Déan staidéar ar na heinsímí miocróbacha a tháirgtear le linn coipeadh baictéarach comhcheangailte agus a ngníomhaíochtaí bitheolaíocha ⅲ

Caibidil 3 Staidéar ar Ghníomhaíocht Antioxidant Einsímí

 

Tá sé cruthaithe go bhfuil baint ag go leor galar daonna leisOcsaigin ghníomhach agus fréamhacha saor in aisce, mar shamplaathlasadh, arteriosclerosis,ag dul in aois, diaibéiteas, slacht, etc.Fréamhacha iomarcacha saor in aisceSa chorp is féidir leis dínádúrú próitéine, damáiste cille agus bás a chruthú, agus fiú athruithe paiteolaíocha sa chorp. Dá bhrí sin, tá go leor staidéar sa bhaile agus thar lear ag lorg bianna atá saibhir i gcomhábhair frithocsaídeoirí nádúrtha chun galair de bharr fréamhacha saor in aisce a chosc agus a rialáil trí aiste bia. Sa lá atá inniu ann, leis na caighdeáin mhaireachtála atá ag dul i méid, athraíonn daoine a bhfócas de réir a chéile chuig a gcomhlachtaí féin, mar sin tagann níos mó táirgí sláinte chun cinn i sruth gan teorainn. Mar sin féin, níl sé éasca a bheith fíor -úsáideach. Is cineál bia iad na heinsímí is féidir a dhéanamh leat féin i saol daoine. Níl an costas an -ard agus tá go leor buntáistí ann.
Tá éagsúlacht feidhmeanna sláinte ag einsímí miocróbacha amhail frith-athlastach agus frith-athlastach, meitibileacht a chur chun cinn, díolúine a fheabhsú, whitening agus frith-aging, díthocsainiú agus frith-ailse. Faoi láthair, is beag staidéar atá ann ar airíonna antioxidant na n-einsímí miocróbacha sa bhaile agus thar lear, agus mar sin tá sé i gceist againn taighde domhain a dhéanamh orthu. Tógann an páipéar seo einsím Apple mar an réad taighde, agus úsáideann sé an t -ábhar feanóil iomlán, an chumhacht laghdaithe, an DPPH · Radharc saor in aisce, · OH radacach saor in aisce, radacach saor in aisce agus ABTanna saor in aisce a chur ar fáil mar innéacsanna cinntithe chun imscrúdú cuimsitheach agus córasach a dhéanamh ar einsím úll tar éis coipthe ar feadh 3 mhí. Rinneadh staidéar ar chomhdhéanamh agus ar ábhar na gcomhábhar gníomhach frithocsaídeora, agus tuigeadh a ghníomhaíocht antioxidant.

Luibheanna Nua Cistanche le cumhacht i bhfad níos mó frith-ocsaídiúcháin ná coipeadh baictéir

Seirbhís thacúil de Wecistanche-an onnmhaireoir Cistanche is mó sa tSín:
Ríomhphost: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Teil: +86 15292862950

 

 

 

 

3.1 Ábhair agus Modhanna

3.1.1 Ábhair

(1) Ábhair thurgnamhacha
Nigh úlla úra le huisce steiriúil faoi choinníollacha steiriúla, triomaigh iad go nádúrtha i mbord oibriúcháin steiriúil, bain iad, agus scaoil iad le húsáid níos déanaí. Cuir siúcra bán agus úlla leis i bpróca gloine steiriliú ag cóimheas maise de 1: 1. Gníomhaigh na baictéir a theastaíonn don turgnamh agus iad a ionaclú isteach san einsím de réir na scéime is fearr (fágtar an chéim oibríochta seo ar lár sa ghrúpa rialaithe), déan é a shéalú agus é a chur in áit fhuar agus thirim. Tar éis 3 mhí de choipeadh teocht an tseomra, tóg sampla chun an leacht einsím iomlán a fháil ina bhfuil an laíon, agus scagaire é. Tóg an supernatant mar an sampla turgnamhach, agus lártheifneoir an sampla ag 10000rpm ar feadh 15 nóiméad i lártheifneoir ardluais sula gcinnfidh tú na sonraí ábhartha. Is fiú a thabhairt faoi deara go ndéantar ár n -oibríochtaí go léir faoi choinníollacha steiriúla sa phróiseas chun einsímí a dhéanamh, chun éilliú neamhriachtanach a sheachaint.

(2) Príomh -Ionstraimí
Spectrophotometer: V -1100, monarcha ionstraime eolaíochta Shanghai;
Folcadh uisce teochta tairiseach: hh -2, Wuhan Litian Technology Instrument Co, Ltd. Tá ionstraimí eile mar an gcéanna le 2.1.3.

3.1.2 Modhanna

(1) Ábhar iomlán feanóil a chinneadh [53]
① Ullmhú Cuar Caighdeánach:
Meáigh go cruinn {{{0}}. 123 g d'aigéad Gallic, é a dhíscaoileadh i méid beag d'uisce driogtha, agus é a aistriú chuig 5 0 0 fleascán toirtmhéadrach ml chun an toirt a dhéanamh suas. Tóg 8 glan 1 {{1 {0}} ml fleascáin toirtmhéadracha, cuir {0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, agus 1.4 ml de thuaslagán caighdeánach aigéad gallic, faoi seach, caolaigh an marc le huisce driogtha, teasann 1 ml le buil an fhillte agus an t -uisce a bhúitiú le 20% de NACO in A in a A in a A in a bhuild in A in A in A in a A in a Fuileann, in A in A Fuileann in a A Uisce in A Fuileann le Fuilte agus le 2 ML Builte, Fuilte, Fuiltiú le Fillteán agus 2 Ml Fuiltiú, Ar feadh 1 nóiméad, fionnuar agus caol go 20 ml, agus cuir ag teocht an tseomra é ar feadh 30 nóiméad. Bain úsáid as speictreafóiméadar chun an t -ionsúiteacht A a thomhas ag tonnfhad 650 nm, agus tarraing cuar caighdeánach le hionsúiteacht A mar an ais chothrománach agus an tiúchan samplach mar an ais ingearach. ② Brath
Cuir uisce driogtha le 100μl, 200μl, 300μl, 400μL, agus 500μl, agus 500μl, agus cuir 1ml de imoibrí Folin-fenol, meascán go cothrom, imoibríonn sé le haghaidh 3min, ansin cuir 3ml de 20% NACO3, croith an t-uisce in aghaidh an uisce, agus déan é a thomhas ag A Aborbance in A in A Aborbance in A Folctha Teochta 25 a bhfuil A A A A A A in A A A A A A A A A A in A A A A A A A A A A A Uisce Folctha mar A A A A A A A A A A A Folhone Folctha A Feath Uisce a Fháil mar Feath Uisce a Fháil ar Feath Uisce mar a A A A A A a A A Folhone Folctha A Feath Folctha A Feath Folctha A Feath Folctha A Feathán A Feathán A Dhréachtú i bhFaith 760nm le speictreafóiméadar. Cuirtear an t -ábhar feanóil iomlán in iúl mar choibhéisí aigéad gallic, agus ríomhtar an t -ábhar feanóil iomlán de réir na cothromóide cuar caighdeánach.

(2) measúnacht laghdaithe [54]
Cuir 1 {0 {0 μl, 2 {0 0μl, 300μl, 400μl, agus 500μl den sampla go 2.5ml de mhaolán fosfáite le comhchruinniú 0.2mol/L agus PH luach 6.6, agus ansin cuir 2.5ml de 1%de Photuride (W/v, le A mais de 1, le A mais de A A MASION de A A A A A A a A A A A A A A A A A De As A A A A As At At At Luach de Luach na dTábtha de PH ({{AR AIS 50 céim ar feadh 30 nóiméad. Ansin cuir 2.5ml d'aigéad trichloroacetic (w/v) le tiúchan maise de 10%, agus lártheifneoir ag 3000rpm ar feadh 10 nóiméad i lártheifneoir ardluais. Díreach tar éis dó a bheith ag éirí amach, tóg 2.5ml de shuaimhneas isteach i bhfleascán toirtmhéadrach, cuir 2.5ml d'uisce driogtha agus 0.5ml de chlóiríd ferric (w/v) le tiúchan maise de 0.1%. Bain úsáid as uisce driogtha mar rialú bán, agus tomhais an ionsúiteacht A ag tonnfhad 700nm ag baint úsáide as speictreafóiméadar. Is féidir neart na cumhachta laghdaithe a mheas de réir an luach ionsúite. Dá airde an luach ionsúite, is ea is láidre an chumhacht laghdaithe.

 

(3) Cinneadh a dhéanamh ar éifeacht scavenging radacach saor ó anion superoxide [55]

Tóg 4.5 ml de {0. Cuir 1 ml de thuaslagán samplach einsím le tiúchain de 10%, 20%, 30%, 40%, agus 50%agus 0.4 ml de thuaslagán pyrogallol 25 mmol/L faoi seach. Measc go maith agus freagair i ndabhach uisce 25 céim ar feadh 5 nóiméad. Cuir 1.0 ml de 8 mol/L HCl leis chun an t -imoibriú a fhoirceannadh. Bain úsáid as maolán Tris-HCl mar thagairt agus bain úsáid as speictreafóiméadar chun an t-ionsúiteacht A a thomhas ag tonnfhad de 299 nm chun an ráta scavenging a ríomh. Maidir leis an ngrúpa rialaithe bán, baineadh úsáid as 1 ml tuaslagóra in ionad an tsampla. Ríomhadh an ráta scavenging o {2- de réir fhoirmle 3.1: o {2- ráta scavenging (%)=(a {1- a2)/a1 × 100 (3.1) áit a bhfuil: A1 is ea an t -ábaltacht an bhlaosc; Is é A2 ionsúiteacht an tsampla.

(4) Cinneadh a dhéanamh ar éifeacht scavenging ar fhréamhacha hiodrocsaile [56]

1 {0 0μl, 200μl, 300μl, 400μL, cuireadh tuaslagán samplach 500μl le huisce go 2ml, agus ansin cuireadh é le 1.4ml de shárocsaíd hidrigine le tiúchan maise molar de 6mmol/L, agus ansin cuirtear é le 0.6ml de shalicyla sóidiam le tiúchan móil móil de chomhchruinniú móil de 20mmol/l agus 2m de ferrous de chomhchruinniú de 20m de chomhchruinniú de 20m de A mais de As As As As As As As As As As As As As As As As As As Fiús 1.5mmol/L, agus téite i ndabhach uisce teochta tairiseach ag 37 céim do 1h. Coigeartaigh go nialas le huisce driogtha, agus tomhais an ionsúiteacht A ag tonnfhad 562nm ag baint úsáide as speictreafóiméadar. Déan 3 mhacasamhail do gach cóireáil. Ríomh an ráta scavenging radacach hiodrocsaile de réir Foirmle 3.2: Ráta scavenging radacach hiodrocsaile (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (3.2) i gcás: is é A1 an t -ionsúchán meán den bhán; Is é A2 an meán -ionsúiteacht ar an tuaslagán samplach. (5) Cinneadh a dhéanamh ar éifeacht scavenging radacach DPPH [57]

Luibheanna Nua Cistanche le cumhacht i bhfad níos mó frith-ocsaídiúcháin ná coipeadh baictéir

 

Pípéad go cruinn 2 ml de thuaslagán samplach einsím le tiúchain de 1 {0%, 20%, 30%, 40%, agus 50%i bhfleascán toirtmhéadrach 10 ml, ansin cuir 2 ml de thuaslagán uiscí eatánóil DPPH 80%leis an bhfleascán toirtmhéadrach. Is é an tiúchan maise molar 2 × 10-4 mol/l. Tar éis é a mheascadh, lig dó seasamh ag teocht an tseomra ar feadh 30 nóiméad. Ag baint úsáide as tuaslagán eatánóil 80% mar thagairt, tomhas ionsúiteacht an tsampla ag tonnfhad de 517 nm, a thaifeadtar mar A1. Measc 2 ml de thuaslagán DPPH agus 2 ml de thuaslagán eatánóil le tiúchan maise de 80% agus tomhais a n -ionsúiteacht ag an tonnfhad céanna, a thaifeadtar mar A0. Measc 2 ml de thuaslagán einsím agus 2 ml de thuaslagán eatánóil le tiúchan maise de 80% agus tomhais a n -ionsúiteacht ag an tonnfhad céanna, a thaifeadtar mar A2. Ríomh an ráta scavenging radacach saor in aisce DPPH de réir Foirmle 3.3:
DPPH Ráta scanraithe radacach saor in aisce (%) {{{{0}} [1- (a {1- a2)/a 0] × 100 (3.3) áit a bhfuil: A1 an t -ionchorprú 2 ml DPPH 80% Athanol Atpanol agus 2 MLL tuaslagán 2 ml de 2 ml dp 8 80% tuaslagán Athanol agus 2 tuaslagán de 2 ml tuaslagán de 2 ml dpl 80% tuaslagán Athanol agus 2 tuaslagán de 2 ml tuaslagán de 2 ml dp 8 80% tuaslagán Athanol agus 2 tuaslagán 2 ml; Is é A2 an tuaslagán measctha de thuaslagán einsíme 2 ml agus 2 ml 80% eatánól trí chomhchruinniú maise; Is é A0 ionsúiteacht tuaslagáin mheasctha de 2 ml DPPH tuaslagán agus 2 ml eatánól 80% de réir comhchruinnithe.

(6) Cumas scanraithe radacach saor in aisce ABTS [58]
Cuir méid áirithe sulfáit photaisiam go 7 mmol/L ABTS go dtí go bhfuil an tiúchan deiridh den tuaslagán measctha 2.45 mmol/L. Cuir an tuaslagán measctha in áit fhionnuar agus tirim ag teocht an tseomra ar feadh 12 go 16 uair an chloig. Forlíonadh 1μl, 3μl, 5μl, 7μl, agus 9μl de thuaslagán samplach go 10μl le maolán fosfáite 5mmol/L PH7.4, agus ansin measctha go cothrom le 10mL den sulfáit photaisiam thuas agus tuaslagán measctha ABT, agus ceadaíodh dó freagairt ag teocht imoibriúcháin de 30 céim agus am imoibriúcháin de 5min. Nialas le huisce driogtha, agus tomhais an ionsúiteacht A ag tonnfhad 734nm ag baint úsáide as speictreafóiméadar. Ríomh an ráta scavenging radacach saor in aisce ABTS de réir Foirmle 3.4:
Ráta scavenging radacach saor in aisce (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (3.4) áit a bhfuil: A1 ionsúiteacht an ghrúpa rialaithe bán; Is é A2 ionsúiteacht an ghrúpa turgnamhach

 

3.2 Torthaí agus Anailís

3.2.1 Ábhar Feanóil Iomlán

(1) Cuar caighdeánach
Tarraingíodh an cuar caighdeánach den ábhar feanóil iomlán leis an tiúchan d'aigéad gallic mar an ais chothrománach agus an luach ionsúite mar an ais ingearach, mar a thaispeántar i bhFíor 3.1.

 

Fig.3.1 An cuar caighdeánach d'ábhar iomlán feanóil

Ó Fig.3.1, is féidir linn a fheiceáil go bhfuil an chothromóid chaighdeánach cuar y {=11. 375x +0.

(2) Samplaí a chinneadh

Léirítear i bhFíor.3.2 torthaí an chinnidh iomlán ar ábhar feanóil na n -einsímí Apple sa ghrúpa rialaithe agus an ghrúpa turgnamhach ag tiúchain éagsúla.

 

 

 

Fig.3.2 Cuar an Ábhair Fhenolic Iomlán

Mar a thaispeántar i bhFíor.3.2, tá ábhar feanólach iomlán ard ag na heinsímí Apple sa ghrúpa rialaithe agus sa ghrúpa turgnamhach, agus méadaíonn an dá rud leis an méadú ar an méid tuaslagáin samplach a chuirtear leis. Sa ghrádán comhchruinnithe céanna, mhéadaigh an t -ábhar feanólach iomlán san einsím Apple sa ghrúpa rialaithe ó {0. Tá an t -ábhar feanólach iomlán sa ghrúpa turgnamhach i bhfad níos airde ná ábhar an ghrúpa rialaithe, agus tá an treocht aníos níos soiléire. De réir an ábhair feanólacha iomláin, tá gníomhaíocht antioxidant foriomlán an ghrúpa turgnaimh níos mó ná gníomhaíocht an ghrúpa rialaithe.

 

3.2.2 Cumhacht a Laghdú

Léirítear i bhFíor 3.3 na torthaí a bhaineann le cinneadh a dhéanamh ar chinneadh cumhachta na n -einsímí úll sa ghrúpa rialaithe agus sa ghrúpa turgnamhach ag tiúchain éagsúla.

 

Mar a léirítear i bhFíor 3.3, tá an treocht athraitheach maidir le cumhacht a laghdú na n -einsímí úll cosúil leis an treocht athraitheach den ábhar feanóil iomlán. Tá cumhacht laghdaithe an ghrúpa turgnamhach níos airde ná cumhacht an ghrúpa rialaithe, agus an é an grúpa turgnamhach nó an grúpa rialaithe é, laistigh den raon tiúchana a chuirtear i láthair sa turgnamh, léiríonn an chumhacht laghdaithe treocht mhéadaitheach leis an méadú ar mhéid an tuaslagáin shamplaí a chuirtear leis. Dheimhnigh na sonraí turgnamhacha freisin go bhfuil gníomhaíocht antioxidant an ghrúpa turgnamhaí níos mó ná an ghrúpa rialaithe i dtéarmaí cumhachta a laghdú.

 

 

3.2.3 cumas scavenging radacach saor ó anion superoxide

Léirítear i bhFíor 3.4 torthaí na n -einsímí úll saor ó anion superoxide anion.

Mar a thaispeántar i bhFíor 3.4, tá difríocht mhór idir an cumas scanraithe radacach saor in aisce idir an grúpa turgnamhach agus an grúpa rialaithe. Laistigh den raon comhchruinnithe a chuirtear i láthair sa turgnamh, athraíonn an cumas scanraithe radacach saor ó anion an -ocsaíd an ghrúpa turgnamhach go suntasach nuair a bhíonn an tiúchan samplach 10%go 20%, agus níl an t -athrú soiléir tar éis an tiúchan níos mó ná 20%; Nuair a bhíonn an tiúchan 50%, tá an cumas scavenging radacach saor ó anion anion chomh hard le 85.4%. Is féidir an cumas scavenging radacach saor in aisce a thaispeánann an grúpa rialaithe a fheiceáil go soiléir ón gcairt treochta. De réir mar a mhéadaíonn an tiúchan einsíme, méadaíonn an cumas scavenging radacach saor in aisce seo, athraíonn sé go mall, agus de réir a chéile bíonn stát seasmhach ann. Sroicheann an cumas scavenging uasmhéid de 42.6%. Tá an grúpa turgnamhach beagnach dhá oiread níos airde leis an ngrúpa rialaithe.

 

 

3.2.4 Cumas scavenging radacach saor ó hiodrocsaile

Léirítear i bhFíor 3.5 na hathruithe ar chumas scavenging radacach saor ó hiodrocsaile sa ghrúpa rialaithe agus sa ghrúpa turgnamhach ag tiúchain éagsúla.

 

 

Fig.3.5 An cuar a bhaineann le radacach saor ó hiodrocsaile a scaradh

 

Is féidir a fheiceáil ó Fíor 3.5 go bhfuil an cumas scanraithe radacach hiodrocsaile saor in aisce sna heinsímí sa ghrúpa turgnamhach agus an grúpa rialaithe ag méadú leis an méadú ar an méid breise. Bhí cumas scanraithe radacach hiodrocsaile an ghrúpa turgnamhaí níos ísle ná cumas an ghrúpa rialaithe, agus d'fheidhmigh sé go dona ag tiúchan íseal. Ag tiúchan ard, tháinig méadú suntasach ar an gcumas scavenging radacach saor ó hiodrocsaile. D'fhéadfadh sé gurb é an chúis a bhí leis seo ná go raibh cineálacha agus ábhar miocrorgánach sna heinsímí Apple sa ghrúpa turgnamhach agus sa ghrúpa rialaithe difriúil le linn an phróisis choipeadh, agus go raibh ábhar na meitibilítí tánaisteacha agus na gcomhpháirteanna de gach táirge a tháirgtear leis an gcoipeadh difriúil, mar sin bhí an cumas frithocsaídeach a thaispeántar difriúil.

 

3.2.5 DPPH · Cumas scanraithe radacach saor in aisce

I gcomparáid le modhanna braite eile, baintear úsáid fhorleathan as cumas scavenging radacach saor in aisce chun gníomhaíocht antioxidant a mheas i dtréimhse ghearr ama [59]. Rinneadh an cumas DPPH · saor in aisce ar an gcumas ag tiúchan éagsúil a bhreacadh de réir thorthaí an ghrúpa rialaithe agus na n -einsímí Apple grúpa turgnamhach, mar a thaispeántar i bhFíor 3.6.

Mar a thaispeántar i bhFíor 3.6, nuair a bhí tiúchan einsím an ghrúpa rialaithe níos ísle ná 30%, bhí an cumas scanraithe radacach DPPH · saor in aisce níos lú ná 50%, ach léirigh einsím Apple an ghrúpa turgnamhach freisin DPPH · cumas scavenging radacach saor in aisce ag tiúchan íseal. Taispeánann na torthaí turgnamhacha go bhfuil an t -aspergillus oryzae, an giosta, an streptococcus teirmeafópach agus lactobacillus na Bulgáire tairbheach don chumas scavenging radacach saor in aisce san einsím. Nuair a bhíonn an tiúchan einsím 50%, tá an cumas seo chomh hard le 91.4%, atá i bhfad níos airde ná an 69.8%den ghrúpa rialaithe ag an tiúchan céanna.

 

3.2.6 ABTS ACMÁINT RAPICANN

Taispeántar torthaí na n -einsímí Apple sa ghrúpa rialaithe agus an ghrúpa turgnamhach ag comhchruinnithe difriúla i bhFíor 3.7.

Fig.3.7 Cuar na hacmhainne radacach ABTS
Is féidir é a fheiceáil ó Fhíor 3.7 go bhfuil an ráta scanraithe de na heinsímí úll sa ghrúpa turgnamhach níos airde nuair a bhíonn an méid breisithe einsím níos mó ná 5μl. An staidéar a rinne Erel et al. Léirigh sé go mbraitheann cumas scanraithe na bhfréamhacha ABTanna go mór ar an tiúchan níos airde de shubstaintí feanólacha [60]. Léirigh torthaí an chinnidh iomláin ábhair feanóil go raibh an t -ábhar feanóil iomlán sa ghrúpa turgnamhach níos airde ná ábhar an ghrúpa rialaithe. Deimhníodh na torthaí turgnamhacha i bhFíor 3.7 go bhfuil cumas scanraithe na bhfréamhacha ABTS níos mó ná cumas an ghrúpa rialaithe.

 

3.3 Achoimre ar an gcaibidil seo

Déanann an chaibidil seo staidéar ar an ngaol idir gníomhaíocht antioxidant na n -einsímí úll a tháirgtear trí choipeadh le ceithre amhrán roghnaithe úlla, tiúchan na samplaí einsím, agus comparáid idir comhpháirteanna gníomhacha frithocsaídeacha agus cumas scavenging radacach saor in aisce idir an grúpa turgnamhach agus an grúpa rialaithe. Taispeánann na torthaí turgnamhacha go bhfuil an t -ábhar feanóil iomlán atá ag einsím Apple sa ghrúpa rialaithe níos ísle ná an t -ábhar feanóil sa ghrúpa turgnamhach, agus a chumhacht laghdaithe, tá cumas radacach radacach saor in aisce, saor ó DPPH saor in aisce agus ABTS saor in aisce agus iad siúd sa ghrúpa rialaithe; Tá cumas an -mhaith ag an einsím sa ghrúpa rialaithe do fhréamhacha saor ó hiodrocsaile.
Go ginearálta, léirigh an grúpa turgnamhach gníomhaíocht antioxidant níos airde, rud a dheimhnigh an fhéidearthacht a bhaineann le tréithchineálacha a chur go saorga chun einsímí miocróbacha a dhéanamh. Ar an mbealach seo, tá níos mó substaintí ag bianna einsíme miocróbacha do shláinte an duine ar bhonn an choipeadh nádúrtha bunaidh, agus is féidir leo forbairt níos fearr a dhéanamh sa treo a bhfuil súil ag daoine leis.