Ról do BATF3 in Difreáil Tu9 agus L Pathologies MucOsal T-tiomáinte (Cuid 2)

Chun tuilleadh eolais a fháil plz déan teagmháildavid.wan@wecistanche.com

PLÉ

Tá cealla T#9 tábhachtach chun galair athlastacha agus ailléirgeacha a fhorbairt. Mar sin féin, níl tuiscint iomlán fós ar an gclár trascríobh agus na truicir athlastacha a thiomáineann idirdhealú cealla TH9. Sa staidéar seo, d'aithin muid an cytokine pro-inflammatory TL1A mar ionduchtóir potent de dhifreáil murine agus daonna T-9 agus aithníodh BATF3 mar fhachtóir trascríobh tábhachtach a bhaineann le difreáil cealla TH9. Áiríodh leis an líonra tras-scríobh a tharlódh ag TL1A na fachtóirí trascríobh BATF agus BATF3 agus roinnt géinte rialaithe BATF (Figiúr Forlíontach 7). In vivo, i dturgnaimh aistrithe uchtála,Tμ9-chealla TL1ABhí siad an-pro-inflammatory as a dtagann athlasadh intestinal agus scamhóg. Bhí claonadh pro-athlastach cealla T-9-TL1A ag brath ar tháirgeadh IL-9. Mar thoradh ar aistrithe cealla Batf3-/T agus 9-TL1A tháinig laghdú ar athlasadh mucosal agus slonn cítocine in vivo.

Cé gur aithníodh cealla Tμ9 mar fho-thacar T-chúntóir ar leith, níor aithníodh fachtóir trascríobh a fheidhmíonn mar mháistir-rialtóir nó a shainaithníonn feinitíopa TH9 amháin. Ina ionad sin, gníomhaíonn roinnt fachtóirí trascríobh le chéile chun idirdhealú na gcealla T-9 a rialú. Tá sé léirithe go gcomhoibríonn BATF go feidhmiúil le IRF4 agus go gceanglaíonn sé le heilimintí ilchodacha laistigh de na réigiúin tionscnóra de ghéinte freagrúla.Tá BATF mar aon le IRF4 déanta Moladh le déanaí mar “fhachtóirí ceannródaíocha” maidir le difreáil cealla Tp17 trí rannchuidiú leis an inrochtaineacht tosaigh ar chromatin agus trí rochtain fachtóirí trascríobh eile a éascú.36 Thugamar faoi deara go bhfuil tionchar díreach ag TL1A ar abairt BATF agus go sineirgíonn sé le TGF{{9} } agus IL-4 chun slonn BATF a spreagadh go háirithe go háirithe go luath sa difreáil TH9. Chun tacú leis an nóisean seo, is é an toradh a bhíonn ar spreagadh le TL1A amháin ná BATF a cheangal leis an tionscnóir II9 ach níl aon éifeacht dhíreach aige ar cheangail fachtóirí trascríobh eile (IRF4 agus BATF3). Ach,TH9-TL1Acuireann coinníollacha go sineirgisteacha le ceangal BATF3 agus IRF4, chomh maith le haicéitiliú histone H3, modhnú crómatin ceadaitheach a chomhghaolann le gníomhaíocht tionscnóra ll9.14 Ag teacht le sonraí a foilsíodh roimhe seo, tá BATF ag teastáil chun IL-9 a chur in iúl. agus IL-10 faoi choinníollacha T,9.15 Tá TL1A in ann go páirteach ar a laghad an ceanglas maidir le BATF a shárú in ionduchtú IL-9 agus IL-13 is dócha trí bhreisiú ar thrascríobh eile fachtóirí a d'fhéadfadh a bheith in ann caillteanas BATF a chúiteamh. Iarrthóir amháin ar chúiteamh feidhmiúil is ea BATF3 a chothaítear go tras-scríbhinne ag TL1A. Tá sé molta go mbeadh BATF agus BATF3 idirmhalartaithe go feidhmiúil le haghaidh forbairt Tu17 agus Tp2 agus má dhéantar ró-léiriú BATF3 i gcealla BATF-'- Is féidir le T táirgeadh IL-17 i gcealla TH17 agus IL-4 agus IL{{ a athchóiriú. 23}} táirgeadh i gcealla T#2.18323738 Mar sin féin, níor sainíodh ról BATF3 i bhforbairt cealla Tu faoi choinníollacha fiseolaíocha agus idirghníomhú féideartha idir BATF agus BATF3 le linn difreála TH9. Léirímid anseo go n-éascaíonn TL1A ceangal BATF3 leis an tionscnóir ll9. Mar iarmhairt fheidhmiúil, cuireann BATF3 le táirgeadh IL-9 faoi choinníollacha T{-9, go háirithe i gcomhthéacs spreagadh TL1A. Is ionadh é, tá BATF3 inchurtha chun idirdhealú a dhéanamh go luath ar chealla Tu9 ach d'fhéadfadh go mbeadh gá leis an bhfeinitíopa TA9 agus an t-seú IL{-9 a chobhsú nó a chothabháil ag pointí ama níos déanaí. Tá ár dtorthaí maidir le ról BATF3 i difreáil TH9 i gcodarsnacht le tuairiscí roimhe seo go raibh BATF3 inchurtha le haghaidh difreálaithe Tu1, TA2, agus Tu17.2'3'I gcodarsnacht le BATF, ní chuireann BATF3 ach le secretion IL{-9 agus ní le cítocíní TH9 eile ar nós IL-10 agus IL-13, rud a thugann le tuiscint go gceanglaíonn BATF3 go sonrach leis an tionscnóir ll9 agus go n-ardaíonn sé secretion IL-9. Tá gá le tuilleadh staidéir chun spriocghéinte breise BATF3 a chinneadh le linn difreála TH9 agus a ról i bhfo-thacair eile Tu.

Cliceáil anseo chun tuilleadh a fhoghlaim faoi Cistanche

Fíor.7 Is é an toradh a bhíonn ar easnamh batf3 ná athlasadh mucosal laghdaithe arna thiomáint ag cealla TH9-TL1A. Rinneadh idirdhealú idir cealla Naive Wtor Batf3-/cealla i gcealla T_9-TL1A agus instealladh isteach i lucha Rag1-7. a stainings ionadaíocha H&E na scamhóga (painéil uachtaracha) agus intestine mór (painéil ag bun). b Scóir histeolaíochta do na scamhóga.c Áireamh ceall iomlán (clé, lár), minicíocht cealla CD4* T (ar dheis). Léiríonn sonraí acmhainn±SD.n=10/group.d Smálú incheallach IL{{11} }, IL-13, agus IL-17 ón spleen, MLN, agus na scamhóga tar éis athspreagadh ex vivo le PMA móide lonomycin.Is ionann sonraí agus acmhainn±SD.n=5/group. Taispeántar turgnamh ionadaíoch amháin as trí thurgnamh neamhspleách.*p<0.05,><0.01 as="" determined="" by="" student's="">

Cé go bhfuil cur síos déanta ar chitocíní nó ar idirghabhálaithe pro-athlastacha eile ar nós IL-1 , OX40, agus TSLP chun feabhas a chur arDifreáil TH9, is cosúil go bhfuil TL1A uathúil maidir le BATF a rialáil, rud a fhágann go n-osclaítear crómatin chun fachtóirí trascríobh eile a earcú lena n-áirítear BATF3.353940 Tacaíonn ár sonraí seicheamhaithe RNA leis an gconclúid seo a shainaithníonn fo-thacar de ghéinte BATF-spleách atá uasrialaithe go suntasach ag TL1A. Ina theannta sin, léiríonn ár sonraí seicheamhaithe RNA go rialaíonn BATF3 gníomhaíocht na bhfachtóirí trascríobh, iomadú cille, agus aistriú comhartha incheallach a thugann le tuiscint go bhfuil ról tábhachtach ag BATF3 le linn difreála T#9. In vivo, tháinig laghdú ar athlasadh mucosal agus slonn cítocine mar thoradh ar chealla Batf3-'- TA{9-T1A. Níor thugamar faoi deara imirce lagaithe de chealla Batf{3-'- TH9-Cealla TL1A go dtí an stéig, atá i gcodarsnacht le cealla BATF-'- CD4 móide T nach n-uasrialaíonn marcóirí imirce stéigeach agus nach ndéanann. na n-intestí a líonadh.4' Tacaíonn ár sonraí le ról BATF3 i bhfeidhm phaitfhiseolaíoch chealla TA9-TL1A.

Le déanaí bhí baint ag cealla IL-9 agus TA9 le pataigineas IBD.*-10 IL-9 móide CD4 móide cealla T saibhríodh in othair le UC agus leibhéil arda serum IL{{ 5}} chomhghaolmhar le galar trom in othair le CD.-10I múnla turgnamhach de ghalar cosúil le UC hapten-spreagtha, IL-9-agus PU.1-cosnaítear lucha easnamhacha ó dhúchas stéigeach. tá athlasadh agus antasubstaintí frith-IL-9 cosanta i múnla coiscthe ainsealach. céim Mar sin féin, níor thugamar faoi deara aon éifeachtaí a bheadh ​​ag TL1A ar shloinneadh PU.1 faoi choinníollacha T9. Tá sé léirithe againn go n-eascraíonn spreagadh TL1A go n-uasrialaítear BATF agus BATF3 ach ní PU.1.Cé go bhfuil cur síos déanta ar PU.1 mar mháistirrialtóir ar dhifreáil TH9, níl sé ag teastáil ach chun fothacar de ghéinte agus lucha TH9 a chur in iúl. ní athraítear ceangaltas PU.1 a mholtar i neamhspleáchas iomlán BATF PU.1 agus BATF. 75

Léirímid go bhfuil cealla T,{0}TL1A an-phataigineach in vivo agus go gcothaíonn siad athlasadh intestinal agus scamhóg. Athlasadh intestinal iTH9-TL1Abhí na faighteoirí teoranta go príomha don stéig bheag. Ina theannta sin, thugamar faoi deara líon méadaithe cealla CCR6* agus CD103 i bhfaighteoirí TH9-TL1A in vivo. Léiríonn na sonraí seo go comhsheasmhach go gcuirtear an receptor chemokine CCR6 agus an integrin CD103 in iúl ar chealla TH9 agus éascaíonn siad imirce chuig láithreáin athlastacha agus dromchlaí mucosal.15,42 Tá líon méadaithe na gcealla CCR6 móide i bhfaighteoirí Tμ comhsheasmhach lenár mbreathnóireacht ar athlasadh stéig bheag den chuid is mó ós rud é go bhfuil sé léirithe go n-éascaíonn an ais CCR6/CCL20 aistriú cealla T,17 go dtí an stéig bheag go sonrach agus tá sé sochreidte go mbaineann meicníochtaí comhchosúla le cealla Tμ9.3 Tá ár dtorthaí comhsheasmhach freisin le torthaí le déanaí maidir le leibhéil ardaithe serum IL-9 in othair CD, go háirithe le galair thromchúiseacha.?

Cuireann TL1A le difreáil T, 1, TH2, agus TA17 agus cé nach bhfaca muid aon chomhartha ar aistriú domhanda ó chealla T9 go fo-thacair TH eile in vitro, d’fhéadfadh sé a mholadh go bhféadfadh cealla TH9 atá difreáilte le TL1A a bheith éagobhsaí in vivo agus"trans -difriúil" isteach i bhfo-thacair eile. Bhí an poitéinseal tras-dhifreáil de chealla TH9 conspóideach agus d'fhéadfadh sé a bheith ag brath ar chomhthéacs, múnla galair, agus stádas imdhíonachta an óstaigh. In EAE, tarlaíonn tras-dhifreáil idir TH9 agus cealla a tháirgeann IFN-Y, áfach, is cosúil go bhfuil feinitíopa T,9 cobhsaí i múnlaí ailse.339 Is ionadh é, lean cealla in vivo T9-leanaí TL1A ag táirgeadh IL{ {18}} agus cítocíní iartheachtacha ar nós IL-17 agus IL-13 agus ní dhearna siad tras-dhifreáil. Tacaíonn ár sonraí leis an nóisean seo freisin a thaispeánann gur leor cóireáil frith-L-9 amháin chun éifeachtaí pataigineacha cealla T{9-TL1A a chosc. Laghdaigh cóireáil antasubstainte frith-Lil amháin táirgeadh IL{-13 agus mhaolaigh athlasadh stéigeach agus scamhóg ar ais go leibhéil TH9. Éilíonn forbairt athlasadh scamhóg ailléirgeach corparáid cealla TH2 agus TH9. Mar sin féin, is cosúil go bhfuil ár múnla d’athlasadh scamhóige ainsealach neamhailléirgeach á thiomáint go príomha ag IL-9-táirgeadh cealla T.9, cé nach féidir linn ranníocaíocht IL a eisiamh{-9-táirgeadh cealla neamh-T sa phaitigineas inár gcuid. Mionsamhail.

Go hachomair, tá TL1A ina ionduchtóir láidir ar dhifreáil T9 murine agus daonna agus rinneamar na conairí comharthaíochta a shoiléiriú. Ag cur san áireamh airíonna pro-athlastacha na cille TH9-TL1A in vivo, d’fhéadfadh gur cur chuige teiripeach dóchasach é díriú ar an ais TL1A-BATF3-IL-9 i bpaiteolaíochtaí T19-. mar IBD nó galar scamhóg ailléirgeach.

MODHANNA

Lucha C57BL/6, C57BL/6 Rag1-/, B6.SJL-Ptprc" Pepc/BoyJ(CD45.1),(B6.Cg-Nfkb1*m130l/J), Stat 6-/-(B6.129S2(C)-Stat6"miGr"/J), p50-/-B6.Cg-Tg(TcraTcrb)425Cbn/ (OT-I),Batrf/( Ceannaíodh lucha B6.129s-Batm1.1km/), agus Ialtóg3-/(B6.129 S(C)-Batf3m1km"/) ó Shaotharlann Jackson. Dr3-/- n Tá cur síos déanta ar lucha in áit eile.4 Coinníodh lucha faoi choinníollacha SPF. D'fhormheas Coiste Cúraim agus Úsáide Ainmhithe Ionad Leighis Cedars-Sinai gach staidéar ar ainmhithe. Leithlisiú agus difreáil T-chealla Rinneadh cealla T Naive (CD62LhichcD44'o"CD25~; clóin MEL-14, IM7, PC61.5; eBioscience) a leithlisiú ó spleens agus MLN ag baint úsáide as an EasySeptM Luiche CD4 móide Aonrú Kit (Stem Cell Teicneolaíochtaí) ina dhiaidh sin sórtáil cille (MoFlo, Beckman Coulter). Saothraíodh cealla i meán RPMI-1640 (10 faoin gcéad FBS) le frith-CD3s (145-2C11; BD Biosciences), frith-CD28(37.51 ; eBitheolaíocht)(coinníollacha TH0), agus murine TL1A(100 ng/ml; Córais T&F) faoi choinníollacha T-9 (TGF daonna- 1 [3 ng/ml], Biolegend, IL{{66} } [20ng/ml, PeproTech).Tar éis 2 lá, cuireadh IL-2(20 U/ml) leis. Chun iomadú cille a mheas, rinneadh cealla sórtáilte a lipéadú le carboxyfluorescein succinimidyl eistir (CFSE; Invitrogen), difreáilte ar feadh 5 lá, agus rinneadh caolú CFSE a mheas ag cíteiméadracht sreafa Chun difreáil T,9 a bhaineann go sonrach le hantaigin a mheas, spreagadh cealla CD4 naive móide T ó lucha OT-Il ar feadh 3 lá le 1 ug/ml OVA;23-339 peiptíd i láithreacht APCanna syngenacha (cóimheas 1:3) Bhí APCanna e ullmhaithe trí ídiú cealla CD90.2T ó splenocytes (Teicneolaíochtaí Gascheall) agus cóireáil mitomycin C ina dhiaidh sin. leithlisiú cealla daonna CD4 móide T agus idirdhealú Fuarthas fuil ó oibrithe deonacha sláintiúla tar éis toiliú feasach de réir nósanna imeachta arna mbunú ag Bord Athbhreithnithe Institiúideach Cedars-Sinai (IRB#3358, 2673). Rinneadh cealla CD4 móide T naive (CD4 móide CD25-CD45RA móide CD45RO7) a leithlisiú ó PBMC ag baint úsáide as an EasySepl Human CD4 T Enrichment Enrichment Kit (Stem Cell Technology) agus sórtáil cille ina dhiaidh sin. Saothraíodh cealla le frith-CD3 (5 ug/ml) agus frith-CD28 (2 ug/ml) le TL1A(100ng/ml; Fitzgerald) daonna faoi choinníollacha TH9 (TGF daonna- 1 [5 ng/ml] , IL daonna-4 [10 ng/ml]). ELISA Rinne ELISA comhchruinniú cítocine i súiteoirí cultúir a mheas le haghaidh IL murine nó daonna-9, IL-10, agus IL-13(eBitheolaíocht). staining intracellular Athspreagthadh cealla le 50 ng/ml PMA(phorbol 12-myristate 13-aicéatáit), 500ng/ml ianomycin, agus monensin (eBioscience) ar feadh 4 h, dhaite le frith-CD4 (RM{{). 117}}, eBitheolaíocht), seasta agus tréscaoilteach ag baint úsáide as an tacar maolánach staining FoxP3 (eBioscience), agus daite le antasubstaintí i gcoinne murine IL-9 (RM9A4, BioElegend),IL-10(JES{{123}) }E3), IL-13(13A),IL-17A (eBio17B7), IL-17F (eBio18F10),IFN-y(XMG1.2),IL{{136} } (BVD6-24G2), IL-22 (1H8PWSR), Ki67(SolA15),BATF(MBM7C7), IRF4 (3E4), IL daonna-9(MH9A4, gach ríomhBhitheolaíocht), agus BATF3(841792, Córais T&F). Rinneadh anailís ar shamplaí ag baint úsáide as cíteaiméadar sreafa CyAnADP (Dako Cytomation) agus bogearraí FlowJo (TreeStar Inc.).

Cainníochtúil RT-PCR

Rinneadh RNA iomlán a leithlisiú le feisteáin RNeasy agus droim ar ais tras-scríofa isteach i cDNA le trealamh Omniscript RT (an dá Qiagen). Rinneadh qPCR ag baint úsáide as an Mastercycler" ep realplex² System (Eppendorf). a úsáidtear le haghaidh Actb, I9, I10, 13, agus BATF (IDT) (Tábla Forlíontach 7). normalaíodh léiriú mRNA de spriocghéin go dtí an abairt Actb. Ríomhadh an abairt choibhneasta géine leis an modh.

an 2-AACt Chromatin precipitation

Rinneadh Chloe ag baint úsáide as trealamh imdhíonta crómatin EZ ChIP (Millipore) agus anailís qPCR ina dhiaidh sin. Go hiomlán, rinneadh cealla céime 1 × 10 a spreagadh, a shocrú, a sonicated, agus a imdhíonta ag baint úsáide as 2ug d'antasubstaintí ChIP-grád: frith-BATF (sc-100974), frith-BATF3(sc-162246), gnáthluch lgG(sc-2025), frith-IRF4(sc-6059), gnáth-ghabhar lgG(sc-2028)(gach Biteicneolaíocht Santa Cruz), frith-aicéitil-histone H3({{17 }}), agus gnáth coinín lgG (Milli-pore). Rinneadh DNA imdhíonta a aisiompú tras-nasctha, íonaithe ag baint úsáide as colúin casadh, agus anailís déanta ag qPCR (seichimh phríomha: Tábla Forlíontach 7). Chun DNA imdhíon-réamhshocraithe a chainníochtú, ghineamar cuar caighdeánach ó chaoluithe sraitheach DNA ionchuir. Cuirtear sonraí i láthair mar chéatadán den DNA ionchuir bunaithe ar normalú in aghaidh an méid DNA ionchuir.

Seicheamhú RNA (uimhreacha aontachais GEO: GSE60362 agus GSE106926)

RNA-Seg ionchuir Íseal (TH9 vs.TH9-TL1A): Baineadh úsáid as SMARTer Ultra"Low Input RNA Kit for Seicheamhú v3 de chuid Clontech chun leabharlanna cDNA dhá shnáithe a ghiniúint ó 1.5 go 2.5 ng den RNA iomlán ó gach sampla de réir mholtaí an déantóra. Rinneadh leabharlanna cDNA dúbailte-snáithe a scoilteadh ina n-aonar agus a cheangal le Cuibheoirí Barcode lon Torrent lon Xpress" ag baint úsáide as Kit Leabharlainne Fragment Lon Xpress" Plus le modhnuithe teoranta lena n-áirítear leabharlanna deiridh méid-roghnaithe le glantachán coirníní dúbailte agus toirt V Rinneadh measúnú ar leabharlanna RNA-Seq maidir le tiúchan agus faid ag baint úsáide as QubitdsDNA HS Assay Kit Invitrogen agus AgilentTrealamh DNA Ard-Íogaireachta, respectively. Samples were multiplexed to obtain >10 milliún léamh an ceann le haghaidh seicheamhú. Méadaíodh na leabharlanna comhthiomsaithe ar lon Sphere" agus cuireadh in ord iad ag baint úsáide as an lon PIM Seicheamh 200 Kit v2,lon Torrent".

mRNA-Seg (WT vs.Baft3-7T,9-TL1A): Illumina TruSeq Stranded mRNA library preparation kit was employed for RNA-Seq. Of total RNA, 1 ug per sample was used for poly-A mRNA selection using streptavidin-coated magnetic beads. cDNA was synthesized from enriched and fragmented RNA using reverse transcriptase (Super-Script ll, Invitrogen) and random primers. The cDNA was converted into double-stranded DNA, and enriched with PCR for library preparation. The PCR-amplified library was purified using Agencourt AMPure XP beads(Beckman Coulter). The concentration of the amplified library was measured with a NanoDrop spectrophotometer and on an Agilent 2100 Bioanalyzer. Samples were multiplexed to obtain >20 milliún léamh/sampla agus seicheamhú ar ardán NextSeq 500 (Illumina) ag baint úsáide as 75-bp seicheamh ceann amháin.

Anailís sonraí. Rinneadh léamha amh a scagadh agus a bhearradh le foireann uirlisí FASTX (http://hannonlab.cshl.edu/fastx{{{0}}toolkit/) agus ailínithe le Tophat leagan 2.0.8 le UCSC GRCm38/mm10 nóta géanóim tagartha luiche (http://genome.ucsc.edu). Gineadh comhairimh léite géine trí úsáid a bhaint as HTSeq (v0.5.4) agus ansin normalaíodh iad trí mheán bearrtha mhodh normalaithe na luachanna M le edgeR (v3.0.8) i mBithsheoltóir in R(v2.15), a úsáideann meán bearrtha ualaithe de na cóimheasa slonn loga. I gcás gach anailíse, níor úsáideadh ach comharthaí cáilíochta (tairseach: deich n-áireamh in aghaidh an mhilliúin in dhá cheann as ceithre shampla ar a laghad). Rinneadh anailís gan mhaoirseacht ag baint úsáide as na 100 géinte barrrangaithe de réir an raoin idircheathairíle agus ansin gineadh cnuasach ordlathach ag baint úsáide as (v2.11) ag baint úsáide as comhghaolta Pearson déthreo chun patrúin slonn géine neamhchlaonta neamhchlaonta a shamhlú. Baineadh úsáid as anailís maoirsithe ag baint úsáide as tástáil bheacht leasaithe Fisher in edgeR agus laghdaíodh ráta fionnachtana bréagach de 10 faoin gcéad ag baint úsáide as nós imeachta Benjamini agus Hochberg chun slonn difreálach a chinneadh idir TH9 agus T.9-TL1A nó WT agus Batf{{23} }T,9-TL1A. Rinneadh anailís saibhrithe cosáin trí úsáid a bhaint as DAVID6.7 (http://david.abcc.ncifcrf.gov/) leis an tsean-tresh comhaireamh =5 agus an tairseach scórála gan stró=0.05.

Múnla aistrithe T-chealla

CD4 móide CD62LighcD44"cD25- Rinneadh cealla T ó lucha CD45.1 a dhifreáil go cealla T9 nó T,9-TL1A ar feadh 3 lá. Fireann Péig{{1{62}}/lucha faighteoir instealladh ip le cealla 0.5×10 céim TH9, nó TH9-TL1A. Rinneadh lucha a mheá ar feadh 6-8 seachtainí. Le haghaidh turgnaimh neodraithe, cuireadh IP ar lucha le rialú frith-IL-9 nó lgG2b antashubstaint (idir 50 ug/dáileog; Córais T&F) trí huaire sa tseachtain ar feadh 4 seachtaine agus dhá uair sa tseachtain don am atá fágtha ag tosú ar lá aistrithe T-chealla. Bhí na fíocháin socraithe go foirmiúil, leabaithe le pairifín, agus daite le H&E nó AB-PAS Scóráil córas scórála leathchainníochtúil an t-athlasadh a rinne paiteolaí oilte dalláilte ar na coinníollacha turgnamhacha. 10 ml de HBSS ina bhfuil 15 ug/ml Liberase" (Roche) agus 25ug/ml DNase I (Sigma) agus ag scagadh trí strainer cille 40-μm agus lysis cille fola dearga ina dhiaidh sin. Dathaíodh fionraí aonchealla le frith-CD4, frith-CD45.1(A20), frith-CCR6 (29-2L17), agus frith-CD103(2E7, eBitheolaíocht ar fad), agus frith-Ki{{52 }}(SolA15, BD PharMingen)antasubstaintí le haghaidh citeiméadracht sreafa nó athspreagtha le hantasubstaintí frith-CD3c/frith-CD28 ar feadh 3 lá. Rinne ELISA leibhéil cíteicne i bhfostóirí a thomhas.

Staitisticí

Ríomhadh tábhacht staitistiúil ag baint úsáide as bogearraí SPSS (IBM SPSS Statistics 20, IBM Machines Corp., Armonk, NY, USA). Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as anailís aontreo ar athraithí (ANOVA) agus t-tástáil Mic Léinn dhá eireaball gan phéire post hoc ina dhiaidh sin, nó tástáil Mann-Whitney U mar a léiríodh. Measadh go raibh difríochtaí suntasacha ag lch<>

BUÍOCHAS

Thacaigh an NIH (DK056328 go SRT) agus Fondúireacht F. Widjaja (SRT agus KSM) leis an obair seo. Fuair ​​Anita Vibsig Neutzsky-Wulff comhaltachtaí iardhochtúireachta ó Fhondúireacht Carlsberg (An Danmhairg) agus ó Fhondúireacht Lundbeck (An Danmhairg). Fuair ​​Jordan Nunnelee Dámhachtain Taighde Mac Léinn ó Fhondúireacht Crohn’s and Colitis of America. Tacaíonn Institiúid Taighde Inflammach Bputóg agus Imdhíoneolaíochta Fondúireacht F. Widjaja, NIH/NIDDK P01 DK046763, U01 DK062413, agus Iontaobhas Carthanúil Leona M agus Harry B Helmsley le Bithbhanc IBD Cedars-Sinai MIRIAD.

RANNÍOCAÍOCHTAÍ AN ÚDAR

MT, HH, LT, MW, BS, MW, BS, MW, JN, JS, AN-W, RB, YW, JT, VF, agus KM. rinne turgnaimh anailís ar shonraí agus rinne siad athbhreithniú criticiúil ar an lámhscríbhinn. Rinne AP, J. T, agus YW anailís sonraí RNA-Seq. Dhear MT, ST, agus KM na turgnaimh. Scríobh MT agus KM an lámhscríbhinn.

EOLAS BREISE

Tá ábhar forlíontach sa leagan ar líne den alt seo (https://doi.org/10.1038/s41385-018-0122-4), atá ar fáil d’úsáideoirí údaraithe.

Leasanna iomaíocha: Ní dhearbhaíonn na húdair aon leasanna iomaíocha.

Nóta ón bhfoilsitheoir: Tá Springer Nature fós neodrach maidir le héilimh dhlínsiúla i léarscáileanna foilsithe agus i gcleamhnachtaí institiúideacha.

TAGAIRTÍ

1. Dardalhon, V. et al. Cuireann IL-4 bac ar chealla TGF-beta-spreagtha Foxp3 móide T agus, le chéile

le TGF-beta, gineann sé IL-9 móide IL-10 móide cealla T éifeachtóra Foxp3(-). Nat. Imdhíonól. 9, 1347-1355(2008).

2. Veldoen, M. et al. "athchláir" fachtóir fáis-béite a athrú

tionscnaítear cealla T helper 2 agus cuireann sé 9-fothacar a tháirgeann idirleukin chun cinn. Nat. Imdhíon.9,1341-1346 (2008).

3. Jager, A, Dardalhon, V, Sobel, RA, Betelli, E.&Kuchroo, VK Th1, Th17, agus Th9

cothaíonn cealla éifeachtóra einceifilíteas uath-imdhíonachta turgnamhach le feinitíopaí paiteolaíocha éagsúla.J.Immunol.183,7169-7177(2009).

4. Licona-Limon, P. et al. Tiomáineann cealla Th9 díolúine óstaigh i gcoinne gastrointestinal

ionfhabhtú péisteanna. Díolúine 39,744-757(2013).

5. Purwar, R. et al. Díolúine láidir siadaí chuig meileanóma arna idirghabháil ag interleukin-9-

cealla T a tháirgeadh. Nat. Med. 18, 1248-1253 (2012).

6. Gerlach, K. et al. Tiomáineann cealla TH9 a léiríonn an fachtóir trascríobh PU.1 T cill-

colitis idirghabhála trí IL-9 comharthaíocht gabhdóra i gcealla epithelial intestinal. Nat Immunol.15,676-686(2014).

7. Nalleweg, N. et al. Tá baint ag IL-9 agus a receptor go príomha leis an

pataigineas UC. Gut.64,743-755 (2015).

8. Feng, T. et al. Réamh-mheastar leibhéil serum interleukin 9 ar dhéine an ghalair agus ar an gclinic

Éifeachtúlacht infliximab in othair a bhfuil galar Crohn orthu. Athlasadh. Bputóg Dis. 23, 1817-1824(2017).

9. Matusiewicz,M., Neubauer,K,Bednarz-Misa,I, Gorska,S.&Krzystek-Korpacka,M.

Interleukin sistéamach-9 i ngalar putóige athlastach: baint le cneasaithe mucosal le colitis ulcerative. Domhanda J. Gastroenterol. 23,4039-4046(2017).

10. Cosantóir, C. et al. Tábhacht leibhéil serum II-9 sa bhroinn athlastach

galar. Int. J. Imdhíonpathol. Cógaslann. 28, 569-575 (2015).

11. Jash, A. et al. Fachtóir núicléach de chealla T gníomhachtaithe 1(NFAT1)-spreagtha ceadaitheach

Éascaíonn modhnú crómatin trasghníomhú idirleukin idirleukin-9 (IL-9) fachtóir-kappaB (NF-kappaB). J. Biol. Ceimic. 287,15445-15457(2012). 12. Staudt, V.et al. Tá fachtóir rialála interferon 4 riachtanach don fhorbairt

clár de chealla T cúntóir 9. Díolúine 33, 192-202 (2010).

13. Goswami, R. et al. STAT6-rialachán spleách ar fhorbairt Th9.J. Imdhíonól.

188,968-975(2012).

14. Chang, HCet al. Tá an fachtóir trascríobh PU.1 riachtanach chun forbairt a dhéanamh ar

IL-9-táirgeadh cealla T agus athlasadh ailléirgeach. Nat. Imdhíonól. 11, 527-534 (2010).

15. Jabeen, R. et al. Teastaíonn trasscríobh rialaithe BATF chun ceall Th9 a fhorbairt

líonra. J. Clin. Infheistiú. 123,4641-4653(2013).

16. Kaplan, MH An líonra fachtóir trascríobh i gcealla Th9. Seimineár. Imdhíonpathol.

39,11-20(2017).

17. Feidhmíonn Echlin, DR, Tae, HJ, Mitin, N. & Taparowsky, EJB-ATF mar dhiúltach

rialtóir tras-idirghabhála AP-1 agus cuireann sé bac ar chlaochlú ceallacha ag Ras agus Fos. Oncogene 19,1752-1763 (2000).

18. Murphy, TL, Tussiwand, R. & Murphy, KM Sainiúlacht trí chomhoibriú:

Rialaíonn idirghníomhaíochtaí BATF-IRF líonraí imdhíonachta-rialála. Nat. Ath. Immunol. 13,499-509(2013).

19. Sopel, N., Graser, A., Mousset, S. & Finotto, S. An fachtóir trascríobh BATF

modhnaíonn sé freagairtí cítocine-idirghabhála i gcealla T. Fachtóir Fáis Cíteicne Ath. 30,39-45 (2016).

20. Edelson, BT et al. Cruthaíonn cealla dendritic imeallacha CD103( móide ) fothacar aontaithe

a bhaineann le forbairt CD8 alfa( móide ) cealla dendritic traidisiúnta.J. Cait. Med. 207,823-836(2010).

21. Hildner, K. et al. Nochtann easnamh Batf3 ról ríthábhachtach do CD8alpha＋ dendritic

cealla i imdhíonacht cille T cíteatocsaineach. Eolaíocht 322,1097-1100 (2008).

22. Meylan, F. et al. Tá an gabhdóir teaghlaigh TNF DR3 riachtanach le haghaidh cealla T éagsúla

galair athlastacha idirghabhála. Díolúine 29,79-89 (2008).

23. Fang, L, Adkins, B, Deyev, V. & Podack, ER Ról riachtanach an ghabhdóra TNF

superfamily 25 (TNFRSF25) i bhforbairt athlasadh ailléirgeach scamhóg. J. Exp.Med.205,1037-1048(2008).

24. Pappu, BP et al. Rialaíonn idirghníomhaíocht TL1A-DR3 feidhm chill Th17 agus Th17-

galar autoimmune idirghabhála. J. Cait. Med. 205,1049-1062 (2008).

25. Tarbh, MJ et al. Tiomáineann an gabhdóir báis 3-cosán próitéin 1A cosúil le TNF

paiteolaíocht cnámh díobhálacha i airtríteas athlastach.J. Exp.Med. 205,2457-2464 (2008).

26. Thomas, LS et al. Déanann an ball teaghlaigh TNF TL1A secretion IL-22 isteach

cealla Th17 daonna tiomanta trí ionduchtú IL-9. J. Leucoc. Biol. 101,727-737 (2017).

27. Richard, ACet al. Cuireann an ligand TNF-teaghlaigh TL1A agus a receptor DR3 T chun cinn

imdhíonphaiteolaíocht ailléirgeach trí chill trí dhifreáil agus pataigineacht IL a fheabhsú-9-táirgeadh cealla T.J.Immunol.194,3567-3582(2015). 28. Tan, C. et al. Léiríonn cealla Th9 a bhaineann go sonrach le hantaigin uathúlacht ina gcinéiticí de

táirgeadh cytokine agus coinneáil gearr ag an suíomh athlastach. Imdhíonól. 185,6795-6801(2010).

29. Wilhelm, C.et al. Léiríonn tuairisceoir cinniúint IL-9 ionduchtú IL- dúchasach

9 freagra i athlasadh scamhóg. Nat. Imdhíonól. 12,1071-1077 (2011).

30. Banias, G.et al. Ról TL1A agus a receptor DR3 in dhá mhúnla ainsealach

ileitis murine. Proc. Natl Acad. Sci. USA 103, 841-8446 (2006).

31. Betz, BCet al. Comhordaíonn BATF gnéithe iomadúla d'fheidhm chealla B agus T atá ag teastáil

le haghaidh gnáthfhreagairtí antasubstainte.J. Exp.Med. 207,933-942(2010).

32. Schraml, BU et al. Tá difríocht idir fachtóir trascríobh AP-1 BATF T(H)17-

tionscnamh. Nádúr 460, 405-409 (2009).

33. Glasmacher, E. et al. Gné rialaitheach genomic a stiúrann cóimeáil agus

feidhm na gcoimpléisc IRF AP a bhaineann go sonrach le himdhíonacht. Eolaíocht 338,975-980 (2012). 34. Li, P. et al. Tá BATF-JUN ríthábhachtach maidir le tras-scríobh trí mheán an IRF i gcealla T. Dúlra

490,543-546(2012).

35. Yao, W.et al. Tá Interleukin-9 ag teastáil le haghaidh athlasadh ailléirgeach aerbhealaigh idirghabhála

ag an cítocine TSLP.Imdhíonacht 38,360-372 (2013).

36. Ciofani, M. et al. Líonra rialála bailíochtaithe do shonraíocht chill Th17. cill

151,289-303(2012).

37. Tussiwand, R.et al. Forbairt cille dendritic cúiteach arna idirghabháil ag BATF-

Idirghníomhaíochtaí IRF. Nádúr 490, 502-507(2012).

38. Iwata, A. et al. Cáilíocht na comharthaíochta TCR arna chinneadh ag cleamhnais difreálach de

feabhsaitheoirí don choimpléasc ilchodach fachtóir trascríobh BATF-IRF4. Nat. Imdhíonachta.18,563-572(2017).

39. Vegan, F. et al. Is é an fachtóir trascríobh IRF1 a ordaíonn an cleithiúnaí IL-21-

feidhmeanna frith-ailse de chealla TH9. Nat. Imdhíonól. 15,758-766(2014).

40. Xiao, X. et al. Tá comharthaíocht OX40 i bhfabhar ionduchtú cealla T(H)9 agus aerbhealaigh

athlasadh. Nat. Imdhíonól. 13,981-990 (2012).

41. Wang, C. et al. Teastaíonn BATF chun gnáthchónaí a chur in iúl

gabhdóirí ag cealla cabhrach T mar fhreagra ar aigéad retinoic. J. Cait. Med. 210, 475-489(2013).

42. Kara, EE et al. Rialaíonn haiseanna sainiúla gabhdóirí ceimicín gáinneáil cealla Th9

chuig láithreáin athlastacha ailléirgeacha agus uath-imdhíonachta. J. Imdhíon. 191,110-117 (2013).

43. Esplugues, E.et al. Tarlaíonn rialú cealla TH17 sa stéig bheag. Dúlra 475,

514-518(2011).

44. Shih, DQ et al. Bunaítear bac ar fhachtóir núíosach fibrogenic Tella

fiobróis colonic. Imdhíon Mhúcosal.7,1492-1503 (2014).

45. Ostanin, DV et al. Múnla aistrithe cille T de cholitis ainsealach: coincheapa, breithnithe, agus cleasanna na trádála. Táim. J. Fisiol. Gastrointest. Fisiol ae. 296, G135-G146(2009).

46. ​​Smig, JEet al. Tá earcú leukocytes aerbhealaigh i lucha ag brath ar alfa4-

integrins agus móilín greamaitheachta cille soithíoch-1. Táim. J. Fisiol. 272, L219-L29 (1997).

47. Weigmann, B. et al. Leithlisiú agus anailís ina dhiaidh sin ar lamina propria murine

cealla mononuclear ó fíocháin choilíneacha. Nat. Prótacal. 2,2307-2311 (2007).