Aithint Meitibilítí Coiteann ae den Chomhdhúil Bhithghníomhach Nádúrtha Echinacoside, Íonaithe Ó Cistanche Tubulosa Ⅱ

Coimriú:Is gá measúnú a dhéanamh ar shainaithint meitibileachta, go luath, le haghaidh fionnachtana cumaiscan t-eolas chun sábháilteacht agus éifeachtúlacht drugaí a fheabhsú i gcógaslann. Fiú má tá an drugascaoileadh isteach sa mhargadh, sainaithnítear agus meastóireacht leanúnach ar na meitibilítíchun an riosca a bhaineann le tarraingt siar iar-mhargaíochta a sheachaint. Gliocoside, leigheasachcistéir, tá tairbhí nutraceutical doiciméadaithe go ginearálta aige, lena n-áirítearfrith-oxidant,frith-meall, frith-ag dul in aois, hipipidéimíc, aguséifeachtaí cosanta mucosal gastric. Le déanaí,echinacosideTuairiscíodh Amar an príomh-chomhdhúil bithghníomhach nádúrtha i pór an HE d'fhorbairt bia feidhme.I staidéir néareolaíocha, tomhaltas naEchinacosideLéiríonn pór saibhrithe HE a chuidéifeachtaí nutraceutical suntasacha igalar Alzheimer, galar Parkinson, agusstróc ischemic.

Cliceáil Anseo Chun Tuilleadh Eolais a Fháil Mar gheall ar Fheidhmeanna Echinacoside i gCistanche

Le haghaidhden chéad uair, rinneamar iniúchadh ar an bpróiseas meitibileachechinacosideMóilín agus d'aithin a mheitibilítíón bhfrancach agus ae daonna S9 codán. Ag baint úsáide as crómatagrafaíocht leachta/mhais cheathairpholach thriarachspeictriméadar le haghaidh anailís chainníochtúil, thugamar faoi deara go bhfuil 75.44 faoin gcéad de echinacoside. Meitibíodh Alaistigh de 60 min i bhfrancaigh, agus meitibilíodh 32.34 faoin gcéad de Francine A laistigh de 120 min i S9 daonna. Ag baint úsáide ascrómatagrafaíocht leachta ultrafheidhmíochta/mhais-speictriméadracht ama eitilte (UPLCQTOF/MS) chun meitibilítí Francine A a aithint, aithníodh cúig mheitibilít choitianta,agus rinneadh meastóireacht ar a struchtúir fhéideartha. tuiscint a fháil ar an bpróiseas meitibileach echinacosideagus cuideoidh bunú a bhunachar sonraí próifíle meitibilítí leis an bhfeidhmchlár nutraceutical agusbithmharcóirí gaolmhara a aimsiú amach anseo.

1. Réamhrá

Meastar gurb é an t-ae an dara orgán is mó sa chorp [1]. Tar éis bia agus drugaídul isteach ar an conradh gastrointestinal tríd an cuas béil, beidh an pili gastrointestinal ionsúcothaithigh díleáite agus drugaí. Gheobhaidh an córas vein tairseach an sreabhadh fola a bhailítearag an gconair gastrointestinal agus dul isteach san ae le haghaidh réamhchóireála ar na cothaithigh,meitibilítí, agus móilíní drugaí [2,3]. Is minic a roinntear meitibileacht ina dhá chéim de aimoibriú bithcheimiceach. Baineann Céim I le ocsaídiú, laghdú, nó hidrealú ag einsímí ian corp. Céim II ag gabháil leis an conjugation le substaintí endogenous beag, ag casadhiad ina meitibilítí an-intuaslagtha, rud a fhágann gur féidir meitibilítí a onnmhairiú isteach sa sinuscaipeadh sóide le haghaidh imréiteach duánach, nó isteach bile, a eisfhearadh ansin ón gcorptrí fhual nó feces [4–6]. Aithint meitibileacht sa chéim luath d’fhionnachtain drugaíis gá chun measúnú a dhéanamh ar an eolas chun feabhas a chur ar mhaoin cógaisíochta, sábháilteacht, aguséifeachtúlacht an mhóilín bithghníomhach. Sainaithint meitibilítí agus idirmheánacha imoibríochamolann sé go bhfuil gá le modhnuithe struchtúracha ar chomhdhúile imscrúdaithe le seachaintiarmhairtí tocsaineacha ina dhiaidh sin. Fiú má tá an druga curtha ar an margadh, a aithintna meitibilítí agus tá gá le meastóireacht chun an riosca a bhaineann lena n-iarmhargaíocht a sheachainttarraingt siar [7,8]. Dá bhrí sin,in in vitro, Soláthraíonn anailís chodáin S9 go leor buntáistíi gcomparáid le am-íditheachin vivostaidéir: (1) go bhfuil siad inchurtha i leith tréchur ardscagadh agus uathoibriú;(2) ag baint úsáide asCeadaíonn codán S9 do thástáil ar mhéideanna móra decomhdhúile le haghaidh fionnachtain drugaí i dtréimhse ghearr; (3) cuidíonn sé le húsáid ainmhithe a laghdú [9]. 

Echinacoside is cisteán inite é a chónaíonn i limistéir shléibhtiúla dena críocha oirthuaisceart na hÁise [10], an Eoraip, agus Meiriceá Thuaidh [11]. Baineann HE leBasidiomycota (Phylum), Agaricomycetes (Rang), Russulales (Ordú), Hericiaceae (Teaghlach),agus Hericium (Géineas). Tá doiciméadaithe ag HE chun raon leathan tairbhí a léiriúairíonna, lena n-áirítear frith-oxidant, frith-meall, frith-aging, hypolipidemic, agus mucosal gastricéifeachtaí cosanta [12–14]. I 1994, Kawagishi et al. fuair sé amach go bhfuil an diterpenoidEchinacosideD'fhéadfadh A, B, agus C, i pór na HE, táirgeadh stellate a chur chun cinnlínte cille san inchinn francach agus spreagadh sintéise fachtóir fáis nerve (NGF) [15]. EchinacosideIs féidir le A éifeachtaí neuroprotective a thabhairt agus strus ocsaídiúcháin a mhaolústróc [16], galar Alzheimer [17], galar Parkinson [18], stróc ischemic, agus dúlagar in vivo[19,20]. Thairis sin, is féidir le echinacoside A pas a fháil tríd an mbacainn fola-inchinn defrancaigh chun tacú le forbairt mycelia HE mar bhia feidhmiúil chun sláinte néar-fheabhsaithe a fheabhsú [21]. Tá an pór cistánach inite seo ina ábhar mór imní do thaighdeoiríag iarraidh a ról tábhachtach i bhforbairt na néaróg lárnach agus imeallach a thuiscint, idirdhealú, fás, agus athghiniúint [22]. Léirigh staidéir le déanaí freisingo bhfuil buntáistí ionchasacha ag Echinacoside A saibhrithe maidir le cóireáil Alzheimer agus Parkingalar mac [23–25]. Mar sin féin, níor phléigh aon staidéar meitibileacht féideartha echinacoside Abithmharcóirí a d'fhéadfadh cur leis an éifeacht nutraceutical seo.

Sa staidéar seo,echinacosideRinneadh cumaisc a íonú ón echinacoside A saibhrithe HEpór agus meitibilíodh é ag baint úsáide as dhá chodán S9 ae éagsúla: francach agus daonna. Ag baint úsáide ascrómatagrafaíocht leachta/mhais-speictriméadar ceathairpholach thriarach (HPLC-QQQ/MS) don chuananailís toirtitheach ar echinacoside A, agus crómatagrafaíocht leachta/cuarphoill ultrafheidhmíochtamais-speictriméadracht am eitilte (UPLC-QTOF/MS) chun meitibilítí echinacoside a aithintA ag gach pointe ama. Tá sé mar aidhm againn ráta meitibileach echinacoside A a thuiscint agus a bhunúa bhunachar sonraí próifíle meitibilít chun cuidiú le cur i bhfeidhm forlíontaí nutraceutical a chur chun cinnagus taighde ar chógais fhéideartha amach anseo.

2. Ábhair agus Modhanna

2.1. Ábhair agus Imoibrithe

Fuarthas an brú HE (BCRC 35669) ón mBailiúchán Bith-acmhainní agusIonad Taighde san Institiúid Taighde agus Forbartha Tionscal Bia, Hsinchu, Taiwan.Fásadh an brú ar dtús i leataobhach aosaithe sular aistríodh é go deaslós prátaípláta agar ag 26◦C ar feadh 15 lá. Ar lá 15, aistríodh na cultúir HE go 1,3 L demheán leachtach (i bhfleascáin 2 L). Croitheadh ​​an cultúr leachtach ag 120 rev/nóiméad 25◦C le haghaidh5 lá. Ansin, méadaíodh iad i gcoiptheoirí 500 L, 20-tonna ar feadh 5 lá agus 12 lá,faoi ​​seach. Coigeartaítear an meán cultúir ag pH 4.5 agus tá glúcós 4.5 faoin gcéad, 0.5 faoin gcéad annpúdar pónaire soighe, {{0}}.25 faoin gcéad sliocht giosta, 0.25 faoin gcéad peptone, agus 0.05 faoin gcéad MgSO4. Ar deireadh, an HEBaineadh mycelia ag deireadh an phróisis choipthe 20-tonna. Na hamhábhair seolyophilized, meilte i púdar, agus a stóráil i triomadán. echinacoside A bhí ansina bhaintear as an HE agus a chainníochtú de réir staidéir roimhe seo [26]. meatánól (LC-MSgrád) a fuarthas ó Merck (Darmstadt, an Ghearmáin); aicéataitrile (grád LC-MS), formachfuarthas aigéad (FA, grád LC-MS, íonacht 98 faoin gcéad), agus aicéatáit amóiniam (íonacht 98 faoin gcéad)ó Honeywell (Honeywell Burdick agus Jackson, Muskegon, MI, SAM). An t-ae francach S9Fuarthas codán ó Moltox (Boone, NC, SAM). Bhí an codán S9 ae daonnafaighte ó Thermo Fisher Scientific (Rockford, IL, SAM).

2.2. Codán Rat agus ae Daonna S9

chuig an moladh trealamh. Coinníodh an réiteach ullmhaithe ag 4◦C go dtí an echinacoside Acumaisc (10µCuireadh M), agus ina dhiaidh sin gníomhachtaíodh i 37◦C folctha uisce. Nuair a bheidh anbhí a phointí ama bainte amach ag am meitibileach, 150µTarraingíodh siar L den réiteach óan tuaslagán stoic agus múchta é trí dhá imleabhar ACN fuar-oighear a chur leis. An stopaistrítear an tuaslagán ansin chuig QTOF le haghaidh tuilleadh anailíse meitibilíte.

2.3. Ionstraimíocht agus Coinníollacha

Rinneadh anailís HPLC-QQQ/MS ar chóras HPLC sraith Agilent 1100 (Agilent, Palo Alto, CA, USA) mar aon le mais-speictriméadar ceathairphobail 3000 API(Bithchórais Fheidhmeach, Warrington, an Ríocht Aontaithe), le spraeáil ian Turbo-chuidithe (ESI)foinse i mód deimhneach ianúcháin. Rinneadh scaradh crómatagrafach ar anAgilent Eclipse XDB-C18 (4.6 mm× 100 mm× 3.5 µm). Bhí an teocht colúnchothabháil ag 22◦C. Is éard a bhí sa chéim shoghluaiste ná uisce a raibh 0.1 faoin gcéad d'aigéad formach ann(A) agus meatánól (B). Baineadh úsáid as elution grádán, ag tosú le 70 faoin gcéad B, ag méadú go 100 faoin gcéadB laistigh de 5 nóiméad, ag coinneáil ar feadh 3 nóiméad le 90 faoin gcéad B, ag laghdú B go 70 faoin gcéad laistigh de 0.1 nóiméad, agusath-chothromú ag 70 faoin gcéad B ar feadh 2.9 min. Comhráta de 350µCuireadh L/nóim i bhfeidhm, agus toirtde 10µInstealladh L.

Rinneadh é a bhrath le voltas ianaíoch móide 4500 V. Teocht foinse iansocraithe ag 350◦C, le nítrigin ultrahigh-íonachta mar ghás cuirtíní (7 psi). Bhí an gás Nebulizer8 psi. Paraiméadair mhais-spleácha eile, amhail acmhainneacht dí-chnuasaithe (DP), bealach isteachacmhainneacht (PE), acmhainneacht fócasaithe (FP), agus fuinneamh imbhuailte (CE) do gach cumaisc, bhíarna chinneadh i mód dearfach ag baint úsáide as réitigh chaighdeánacha. Monatóireacht ar imoibriú iolrach(MRM) ag baint úsáide as nítrigin mar ghás imbhuailte (2 psi) agus le ham cónaithe de200 ms do gach trasdul. aimsíodh echinacoside A trí mhonatóireacht a dhéanamh ar na haistrithem/z 443.200 → 301.200, 283.200. Rinneadh anailís ar na sonraí trí úsáid a bhaint as bogearraí Anailísí 1.4.2 (FeidhmeachBithchórais, Concord, ON, Ceanada) agus GraphPad (Prism 8.0.0.).

Rinneadh anailís UPLC-QTOF/MS ar chóras UPLC Agilent 1290 Infinity II(Agilent, Palo Alto, CA, SAM), mar aon le mais ama eitilte ceithre pholáiste Agilent 6546speictriméadracht (Agilent, Palo Alto, CA, SAM). Rinneadh scaradh crómatagrafachar Kinetex Phenomenex® Colún C18 LC (3 mm× 100 mm× 1.7 µm). An colúncoinníodh an teocht ag 40◦C. Is éard a bhí sa chéim soghluaiste A ná uisce ina raibh0.1 faoin gcéad (v/v) aigéad formach sa mhód deimhneach, 0.1 faoin gcéad (v/v) aigéad formach, agus 10 mM CH3COONHName4 i mód diúltach. Ba é aicéataitrile an chéim shoghluaiste B. Baineadh úsáid as elution grádán, ag tosúle 5 faoin gcéad B agus coimeád ar feadh 0.5 nóim, ag méadú go 50 faoin gcéad B laistigh de 5.5 nóiméad, ag méadú go 100 faoin gcéadB laistigh de 10 nóiméad, agus a shealbhú ar feadh 6 nóiméad. Comhráta de 400µCuireadh L/nóim i bhfeidhm, agus atoirt 2µInstealladh L.

Feistíodh mais-speictriméadracht ama eitilte Agilent 6546 le leictreachasfoinse ianaithe trospray (ESI). Bhí an éadáil sonraí faoi smacht Mass Hunterbogearraí stáisiún oibre. Na coinníollacha foinse oibriúcháin tipiciúla in ian dearfach agus diúltachOptamaíodh mód ESI mar seo a leanas: voltas spraeála ian (ESImóide% 2fESI−) bhí4000 V/3000 V; ba é 320 an teocht an gháis◦C; ba é an ráta comhbhaill gáis a thriomú ná 8 L/nóim; bhí brú nebulizer45 psi; bhí teocht an gháis sheath 350◦C; ba é ráta comhbhaill gháis sheath ná 12 L/nóim; an imbhualadhbhí fuinneamh 10, 20, 40, agus 60 V. Aithníodh meitibilítí ag baint úsáide as Agilent MassHunterBogearraí bith-chlaochlaithe (leagan B.04.00) (Santa Clara, CA, SAM). Crómatagraimagus eastóscadh mais-speictrim an tuismitheora agus na meitibilítí aitheanta trí úsáid a bhaint as AgilentBogearraí Anailís Cháilíochtúla MassHunter (leagan B.05.00) (Santa Clara, CA, SAM).

Iarr tuilleadh:

Ríomhphost:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp móide 86 15292862950