Comhchuingeacha Antashubstaintí Spreagtha Imdhíonachta Faightear Gníomhachtú Láidir Myeloid agus Díolúine Bhuan Frith-meall (Cuid 2)

Chun tuilleadh eolais a fháil plz déan teagmháildavid.wan@wecistanche.com

Plé:

Soláthraíonn na torthaí a chuirtear i láthair anseo fianaise an-láidir a thacaíonn le ISACanna mar theicneolaíocht nua le haghaidh imdhíonteiripe siadaí. Léirigh samhaltú in vitro ar ISACanna a gcumas chun APCanna myeloid daonna príomhúla a ghníomhachtú ar bhealach Fc R agus TLR-spleách agus chun tras-chur i láthair antaiginí a fheabhsú ag baint úsáide as an gcóras múnla OVA murine. Ní hamháin in vitro a breathnaíodh gníomhachtú trí mhóilín costimulatory CD40 a uasrialú ach chonacthas é freisin ar APCanna myeloid a chónaíonn siadaí i múnlaí siadaí xenograft agus singeneic araon. D'athraigh antashubstaint mhonaclónach spriocdhírithe i bhfoirm ISAC an toradh imdhíon-spreagthach agus an éifeachtúlacht fhoriomlán a bhfuiltear ag súil leis go hiondúil le hionsaitheoirí TLR. Léirigh comparáid idir seachadadh áitiúil trastuzumab in éineacht le T785 go seachadadh córasach an T785-ISAC gur éirigh leis an ISAC amháin an t-ualach siadaí a laghdú. Níor thug seachadadh áitiúil an mheascáin aon tairbhe don tsamhail xenograft siadaí HCC1954, le héifeachtaí inchomparáide le trastuzumab amháin. Tacaíonn an toradh seo go bhfuil ní amháin seachadadh áitiúil ach freisin seachadadh comhuaineach an oibreáin antashubstainte agus TLR riachtanach don éifeachtúlacht theiripeach a breathnaíodh leis an ISAC. Léirigh sonraí meicniúla a gineadh i múnla xenograft siadaí HCC1954 an riachtanas in vivo maidir le rannpháirtíocht Fc R agus rannpháirtíocht TLR le haghaidh éifeachtúlachta, toisc gur theip ar an ISAC TLRnull-ISAC agus Fc-neamhghníomhach fás siadaí a rialú. Ina theannta sin, ba é an toradh a bhí ar riar sistéamach ISACanna ná éifeachtúlacht fhrith-meall marthanach i francach HER2 móide samhlacha siadaí singeneic agus HER2 daonna móide seineagrafaíocht ailse chíche a bhí frithsheasmhach in aghaidh cóireála leis an antashubstaint neamhchomhchuingeach. Roghnaíodh HER2 mar an sprioc-antaigin do staidéir réamhchliniciúla in vivo toisc go bhfuil antasubstaintí spriocdhírithe HER nach bhfuil deartha chun an t-imdhíonacht a spreagadh chun tosaigh i dteiripe neoadjuvant, aidiúvach agus céadlíne d'othair a bhfuil ailse chíche chun cinn go háitiúil nó metastatach acu. Ní raibh an córas agus an t-antasubstaintí blocála coscairí cealla T ceadaithe ach ar a laghad éifeachtach sna hothair seo. D'fhéadfadh na hothair seo leas a bhaint as ISACanna a choinníonn feidhmiúlacht na n-antasubstaintí tuismitheora agus a chuireann acmhainneacht shuntasach imdhíon-spreagthach leis. Mar is amhlaidh le haon imdhíon-teiripe, tá an fhéidearthacht ann antasubstaintí frithdhrugaí a ghiniúint nó a dhianú agus, i gcás an ISAC, d’fhéadfadh sé a bheith ag brath ar imdhíon-ghineacht an mháthair-antasubstainte. Is fearr a dhéantar na measúnuithe seo go cliniciúil agus d’fhéadfadh trastuzumab a bheith an-oiriúnach le himscrúdú mar go bhfuil an ráta imdhíon-ghineachta tuairiscithe de Herceptin™ in othair níos lú ná 1 faoin gcéad . Tacaítear tuilleadh le sonraí in vivo a thaispeánann an gá atá le seachadadh comhuaineach an antashubstainte agus an aidiúvach ag obair a shonraíonn an chomharthaíocht intracellular a rialaíonn gníomhaíocht ISAC trí chomharthaíocht comhuaineach Fc R agus TLR. Cé go bhféadfadh staidéir bhreise dinimic chomharthaíochta ISAC infhéitheach a shoiléiriú tuilleadh, léiríonn na staidéir a ndéantar cur síos orthu anseo na buntáistí comharthaíochta féideartha a bhaineann le comhchuingeach agónaí TLR le hantasubstaint, mar a thugtar faoi deara go hiondúil nuair a théann antasubstaintí i ngleic le pataiginí le linn imdhíonacht chosanta. fostaíodh PBMCanna daonna chun tuilleadh a dhéanamhgníomhaíocht an mheascáin agus ISAC a thuiscint agus a idirdhealú. Léirigh na torthaí síniú méadaithe tar éis spreagadh ISAC i gcomparáid leis an síniú a fuarthas ó mheascán de chomhpháirteanna aonair, ag tacú tuilleadh leis an bhféidearthacht gníomhaíocht a fheabhsú trí chomhchuingeach ceimiceach an antashubstainte agus agónaí TLR. Cé nach féidir cumas sonrach TLR7 agus TLR8-iSACanna a thomhas ag baint úsáide as cealla tuairisceora HEK293, tá an léiriúde phosfarylation de chuid IRF spreagtha ag ISAC-7 le fios agónachas gníomhach TLR7/8, mar is eol go bhfuil IRF-7 le sruth ó chomharthaíocht faoi thiomáint TLR7 agus TLR8 MyD 30. Léiríonn na sonraí go bhfuil an Ní hamháin go n-éilíonn ISAC comharthaíocht mhéadaithe ar bhealaí canónacha a bhaineann le cosáin TLR agus Fc R ach laghdaíonn sé freisin an tairseach gníomhachtaithe pairwise a theastaíonn chun fosfarú próitéiní comharthaíochta iartheachtacha a spreagadh mar phróitéin ribosómach S6, príomh-rialtóir aistrithe próitéine sa chill. Scóir arda DREMI, tomhaiste go háirithei monocytes chomh maith le DCs, tacú leis an spleáchas láidir coinníollach a tharlódh de bharr spreagadh leis an ISAC nach bhfeictear leis an meascán. Féadfaidh an feiniméan seoa éascú trí athruithe intracellular go flúirseach, logánú, agus / nó earcú gabhdóirí laistigh den endsome, ach tá tuilleadh imscrúdaithe ag teastáil chun meicníocht cruinn a dhearbhú. Rud atá tábhachtach, d'aithin anailís DREMI caidrimh a bhí comhsheasmhach le comhpháirtithe comharthaíochta aitheanta mar thoradh ar spreagadh ISAC. De réir a coisctheach aitheantaról i gcomharthaíocht chanónach NF-κB 49, chonaiceamar spleáchas laghdaithe (.i. scór DREMI)idir pIRF7 agus inhibitor de kappa B (IκB) nuair a spreag cealla myeloid le ISAC. I dteannta a chéile, tacaíonn na torthaí seo le freagairt intracellular méadaithe agus marthanach trí mhóilíní conair aistrithe comhartha ábhartha le sruth ó spreagadh ISAC i dteannta leis an tsineirgíocht idir na cosáin chomharthaíochta a bhaineann le TLR agus FC R.

Cliceáil anseo chun tuilleadh a fhoghlaim faoi Cistanche

Léirigh ár dtorthaí go bhfuil idirghníomhaíochtaí feidhmiúla Fc-Fc R riachtanach do ghníomhachtú APCanna myeloid arna n-idirghabháil ag ISAC. Bhí an Dúchasach IgG1 Fc, a bhfuil an cleamhnas is airde aige maidir le gníomhachtú Fc Rs na n-isitíopaí IgG atá ann go nádúrtha, níos fearr ná isitíopaí IgG eile le cleamhnachtaí níos ísle do na Fc Rs a ghníomhachtú. Feabhsú breise ar an idirghníomhaíocht Fc-Fc R trí chumas feabhsaithe fucosilation agus laghdú ar an idirghníomhaíocht Fc-Fc R trí chumhacht laghdaithe glycosilation. De réir mar a bhíothas ag súil leis, bhí Syk ag teastáil le haghaidh comharthaíochta le sruth ó rannpháirtíocht Fc R chomh maith leis an agóntacht TLR ina dhiaidh sin chun go bhfaigheadh ​​ISACs an spreagadh uasta. Tá na torthaí seo tacaithe ag staidéir a thaispeánann feabhas suntasach ar spreagadh myeloid tar éis comh-spreagadh le IgG pláta-cheangailte agus an t-oibreoir TLR PAM3CSK 50. Tugann siad le fios freisin go ndéanfaí trasnascadh FC níos fairsinge, ar an spriocdhromchla cille nó laistigh den socrú pláta in vitro. , féadfaidh sé tarlú, nó go bhfuil líonraí comharthaíochta difreálach á bhfostú, tar éis spreagadh ISAC i gcomparáid le meascán na gcomhpháirteanna. Rinneadh aistriúchán ar an ardán ISAC in vivo a mheasúnú den chéad uair le HER2 daonna móide línte cille meall i lucha nach bhfuil cealla B, T, agus NK lánfheidhmeach acu. Go hiontach, bhí an ISAC trastuzumab i bhfad níos éifeachtaí ná trastuzumab ar fud siadaí iolracha le leibhéil éagsúla léiriú HER2. Ina theannta sin, léirigh na sonraí an spleáchas ar spriocdhíriú siadaí le haghaidh éifeachtaí frith-meall an ISAC, toisc nach raibh an t-isitíopa-ISAC in ann aischéimniú agus imréiteach siadaí a spreagadh. Cé gur léirigh samhaltú in vitro go raibh gá le gníomhaíocht TLR agus Fc R chun cumas ISAC a chumasú, níor éirigh le samhlacha den sórt sin an spleáchas ar spriocdhíriú antaiginí ISAC a thomhas. Ní dhearnadh aon difríocht a thomhas idir T785-ISACs spriocdhírithe agus isitíopa i dtástálacha pláta-bhunaithe le APCanna miailóideacha sláintiúla daonna arna gcomhshaothrúle cealla meall (sonraí nach bhfuil léirithe).D’fhéadfaí an easpa sprice-spleáchais arna thomhas in vitro a chur i leith fachtóirí iolracha: faightear amach go ndéanann APCanna myeloid Fc Rs ar dhromchla na cille a rialáil tar éis an chultúir in vitro, rud a d’fhéadfadh cur le cumas IgG intuaslagtha chun ceangal le Fc R, rud a fhágann go bhfuil comhartha aimplithe ón isitíopa ISAC.Ina theannta sin, an saothraithetá easpa IgG inghineach sa chóras agus fachtóirí séiream breise atá i láthair in vivo a d'fhéadfadh dul san iomaíocht le haghaidh Fc R in vivo agus éifeachtaí a mhaolaíonn a fheictear le ISAC isitíopa.Mar sin féin, léirigh na samhlacha in vivo go raibh an ISAC ag brath ar spriocdhíriú siadaí le haghaidh éifeachtúlacht frith-meall.Ní hamháin gur beag an tionchar a léirigh ISACanna isitíopa ar fhás siadaí i staidéir éifeachtúlachta, ach fuarthas amach freisin nach mbíonn aon tionchar acu ar an leibhéal géiniteach i siadaí, mar a léirítear i múnlaí siadaí xenograft agus singeneic.Chomh maith le héifeachtúlacht sprioc-chleithiúnach a léiriú in vivo, ghlac ainmhithe leis an T785-ISAC agus spreag sé meáchain caillteanas íosta, rud a léirigh comhartha beag d’éifeachtaí seach-sprioc agus teagmhais dhíobhálacha sa luch.Tacaíonn na sonraí seo tuilleadh le cumas ISAC a dhíríonn ar siadaí a sheachadtar go córasach chun taisteal chuig an siadaí agus freagairt frith-meall áitiúil pro-athlastach a spreagadh.

Léiríodh an tábhacht a bhaineann le héifeachtaí trí mheán cille myeloid i staidéir ar ídiú ceall, inar chuir ídiú clodronate fagaicítí le cumas an ISAC imréiteach siadaí a spreagadh.Is díol spéise é, cé gur tháinig siadaí siar ar dtús tar éis ídiú cealla dearfacha Gr1, d’fhás na siadaí amach ina dhiaidh sin.D'fhéadfadh gur tharla an feiniméan seo mar thoradh ar ídiú réamhtheachtaithe phagocyte mar monocytes, a d'fhéadfadh a bheith idirdhealú níos déanaí i gcealla phagocytic feidhmiúla agus aibí 51 .Fuarthas tuilleadh léargais mhóilíneacha agus cheallacha ar chainníochtú leibhéil mRNA agus athruithe tar éis cóireála ISAC.Daingníodh na sonraí seo tuilleadh le himdhíon-histochemistry chomh maith le cainníochtú próitéine, rud a léiríonn insíothlú cealla myeloid isteach sa meall feadhle táirgeadh cítocine pro-inflammatory TNF agus cemoattractants myeloid CCL2 (MCP-1) agus CCL4 (Mip1b).

Fíor 2: Faigheann ISACS patrúin comharthaíochta ar leith i APCanna myeloid.(ad) Spreagadh PBMC daonna úrscoite le 1 μM den rituximab-ISAC nó coibhéis equimolar den mheascán i láthair CD20 móide cealla meall Toledo ag 1:1 cóimheas ar feadh 15 nóiméad. (a) Tomhaiseadh an cóimheas arcsinh airmheánach de ISAC thar chomharthaíocht tar éis meascán a spreagadh le haghaidh fosfaiphróitéiní éagsúla mar a léirítear le léarscáil teasa, le buí ina tháscaire ar chomharthaíocht mhéadaithe agus gorm ina tháscaire ar chomhartha laghdaithe. (b) Ceapacha sreafa-chíteiméadrachta ionadaíocha do pIRF7 agus pRPS6 i monaicítí agus i dDCanna. (c)Ríomhadh an t-athrú comharthaíochta ionduchtaithe fillte mar an cóimheas arcsinh thar an rialú neamhspreagtha. Rinneadh fosfarylation IRF7 agus ERK1/2 a thomhas i monocytes agus CDCanna tar éis spreagadh ISAC nó meascán. Tagann na sonraí ó thurgnamh amháin le seisear deontóirí (meán agus SEM); *P<0.05,><0.01,><0.001,><0.0001. (d)="" representative="" drevi="" plots="" following="" dremi="" analysis="" with="" the="" area="" under="" the="" curve="" (auc)="" and="" inflection="" point="" (ip)="" denoted.="" drevi="" plots="" were="" visually="" inspected="" for="" curve="" fit="" and="" signal-to-noise,="" and="" inflection="" points="" were="" calculated="" for="" those="" with="" proper="" sigmoidal="" curve="" fits="" (n/a="" indicates="" no="" curve="">

Cuirtear na gabhdóirí do CCL2 agus CCL4, CCR2 agus CCR5 in iúl ar monocytes agus macrophages, faoi seach, ag tabhairt le tuiscint go bhféadfaí na cineálacha cille seo a earcú do siadaí atá cóireáilte ag ISAC.Ina theannta sin, rinneadh Cxcl9 agus Cxcl11 mRNA, a ionchódaíonn ceimicíní a bhaineann go sonrach le cealla T agus a chuirtear in iúl ag DCanna sa TME, a uasrialáil freisin trí chóireáil ISAC trastuzumab (Fíor Forlíontach 23) 52,53.Léirigh ISAC trastuzumab le hacmhainneacht mhéadaithe, ag baint úsáide as an agonist CL264, éifeachtúlacht fheabhsaithe i múnlaí siadaí ag léiriú níos lú HER2.Tá sé seo tábhachtach ós rud é go bhfuil roghanna cóireála níos teoranta ag othair a léiríonn a gcuid siadaí íseal HER2 agus nach bhfuil siad incháilithe le haghaidh trastuzumab nó teiripí eile ina bhfuil trastuzumab.Breathnaíodh meáchain caillteanas neamhbhuan de thart ar 5-10 faoin gcéad agus méadú ar an secretion sistéamach TNF in ainmhithe a cóireáladh leis na spriocdhírithe agus na isitíopa CL264-ISACs, rud a léiríonn éifeachtaí féideartha lasmuigh den sprioc chomh maith leis an bhfrithshubstaint láidir. gníomhaíocht meall a breathnaíodh.Tugann na sonraí comhchoiteanna a chuirtear i láthair sna samhlacha xenograft le tuiscint gur meicníocht éifeachtach é fagaicíotóis trí mheán an ISAC chun siadaí a dhíchur, ach d’fhéadfaí an mheicníocht seo a fheabhsú tar éis cur i láthair antigen neoantigens siadaí ar chealla T in óstaigh inmuno-inniúlachta.Chuige sin, rinneadh imscrúdú ar chumas ISACanna díolúine frith-meall a chur chun cinn i lucha de chineál fiáin le ISACanna frith-rHER2 in dhá cheann éagsúla.rHER2-samhlacha singéineacha a chur in iúl (MMC agus CT26-rHER2). Rinneadh measúnú ar T785 agus CL264 ina bhfuil ISACanna sa tsamhail MMC singéiseach i bhfianaise an léiriú ard antaigin de rHER2, toisc gur postáladh na ISACanna níos ísle agus níos airde araon a bheith éifeachtach le dlús ard antaigin ar an gcill meall. Bhí imréiteach iomlán siadaí mar thoradh ar an dá ISAC rHER2 in ainmhithe a raibh siadaí móra (350-950 mm3) orthu sa tsamhail MMC ach níor éirigh leis an antashubstaint neamhchomhchuingeach fás siadaí a rialú. Léirigh anailís ar leibhéil tras-scríbhinní mRNA sa mhúnla MMC athrú suntasach ar rialúchángo leor géinte ag 24 uair an chloig tar éis cóireála leis an rHER2 T785-ISAC spriocdhírithe i gcoibhneas leis an antashubstaint rHER2 nó ISAC isitíopa, lena n-áirítear laistigh de ghéinte a bhfuil baint acu le bitheolaíocht ceall mialóideach, bitheolaíocht TLR, agus freagairtí imdhíonachta oiriúnaitheacha. Chonaic imdhíon-histochemistry insíothluithe méadaithe de chealla léirithe CD11c- agus F4/80-, cosúil leis an treocht a fheictear i múnla siadaí xenograft HCC1954. Ina theannta sin, breathnaíodh insíothlú cille CD8 T agimdhíonhistochemistry, ag tacú le giniúint freagra imdhíonachta oiriúnaitheach tar éis cóireála ISAC.

Chomh maith leis an tábhacht léirithe a bhaineann le fagaicítí sa tsamhail xenograft, léirigh staidéir ídiú i múnla meall syngeneic MMC spleáchas láidir ar fagaicítí, toisc gur chuir ídiú ag baint úsáide as liposomes clodronate-luchtaithe stop le héifeachtaí frith-meall ISAC-idirghabhála. Ina theannta sin, léirigh na staidéir singineacha ról ríthábhachtach do chealla T in éifeachtúlacht ISAC. Bhí imréiteach siadaí faoi thiomáint ISAC ag brath go mór ar ghníomhaíocht ceall CD8 T, toisc gur chuir ídiú cealla CD8 T bac ar éifeachtúlacht frith-meall. Tugann na sonraí le fios go bhfuil gníomhaíocht cealla T á thiomáint trí ghníomhachtú TLR-idirghabhála cealla myeloid spreagtha ag ISAC. Tacaíonn ceanglas den sórt sin le haghaidh cealla T, is dócha a bhaineann le léiriú antaiginí a bhaineann le siadaí ag cealla myeloid arna spreagadh ag ISAC, gur dócha go ndéanfaidh ISACanna idirghabháil ar a ngníomhaíocht frith-meall trí dhá mheicníocht ar a laghad: fagaicíotóis agus cur i láthair antaiginí. Cé go soláthraíonn fagaicítí freagairt luath frith-meall tar éis cóireála ISAC, soláthraíonn príomhú antaiginí cealla T imréiteach siadaí agus éifeachtaí marthanacha arna dtomhas i múnlaí atá lán-inniúil. Bheadh ​​an meascán seo thar a bheith inmhianaithe d'othair ailse mar d'fhéadfadh díolúine frith-meall láidir agus marthanach a bheith mar thoradh ar chóireáil ISAC. 264-Dúshlánaíodh cóireáil ISAC, tar éis 30 lá de bheith saor ó shíol, agus léirigh an neamh-rHER2 líne chill tuismitheora CT26. rHER2-Cosnaíodh ainmhithe leigheasta CT26 ón dúshlán le CT26 ach ní raibh na hainmhithe naive siadaí in ann fás siadaí a dhiúltú. Ina theannta sin, chun a thaispeáint go raibh cosaint shonrach ag baint le líne cille meall CT26, rinneadh 4T1 a ionchlannú go comhuaineach ar thaobh contralateral lucha dúshlánacha CT26 tuismitheora. Cé gur theip ar siadaí CT26 fás i lucha a leigheas-CT26, bhí fás siadaí 4T1 neamhualaithe agus mar sin cuireann sé fianaise ar fáil go bhfuil an díolúine sainiúil don antigen agus ag brath ar an bhfreagairt imdhíonachta oiriúnaitheach. Ina theannta sin, tugann na staidéir seo le tuiscint go n-idirghabháil ISACanna siadaí-spriocdhírithe cuimhne imdhíoneolaíoch ní amháin don antaigin siadaí ar díríodh orthu ar dtús ach freisin le hantaiginí nach bhfuiltear ag díriú orthu. Tugann na sonraí seo le fios freisin go bhféadfadh antaiginí siadaí-ghaolmhara a bheith i gceist le cealla myeloid a spreagann freagraí breise CTL. Léiríonn impleachtaí na dtorthaí seo, fiú má dhéantar an antaigin siadaí spriocdhírithe a íosrialáil ina dhiaidh sin nó mura bhfuil sé in ann ceangal a dhéanamh leis an ISAC, go bhfuil cuimhne imdhíoneolaíoch agairt cheana féin agus go bhfuil sé in ann freagairt marthanach a choinneáil. Níl an freagra seoteoranta don antaigin atá á díriú ag an ISAC ach freisin d'antaiginí breise, neamhaitheanta, siadaí-léirithe.Nuair a chuirtear le chéile iad, léiríonn na sonraí seo go n-aimsíonn ISACanna bitheolaíocht ar leith go cáilíochtúil agus go cainníochtúil a bhaineann le gníomhachtú ceallach agus cur i láthair antaiginí, iomadú ceall T, agus imdhíonacht mharthanach frith-meall.

Methods and Materials: Antibody Conjugation & Characterization For conjugation of adjuvants to the antibody, adjuvants were first synthesized to include a linker flanked by a reactive group. Conjugates produced using two-step methods were first synthesized through the modification of mAb lysine residues with a heterobifunctional crosslinker SATA. Deprotection of the acetylated thiol exposed a reactive thiol which was then reacted at room temperature for 2-4 hours with an adjuvant-linker flanked by a thio-reactive maleimide. For constructs produced using a single-step conjugation method, TFP esters were then conjugated to an IgG1 antibody. The TFP esters were dissolved in anhydrous DMSO to make a 20 mM stock solution and 5-10 molar equivalents (relative to the antibody) were added to the IgG antibody at 10 mg/mL in PBS. The conjugation reaction was performed at 4-40°C for 2-12 hours. The resulting immunoconjugates were buffer exchanged into PBS (pH 7.4) through desalting (Zeba Columns, Thermo Fisher Scientific) or dialysis to remove excess small molecular weight impurities. The final protein concentration was determined by measuring the absorbance at 280 nm on a Nanodrop 1000 spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific). The yields were >75 faoin gcéad bunaithe ar phróitéin aisghafa. D'aimsigh anailís CSS láithreacht chomhiomlán íosta agus socraíodh DAR trí anailís LC/MS. Rinneadh na ISACanna íonaithe a scagadh trí 0.2 μm scagaire steiriúla agus a stóráil ag −20 céim go dtí úsáid. agus leanadh prótacail díoltóirí le haghaidh iomadú ceallach agus turgnamh. Go hachomair, méadaíodh cealla go 80-85 faoin gcéad cumar ag 5 faoin gcéad CO2 i DMEM arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad FBS, Zeocin, agus Blasticidin. Cuireadh na cealla ansin i 96-plátaí tobair cothroma ag cealla 4x104/tobar le foshraith ina raibh meán braite HEK agus móilíní imdhíonspreagthacha. Rinneadh an ghníomhaíocht a thomhas ag úsáid léitheoir pláta ag 620-655 tonnfhad 620-655 nm wavelength.Biacore AnalysisHis-clibáilte Fc Gáma Glacadóir (FCGR) próitéiní a fuarthas ó R&D Systems (FCGR1 (CD64, cat# 1257-FC{{23}) }), FCGR2A (CD32a, cat# 1257-FC-050), FCGR2B (CD32b, cat# 1875-FC-050), FCGR3A (CD16a, cat# {{34 }}FC-050) Rinneadh anailís cheangailteach ar ionstraim Biacore T200 i HBS-EP móide maolán (GE BR100669) ag baint úsáide as sliseanna CM5 (GE BR100530) ina raibh antashubstaint díluailithe frith-HIS (HIS Capture kit, GE 28995056 ) Tá Rituximab nó Rituximab-ISAC tar éis instealladh a dhéanamh thar sreabhchealla ina bhfuil FCGRanna gafa nó frith-Antasubstaint dromchla tagartha amháin. Rinneadh tagairt faoi dhó ar na sonraí leis anfrith-A dhromchla agus instealladh maolánach amháin. Baineadh úsáid as modh toirtmheasctha cinéiteach agus athghiníodh dromchlaí idir timthriallta trí instealladh de ghlicín 10 mM, pH 1.5. Bhí na sonraí oiriúnach ag baint úsáide as bogearraí meastóireachta Biacore T200 (V3.1) ag baint úsáide as feistiú cinéiteach (1:1) le haghaidh FCGR1 agus FCGR3A (6 rith ar an meán) agus cleamhnas seasta (1: 1) le haghaidh FCGR2A agus FCGR2B (3 rith ar an meán). ).

Human Myeloid APC Isolation Myeloid APCs, which predominantly consisted of monocytes (>95%), were isolated from the whole blood of healthy donors (Stanford Blood Center) by density gradient centrifugation using a RosetteSep Human Monocyte Enrichment Cocktail (Stem Cell Technologies). Myeloid APCs were further isolated using a negative selection Human Monocyte Enrichment Kit without CD16 depletion (Stem Cell Technologies) to a final purity of >90 faoin gcéad mar a chinntear ag cíteiméadracht sreafa bunaithe ar CD14, CD16, CD11c, agus HLA-DR expression.Toledo Tumor Cell PreparationToledo cealla (ATCC) saothraithe i meáin a mhol an díoltóir agus a chothabháil ag dlús cille díoltóir-molta (ATCC). Baineadh cealla as an gcultúr, nite, agus athchuireadh i PBS le 2 faoin gcéad FBS agus 2 mM EDTA ag 1-10x106 cealla/mL. I gcásanna áirithe, rinneadh cealla a lipéadú ina dhiaidh sin le 2 μM CFSE ar feadh 2 nóiméad agus ansin nite uair amháin le RPMI-1640 (Lonza) arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad FBS (Atlanta Biologicals) agus 100 U/mL Pen/Strep (Lonza). Socraíodh cealla ansin i bparaformaildéad 2 faoin gcéad agus nite trí huaire le PBS sula n-úsáidfí a thuilleadh iad.Plátáladh Measúnachtaí Gníomhachtaithe Ceallacha PBMCanna nó monaicítí scoite ag cealla 3x105 nó 2x105 in aghaidh an tobair, faoi seach, i bplátaí tobair, 96-bun comhréidh in IMDM. arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad FBS (Atlanta Biologicals), 1 mM Sóidiam Pyruvate (Lonza), 100 μM aimínaigéid neamhriachtanacha (Lonza), agus 100 U/mL Pen/Strep (Lonza). Le haghaidh turgnaimh chomhchultúr monocyte agus siadaí, saothraíodh monocytes le cealla siadaí allogeneic seasta ag cóimheas 3 go 1. Goradh cealla ina dhiaidh sin le gníomhairí imdhíonspreagthacha nó rialuithe ar feadh 18-36 uair an chloig ag 37 céim le 10 faoin gcéad CO2. Rinneadh gníomhachtú ceallach a thomhas trí léiriú dromchla cille marcóirí gníomhachtaithe agus táirgeadh cítocín. Rinneadh leibhéil slonn marcóra dromchla a thomhas de réir cíteiméadracht sreafa le antasubstaintí in aghaidh CD40 (5C3, BD), CD86 (IT2.2, BD), HLA-DR (L243, BD), agus CD16 (3G8, BD), CD14 (MΦP9, BD), agus CD123 (7G3, BD). Rinneadh anailís ar PBMCanna de réir cíteiméadracht sreafa le antasubstaintí i gcoinne na marcóirí gníomhachtaithe thuasluaite chomh maith le marcóirí lineage CD19 (HIB19, BD), CD56 (B159, BD), CD3 (SK7, BD), CD4 (OKT4, BioLegend), CD8 (SK1, BD) agus CD69 (FN50, BD). I ngach cás, bailíodh forshnaidhm saothrán cille tar éis gor 18 nó 36-uair an chloig, agus tomhaiseadh táirgeadh cíteicnín ag baint úsáide as trealamh eagair coirníní cítocín (Citeal Cíteicne Athlasta Daonna, Bitheolaíochtaí BD) agus ELISA (trealamh ELISA Daonna TNF, eBitheolaíochtaí) .Mass CytometryPBMCs leithlisíodh ó fhuil shláintiúil deontóra agus spreagtar iad le ISAC, meascán antashubstainte agus aidiúvach, nó gan aon spreagadh ar feadh 5-15 nóiméad ag 37 céim . Tar éis spreagadh, ceallasocraíodh iad trí 16 faoin gcéad PFA (Eolaíochtaí micreascópachta Leictreonaí) a chur le tiúchan deiridh de 1.6 faoin gcéad agus gortha ar feadh 10 nóiméad ag teocht an tseomra (RT). Rinneadh cealla seasta a ní le meán staining cille (CSM; PBS le 0.5 faoin gcéad BSA agus 0.02 faoin gcéad azide sóidiam (gach Sigma) agus barrachóid ag baint úsáide as cur chuige pallaidiam-bhunaithe mar a thuairiscítear roimhe seo 54. Cuireadh samplaí barcoded le chéile i gceann amháin). sampla ilchodach le haghaidh staining dromchla.

Rinneadh smálú dromchla trí antasubstaintí (Tábla Forlíontach 2) a chur le CSM agus gor ar feadh 3{{10}} nóiméad ag RT. Ceannaíodh antasubstaintí frith-dhaonna comhchuingeacha (Fluidigm) nó comhchuingeach le iseatóip miotail throma ag baint úsáide as trealamh lipéadaithe antasubstainte MaxPar X8 (Fluidigm) de réir mholtaí an déantóra. Niteadh cealla dromchla-dhaite uair amháin i CSM agus permeabilized le MeOH ar feadh 10 nóiméad ar oighear. Nitear cealla tréscaoilteacha faoi dhó le CSM agus cuireadh antasubstaintí i gcoinne antaiginí intracellular ar feadh 30 nóiméad ag RT. Nigh cealla le CSM agus ar deireadh athshuíomh i réiteach intercalation (1.6 faoin gcéad PFA i PBS, 0.02 faoin gcéad saponin (Sigma), agus 0.5 μM iridium-intercalator (Fluidigm))) thar oíche ag 4 céim . Sula bhfuarthas sonraí, nite samplaí uair amháin sa CSM agus faoi dhó in ddH2O. Scagadh na samplaí go léir trí strainer cille (Gorm) agus athchuireadh iad ag cealla 1x106/mL i ddH2O arna fhorlíonadh le coirníní calabraithe ceithre eilimint 1x EQ (Fluidigm) agus fuarthas sonraí ar chíteiméadar mais CyTOF2 (Fluidigm). Rinneadh measúnú ar fhreagraí comharthaíochta agus úsáid á baint as feidhmiú SPADE laistigh de Citibank 29. Ritheadh ​​anailísí ar na cillíní go léir (gan aon íosshampláil), ag roghnú líon sonraithe na gcnuasach agus ag baint úsáide as na marcóirí dromchla ábhartha go léir ach níor úsáideadh aon mharcóirí incheallacha le haghaidh cnuasaithe. Rinneadh anótáil ar línte cille imdhíonachta bunaithe ar a bpatrúin slonn próitéine dromchla ardtoiseach. Rinneadh anailís staitistiúil in R, timpeallacht bogearraí staidrimh foinse oscailte. Laistigh de gach fo-thacar cille, grúpa cóireála, agus deontóra, ríomhadh meánathrú fillte don fiche marcóir próitéine fosfaite seo a leanas: p-Src, p-STAT5, p-cMET, p-AKT, p-MAPKAPK2, p-SHP2, p -SLP76, p-IRF-7, p-ZAP70/SYK, p-CREB, p-NFKB, p-PI3K, IKB (iomlán), p-PLCG1, p-ERK1/2, p-p38, lch -BTK/ITK, p-S6, p-STAT3, agus p-JNK/SAPK. Rinneadh an meánathrú fillte a ualú de réir líon iomlán na gceall i ngach braisle, mar a shainmhínítear tar éis braisliú SPADE. Rinneadh t-tástálacha péireáilte chun meastachán a dhéanamh ar an difríocht sa mheánathrú fillte, agus chun an hipitéis nialasach a thástáil nach raibh aon difríocht i meánathrú gach marcóra trasna coinníollacha cóireála agus rialaithe.

Nós Imeachta Turgnamhach Múnla Tumor Xenograft Ceannaíodh línte cille ó ATCC (NCI-N87, HCC1954, agus COLO205) nó AddexBio (JIMT-1) agus fásadh iad de réir threoirlínte an déantóra. Baineadh cealla nuair a shroich siad 80-90 faoin gcéad comhlí trí dhícheangal le Accutase (Stemcell), nite le PBS, athchuireadh ag 40 x 106 cill/mL i PBS, agus cuireadh ar oighear iad ar feadh dhá uair an chloig ar a mhéad. Díreach roimh ionchlannú, rinneadh cealla ar fuaidreamh a mheascadh le toirt cothrom de Cultrex PathClear BME, Cineál 3 (Córais T&F), agus 100 μL den mheascán (2 x 106 cill) ionchlannú go subcutaneously isteach sa chliath dheis de 6-8-seachtain. - lucha ban d’aois mar seo a leanas: ionchlannaíodh cealla NCI-N87 agus COLO205 i lucha NSG (Saotharlann Jackson), HCC1954 agus JIMT-1 ionchlannú i gcillíní cnag dúbailte Rag2/IL2rg (Taconic), agus HCC1954 (le measúnú le Ionchlannaíodh T785-ISAC) in NSG nólucha SCID/beige (Jackson Laboratory nó Taconic and Envigo). Taifeadadh méid meall dhá uair sa tseachtain agus rinneadh é a mheas ag baint úsáide as an bhfoirmle seo a leanas: (fad x leithead2)/2. Nuair a shroich siad 50-100 mm3, de ghnáth laistigh de sheachtain amháin ó ionchlannú siadaí, cuireadh tús le cóireálacha. Rinneadh lucha a randamach de réir méid siadaí i ngrúpaí cóireála roimh an gcóireáil tosaigh. Ullmhaíodh Trastuzumab (EirGenix; EG12014), Trastuzumab ISAC, nó Isotype ISAC i PBS ag 1 mg/mL agus riaradh ag 5 mg/kg intraperitoneally gach cúig lá (Q5D) ar feadh sé dáileog san iomlán. Eotanaíodh lucha a sháraigh siadaí 2000 mm3.

Nós Imeachta Turgnamhach um Ídiú Ceallacha HCC1954 agus MMC Chun macrophages agus cealla phagocytic eile a ídiú, cuireadh cóireáil ar lucha a raibh HCC1954 nó siadaí MMC orthu trí instealladh intraperitoneal dhá lá roimh an gcóireáil tosaigh ISAC le liposomes clodronate nó liposomes rialaithe nach bhfuil clodronate iontu mar rialú diúltach (Encapsula, CLD-8901) agus ansin cóireáilte faoi dhó sa tseachtain ar feadh trí seachtaine san iomlán. Chun neodrófilí a ídiú, cuireadh cóireáil ar lucha le hantashubstaintí ídithe 1A8 chun Ly6G móide neodrófail amháin a ídiú (Catalog BioXCell # BE0075-1) nó RB{7}}C5 chun cealla Gr1 móide a ídiú, lena n-áirítear Ly6G móide neodrófilí agus Ly6C móide cealla (Catalóg BioXCell # BE0075) nó rialuithe isitíopa 2A3 agus LTF-2 (Catalog BioXCell # BE0089 agus BE0090, faoi seach) dhá lá roimh an gcóireáil tosaigh ISAC, ansin cóireáilte dhá uair sa tseachtain ar feadh trí seachtaine. Deimhníodh ídiú na gceall san fhuil le cíteiméadracht sreafa (Fíor Forlíontach 24). Ionchlannaíodh Tumor Cytokine & MRNA Analysis Procedures mar a thuairiscítear roimhe seo agus bailíodh iad le haghaidh anailíse ag na pointí ama a léiríodh i ndiaidh na cóireála. Maidir le hanailís imdhíon-histochemistry agus mRNA, roinntear siadaí, agus rinneadh anailís ar mRNA le painéal próifílithe imdhíonachta uile-ailse luiche NanoString. Rinneadh anailís sonraí le nSolver Advanced Analysis Software de réir mholtaí an déantóra. Tarraingíodh ceapacha bolcáin leis an bpacáiste ggplot2 i R. Chun lysates siadaí a fháil le haghaidh anailíse cítocine, coinníodh blúirí siadaí i maolán réamhdhéanta (Táibléad Inhibitor Pierce Protease 1 (Thermo Fisher, Catalóg #A32965) tuaslagtha i 20 mL de T- Imoibrí Eastóscadh Próitéine Fíocháin PER, Thermo Fisher, Catalóg #78510) i Feadáin GentleMACS M (Miltenyi, Catalóg #{130-093-236) díreach tar éis necropsy. Ansin dícheangail samplaí meall ag baint úsáide as Dissociator Octo GentleMACS. Caitheadh ​​na samplaí go léir síos ar feadh 5 nóiméad ag 300g ina dhiaidh sin. Bailíodh súithíní ansin isteach i bhfeadáin micreafuge agus sníomhadh síos iad arís le micrealártheifneoir. Rinne MSD anailís cíteicne ar sháithigh. Rinneadh immunohistochemistry ag baint úsáide as hematoxylin agus eosin chun ailtireacht fíocháin a aithint, chomh maith le haghaidh na marcóirí seo a leanas nuair a léirítear i staidéir: CD11c (CST Catalog #87585) agus CD8 (CST Catalog #98941).

Fíor 4: T785-Faigheann ISACs imdhíonacht láidir frith-meall i múnlaí xenograft siadaí atá resistant le trastuzumab. – 75 mm3. (a) Cuireadh cóireáil ar lucha uair amháin trí in-peritoneal (IP) le 5 mg/kg trastuzumab T785-ISAC nó trastuzumab, nó le dáileoga coibhéiseach molar le meascán de trastuzumab agus T785 chuig an ISAC trí instealladh intratumoral (IT). Tagann na sonraí ó thurgnamh amháin le n=3-5 lucha in aghaidh an ghrúpa. (b) Cuireadh cóireáil ar lucha trí instealladh intraperitoneal le 5 mg/kg de trastuzumab, trastuzumab-ISAC,rituximab, nó rituximab-ISAC Q5DX6 (n= 5 lucha in aghaidh an ghrúpa). (c) Cuireadh cóireáil ar lucha trí instealladh ion-peritoneal le 5 mg/kg de trastuzumab, trastuzumab T785-ISAC, trastuzumab N297A-ISAC, nó lucha trastuzumab TLRnull-ISAC (n=5 in aghaidh an ghrúpa). (d) Ionchlannaíodh cealla meall HCC1954 i lucha SCID/Beige, agus ídíodh cealla spéise roimh agus le linn cóireáil trastuzumab T785-ISAC (5 mg/kg, Q5DX3) ag baint úsáide as antashubstaint frith-Ly6G (rialú francach IgG2a) , liposomes clodronate (liposóim rialaithe mar rialú) nó antasubstaint frith-Gr1 (rialú francach IgG2b). Tagann na sonraí ó thurgnamh amháin le n=4-6 lucha in aghaidh an ghrúpa. (e, f) Ionchlannaíodh lucha dúbailte NSG nó Rag2/IL2rg le líne chill siadaí JIMT-1 agus rinneadh iad randamach nuair a shroich an toirt siadaí 50 – 75 mm3. Cóireáladh lucha ina dhiaidh sin leis na cóireálacha léirithe ag 5 mg/kg intraperitoneally le minicíocht (e) Q5DX6nó (f) Q5DX5 (n=3-6 lucha in aghaidh an ghrúpa). (bf) Tá na sonraí a thaispeántar ionadaíoch do dhá thurgnamh ar a laghad. (gj) Baineadh siadaí HCC-1954 ó chohóirt lucha ag na pointí ama sonraithe tar éis cóireála le dáileog amháin de 5 mg/kg ISAC nó antasubstaintí rialaithe. Próiseáladh siadaí le haghaidh anailíse cíteaiméadrachta sreafa, cainníochtú mRNA NanoString, nó formailin-seasta agus paraifín-leabaithe le haghaidh imdhíon-histochemistry. (g) Léiríonn ceapacha bolcáin athrú log2 huaire ar shloinneadh géine i siadaí rialaithe isitíopa cóireáilte vs siadaí arna dtomhas ag NanoString ag 24 uair an chloig (n=5 lucha in aghaidh an ghrúpa). Taispeántar athruithe le p-luach coigeartaithe < 0.05="" i="" dearg.="" (h)="" scóir="" sínithe="" géine="" arna="" chainníochtú="" ag="" nsolver="" advanced="" analysis="" pathway="" scór="" le="" haghaidh="" siadaí="" arna="" anailísiú="" 24="" uair="" tar="" éis="" cóireála="" (n="5" lucha="" in="" aghaidh="" an="" ghrúpa).="" (i)="" anailís="" cíteaiméadrachta="" sreafa="" ar="" chomhdhéanamh="" ceallacha="" siadaí="" 24="" uair="" agus="" 7="" lá="" tar="" éis="" cóireála="" (n="2-4" lucha="" in="" aghaidh="" an="" ghrúpa).="" tá="" na="" sonraí="" ionadaíoch="" ar="" 2="" thurgnamh="" ar="" a="" laghad.="" (j)="" íomhánna="" ionadaíocha="" chomh="" maith="" le="" cainníochtú="" f4/80="" agus="" cd11c="" ihc="" de="" thumaí="" a="" baineadh="" 9="" lá="" tar="" éis="" gach="" cóireála="" a="" shonraítear.="" tá="" barraí="" scála="" 50="" μm.="" (aj)="" taispeántar="" sonraí="" mar="" mheán="" le="" sem="" agus="" taispeántar="" staitisticí="" le=""><0.05,><0.01,><0.001,><>

Nós Imeachta Turgnamhach Samhail Tumor Syngeneic Fuarthas ceallaMMC ón Dr Disis (Ollscoil Washington) agus saothraíodh iad i RPMI 1640 arna fhorlíonadh le 20 faoin gcéad FBS, 1 faoin gcéad peinicillin-streptomycin, agus L-glutamine ag 37 céim agus 5 faoin gcéad CO2 go dtí {{8 }} faoin gcéad comhluail. Fásadh cealla CT26 (ATCC) a aistríodh go próitéin HER2 francach sainráite go cobhsaí i RPMI 1640 arna fhorlíonadh le 10 faoin gcéad FBS agus 600 ug/mL antaibheathach roghnach G418 (Thermo) ag 37 céim agus 5 faoin gcéad CO2 go dtí 80-90 faoin gcéad comhlí. Chomh luath agus a bhí a dhóthain comhluail acu, baineadh cealla trí dheighilt le Accutase (Stemcell) agus nigh le PBS. Athchuireadh cealla bainte ag 20 x 106 cill/mL (MMC)nó 5 x 106 cill/mL (CT26-rHER2) i PBS agus coinnithe ag 4 chéim /ar oighear go dtí go n-úsáidfear iad. 100 μLionchlannaíodh cealla ar fuaidreamh go fochraicneach i 6-8-FVB/N-TgN(MMTV-Erbb2)NK1Mul/Jmice seachtaine d’aois (múnla MMC, Saotharlann Jackson) nó i lucha baineanna BALB/c (samhail CT26, The Jackson Laboratory) . Rinneadh méid meall a thomhas agus a thaifeadadh faoi dhóin aghaidh na seachtaine ar feadh ré an staidéir. Measadh toirt meall ag baint úsáide as an bhfoirmle seo a leanas: (fad x leithead2)/2. Nuair a shroich siad 200-500 mm3 (MMC) nó 50-100 mm3 (CT26-rHER2), de ghnáth laistigh de sheachtain amháin ó ionchlannú siadaí, cuireadh tús le cóireálacha. Rinneadh lucha a randamach de réir méid siadaí i ngrúpaí cóireála roimh thús tosaighcóireáil. Rinneadh an frith-rHER2 mAb (BioXCell; 7.16.4) nó an frith-rHER2-ISAC a riar go hidirpheiritónach (minicíocht mar a léirítear i bhfíorscéalta) ar feadh ré an staidéir.Eotanaíodh lucha a sháraigh siadaí 2000 mm3. Rinneadh ídiú na gcealla T a mheasin ainmhithe a úsáideann antasubstaintí CD4 (BioXCell; GK1.5) nó CD8 (BioXCell; YTS 169.4) a ídíonn ceall. Cuireadh tús le hídiú roimh ionchlannú siadaí agus leanadh ar aghaidh le riar 200 ug in aghaidh na seachtaine in aghaidh an antashubstainte faoi dhó. Le haghaidh athdhúshlánú siadaí, ionchlannaíodh línte cille CT26 agus 4T1 ag 5 x 106 ceall in aghaidh an líne meall, agus cuireadh dúshlán ar lucha naive meall leis an dá líne cille mar rialuithe.

Ábhar ForlíontachDéan tagairt don leagan Gréasáin ar PubMed Central le haghaidh ábhar forlíontach.Buíochas:Is mian leis na húdair buíochas a ghabháil le P. Basto, NE Reticker-Flynn, T. Prestwood, agus B. Mallet as a bplé cabhrach. Gabhaimid buíochas freisin le Croí-Cítiméadracht Sreabhadh Lárionad Fola Stanford, go sonrach L. Tolentino, O. Choi, agus N.Wu. Gabhaimid ár mbuíochas freisin leis an Dr. Mary L. (Nora) Disis agus Denise Cecil ó Ollscoil Washington a sholáthair an líne ceall meall MMC.

Maoiniú: Thacaigh Comhaltacht Stanford BioX Bowes le SE Ackerman.

Tagairtí:1. Davis TA et al. Teiripe antashubstaint mhonaclónach frith-CD20 rituximab i liomfóma neamh-Hodgkin: sábháilteacht agus éifeachtúlacht na hathchóireála. J Clin Oncol 18, 3135–3143, doi:10.1200/JCO.2000.18.17.3135 (2000). [PubMed: 10963642]2. Grillo-Lopez AJ et al. Rituximab: an chéad antasubstaint mhonaclónach ceadaithe chun cóireáil a dhéanamh ar liomfóma. Curr Pharm Biotechnol 1, 1–9 (2000). [PubMed: 11467356]3. Dúirt Lizotte PH et al. Nochtann próifíliú ilpharaiméadrach ar ailsí scamhóg neamh-bheagchealla imdhíonfheinitíopaí ar leith. JCI Insight 1, e89014, doi:10.1172/jci.insight.89014 (2016). [PubMed: 27699239]4. Spranger S et al. Ní mhíníonn dlús antaiginí imdhíon-ghineacha láithreacht nó neamhláithreacht micri-thimpeallacht siadaí T-chealla i melanóma. Proc Natl Acad Sci USA 113, E7759– E7768, doi:10.1073/pnas.1609376113 (2016). [PubMed: 27837020]5. Beatty GL & Gladney WL Meicníochtaí éalaithe imdhíonachta mar threoir d'imdhíonteiripe ailse. Clin Cancer Res 21, 687–692, doi:10.1158/1078-0432.CCR-14-1860 (2015). [PubMed: 25501578]6. Fridman WH, Leathanaigh F, Salutes-Fridman C & Galon J An comhthéacs imdhíonachta i siadaí daonna: tionchar ar thoradh cliniciúil. Nat Rev Cancer 12, 298–306, doi:10.1038/nrc3245 (2012). [PubMed: 22419253]

7. Galon J & Bruni D Cur chuige chun siadaí imdhíonachta te, athraithe agus fuara a chóireáil le teaglaim in-imdhíonteiripe. Nat Rev Drug Diosca 18, 197–218, doi:10.1038/s41573-018-0007-y (2019). [PubMed: 30610226]8. Gabrilovich DI, Ostrand-Rosenberg S & Bronte V Rialúchán comhordaithe ar chealla myeloid ag siadaí. Nat Rev Immunol 12, 253–268, doi:10.1038/nri3175 (2012). [PubMed: 22437938]9. Eisiamh cille T Joyce JA & Fearon DT, pribhléid imdhíonachta, agus micri-thimpeallacht an siadaí. Eolaíocht 348, 74–80, doi:10.1126/science.aaa6204 (2015). [PubMed: 25838376]10.Carmi Y et al. Is seicphointí intreacha DC iad Akt agus SHP-1 le haghaidh imdhíonacht siadaí. JCI Insight 1, e89020, doi:10.1172/jci.insight.89020 (2016). [PubMed: 27812544]11. Carmi Y et al. IgG allogeneic in éineacht le spreagthaí cille dendritic a spreagann imdhíonacht T-chealla frith-tumor. Nádúr 521, 99–104, doi:10.1038/nature14424 (2015). [PubMed: 25924063]12. Bhí Allen BM et al. Mífheidhmiú sistéamach agus plaisteacht na micri-thimpeallachta imdhíonachta i múnlaí ailse. Nat Med 26, 1125–1134, doi:10.1038/s41591-020-0892-6 (2020). [PubMed: 32451499]13. Sagiv-Barfi I et al. Díothú urchóideacht spontáineach trí imdhíonteiripe áitiúil. Sci Transl Med 10, doi:10.1126/scitranslmed.aan4488 (2018).14. Tá Spitzer MH et al. Tá Díolúine Sistéamach ag Teastáil le haghaidh Imdhíonteiripe Éifeachtach Ailse. Cill 168, 487–502 e415, doi:10.1016/j.cell.2016.12.022 (2017). [PubMed: 28111070]15. Milhem Mohammed M., Theresa Medina RG, Kirkwood John M., Buchbinder Elizabeth, Mehmi Inderjit, Niu Jiaxin, Shaheen Montaser, Meáchan Ryan, Margolin Kim, Luke Jason, Morris Aaron, Mauro David, Krieg Arthur M., Ribas Antoni CT{ {77}}Is féidir le gníomhaí gabhdóra intratumóra cosúil le dola (TLR9), CMP-001, i gcomhar le pembrolizumab, an fhriotaíocht ar chosc PD-1 a aisiompú i dtriail chéim 1b in ábhair a bhfuil meileanóma ard orthu (Cruinniú Bliantúil AACR 2018, 2018).16. Rook AH An áilleacht agonists TLR do CTCL. Fuil 119, 321–322, doi:10.1182/ fuil-2011-11-391243 (2012). [PubMed: 22247516]17. Singh M et al. Díolúine éifeachtach dúchasach agus oiriúnaitheach in aghaidh meileanóma trí ghníomhachtú logánta TLR7/8. J Immunol 193, 4722–4731, doi:10.4049/J Immunol.1401160 (2014). [PubMed:25252955]18. Zhao BG, Vasilakos JP, Tross D, Smirnov D & Klinman DM Cuireann teiripe teaglaim atá dírithe ar ghabhdóirí cosúil le dola 7, 8, agus 9 deireadh le tumaí móra bunaithe. J Immunother Cancer 2, 12, doi:10.1186/2051-1426-2-12 (2014). [PubMed: 24982761]19. Jurk M et al. Tugann an duine TLR7 nó TLR8 freagrúlacht go neamhspleách don chomhdhúil frithvíreasach R-848. Nat Immunol 3, 499, doi:10.1038/ni0602-499 (2002). [PubMed: 12032557]20. Chattergoon MA et al. Gníomhaíonn VEID agus HCV an t-athlasta i monaicítí agus macrophages trí ghabhdóirí endosomal-mhaith dola gan ionduchtú de chineál 1 interferon. PLoS Pathog 10, e1004082, doi:10.1371/journal.bat.1004082 (2014). [PubMed: 24788318]21. Mothaíonn Eigenbrod T, Pelka K, Latz E, Kreikemeyer B & Dalpke AH TLR8 RNA Baictéarach i Monaicítí Daonna agus Imríonn sé Ról Neamhiomarcúil maidir le Streptococcus pyogenes a Aithint. J Immunol 195, 1092–1099, doi:10.4049/J Immunol.1403173 (2015). [PubMed: 26101323]22. Mattson G et al. Cur chuige praiticiúil maidir le trasnascadh. Mol Biol Rep 17, 167–183 (1993). [PubMed: 8326953]23. Gabay C, Ben-Bassat H, Schlesinger M & Laskov R Sócháin sómacha agus éagsúlachtaí infhéitheacha sna géinte Vkappa atheagraithe de línte cille liomfóma B-neamh-Hodgkin. Eur J Haematol 63, 180–191, doi:10.1111/j.1600-0609.1999.tb01766.x (1999). [PubMed: 10485273]24. Alonso MN et al. Treoraíonn cealla T(H)1, T(H)2, agus T(H)17 monaicítí chun idirdhealú a dhéanamh i bhfo-thacair cille dendritic speisialaithe. Fuil 118, 3311–3320, doi:10.1182/fola-2011-03-341065 (2011). [PubMed: 21813450]25. Clarke SR et al. Tréithriú na líne transgenic TCR Ovalbumin-sonrach OT-I: Eilimintí MHC le haghaidh roghnú dearfach agus diúltach. Cille Imdhíonachta Biol 78, 110–117, doi:10.1046/ j.1440-1711.2000.00889.x (2000). [PubMed: 10762410]26. Zehn D, Lee SY & Bevan MJ Críochnaithe ach an freagra T-chealla laghdaithe ar antaigin an-íseal-chleamhnas. Nádúr 458, 211–214, doi:10.1038/nature07657 (2009). [PubMed: 19182777]27. Kondratova M et al. Nochtann léarscáil líonra comharthaíochta ilscála den fhreagra imdhíonachta dúchasach in ailse sínithe ilchineálachta cille. Nat Commun 10, 4808, doi:10.1038/s41467-019-12270-x (2019). [PubMed: 31641119]

28. Bendall SC et al. Cíteiméadracht mais aonchealla de fhreagraí difreálacha imdhíonachta agus drugaí thar leanúntas hematopoietic daonna. Eolaíocht 332, 687–696, doi:10.1126/eolaíocht.1198704 (2011).[PubMed: 21551058]29. Tá Qiu P et al. Ordlathas cheallacha a bhaint as sonraí cíteaiméadrachta ardtoiseach le SPADE. Nat Biotechnol 29, 886–891, doi:10.1038/nbt.1991 (2011). [PubMed: 21964415]30.Kawai T & Akira S TLR comharthaíochta. Difríocht Bás Cille 13, 816–825, doi:10.1038/sj.cdd.4401850 (2006). [PubMed: 16410796]31.Sanchez-Mejorada G & Rosales C Aistriú Comhartha ag gabhdóirí imdhíon-ghlóbailin Fc. J Leukoc Biol 63, 521–533 (1998). [PubMed: 9581795]32. Krishnaswamy S et al. Bitheolaíocht córais. Anailís dhlúth-bhunaithe ar chomharthaíocht chill T i sonraí aonchealla. Eolaíocht 346, 1250689, doi:10.1126/science.1250689 (2014). [PubMed: 25342659]33. Kiefer F et al. Tá an tyrosine kinase próitéin Syk riachtanach do chomharthaíocht receptor Fcgamma i macrophages agus neodrófail. Mol Cill Biol 18, 4209–4220 (1998). [PubMed: 9632805]34. Braselmann S et al. R406, bacainn spleen tyrosine kinase atá ar fáil ó bhéal a bhlocálann comharthaíocht receptor Fc agus laghdaíonn sé athlasadh imdhíonachta casta-idirghabhála. J Pharmacol Cait Ther 319, 998–1008, doi:10.1124/jpet.106.109058 (2006). [PubMed: 16946104]35. Bruhns P et al. Sainiúlacht agus cleamhnas na ngabhdóirí Fcgamma daonna agus a n-athraitheacha ilmhorfacha d'fho-aicmí IgG daonna. Fuil 113, 3716–3725, doi:10.1182/fola-2008-09-179754 (2009). [PubMed: 19018092]36. Nimmerjahn F & Ravetch JV Gníomhaíocht fho-aicme imdhíon-ghlóbailin g éagsúla trí cheangal roghnach receptor Fc. Eolaíocht 310, 1510–1512, doi:10.1126/science.1118948 (2005). [PubMed: 16322460]37. Jefferis R Teiripíocht athchuingreach antashubstainte: an tionchar a bhíonn ag gliceasúlú ar mheicníochtaí gníomhaíochta. Treochtaí Pharmacol Sci 30, 356–362, doi:10.1016/j.tips.2009.04.007 (2009). [PubMed: 19552968]38. Tanji H, Ohio U, Shibata T, Miyake K & Shimizu T Atheagrú struchtúrach an ghabhdóra Tola-mhaith 8 dimers de bharr ligands agonistic. Eolaíocht 339, 1426–1429, doi:10.1126/eolaíocht.1229159 (2013). [PubMed: 23520111]39. Shultz LD et al. Forbairt cealla limfóideach daonna agus myeloid i lucha gáma null IL2R-ráite IL2R greanta le gaschealla haemóipietic daonna slógtha. J Immunol 174, 6477–6489, doi:10.4049/J Immunol.174.10.6477 (2005). [PubMed: 15879151]40. Tá Xia Z et al. Freagra imdhíonachta dúchasach ar ionchlannú cille fibroblastic smeara daonna i lucha CB17 SCID/beige. J Cell Biochem 98, 966–980, doi:10.1002/jcb.20730 (2006). [PubMed: 16795075]41. Tá Tanner M et al. Tréithriú líne nua cille a bunaíodh ó othar a bhfuil ailse chíche atá frithsheasmhach in aghaidh Herceptin. Mol Ailse Ther 3, 1585–1592 (2004). [PubMed: 15634652]42.Luque-Cabal M, Garcia-Teijido P, Fernandez-Perez Y, Sanchez-Lorenzo L & Palacio-Vazquez I Meicníochtaí Taobh thiar d'Fhriotaíocht in aghaidh Trastuzumab in HER2-Méadaithe ar Ailse Cíche agus ar Chomhlacht Cíche méadaithe é. Clin Med Insights Oncol 10, 21–30, doi:10.4137/CMO.S34537 (2016). [PubMed: 27042153]43. Dúirt Li JY et al. A OID Dépharatópach2-Dírítear Comhchuingeach Antashubstaint-Drugaí, Spreagtar Aischéimniú Meall i Múnlaí Príomhúla atá Teasfhulangach go nó Neamh-incháilithe do Teiripe Spriocdhírithe OID. Cill Ailse 29, 117–129, doi:10.1016/j.ccell.2015.12.008 (2016). [PubMed: 26766593]44. Ning S, Pagano JS & Bearbóir GN IRF7: gníomhachtú, rialáil, modhnú, agus feidhm. Imdhíonacht Genes 12, 399–414, doi:10.1038/gene.2011.21 (2011). [PubMed: 21490621]45. Cao Q et al. Léiríonn duánach F4/80 móide CD11c móide fagaicítí mononuclear tréithe feinitíopacha agus feidhmiúla macrophages i sláinte agus nephropathy adriamycin. J Am Soc Nephrol 26, 349–363, doi:10.1681/ASN.2013121336 (2015). [PubMed: 25012165]46. Sheng J et al. Is Féidir Tras-Láithriú Éifeachtach a Thrasláithriú go hÉifeachtach le Fothacar Scoite de Chealla Monaicítí-Díorthaithe i measc Chealla Dendritic Ghnáthghnáth-Chineál 2. Cill Ionadaí 21, 1203–1214, doi:10.1016/ j.celrep.2017.10.024 (2017). [PubMed: 29091760]

47. Knutson KL, Almand B, Dang Y & Disis ML Is féidir malairtí antaigin-diúltacha neo-dhiúltacha a ghiniúint tar éis teiripe antashubstainte néara-shonrach i lucha nó trasgenacha. Ailse Res 64, 1146–1151 (2004). [PubMed: 14871850]48. Moynihan KD et al. Díothú siadaí móra seanbhunaithe i lucha trí imdhíonteiripe teaglaim a ghabhann freagraí imdhíonachta dúchasacha agus oiriúnaitheacha. Nat Med 22, 1402–1410, doi:10.1038/nm.4200 (2016). [PubMed: 27775706]49.Siebenlist U, Franzoso G & Brown K Struchtúr, rialáil agus feidhm NF-kappa B. Annu Rev Cell Biol 10, 405–455, doi:10.1146/annurev.cb.10.110194.01924 (10.10194.01924) . [PubMed: 7888182]

Fíor 6: CL264-ina bhfuil ISACanna, faightear imréiteach siadaí i meán HER2 a chuireann in iúl xenografts agus imréiteach siadaí T-idirmheánach T, cuimhne imdhíoneolaíoch, agus scaipeadh epitope i múnla siadaí singeneic. (a) Struchtúir cheimiceacha aidiúvach T785 agus CL264 a úsáidtear chun ISAC a ghiniúint. (b) Rinneadh randamach ar lucha NSG a ionchlannaíodh le líne cille siadaí HCC1954 nuair a shroich toirt an tséimh 50 – 75 mm3. Cuireadh cóireáil ar lucha uair amháin trí instealladh ion-peritoneal de 5 mg/kg trastuzumab, trastuzumab T785-ISAC nó trastuzumab CL264-ISAC. Baineadh siadaí 20 uair tar éis an riaracháin, próiseáladh iad chuig fionraí cille aonair, agus rinneadh anailís orthu de réir cítoiméadracht sreafa chun gníomhachtú APCanna myeloid insíothlaithe siadaí a mheas. (cd) Ionchlannaíodh lucha cnag dúbailte NSG nó Rag2/IL2rg leis an líne cille meall daonna léirithe agus randamach iad nuair a shroich an toirt siadaí 50 - 75 mm3 (HCC1954) nó 75 - 150 mm3 (JIMT-1). Cóireáladh lucha trí instealladh intraperitoneal le 5 mg/kg de rituximab, trastuzumab, trastuzumab T785-ISAC, trastuzumab CL264-ISAC nó an isitíopa faoi seach-ISACanna, gach 5 lá ar feadh 6 chóireáil san iomlán. (e) tomhaiseadh slonn rHER2 ar chealla meall CT26-rHER2 i gcultúr roimh ionchlannú (plota sreafa ar chlé) agus i siadaí naoi lá iar-ionchlannú (plota sreafa ar dheis) trí chitoiméadracht sreafa le antashubstaint fhluaraiseach-chomhchuingeach frith-rHER2 (dearg) nó rialú isitíopa (gorm). (f) Ionchlannaíodh lucha balb/c leis an líne chill siadaí CT26-rHER2 agus rinneadh iad a randamacht nuair a shroich toirt an siadaí 50mm3. Cóireáladh lucha ansin trí instealladh ion-peritoneal le 10 mg/kg de luch frith-francachHER2 nó frith-rata luiche HER2 CL264-ISAC gach 5 lá le haghaidh 6 chóireáil san iomlán. Tá na sonraí a thaispeántar ó thurgnamh amháin le 8 lucha an lámh agus ionadaíoch ar 3 thurgnamh.

(g) Anti-rat HER2 CL264-ISAC treated mice that experienced complete tumor regression for >Dúshlán 21 lá tar éis a gcóireála deiridh le línte cille CT26 tuismitheora (taobh clé) agus 4T1 (taobh ar dheis), le nó gan ídiú cille CD4 agus CD8 T (n =3 an ceann). Áiríodh lucha naive meall (n=6) a ndearnadh dúshlán orthu leis na línte cille CT26 agus 4T1 tuismitheora mar rialuithe. (ai) Taispeántar sonraí ó thurgnaimh aonair le 3-6 lucha in aghaidh na láimhe agus tá siad ionadaíoch do 1-4 thurgnaimh le híosmhéid de 3 lucha in aghaidh na láimhe i ngach turgnamh. Taispeántar sonraí mar mheán le SEM agus taispeántar staitisticí le *P<><0.01,><0.001, and=""><>

50. Vogelpoel LT et al. Déanann traschaint FcgammaRIIa le TLRs, IL-1R, agus IFNgammaR táirgeadh cítocine a mhodhnú go roghnach i gcealla mialóideacha daonna. Imdhíon-bhitheolaíocht 220, 193–199, doi:10.1016/j.imbio.2014.07.016 (2015). [PubMed: 25108563]51. Daley JM, Thomas AA, Connolly MD, Reichner JS & Albina JE Úsáid a bhaint as antashubstaint mhonaclónach a bhaineann go sonrach le Ly6G chun neodrófail a ídiú i lucha. J Leukoc Biol 83, 64–70, doi:10.1189/ jlb.0407247 (2008). [PubMed: 17884993]52. Cuireann Broz ML et al. Ag Scaradh na Rannán Miolóide Meall Nochtann Neamhchoitianta Cealla Tíolactha Antaiginí a Ghníomhachtú atá ríthábhachtach maidir le Díolúine T Chealla. Cill Ailse 26, 938, doi:10.1016/ j.ccell.2014.11.010 (2014).53. Spranger S, Dai D, Horton B & Gajewski TF Meall Cónaitheach Batf3 Tá Cealla Dendritic ag Teastáil le haghaidh Gáinneála Ceall T Éifeachtach agus Teiripe Ceall T Uchtála. Cill Ailse 31, 711–723 e714, doi:10.1016/j.ccell.2017.04.003 (2017). [PubMed: 28486109]54. Tá Zunder ER et al. Barrachóid cille mais-chlib bunaithe ar Pallaidiam le scéim scagacháin dhúbailte agus algartam dí-chonbhlúite aonchealla. Nat Prótacal 10, 316–333, doi:10.1038/nprot.2015.020 (2015). [PubMed: 25612231]