anailíse Bithíomhá (Ollscoil Zhengzhou, Zhengzhou, an tSín). Cinneadh na cóimheasa de dhéine banda próitéine le GAPDH (cytoplasmicproteins) agus H3 (próitéiní núicléacha) mar thagairtí inmheánacha ag baint úsáide as ImageJ.

4.6. Imdhíonfluaraiseacht

Fuarthas na {{0}}µm slisní corónacha d’fhíochán inchinne trí úsáid a bhaint as micreatóim reo (Leica, an Ghearmáin) le haghaidh imdhíonfhluaraiseacht. Cuireadh bac ar na sleamhnáin ar feadh 2 h le PBS le séiream bó féatais 10%, (#A8020, Solarbio Life Sciences, Beijing, an tSín) agus 0.3% Triton ×-100, Amresco 0694, Biosharp, an Eastóin ag teocht an tseomra agus ansin gortha le príomh-antasubstaintí ó Theicneolaíocht Chomharthaíochta Cille (Danvers, MA, SAM): frith-AIF, D39D2 (caolú 1:400), frith-Chíteochróim C, 136F3 (caolú 1:200), caspase frith-scréitithe-3 , Asp175 (caolú 1:400), frith-Smac/Diablo, D553R (caolú 1:200) agus frith- OPA1, D7C1A (caolú 1:400) thar oíche ag 4 ◦C.

Ansin, nite na sleamhnáin 3 huaire gach 10 nóiméad buan i PBS, agus ansin gortha le antasubstaintí tánaisteacha (ab150077 ó Abcam, Cambridge Bithleighis Campus, Cambridge, RA) ar feadh 2 h ag teocht an tseomra sa dorchadas.DAPI, # C0065 ó Solarbio Life Cuireadh na hEolaíochtaí, Beijing, an tSín (1:100PBS) ar feadh 5 nóiméad a dhoirteadh, a nite i PBS ar feadh 3 huaire an ceann 5 nóiméad, a thriomú, cuireadh an gníomhaire múchta (# P0126, Beyotime Biotechnology, Shanghai, China), gloine leis. socraíodh duillín ar na sleamhnáin, agus stóráladh samplaí ag −20 ◦C ar feadh 2 h agus tógadh iad le haghaidh íomháithe micreascópacha. Gabhadh na híomhánna fíocháin le micreascóp fluaraiseachta comhfhócasach (Ni-U942877, Nikon, Tóiceo, an tSeapáin), agus na híomhánna a léiríonn rinneadh na próitéiní sa cortex mótair a chainníochtú ansin ag baint úsáide as FIJI-ImageJ mar a thuairiscítear i [33].

4.7. Anailís staitistiúil

Úsáideadh GraphPad Prism leagan 8.0.0 do Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, SAM) le haghaidh gach anailíse. Baineadh úsáid as ANOVA aontreo agus tástálacha post hoc Dunnett, faoi seach, chun suntas staitistiúil a thomhas. Cuirtear na torthaí i láthair mar mheán ± SEM, agus measadh go raibh p < 0.05 suntasach go staitistiúil.

5. Conclúidí

Léiríonn an staidéar seo gur chuir cleachtadh snámha feabhas ar ghníomhaíocht mhótair, ar chuimhne agus ar fhoghlaim a bhaineann le HIE trí apoptosis miteachondrial a shochtadh trí theCyto.C/cleaved caspase-3 agus cosáin chomharthaíochta AIF. Ina theannta sin, léiríodh go ndéanann idirghabháil chleachtaidh snámha cobhsú ar na féidearthachtaí cristae agus membrane mitochondrial mar a léirítear ag aisiompú Smac/Diablo agus OPA1 i bhfrancaigh le HIE. Mar thoradh air sin, is bonn tarraingteach agus inmharthana é seo do thaighde breise chun tuilleadh bealaí móilíneacha a aimsiú a d’fhéadfaí a láimhseáil chun HIE agus na heasnaimh dá bharr a bhainistiú go héifeachtach. ag HIE, níor ídigh sé na modhanna go léir a d'fhéadfadh a bheith ann lena fháil amach conas a chobhsaítear na cristae miteachondrial; tá sé seo ríthábhachtach do thaighde ar an ábhar seo amach anseo.

Ranníocaíochtaí Údair: Coincheapú, FG, FP, YW, agus CC; coimeád sonraí, FG, FP, YW, HL, agus JF; anailís fhoirmiúil, FG, HL, agus CC; éadáil maoinithe, CC; imscrúdú, FG, FP, YW, HL, agus JF; modheolaíocht, FG, FP, YW, agus CC; riarachán tionscadail, FG, YW, agus CC; acmhainní, CC; bogearraí, FG, FP, JF, agus CC; maoirseacht, CC; bailíochtú, FG, FP, YW, HL, agus CC; léirshamhlú, FG, FP, YW, HL, agus JF; scríobh – bundréacht, FG, agus YW;scríbhneoireacht–léirmheas agus eagarthóireacht FG agus HL Tá leagan foilsithe na lámhscríbhinne léite agus aontaithe ag gach údar.

Maoiniú: Tá an staidéar seo tacaithe ag Tionscadal Taighde Eolaíoch agus Teicneolaíochta na Roinne Eolaíochta agus Teicneolaíochta HenanProvincial (Deontas Uimh. 212102310217) agus deontas ó Chistí Fhondúireacht Eolaíochta Nádúrtha Náisiúnta na Síne (Deontas Uimh. 81401015).

Ráiteas an Bhoird Athbhreithnithe Institiúideach: Rinneadh an staidéar de réir threoirlínte an Choiste um Chúram Ainmhithe Taighde Ollscoil Zhengzhou; ZZUIRB2022-32.

Ráiteas um Toiliú Feasach: Neamhbhainteach.

Ráiteas Infhaighteachta Sonraí: Neamhbhainteach.

Coinbhleachtaí Leasa: Ní dhearbhaíonn na húdair aon choinbhleacht leasa.

Tagairtí

1. Li, B. ; Concepcion, K. ; Meng, X. ; Zhang, L. Idirghníomhaíochtaí inchinn-imdhíonachta i ngortú inchinne imbhreithe hypoxic-ischemic. Clár. Neurobiol.2017, 159, 50–68. [CrossRef]

2. Dubhghlas-Escobar, M.; Weiss, MD Einceifileapaite hippocsaí-ischemic: athbhreithniú don chliniceoir. Péidiatraí JAMA. 2015, 169, 397–403.[CrossRef] [PubMed]

3. Dubh, RE; Cousens, S.; Johnson, HL; Faiche, J. ; Rudán, I.; Bassani, D.; Jha, P.; Caimbeul, H. ; Walker, CF; Cibulskis, R.; et al. Cúiseanna domhanda, réigiúnacha agus náisiúnta mortlaíochta leanaí in 2008: Anailís chórasach. Lancet 2010, 375, 1969–1987. [CrossRef]

4. Iúil, SE; Ferriero, DM Straitéisí Neuroprotective Pharmacologic i nDíobháil Inchinn Nua-Naíoch. Clin. Peirianatól. 2014, 41, 119–131.[CrossRef]

5. Zhu, C. ; Rodriguez, JI; Li, T. ; Xu, Y.; Sun, Y. Ról an fhachtóra a chothaíonn apoptosis i ngortú inchinne hipocsamach-ischemic imbhreithe. Regen Neural. Res. 2021, 16, 205–213. [CrossRef] [PubMed]

6. Amhrán, S.-H.; Jee, Y.-S.; Ko, I.-G. ; Laoi, S.-W.; Sim, Y.-J. ; Kim, D.-Y.; Laoi, S.-J.; Cho, YS Treadmill a fheidhmiú agus a fheidhmiú roth feabhas a chur ar fheidhm mótair trí shochtadh bás cille neuronal apoptotic i francaigh athlasadh inchinn. J. Cleachtadh. Athshlánú. 2018, 14, 911–919.[CrossRef]

7. Kelly, M.; Darrah, J. Cleachtadh uisceach do leanaí a bhfuil pairilis cheirbreach orthu. Dev. Med. Páiste. Néaról. 2005, 47, 838–842. [CrossRef]

8. Müller, P. ; Duderstadt, Y.; Lessmann, V. ; Müller, NG Lactate agus BDNF: Príomh-idirghabhálaithe de Néarphlaisteachas Spreagtha Aclaíochta?J. Clin. Med. 2020, 9, 1136. [CrossRef]

9. Intlekofer, KA; Cotman, CW Cuireann aclaíocht in aghaidh laghdú ar fheidhm hippocampal san aosú agus galar Alzheimer. Neurobiol.Dis. 2013; sa phreas. [CrossRef]

10. Fíor, C. ; Ferreira, A.; Chaves-Kirsten, G.; Torrão, A.; Pires, R. ; Britto, L. Cuireann imshuí gabhdóirí BDNF bac ar éifeachtaí tairbhiúla aclaíocht i múnla francach de ghalar Parkinson. Néareolaíocht 2013, 237, 118–129. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com