Cothaíonn Aiste Bia Ard-fhosfair Athrialú Léiriú MRNA Bmp2 agus Spp1 i nDuán Rat

Hiroshi Matsuzaki, Kikue Mori, Shinichi Katsumata 

Chun meicníocht forbartha nephrocalcinosis a tharlódh de bharr aiste bia ard-fhosfair (P) a shoiléiriú, dhíríomar ar phróitéiní a bhaineann le cnámh mar próitéin morphogenetic cnámh 2 agus osteopontin. Rinne an staidéar seo imscrúdú ar éifeachtaí aiste bia ard-P ar an slonn mRNA de Bmp2 agus Spp1 sa francachduán. Roinneadh francaigh Wistar ina dhá ghrúpa agus chothaigh siad aiste bia rialaithe (grúpa rialaithe) nó aiste bia ard-P (grúpa ard-P).DuánMéadaíodh tiúchan cailciam agus P go suntasach sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. Méadaíodh go mór an abairt mRNA de Bmp2 agus Spp1 araon sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. Léiríonn na torthaí seo go spreagann aiste bia ard-P upregulation Bmp2 agus Spp1 mRNA saduán.

Eochairfhocail: aiste bia ard-fosfair, nephrocalcinosis, Bmp2, Spp1,duán, francach

Le haghaidh tuilleadh eolais déan teagmháil le:emily.li@wecistanche.com

cistanche a chóireáil galar duáin

Réamhrá

Is neamhord é nephrocalcinosis arb iad is sainairíonna é taiscí cailciam (Ca) sa parenchyma duánach. Tá fosfar cothaitheach (P), go háirithe, ina fhachtóir lárnach i bhforbairt an neamhord seo. Tá sé léirithe go dtiocfaidh méadú ar thiúchan Ca sa riar ar aiste bia ard-Pduánagus taiscí Ca sa parenchyma duánach1-6）. Cé go ndearnadh staidéar leanúnach ar éifeacht aiste bia ard-P ar fhorbairt nephrocalcinosis, níl mórán ar eolas faoin meicníocht atá freagrach as forbairt an neamhord seo. Mar sin, tá gá le réiteach tráthúil ar an gceist seo.

Thuairiscigh muid, tar éis scrúdú histolaíochta ag baint úsáide as micreascópacht leictreoin tarchurtha, gur breathnaíodh criostail cosúil le snáthaid-chruthach hiodrocsapatite i bhfeadáin duánacha na bhfrancach a chothaítear ar aiste bia ard-P6, 7）. Léirigh micrea-anailís X-gha go bhfuil taiscí Ca a tharlódh ó aiste bia ard-P comhdhéanta den chuid is mó de Ca agus P7）. Léirigh na torthaí seo gur foirm de hidroxyapatite iad taiscí Ca a tharlódh ó aiste bia ard-P. Bunaithe ar an toradh seo, déanaimid postáil go bhfuil forbairt nephrocalcinosis á rialú ag meicníocht cosúil leis an meicníocht i bhfoirmiú cnámh. Mar sin, dhírigh an staidéar reatha ar phróitéiní a bhaineann le cnámh cosúil le próitéin morphogenetic cnámh 2 (BMP2). Is fachtóir osteogenic é BMP2 a thaispeánann gníomhaíocht a chothaíonn osteogenesis8, 9）. Is fiú a thabhairt faoi deara gur aithníodh BMP2 mar fhachtóir a chothaíonn ectopiccnámhfoirmiú10, 11）. Mar sin, rinneamar hipitéisiú, má tá ról tábhachtach ag BMP2 i bhforbairt nephrocalcinosis, léiriú na próitéine seo saduánbheadh ​​upregulated ag aiste bia ard-P. Bhí sé mar aidhm ag an staidéar reatha a chinneadh an bhfuil tionchar ag aiste bia ard-P ar abairt mRNA Bmp2 saduán.

Idir an dá linn, thuairiscigh ár staidéar roimhe seo go n-ardaíonn aiste bia ard-P slonn osteopontin (OPN) i bhfeadáin duánach ag baint úsáide as anailís imdhíon-histochemical, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh baint a bheith ag OPN le forbairt taiscí Ca a tharlódh de bharr aiste bia ard-P12）. Mar sin, rinneamar imscrúdú ar na hathruithe i slonn Spp1 mRNA saduánfreisin.

Féadfaidh torthaí an staidéir seo léargais luachmhara a sholáthar ar an meicníocht atá freagrach as forbairt nephrocalcinosis a tharlódh de bharr aiste bia ard-P.

abhair agus modhanna

Ainmhithe agus aistí bia.

D'fhormheas Coiste um Úsáid Ainmhithe Ollscoil Talmhaíochta Tóiceo an staidéar seo, agus coinníodh gach ainmhí de réir threoirlínte na hollscoile maidir le cúram agus úsáid ainmhithe saotharlainne (Formheas Uimh. 300049).

Tá sé tábhachtach a thabhairt faoi deara go bhforbraíonn francaigh baineanna nephrocalcinosis níos éasca ná francaigh fireann13, 14）. Ina theannta sin, thuairiscigh muid go méadaíonn aiste bia ard-P léiriú OPN i tubules duánach de francaigh baineanna12）. Bhain an staidéar seo úsáid as francaigh baineanna mar ainmhithe turgnamhacha. Bhí francaigh Wistar baineann ceithre seachtaine d'aois (Clea Japan, Tóiceo, an tSeapáin) lonnaithe i gcliabháin aonair de mhogalra sreinge cruach dhosmálta. Le linn na tréimhse turgnamhacha, bhí cages suite i seomra le soilsiú rialaithe faoi 12-h solas: timthriall dorcha (solas, 0800-2000 h), an teocht 22 ± 1 céim , agus taiseachas coibhneasta de 60 faoin gcéad go 65 faoin gcéad .

Léirítear comhdhéanamh na n-aistí bia turgnamhacha iTáblae 1. Ullmhaíodh aistí bia turgnamhacha maidir leis an aiste bia AIN{{{{{{{0}}G15). Bhí dhá thiúchan P éagsúla sna aistí bia turgnamhacha (aiste bia rialaithe, 0.3 faoin gcéad; aiste bia ard-P, 1.5 faoin gcéad ). Socraíodh an tiúchan P san aiste bia ard-P go 1.5 faoin gcéad ó thug ár staidéir roimhe seo faoi deara go n-eascraíonn tiúchan P chothaithe de 1.5 faoin gcéad

nephrocalcinosis dian6, 7, 12, 14） agus slonn ard OPN12）. Bhí an tiúchan céanna Ca (0.5 faoin gcéad) ag gach aistí bia turgnamhacha. Taispeántar tiúchain P agus Ca, mar a chinntear trí anailís ar na aistí bia turgnamhacha, iTáblae 1. Roimh thús an staidéir, bhí na francaigh go léir acclimatized ar feadh 7 lá, agus le linn an ama sin tugadh rochtain saor in aisce dóibh ar an aiste bia rialaithe agus uisce dí-ianaithe. Tar éis na tréimhse acclimatization, roinneadh na francaigh go randamach ina dhá ghrúpa le meánmheáchan coirp comhchosúla agus chothaigh siad an aiste bia rialaithe (grúpa rialaithe) nó an aiste bia ard-P (grúpa ard-P) ar feadh 14 lá. Tugadh rochtain saor in aisce do francaigh ar aistí bia turgnamhacha sannta agus ar uisce dí-ianaithe le linn na tréimhse turgnamhacha. Ag deireadh na tréimhse turgnamhaí, rinneadh francaigh a eotanú trí instealladh intraperitoneal den mheascán ainéistéiseach (medetomidine, midazolam, agus butorphanol), agus fuil agusduánBailíodh samplaí le haghaidh anailíse. Rinneadh samplaí fola a lártheifneoiriú agus úsáideadh súdairí mar shamplaí séirim. Baineadh na duáin agus caitheadh ​​amach an capsúl duánach. An serum agusduánStóráladh samplaí ag －80 céim go dtí go raibh gá leo le haghaidh anailíse. Baineadh úsáid as an duán ceart le haghaidh anailís chainníochtúil ar Bmp2 agus Spp1 mRNA, agus ar chléduánBaineadh úsáid as chun anailís a dhéanamh ar thiúchan Ca agus P.

Anailís mianraí.

Samplaí de na aistí bia turgnamhacha agusduáina luaithreach ag 550 céim ar feadh 48 h i bhfoirnéis muffle, agus baineadh mianraí i 1 mol/L de HCl le haghaidh anailíse. Ca tiúchan sna aistí bia turgnamhacha agusduáinarna chinneadh ag speictrophotiméadracht ionsú adamhach16）. tiúchan P sna aistí bia turgnamhacha agusduáinRinneadh anailís orthu ag baint úsáide as an modh Gomori17）.

Anailís chainníochtúil ar mRNA Bmp2 agus Spp1.

Rinneadh RNA iomlán a leithlisiú ón duán homogenized ag baint úsáide as imoibrí TRIzol (Life Technologies, CA, USA) de réir sonraíochtaí an mhonaróra. Rinneadh measúnú ar mhéid agus ar íonacht an RNA ag baint úsáide as NanoDrop 2{000c (Thermo Fisher Scientific, MA, USA). Rinneadh cDNA a shintéisiú ag baint úsáide as an SuperMix Sintéis Chéad-Snáithe SuperScript III le haghaidh qRT-PCR (Teicneolaíochtaí Saoil) agus ansin cuireadh faoi réir RT-PCR cainníochtúil fíor-ama ag baint úsáide as SYBR Select Master Mix (Teicneolaíochtaí Saoil). Baineadh úsáid as primers sonracha18-20) chun anailís a dhéanamh ar Bmp2 (ar aghaidh, 5'-ACCGTGCTCAGCTTCCATCAC-3'; droim ar ais, 5'-TTCCTGCATTTGTTCCCGAAA-3'), Spp1 (ar aghaidh, 5'- TGAGACTGGCAGTGGTTTGC-3'; droim ar ais, 5'-CCACTTTCACCGGGAGACA-3'), agus Gapdh (ar aghaidh, 5'-TGGGAAGCTGGTCATCAAC-3'; droim ar ais, 5'-GCAT-CACCCCATTTGATGTT{{26} }'). Rinneadh an t-imoibriú PCR fíor-ama ag baint úsáide as Córas PCR Fíor-Ama StepOne (Bithchórais Fheidhmeach, CA, SAM), agus normalaíodh leibhéil slonn mRNA go leibhéil Gapdh mRNA. Measadh gurbh é luach an ghrúpa rialaithe ná 1.00.

Anailís staitistiúil.

Cuirtear torthaí i láthair mar acmhainn ± SEM do gach grúpa de 6 francach. Tar éis tástáil-F a dhéanamh chun aonchineálacht na n-athraitheas a fháil amach, baineadh úsáid as tástáil t an Dalta chun difríochtaí suntasacha idir an dá ghrúpa a chinneadh. Mura raibh aonchineálacht na n-athraitheas cothrom, baineadh úsáid as t-tástáil Welch in ionad t-thástáil an Mhic Léinn. Measadh go raibh difríochtaí suntasacha ag p ＜ 0.05

Torthaí

Meáchan coirp, iontógáil bia, agus anailís serum.

Laghdaíodh meáchan coirp deiridh agus iontógáil bia go suntasach sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Tábla 2). Duánmeáchan agus tiúchan mianraí.Duánméadaíodh meáchain fliuch agus tirim go suntasach sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Tábla 3). DuánMéadaíodh tiúchan Ca agus P go suntasach freisin sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe.

Slonn mRNA Duánach Bmp2 agus Spp1.

Méadaíodh leibhéil mRNA Bmp2 sa ghrúpa ard-P go suntasach i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Fig.1A). Méadaíodh léiriú mRNA de Spp1 go suntasach freisin sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe (Fig. 1B).

Plé

Ceann de na héifeachtaí fiseolaíocha atá ar eolas go maith ar aiste bia ard-P ná forbairt nephrocalcinosis. Sa staidéar reatha, méadaíodh tiúchan Ca agus P na duáin sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, atá ag teacht le torthaí na staidéar roimhe seo1-6）. Thuairiscigh staidéir roimhe seo go raibh comhghaol dearfach idir scóir histological nephrocalcinosis agus tiúchan Ca agus P duáin4, 21）. Mar sin, cé nach ndearnadh aon bhreathnóireacht histeolaíoch ar an duán sa staidéar reatha, léiríonn tiúchan méadaithe Ca agus P na duáin gur tharla nephrocalcinosis de bharr an aiste bia ard-P.

Toisc go meastar go ginearálta gur foirm de hidroxyapatite6, 7） iad na taiscí Ca a tharlódh ó aiste bia ard-P6, 7）, rinneamar hipitéisiú go bhfuil forbairt nephrocalcinosis á rialú ag meicníocht cosúil le meicníocht osteogenesis. Mar sin, rinneamar scrúdú ar éifeachtaí aiste bia ard-P ar abairt Bmp2 mRNA sa duán. Na torthaí

léirigh gur méadaíodh léiriú mRNA Bmp2 duánach sa ghrúpa ard-P agus go n-eascraíonn aiste bia ard-P upregulation de abairt mRNA Bmp2 sa duán. D’fhéadfadh an toradh seo cuidiú le cuntas a thabhairt ar mheicníocht forbartha nephrocalcinosis a tharlódh de bharr aiste bia ard-P. Cé go bhfuil easpa fianaise chinntitheach a thacaíonn lenár hipitéis, tá féidearthacht amháin ann go bhfuil léiriú ar fhachtóirí trascríobh osteigineacha ardaithe i réigiúin chailcithe sa duán. Spreagann BMP2 difreáil osteoblast agus foirmiú cnámh trí fhachtóirí trascríobh osteigineacha a rialáil mar Osterix, Runx2, agus Msx28, 9）; mar sin, féadfaidh BMP2 nephrocalcinosis a chur chun cinn trí fhachtóirí trascríobh oistéigineacha den sórt sin a rialáil. Faoi láthair, tá ról mionsonraithe BMP2 i bhforbairt nephrocalcinosis fós doiléir. Ina theannta sin, ós rud é nach ndearnadh ach an abairt Bmp2 mRNA a thomhas sa staidéar seo, ní fios an bhfuil difríocht sa abairt próitéin BMP2. Mar sin féin, molann ár dtorthaí meicníocht fhéideartha trína n-imríonn athruithe i slonn BMP2 ról láidir i bpaitigineas nephrocalcinosis ard-P de bharr aiste bia.

Dhírigh an staidéar reatha ar shloinneadh mRNA Spp1 chomh maith le slonn Bmp2 mRNA. Léirigh ár staidéar roimhe seo ag baint úsáide as anailís imdhíon-histochemical leibhéil arda de léiriú OPN i feadáin duánach na bhfrancaigh a chothaítear aiste bia ard-P12）. Fuarthas amach sa staidéar reatha gur tháinig méadú thart ar 10-thart ar slonn mRNA Spp1 sa ghrúpa ard-P. Léiríonn torthaí na staidéar reatha agus staidéir roimhe seo go spreagann aiste bia ard-P léiriú OPN sa duán. Ar an láimh eile, léirigh taighdeoirí eile go bhfuil OPN mar mhaitrís cloiche ina fhachtóir tábhachtach i bhfoirmiú clocha urinary22, 23）; mar sin, mhol ár dtuarascáil roimhe seo go bhféadfadh ról a bheith ag OPN mar chomhpháirt maitrís i bhfoirmiú taiscí Ca de bharr aiste bia ard-P12）. Mar sin féin, tá Paloian et al. tuairiscíodh le déanaí go bhfuil ról ag OPN i gcosc nephrocalcinosis ard-P de bharr aiste bia i lucha OPN KO24）. Is é sin le rá, is dealraitheach gurb é an ról fiseolaíoch atá ag OPN ar nephrocalcinosis a tharchuirtear le aiste bia ard-P faoi chois seachas cur chun cinn calcaithe sa chorp.duán. Ina theannta sin, tuairiscítear i dtuarascálacha roimhe seo go n-ardaíonn leibhéil OPN chun tuilleadh calcaithe ectopic pathologic a fhritháireamh iduánagus soithíoch de réir mar a dhéantar OPN a rialáil ar shuíomh an chailcithe phaiteolaíoch.

Mar a luadh thuas, mhol an staidéar reatha an tábhacht a bhaineann le BMP2 agus OPN i nephrocalcinosis ard-P de bharr aiste bia. Is fiú a thabhairt faoi deara go meastar go bhfuil éifeachtaí BMP2 agus OPN ar fhorbairt nephrocalcinosis á rialú ag meicníochtaí éagsúla. D’fhéadfadh na difríochtaí meicniúla seo a léiriú go bhfuil meicníocht bhunúsach nephrocalcinosis casta. Is é an chéad phointe eile le breithniú ná go bhféadfadh go mbeadh tionchar ag cosc ​​ar fhás ar abairt mRNA Bmp2 agus Spp1 saduántoisc gur tugadh faoi deara sa staidéar reatha laghdú ar mheáchan coirp deiridh i ngrúpa ard-P. B’fhéidir go gcuideodh tuairimí inár staidéir 12） agus láithreacha roimhe seo leis an bpointe seo a chur san áireamh. Thuairiscigh muid roimhe seo méadú ar léiriú próitéin OPN i tubules duánach na bhfrancach a bhfuil a bhfás

níor chuir aiste bia ard-P isteach air12）. Thairis sin, léirigh an staidéar reatha cosc ​​​​ar fhás sa ghrúpa ard-P, ach leibhéil arda de léiriú mRNA Spp1 sa duán. Bunaithe ar na breathnuithe seo, is cosúil nach bhfuil mórán éifeacht ag an staidéar reatha ar chosc fáis ar abairt mRNA Bmp2 agus Spp1. Mar sin féin, ní léir sonraí an chaidrimh idir cosc ​​ar fhás agus léiriú géine Bmp2 agus Spp1. Dá bhrí sin, tá gá le himscrúduithe breise chun an pointe seo a shoiléiriú.

Mar fhocal scoir, chun meicníocht forbartha nephrocalcinosis a tharlódh de bharr aiste bia ard-P a shoiléiriú, chinn an staidéar reatha éifeachtaí aiste bia ard-P ar abairt mRNA Bmp2 agus Spp1 saduán. Méadaíodh tiúchan Duán Ca agus P go suntasach sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. Ina theannta sin, méadaíodh léiriú mRNA de Bmp2 agus Spp1 go suntasach sa ghrúpa ard-P i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe. Léiríonn na torthaí seo go gcothaíonn aiste bia ard-P upregulation de Bmp2 agus Spp1 abairt mRNA saduán.

Tagairtí

1） Hitchman AJ, An bhfuil SA ar bith aige, Hitchman A, Harrison JE, Tam C: Calcification duánach de bharr fosfáite sa francach. An féidir J Physiol Pharmacol 57: 92-97, 1979

2） Parker HE: Idirghaolmhaireachtaí maignéisiam agus fosfar ag leibhéil leordhóthanacha de bhreis ar leibhéil fosfair aiste bia. Nutr Rep Int 32: 1311-1318, 1985

3） Ritskes-Hoitinga J, Lemmens AG, Danse LHJC, Beynen AC: Nephrocalcinosis arna spreagadh le fosfar agus feidhm duáin i bhfrancaigh baineanna. J Nutr 119: 1423-1431, 1989

4） Cockell KA, L'Abbe MR, Belonje B: Bíonn tionchar ag na tiúchain agus an cóimheas idir cailciam agus fosfar aiste bia ar fhorbairt nephrocalcinosis i bhfrancaigh baineanna. J Nutr 132: 252-256, 2002

5). J Nutr Sci Vitimín 61: 195-200, 2015

6） Matsuzaki H, Uehara M, Suzuki K, Liu QL, Sato S, Kanke Y, Goto S : Cothaíonn aiste bia ard-fosfair go tapa nephrocalcinosis agus gortú tubular cóngarach i bhfrancaigh. J Nutr Sci Vitimín 43: 627-641, 1997

7) Liu QL, Sato S, Kishikawa T, Matsuzaki H, Yamanaka N: Éifeachtacht leigheas traidisiúnta na Síne, Wulingsan, maidir le forbairt nephrocalcinosis a tharlódh de bharr aiste bia ard-fosfair i bhfrancaigh óga a shochtadh. Micreascóp Med Leictreon 34: 103-114, 2001

8） Sirard C, Kim S, Mirtsos C, Tadich P, Hoodless PA, Its A, Maxson R, Wrana JL, Mak TW: Léiríonn cur isteach spriocdhírithe i gcealla murine riachtanas athraitheach do Smad4 maidir le comharthaí fáis a bhaineann le fachtóir fáis a athrú. J Biol Chem 275: 2063-2070, 2000

9） Matsubara T, Kida K, Yamaguchi A, Hata K, Ichida F, Meguro H, Aburatani H, Nishimura R, Yoneda T: rialaíonn BMP2 Osterix trí Msx2 agus Runx2 le linn difreáil osteoblast. J Biol Chem 283: 29119-29125, 2008

10） Urist MR : Cnámh: Foirmiú trí uath-ionduchtúchán. Eolaíocht 150: 893-899, 1965

11） Wozney JM, Rosen V, Celeste AJ, Mitsock LM, Whitters MJ, Kriz RW, Hewick RM, Wang EA: Úrscéal Rialálaithe foirmiú cnámh: Cluain Eois agus gníomhaíochtaí móilíneacha. Eolaíocht 242: 1528-1534, 1988

12） Matsuzaki H, Katsumata S, Uehara M, Suzuki S, Miwa M: spreagann aiste bia ard-fosfair léiriú osteopontin tubules duánach i bhfrancaigh. J Clin Biochem Nutr 41: 179-183, 2007

13） Cousins ​​FB, Geary CPM: Calcification duánach de réir gnéis i bhfrancaigh. Dúlra 211 : 980-981, 1966

14） Matsuzaki H, Katsumata S, Masuyama R, Uehara M, Nakamura K, Suzuki K: Difríochtaí gnéis i dtiúchan mianraí duáin agus eisfhearadh albaimin urinary i bhfrancaigh a dtugtar beatha ard-fosfair dóibh. Biosci Biotechnol Biochem 66: 1737-1739, 2002

15） Reeves PG, Nielsen FH, Fahey GC Jr: AIN-93 aistí bia íonaithe le haghaidh creimirí saotharlainne: Tuarascáil deiridh coiste scríbhneoireachta ad hoc Institiúid Cothaithe Mheiriceá ar athfhoirmliú an AIN-76Aistí bia creimire . J Nutr 123: 1939-1951, 1993

16） Gimblet EG, Marney AF, Bonsnes RW: Cailciam agus maignéisiam i serum, fual, aiste bia, agus stól a chinneadh trí speictreafótaiméadracht ionsúcháin adamhach. Clinic Chem 13 : 204-214, 1967

17） Gomori G: Mionathrú ar an gcinneadh dathmhéadrach fosfair le húsáid leis an dathmhéadar fhótaileictreach. J Lab Clin Med 27: 955-960, 1942

18) Ming LG, Lv X, Ma XN, Ge BF, Zhen P, Song P, Zhou J, Ma HP, Xian CJ, Chen KM: Cuireann an grúpa prenyl le gníomhaíochtaí phytoestrogen 8-prenynaringenin chun foirmiú cnámh a fheabhsú agus cosc ​​a chur ar resorption cnámh in vitro. Inchríneolaíocht 154: 1202-1214, 2013

19） Kreke MR, Huckle WR, Goldstein AS: Spreagann sreabhadh sreabhán léiriú osteopontin agus sialoprotein cnámh trí chealla stromal smeara ar bhealach a bhraitheann go sealadach. Cnámh 36: 1047-1055, 2005

20） Drechsler J, Grotzinger J, Hermanns HM: Tréithriú an choimpléasc receptor oncostatin M francach atá cosúil leis an duine ach atá difriúil leis an ngabhdóir cítocine murine. PLoS a hAon 7: e43155, 2012

21） Hoek AC, Lemmens AG, Mullink JWMA, Beynen AC: Tionchar cailciam aiste bia: cóimheas fosfar ar eisfhearadh mianraí agus nephrocalcinosis i bhfrancaigh baineanna. J Nutr 118: 1210-1216, 1988 

22) Kohri K, Suzuki Y, Yoshida K, Yamamoto K, Amasaki N, Yamate T, Umekawa T, Iguchi M, Shinohara H, Kurita T: Clónáil mhóilíneach agus seicheamhú cDNA ag ionchódú próitéin cloiche urinary, atá comhionann le osteopontin. Biochem Biophys Res Commun 184: 859-864, 1992

23） Kohri K, Nomura S, Kitamura Y, Nagata T, Yoshioka K, Iguchi M, Yamate T, Umekawa T, Suzuki Y, Shinohara H, Kurita T: Struchtúr agus léiriú an próitéin cloiche urinary ionchódaithe mRNA (Osteopontin). J Biol Chem 268: 15180-15184, 1993

24） Paloian NJ, Leaf EM, Giachelli CM: tástálacha pro Osteopontin i gcoinne nephrocalcinosis ard-spreagtha fosfáit agus cailciú soithíoch. Duán Int 89: 1027-1036, 2016

25） Giachelli CM, Bae N, Almeida M, Denhardt DT, Alpers CE, Schwartz SM: Tá Osteopontin ardaithe le linn foirmiú neointima in artairí francaigh agus is comhpháirt nua é de phlaiceanna atherosclerotic daonna. J Clin Invest 92: 1686-1696, 1993