Baineann Cosaint Stéigeach le Proanthocyanidins le Gníomhartha Frith-ocsaídiúcháin agus Frith-ghalaithe i gComhcheangal le Feabhsú ar Íogaireacht Insline, Hoiméastáis Lipid Agus Glúcóis Cuid 2

Déan teagmháil le do thoiloscar.xiao@wecistanche.comle haghaidh tuilleadh eolais

Sloinneadh teinn ag baint úsáide as blot an Iarthair. Léirítear i bhFíor 6 gur mhéadaigh cur leis na cealla Fe/Asc le Caco-2/15 leibhéal an dá einsím thábhachtacha, ach rinne PACanna a n-uasrialú de bharr Fe/Asc a fhrithchothromú.

Ós rud é go modhnaíonn comharthaíocht inslin próisis lipogenesis, FA-ocsaídiúcháin, agus gluconeogenesis, bhí sé tábhachtach imscrúdú a dhéanamh ar thionchar Fe/Asc agus PACs ar MAPKs agus PI3K/Akt, an dá phríomhbhealach comharthaíochta inslin. Chuige sin, rinneadh inslin a ghortú roimh chill Caco-2/15 roimh an gcill eile Caco-2/15

Fíor6.Éifeachtaí PACanna ar glucogenesis i gcealla Caco-2/15. Cuireadh Proanthocyanidins (PACs, 250 ug / mL) leis an urrann cille apical ar feadh 24 h roimh chóireáil le Fe/Asc (200μM/2 mM) ar feadh 6h ag 37 céim . Rinneadh measúnú ar an slonn próitéine de (A) G6Pase agus (B) PEPCK ag blot an Iarthair.púdar cisteancheIs ionann na torthaí agus acmhainn ±SEM 3 thurgnamh neamhspleácha, gach ceann díobh faoi thrí. Taispeántar blotch ionadaíoch an Iarthair, a léiríonn turgnamh trí chóip ar an nglóthach céanna agus ag an nochtadh céanna.*P<0.05 vs="" untreated=""><0.05 vs="" fe/asc="" treated="" cells.="">fréimhe cistancheG6Pase glúcóis-6-fosfatás, PEPCK phosphoenolpyruvate carboxykinase.

Cliceáil anseo le do thoil chun tuilleadh eolais a fháil

cóireálacha chun an cosán comharthaíochta a ghníomhachtú. Cé gur ardaigh Fe/Asc p{0}}Slonn próitéine MAPK agus cóimheas phospho p38-MAPK/p38-MAPK, chuir PACanna cosc ​​ar na gníomhartha seo (Fíor 7A-C).Ar an láimh eile, cé gur laghdaigh Fe/Asc mais próitéine an chóimheas phospho Akt (pAkt) agus Akt/Akt, léirigh PACanna cumas a ngnáthleibhéal a choinneáil. Tugadh treocht den chineál céanna faoi deara do PI3K (Fíor 7D-I. Mar sin, tacaíonn na breathnuithe seo le ról fabhrach PACanna i gcomharthú inslin.

Plé

Tá clú agus cáil ar pholaiphenóil as a n-éifeachtaí bitheolaíochta agus íocshláinte pleiotrópacha, rud a mhíníonn an mhealladh atá ag go leor eolaithe agus tionscail bia do na táirgí nádúrtha suimiúla seo atá díorthaithe ó phlandaí. Seasann PACanna amach ón éagsúlacht agus ó líon ard polyphenols mar gheall ar a n-iarmhairtí cógaseolaíochta agus teiripeacha ar neamhoird ainsealacha2021. In ainneoin a ngnéithe inmholta, tá go leor nach bhfuil ar eolas fós maidir lena dtionchar ar an gconair GI, a úsáideann líonraí leathnaithe díleácha, imdhíoneolaíochta, néarónacha agus meitigenomics2.codladh cistéirAr an gcúis seo, rinneadh iarrachtaí san imscrúdú seo chun ról PACanna in OxS intestinal, cosaint frithocsaídeach, athlasadh, FA-ocsaídiúcháin, lipogenesis, agus gluconeogenesis a shoiléiriú, agus ag an am céanna iarracht a dhéanamh meicníochtaí bunúsacha mar chomharthaíocht inslin a shoiléiriú. agus stádas fachtóirí trascríobh.

Chun éifeachtaí PAC a fhiosrú, d’úsáideamar an líne chill Caco-2/15, samhail intestinal a bhfuil an-mheas ag an bpobal eolaíoch air go príomha2, agus atá aitheanta ag an Riarachán Bia agus Drugaí do phróisis glactha agus iompair4. Ní hamháin go ndéanann cealla Caco-2/15 idirdhealú go spontáineach go dtí eintreaicítí daonna atá cosúil go feidhmiúil agus go moirfeolaíoch3,25, ach feidhmíonn siad freisin d’iniúchadh agus idirghníomhaíochtaí putóige, cothú, tocsaineolaíocht, micribhitheolaíocht bia, tástálacha bith-infhaighteachta, agus scagadh ar tréscaoilteacht drugaí sa chlár fionnachtana2²627. Mar a bhí inár dtuarascálacha roimhe seo maidir le topaicí éagsúla28-3】, bhí cilllíne Caco-2/15 ríthábhachtach sa staidéar reatha chun teacht ar an gcumas atá ag PACanna bealaí éagsúla meitibileach a rialáil. Tá sé tábhachtach, sa staidéar seo, cuireadh cealla ar scagairí póiriúla, rud a cheadaigh rochtain ar an dá thaobh den epithelium intestinal dépholach: urranna apical agus basolateral a fhreagraíonn don lumen stéigeach nó don scaipeadh serosal, faoi seach, rinneamar réamh-ghlais Caco-2. /15 cealla le Fe/Asc, toisc go raibh an córas seo thar a bheith ábhartha inár saotharlann chun OxS láidir agus athlasadh a aslú, a raibh speictream mór éifeachtóirí ag tabhairt dúshlán dóibh17,1932-3 Díol suntais, Fe/Asc mar ocsaigin láidir - Déanann córas giniúna radacach damáiste ocsaídiúcháin do mhacramóilíní bitheolaíocha, athraíonn sé timpeallacht redox intracellular agus tá baint aige le go leor stát paiteolaíochta2.35,56. nathanna próitéine SOD2).sochair cistanche tubulosaIna theannta sin, de bhua a chumas sárocsaídí lipid a ghiniúint, cuireann an coimpléasc Fe/Asc athlasadh chun cinn mar is léir ó léiriú méadaithe TNFa, COX2, agus NF-is. I dteannta a chéile, déanann na torthaí reatha an ghiniúint radacach agus athlastach a bhailíochtú mar fhreagra ar Fe/Asc

Chuir láithreacht PACanna in aghaidh sárocsaídiú lipid trí mheán Fe/Asc. Toisc go bhféadfadh teip na cosanta frithocsaídeacha ionduchtúchán OCS a mhíniú, rinneamar scrúdú ar a ghníomhaíocht ar einsímí frithocsaídeacha ingenacha. Go deimhin, bhí PACanna in ann meath Fe/Asc-mediated SOD2 agus GPx a athbhunú. Chun an mheicníocht le haghaidh géarú OxS ag Fe/Asc agus maolú ag PACanna a shainiú, rinneamar measúnú ar chonair chomharthaíochta na heiliminte freagartha frithocsaídeacha (ARE) Keap1-NRF{4}, a mheastar mar an frithocsaídeoir inghineach is cumhachtaí. rialtóir37.tae cisteancheIs braiteoir OCS ceallach é NRF2 a bhfuil sé mar fheidhm aige homeostasis redox a chothabháil. I gcoinníollacha gnáth. Déantar NRF2 a uileláithriú agus a spriocdhíriú go leanúnach le haghaidh díghrádú próitéamaíoch ag a rialtóir faoi cheangal diúltach Keap18. I láthair na n-éifeachtóirí endogenous agus exogenous, tá Keapl díghníomhaithe agus íosrialaithe, rud a chuireann isteach ar idirghníomhaíocht Keapl-NRF2 agus ag scaoileadh NRF2, a aistríonn go núicléas na cille, ceangailte leis na tionscnóirí ina bhfuil

Fíor 7. Éifeachtaí PACanna ar íogaireacht inslin i gcealllíne Caco-2/15. Cuireadh Proanthocyanidins (PACs, 250 ug / mL) leis an urrann cille apical ar feadh 24 h roimh chóireáil le Fe / Asc （200μM/2 mM） ar feadh 6h ag 37 céim. Dhá uair an chloig roimh dheireadh na gorlainne 6h le meascán Fe/Asc, cuireadh inslin (100 nM) leis chun íogaireacht inslin a mheas. Ba é slonn próitéin(A) p38-MAPK,(B) fosfar p38-MAPK,(D)Akt,(E)phospho Akt,(G)PI3k, agus (H) phospho PI3k, measta ag blot an Iarthair. Ríomhadh na cóimheasa(C) phospho p38-MAPK/p38-MAPK,(F)phospho Akt/Akt/Akt, agus (Dphospho PI3k/PI3k) ansin. Léiríonn na torthaí acmhainn ±SEM de 3 thurgnamh neamhspleách gach ceann i ndúblach Taispeántar blotch ionadaíoch an Iarthair, a léiríonn turgnamh faoi thrí ar an nglóthach céanna agus leis an nochtadh céanna.*P<0.05 vs+/-insulin="" untreated=""><0.05 vs="" fe/asc+/-insulin-treated="" cells.p38-mapkp38-mitogen-activated="" protein="" kinase,="" pi3k="" phosphoinositide="" 3-kinase,="" akt="" protein="" kinase="">

ARE, agus luathaíonn sé trascríobh einsímí frithocsaídeacha39. De réir ár sonraí, mar gheall ar chóireáil cealla Caco-2/15 le PACanna athbhrúite Keapl agus is dócha gur cheadaigh NRF2 aistriú chuig an núicléas a cheadaíonn ceangal ARE (croí-seicheamh: 5'TGACnnnGC3') i réigiún tionscnóra na ngéinte frithocsaídeacha. (SOD2 agus GPx), a spreagtar a n-trascríobh agus uasrialáil chomhordaithe dá bharr. Ag teacht leis na sonraí seo, chuir an cumaisc feanólach resveratrol cosc ​​ar OxS i synoviocytes cosúil le fibroblast airtríteas réamatóideach cóireáilte trí léiriú NRF2 a chur chun cinn agus léiriú Keap12 a laghdú. Ina theannta sin, de réir Kanzaki et al, is féidir gníomhachtú einsímí frithocsaídeacha agus cíteachosanta a bheith bainteach le cóimheas NRF2/Keapl1.

Mar a bheifí ag súil leis ó fheabhsú OCS, laghdaigh PACanna athlasadh go suntasach mar is léir ón íosrialáil TNFa agus COX2. Toisc go bhfuil NF-KB ina phríomhrialaitheoir ar chitocíní pro-athlastacha, scrúdaíomar a fhreagairt ar PACanna. Ag teacht le treocht na ngníomhairí athlastacha, d'aisghair PACanna ionduchtú NF-KB trí mheán Fe/Asc agus laghdaigh an cóimheas NF-KB/IikB. Mar sin, is féidir linn glacadh leis go réasúnta go gcuidíonn PACanna le cosaint in aghaidh athlasadh a chuireann feidhmeanna cille intestinal i mbaol trí NF-kB, an príomh-rialtóir freagartha athlastacha, a rialú. Is fiú a lua go bhféadfadh PACanna cosaint a thabhairt ar athlasadh trí mheicníochtaí cosantacha frithocsaídeacha ceallacha a spreagadh mar go bhfuil dlúthghaol idir bithmharcóirí éagothroime ocsaí agus athlasadh2.

Bhí sé mar aidhm ag an staidéar reatha imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtaí Pac ar homeostasis lipid intestinal. Léirigh ár dtorthaí suimiúla go ndearna PACanna CPTla a rialáil, ar thaobh amháin, agus gur laghdaigh siad FAS, arb ionann iad agus bithmharcóirí FA -ocsaídiúcháin agus lipogenesis, faoi seach. Dá bhrí sin, is spriocanna ionchasacha PACanna iad na heinsímí seo, rud a léiríonn an acmhainneacht ilfheinólach chun carnadh lipidí a chosc, a mheastar a bheith ina léiriú paiteolaíoch ar athlasadh OxSand i go leor fíocháin*3. Is dócha go mbaineann na meicníochtaí móilíneacha le upregulation PPAra agus downregulation of SREBPlc, dhá fhachtóir trascríobh a rialaíonn meitibileacht lipid. Is é FAS an einsím lárnach i lipogenesis, atá freagrach as tiontú malonyl-CoA go FAs45 a chatalú. Ag teacht lenár dtorthaí, fuarthas amach freisin go laghdaigh polyphenols Solanum nigrum FAS agus SREBPanna, agus ag an am céanna ag méadú CPTla agus PPARa i heipitocytes atá cóireáilte le haigéad oiléach"6.

Go ginearálta baineann meicníochtaí gníomhartha polyphenols le gníomhachtú AMPKa fosfarylation7. Rud atá tábhachtach, laghdaíodh AMPKa fosfair inár staidéar ag Fe/Asc, ach spreagtha ag PACanna, a mhíníonn íosrialáil phospho ACC, rud a d'fhág go raibh bac ar lipogenesis agus meitibileacht mhéadaithe fuinnimh. Mar sin féin, méadaíodh léiriú próitéine AMPKa ag OxS spreagtha Fe/Asc i gcealla Caco2/15. Dá réir sin, d’fhéadfadh ROS agus OxS AMPKa a aslú trí kinases éagsúla in aghaidh an tsrutha8.

Cothaíonn OCS agus athlasadh go láidir frithsheasmhacht in aghaidh inslin agus neamhoird meitibileach breise9,50, rud a spreag dúinn measúnú a dhéanamh ar chumas PAC roinnt príomhphróitéiní a rialáil i gcoibhneas leis an gcosán comharthaíochta inslin. Dhírigh muid ar p38-MAPK ar dtús a fuair OxS a shloinneadh agus é ag cur isteach ar easghluaiseacht chomharthaíochta an ghabhdóra inslin. Léirigh anailís bothe ar p{3}}MAPKphosphorylation agus ríomh an chóimheas phospho p38-MAPK/p38-MaPK méadú suntasach ar an bhfreagairt ar Fe/Asc, atá comhoiriúnach le IS lagaithe in Caco{ {6}}/15 cealla. Fuarthas bailíochtú trí mheath pAkt agus PI3K. I gcodarsnacht leis sin, d'aisiompaigh PACanna an treocht mar léirigh siad an cumas p{9}}MAPK phosphorylation agus an phospho p38-MAPK/p38-cóimheas MAPK a laghdú agus an cosán comharthaíochta PI3K/Akt á bhfeabhsú, arb eol dó idirghabháil a dhéanamh ar phríomhghníomhartha bitheolaíocha insulin trí iompar glúcóis, sintéis próitéin, iomadú cealla, maireachtáil cille, agus gluconeogenesis a rialáil. Is féidir leis an lagú in IS mar gheall ar OxS agus athlasadh ainsealach difear a dhéanamh freisin ar phróiseas gluconeogenesis3,54. Nocht anailís ar an dá phríomh-einsím a bhaineann le sintéis glúcóis de novo (PEPCK, G6Pase) méadú suntasach ar an bhfreagairt ar Fe/Asc ach thug riarachán PACanna ar ais iad go dtí na gnáthleibhéil i gcealla Caco2/15.

Mar fhocal scoir, léiríonn staidéir iomadúla sa litríocht eolaíoch éifeachtaí suntasacha sláinte a bhaineann le comhdhúile feanólacha mar mhóilín feanólach ar leith nó mar mheascán de roinnt polyphenols trí fhianaise indíreach. Léiríonn an obair reatha an éifeacht ríthábhachtach atá ag PACanna (flavanols casta) ar homeostasis intestinal trí OxS, athlasadh agus neamhoird meitibileach a bhaineann leo a chosc. Ós rud é go bhféadfadh sé nach n-ionsúitear PACanna go hiomlán ag an stéig bheag, tá gá le tuilleadh staidéir chun imscrúdú a dhéanamh ar na meicníochtaí a bhaineann lena n-éifeachtaí tairbheacha sláinte sa stéig bheag.

Ábhar agus modhanna

Saothr agus cóireáil cille Caco-2/15 stéigeach. Le haghaidh na dturgnaimh go léir, d'úsáideamar an líne ceall adenocarcinoma Caco-2/15 cholaireicteach epithelial daonna, clón cobhsaí de na cealla bunaidh Caco-2 (American Type Culture Collection, Rockville, Md., USA), fuarthas é sin ón Dr. JF Beaulieu (An Roinn Bitheolaíocht Cheallach, Dámh an Leighis, Université de Sherbrooke, Sherbrooke, Québec, Ceanada). Tá an t-airí sainiúil ag an gcilllíne Caco-2/15 chun idirdhealú a dhéanamh in vitro go eintreachicítí aibí polaraithe agus chun mona-tharlú neamh-thréscaoilteach a chruthú. Saothraíodh cealla Caco-2/15 mar a thuairiscítear roimhe seo323455 agus úsáideadh iad chun staidéar a dhéanamh ar shláine cille, OCS, agus athlasadh17,19, agus IS56.

Anailís ar léiriú próitéine ag imdhíonblotting. Tar éis goir le cóireálacha éagsúla, cuireadh cealla Caco-2/15 i maolán fuar-oighear ina raibh 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1 mM Na2E-DTA, 1 mM EGTA, 1 faoin gcéad NP -40, 1 faoin gcéad deocsacolaáit, 2.5 mM pireafhosfáit sóidiam, 1 mM Na2VO4, 1 ug/mL leupeptin, agus 1 mM PMSF. Cinneadh an tiúchan próitéine i ngach sampla ag baint úsáide as modh Bradford (Bith-Rad). Dínádúraíodh próitéiní ansin ar feadh 5 nóiméad i maolán samplach ina raibh SDS agus ß-mercaptoethanol. Rinneadh homogenates ina raibh próitéiní iomlána 15 ug a scartha ar fhoirmiú 10 faoin gcéad SDS-polyacrylamide de réir meáchain mhóilíneacha próitéine agus rinneadh iad a leictreaphlátáil ar sheicní nitrocellulose. Baineadh úsáid as bainne saor ó shaill chun suíomhanna neamhshonracha na seicní a bhlocáil sula gcuirfí antasubstaintí príomhúla leis thar oíche ag 4 chéim . Tuairiscítear caolú antasubstaintí san Fhaisnéis Fhorlíontach agus inár bhfoilseachán le déanaí. Gabhadh bannaí imoibríocha ag baint úsáide as Córas Íomháithe MP ChemiDoc (Bith-Rad). Cuirtear na sonraí go léir in iúl mar chóimheas na sprice próitéine le -actin sa sampla céanna.

Anailís staitistiúil. Sloinntear na luachanna go léir mar mheán±SEM de thrí thurgnamh dhifriúla ar a laghad a dhéantar i dtrí-chomhlachas. Rinneadh anailís ar shonraí ag ANOVA aontreo agus ina dhiaidh sin rinne tástálacha iolracha comparáide Tukey ag baint úsáide as PRISM 7.0(GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Measadh go raibh difríochtaí suntasacha ag P<>

Baintear an t-alt seo as Scientif Reports|(2021) 11:3878|https://doi.org/10.1038/s41598-020-80587-5