CistancheTá feidhm aige freisintáirgeadh collagen a chur chun cinn, is féidir a mhéadú an elasticity agus luster an craiceann agus cabhrúcealla craiceann damáiste a dheisiú. CistancheGlicóisídí feinileatánóltionchar suntasach síos-rialaithe ar ghníomhaíocht tyrosinase, agus tá an éifeacht ar tyrosinase léirithe a bheith iomaíoch agus cosc ​​inchúlaithe, is féidir a chur ar fáil bonn eolaíoch a fhorbairt agus a úsáid comhábhair whitening i Cistanche. Dá bhrí sin, tá ról lárnach ag cistanche i gcraiceannag fiuchadh. Is féidir leisbac a chur ar tháirgeadh melanindídhathú agus dullness a laghdú; agus táirgeadh collagen a chur chun cinn chun leaisteachas craiceann agus radiance a fheabhsú. Mar gheall ar aitheantas forleathan na n-éifeachtaí seo a bhaineann le cistanche, tá go leor táirgí whitening craiceann tar éis tosú ag insileadh comhábhair luibhe ar nós Cistanche chun freastal ar éileamh na dtomhaltóirí, rud a mhéadaíonn luach tráchtála Cistanche i dtáirgí whitening craiceann. Go hachomair, tá ról an chistín i ngéibheann craicinn ríthábhachtach. Afrithocsaídeachéifeacht aguséifeacht a tháirgeann collagenis féidir le mílí agus dullness a laghdú, leaisteachas craiceann agus luster a fheabhsú, agus dá bhrí sin éifeacht whitening a bhaint amach. Chomh maith leis sin, léiríonn feidhmiú leathan Cistanche i dtáirgí whitening craicinn nach féidir a ról i luach tráchtála a mheas faoina luach.

Cliceáil Cistanche Orgánach le haghaidh Bánú

Tuilleadh eolais:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Is é Tyrosinase an einsím a theorannú ráta de tháirgeadh melanin agus, dá réir sin, is é an sprioc is suntasaí chun hipearpigmentation a chosc. Aithníodh go leor coscairí tyrosinase, ach níl éifeachtúlacht chliniciúil ag an gcuid is mó díobh sin toisc gur aithníodh iad ag baint úsáide as tyrosinase muisiriún mar an sprioc. Dá bhrí sin, d’úsáideamar tyrosinase daonna athchuingreach chun leabharlann de 50,000 comhdhúil a scagadh agus chuireamar i gcomparáid leis na hamanna gníomhacha scagtha le comhábhair ghealaithe a bhfuil clú orthu. Níor chuir hidroquinone agus a arbutin díorthach ach cosc ​​​​lag ar tyrosinase daonna le tiúchan coisctheach leath uasta (IC50) sa raon millimolar, agus léirigh aigéad kojic éifeachtúlacht lag (IC50> 500 mmol/L). Ba iad na coscairí is cumhachtaí de tyrosinase daonna a aithníodh sa scáileán seo ná díorthaigh resorcinol-thiazole, go háirithe an Thiamidol nua-aitheanta (Beiersdorf AG, Hamburg, an Ghearmáin) (isobutyl amido thiazolyl resorcinol), ag a raibh IC50 de 1.1 mmol/L. I gcodarsnacht leis sin, níor chuir Thiamidol bac ach go lag ar tyrosinase muisiriún (IC50 =108 mmol/L). I gcultúir melanocyte, chuir Thiamidol bac láidir ach inchúlaithe ar tháirgeadh melanin (IC50 =0.9 mmol/L), ach chuir hidreacuineon bac do-aisiompaithe ar mheileanogenesis (IC 50 = 16.3 mmol/L). Go cliniciúil, laghdaigh Thiamidol cuma spotaí aoise laistigh de 4 seachtaine go feiceálach, agus tar éis 12 seachtaine bhí roinnt spotaí aoise aitheanta ón ngnáthchraiceann in aice láimhe. Ní mór iniúchadh a dhéanamh ar chumas iomlán Thiamidol chun hipearpigmentation craiceann daonna a laghdú i staidéir amach anseo.

RÉAMHRÁ

Is fadhbanna móra cosmaideacha iad melasma, leintigíní actinic agus ganna, agus hipearpigmentation post-athlastach a lorgaíonn go leor othar comhairle leighis ina leith. Go ginearálta, bíonn tionchar ag na neamhoird sin ar dhaonraí a bhfuil coimpléisc craiceann níos dorcha orthu agus a bhfuil níos mó minicíochta agus déine acu (Stratigos agus Katsambas, 2004). Tá go leor táirgí tráthúla ar fáil chun neamhoird hipearpacha a chóireáil, agus tá comhábhair ghníomhacha éagsúla iontu chun táirgeadh agus/nó dáileadh meileanin a laghdú. Cé gur féidir hyperpigmentation craiceann a laghdú trí mheicníochtaí éagsúla (Briganti et al., 2003), is é tyrosinase, an einsím a theorannú ráta de tháirgeadh melanin, an sprioc soiléir d’inhibitors hyperpigmentation (Kanteev et al., 2015; Lee et al., 2014; Ramsden agus Riley, 2014). Tá cur síos déanta ar go leor substaintí sa litríocht mar choscóirí tyrosinase, ach níl éifeachtúlacht chliniciúil ag an gcuid is mó acu, agus ní úsáidtear ach cúpla comhdhúil faoi láthair i dtáirgí deirmeolaíochta tráthúla (Chang, 2009; Kim agus Uyama, 2005; Rescigno et al., 2002 ). Ina measc siúd, is iad aigéad kojic, hidroquinone, agus arbutin na cinn is coitianta (Solano et al., 2006).

Tá éifeachtacht chliniciúil mhíshásúil na gcoscairí tyrosinase a úsáidtear faoi láthair mór mar go ndearnadh tástáil ar na comhdhúile sin ag baint úsáide as tyrosinase amháin atá scoite ón muisiriún Agaricus bisporus (mTyr) (Espin et al., 2000; Garcia-Molina et al., 2005), arb é an t-aon cheann é. tyrosinase gníomhach ar fáil go héasca ar bhonn tráchtála. Tá difríocht shuntasach idir gníomhaíochtaí catalaíoch agus sainiúlachtaí foshraitheanna mTyr agus an einsím mamaigh (Hearing et al., 1980). Réitíodh struchtúir tríthoiseach roinnt tyrosinases le déanaí, ina measc struchtúir mTyr (Ismaya et al., 2011) agus dhá einsím baictéarach ó Streptomyces castaneoglobisporus (Matoba et al., 2006) agus Bacillus megaterium (Sendovski et al. , 2011). I gcodarsnacht leis sin, is beag eolas cinéiteach nó struchtúrach atá ar fáil do tyrosinase daonna (HTyr), go príomha mar gheall ar na deacrachtaí suntasacha a bhaineann le méideanna leordhóthanacha hTyr a fháil ó fhoinsí nádúrtha nó trí léiriú heitreolaíoch. Tá hTyr curtha in iúl go neamhbhuan i línte cille ainmhithe éagsúla (Olivares et al., 2002; Schweikardt et al., 2007; Tripathi et al., 1992; Wendt, 2006), ach bhí an táirgeacht ró-íseal i gcónaí chun tréithriú mionsonraithe a dhéanamh ar an toradh a bhí air. ullmhóidí hTyr. Le déanaí, tá córais léirithe níos éifeachtaí forbartha ag grúpaí éagsúla le haghaidh hTyr (Cordes et al., 2013; Fogal et al., 2015; Lai et al., 2016), ach sonraí ar struchtúr tríthoiseach hTyr nó sonraí cinéiteach de Bhí coscairí hTyr fós ar iarraidh.

TORTHAÍ

Cosc ar hTyr

A screen of 50,000 compounds in the library, which spans a wide chemical space, yielded several hit series of active and effective hTyr inhibitors. Among them, derivatives of thiazolyl-resorcinol were the most promising group. This lead compound was then optimized to develop derivatives with high activity and physicochemical properties compatible with topical formulations. Thiamidol (isobutyl amido thiazolyl resorcinol, compound 1) (Figure 1) was identified as one of the most potent derivatives. In addition to Thiamidol, 4-butyl resorcinol (compound 2) and the classical tyrosinase inhibitors kojic acid (compound 5), hydroquinone (compound 6), and arbutin (compound 7), as well as rhododendron (compound 9), were also tested as inhibitors of the diphenols (L-dopa oxidase) activity of hTyr over a wide range of concentrations (up to 4 orders of magnitude). The results are summarized in Figure 2a and Table 1. Among these actives, Thiamidol was by far the most efficient inhibitor of hTyr, with a half-maximal inhibitory concentration (IC50) of 1.1 mmol/L, with almost complete enzyme inhibition of hTyr occurring at concentrations above 10 mmol/L. The resorcinol derivatives 4-butylresorcinol, 4-hexylresorcinol, and 4-phenylethylresorcinol had IC50 values of 21mmol/L, 94mmol/L, and 131 mmol/L, respectively (Table 1). With an IC50 of about 500 mmol/L, kojic acid was 500 times less potent than Thiamidol. Hydroquinone and arbutin were both very poor inhibitors of hTyr, with IC50 values in the millimolar range. Kojic acid, arbutin, and hydroquinone were not able to completely inhibit hTyr in the concentration range tested. Racemic rhododendron was also rather ineffective as an inhibitor of L-dopa oxidation, with an IC50 >1,200 mmol/L (Fíor 2a).

Thug anailís chinéiteach mhionsonraithe ar chosc ar hTyr le Thiamidol cineál coiscthe fíor-iomaíoch le tairiseach coscaire (Ki) de 0.25 mmol/L (Fíor 2b, Tábla 1). Tagann an luach seo leis an luach IC50 measta ó chuair dáileoige-fhreagartha (1.1 mmol/L) (cf. Fíor 2a) ar cheart, maidir le cosc ​​iomaíoch, a bheith thart ar 3 huaire níos airde ná an Ki. Bhí na luachanna Ki do 4-reasorcinol búitile (9 mmol/L), 4-heicsileresorcinol (39 mmol/L), agus 4- feinileitilresorcinol (24 mmol/L) i bhfad níos airde ná an Luach Ki Thiamidol (Tábla 1). Léiríonn na sonraí seo go dtugann an taise aimíd thiazolyl de Thiamidol cosc ​​i bhfad níos fearr ar hTyr ná mar a dhéanann na taobhshlabhraí hidreacarbóin atá i dtrí dhíorthach eile resorcinol (4-butyl-, 4-hexyl-, agus {{). 21}} resorcinol feinile eitile). Mar a tugadh faoi deara, tá an éifeachtúlacht an-difriúil i mTyr, áit a bhfuil 4-búitile resorcinol, 4-hexylresorcinol, agus 4-phenylethylresorcinol, agus fiú aigéad kojic, níos fearr ná Thiamidol chun an einsím a chosc (Tábla 1). Mar sin, ní bheadh ​​Thiamidol sainaitheanta mar dearfach i scagadh ag baint úsáide as mTyr, agus bheadh ​​éifeachtúlacht 4-phenylethylresorcinol rómheastachán go hiomlán.

Dúirt Garcia-Jimenez et al. (2016) le déanaí go n-ocsaídíonn mTyr resorcinols áirithe go mall, ar choinníoll go ndéantar foirm mheitineach na heinsíme a thiontú roimhe seo go dtí an fhoirm ocsa nó díocsa trí bhreiseáin cosúil le H2O2 agus ascorbate agus go gcothaítear an t-imoibriú ag o-défheinóil. . Mar sin, d’úsáideamar anailís chainníochtúil ardfheidhmíochta crómatagrafaíocht leachta (Ito agus Wakamatsu, 2015) chun a fháil amach an bhféadfadh Thiamidol a bheith ina fhoshraith de hTyr freisin. Inár ngnáthchoinníollacha measúnaithe (ie, in éagmais na mbreiseán a luaigh Garcia-Jimenez et al., 2016), níor tharla aon ocsaídiú inbhraite de Thiamidol laistigh de roinnt uaireanta an chloig tar éis gortha le hTyr, ach rinneadh róslabhras a ocsaídiú go héasca laistigh den tréimhse ama sin. (féach Fíor Forlíontach S1 ar líne). Dá bhrí sin, glacaimid leis go bhfuil an t-imoibriú cur síos ag Garcia-Jimenez et al. Níl sé ábhartha do Thiamidol agus hTyr i gcoinníollacha fiseolaíocha.

Cosc ar tháirgeadh melanin

Rinneamar tástáil ansin ar éifeachtaí coisctheacha féideartha na gcomhdhúile seo ag baint úsáide as múnla tríthoiseach do chraiceann an duine. Mar a breathnaíodh le hTyr íonaithe, níor léirigh arbutin ach éifeachtúlacht diomaibhseach maidir le táirgeadh melanin a chosc i múnlaí craiceann MelanoDerm (MatTek Corporation, Ashland, MA) (IC50 > 4,000 mmol/L) (Fíor 2c) . Chuir aigéad Kojic bac ar tháirgeadh melanin le IC50 de w400 mmol/L, rud a léirigh cuar dáileog-fhreagartha a bhí iontach géar, agus nach raibh ach tiúchan faoi 200 mmol/L ach beagán bac ar tháirgeadh meileanin (ie, 5 faoin gcéad ag 150 mmol/L). Níor léirigh an róslabhras ach éifeachtaí imeallacha ar mheileanogenesis, le IC50 dealraitheach do chosc w1,200 mmol/L. Chuir hidroquinone bac ar tháirgeadh melanin i múnlaí craiceann MelanoDerm le IC50 de 15 mmol/L, rud a thugann le tuiscint go bhfuil meicníocht eile aige seachas cosc ​​tyrosinase. 4-Choisc Butylresorcinol sintéis melanin le IC50 de 13.5 mmol/L. Arís, bhí Thiamidol, le fada, ar an gcosc is cumhachtaí ar tháirgeadh melanin i múnlaí craiceann MelanoDerm, le IC50 de 0.9 mmol/L, agus i gcultúir monolayer, laghdaigh Thiamidol foirmiú melanin le feiceáil (Fíor 3a).

Rinneadh tástáil ar hidroquinone agus Thiamidol ansin i gcultúir mhonashraitheanna melanocyte fadtéarmacha chun inchúlaitheacht fhéideartha an choisc a sheiceáil. Cé gur laghdaigh 1 mmol/L Thiamidol táirgeadh melanin go dtí níos lú ná 60 faoin gcéad tar éis 2 sheachtain, laghdaigh hidreaquinone 1 mmol/L táirgeadh melanin go dtí thart ar 85 faoin gcéad (Fíor 3b). Mar sin féin, tar éis tuilleadh saothraithe gan na comhdhúile gníomhacha, d'aththosaigh melanocytes a bhí bactha ag Thiamidol a dtáirgeadh melanin go tapa, ag baint amach leibhéil réamhchóireála laistigh de sheachtain amháin. I gcodarsnacht leis sin, níor éirigh le cealla cóireáilte le hidroquinone a gcumas iomlán a aisghabháil le haghaidh táirgeadh melanin laistigh den 2-tréimhse cultúir seachtaine, agus lean táirgeadh melanin ag 85 faoin gcéad de na leibhéil réamhchóireála.

Samhaltú mhóilíneach

Scrúdaíodh modhanna ceangailteacha féideartha Thiamidol le hTyr trí staidéir dhuga fhíorúla. Taispeánann Figiúr 4a suíomh gníomhach na samhla homaleolaíochta de hTyr san fhoirm mheitineach, le ligand Thiamidol dugtha i gcomhfhoirmiú is ísle fuinnimh. Tá an t-ionad dé-copair leis an ocsaigin idirlinne le feiceáil ar thaobh na láimhe clé. Ní thaispeántar ach iarmhair aimínaigéad atá díreach in aice leis an gcoscóir faoi cheangal. (Cuimsíonn uimhriú iarmhair an peptide comhartha). Tá dromchla istigh an phóca ceangailteach daite de réir hidreafóbacht ar scála ó ghorm le haghaidh hidreafail go donn le haghaidh hidreafóbach. Cé go bhfuil timpeallacht an ionaid dé-copair thar a bheith hidreafail, cruthaítear fo-phóca láidir hidreafóbach go príomha ag na slabhraí taobh I368, V377, agus F347. Sa treoshuíomh spásúil a thaispeántar, déanann an 1-grúpa hidrigine d'fháinne aramatacha an ligand teagmhálacha fairsinge leis an lárionad dé-copair, agus tá an 3-grúpa hiodrocsa páirteach i naisc hidrigine le taobhshlabhra na S380 agus carbóinil cnámh droma M374. Coinnítear an fáinne thiazolyl i bhfeidhm ag idirghníomhaíochtaí hidreafóbach leis an bpóca neamhpholach (Fíor 4b), déanta ag slabhraí taobh aimínaigéid, a bhfuil difríocht idir an chuid is mó acu idir mTyr agus hTyr (Fíor 4c).

Fuarthas torthaí inchomparáide nuair a dúnáladh Thiamidol go dtí an struchtúr x-ghathaithe a foilsíodh le déanaí den TRP1 atá cosúil le struchtúr, einsím melanóigineach ina bhfuil Zn2þ a bhfuil feidhm fós anaithnid i ndaoine (Ghanem agus Fabrice, 2011; Lai et al., 2017), ag moladh go bhfuil an einsím TYRP1 bac Thiamidol chomh maith (féach Figiúr Forlíontach S2 ar líne).

Staidéir chliniciúla

Scrúdaíodh éifeachtúlacht in vivo Thiamidol ansin i staidéir chliniciúla nuair a dhéileáil daoine scothaosta le spotaí aoise ar a gcraiceann dhá uair sa lá le foirmle ina raibh {{{0}}.2 faoin gcéad Thiamidol nó leis an bhfeithicil amháin mar rialú. Cheana féin tar éis 4 seachtaine de chóireáil, bhí na spotaí aoise cóireáilte i bhfad níos éadroime ná na spotaí aoise rialaithe gan chóireáil (Fíor 5a). Leanadh ar aghaidh leis an bhfeabhsú thar thréimhse iomlán na cóireála, agus tar éis 12 seachtaine bhí cuid de na spotaí aoise do-aitheanta ón gcraiceann gnáth-lí timpeall air (Fíor 5b). Léirigh grianghraif EpiFlash (Canfifield Scientifific Inc., Parsippany, NJ) feabhas infheicthe ar chuma spotaí aoise, agus d'fhan na spotaí aoise rialaithe gan chóireáil gan athrú (gan a thaispeáint). Léirigh staidéar leantach gur laghdaigh tiúchan Thiamidol chomh híseal le 0.1 faoin gcéad go héifeachtach infheictheacht spotaí aoise (féach Fíor Forlíontach S3 ar líne).

PLÉ

Is é an bealach is sábháilte agus is éifeachtaí chun hipearpigmentation cutaneous a chóireáil ná táirgeadh melanin a laghdú trí ghníomhaíocht tyrosinase a chosc. Mar sin féin, níl éifeachtúlacht chliniciúil ag formhór na gcoiscí tyrosinase a gcuirtear síos orthu sa litríocht nuair a dhéantar iad a ionchorprú i dtáirgí tráthúla. Ní tástáladh beagnach gach ceann acu ach i gcoinne mTyr (Espin et al., 2000; Garcia-Molina et al., 2005) agus mar sin, cé go raibh siad éifeachtach i gcoinne mTyr, d'éirigh leo a bheith ina gcoscairí bochta ar hTyr. Ní ullmhúchán aonchineálach é mTyr atá ar fáil go tráchtála, ach is meascán é de roinnt isoeninsí tyrosinase agus méideanna beaga de ghníomhaíochtaí einsíme breise a d’fhéadfadh tionchar a bheith acu ar staidéir ar chosc ar bhealaí nach féidir a thuar (Pretzler et al., 2017). Tá seichimh aimínaigéad i réigiún an tsuímh ghníomhaigh ag Isoenzymes AbPPO3 agus AbPPO4, na príomhchodanna de mTyr atá ar fáil go tráchtála, atá difriúil go suntasach ó hTyr (Fíor 4c). Tá lúba breise ag an dá isoenzyme mTyr idir Asn371 (ceann de na suíomhanna glycosylation de hTyr) agus Gly372. Níl roinnt de na hiarmhair a idirghníomhaíonn le Thiamidol in hTyr (cf. Fíor 4b) caomhnaithe in mTyr, mar shampla, Ile368, Ser375, agus Ser380. Tá Phe207 caomhnaithe go struchtúrach i mTyr, ach níl Phe347. Toisc go bhféadfadh éifeachtaí suntasacha a bheith ag fiú athruithe beaga in idirghníomhaíochtaí einsím-ligand ar chleamhnais cheangailteacha, níorbh ábhar iontais na próifílí coiscthe éagsúla de hTyr agus mTyr (achoimrithe i dTábla 1).

Ba é príomhchuspóir an staidéir seo comparáid a dhéanamh idir éifeachtaí arbutin, hidreaquinone, agus aigéad kojic le díorthaigh resorcinol éagsúla ar fheidhm chatalaíoch hTyr agus ar tháirgeadh melanin in vivo. Ach amháin i gcás Thiamidol, cuireadh síos ar na substaintí go léir a tástáladh mar choscóirí tyrosinase (Kim et al., 2012); áfach, tá a ngníomhaíochtaí coisctheacha tuairiscithe an-éagsúil. Sa litríocht leighis, meastar gurb é hidroquinone an caighdeán critéar le haghaidh cóireáil hyperpigmentation craiceann, cé go bhfuil imní mhór ann maidir lena shábháilteacht. Tá cosc ​​ar hidroquinone san Aontas Eorpach ó úsáid i gcosmaidí, ach díoltar é fós sna Stáit Aontaithe mar dhruga thar an gcuntar i bhfoirmlithe ina bhfuil suas le 2 faoin gcéad hidreacuineon. Le déanaí, léirigh Riarachán Bia agus Drugaí na SA (2006) imní faoi hidreaquinone; áfach, tá rialú deiridh fós ar feitheamh. Clúdaíonn na luachanna foilsithe IC50 do chosc hidreaquinone ar mTyr raon ó 1.1 mmol/L (Kang et al., 2003) go 680 mmol/L (Abu Ubeid et al., 2009). Inár n-anailís, bhí hidreacuineon thar a bheith neamhéifeachtach i gcoinne hTyr, rud a chuir bac air ach beagán, ag baint amach coiscthe 50 faoin gcéad ag thart ar 4,000 mmol/L. Cé gur measadh go bhfuil hidroquinone mar inhibitor tyrosinase ó na 1990idí luatha (Palumbo et al., 1991), tugann ár dtorthaí le fios go bhfuil a chuid airíonna cíteatocsaineacha níos tábhachtaí, ní hamháin as a éifeachtaí díobhálacha ar melanocytes ach freisin as a éifeachtúlacht mar inhibitor of melanogenesis (Jimbow et al., 1974; Penney et al., 1984; Smith et al., 1988). Tá bunús leis an dearcadh seo ní hamháin ag ár dtorthaí le hTyr agus ag an bhfíric gur laghdaigh hidreaquinone táirgeadh melanin go suntasach i múnlaí craiceann ach freisin ag ár dturgnaimh le cultúir melanocyte. Anseo, laghdaigh hidroquinone táirgeadh melanin, ach níor tháinig na cealla cóireáilte ar ais ar an gcumas iomlán melanin a tháirgeadh tar éis deireadh a chur leis an gníomhach.

Although arbutin is generally considered an effective tyrosinase inhibitor, the published IC50 values of arbutin for mTyr range from 40 mmol/L (Ying et al., 1999) to more than 30,000 mmol/L (Sugimoto et al., 2005). In our test system, we found very high IC50 values (>4,000 mmol/L) le haghaidh arbutin le hTyr íonaithe agus leis an múnla craiceann MelanoDerm araon. Tá sonraí maidir le héifeachtúlacht a-arbutin agus b-arbutin araon foilsithe (Garcia-Jimenez et al., 2017). Mar sin féin, is pro-dhrugaí hidroquinone an dá chomhdhúil, agus braitheann a ngníomhaíocht bhitheolaíoch ar scaoileadh hidreaquinone ón móilín (Briganti et al., 2003). D’fhoilsigh Coiste Eolaíoch an Aontais Eorpaigh um Tháirgí Tomhaltóirí (2008) tuairim chriticiúil ar arbutin. Mar gheall ar scaoileadh hidroquinone ón móilín, measann sé go bhfuil úsáid arbutin i dtáirgí cosmaideacha neamhshábháilte.

Raon na luachanna IC50 foilsithe do chosc tyrosinase ag aigéad kojic ó 6 mmol/L (Curto et al., 1999) go dtí níos mó ná 100 mmol/L (Jeon et al., 2005). Mar choscóir hTyr, tá aigéad kojic i bhfad níos lú éifeachtaí, le IC50 de thart ar 500 mmol/L. Léiríonn aigéad Kojic cineál measctha coiscthe, le Ki de 145 mmol/L, rud a thugann le fios go gceanglaíonn sé leis an bhfoirm deocsa de tyrosinase (Sun et al., 2014). Nuair a úsáidtear é chun an tsamhail MelanoDerm a chóireáil, taispeánann aigéad kojic cuar dáileog-fhreagartha atá thar a bheith géar, agus méadú ar chosc ó 5 faoin gcéad ag 150 mmol/L go coisc níos mó ná 75 faoin gcéad ag 900 mmol/L (féach Fíor 2c). B’fhéidir gurb é seo an phríomhchúis le héifeachtacht an-teoranta aigéad kojic in vivo. Maidir le sábháilteacht aigéad kojic, measann an Coiste Eolaíoch Eorpach um Shábháilteacht Tomhaltóirí (2012) anois go bhfuil aigéad kojic ag tiúchan suas le 1.0 faoin gcéad sábháilte do tháirgí cosmaideacha nuair a chuirtear i bhfeidhm é ar chraiceann sláintiúil, dearcadh a chomhroinneann an Painéal Saineolaithe um Athbhreithniú ar Chomhábhair Cosmaideacha ( Burnett et al., 2010).

Bronnadh stádas gar-dhrugaí ar róslabhras sa tSeapáin in 2008 agus úsáideadh é mar chomhábhar whitening i dtáirgí cosmaideacha. Glacadh leis go raibh sé ina choscóir iomaíoch ar tyrosinase. In 2013, áfach, rinneadh táirgí a raibh róslabhras iontu a athghairm i 10 dtír san Áise nuair a d’fhorbair gar do 20,000 tomhaltóir leoicídí tar éis na táirgí a úsáid. Léiríodh go bhfuil róslabhras ní hamháin ina inhibitor ach freisin ina fhoshraith den dá hTyr (Ito et al., 2014a) agus mTyr (Ito et al., 2014b). D’fhéadfadh carnadh strus reticulum endoplasmic-spleách agus/nó gníomhachtú an chosáin apoptotic cur le cíteatocsaineacht melanocyte róslabhras (Sasaki et al., 2014).

Tá an móitíf resorcinol ionadach ar a dtugtar 4-ar a dtugtar le tamall anuas mar chuid éifeachtach ceimiceach a chuireann cosc ​​​​ar tyrosinase (Khatib et al., 2005). Tá an móitíf seo i go leor comhdhúile nádúrtha a aithníodh mar oibreáin whitening, go príomha flavonoids (Shimizu et al., 2000, 2011). Toisc go bhfuil bith-infhaighteacht flavonoids íseal go ginearálta, ba é an sprioc a bhí againn ná díorthaigh resorcinol a aithint le héifeachtúlacht níos fearr agus le bith-infhaighteacht. 4-Aithníodh Butylresorcinol cheana féin mar choscóir luchóg agus tyrosinase daonna (Kim et al., 2005; Kolbe et al., 2013) agus de ghníomhaíocht aigéad carbocsaileach indole dihydroxy de luch TYRP1 (Katagiri et al. , 2001). Mar sin féin, bhí sonraí cinéiteach mionsonraithe 4-búitile resorcinol fós in easnamh. I measúnú hTyr, fuaireamar cineál coiscthe fíor-iomaíoch de 4-búitile resorcinol le Ki de 9.1 mmol/L, atá ag teacht go sármhaith leis an luach IC50 arna chinneadh (Tábla 1).

Inár dturgnaimh in vitro, ba é Thiamidol, le IC50 de 1.1 mmol/L sa mheasúnacht einsím hTyr agus 0.9 mmol/L sa mhúnla craiceann MelanoDerm, an ceann is éifeachtaí le fada de na substaintí go léir a tástáladh. Dheimhnigh turgnaimh bhreise gur inhibitor dian-iomaíoch é Thiamidol (Fíor 2b) agus nach foshraith do tyrosinase (féach Figiúr Forlíontach S1), agus, mar sin, ní thiontaítear Thiamidol go quinone tocsaineach agus a d'fhéadfadh a bheith ina chúis le leukoderma. Dá bhrí sin, roghnaíodh Thiamidol le haghaidh staidéir chliniciúla chun a éifeachtúlacht in vivo a mheas. Thaispeáin staidéar ar Thiamidol a d’úsáid spot-reannán go bhfuil feabhas leanúnach ar chuma spotaí aoise thar an 12-tréimhse cóireála iomlán, rud a bhain tábhacht staitistiúil amach chomh luath le 4 seachtaine. Léiríonn na torthaí seo éifeachtúlacht láidir laghdaithe lí an táirge tástála Thiamidol agus tairbhe chliniciúil soiléir i mbainistiú hipearpigmentation craicinn.

ABHAIR AGUS MODHANNA

Tyrosinase daonna

Léiríodh foirm teasctha HTyr (hTyr-DHis) ina bhfuil an fearann ​​catalaíoch hTyr i gcealla HEK 293 agus í íonaithe ag crómatagrafaíocht cleamhnas miotail ar Ni2þ-Sepharose (GE Healthcare, München, an Ghearmáin) mar a thuairiscítear in áit eile ( Cordes et al., 2013). Bhí na hairíonna catalaíoch céanna ag an ullmhúchán mar thoradh air agus atá ag hTyr fiáin.

Foinsí coscairí

Ó leabharlann cumaisc Evotec (Evotec, Hamburg, an Ghearmáin), roghnaíodh 50,000 comhdhúil, a chlúdaíonn spás leathan ceimiceach, chun HTS a dhéanamh le haghaidh coscairí hTyr, arna measúnú ag baint úsáide as an measúnacht Tyr a bhfuil cur síos air sa chéad chuid eile. Ansin rinneadh díorthaigh de chomhdhúile luaidhe a bhfuil gealladh fúthu a shintéisiú le haghaidh barrfheabhsú breise. Ceannaíodh na coscairí eile ó sholáthraithe éagsúla (féach Ábhair Fhorlíontacha ar líne le haghaidh sonraí).

Measúnacht tyrosine agus nós imeachta HTS

Tá sonraí iomlána faoi ghníomhaíocht L-dopa oxidase agus na nósanna imeachta scagthástála HTS a úsáideadh le fáil sna Ábhair Fhorlíontacha.

Samhaltú mhóilíneach

In silico bhí duáil bunaithe ar shamhail homaleolaíochta nua de hTyr, a bhfuil cur síos air in áit eile (Mann et al., 2017). Rinneadh na insamhaltaí trí úsáid a bhaint as Molegro Virtual Docker (Molegro, Aarhus, an Danmhairg). Baineadh úsáid as Discovery Studio Visualizer 4.0 (Accelrys, San Diego, CA) le haghaidh anailíse sonraí amhairc agus cur i láthair. Tógadh na seichimh ó bhunachar sonraí UniProt (UniProt Consortium, 2017).

Measúnachtaí samhlacha craiceann

Tá sonraí iomlána ar fhíocháin MelanoDerm a úsáidtear mar mhúnla craicinn agus ar chainníocht n a n-ábhar melanin le fáil sna Ábhair Fhorlíontacha.

Cultúir melanocyte

Is féidir sonraí iomlána cultúir melanocyte agus cainníochtú a n-ábhar melanin a fháil sna Ábhair Fhorlíontacha.

Staidéir chliniciúla

Rinneadh dhá staidéar randamach in vivo (dallta do na táirgí tástála, oscailte don rialú neamhchóireáilte). Chláraigh staidéar amháin 18 n-ábhar baineann (56e71 bliain d'aois), agus chríochnaigh 17 n-ábhar an staidéar. Rinneadh an dara staidéar le 19 n-ábhar (18 baineannach, 1 fireann; 58e7{{10}} bliain d’aois), agus chríochnaigh na 19 n-ábhar ar fad an staidéar. Chuir gach ábhar dhá fhoirmliú éagsúla i bhfeidhm dhá uair sa lá ar spotaí aoise ar a gcuid forearms volar ag baint úsáide as spot-reannaitheoir. Ní raibh difríocht idir na foirmlithe ach amháin sa chomhábhar gníomhach: 0.2 faoin gcéad Thiamidol i gcoinne feithicle sa chéad staidéar, agus 0.1 faoin gcéad Thiamidol versus feithicle sa dara staidéar. Cuireadh cóireáil ar láthair aoise amháin in aghaidh an ábhair le foirmle ina raibh an comhábhar gníomhach, agus déileáladh le láthair rialaithe leis an bhfeithicil amháin. Rinneadh anailís ar pigmentation na spotaí aoise mar a thuairiscítear sna Ábhair Fhorlíontacha. Rinneadh na staidéir in vivo de réir mholtaí an leagain reatha de Dhearbhú Heilsincí agus threoirlínte na Comhdhála Idirnáisiúnta ar Chomhchuibhiú Dea-Chleachtais Chliniciúil. Thug gach rannpháirtí sna staidéir seo toiliú feasach i scríbhinn. Ina theannta sin, d'fhormheas agus d'imréitigh bord athbhreithnithe institiúideach Beiersdorf AG (Hamburg, an Ghearmáin) na staidéir.

COIMHLINT LEASA

ÁBHAR FORLÍONTACH

Tá ábhar breise nasctha leis an leagan ar líne den pháipéar.

TAGAIRTÍ

1.Abu Ubeid A, Zhao L, Wang Y, Hantash BM. Oligopeptides seicheamh gearr le gníomhaíocht choisctheach i gcoinne muisiriún agus tyrosinase daonna. J Invest Dermatol 2009; 129: 2242e9.

2. Bohnsack K, Koop U, Hiddemann S, Kolbe L, Rippke F. Laghdaíonn lí éifeachtúlacht agus inghlacthacht sé fhoirmliú cúraim aghaidhe nua ina bhfuil 4-n-bhúitile resorcinol, póstaer uimh. P{3}}. Póstaer curtha i láthair ag 21ú Comhdháil EADV, Meán Fómhair 27-30, 2012; Prág, Poblacht na Seice.

3. Briganti S, Ceamara E, Picardo M. Cur chuige ceimiceach agus uirlise chun hyperpigmentation a chóireáil. Res Cill Lí 2003; 16:101e10.

4. Burnett CL, Bergfeld WF, Belsito DV, Hill RA, Klaassen CD, Liebler DC, et al. Tuarascáil deiridh ar an measúnú sábháilteachta ar aigéad Kojic mar a úsáidtear i gcosmaidí. Int J Toxicol 2010; 29(6 Soláthar). 244Se73.

5. Chang TS. Athbhreithniú nuashonraithe ar choscóirí tyrosinase. Int J Mol Sci 2009; 10: 2440e75.

6. Chen QX, Ke LN, Song KK, Huang H, Liu XD. Éifeachtaí coiscthe hexylresorcinol agus dodecyl resorcinol ar muisiriún (Agaricus bisporus) tyrosinase. Próitéin J 2004; 23:135e41.

7. Corda P, Sun W, Wolber R, Kolbe L, Klebe G, Ro¨hm KH. Léiriú i gcórais neamh-mheileanaigineacha agus íonú leagan intuaslagtha de tyrosinase daonna. Bithcheimic 2013; 394:685e93.

8. Curto EV, Kwong C, Hermersdo¨rfer H, Glatt H, Santis C, Virador V, et al. Coscairí melanocyte tyrosinase mamaigh: comparáidí in vitro idir eistir ailcile d'aigéad géiniteach le coscairí toimhdeacha eile. Cógaslann Bithcheimic 1999; 57:663e72.

9. Espin JC, Varon R, Fenoll LG, Gilabert MA, Garcia-Ruiz PA, Tudela J, et al. Tréithriú cinéiteach sainiúlacht an tsubstráit agus meicníocht tyrosinase muisiriún. Eur J Biochem 2000; 267: 1270e9.

10. Fogal S, Carotti M, Giaretta L, Lanciai F, Nogara L, Bubacco L, Bergantino E. Tyrosinase daonna a tháirgtear i gcealla feithidí: sainchomhartha maidir le scagadh drugaí nua a thugann aghaidh ar a ghníomhaíocht. Biteicneolaíocht Mol 2015; 57:45e57.

11. Garcia-Jimenez A, Teruel-Puche JA, Berna J, Rodriguez-Lopez JN, Tudela J, Garcia-Canovas F. Gníomh tyrosinase ar alfa agus béite-arbutin: Staidéar cinéiteach. PLoS a hAon 2017; 12:e0177330.

12. Garcia-Jimenez A, Teruel-Puche JA, Berna J, Rodriguez-Lopez JN, Tudela J, Garcia-Ruiz PA, Garcia-Canovas F. Tréithriú gníomh tyrosinase ar resorcinols. Bioorg Med Chem 2016; 24:4434e43.

13. Garcia-Molina F, Hiner AN, Fenoll LG, Rodriguez-Lopez JN, Garcia-Ruiz PA, Garcia-Canovas F, et al. Tyrosinase muisiriún: gníomhaíocht catalase, cosc, agus díghníomhú féinmharaithe. J Agric Bia Chem 2005; 53:3702e9.

14. Ghanem G, Fabrice J. Próitéin 1 a bhaineann le Tyrosinase (tyrp1/gp75) i meileanóma scoite daonna. Mol Oncol 2011; 5:150e5.

15. Éisteacht VJ Jr, Ekel TM, Montague PM, Nicholson JM. tyrosinase mamaigh. Stoichiometry agus tomhas táirgí imoibriúcháin. Acht Bithchim Bithfhis 1980; 611:251e68.

16. Ismaya WT, Rozeboom HJ, Weijn A, Mes JJ, Fusetti F, Wichers HJ, Dijkstra BW. Struchtúr criostal tyrosinase muisiriún Agaricus bisporus: céannacht na bhfo-aonaid tetramer agus idirghníomhú le trópolóin. Bithcheimic 2011; 50:5477e86.

17. Ito S, Gerwat W, Kolbe L, Yamashita T, Ojika M, Wakamatsu K. Is féidir le tyrosinase daonna an dá enantiomers de róslabhras a ocsaídiú. Meileanoma Cill lí 2014a; 27:1149e53.

18. Táirgeann Ito S, Ojika M, Yamashita T, Wakamatsu K. Tyrosinase-catalyzed ocsaídiúcháin de róslabhras 2-meitil chróman-6,7-dé-ón, an meitibilít thocsaineach deiridh toimhdiúil: impleachtaí do thocsaineacht melanocyte . Meileanoma Cill lí 2014b; 27:744e53.

19. Ito S, Wakamatsu K. Modh scagthástála áisiúil chun coscairí tyrosinase whitening craiceann feanólacha a idirdhealú ó fheanóil a spreagann leukoderma. J Dermatol Sci 2015; 80:18e24.

20. Jeon SH, Kim KH, Koh JU, Cong KH. Éifeachtaí coiscthe l-Dopa ocsaídiúcháin tyrosinase ag gníomhairí whitening craicinn. Bull Cóiréis Chem Soc 2005; 26:1135e7.

21. Jimbow K, Obat H, Pathak MA, Fitzpatrick TB. Meicníocht dídhíleáite ag hidreacuineon. J Invest Dermatol 1974; 62: 436e49.

22. Jimenez M, Garcia-Carmona F. 4-ionadaigh resorcinols (roghanna eile sulfíte) mar choscairí mall-cheangailteacha ar ghníomhaíocht catecholase tyrosinase. J Agric Food Chem 1997; 45:2061e5.

23. Kang HH, Rho HS, Hwang JS, Ó SG. Gníomhaíocht dídhírithe agus cíteatocsaineacht íseal beansóáití alcocsa nó cainéamáit alcocsa i melanocytes saothraithe. Tarbh Cheim Pharm (Tóiceo) 2003; 51:1085e8.

24. Kanteev M, Goldfeder M, Fishman A. Comhghaolta struchtúir-fheidhm i tyrosinases. Prot Sci 2015; 24:1360e9.

25. Katagiri T, Okubo T, Oyobikawa M, Futaki K, Shaku M, Kawai M, et al. Gníomhaíocht choisctheach de 4-n-bhúitile resorcinol ar mheileanogenesis agus a éifeacht whitening craicinn. J Soc Cosmet Chem Jpn 2001;35:42e9.

26. Khatib S, Nerya O, Musa R, Shmuel M, Tamir S, Vaya J. Chalcones mar choscóirí cumhachtacha tyrosinase: an tábhacht a bhaineann le 2,4-gluaiseacht resorcinol ionadach. Bioorg Med Chem 2005; 13:433e41.

27. Kim DS, Kim SY, Park SH, Choi YG, Kwon SB, Kim MK, et al. Éifeachtaí coiscthe 4-n-bhúitile resorcinol ar ghníomhaíocht tyrosinase agus sintéis melanin. Tarbh Biol Pharm 2005; 28:2216e9.

28. Kim H, Choi HR, Kim DS, Páirc KC. Gníomhairí tráthúla hipopigmented le haghaidh neamhoird lí agus a meicníochtaí gníomhaíochta. Ann Dermatol 2012; 24:1e6.

29. Kim YJ, Uyama H. ​​Coscairí Tyrosinase ó fhoinsí nádúrtha agus sintéiseacha, struchtúr, meicníocht coiscthe agus peirspictíocht don todhchaí. Sciath Beatha Cill Mol 2005;62:1707e23.

30. Kolbe L, Mann T, Gerwat W, Batzer J, Ahlheit S, Scherner C, et al. 4-n-butyl resorcinol, coscaire tyrosinase an-éifeachtach le haghaidh cóireáil tráthúla ar hipearpigmentation. J Eur Acad Dermatol Venereol 2013; 27: 19e23.

31. Lai X, Soler-Lopez M, Wichers HJ, Dijkstra BW. Slonn athchuingreach ar scála mór agus íonú tyrosinase daonna atá oiriúnach do staidéir struchtúracha. PLoS a hAon 2016; 11:e0161697. 32. Lai X, Wichers HJ, Soler-Lopez M, Dijkstra BW. Nochtann struchtúr próitéine a bhaineann le tyrosinase daonna 1 suíomh gníomhach since binuclear atá tábhachtach do melanogenesis. Angew Chem Int Ed Engl 2017; 56:9812e5.

33. Lee SY, Baek N, Nam TG. Coscairí tyrosinase nádúrtha, leathsintéiseach agus sintéiseacha. J Einsím Inhib Med Chem 2014; 31:1e13.

34. Mann T, Gerwat W, Wenck H, Ro¨hm KH, Kolbe L. Isobutylamido thiazolyl resorcinol inhibitor nua cumhachtach tyrosinase daonna. Melanoma Cill lí 2017:e85.

35. Matoba Y, Kumagai T, Yamamoto A, Yoshitsu H, Sugiyama M. Fianaise criostalach go bhfuil an t-ionad copar dinuclear tyrosinase FL solúbtha le linn catalysis. J Biol Ceimic 2006; 281:8981e90.

35. Nesterov A, Zhao J, Minter D, Hertel C, Ma W, Abeysinghe P, et al. 1-(2,4- déhidrocsa feinil)-3-(2,4-dimethoxy-3-meitilfeinil)própán, coscaire núíosach tyrosinase a bhfuil éifeachtaí dí-dhíola láidre aige. Tarbh Cheim Pharm (Tóiceo) 2008; 56:1292e6.

36. Olivares C, Garcia-Borron JC, Solano F. Aithint na n-iarmhar suímh ghníomhacha a bhfuil baint acu le nascadh cofactor miotail agus aithint substráit stereospecific i tyrosinase mamaigh. Impleachtaí don timthriall catalaíoch. Bithcheimic 2002; 41:679e86.

37. Palumbo A, d'Ischia M, Misuraca G, Prota G. Meicníocht um chosc ar mhelanógenesis trí hidreacuineóin. Acht Bithchim Bithfhis 1991; 1073:85e90.

38. Penney KB, Smith CJ, Allen JC. Braitheann gníomh díphacáil hidreaquinone ar chur isteach ar phróisis bhunúsacha na gceall. J Invest Dermatol 1984; 82:308e10.

39. Pretzler M, Bijelic A, Rompel A. Léiriú heitrologach agus tréithriú tyrosinase feidhmiúil muisiriún (AbPPO4). Ionadaí Sci 2017; 7: 1810.

40. Ramsden CA, Riley PA. Tyrosinase: na ceithre staid ocsaídiúcháin den suíomh gníomhach agus a n-ábharthacht maidir le gníomhachtú einsímeach, ocsaídiú agus díghníomhú. Bioorg Med Chem 2014; 22: 2388e95.

41. Rescigno A, Sollai F, Pisu B, Rinaldi A, Cosc Sanjust E. Tyrosinase, gnéithe ginearálta agus feidhmeacha. J Einsím Inhib Med Chem 2002; 17:207e18.

42. Sasaki M, Kondo M, Sato K, Umeda M, Kawabata K, Takahashi Y, et al. Feidhmíonn róslabhras, comhdhúil feanólach a chothaíonn dí-dhípéadú, cíteatocsaineacht melanocyte trí mheicníocht atá ag brath ar tyrosinase. Meileanoma Cill lí 2014; 27:754e63.

43. Schweikardt T, Olivares C, Solano F, Jaenicke E, Garcia-Borron JC, Decker H. Samhail tríthoiseach de mamaigh suíomh gníomhach tyrosinase cuntas ar an caillteanas na sócháin feidhme. Res Cill Lí 2007; 20: 394e401.

44. An Coiste Eolaíoch um Tháirgí Tomhaltóirí. Tuairim ar b-arbutin; 2008 (ar rochtain 21 Samhain, 2017).

45. An Coiste Eolaíoch um Shábháilteacht Tomhaltóirí. Tuairim ar aigéad kojic; 2012 (ar rochtain 21 Samhain, 2017).

46. ​​Sendovski M, Kanteev M, Ben-Yosef VS, Adir N, Fishman A. Léiríonn na chéad struchtúir de tyrosinase baictéarach gníomhach plaisteacht copair. J Mol Biol 2011;405:227e37.

47. Shimizu K, Kondo R, Sakai K. Cosc ar tyrosinase ag flavonoids, stilbenes, agus 4-reasorcinóil ionaid ghaolmhara: imscrúduithe ar ghníomhaíocht struchtúir. Planta Med 2000; 66:11e5.

48. Shimizu MM, Melo GA, Brombini Dos Santos A, Bottcher A, Cesarino I, Arau’jo P, et al. Tréithriú einsím, leithlisiú, agus clónáil cDNA de polyphenol oxidase i gcroí pailme trí speiceas atá tábhachtach ó thaobh tráchtála de. Bithcheimic Phlandaí 2011; 49:970e7.

49. Smith CJ, O'Hare KB, Allen JC. Déantar cítotocsaineacht roghnach hidroquinone do chealla díorthaithe melanocyte a idirghabháil trí ghníomhaíocht tyrosinase ach neamhspleách ar ábhar melanin. Cill Lí Res 1988; 1:386e9.

50. Solano F, Briganti S, Picardo M, Ghanem G. Gníomhairí hipopigmenting: athbhreithniú nuashonraithe ar ghnéithe bitheolaíocha, ceimiceacha agus cliniciúla. Res Cill Lí 2006; 19:550e71.

51. Stratigos AJ, Katsambas AD. An bhainistíocht is fearr ar neamhoird athchomhaireacha hyperpigmentation in othair a bhfuil craiceann dorcha orthu. Am J Clin Diairm 2004;5: 161e8.

52. Sugimoto K, Nomura K, Nishimura T, Kiso T, Sugimoto K, Kuriki T. Sintéisí a-arbutin-a-glycosides agus a n-éifeachtaí coisctheacha ar tyrosinase daonna. J Biosci Bioeng 2005; 99:272e6.

53. Sun W, Wendt M, Klebe G, Ro¨hm KH. Ar an léirmhíniú cinéitic chosc tyrosinase. J Einsím Inhib Med Chem 2014; 29:92e9.

54. Tripathi RK, Éisteacht VJ, Urabe K, Aroca P, Spritz RA. Mapáil só-ghineach ar ghníomhaíochtaí catalaíoch tyrosinase daonna. J Biol Ceimic 1992; 267: 23707e12.

Cuibhreannas 55.UniProt. UniProt: an bunachar eolais próitéin uilíoch. Aigéid Núicléacha Res 2017; 45:D158e69.

56. Riarachán Bia agus Drugaí SAM, An Roinn Sláinte agus Seirbhísí Daonna. Táirgí drugaí tuaradh craicinn lena n-úsáid thar an gcuntar ag an duine; riail bheartaithe. 71 Clár Cónaidhme 51146-5115521 (códaithe ag 21 CFR Cuid 310); 2006.

57. Vielhaber G, Schmaus G, Jacobs K, Franke H, Lange S, Herrmann M, et al. 4-(1-phenylmethyl)1,3-benzenediol: oibreán tintreach nua, an-éifeachtach. Int J Cosmet Sci 2007; 29:65e6. 58. Wendt M. Réasúnaíocht a dhearadh neuer tyrosinase-inhibitoren. Ph.D. tráchtas. Marburg, an Ghearmáin: Scoil Leighis Ollscoil Marburg; 2006.

59. Ying YH, Lee SJ, Chung MH, Ying HJ, Suk JL, Myung HC, et al. Cuireann Aloesin agus arbutin bac ar ghníomhaíocht tyrosinase go sineirgíoch trí mheicníocht gníomhaíochta eile. Arch Pharm Res 1999; 22: 232e6.

Tuilleadh eolais: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501