Aistriú Epithelial-go-Mesenchymal arna Spreagadh ag Hypocsa i gCealla Eipitilíteacha Feadánacha Cóngaracha Trí MiR-545-3p–TNFSF10

Mei-Chuan Kuo ¹, Wei-An Chang ^2,3et al

Coimriú:Breathnaítear ar hypoxia mar cheann de na meicníochtaí pathophysiologic de ghortú duáin agus dul chun cinn breise go dtíteipeanna duáin. Is próiseas ríthábhachtach é an t-aistriú epithelial-go-mesenchymal (EMT) i tubules duánach maidir le fiobróis duáin. Bhain an staidéar seo úsáid as anailís tras-sgrìobhaidh chun EMT spreagtha hypoxia a fhiosrú trí EMT modhnaithe microRNA (miRNA) i gcealla epithelial feadánacha cóngaracha (PTECanna). Léirigh seicheamhú RNA go raibh ocht miRNA uasrialaithe agus íosrialáil trí miRNA i PTECs saothraithe faoi hypoxia i gcomparáid le normoxia. I measc na 11 miRNAs, tá an slonn is airde ag miR-545-3p i PTECanna atá faoi lé hypoxia, agus miR-545-3p faoi chois slonn ligand apoptosis-spreagtha fachtóir neacróis (TRAIL/TNFSF10). EMT spreagtha hypoxia i PTECanna trí mhodhnú miR-545-3p–TNFSF10, agus TNFSF10-Tarlaithe EMTresulted ó hypoxia nó miR-545-3p aistriú aithrise. Thug na torthaí seo tuairimí nua ar rialú uathúil na hidirghníomhaíochta miR-545-3p-TNFSF10 agus a n-iarmhairtí teiripeacha féideartha ar ghortú duán de bharr hipocsa.

Eochairfhocail: hypoxia; miR-545-3p; TNFSF10; trasdul epithelial-go-mesenchymal; cealla epithelial feadánacha proximal; anailís trascríobh

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

sochair cistanche desert: feabhas a chur ar fheidhm na duáin agus gortú duáin a mhaolú

1. Réamhrá

Galar duánis saincheist sláinte dhomhanda í, a mhéadaíonn galracht agus mortlaíocht agus a mhéadaíonn ualaí troma airgeadais ar fud an domhain. Is sainchomhartha é fiobróis duán maidir le dul chun cinn lag na ngalar duáin éagsúla, rud a d’eascair galar duáin deiridh [1].

Tá ról ríthábhachtach ag hypoxia ifíochán duáin gortúagus dul chun cinn breise chuig fiobróis duáin [2]. Is rialtóir cumhachtach é Hypoxia ar phróisis iolracha cheallacha, lena n-áirítear meitibileacht, fás, agus maireachtáil cille trí mheicníochtaí braite ocsaigine [3]. Déantar na freagraí tras-scríobhacha ar dhíothacht ocsaigine a idirghabháil go príomha ag fachtóirí hypoxia-inducible (HIF), a fheidhmíonn le linn gnáthfhorbairt agus i bpróisis phaiteolaíocha i gcomhar le hinfhaighteacht ocsaigine laghdaithe [4]. Is féidir le hypoxia ainsealach freagairt damáiste duáin a spreagadh agus claochlú feinitíopa do-aisiompaithe a chur faoi deara i gcealla epithelial feadánacha, rud a fhágann fiobróis duánach [5,6]. Is próiseas ríthábhachtach é trasdul epithelial-go-mesenchymal (EMT) maidir le fiobróis duáin trína gcailleann cealla epithelial a saintréithe epithelial agus a fhaigheann na gnéithe mesenchymal [7,8]. Féadfaidh gníomhachtú comharthaíochta HIF i gcealla epithelial duánach fibrogenesis a chur chun cinn trí EMT a éascú [9]. Tá athruithe ar leibhéil ocsaigine agus gníomhachtú comharthaíochta hypoxic trí HIF ag teacht chun cinn mar thruiceoirí agus modhnóirí tábhachtacha EMT [10]. Mar sin féin, ní thuigtear go hiomlán na meicníochtaí móilíneacha is bun le EMT a chothaíonn hypoxia agus fiobróis sna duáin.

Breathnaítear ar microRNAs (miRNAs), mar fhachtóirí rialála iar-trascríobh, mar rialtóirí cumhachtacha ar léiriú géine agus feinitíopaí ceallacha. Léiríonn fianaise carnadh modhnaítear hypoxia biogenesis agus gníomhaíocht miRNAs [11]. Thuairiscigh roinnt staidéir léirithe éagsúla miRNAs agus a dtionchar ar fhorbairt EMT agus fiobróis sna duáin faoi hypoxia [12-14]. Du et al. le fios go ndéanfaí íosrialáil miR-34EMT chun cinn i gcealla epithelial feadánacha [13]. Tá Xie et al. léirigh gur tharla fibróis i bhfeadáin chóngaracha mar thoradh ar uasrialáil miR-155 [14]. Mar sin féin, níor rinneadh iniúchadh maith ar cibé an ndéanann miRNAs idirghabháil ar chonair chomharthaíochta phataigineach EMT spreagtha hypoxia i gcealla epithelial feadánacha cóngaracha (PTECanna) trí úsáid a bhaint as anailís tras-sgrìobhaidh.

Mar sin, sa staidéar seo, d’úsáideamar anailís seicheamhaithe RNA beag ar PTECanna faoi choinníollacha normoxia agus hypoxia chun imscrúdú a dhéanamh ar na meicníochtaí a d’fhéadfadh a bheith ann chun bealaí comharthaíochta hypoxia-idirghabhála díobhála duáin a rialáil.

cisteán tcmIs maith le haghaidh galar duáin choric

2. Ábhair agus Modhanna

2.1. Breathnú ar Chultúr na gCeall agus ar Mhirfeolaíocht

Saothraíodh PTECanna Daonna (ATCC PCS{{0}}) i meán basal cille epithelial duánach (ATCC PCS400030™) móide 0.5 faoin gcéad de shéiream bó féatais (FBS), de réir mholadh an déantóra. Ceannaíodh cealla HK-2 ón mBailiúchán Cultúir Cineál Meiriceánach (Manassas, VA, USA). Saothraíodh cealla HK-2 i keratinocyte-SFM (GIBCO) le forlíonta 2 faoin gcéad FBS. Bhí saothraithe cealla faoi normoxia ( O2 , 21 faoin gcéad ) agus hypoxia ( O2 , 1 faoin gcéad ) .

Aithníodh tréithe EMT i PTEC daonna trí bhreathnuithe sraitheacha ar a n-athruithe moirfeolaíocha ag baint úsáide as micreascópacht solais (Nikon ECLIPSE TE20000-S, Nikon, Tóiceo, an tSeapáin).

2.2. Anailís Blot an Iarthair

Baineadh próitéin iomlán na gceall HK-2 trí úsáid a bhaint as maolán lysis RIPA (measúnacht radai-imdhíon-réamhaisnéise) (EMD Millipore, Burlington, MA, SAM). Scaradh an próitéin dínádúraithe le leictreafóiréis 9-11 faoin gcéad SDS-LEATHANACH agus ansin aistríodh go membrane PVDF é tar éis blocáil agus imdhíonadh ag antasubstaintí príomhúla agus tánaisteacha ar leith.

Antasubstaintí in aghaidh HIF-1 (Catalóg #nb100-105, Novus), HIF-2 (Catalóg #7096s, Comharthaíocht Cille), N-cadherin (Catalog #610921, BD Biosciences), vimentin ( Baineadh úsáid as Catalóg #550513, BD Biosciences), E-cadherin (Catalóg #610182, BD Biosciences), seilide (Catalóg #9585s, Comharthaíocht Cille), agus GAPDH (Catalóg #MAB374, EMD Millipore). Gabhadh comharthaí na blots ag baint úsáide as an gcóras Proteinsimple móide Fluorchem Q (Alpha Innotech, San Leandro, CA, SAM). Ríomhadh dlúsmhéadracht na blots ag baint úsáide as bogearraí Image J (Bethesda, MD, SAM).

2.3. Seicheamhú RNA Beag

HK-2 cells were cultured under hypoxia or normoxia conditions for 48 h. NGS was performed to examine the miRNA profiles of HK-2 cells. Trizol® Reagent (Invitrogen, Waltham, MA, USA) was utilized to extract total RNA from the harvested cells, which were isolated for further RNA preparation and small RNA-seq by Welgene Biotechnology Company (Welgene, Taipei, Taiwan). The quality of the extracted RNA was evaluated by an RNA integrity number (RIN), which was measured using an Agilent Bioanalyzer (Agilent Technology, Santa Clara, CA, USA). Samples were prepared to manufacture the small RNA library and then to execute deep sequencing by the Illumina sample preparation kit. PCR amplification was performed to ligate total RNA with 30 and 50 adaptors and to reverse￾transcription into cDNA. cDNA constructs were separated using 6% polyacrylamide gel Biomolecules 2021, 11, 1032 3 of 14 electrophoreses, and 18–40 nucleotide RNA fragments (140–155 nucleotide in length with both adapters) were extracted. The sequencing of the libraries was performed using an Illumina GAIIx instrument (50 cycle single read) and then the results were processed by the Illumina software. The differentially expressed miRNAs between HK-2 cells treated with normoxia or hypoxia were defined at >2-fold change and >10 léamh in aghaidh an mhilliúin.

2.4. Infhaighteacht Sonraí

Tá na sonraí seicheamhaithe RNA a gineadh san fhoilseachán seo i dtaisce in GEO faoin aontachas GSE178810.

2.5. Aonrú RNA, Trascríobh Droim ar Ais, agus PCR Fíor-Ama Cainníochtúil (Q-PCR)

RNA iomlán ó chealla saothraithe faoi choinníollacha normocsa nó hipocsa nó cóireáilte le coscaire HIF-1 (CAY10585, (3-(2-(4-Adamantane-1-il-phenoxy )-aicéitilimín)-4-eistear meitile aigéad hidroxybenzoic) ar feadh 48 h (10 uM, catalóg #400092, Calbiochem) le húsáid TRIzol agus TRIzolLS Imoibrí (Life Technologies), faoi seach. ™ miRNA Kit Sintéise Céad Snáithe (Catalóg #638313 Takara, an tSeapáin) Baineadh úsáid as SYBR Green chun anailís a dhéanamh ar an miRNA cainníochtúil le córas QuantStudio 3Q-PCR (ThermoFisher Scientific, Foster City, CA, USA).Leibhéil slonn choibhneasta an miRNA agus RNA i gcealla a bhí normalaithe chuig an rialú inmheánach U6 nó GAPDH, faoi seach Cuireadh i láthair nathanna coibhneasta ag baint úsáide as an modh 2 - − - Ct .. Tá na primers a úsáidtear liostaithe i dTábla S1.

2.6. Uirlisí Anailíse Bithfhaisnéisíochta

Rinneadh spriocanna miRNAs sonracha a thuar ag baint úsáide as dhá shuíomh Gréasáin bithfhaisnéisíochta, na bunachair shonraí miRmap [15] agus TargetScan [16], ar féidir leo réamh-mheastacháin sprice miRNA a sholáthar d'orgánaigh éagsúla. Rangaíonn bogearraí miRmap agus TargetScan araon spriocanna miRNA sonracha féideartha agus léiríonn siad an neart faoi chois de sprioc miRNA bunaithe ar na scóir miRmap agus peircintílí Comhthéacs móide móide scór [17].

Rinneadh anailís ar fheidhmeanna bitheolaíocha na spriocanna miRNA roghnaithe ag baint úsáide as bogearraí IPA (Ingenuity Systems, Redwood City, CA, USA), a sholáthraíonn “croí-anailís” ar na géinte/próitéiní. Is féidir liostaí conairí canónacha, líonra agus tocsaineachta a fhaightear ón croí-anailís a úsáid chun pataigineas féideartha na ngéinte/próitéiní a shainaithint [18].

2.7. Aistriú Neamhbhuan

Aistríodh an miR{0}}p mimic (200 nM) agus rialú miR-diúltach ar an mimic (miR-NC, 200 nM) (GE Healthcare, USA) go cealla ag baint úsáide as imoibrí aistrithe Lipofectamine™ RNAiMAX (Catalóg #13778075 , ThermoFisher Scientific, USA) ag leanúint phrótacail an mhonaróra. Tá seicheamh na miR-545-3p mimics a úsáideadh liostaithe i dTábla Forlíontach S1.

2.8. Measúnacht Imdhíon-Ionrach-Cheangailte le heinsím (ELISA)

Tomhaiseadh na tiúchain TNFSF10 de sháithíní na gceall HK-2 a shaothraítear faoi normocsa, hypoxia, nó tar éis aistrithe leis an miR-545-3p miR-545-3p faoi choinníollacha hypoxia ar feadh 48 h leis an trealamh Quantikine1 ELISA atá ar fáil go tráchtála ( Catalóg #DTRL00, Córais T&F) de réir threoracha an déantóra, mar a bhí roimhe seo

cur síos.

2.9. Anailís staitistiúil

Cuireadh na hathróga leanúnacha in iúl mar mheán-earráid chaighdeánach an mheáin (SEM) nó mar airmheán (25ú agus 75ú peircintíl) de réir mar is cuí, agus cuireadh athróga catagóireacha in iúl mar chéatadáin. Scrúdaíodh an comhghaol idir athróga leanúnacha ag comhghaol Spearman. Rinneadh tástáil ar thábhacht na ndifríochtaí in athróga leanúnacha idir grúpaí trí úsáid a bhaint as t-tástáil an Mhic Léinn nó anailís aontreo ar athraithis (ANOVA), agus an tástáil post hoc coigeartaithe ina dhiaidh sin le ceartúchán Tukey de réir mar is cuí. Rinneadh Bithmhóilíní Staidrimh 2021, 11, 1032 4 de 14 anailís ag baint úsáide as GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, SAM). Socraíodh tábhacht staitistiúil ag p-luach dhá thaobh de<>

púdar luibh costanchetá éifeacht deisiúcháin mhaith ardamáiste duánach

3. Torthaí

3.1. Hypoxia Iondaíonn EMT i PTECs

Tuairiscíodh go bhfuil hypoxia rannpháirteach i meicníochtaí pathophysiologic degortú duáin[9]. Chun imscrúdú a dhéanamh ar athrú feinitíopach ar chealla PTEC duánacha daonna (RPTECs) agus HK-2 faoi choinníollacha hypoxia, saothraíodh cealla faoi choinníollacha normoxia (O2, 21 faoin gcéad) agus hypoxia (O2, 1 faoin gcéad) ar feadh 48 u. Fuaireamar amach go raibh slonn HIF-1 agus HIF-2 ardaithe i gcealla RPTEC agus HK{-2 faoi choinníollacha hypoxia ar feadh 6 h (Fíor 1A). Breathnaíodh agus athraíodh moirfeolaíochtaí na gcealla ó chruth cruinn go feinitíopa fadaithe agus motile faoi choinníollacha hypoxia i gcomparáid le coinníollacha normoxia (Fíor 1B).

Baineadh úsáid as blotáil an Iarthair chun EMT a mheas i PTECanna faoi choinníollacha normoxia nó hypoxia. D’ardaigh Hypoxia N-cadherin agus léiriú vimentin agus laghdaíodh léiriú E-cadherin i gcealla PTEC daonna (Fíor 1C) agus HK-2 (Fíor 1D) tar éis tréimhse goir 48-h. Dá bhrí sin, is cúis le hypoxia EMT i PTECanna.

3.2. Aithint miR-545-3p Páirt a ghlacadh in EMT ar Spreagadh Hypoxia i PTECanna

Léirítear an tsreabhchairt um thaiscéaladh miRNAs ionchasacha a tharlódh de bharr hypoxia i bhFíor 2A. Rinne NGS próifíliú ar phróifíl na RNA beaga ó HK-2 cealla saothraithe faoi normocsa nó hypoxia ar feadh 24 h. Fuarthas aon miRNA is fiche le hathrú suntasach 2-huaire i gcealla HK-2 a nochtar do hypoxia i gcomparáid leo siúd atá saothraithe faoi normocsa.

As na 21 miRNAs, rinneadh 10 miRNA a rialáil agus íosrialáil 11 miRNAs. Tar éis na miRNAs a eisiamh le líon léamh amh Níos lú ná nó cothrom le 10, taispeánadh 11 miRNAs suntasacha (8 upregulated agus 3 downregulated faoi choinníollacha hypoxia) ag mapáil teasa (Fíor 2B agus Tábla S1). D’úsáideamar RT-Q-PCR chun léiriú na miRNAs seo a bhailíochtú in dhá mhúnla in vitro, lena n-áirítear cealla RPTEC daonna agus HK-2 faoi choinníollacha normocsa agus hipocsa. I measc na 11 miRNAs, níorbh fhéidir miR-190a-3p agus miR{-1277-3p{-1277-3p) a bhrath le qT-PCR, agus slonn neamhréireach miR-1269a, miR{ Fuarthas {18}}p, miR- 33b-5p, miR-33a-5p, agus miR-219a-5p i gcealla PTEC daonna agus HK{-2 tar éis cóireála le hipocsa (Fíor 2C–G). Laghdaíodh na leibhéil miR{27}}p, miR-4474-3p, agus miR-5579-3p i gcealla PTEC daonna agus HK{-2 araon faoi choinníollacha hipocsa (Fíor 2H–J). Ní hamháin go raibh slonn miR-545-3p ar an leibhéal ab airde i measc na 11 miRNAs i HK-2 cealla a nochtar do hypoxia i gcomparáid leo siúd ar cuireadh cóireáil orthu le normocsia ach bhí sé ardaithe freisin i PTECanna daonna faoi choinníollacha hypoxia (Fíor 2K). Scrúdaíomar freisin an bhfuil baint ag HIF-1 le rialáil slonn miR{-545-3p (Fíor S1), agus fuaireamar amach gur shocht an t-inhibitor HIF miR-545-3p ingearchló in HK -2 cealla de bharr hipocsa (Fíor 2L). Thug na torthaí thuas le fios gur rialaigh HIF-1 slonn miR{-545-3p sna feadáin chóngaracha faoi choinníollacha hipocsa.

De réir na slonn is airde de miR-545-3p i measc na 11 miRNA i HK-2 cealla a nochtar do hypoxia, feidhm pathfisiologach na spriocanna féideartha miR-545-3p-bhunaithe, le scór miRmap > 90 de réir bhunachar sonraí miRmap, ag baint úsáide as croí-anailís ar bhunachar sonraí an Fhorais Riaracháin. Léirigh na deich mbealach is airde de na conairí canónacha den anailís IPA go raibh rialáil EMT de réir fachtóirí fáis san áireamh le feidhm phaitfhisiceach miR-545-3p (Fíor 3A). Léirigh an anailís ar an liosta tocsaí go raibh comhghaol idir miR-545-3p agus gortú duánach agus freagairt ar strus ocsaídiúcháin (Fíor 3B). Bunaithe ar thorthaí na hanailíse bhithfhaisnéisíochta, d'fhéadfadh hypoxia EMT a spreagadh i PTECanna trí mhodhnú miR-545-3p.

Ina theannta sin, léirigh anailís líonra ar na spriocanna féideartha miR{0}}p go raibh baint ag miR-545-3p agus TNFSF10, mar spriocanna arna rialú ag miR-545-3p, le iomadú cealla agus na cille. timthriall (Tábla 3).

Baineadh úsáid as miRmap agus TargetScan (leagan 7.1) chun tuar bithfhaisnéise a dhéanamh, a léirigh go raibh an seicheamh síl sprice do cheangal miR-545-3p. Léiríonn na scóir mipmap dóchúlachta dóchúlacht na sprice géinte tuartha miR-545-3p (Fíor 3C). Léirítear an seicheamh síolta miR-545-3p speiceas-chaomhnaithe sa 3/ UTR de TRAIL i bhFíor 3D. Laghdaigh cóireáil hypoxia leibhéal mRNA TNFSF10 de chealla PTEC daonna (Fíor 3E) agus HK-2 (Fíor 3F). Ina theannta sin, thángthas ar leibhéal laghdaithe mRNA TNFSF10 i supernatants díorthaithe ó HK-2 cealla faoi hypoxia i gcomparáid le normoxia (Fíor 3G). Ina theannta sin, rinne aistriú an miR-545-3p aithris ar slonn laghdaithe mRNA TNFSF10 i bhfoshuíomh cealla HK-2 (Fíor 3H). D'aisiompaigh coscaire HIF-1 slonn laghdaithe mRNA TNFSF10 i gcealla HK-2 a tharlódh de bharr hipoxia (Fíor 3I). Mar sin, rialaigh hypoxia slonn miR-545, a laghdaigh slonn TNFSF10 ina dhiaidh sin, agus d’fhéadfadh HIF-1 an conair miR-545-3p–TNFSF10 a mhodhnú.

3.4. Iondaíonn Hypoxia EMT i gCealla HK trí mhodhnú miR-545-3p–TNFSF10

Chun measúnú a dhéanamh ar cé acu an modhnaíodh miR{0}}p EMT a chothaíonn hypoxia sa fheadán cóngarach, rinneamar measúnú ar éifeachtaí bitheolaíocha miR-545-3p agus TNFSF10 i gcealla HK{-2. Ar an gcéad dul síos, níor chuir cóireáil le TNFSF10 (20 ng/mL) isteach ar inmharthanacht cille na gceall HK-2 (Fíor4A). Rinneamar scrúdú breise ar léiriú slugaí, mar cheann de na fachtóirí trascríobh do rialáil EMT. Méadaíodh slonn seilide i gcealla HK-2 tar éis aistrithe le miR-545-3p (Fíor4B) agus cuireadh faoi chois é i gcealla HK-2 a cuireadh faoi chóireáil TNFSF10 (Fíor 4C) faoi choinníollacha normocsa. Tar éis an miR{15}}p mimic a aistriú, rinneadh an slonn E-cadherin a ísliú, agus rinneadh slonn N-cadherin agus vimentin a uasghrádú i gcealla HK-2 faoi choinníollacha normocsa (Fíor 4D). Mar sin féin, d'aisiompaigh TNFSF10 éifeacht miR-545-3p in ionduchtú EMT i gcealla HK{-2. Ina theannta sin, chuir cóireáil le TNFSF10 (20 ng/mL) cosc ​​ar íosrialáil E-cadherin agus cuireadh faoi chois N-cadherin agus uasrialú vimentin, agus aisiompaíodh EMT i gcealla HK-2 de bharr hypoxia i gcealla HK-2 (Fíor 4E). Chiallaigh na torthaí seo gur chuir hypoxia le EMT i PTECanna trí mhodhnú an chosáin miR-545-3p– TNFSF10, agus d’fhéadfadh TNFSF10 EMT a mhaolú i PTECanna a tharlódh de bharr hypoxia agus miR-545-3p.

4. Plé

Hypoxia is cúis le dysfunction morphologach agus pathophysiologic anduán, as a dtiocfaidh meath tapa ifeidhm duáin[16]. Bhain an staidéar seo úsáid as anailís tras-sgrìobhaidh chun imscrúdú a dhéanamh ar na miRNAs ionchasacha a bhí rannpháirteach sa phróiseas EMT spreagtha hypoxia i PTECanna, agus léirigh sé go raibh miR-545-3p uasrialaithe i PTECanna a ndearnadh cóireáil orthu le hipoxia, agus miR modhnaithe HIF{{-1. slonn 4}}p agus TNFSF10. miR-545-3p d’eascair EMT i PTECanna faoi hypoxia mar gheall ar uasrialáil. Ina theannta sin, leasaigh TNFSF10 EMT i PTECanna a ndearnadh cóireáil orthu le hypoxia. Mar sin, tá tuairimí nua faighte againn trí rialú uathúil miR-545-3p–TNFSF10 a bhaint amach, ónar féidir linn forchéimniú galar duáin a léirmhíniú (Fíor 5).

Léirigh ár dtorthaí slonn miR-545-3p faoi rialú hypoxia i bhfeadáin chóngaracha. Is eol go bhfuil ról ríthábhachtach ag miRNAs i modhnú léiriú nó gníomhaíocht géine agus déanann siad rialáil bhreise ar mheicníochtaí pathophysiologic maidir le tosú nó dul chun cinn galair [19]. Léirigh staidéir roimhe seo go raibh miR-545 ag feidhmiú mar thionscnóir siadaí, a rialaigh iomadú cille, ionradh agus imirce, rud a d'eascair carcanóma hepatocellular a thuilleadh [20,21]. spreag miR-545 próiseas athlasadh agus chuir sé le cirrhosis ae heipitíteas B trí dhíriú ar Tim-3 [22]. Os a choinne sin, chuir miR-545-3p bac páirteach ar an lncRNA XIST agus chuir sé feabhas ar apoptosis mióblastaí cairdiacha de bharr hipocsa/athocsaiginiú [23]. Mar sin féin, ní dhéantar iniúchadh maith ar cibé an nglacann miR-545 páirt i bpataigineas na ngalar duáin. Léirigh cúpla staidéar go raibh miR-545-3p rannpháirteach i ngéarghortú duánach a bhain le sepsis [24,25]. Tá Tan et al. thuairiscigh go bhfeidhmíonn circ_0091702 mar spúinse miR-545-3p chun apoptosis cealla HK{-2 a tharlódh de bharr lipopolysaccharide (LPS) trí upregulation thrombospondin 2 a chosc [24]. Hu et al. fuarthas amach gur mhaolaigh ró-fhuaimniú fada neamhchódaithe So-ghabhálacht Ailse 2 apoptóis spreagtha LPS i gcealla HK{-2 trí miR-545-3p/peroxisome iomadóir-ghníomhaithe-ais-gníomhadóra [25] a rialáil. Shi et al. le fios gur sháraigh circPRKCI gortú athlastach a tharlódh ag LPS i gcealla HK{-2 trí miR-545/finger since E-box-ceangailteach homeobox 2 [26] a shochtadh. Léirigh an staidéar reatha seo ar dtús an tionchar a bhí ag miR-545-3p ar EMT spreagtha hypoxia sna duáin. D’ardaigh Hypoxia na leibhéil miR-545-3p, agus slonn miR{-545-3p rialaithe HIF{-545-3p i PTECanna. miR-545-3p ingearchló sluga ionduchtaithe agus EMT a chur chun cinn tuilleadh, lena n-áirítear slonn miR-545-3p E-cadherin a shochtadh agus slonn N-cadherin agus vimentin a fheabhsú i PTECanna. Léiríomar conair comhartha nua chun an próiseas EMT a mhodhnú i bhfeadáin chóngaracha faoi hypoxia.

Tuairiscíodh freisin go bhfuil hypoxia chun léiriú TNFSF10 agus an próiseas fiseolaíoch a mhodhnú [27,28]. Tá Fang et al. le fios gur mhéadaigh HIF-1 TNFSF10-apoptosis spreagtha trí léiriú TNFSF10 receptor decoy 1 (DcR1) a mhéadú i gortú traumatach inchinn [27]. Tá Harashima et al. le fios gur mhéadaigh HIF-2 so-ghabhálacht cealla ailse briseán chuig TNFSF10 faoi choinníollacha hypoxia [28]. Mar sin féin, níl sé soiléir conas TNFSF10 a rialáil trí miRNAanna a iar-trascríobh, go háirithe maidir le gortú duáin de bharr hypoxia. Tugann ár dtorthaí léargas nua sa mhéid is go modhnaíonn hypoxia slonn TNFSF10 sna feadáin chóngaracha trí miR-545-3p. Mhéadaigh Hypoxia na leibhéil miR-545-3p, agus, ar a seal, chuir sé slonn TNFSF10 faoi chois i PTECanna agus a gcuid supernatants chun an próiseas EMT a aslú. Ina theannta sin, fuaireamar amach freisin gur mhodhnaigh hypoxia an chonair miR-545-3p–TNFSF10 i bhfeadáin chóngaracha trí HIF-1. Mar sin féin, níl sé soiléir cé acu an rialaíonn HIF-2 an cosán seo sa duán faoi thimpeallacht hipocsa. Tá gá le tuilleadh staidéir chun iniúchadh a dhéanamh ar an tionchar a bhíonn ag fochineálacha na bhfachtóirí trascríobh HIF ar rialachán miR{-545-3p-TNFSF10 maidir le gortú duáin.

Léiríonn fianaise carntha go bhfuil baint ghníomhach ag baill superfamily TNF le paiteolaíocht fhorbairt agus dul chun cinn galair duáin [29]. Rialaíonn na baill superfamily TNF feidhmíocht cille, mar shampla difreáil, iomadú, necróis, apoptosis, nó fibrosis, ag brath ar na céimeanna éagsúla damáiste duáin [30,31]. D'fhéadfadh TNFSF10, mar ghníomhaire teiripeach frith-ailse féideartha, bac a chur ar fhás cille agus feabhas a chur ar apoptosis cille trí cheangal a dhéanamh ar ghabhdóirí báis sainiúla trasmembrane cineál I, rud a chuideodh le héifeachtúlacht na cóireála ceimiteiripe ar ailsí éagsúla [29,32]. D'aimsigh staidéir le déanaí caidreamh diúltach idir serum TNFSF10 agus torthaí cliniciúla i galair neamh-ailse [33,34]. Mar sin féin, níl iniúchadh iomlán déanta ar ról TNFSF10 i galair duáin. Fuarthas léiriú ardaithe ar TRAIL a scaiptear in othair le roinnt galair duáin, mar shampla galar duáin diaibéitis agus galar athraithe mion-mal [35,36]. Cosc a chur ar damáiste maolaithe TNFSF10 i múnla in vivo de duáin ischemia-reperfusion [37]. Os a choinne sin, laghdaíodh scaipeadh TNFSF10 in othair le galar duáin polycystic ceannasach uathsomal i gcomparáid le gnáth daoine aonair [38]. Seachas sin, tuairiscíodh éifeachtaí neamhréireach TNFSF10 ar ghalair duáin freisin. I gcodarsnacht leis an éifeacht apoptotic ar PTECanna i nephropathy diaibéitis[30], Nguyen et al. thuairiscigh gur thug TNFSF10 freagra inflammatory agus iomadú cille i nephritis lupus [39]. D’fhéadfadh baint a bheith ag na ráitis chontrártha seo le rialacháin éagsúla TNFSF10 i measc cineálacha agus céimeanna éagsúla de ghalair duáin. Go dtí seo, tá sé deacair fós a dheimhniú faoi ról iarbhír TNFSF10 i bhforbairt agus dul chun cinn galar duáin. Fuair ​​​​an staidéar reatha seo nach raibh tionchar ag TNFSF10 ar inmharthanacht PTEC, rud a thugann le tuiscint nár spreag sé apoptosis sa chineál seo cille. D’fhéadfadh ró-léiriú TNFSF10 EMT a tharlódh de bharr hipoxia i bhfeadáin chóngaracha a mhaolú, rud a thugann le tuiscint an éifeacht theiripeach fhéideartha a d’fhéadfadh a bheith ag miR-545-3p–TNFSF10 maidir le gortú duáin a bhaineann le hipocsa.

5. Conclúidí

Léiríodh sa staidéar seo gur chuidigh hypoxia le EMT trí mhodhnú miR-545-3p– TNFSF10, agus cosc ​​​​miR-545-3p agus TNFSF10 aisiompú EMT hypoxia-spreagtha i PTECanna. Mar sin, cuireann na torthaí seo léargais nua ar fáil ar rialáil uathúil miR-545-3p–TNFSF10 agus a n-éifeacht theiripeach ionchasach ar ghortú duáin de bharr hipocsa.

sistéanis féidir a rialáil ainsealachgalar duáin, cliceáil anseo chun tuilleadh a fhoghlaim

Tagairtí

1. Liu, M. ; Liu, L. ; Bai, M.; Zhang, L.; Ma, F.; Yang, X.; Sun, S. Cuireann gníomhachtú ar ais Twist/miR-214/E-cadherin de bharr hipocsa trasdul meiseinchymal cille epithelial tubular duánach agus fiobróis duánach chun cinn. Bithcheimic. Bithfhis. Res. Cumann. 2018, 495, 2324–2330.

2. Heyman, SN; Camaisi, M.; Róisín, S.; Rosenberger, C. Hypoxia parenchymal duánach, freagra hypoxia agus dul chun cinn galar duáin ainsealach. Táim. J. Nephrol. 2008, 28, 998–1006.

3. Giaccia, AJ; Síomón, MC; Johnson, R. Bitheolaíocht hypoxia: Ról braite ocsaigine i bhforbairt, i ngnáthfheidhm agus i ngalar. Genes Dev. 2004, 18, 2183–2194.

4. Movafagh, S.; Crook, S.; vo, K. Rialáil fachtóir induchtaithe hypoxia-1a ag speicis imoibríoch ocsaigine: Forbairtí nua ar sheandhíospóireacht. J. Bithcheimic Cille. 2015, 116, 696–703.

5. Manotham, K. ; Tanaka, T.; Matsumoto, M.; Ó, T. ; Inagi, R.; Miyata, T. ; Kurokawa, K.; Fujita, T.; Ingelfinger, JR; Nangaku, M. Trasdhifreáil cealla feadánacha saothraithe de bharr hypoxia. Duán Int. 2004, 65, 871–880.

6. Fine, LG; Bandyopadhyay, D.; Normannach, JT An bhfuil meicníocht choiteann ann chun cineálacha éagsúla galar duánach a chur chun cinn seachas an phróitéiniúir? I dtreo an téama aontaithe de hypoxia ainsealach. Duán Int. Supl. 2000, 75, S22–S26.

7. Li, Y. ; Kang, YS; Dai, C. ; Póg, LP; Wen, X.; Liu, Y. Is cosán féideartha é trasdul epithelial-go-mesenchymal as a dtiocfaidh mífheidhm podocyte agus proteinuria. Táim. J. Pathol. 2008, 172, 299–308.

8. Yamaguchi, Y .; Eoghan, M. ; Suzuki, D.; Nakatani, K.; Kimura, K.; Harada, K.; Cubo, A.; Akai, Y.; Toyoda, M.; Kawaguchi, M.; et al. Aistriú epithelial-mesenchymal mar mhíniú féideartha ar ídiú podocyte i nephropathy diaibéitis. Táim. J. Duán Dis. 2009, 54, 653–664.

9. Higgins, DF; Kimura, K.; Bernhardt, WM; Shrimanker, N. ; Akai, Y.; Hohenstein, B. ; Saito, Y. ; Johnson, RS; Kretzler, M.; Cohen, CD; et al. Cothaíonn hypoxia fibrogenesis in vivo trí HIF-1 spreagadh trasdul epithelial-go-mesenchymal. J. Clin. Imscrúdú. 2007, 117, 3810–3820.

10. Haase, VH Rialaíonn ocsaigin trasdul epithelial-go-mesenchymal: Léargais ar mheicníochtaí móilíneacha agus ábharthacht do ghalar. Duán Int. 2009, 76, 492–499.

11. Nallamshetty, S. ; Chan, SY; Loscalzo, J. Hypoxia: Máistir-rialtóir ar bhithgenesis agus gníomhaíocht microRNA. Radacach saor in aisce,. Biol. Med. 2013, 64, 20–30.

12. Zell, S.; Schmitt, R.; Witting, S.; Kreipe, HH; Hussein, K.; Becker, JU Hypoxia Spreagann Léiriú Géin Mesenchymal i gCealla Epithelial Tubular Duánach: Samhail in vitro d'Fiobróis Trasphlandaithe Duán. Nephron Extra 2013, 3, 50–58.

13. Du, R. ; Grian, W. ; Xia, L. ; Zhao, A .; Yu, Y.; Zhao, L.; Wang, H.; Huang, C. ; Sun, S. Cuireann íosrialáil microRNA de bharr hypoxia-34a chun cinn EMT trí dhíriú ar chonair comharthaíochta Notch i gcealla epithelial feadánacha. PLoS ONE 2012, 7, e30771.

14. Xie, S.; Chen, H.; Li, F.; Wang, S.; Guo, J. Cuireann microRNA spreagtha hypoxia-155 chun cinn fiobróis i gcealla feadán cóngarach. Mol. Med. Ionadaí 2015, 11, 4555–4560.

15. Ar fáil ar líne:

16. Ar fáil ar líne:

17. Tsai, YC; Kuo, MC; Crochadh, WW; Wu, LY; Wu, PH; Chang, WA; Cuo, PL; Hsu, YL Ard-ghlúcóis Iondaíonn Apoptosis Cealla Mesangial trí miR-15b-5p agus Spreagann Nephropathy Diaibéiteach trí Seachadadh Vesicle Extracellular. Mol. Ther. 2020, 28, 963–974.

18. Lewington, AJ; Cerda, J. ; Mehta, RL Feasacht a ardú ar ghéarghortú duán: Peirspictíocht dhomhanda ar mharfóir ciúin. Duán Int. 2013, 84, 457–467.

19. Chitwood, DH; Déanann Timmermans, MC Target mimics a mhodhnú miRNAs. Nat. Géinte. 2007, 39, 935–936.

20. Changjun, L. ; Feizhou, H.; Dezhen, P.; Zhao, L.; Rialaíonn ais Xianhai, M. MiR-545-3p/MT1M iomadú cille, ionradh agus imirce i gcarcanóma hepatocellular. Biomed. Cógaiseoir. 2018, 108, 347–354.