Cuireann Acidosis Eischeallach Srian le Meitibileacht Aoncharbóin Agus Caomhnaíonn sé Géine Cille T

Cuireann carnadh táirgí dramhaíola meitibileach aigéadach laistigh den mhicrea-thimpeallacht siadaí bac ar fheidhmeanna éifeachtóra na limficítí a ardaíonn siadaí (TILanna). Mar sin féin, níl sé soiléir conas a théann timpeallacht aigéadach i bhfeidhm ar mheitibileacht agus ar dhifreáil chealla T. Léirímid anseo go ndéanann nochtadh fada d’aigéad athchlárú ar mheitibileacht incheallach cille T agus folláine miteachondrial agus go gcaomhnaíonn sé gascheall cille T. Go meicniúil, cuireann aigéadóis eischeallach ardaithe isteach ar iontógáil agus meitibileacht meitiainín trí íosrialáil SLC7A5, agus mar sin ag athrú sil-leagan H3K27me3 ag tionscnóirí príomhghéinte gascheall T. Cothaíonn na hathruithe seo staid 'chuimhne gas' agus feabhsaíonn siad marthanacht fhadtéarmach in vivo agus éifeachtúlacht frith-meall i lucha. Ní hamháin go léiríonn ár dtorthaí cumas aigéadóis eischeallach gan choinne chun airíonna gas-chosúil na gcealla T a chothabháil ach freisin cuireann ár dtuiscint ar an gcaoi a dtéann meitibileacht meitiainín i bhfeidhm ar ghaschealla T.

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Léiríonn aistriú uchtaithe cealla T a bhaineann go sonrach le meall-antigen chun cinn mór i réimse na teiripe ailse, toisc go bhfuil sé mar thoradh ar aischéimniú iomlán urchóideacha áirithe. Braitheann a éifeachtúlacht theiripeach go mór ar mharthanacht agus stádas difreála na gcealla T aistrithe1,2. Is iad cealla T cuimhne nach bhfuil chomh difreáilte an daonra is fearr le haghaidh aistriú cille T uchtála (ACT) mar gheall ar a n-airíonna cosúil le gaschealla d'fhéin-athnuachan agus d'ilchumhachta3,4. Go deimhin, tá sé léirithe go n-éiríonn le húsáid cealla cuimhne T cosúil le gas le haghaidh ACT freagraí frith-meall níos fearr5. I gcomparáid le cealla éifeachtóra T atá difreáilte go foirceanta, taispeánann cealla T cosúil le gas sainmharcanna ar leith6. Is sainairíonna iad cealla T cosúil le gas daonna agus luch araon mar gheall ar a léiriú ar mhóilíní a bhfuil taithí acu ar antaigin agus a bhaineann le homing, lena n-áirítear leibhéil arda CD62L agus CCR7 (tag. 7 ). Tá dul chun cinn suntasach tagtha le blianta beaga anuas8-10 lenár dtuiscint ar na próifílí tras-scríobhacha, ar na modhnuithe eipigineacha, agus ar na bealaí meitibileach a rialaíonn cealla T cosúil le gas. Tuairiscíodh go bhfuil róil riachtanacha ag roinnt fachtóirí tras-scríobhacha, mar shampla TCF1, KLF2, agus LEF1, maidir le gascheall T chealla a thiomáint nó a chothabháil9. Go háirithe, is é TCF1 an príomhfhachtóir trascríobh a chuireann chun cinn giniúint cealla T cuimhne fadsaoil11. Le linn ionfhabhtuithe ainsealacha, cothaíonn codán beag de chealla T cosúil le gas TCF freagraí T chealla in aghaidh ionfhabhtú tánaisteach1,12. Soláthraíonn athruithe eipigéiniteacha bealach do chealla T chun tús a chur le hathruithe tras-trascríobhacha atá mar bhunús le tréithe cille cuimhne a fháil agus na patrúin slonn trascríobhacha seo a chothabháil13. Tá sé léirithe ag staidéir iolracha go bhfaightear trimethylation de histone H3 ag K4 (H3K4me3), modhnú a bhaineann le gníomhachtú, ag loci géine a bhaineann le cuimhne, lena n-áirítear TCF7, KLF2, LEF1, CCR7 agus SELL, le linn difreáil CD naive{47 }} cealla T ina gcealla cuimhne T, ach cailltear trímheitiolú H3 ag K27 (H3K27me3), modhnú faoi chois, ag na loci13-15 seo. Os a choinne sin, léirigh géinte a bhaineann le héifeachtaí (GZMB, PRF1, IFNG, agus TBX21) modhnuithe epigenetic laghdaithe cosnochta agus gníomhachtúcháin ag na loci seo i gcealla éifeachtóra T13,16. Mar fhocal scoir, tugann línte carntha fianaise le fios go n-ordaíonn ciorcaid mheitibileach cinntí cinniúint T cille agus go múnlaítear a staideanna epigenetic agus feidhmiúla17. Tá cealla éifeachtóra gearrsaoil T an-glicolytic agus ag brath ar mheitibileacht aon-charbóin18,19, ach léiríonn cealla T cuimhne gas-chosúil próifílí meitibileach ar leith arb iad is sainairíonna iad ocsaídiú aigéad sailleach méadaithe (FAO) agus cumas riospráide spártha mitochondrial (SRC), an cardinal. tréithe a bhaineann le marthanacht fhadtéarmach20–22. Dá bhrí sin, tá athchlárú meitibileach tábhachtach chun gas agus maireachtáil fhadtéarmach cealla T a fháil go héifeachtach.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Is é an microenvironment meall inmunosuppressive (TME), arb é is sainairíonna é pH íseal, hypoxia, díothacht glúcóis, agus saibhriú aigéid lachtaigh, an príomh-bhacainn a chuireann bac ar leathnú cille T ceart, idirdhealú agus feidhmiúlacht23,24. Go deimhin, cuireann an strus meitibileach a chuireann an TME isteach ar chumas agus ar fholláine miteachondrial, rud a chuireann faoi deara neamhdhóthanacht meitibileach cille T intratumoral agus mífheidhmiú25–28. Is díol spéise é go bhfuil an chuid is mó de na limficítí a insíothlaíonn siadaí (TILanna) mífheidhmiúil, ach go gcoinníonn codán beag cuimhne cosúil le gas nó airíonna réamhtheachtaithe7,29. Caomhnaíonn an fo-thacar TIL seo atá cosúil le gas acmhainneacht iomadúil agus marthanacht agus tá baint aige le freagairt fhabhrach ar imshuí seicphointí imdhíonachta (ICB) agus TIL-ACT i ndaoine a bhfuil ailse orthu11,30. Tá sé léirithe ag staidéir roimhe seo gur chuir aigéadóis eischeallach ardaithe (↑[H+ ]) gníomhaíocht chitealaíoch cealla T in vitro agus in vivo31-33 faoi chois. Ina theannta sin, tá tionchar nach beag ag an TME aigéadach ar ghníomhaíocht agus ar dhifreáil na gceall mialóóideach a insíothlaíonn siadaí, amhail cealla dendritic (DCanna) agus macraphages a bhaineann le siadaí (TAMs)34–36. Mar sin féin, tá an tionchar atá ag ↑[H+] ar gaschealla T agus folláine meitibileach fós anaithnid den chuid is mó. Anseo, tuairiscímid go n-éascaíonn nochtadh fadtéarmach in vitro ↑[H+ ] idirdhealú idir cealla T CD8+ daonna agus luch cosúil le gas, ar chostas cealla T CD8+ críochfoirt éifeachtóra. Fuaireamar amach go ndéanann cóireáil fhadtéarmach ↑[H+] meitibileacht T-chealla a athmhúnlú agus go gcothaíonn sé cumas riospráide miteachondrial. Ina theannta sin, cuireann nochtadh leanúnach ↑[H+ ] isteach ar iontógáil agus meitibileacht meitiainín, rud a fhágann ina dhiaidh sin go laghdaítear sil-leagan H3K27me3 de ghéinte a bhaineann le cuimhne, rud a éascaíonn cothabháil stádais 'chuimhne gas'. Ar deireadh, léiríonn aistriú uchtaíoch cealla T saothraithe i ↑[H+ ]-coinníollacha gníomhaíocht fhrith-meall in vivo, i gcomhréir lena feinitíopa nach bhfuil chomh ídithe. Mar sin, taispeánann ár staidéar an ról gan choinne atá ag aigéadóis eischeallach i gcaomhnú gascheall T cille trí mheitibileacht cheallacha agus patrúin eipigineacha a athmhúnlú.

Torthaí

Cothaíonn nochtadh ↑[H+ ] gascheall cille CD8+ T

Chun a chinneadh an bhfuil tionchar ag eischeallach ↑[H+ ] ar dhifreáil T chealla cosúil le gas, rinneamar anailís shreabhadh ciiméadrach ar phríomh-fheinitíopaí cosúil le gas ar chealla T daonna saothraithe ar feadh 12 lá i gceachtar meán rialaithe, ↑[H+ ] meáin ina bhfuil aigéad lachtaigh 10 mM (ag déanamh aithrise ar an tiúchan lachtáit i gcásanna paiteolaíocha23,35) nó meán aigéadach (~pH 6.6, ag aigéad hidreaclórach) (Fíor 1a). Chonacthas comhréir níos airde de chealla T CD8+ cosúil le gas, lena n-áirítear cuimhne luath (CD45RO− CD27+ ) agus cuimhne lárnach (CD45RO+ CD27+ ), i gcealla T a bhfuil riocht orthu in ↑ [H+ ] in aghaidh meán rialaithe (Sonraí Breisithe Fíor 1a). Ina theannta sin, fuaireamar amach go raibh céatadán níos airde de chealla cosúil le gas (CCR- CD62L+ ) (Fíor 1b) ag cealla T saothraithe i meán ↑[H+]. Is fiú a thabhairt faoi deara, thugamar faoi deara go bhfuil méadú suntasach tagtha ar léiriú TCF1, an príomhfhachtóir a stiúrann idirdhealú cuimhne lárnach agus gas, ag an leibhéal próitéine i gcealla T CD daonna agus lucha araon nochta do ↑[H+ ] (Fíor 1c agus Sonraí Breisithe Fíor 1b). Ina theannta sin, bhí éifeacht [H + ]-tiúchan-spleách ar CCR7 agus TCF1 slonn (Sonraí Breisithe Fíor. 1c). I gcomhréir leis an bhfeinitíopa cosúil le gas de chealla T ↑[H+]-coinníollaithe, laghdaíodh táirgeadh fachtóir neacróis intracellular (IFN- ) agus meall neacróis (TNF-) go suntasach sna cealla seo (Fíor 1d).

Chun stádas difreála na gceall T a iniúchadh níos fearr, rinneamar anailís ar sheicheamhú RNA (RNA-seq) agus fuarthas amach go raibh próifíl trascríobh ar leith mar thoradh ar nochtadh fadtéarmach in vitro ↑[H+ ] (Sonraí Breisithe Fíor 1d). Mar thoradh ar nochtadh do ↑[H+ ] tháinig laghdú thar cuimse ar léiriú géinte ag ionchódú móilíní éifeachtóra, mar shampla PRF1, GZMB agus IFNG, agus an receptor comh-choiscthe BTLA (Fíor 1e,f agus Sonraí Breisithe Fíor 1e). I gcodarsnacht leis sin, léirigh cealla T ↑[H+]-shaothraithe léiriú níos airde ar BACH2, CCR7, LEF1 agus TCF7, a chomhghaolann le gascheall cille T (Fíor 1e,f agus Sonraí Breisithe Fíor 1e). Léirigh anailís saibhrithe tacair géine (GSEA) go raibh an patrún trascríobh a tharlódh de bharr nochtadh ↑[H+] cosúil leis sin de chealla cuimhne T (Fíor 1g agus Sonraí Breisithe Fíor 1f). Ina theannta sin, dheimhnigh anailís chainníochtúil imoibriú slabhrúil polaiméaráise (qPCR) abairt mRNA méadaithe de BACH2, KLF2, LEF1 agus TCF7 tar éis cóireála ↑[H+] (Fíor 1h). I dteannta a chéile, tacaíonn na tuairimí seo leis an bhfíric go múnlaíonn cóireáil ↑[H+ ] próifílí tras-scríobhacha na gcealla T go mór chun gastacht a shuíomh. Is fiú a thabhairt faoi deara, fuaireamar amach gur chuir cóireáil ↑[H+] bac ar iomadú cille T agus go raibh an dáileadh cille-timthriall sceabhach i dtreo na céime G1 agus ar shiúl ón gcéim S (Fíor Fhorlíontach 1a-c). Scrúdaigh muid gníomhachtú cille T ar chóireáil ↑[H+] le linn spreagadh TCR agus fuarthas amach nach bhfuil aon éifeacht shuntasach ag nochtadh ↑[H+] ar léiriú marcóirí gníomhachtaithe cille T nó méid cille (Fíor Forlíontach 2a,b). Ina theannta sin, dheimhnigh muid freisin go bhféadfadh nochtadh ↑[H+] tar éis gníomhachtú cille T staid gas-cosúil de chealla T a aslú fós (Fíor Forlíontach 2c-f). Cuireann na torthaí seo as an áireamh an fhéidearthacht go bhfuil cealla T a nochtar do ↑[H+ ] go simplí teasfhulangach ó thaobh spreagthachta, seachas staid cosúil le gas a ghlacadh.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Léiríodh i dtuarascálacha roimhe seo go gcuireann an milieu aigéadach bac géar ar ghníomhaíocht chitolytic cealla T in vitro agus in vivo23,31. Fuaireamar amach freisin go ndearna nochtadh gearrthéarmach ↑[H+] lagú ar tháirgeadh cítocíní ach gur beag an tionchar a bhí aige ar an bhfeinitíopa cosúil le gas i gcealla T (Sonraí Breisithe Fíor. 1g-i agus Fíor Fhorlíontach Fíor 3a-c). Ina theannta sin, tá na héifeachtaí coisctheacha a bhaineann le táirgeadh cítocín trí nochtadh ↑[H+] neamhbhuan agus inchúlaithe toisc go ndéanann baint ↑[H+ ] an táirgeadh citocín a athchóiriú go tapa trí chealla T (Sonraí Breisithe Fíor 1h). Mar sin, tá cosc ​​ar fheidhm éifeachtóra cille T ag an milieu aigéadach an-tapa, ach tá gá le nochtadh fada ↑[H+] chun gascheall cille T a athchlárú. Toisc go bhfuil lachtáit i láthair i dtuaslagán ina fhoirm neamh-dissociated (aigéad lachtaigh) nó mar salann ian (lachtáit sóidiam), d'fhéachamar le fáil amach an raibh lachtáit sóidiam ag taispeáint éifeachtaí comhchosúla ar gascheall T agus fuair sé amach gur chuir lachtáit sóidiam comharthaí gasta chun cinn freisin, cé go raibh a éifeachtúlacht i bhfad níos ísle ná an éifeachtúlacht a bhain le cóireáil aigéid lachtaigh (10 mM) (Sonraí Breisithe Fíor 1j,k agus Fíor Forlíontach 4a-f). Tugann na torthaí seo le fios an tábhacht a bhaineann le ↑[H+ ] agus an difríocht a bhaineann leis ó chóireáil ian lachtaigh, in ionduchtú feinitíopa cosúil le gas de chealla T CD8+.

Fíor 1|Éascaíonn nochtadh ↑[H+ ] idirdhealú a dhéanamh ar chealla T CD8+ cosúil le gas. Scéimre de ghníomhachtú cille T daonna sna coinníollacha a léirítear: pH 7.4 (–↑[H+ ], rialú), pH 6.6 (+↑[H+ ], aigéad hidreaclórach), nó aigéad lachtaigh 10 mM (+↑[H+ ]). PBMCanna, cealla mononuclear fola forimeallach. b, Próifílí slonn ionadaíocha CCR7 agus CD62L i gcealla daonna CD8+ T faoi choinníollacha éagsúla ag lá 12. n=3 samplaí neamhspleácha. c, Histeagraim ionadaíocha agus cainníochtú slonn TCF1 i gcealla daonna CD8+ T faoi choinníollacha éagsúla ag lá 12. n=3 samplaí neamhspleácha. MFI, meándéine fhluaraiseachta. d, leathnaíodh cealla T Daonna mar a tharla i gceann 12 lá agus spreagtar iad le phorbol 12-myristate 13-aicéatáit (PMA) ina bhfuil brefeldin A (BFA) ar feadh 4.5 h. Léirítear próifíl abairt intracellular IFN- agus TNF- do chealla T sa riocht pH 7.4 (ar chlé), aigéad lachtaigh 10 mM (lár), nó pH 6.6 (ar dheis). n=3 samplaí neamhspleácha. e, f, anailís RNA-seq ar chealla T daonna a leathnaíodh i rialú (pH 7.4) nó aigéad lachtaigh (10 mM). Léarscáil teasa de ghéinte roghnaithe (e) agus plota bolcán de na géinte go léir inar lipéadaíodh géinte a bhaineann le cuimhne, éifeachtóir, agus cealla T ídithe (f). Sa phlota bolcáin, seasann an x-ais don loga2-luachanna athraithe fillte (FC) do chealla atá cóireáilte le haigéad lachtaigh i gcoibhneas le rialtáin ag lá 12, agus seasann an y-ais do na luachanna P coigeartaithe. n=4 samplaí neamhspleácha. g, plota GSEA ag déanamh comparáide idir rialú agus cealla T atá oiriúnaithe d'aigéad lachtaigh le haghaidh éifeachtóra in aghaidh saibhriú cuimhne. NES, scór saibhrithe normalaithe. h, Léiriú cainníochtúil mRNA ar fhachtóirí trascríobh a bhaineann le gascheall cille T (BACH2, KLF2, LEF1, TCF7) i gcealla T faoi na coinníollacha atá léirithe. n=3 sampla neamhspleách. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± sem Rinneadh anailís staitistiúil a chinneadh trí thástáil dhá eireaball neamhphéireáilte an Mhic Léinn (b–d,h). Ríomhadh luachanna ainmniúla P agus rátaí fionnachtana bréagacha (FDRanna) le modh réamhshocraithe na mbogearraí GSEA (g).

Spreagann [H+ ] ardaithe athchlárú meitibileach

Taobh amuigh de na cláir thrascríobh ar leith, faigheann cealla T cosúil le gas tréithe uathúla meitibileach freisin, lena n-áirítear EBT ardaithe agus meitibileacht glycolytic srianta17,20,37. Chun iniúchadh a dhéanamh ar ghnéithe meitibileach cealla T fadtéarmacha in vitro ↑[H+ ]-nochta, rinneamar anailís saibhrithe Géine Ontology (GO) agus fuaireamar difríochtaí suntasacha i léiriú géinte a bhaineann le cosáin meitibileach, mar mheitibileacht mhóilíneach beag agus glicealú (Fíor 2a). Go deimhin, léirigh cealla T fadtéarmach ↑[H+ ]-coinníollaithe glicealú laghdaithe agus meitibileacht aimínaigéad i gcodarsnacht le meitibileacht mhéadaithe aigéid shailligh slabhra fada (Sonraí Breisithe Fíor 2a,b). Murab ionann agus nochtadh fadtéarmach ↑[H+ ], níor chuir cóireáil ghearrthéarmach ↑[H+ ] bac ach ar ghliogalú, ach ní raibh aon tionchar suntasach aige ar EBT (Fíor Fhorlíontach 5a). Dhearbhaigh anailís chainníochtúil PCR tuilleadh gur tháinig laghdú suntasach ar na géinte glicealú SLC2A1, SLC2A3 agus LDHA i gcealla T ↑[H+ ]-nochta (Sonraí Breisithe Fíor 2c). Os a choinne sin, chuir riochtú ↑[H+] chun cinn léiriú carnitine palmitoyltransferase 1 (ionchódaithe ag CPT1A), einsím a theorannú rátaí a bhaineann le EBT (Sonraí Breisithe Fíor 2c). Chun na hathruithe meitibileach a tharlódh le ↑[H+] a shoiléiriú tuilleadh, rinneamar anailís mheitibileachta neamhchlaonta agus fuaireamar 285 idirmheánach ar leith i gcealla T saothraithe le ↑[H+ ] i gcoinne rialuithe (Sonraí Breisithe Fíor 2d). Go háirithe, laghdaigh nochtadh do ↑[H+ ] go suntasach na hidirmheánacha glycolytic agus aimínaigéid riachtanacha áirithe in ionad méadú ar speicis carnitine iolracha, an fhoirm ghníomhachtaithe aigéid shailleacha a aistrítear go mitochondria le haghaidh ocsaídiúcháin (Sonraí Breisithe Fíor 2e-g). Léirigh anailís flosc meitibileach ag baint úsáide as [13C6] glúcóis nó [13C16]palmitate gur chuir nochtadh ↑[H+] bac mór ar ionchorprú glúcóis [13C6] in idirmheánacha TCA agus aigéad lachtaigh, agus ionchorprú [13C16]palmitate in aicéitil-CoA agus citrate á gcur chun cinn aige, ag tacú leis an nóisean. go shochtann acidosis extracellular glicealú agus a fheabhsaíonn EBT i gcealla T (Fig. 2b-e). Léirigh na cealla T ↑[H+ ]-coinníollacha seo teorainneacha maidir le hiontógáil cothaitheach, mar is léir ón laghdú ar thomhaltas glúcóis [13C6] agus ionsú analógacha lipid (BODIPY FL C16), toradh a d’fhéadfadh a bheith mar gheall ar ghrádán leictriceimiceach méadaithe. (Sonraí Breisithe Fíor 2h, i).

D'fhéadfadh athruithe ar na líonraí comharthaíochta i gcealla T a bheith mar thoradh ar iontógáil cothaitheach teoranta agus lasc meitibileacht cheallacha. Léirigh anailís saibhrithe GO ar chealla T cóireáilte le haigéad lachtaigh go bhfuil baint ag an chuid is mó de na géinte lena mbaineann go príomha le comharthaíocht PI3K-AKT, mTOR agus TCR (Sonraí Breisithe Fíor. 3a). Tá ról lárnach ag comharthaíocht mTOR maidir le comharthaí imdhíonachta agus leideanna meitibileach a chomhtháthú le haghaidh gníomhachtú ceart cealla T, agus cosc ​​a chur ar chealla comharthaíochta mTOR i dtreo cealla cuimhne CD8+ T a fhoirmiú in ionad difreáil éifeachtóra38–40. Léirigh ár n-anailís GSEA gur laghdaíodh gníomhaíocht comharthaíochta AKT-mTOR agus NF-кB i gcealla T ↑ [H + ] i gcomparáid leis an ngníomhaíocht i gcealla T rialaithe (Fíor 2f agus Sonraí Leathnaithe Fíor 3b). Deimhníodh é seo tuilleadh leis an bhfosfarylation laghdaithe de S6 (ag Ser235 agus Ser236), 4EBP1 (ag Thr37 agus Thr46), AKT (ag Ser473) agus NF-кB (ag Ser536) i gcealla T ↑ [H + ]-coinníollacha (Fíor. 2g,h agus Sonraí Breisithe Fíor 3c). Is eol go bhfuil mTOR ina rialtóir ríthábhachtach ar phróisis bhitheolaíocha éagsúla, lena n-áirítear méid cille, giniúint fuinnimh agus sintéis próitéin41. Go deimhin, fuaireamar amach gur laghdaíodh méid cille na gcealla T ↑[H+] i gcomparáid le cealla T rialaithe (Sonraí Breisithe Fíor. 3d). An chéad uair eile rinneamar measúnú ar shintéis próitéin bithfhuinnimh i gcealla T ↑[H+ ]-coinníollaithe ag baint úsáide as SCENITH, modh nuafhorbartha a úsáideann ionchorprú puromycin mar léamh amach ar leibhéil próitéin-sintéise42. Mar a bheifí ag súil leis, chuir nochtadh ↑[H+ ] sintéis próitéine atá dian ar fhuinneamh faoi chois (Fíor 2i), rud a thugann le tuiscint gur athraíodh meitibileacht fuinnimh i gcealla T CD8+. Tá na torthaí seo comhsheasmhach le torthaí roimhe seo gur mhéadaigh cosc ​​ar ghníomhaíocht mTOR ag rapamycin léiriú fachtóirí tras-scríobhacha a bhaineann le gas (Sonraí Breisithe Fíor. 3e,f). Agus ár dtorthaí á gcur le chéile againn, tagaimid ar an gconclúid go n-ordaíonn nochtadh fadtéarmach ↑[H+] lasc meitibileach agus go sochtann sé gníomhaíocht mTOR, rud a éascaíonn fáil agus cothabháil gascheall cille T.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

↑[H+ ]-idirghabhála srian meitibileacht meitiainín caomhnaíonn gas epigenetic

Tugann línte carntha fianaise le fios go n-ordaíonn meitibileacht aoncharbóin cinntí cinniúint T-chealla agus go múnlaíonn sé a staideanna feidhme43,44. Léirigh ár n-anailís RNA-seq saibhriú bocht don phróiseas meitibileach aon-charbóin agus síniú timthriall meitiainín i gcealla T a nochtar do chóireáil fhadtéarmach, seachas gearrthéarmach, ↑[H+ ] (Fíor 3a, Sonraí Breisithe Fíor 4a, agus Fíor Fhorlíontach 5b). Dá réir sin, chuir nochtadh ↑[H+ ] bac ar léiriú na n-einsímí ionchódaithe géinte a bhaineann leis an timthriall meitiainín (MTR, AHCY agus BHMT) chomh maith le meitibileacht folate (SHMT1 agus SHMT2) (Sonraí Breisithe Fíor 4b). Léirigh anailís mheitibileachta bhreise gur léirigh cealla T saothraithe in aigéad lachtaigh laghdú suntasach ar mheitibilítí intracellular a bhí páirteach sa timthriall meitiainín, lena n-áirítear meitiainín, S-adenosylmethionine (SAM) agus S-adenosylhomocysteine ​​(SAH), ach leibhéil mhéadaithe serine agus homocysteine ​​(Breathnaithe). Sonraí Fíor 4c). [13C5]dhearbhaigh rianú meitiainín freisin go raibh iontógáil agus flúirse incheallach meitiainín, SAM intracellular lipéadaithe 13C (m+5), SAH (m+4) agus 5′-meitil-thioadenosine (MTA, m). +1) laghdaíodh go suntasach i gcealla T ↑[H+ ]-nochta (Fíor 3b–d agus Sonraí Breisithe Fíor. 4d). Is fiú a thabhairt faoi deara, d'athchóirigh forlíonadh meitiainín exogenous an iontógáil agus an raidhse infhéitheach de [13C5] meitiainín chomh maith leis na hidirmheánacha ábhartha i gcealla T ↑[H+ ]-nochta (Fíor 3c,d agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 4d), ag tabhairt le tuiscint go bhfuil meitiainín eisghinteach ann. d'fhéadfadh forlíonadh iontógáil meitiainín agus meitibileacht cealla T ↑[H+ ]-nochta a athbhunú. An chéad uair eile rinneamar imscrúdú an féidir le srianadh meitiainín gascheall cille T a thiomáint. Fuaireamar amach gur chuir díothacht meitiainín go deimhin chun cinn ionduchtú daonra cille T TCF{1+ CD8+ ach ní raibh aon éifeacht aige ar léiriú CD62L agus CD44 (Sonraí Leathnaithe Fíor 4e,f). Chun tuilleadh staidéir a dhéanamh ar an ról atá ag meitibileacht meitiainín i ↑[H+ ] gascheall cille T ↑[H+], shaothraíodh cealla T le meán ↑[H+] arna fhorlíonadh le meitiainín, SAM, nó SAH. An feinitíopa de stemness cille T tharlódh de bharr acidosis extracellular bhí cosc, go deimhin, go páirteach ag fhorlíonadh le meitiainín nó SAM, ach ní SAH ( Fíor. 3e agus Sonraí Breisithe Fíor. 4g-i). Déantar meitiainín intracellular a thiontú ina SAM, deontóir grúpa meitile tábhachtach le haghaidh imoibrithe meitilation DNA agus histone (Sonraí Breisithe Fíor. 5a). Dá bhrí sin, tréith againn patrúin methylation histone agus fuarthas amach go ardaithe [H + ] laghdaigh go mór leibhéil H3K27me3 iomlán i gcealla T, ach ní raibh tionchar suntasach aige ar léiriú marcóirí methylation histone eile (Fíor. 3f agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 5b). De réir mar a bhíothas ag súil leis, d'athbhunaigh forlíonadh meitiainín le cealla T faoi ↑[H+ ] leibhéal iomlán slonn H3K27me3 (Fíor 3f). Spreag an laghdú sonrach ar an leibhéal H3K27me3 a breathnaíodh i gcealla T a ndearnadh cóireáil fhadtéarmach↑[H+ ] dúinn hipitéis a thabhairt go rialaíonn nochtadh ↑[H+ ] go roghnach an sain-mheitiltransferase maidir le sil-leagan H3K27me3. Go deimhin, thugamar faoi deara léiriú laghdaithe go suntasach ar EZH2, príomh-methyltransferase do H3K27me3, ag an leibhéal mRNA agus próitéine i gcealla T ↑[H+ ]-nochta (Sonraí Breisithe Fíor 5c,d). Ina theannta sin, mhéadaigh cosc ​​ar ghníomhaíocht EZH2 ag coscóir an-sonrach, GSK126, slonn TCF1, chomh maith leis an gcéatadán de chealla T CCR7+ CD62L+ CD8+ (Sonraí Leathnaithe Fíor. 5e,f) , a bhí ag teacht le tuarascáil roimhe seo go bhféadfadh EZH2 acmhainneacht cille cuimhne-T a rialáil trí mhodhnuithe epigenetic roghnacha45. Chun athruithe ar fud an ghéanóim a aithint i bpatrúin eipigineacha de ghaschealla T ↑[H+ ]-spreagtha, rinneamar an measúnú CUT&Tag-seq agus fuaireamar athruithe íosta ar chomhréireacht na sil-leagan H3K4me3 agus H3K27me3 i measc grúpaí cóireáilte éagsúla feadh an tionscnóra, an chorp géine agus réigiúin intergenic (Sonraí Leathnaithe Fíor 5g). Go sonrach, léirigh próifíliú eipigineach leibhéal laghdaithe de mharcóir histone faoi chois H3K27me3 ag lócais ghéine a bhaineann le cuimhne (mar shampla, TCF7, CCR7, ID3, LEF1 agus KLF2) i gcealla T fadtéarmacha ↑[H+ ]-chóireáilte (Fíor 3g). . Is tábhachtaí fós, trí mheitiainín a chur leis faoi nochtadh ↑[H+ ] go páirteach ar an leibhéal H3K27me3 ag na loci thuas, chomh maith lena léiriú géine, rud a thugann le tuiscint go bhfuil ról tábhachtach ag meitiainín i modhnú epigenetic na ngéinte cuimhne seo (Fíor 3g agus Sonraí Breisithe Fíor 5h). Ag teacht le staidéar roimhe seo14, fuair géinte éifeachtóra mar PRF1, GZMB, IFNG, TBX21 agus NR4A2 patrún gníomhach histone-methylation (H3K4me3hi agus H3K27me3lo) (Fíor 3g). Is díol suntais é, go raibh áitíocht H3K4me3 ag réigiúin tionscnóra de na géinte éifeachtóra seo lagaithe i gcealla T saothraithe faoi nochtadh ↑[H+ ] agus athchóiríodh iad le forlíonadh meitiainín (Fíor 3g). Tríd is tríd, léiríonn na torthaí seo go gcuireann cur isteach ↑[H+ ]-idirghabhála ar an timthriall meitiainín caomhnú epigenetic ar gas cille T chun cinn.

Is féidir le roinnt iompróirí meitiainín (SLCanna), lena n-áirítear SLC7A5, SLC38A1, SLC38A2, agus SLC43A2, iompar meitiainín a idirghabháil46. Chun imscrúdú a dhéanamh ar an gcaoi a laghdaíonn nochtadh ↑[H+ ] iontógáil meitiainín agus meitibileacht i gcealla T, rinneamar anailís ar phatrúin slonn SLCanna ar leith agus fuarthas amach go ndearna ↑[H+ ] íosrialú suntasach ar shloinneadh SLC7A5 agus SLC38A2, ach gur beag tionchar a bhí aige ar abairt SLC38A1 (Breisithe Sonraí Fíor 6a,b). Ina theannta sin, laghdaigh nochtadh ↑[H+ ] slonn agus gníomhaíocht MYC (Sonraí Leathnaithe Fíor 6c,d), a tuairiscíodh chun slonn iompróirí meitiainín cosúil le SLC7A5 (tag. 47) a rialáil. Léirigh muid freisin áitíocht ard MYC ar an tionscnóir SLC7A5 agus go pointe níos lú ar an tionscnóir SLC38A2 (Sonraí Leathnaithe Fíor. 6e). Rud atá tábhachtach, chonacthas laghdú suntasach ar MYC ceangailteach leis na loci seo i gcealla T a raibh cóireáil fhada orthu ↑[H+] (Sonraí Breisithe Fíor. 6e). Ag teacht leis na tuairimí seo, d'athchóirigh ró-eisiúint MYC an slonn SLC7A5 agus SLC38A2 i gcealla T ↑[H+ ]-nochta go suntasach (Sonraí Breisithe Fíor 6f). Tacaíonn na torthaí seo le ról tábhachtach MYC i léiriú laghdaithe iompróirí meitiainín nuair a nochtar ↑[H+ ]. Rud suimiúil, fuaireamar amach gur féidir le forlíonadh meitiainín léiriú MYC agus SLC7A5 a athbhunú i gcealla T ↑[H+ ]-nochta (Sonraí Breisithe Fíor. 6g), rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh forlíonadh meitiainín cumas glactha meitiainín cealla T a athbhunú trí iompróir meitiainín SLC7A5 a rialáil ar bhealach atá ag brath ar MYC. Léirigh staidéar roimhe seo gurb é SLC7A5 an t-iompróir meitiainín is flúirseach i gcealla T gníomhachtaithe47. Tugann sé seo, mar aon lenár dtorthaí roimhe seo, le fios go bhféadfadh ról tábhachtach a bheith ag SLC7A5 maidir le srianadh meitiainín ↑[H+ ]-spreagtha agus i gcothabháil staid cosúil le gas. Go deimhin, fuaireamar amach gur bhain ró-eisiúint SLC7A5 go páirteach leis an bhfeinitíopa gas-spreagtha ↑[H+] (Sonraí Breisithe Fíor 6h, i), ag tacú tuilleadh le rannpháirtíocht an iompróra meitiainín SLC7A5 i ↑[H+ ]-spreagtha T cille cuimhne. -mhaith feinitíopa. Trí anailís a dhéanamh ar fhodhaonraí cille T CD8+ éagsúla meall-insíothlaithe, fuaireamar slonn laghdaithe de MYC agus SLC7A5 araon i CD8+ TILanna cuimhne-chosúil (Sonraí Leathnaithe Fíor. 7a,b), atá ar aon dul. lenár dtorthaí in vitro. Mar sin, tugann na torthaí seo le fios go bhféadfadh an ais MYC-SLC7A5-methionine cur le caomhnú stádas cuimhne TILs.

Fíor 2|Spreagann nochtadh ↑[H+ ] athchlárú meitibileach agus seachnaíonn sé comharthaíocht mTOR. a, anailís GO ag baint úsáide as sonraí RNA-seq, a thaispeánann géinte meitibileach ionadaíocha arna gcur in iúl go difreálach i gcealla T daonna rialaithe agus lachtaigh-aigéad (luach P coigeartaithe < 4.23 × 10-2). b, Scéimreach de phatrúin lipéadaithe [13C6] glúcóis nó [ 13C16] pailmitate. c, Céatadán an m+3 lachtáit léirithe as lachtáit iomlán nó m+3 pyruvate as iomlán pyruvate i gcealla T. n=3 samplaí neamhspleácha. d, Céatadán iseatópóra na n-idirmheánacha TCA, amhail citrate (m+2), malate (m+2), agus succinate (m+2), díorthaithe ó [13C6]glúcóis. n=3 sampla neamhspleách. e, Céatadán an m+2 aicéitil-CoA in iúl as aicéitil-CoA iomlán nó m+2 iseatóp chiotráite as iomlán chiotráite i gcealla T ó [13C16] palmitate. n=4 samplaí neamhspleácha. f, GSEA le hanailís staitistiúil ar an tacar géine a bhaineann le comharthaíocht mTORC1 i rialú in aghaidh lachtaigh-aigéad-oiriúnaithe (clé) nó pH 6.6-cealla T daonna coinníolacha (ar dheis). g, h, Anailís agus cainníochtú citéiméadrach sreafa do S6 fosfarlaithe ag Ser235 agus Ser236 (g) agus 4EBP1 fosfarlaithe ag Thr37 agus Thr46 (h) i gcealla CD daonna8+ T faoi na coinníollacha atá léirithe. n=3 samplaí neamhspleácha. I, Anailís chithiméadrach sreafa agus cainníochtú shintéis próitéin atá dian ar fhuinneamh i rialtáin nó lachtaig-aigéad nó pH 6.{6-chealla T daonna coinníolacha. n=3 samplaí neamhspleácha. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± sem Rinneadh anailísí staitistiúla a chinneadh trí thástáil bheacht aon-thaobh Fisher le tástáil ilchomparáidí Benjamini–Hochberg (a) nó t-tástáil dhá eireaball an Mhic Léinn (c–e, g–i) gan phéire. Ríomhadh luachanna ainmniúla P agus FDRanna leis an modh réamhshocraithe i mbogearraí GSEA (f).

Fíor 3|Méadú [H+ ] athraíonn meitibileacht meitiainín cille T chun gastacht epigenetic a chaomhnú. plota GSEA den tacar géine a bhaineann le meitibileacht aon-charbóin agus le meitibileacht cistéin agus meitiainín i gcealla T daonna atá riochtaithe le haigéad lachtaigh. b, Scéimreach de phatrúin lipéadaithe [13C5]meitiainín. c, Céatadán SAM intracellular (m+5), SAH (m+4), agus MTA (m+1) ​​díorthaithe ó [13C5]meitiainín, as a gcomhthiomsuithe iomlána faoi seach, i Cealla T saothraithe faoi choinníollacha rialaithe nó le haigéad lachtach 10 mM nó aigéad lachtaigh 10 mM arna fhorlíonadh le meitiainín (10 mM + Met). n=3 samplaí neamhspleácha. d, Flúirse choibhneasta [12C5]meitiainín agus [13C5]meitiainín i gcealla T. e, Histeagram ionadaíoch agus cainníochtú TCF1 i gcealla CD daonna T a shaothraítear i gcoinníollacha éagsúla. n=3 samplaí neamhspleácha. f, Éifeachtaí forlíonta meitiainín ar mheitiliú histone i gcealla T daonna. H3K4me3, histone H3 trimethylated ag K4; H3K79me2, H3 dimethylated ag K79; H3K27me3, H3 trimethylated ag K27; H3K9me2, H3 démheitiolaithe ag K9. n=3 samplaí neamhspleácha. g, Amharc rian Genome ar lócais ghéine ionadaíocha a thaispeánann buaiceanna H3K27me3 (dearg, os cionn na líne) nó H3K4me3 (gorm, faoi bhun na líne). Tagann sonraí CUT&Tag-seq ó dhá shampla neamhspleácha. Cuirtear sonraí i láthair mar mheánluachanna ± sem Ainmniúil P agus ríomhadh FDRanna le modh réamhshocraithe bogearraí GSEA (a). Rinneadh anailís staitistiúil ag baint úsáide as anailís dhá-bhealach ar athraithis (ANOVA) le tástáil ilchomparáidí Tukey (c-f).

Cothaíonn nochtadh do ↑[H+ ] aclaíocht miteachondrial 

Mar gheall ar an laghdú ar shintéis próitéine atá dian ar fhuinneamh i gcealla T ↑[H+ ]-coinníollacha, rinneamar hipitéisiú go bhféadfadh athruithe suntasacha a bheith mar thoradh ar nochtadh fadtéarmach do ↑[H+] i meitibileacht fuinniúil cheallacha. Rinneadh anailís ar chealla T rialaithe agus ↑[H+ ] ag baint úsáide as SCENITH42 chun spleáchas glúcóis, spleáchas mitochondrial, cumas glycolytic, agus EBT agus cumas ocsaídiúcháin aimínaigéad a ríomh (Fíor 4a agus Sonraí Breisithe Fíor 8a). De réir ár dtorthaí meitibileolaíochta agus rianaithe iseatóp, thugamar faoi deara meitibileacht mhéadaithe miteachondrial i gcealla T ↑[H+ ]-nochtaithe, ach laghdaíodh rátaí glicealaithe (Fíor 4b, c agus Sonraí Breisithe Fíor. 8b), rud a léiríonn athchlárú infhéitheach meitibileacht fuinniúil i gcealla T ↑[H+ ]-oiriúnaithe. Léirigh anailís Seahorse a thuilleadh gur léirigh cealla T ↑[H+ ]-coinníollacha ráta tomhaltais ocsaigine níos airde (OCR) chomh maith le SRC, gné lárnach de chealla T CD8+ cuimhne fadsaoil22 agus ráta aigéadaithe eischeallach níos ísle ( ECAR) (Fíor 4d–h agus Sonraí Breisithe Fíor 8c–f). Toisc go bhfuil méadú ar mhais/comhleá miteachondrial agus ar phoitéinseal membrane mitechondrial laghdaithe (Δψm) tábhachtach chun gascheall cille T48–50 a chothabháil, rinneamar scrúdú breise ar chainníocht agus ar cháilíocht miteacoindria de chealla T ↑[H+] agus fuaireamar amach go bhfuil ↑[H+ ] cóireáil feabhsaithe mais mitochondrial i gcealla T daonna agus luch araon (Fíor 4i, j agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 8g,h), a choimeádann freisin Δψm níos ísle (Fíor 4k agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 8i). Léirigh anailís ultrastruchtúir trí mhicreascópacht leictreoin (EM) go raibh mitochondria mór dlúthphacáilte scaipthe sa chiteaplasma ag cealla T ↑[H+ ]-nochtaithe agus go raibh go leor cristae caol, daingean acu i gcomparáid le cealla T rialaithe, atá ag teacht le torthaí foilsithe gaolmhara le moirfeolaíocht mitochondria i gcealla cuimhne T (Fíor 4l,m). Ag teacht leis an gcinneadh seo, thugamar faoi deara freisin léiriú géine méadaithe ar roinnt rialtóirí criticiúla comhleá miteachondrial i gcealla T ↑[H+ ]-choinníollach (Sonraí Leathnaithe Fíor. 8j), a moladh go mbeadh ról riachtanach aige maidir le giniúint cille T cuimhne50. San iomlán, léiríonn na torthaí seo go gcuireann nochtadh ↑[H+ ] le mais/comhleá miteachondrial agus folláine chun foirmiú cealla T cosúil le gas a chur chun cinn.

cistanche córas imdhíonachta a mhéadú plandaí

Cuireann nochtadh ↑[H+ ] le gníomhaíocht frith-meall CD8+ T chealla 

Tá gas-chealla T i bhfabhar greanadh, leathnú agus éifeachtúlacht frith-meall in imdhíonteiripe uchtaíoch51. Chun imscrúdú a dhéanamh an léiríonn cealla T fadtéarmach in vitro ↑[H+ ]-chothaithe CD8+ leathnú feabhsaithe nó marthanacht nuair a aistrítear iad, CD45.1+ cealla OT-I T a leathnaíodh i rialú nó ↑[ Aistríodh meán riochtaithe H+ ] go huchtach go CD45.2+C57BL/6N lucha gan aon siadaí ionchlannaithe (Fíor 5a). Cé gur braitheadh ​​líon beagán méadaithe na gceall apoptotic ar riochtú ↑[H+] (Sonraí Breisithe Fíor 9a), bhí céatadán i bhfad níos airde de chealla T san fhuil imeallach de lucha a aistríodh le cealla T méadaithe sa riocht ↑[H+ ] i gcomparáid leo siúd leathnaithe i meán rialaithe (cealla T rialaithe) (Fíor 5b). Mar an gcéanna, braitheadh ​​minicíochtaí i bhfad níos airde de chealla T sa spleen agus nóid limfe (LNs) (Sonraí Leathnaithe Fíor. 9b, c). Ina theannta sin, fuaireamar méadú suntasach ar charnadh cille T i siadaí, spleen agus draenacha nóid limfe i lucha siadaí B16-OVA inar aistríodh cealla méadaithe ↑[H+ ] go huchtach i gcomparáid leis sin i lucha a fuair cealla rialaithe, rud a thugann le tuiscint go bhfuil marthanacht feabhsaithe ag cealla CD8+ T a coinníodh i ↑[H+ ] (Fíor 5c–e agus Sonraí Leathnaithe Fíor 9d). Ag teacht leis na torthaí seo, tháinig méadú suntasach ar chéatadán na gcealla cuimhne T i spleens agus LNanna na lucha a fuair cealla T ↑[H + ]-coinníollaithe (Fíor 5f agus Sonraí Leathnaithe Fíor 9e). Go háirithe, léirigh cealla OT-I T ↑-méadaithe fás meall go mór moillithe i gcomparáid le cealla T rialaithe (Fíor 5g). An chéad uair eile rinneamar imscrúdú ar éifeachtúlacht theiripeach cealla T ↑[H+ ]-leathnaithe CD19 chimeric-antigen-receptor-modified (CAR) le múnla siadaí in vivo inar instealladh cealla meall CD19-K562 go subcutaneously isteach i gcliathán na. lucha NCG (Fíor 5h). Fuaireamar amach gur chuir nochtadh ↑[H+ ] gascheall cille CAR-T chun cinn ach ní raibh aon éifeacht aige ar apoptosis (Sonraí Leathnaithe Fíor. 9f), mar is léir ó na céatadáin mhéadaithe suntasach de CCR{{50}L+ CD62L+ gas-cosúil le CAR-T. cealla chomh maith le slonn upregulated TCF1 (Sonraí Leathnaithe Fíor 9g,h). Ina theannta sin, bhí ráta níos airde de charnadh cille CAR-T i suíomhanna siadaí agus spleens de lucha NCG tar éis insileadh le cealla T ↑[H+ ]-choinníollach (Fíor 5i). De réir mar a bheifí ag súil leis, léirigh lucha NCG a aistríodh go huchtach le cealla CAR-T a leathnaíodh i ↑[H+ ] imréiteach níos mó de shiad CD19+ ionchlannaithe i gcomparáid leo siúd a fuair cealla CAR-T a leathnaíodh. i meán rialaithe (Fíor 5j). Le chéile, léirigh na sonraí seo go gcuireann cóireáil ↑[H+ ] chun cinn in vivo marthanacht agus gníomhaíocht frith-meall cealla T.

Cuireann nochtadh do ↑[H+ ] srian le hídiú T-chealla

Chun iniúchadh breise a dhéanamh ar an tionchar a bhíonn ag nochtadh leanúnach ↑[H+ ] ar ídiú cille T in vitro, thomhaiseamar slonn LAG-3 agus TIM-3 i gcealla T daonna ↑[H+ ]-primeáilte a chuaigh faoi bhabhtaí iolracha de spreagadh breise le hantasubstaintí frith-CD3 agus bhí siad riochtaithe i meán rialaithe (Fíor 6a). Fuaireamar amach gur laghdaíodh slonn LAG-3 agus TIM-3 araon i gcealla T ↑[H+ ]-nochta (Fíor 6b agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 10a), rud a thugann le fios go bhfuil laghdú tagtha ar thorthaí cóireála ↑[H+ ] T ídithe cille. Ina theannta sin, fuaireamar amach go bhfuil méadú ar léiriú marcóirí coisctheacha mar thoradh ar thiúchan ard meitiainín, mar shampla PD-1, LAG-3, agus TIM-3, agus cóireáil le híseal Tháinig laghdú beag ar thiúchan meitiainín ar léiriú na marcóirí seo (Fíor Forlíontach 6a-c). Go háirithe, ar nochtadh fadtéarmach in vitro ↑[H+ ], bhí minicíocht TIM-3+ LAG-3+ insíothlú cealla OT-I T agus cealla CD19-CAR T laistigh de na siadaí den chuid is mó. laghdaithe tar éis aistriú uchtaíoch (Fíor 6c–e agus Sonraí Leathnaithe Fíor. 10b), atá ag teacht lena n-ídiú in vitro níos ísle agus cumas rialaithe siadaí feabhsaithe in vivo. Ina theannta sin, léirigh muid gur léirigh cealla T fadtéarmach ↑ [H + ]-coinníollaithe go suntasach laghdú suntasach ar léiriú TOX in vitro agus in vivo (Fíor 6f, g agus Sonraí Breisithe Fíor 10c,d). Mar a thuairiscítear roimhe seo, is féidir cealla T ídithe a roinnt go ginearálta i bhfothacar ídithe progenitor nó ídithe go foirceanta, mar a chinntear ag slonn TCF1 agus TIM-352,53. Mar sin, thomhaiseamar an patrún slonn de TCF1 agus TIM-3 i CD45.1+ TILs agus thugamar faoi deara gur laghdaíodh minicíocht na gcealla T ídithe teirminéil TCF1− TIM-3+ den chuid is mó, le a céatadán méadaithe go suntasach de TCF1+ TIM-3– cealla giniúna T faoi riochtú ↑[H+ ] (Fíor 6h). Ina theannta sin, léirigh muid méadú LY108+ TIM-3– daonra cille T ginearaí (Sonraí Leathnaithe Fíor. 10e) chomh maith le minicíocht mhéadaithe IFN- + TNF- + T cealla (Sonraí Breisithe Fíor. 10f), ag tacú tuilleadh leis an bhfíric go gcuireann cealla T aistrithe uchtaithe fadtéarmacha in vitro ↑[H+ ]-leathnaithe go huchtach teorainn ar ídiú agus go gcaomhnaítear gas.

Plé

Is cur chuige tuar dóchais inti é ACT a bhaineann go sonrach le meall chun cóireáil a dhéanamh ar dhaoine aonair a bhfuil siadaí teasfhulangacha acu, ach tá na héifeachtaí teiripeacha srianta den chuid is mó ag mífheidhmiú cealla T sa TME. Le déanaí, tugadh aird nach beag ar réamhoiriúnú cealla T le ocras neamhbhuan glúcóis, srianadh glutamine, nó potaisiam eischeallach ardaithe (↑[K+ ]) le linn cultúir in vitro chun gascheall cille T a chaomhnú agus torthaí teiripeacha a fheabhsú54-56. Sa staidéar seo, léirigh muid gur chuir saothrú cealla T CD8+ faoi leibhéil arda [H+ ] le linn priming éadáil gascheall cille T agus friotaíocht méadaithe in aghaidh ídithe cille T chun cinn, rud a chuir feabhas mór ar na héifeachtaí frith-meall. cealla T aistrithe go huchtach.

Breathnaíodh le fada ar charnadh iomarcach aigéid lachtaigh laistigh den TME mar phríomhfhachtóir maidir le héalú imdhíonachta siadaí. Mar shampla, tá sé léirithe go ndéanann aigéad lachtach agus an TME aigéadach gníomhaíocht chitealaíoch T cille T agus táirgeadh cítocín31–33,57 a shochtadh. Ag teacht leis na torthaí seo, fuaireamar amach freisin gur leor nochtadh gearrthéarmach do ↑[H+ ] in vitro chun cosc ​​mór a chur ar tháirgeadh cítocín éifeachtóra ach nach raibh aon éifeacht aige ar léiriú TCF1 ná ar ghnéithe meitibileach a bhaineann le gastacht. Ach chuir cóireáil fhadtéarmach ↑[H+ ] léiriú TCF1 chun cinn gan choinne agus chothaigh sí feinitíopa cealla T cosúil le gas trí athchlárú meitibileach agus athmhúnlú eipigineach. Nuair a nochtar cealla T do ↑[H+ ] tar éis a ngníomhaithe iomláin, féadann sé feinitíopa cosúil le gas a chothú, rud a fhágann an fhéidearthacht go bhfuil cealla T atá faoi lé pH íseal tar éis éirí teasfhulangach don spreagadh seachas staid ghas a ghlacadh. Is é an tiúchan fiseolaíoch aigéid lachtaigh san fhuil daoine sláintiúla timpeall 1.5-3.0 mM, ach is féidir é a ardú go 10 mM go 40 mM sa TME35,58. Ag baint úsáide as samhail spreagtha frith-CD3/CD28 leanúnach, Feng et al. thuairiscigh siad le déanaí go méadaíonn tiúchan ard lachtáit sóidiam na leibhéil H3K27ac ag lócas sárfheabhsaithe TCF7 trí ghníomhaíocht histone deacetylase a chosc, rud a fhágann go dtiocfaidh méadú ar léiriú TCF1 agus cothaítear gascheall cille T CD8+59. I gcodarsnacht leis sin, fuaireamar amach gur féidir le nochtadh fadtéarmach do thiúchan réasúnta íseal d’aigéad lachtaigh (10 mM), ach ní lachtáit sóidiam, síniú gas-chosúil de chealla T a spreagadh go héasca trí mheitibileacht meitiainín a shrianadh agus H3K27me3 a rialáil. sil-leagan ag loci géine a bhaineann le gas, a thacaíonn go soiléir le rialáil eipigineach ar leith ag lachtáit sóidiam agus aigéad lachtaigh. Mar sin féin, ní bhíonn tionchar suntasach ag cóireáil íseal-aigéadacht (pH 6.9) ar léiriú TCF1 faoi spreagadh leanúnach frith-CD3/CD28, rud a thugann le tuiscint go bhfuil na sínithe gas-cosúil le cealla T CD{8+ spreagtha ag ↑[H+ ] féadfar nochtadh a shárú trí spreagadh TCR. Is féidir le gníomhachtú TCR feabhas a chur ar iontógáil meitiainín agus meitibileacht meitiainín a athchlárú chun cabhrú le gníomhachtú cille T19,60. Rinneamar tuairimíocht go bhféadfadh spreagadh TCR an iontógáil meitiainín i gcealla T ↑[H+]-chóireáilte a threisiú, a raibh srian ar mheitibilít meitiainín, rud a chuir isteach ar ghas epigenetic ↑[H+ ]-spreagtha. Ina theannta sin, d'fhéadfadh cealla T úsáid a bhaint as iain lachtáit mar fhoinse carbóin eischeallacha chun éadáil gasta a éascú i láthair nó in éagmais spreagadh TCR leanúnach. Tá dlúthbhaint ag gníomhaíocht meitibileach le difreáil cille T, agus d'fhéadfadh idirghabhálacha meitibileach áirithe foirmiú cille cuimhne-T fadtéarmach a chur chun cinn go mór21,37,61,62. Dá réir sin, tacaíonn ár n-anailísí meitibileachta agus rianaithe iseatóp leis an nóisean go mbíonn athchlárú meitibileach buailte mar thoradh ar nochtadh fadtéarmach ↑[H+ ], amhail glacadh níos lú glúcóis agus laghdú ar ghliogalú agus meitibileacht timthriall TCA. Tá sé léirithe ag staidéir éagsúla go n-úsáideann cealla cuimhne CD{{{8+} T FAO chun a gcuid riachtanas fuinnimh a chomhlíonadh, cé gur dócha gur oiriúnú é seo don difreáil líneála cuimhne, agus cuireann ró-eisiúint Cpt1 fad saoil T cille21,22,63,64 chun cinn. Mar sin féin, ina múnla de scriosadh géiniteach T cill-shonrach de Cpt1a, Raud et al. léirigh sé le déanaí go bhfuil LC-FAO in-dáilte den chuid is mó le haghaidh gníomhachtú cille T agus foirmiú cealla cuimhne CD8+ T65. Is dúshlán fós é neamhréiteach den sórt sin a mhíniú. I gcomhthéacs ár staidéir, tuairimíonn muid gur dócha go bhfuil baint ag athchlárú meitibileacht aigéid shailligh arna thiomáint ag aigéadóis eischeallach le giniúint na gcealla cuimhne T, cé go bhfuil gá le himscrúdú breise ar an mheicníocht bheacht atá mar bhonn leis an hipitéis seo. Ina theannta sin, fuaireamar amach gur chuir nochtadh ↑[H+] bac ar ghníomhaíocht mTOR, rud a d’fhéadfadh a bheith mar thoradh ar chosc ar glycolytic. Go háirithe, d'fhéadfadh sé go gcuirfeadh cosc ​​ar chomharthaíocht mTOR leis an aistriú meitibileach ó glicealú go riospráid miteachondrial. Go deimhin, léirigh na cealla T ↑[H+ ]-leathnaithe seo folláine miteachondrial feabhsaithe, mar is léir ón méadú marcáilte SRC agus mais miteachondrial agus laghdaigh Δψm. Tá na sínithe miteachondrialacha seo, atá saibhrithe i gcealla T cosúil le gas agus a bhaineann le fad saoil agus le gníomhaíocht frith-meall níos fearr in vivo, modhnaithe go dlúth ag comhleá miteachondrial agus dinimic eamhnaithe22,48,50. Tá ról fíor-riachtanach ag próitéin comhleá membrane mitochondrial OPA1 i nginiúint cille cuimhne-T50. Dá réir sin, fuaireamar amach gur chuir acidosis eischeallach léiriú OPA1 chun cinn i gcealla T, rud a d'fhág go raibh an chothromaíocht mhoirfeolaíochta i dtreo comhleá i gcealla T. Tá sé léirithe go gcuireann go leor meitibilítí ceallacha go díreach le modhnuithe epigenetic. Mar shampla, is féidir le meitibileacht aon-charbóin an deontóir meitile uilíoch SAM a ghiniúint le haghaidh histone methylation66.

Fíor 4|Coinnítear folláine mitochondrial i gcealla T a nochtar do ↑[H+]. anailís SCENITH ar na cealla T daonna i gcealla T rialaithe nó lachtaigh-aigéad-oiriúnaithe. Taispeántar leibhéal aistriúcháin ionadaíoch (frith-Puro) (n=3 samplaí neamhspleácha). Léiríonn an líne briste an leibhéal cúlra a fuarthas tar éis cóireála 2-deoxy-d-glucose + oligomycin (2-DG+O). b,c, Anailís chainníochtúil ar acmhainn glycolytic (b) agus ar spleáchas miteachondrial (c) laistigh de a. n=3 samplaí neamhspleácha. d–f, OCR (d) de rialú agus lachtaigh-aigéad-coinníollaithe T cealla a thomhas i bhfíor-am faoi choinníollacha basal mar fhreagra ar na coscairí atá léirithe. FCCP, carbóinile ciainíd-p-trifluoromethoxy feinilhiodrazone; ROT/ AA, rotenone agus antimycin A. Anailís staidrimh ionadaíoch ar OCR basal (e), riospráid uasta (e) agus SRC (f). n=9 tástáil; Rinneadh anailís ar 3 shampla neamhspleácha agus tomhaiseadh gach sampla 3 huaire. g,h, ECAR (g) de chealla T rialaithe nó lachtaigh-aigéad-oiriúnaithe arna dtomhas mar fhreagra ar na coscairí sonraithe. Anailís staitistiúil ionadaíoch ar ECAR bunúsach agus ECAR faoi bhéim (h). n=9 tástáil; Braitheadh ​​3 shampla neamhspleácha agus tomhaiseadh gach sampla 3 huaire. i, Anailís Immunoblot ar COXIV agus TIM23 i gcealla T daonna faoi na coinníollacha atá léirithe. Baineadh úsáid as Actin mar rialú luchtaithe. j,k, Histeagraim ionadaíocha nó ceapacha comhrianta agus anailís staitistiúil ar mhais miteachondrial (MTG) (j) agus ar phoitéinseal membrane miteachondrial (TMRM) (k), faoi seach, sa rialú nó san aigéad lachtaigh- nó sa pH 6.{{30} }chealla T daonna riochtaithe. n=3 samplaí neamhspleácha. l,m, moirfeolaíocht mitochondrial ionadaíoch de chealla T saothraithe sa riocht rialaithe, aigéad lachtaigh nó an riocht pH 6.6 ar feadh 12 lá, arna anailísiú ag EM (barra scála, 1 μM) (l). Réimse na miteacoindria aonair i gcealla T (m), n=45 cealla. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± sem Rinneadh anailís staitistiúil trí úsáid a bhaint as t-tástáil dhá earball neamhphéireáilte an Mhic Léinn.

Fíor 5|↑[H+ ]-táirgeann cealla T leathnaithe gníomhaíocht fheabhsaithe frith-meall. a,b, Rinneadh anailís ar chealla T CD8+ méadaithe nó lachtaigh-aigéad-leathnaithe le haghaidh marthanachta tar éis aistrithe uchtaithe (n=6 lucha). Luch CD45 úrscoite.1+ Gníomhachtaíodh cealla OT-I T le luch IL-2 agus frith-luch CD3 agus frith-luiche CD28 antasubstaintí ar feadh 2 lá agus ansin coinníodh iad i meán cultúir le luch IL-2 go dtí go n-aistrítear uchtach (CD3&CD28+IL-2). Scéimreach den turgnamh ainmhithe (a) chomh maith le ceapacha ionadaíocha FACS agus anailís staitistiúil ar CD45.1+ agus CD45.2+ Taispeántar cealla T san fhuil i (b). c–g, CD45.1+ Leathnaíodh cealla OT-I T i meán rialaithe nó aigéid lachtaigh ar feadh 7 lá agus aistríodh iad go lucha a bhfuil meall OVA orthu, agus rinneadh measúnú ar insíothlú an chóimheasa (n=5 lucha). Scéimreach den turgnamh ainmhithe ag baint úsáide as lucha siadaí B16-OVA (c), chomh maith le ceapacha ionadaíocha FACS (ar chlé) agus staitisticí don líon (ar dheis) CD45 aistrithe.1+ OT- I cealla T sa meall (d). sc, instealladh subcutaneous. Staitisticí don chéatadán CD45.1+ T chealla (e) agus sonraí ionadaíocha (ar chlé) agus staitisticí don chéatadán (ar dheis) de CD62L+ CD44+ CD45.1+ T chealla (f ) sa spleen ar taispeáint. Cuar fáis meall (g) (n=5 lucha, lá 14). h–j, CD19-Leathnaíodh cealla CAR T i meán rialaithe nó aigéid lachtaigh ar feadh 12 lá agus aistríodh iad go CD19-overexpressing K562 lucha NCG a bhfuil siadaí orthu, agus ba é an cóimheas insíothlaithe sa meall agus sa spleen measta (n=6 lucha). Léirítear scéimreach den turgnamh ainmhithe (h), céatadán ionadaíoch de chealla T aistrithe sa meall agus sa spleen (i), agus cuair fáis meall (j) (n=6 lucha, lá 10). Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± sem Rinneadh anailís staitistiúil trí úsáid a bhaint as t-tástáil dhá earball neamhphéireáilte an Mhic Léinn.

Fíor 6|↑[H+ ] cuireann nochtadh srian le hídiú T chealla. Scéimr de spreagadh ainsealach cealla T daonna in vitro. b, Ceapacha ionadaíocha FACS do LAG-3 agus TIM-3 i gcealla T daonna spreagtha go hainsealaí atá saothraithe i gcoinníollacha rialaithe nó aigéid lachtaigh. n=3 sampla neamhspleách. c, Slonn LAG-3 agus TIM-3 i CD45.1+ TILs ó B16-OVA-iompartha siadaí C57BL/6N lucha (n=5 lucha ). d, Cainníochtú slonn LAG-3, TIM-3 agus PD-1 i CD45.1+ TIL ó B16-OVA-tumor-bearing C57BL/ 6N lucha (n=5 lucha). e, Sloinneadh LAG-3 agus TIM-3 i gcealla CD insíothlaithe siadaí19-CAR T ó CD19-K562 lucha NCG a bhfuil siadaí orthu, arna chinneadh ag cíteiméadracht sreafa (n=6 lucha). f, Slonn TOX i CD45.1+ TIL ó B16-OVA siadaí C57BL/6N (n=5 lucha). g, Histeagraim agus anailís staitistiúil ar TOX i gcealla CAR T a insíothlaíonn siadaí ó CD19-K562 lucha NCG a bhfuil siadaí orthu (n=6 lucha). h, Clé, ceapacha cítiméadrachta sreafa ionadaíocha do TIM-3 agus TCF1 i CD45.1+ TIL ó B16-OVA-iompartha siadaí C57BL/6N lucha (n=5 lucha) . Ar dheis, an céatadán de dhaonraí TCF{1+ TIM-3– nó TCF1– TIM-3+. Cuirtear sonraí i láthair mar mheán ± sem Rinneadh anailís staitistiúil trí úsáid a bhaint as t-tástáil dhá earball neamhphéireáilte an Mhic Léinn.

Tuairiscíodh go bhfeidhmíonn meitibilítí, mar S-2-hydroxyglutarate agus -hydroxybutyrate, mar rialtóirí eipigéiniteacha ar dhifreáil cille cuimhne-T67,68. Léirigh ár dtorthaí go gcuireann cóireáil leanúnach ↑[H+] teorainn le glacadh meitiainín agus meitibileacht meitiainín le laghdú meitiainín intracellular, SAM, agus SAH trí chosc ar léiriú iompróirí meitiainín. D’fhéadfadh go míníonn na torthaí seo go páirteach cén fáth nach bhfuil cealla T in ann dul i ngleic le cealla siadaí le haghaidh iontógáil meitiainín sa TME69. Go meicniúil, léirigh muid gur laghdaigh nochtadh ↑[H+] go mór léiriú MYC agus a cheangal ar an tionscnóir SLC7A5, rud a d'fhág gur laghdaigh slonn SLC7A5 agus lagaigh meitibileacht meitiainín i gcealla T. Is díol spéise é gur féidir le forlíonadh meitiainín léiriú MYC agus SLC7A5 a athbhunú, chomh maith le flosc an timthriall meitiainín i gcealla T ↑[H+ ]-nochta, rud a thugann le tuiscint gur dócha go bhféadfaí cumas glactha meitiainín a athbhunú mar gheall ar ró-rialú an iompróra meitiainín. SLC7A5 ar bhealach MYC-spleách. Tuairiscíodh gníomhaíocht mTOR chun aistriúchán MYC a rialáil70. Dá réir sin, rinneamar tuairimíocht gur dócha go mbeidh íosrialú de bharr ↑[H+ ]-spreagtha ar MYC mar gheall ar chois aistritheach trí chosc forásach ar mTOR agus iontógáil lagaithe meitiainín. D’fhéadfadh forlíonadh meitiainín exogenous a chur ar ais faoi chois den sórt sin, cé go bhfuil gá le tuilleadh staidéir ar an meicníocht bheacht. Meastar go ndéanann SAM a dhíorthaítear ón timthriall meitiainín idirghabháil a dhéanamh ar mheitiliú histone agus athmhúnlú epigenetic le linn difreáil cille éifeachtóra-T8,71. Ag teacht leis an laghdú ar SAM intracellular i gcealla T ↑[H+ ]-leathnaithe, fuaireamar amach gur laghdaíodh go mór an flúirse iomlán de H3K27me3 agus a áitíochta ag tionscnóir loci gascheall T. Déantar H3K27me3 agus H3K4me3 a mhodhnú go roghnach ar bhealach atá comhghaolmhar le slonn na ngéinte atá lárnach d’éifeachtóir nó do chlár gasta cealla T14. Go deimhin, bhí saibhriú níos ísle H3K4me3 laistigh de thionscnóirí géine éifeachtóra i gcealla T ↑[H+ ]-leathnaithe. Mar sin, mar thoradh ar leibhéil laghdaithe SAM deontóra meitiain mar thoradh ar iontógáil meitiainín lagaithe agus meitibileacht faoi choinníoll ↑[H+ ], tá athruithe epigenetic ann atá i bhfabhar difreáil cille T go stádas cuimhne. Díol spéise é, ní hamháin go n-éireoidh le meitiainín a chur leis faoi nochtadh ↑[H+ ] slonn MYC agus SLC7A5 i gcealla T ↑[H+ ]-nochta, ach freisin athbhunaítear leibhéal iomlán slonn H3K27me3, ag tacú le ról tábhachtach don MYC-SLC7A5 – ais meitibileachta meitiainín i rialáil ↑[H+ ] gasta epigenetic spreagtha. Go deimhin, fuaireamar amach gur bhain ró-eisiúint SLC7A5 isteach go páirteach ar an bhfeinitíopa gasta ↑[H+]-spreagtha, rud a thacaigh tuilleadh le ról ríthábhachtach an iompróra meitiainín SLC7A5 maidir le feinitíopa cuimhne-chill T a fháil faoi nochtadh ↑[H+].

Ceapadh go stairiúil go bhfuil an chuid is mó de TILanna ídithe mar gheall ar nochtadh leanúnach TCR laistigh de siadaí, ach go paradacsach go gcoimeádann fo-thacar beag clóitíopaí cealla T i TILanna a léiríonn an fachtóir trascríobh TCF1 airíonna cosúil le gaschealla. Nocht ár dtorthaí go ndéanann nochtadh ↑[H+ ] feidhm éifeachtóir cille T a fhritháireamh agus go gcaomhnaítear gascheall cille T tríd an ais meitibileachta MYC-SLC7A5-meitiainín, a sholáthraíonn míniú féideartha don paradacsa reatha maidir le cén fáth go bhfuil codán beag de TILs fós ag cuain gas- cosúil le cuimhne nó airíonna réamhtheachtaithe. Go deimhin, tá torthaí comhchosúla tuairiscithe ina bhfreastalaíonn iain photaisiam sa TME ról déach ag dul i bhfeidhm ar fheidhm éifeachtóra cealla T agus gas56,72, ag tacú le héifeachtaí casta fachtóirí imdhíonachta TME (mar shampla, spreagadh TCR ainsealach, hypoxia, agus íseal). glúcóis) ar fheidhm chill T agus difreáil. Ina theannta sin, tá na réigiúin aigéadacha laistigh de siadaí an-dinimiciúil agus rialaithe go spásúil agus go ham, agus is dócha go mbeidh folláine na gcealla T atá oiriúnaithe d'acidosis eischeallach sáraithe nuair a thagann siad ar fhachtóirí crua TME eile a d'fhéadfadh tionchar a bheith acu ar fheidhm agus ar dhifreáil éifeachtóra cille T intratumoral. Ina theannta sin, thugamar faoi deara léiriú níos airde de MYC i gcealla T ídithe foirceanta (LY108 - TIM -3+ ) ná i gcealla T ídithe ginearaí (LY108+ TIM-3– ), is é sin ag teacht le tuairiscí roimhe seo gur fearr a fhaigheann cealla MYClo T cinniúint na cuimhne73. Ag teacht le slonn SLC7A5 laghdaithe agus glacadh meitiainín i gcealla T ↑[H+ ]-nochta, laghdaíodh go suntasach an slonn SLC7A5 go suntasach freisin sa LY108+ TIM-3-daonra cille T ídithe ginearaí laistigh de shúmair, ag tabhairt le tuiscint go bhféadfadh an ais rialála MYC-SLC7A5-methionine oibriú in vivo freisin. Tá sé soiléir anois go bhfuil éifeachtaí teiripeacha frith-meall níos fearr ag cealla T cuimhne gas nach bhfuil chomh difreáilte mar gheall ar a marthanacht fadtéarmach agus a bhfrithsheasmhacht in aghaidh forbairt mhífheidhm51,74. Tá fianaise an-láidir curtha ar fáil againn anseo gur léirigh cealla T fadtéarmach ↑[H+ ]-coinníollaithe CD8+ marthanacht feabhsaithe agus cumas frith-meall níos fearr in vivo, le daonra laghdaithe cealla T ídithe críochfoirt (TCF1− TIM{ {39}} ) agus fo-thacar méadaithe giniúna cosúil le gas (TCF{1+ TIM-3– ) laistigh de shúmair. Mar fhocal scoir, tugann ár staidéar reatha léargais ar na héifeachtaí iltoiseacha a bhaineann le nochtadh ↑[H+ ] ar shochtadh fheidhm éifeachtóra cille T agus a thionchar comhtharlaitheach ar gascheall T chealla.

Modhanna

Línte lucha agus cille

Rinneadh na turgnaimh ainmhithe go léir le faomhadh an Choiste Institiúideach um Chúram agus Úsáid Ainmhithe (IACUC) d'Institiúid Leigheas Córais Suzhou (ISM-IACUC-0151-R), agus cuireadh na hainmhithe i saoráidí luiche ar leith saor ó phataigin. Cóiríodh lucha i gcoinníollacha caighdeánacha, le 12-u/12-h/timthriallta solais/dorcha agus teocht rialaithe 22–24 céim agus bogthaise de 6{{0%, le bia agus uisce neamhshrianta. infhaighteacht, agus scrúdaíodh iad go laethúil. Níor sháraigh na hualaí siadaí go léir an cead a cheadaigh an Coiste Institiúideach um Chúram agus Úsáid Ainmhithe de chuid Institiúid Leigheas Córais Suzhou. CD45.1+ bhí lucha trasgenacha baineanna OT-I TCR ar chúlra C57BL/6N lonnaithe le chéile. CD45.2+ baineann C57BL/6N lucha 6-8 seachtaine d'aois a ceannaíodh ón Vital River mar fhaighteoirí. Ceannaíodh lucha baineanna NCG (NOD/ ShiLtJGpt-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Gpt) idir 6–8 seachtaine d’aois ó GemPharmatech. Do thurgnamh neamhspleách amháin in vivo, bhí gnéas-mheaitseáil idir na lucha CD45.1+ agus CD45.2+ (6-12 seachtaine). HEK-293Coinníodh cealla T ón mBailiúchán Cultúir de Chineál Meiriceánach (ATCC) i meán DMEM agus forlíonadh le 10% de shéiream bó féatais (FBS) agus 1% peinicillin-streiptimícin. Aistríodh an líne chill meileánoma luiche B16, ó ATCC, chun OVA a chur in iúl agus coinníodh í i meán DMEM arna fhorlíonadh le 10% FBS agus 1% peinicillin-streiptimícin. Aistríodh cealla K562 ó ATCC chun CD19 daonna a chur in iúl agus saothraíodh iad i meán RPMI 1640 arna fhorlíonadh le 10% FBS, 1% peinicillin-streiptimícin, 1% GlutaMAX, 0.1 M HEPES, 1% aimínaigéid neamhriachtanacha, 1 mM pyruvate sóidiam agus 50 μM -mercaptoethanol. Ceannaíodh na himoibrithe thuas go léir ó Gibco.

Aonrú cille T bunscoile, gníomhachtú, agus trasduchtúchán retroviral

Luiche CD{10 Rinneadh limficítí T a leithlisiú ó spleens lucha OT-I fireann nó baineann 6-12 seachtaine trí úsáid a bhaint as trealamh aonrúcháin cille T CD8 naive (BioLegend) agus saothraíodh iad in RPMI{{5} } meán forlíonta le 10% FBS, 1% peinicillin-streiptimícin, 1% aimínaigéid neamhriachtanacha, 1% GlutaMAX, 1 mM pyruvate sóidiam, 0.1 M HEPES agus 50 μM -mercaptoethanol i láthair luch IL -2 (20U/ml, Peprotech). I gcás turgnaimh neamhspleách amháin in vitro, bhí na lucha fireanna agus baineanna (6-12 seachtaine) comhoiriúnaithe inscne. Cuireadh cealla íonaithe i ngníomh ag antasubstaintí frith-luiche CD3 (2 ug/ml, BioLegend) agus frith-luch CD28 (1 ug/ml, BioLegend) ar feadh 48 h. Ceannaíodh cealla mononúicléacha fola forimeallacha daonna (PBMCanna) ó dheontóirí sláintiúla ó Sailybio agus saothraíodh iad i meán RMPI-1640 arna fhorlíonadh le 5% Séiream Daonna AB (Gemini), 1% peinicillin-streiptimícin, 1% aimínaigéid neamhriachtanacha, 1% GlutaMAX, piorúváit sóidiam 1 mM, 0.1 M HEPES agus 50 μM -mercaptoethanol i láthair IL daonna-2 (100 U/ml, Peprotech). Baineadh úsáid as antasubstaintí monachlónacha CD3 (1 ug/ml, BioLegend) agus frith-dhaonna CD28 (1 ug/ml, BioLegend) chun PBMCanna a ghníomhachtú ar feadh 3 lá. Cuireadh cealla íonaithe lucha agus daonna T i ngníomh agus leathnaíodh iad sna coinníollacha cultúir léirithe: pH 7.4, pH 6.6, aigéad lachtaigh (Sangon), nó lachtáit sóidiam (Sangon). Baineadh úsáid as na meitibilítí seo a leanas chun pH 6.6 nó meán aigéid lachtaigh (10 mM) a fhorlíonadh: methionine 800 μM (MCE), SAM 100 μΜ (MCE), nó SAH 100 μM (Sigma). Maidir le haistriú víreasach, cuireadh 1 × 106 PBMC i ngníomh in aghaidh an tobair i 24-phlátaí tobair. Tar éis 48 h de ghníomhachtú, cuireadh formhéadóir aisviral neamhchruinnithe le 10 ug/ml polabréine (Santa Cruz) in ionad fhormhór an mheáin. Tar éis lártheifneoraithe ag 600 g ar feadh 90 nóiméad ag 30 céim , saothraíodh cealla sa ghorlann ar feadh 24 h le meán úr. Rinneadh an t-aistriú arís agus arís eile 24 uair an chloig ina dhiaidh sin agus ansin cuireadh ar ais chuig meán úr cultúir é. Baineadh úsáid as gabhdóir fachtóir fáis nerve íseal-chleamhnas (LNGFR) chun éifeachtúlacht an ionfhabhtaithe a chainníochtú.

Cíteiméadracht sreafa

Rinneadh na cealla a dhaite le antasubstaintí fluaraiseacha agus ansin rinneadh anailís orthu trí chitoiméadracht sreafa. Le haghaidh ruaimniú marcóra dromchla, rinneadh na cealla a dhathú le antasubstaintí comhchuingeacha fluaraiseacha agus le Kit stainte Cill Marbh In-Inrite Beo/Marbh (Invitrogen) i maolán FACS (salainn mhaolánach fosfáit (PBS) le 2% FBS), ansin socraithe le 2% paraformaildéad (Casmart). ar feadh 20 nóiméad ag teocht an tseomra. Chun fosfa-próitéiní a ruaimniú infhéitheach, socraíodh cealla réamh-dhaite le Maolán Fosúcháin (BioLegend) agus ansin dhaite iad le hantasubstaintí fosfa-shonracha i Maolán Permeabilization (Invitrogen). Chun cytokines intracellular a bhrath, spreagadh cealla le aicéatáit myristate phorbol (PMA) i láthair Brefeldin A (BFA) (BioLegend) ar feadh 4.5 h. Ansin, socraíodh na cealla réamh-dhaite agus dhaite le antasubstaintí cytokines i maolán tréscaoilteachta. Maidir le smáthú fachtóir tras-cheallacha, rinneadh réamh-dhaite ar chealla le Paitinne Dornán Cealla Marbh In-Insithe Beo/Marbh agus antasubstaintí comhchuingeacha fluaraiseacha i maolán FACS chun marcóirí dromchla a bhrath. Socraíodh na cealla ansin ar feadh 30 nóiméad ar oighear ag baint úsáide as FOXP3/Maolán Daingnithe Fachtóra Trascríobh (Invitrogen) agus daite le antasubstaintí fachtóir trascríobh i Maolán Permeabilization. Tar éis staining, athchuireadh cealla i maolán FACS le haghaidh cíteiméadracht sreafa. Bhailigh BD LSR Fortessa agus BD FACSDiva (v8.0.2) sonraí citeiméadrachta sreafa, agus rinneadh anailís orthu le bogearraí FlowJo (v10.4). Soláthraítear straitéisí ionadaíocha geataí i Sonraí Leathnaithe Fíor 10b.

Seicheamhú RNA

Rinneadh anailís RNA-seq trí úsáid a bhaint as 12-chealla T leathnaithe sa lá agus iad saothraithe sna coinníollacha sonraithe mar a léirítear i bhFíor 1a. Go hachomair, 12 lá tar éis leathnú cille T, baineadh RNA iomlán trí homogenization i TRIzol (Takara) agus reo i feadáin saor ó RNase le nítrigin leachtach. Rinneadh sláine RNA a mheas trí úsáid a bhaint as Bithanailíseoir Agilent 2100 (Agilent). Tógadh na leabharlanna ag baint úsáide as trealamh prep sampla TruSeq RNA (FC-122-1001, Illumina). Cuireadh na leabharlanna in ord ansin trí úsáid a bhaint as ardán Illumina NovaSeq 6{000 (PE150), agus gineadh thart ar 40 milliún léamh péireáilte (Novogene). Baineadh na hamháirimh léite amach agus normalaíodh iad ansin de réir fachtóirí méid na leabharlainne ag baint úsáide as DESeq2 (v1.28.1). Baineadh úsáid as an gclaochlú logartamach rialta (r-log) chun an t-athraitheas trasna na samplaí a chobhsú. Rinneadh an anailís saibhrithe cosáin GO agus KEGG ar ghéinte léirithe go difreálach le próifíl bhraisle (v3.16.0). Gineadh léarscáileanna teasa slonn leis an 'pheatmap' pacáiste R (v1.0.12). Baineadh úsáid as GSEA v.4.0 le haghaidh anailíse GSEA.

GUT&Clib-seq

Rinneadh CUT&Tag-seq mar a thuairiscítear roimhe seo75, ag baint úsáide as an Uilíoch Hipirghníomhach CUT&Tag Measúnachta do Illumina (TD903, Vazyme). Go hachomair, leathnaíodh cealla T daonna ar feadh 12 lá faoi choinníollacha rialaithe, aigéad lachtaigh, nó aigéad lachtaigh le 800 μM methionine. Ansin, rinneadh cealla 1 × 105 T a liostú chun ábhair núicléacha a bhaint astu agus goradh iad le coirníní ConA ag teocht an tseomra ar feadh 10 nóiméad. Athchóiríodh cealla i maolán antashubstainte 50 µL réamh-mheasctha le príomh-antasubstaint (frith-H3K27me3 nó frith-H3K4me3) agus gor thar oíche ag 4 céim . Goradh na samplaí leis an antashubstaint thánaisteach ag teocht an tseomra ar feadh 30 nóiméad agus ansin comh-ghlais iad leis an trasposase próitéin A/G-Tn5 ag teocht an tseomra ar feadh 1 u chun cur isteach ar ilroinnt DNA. Baineadh úsáid as DNA íonaithe le haghaidh ullmhúcháin leabharlainne agus seicheamhaithe ag baint úsáide as PE150 le Illumina Nova6000 seicheamhóir.

Anailís CUT&Clib-seq

Úsáideadh FastQC (v{{{0}}.11.4) (https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/) chun cáilíocht léite an tseichimh a sheiceáil. Bearradh cáilíochta na léamha go dtí íosscór Phred de 2{{0 trí úsáid a bhaint as trimmamatic (v0.39) (http://www.usadellab.org/cms/?page=trimmamatic) . Rinneadh na léamha go léir a rinne CUT&Tag-seq de H3K27me3 agus H3K4me3 a ailíniú leis an genome daonna hg38 ag baint úsáide as Bowtie2 (v2.2.8) (https:// bowtie-bio.sourceforge.net/bowtie2/index.shtml) le roghanna: –local– an-íogair-áitiúil-gan-unal-gan-mheasctha-gan-neamh-chomhfhreagrach-phred33 -I 10 -X 700. normalaíodh na samplaí gan DNA spíc-isteach ag baint úsáide as modh ChIPseqSpikeInFree, arb é a modh nua normalaithe chun fachtóirí scálaithe a chinneadh go héifeachtach do shamplaí trasna coinníollacha agus cóireálacha éagsúla76. Maidir le H3K27me3, glaodh buaiceanna ag baint úsáide as MACS2 (v2.2.6) (https://hbctraining.github.io/Intro-to-ChIPseq/lessons/05_ buaic{{_glaoch{_macs) .html) le roghanna '-g hs -f BAMPE–keep-dup all– leathan–leathan-scoith 0.1'. Maidir le H3K4me3, bhain buaicghlao úsáid as MACS2 le paraiméadair '-g hs -q 0.01 -f BAMPE–keep-dup all'. Rinneadh anótáil ar bhuaiceanna le ChIPseeker (v1.22.1) (https://guangchuangyu.github.io/software/ ChIPseeker/), agus cruthaíodh léirshamhlú ag baint úsáide as deepTools (v3.5.1) ( https://deeptools.readthedocs.io/en /develop/) agus pyGenomeTracks (v3.7) ( https://pygenometracks.readthedocs.io/ga/latest/).

qRT – PCR

Rinneadh RNA iomlán a leithlisiú le TRIzol (Takara) agus a mhalairt a thrascríobh go cDNA le HiScript Reverse Transcriptase (Vazyme), de réir threoracha an mhonaróra. Le haghaidh PCR fíor-ama cainníochtúil, baineadh úsáid as priosma ABI 7500 Córas PCR fíor-ama (Thermo Fisher) agus 2 × SYBR Green qPCR Master Mix (Bimake) de réir threoracha an mhonaróra. Baineadh úsáid as ACTB mar chaighdeán inmheánach. Ríomhadh an slonn coibhneasta mRNA ag baint úsáide as an modh 2−ΔΔCT. Tá seichimh primer a úsáidtear le haghaidh qPCR le fáil i dTábla Forlíontach 1.

Blotting an Iarthair

Le haghaidh anailíse léirithe próitéine, bailíodh cealla agus nite le PBS fuar, agus baineadh an próitéin iomlán trí úsáid a bhaint as 1% SDS (Sangon) ar oighear. Rinneadh tiúchan próitéine a thomhas le trealamh measúnaithe próitéin BCA (Merck). Scaradh samplaí próitéine le glóthacha SDS-PAGE agus ansin aistríodh iad chuig seicní PVDF (Millipore). Cuireadh bac ar scannáin le 5% bainne neamhshaille i PBS ina raibh Tween20. Tar éis blocála, goradh na seicní le antasubstaintí príomhúla thar oíche ag 4 céim agus antasubstaintí tánaisteacha HRP-chúpláilte ar feadh 2 h ag teocht an tseomra. Forbraíodh an comhartha HRP ag electrochemiluminescence (ChemeMINI610) agus bhailigh Sage Capture (v2.19.12). Rinneadh anailís ar shonraí ag baint úsáide as bogearraí ImageJ (v1.8.0).

Anailís ar mhoirfeolaíocht mitochondrial

I ngach tobar de {{0}plátaí toibreacha, cuireadh PBMCanna i ngníomh ag antasubstaintí frith-CD3 agus frith-CD28 daonna ar feadh 3 lá agus saothraíodh iad i meán RPMI{-1640 faoi choinníollacha éagsúla ar feadh 12 lá. Ansin, bailíodh agus socraíodh 1 × 106 PBMC i maolán fosaithe réamh-fhuaraithe (2.5% glutaraldehyde, maolán fosfáit 0.1 M (PB), pH 7.4) thar oíche ag 4 céim. Tar éis a bheith nite le PBS trí huaire, rinneadh cealla a iar-shocrú i 1% osmium tetroxide i PBS ar feadh 2 h, díhiodráitithe agus leabaithe i roisín Spurr, de réir an nós imeachta caighdeánach. Bhí ailt ultrathin dhaite le aicéatáit úráinile agus chiotráite luaidhe. Rinneadh deilbhíocht mhiotochondrial a íomháú trí úsáid a bhaint as micreascópacht leictreoin tarchurtha Hitachi HT{-7800 (TEM) (v01.20) agus ceamara AMT-XR81DIR.

Antasubstaintí agus imoibrithe

Seo a leanas na hantasubstaintí a úsáideadh le haghaidh anailíse cíteaiméadrach sreafa. NGFR frith-dhaonna APC (cat. uimh. 345108, 1:1,000 le haghaidh FACS), FITC frith-dhaonna CD4 (cat. uimh. 357406, 1:200 le haghaidh FACS), Pacific Blue frith-daonna CD8 (cat. uimh. 300928, 1:200 le haghaidh FACS), APC-Cy7 frith-daonna/luch CD44 (cat. uimh. 103028, 1:200 le haghaidh FACS), PE frith-dhaonna CCR7 (cat. uimh. 353204, 1 :200 le haghaidh FACS), PE frith-daonna TNF- (cat. uimh. 502909, 1:200 le haghaidh FACS), PE-Cy7 frith-daonna CD45RO (cat. uimh. 304230, 1:200 le haghaidh FACS), APC frith- IFN daonna- (cat. uimh. 502512, 1:200 le haghaidh FACS), LAG frith-dhaonna PE-Cy7-3 (cat. uimh. 369310, 1:200 le haghaidh FACS), PE frith-dhaonna TIM{{ 52}} (cat. uimh. 345006, 1:200 le haghaidh FACS), BV711 PD frith-dhaonna-1 (cat. uimh. 329928, 1:200 le haghaidh FACS), Percp-Cy5.5 frith-dhaonna CD62L (cat. uimh. 304824, 1:200 le haghaidh FACS), APC frith-dhaonna CD27 (cat. uimh. 302810, 1:200 le haghaidh FACS), BV711 frith-luch CD8 (cat. uimh. 100748, 1:200 le haghaidh FACS) ), PE-Cy7 frith-luch CD62L (cat. uimh. 104418, 1:200 le haghaidh FACS), APC-Cy7 frith-luch CD45.2 (cat. uimh. 830789, 1:200 le haghaidh FACS), Pacific Blue frith- luch CD45.1 (cat. uimh. 110722, 1:200 le haghaidh FACS), APC frith-luch Ly108 (cat. níl. 134610, 1:200 le haghaidh FACS), LAG frith-luiche PE-3 (cat. uimh. 125207, 1:200 le haghaidh FACS), Alexa Fluor 488 frith-c-MYC Antibody (cat. uimh. 626811, 1 :200 le haghaidh FACS), PE frith-luch TNF- (cat. uimh. 506306, 1:200 le haghaidh FACS), agus APC frith-luch IFN- (cat. uimh. 505810, 1:200 le haghaidh FACS) a cheannach ó BioLegend . Fearas stainte cealla marbha In-Insithe Beo/Marbh, PD frith-luiche PerCP-eFluor710-1 (cat. uimhir. 46-9981-82, 1:200 le haghaidh FACS), PE phosphor-S6 (Ser235/236) (cat .uimh. 12-9007-42, 1:200 le haghaidh FACS), PE frith-daonna/luch TOX (cat. uimh. 12-6502-82, 1:200 le haghaidh FACS), agus PE-Cy7 frith-luch TIM{ Ceannaíodh {149}} (cat. uimh. 25-5870-82, 1:200 le haghaidh FACS) ó Thermo Fisher. Ceannaíodh Alexa Fluor 647 frith-TCF1 (cat. uimh. 6709, 1:200 le haghaidh FACS) agus fosfar-4E-BP1 (Thr37/46) (cat. uimh. 2846, 1:200 le haghaidh FACS) ó Teicneolaíocht Comharthaíochta Cille. Ceannaíodh Alexa Fluor 647 frith-puromycin (cat. uimh. MABE343-AF647, 1:800 le haghaidh FACS) ó Merck. Seo a leanas na hantasubstaintí a úsáideadh le haghaidh blotaí an iarthair. Coinín frith-phospho-Akt (Ser473) (cat. uimh. 4060, 1:1,000 le haghaidh IB), frith-fosfa-NF-κB p65 (Ser536) (cat. uimh. 3033, 1:1 ,000 le haghaidh IB), frith-c-MYC (cat. uimh. 18583, 1:1, 000 le haghaidh IB), frith-EZH2 (cat. uimh. 5246, 1:1,{ {200}} le haghaidh IB), frith-trí-meitil-histone H3 (Lys27) (cat. uimh. 9733, 1:1, 000 le haghaidh IB), frith-trí-meitil-histone H3 (Lys4) (cat. uimh. 9751, 1:1,000 le haghaidh IB), frith-dhé-meitil-histone H3 (Lys9) (cat. uimh. 4658, 1:1,000 do IB) , frith-dé-meitil-histone H3 (Lys79) (cat. uimh. 5427, 1:1, 000 le haghaidh IB), frith-histone H3 (cat. uimh. 9715, 1:1,{{242 }} le haghaidh IB), frith-COXIV (cat. uimh. 850, 1:1,000 le haghaidh IB), IgG frith-choine (ceangailte le HRP) (cat. uimh. 7074, 1:2,{ {253}} le haghaidh IB), agus ceannaíodh IgG frith-luch (HRP-nasctha) (cat. uimh. 7076, 1:2,000 le haghaidh IB) ó Cell Signaling Technology. Ba ó BD Biosciences a tháinig luch frith-Tim23 (cat. uimh. 611223, 1:1,000 do IB). Luch frith- -actin (cat. uimh. 66009-1-Ig, 1:5,000 le haghaidh IB), frith-SLC7A5 (cat. uimh. 67951-1-Ig, 1: 1,000 le haghaidh IB), agus coinín frith-SLC38A1 (cat. uimh. 12039-1-AP, 1:1,000 do IB) ó Proteintech. Ceannaíodh coinín frith-SLC38A2 (cat. uimhir. BMP081, 1:1,000 le haghaidh IB) ó Shaotharlanna Leighis & Bitheolaíochta.

Measúnacht meitibileach T-chealla

Chun glacadh BODIPY FL C16 i gcealla rialaithe nó ↑[H+ ]-cóireáilte i gcealla T a sheiceáil, saothraíodh cealla T le 1 μM BODIPY FL C16 (Invitrogen) a bhí tuaslagtha go úr ar feadh 1 h, ansin nite faoi dhó le PBS roimh staining dromchla. Chun iniúchadh breise a dhéanamh ar an spleáchas meitibileach i ngrúpaí cóireála éagsúla, rinneadh turgnaimh trí úsáid a bhaint as modh SCENITH (meitibileacht fuinniúil aonchealla trí chosc ar aistriúchán a phróifíliú)42. Go hachomair, cuireadh cealla T i 96-phlátaí tobair ag 1 × 106 cill/ml. Ansin déileáladh le cealla le rialú (Ctrl), 2-deoxy-d-glúcóis (tiúchan deiridh 100 mM), oligomycin (tiúchan deiridh 5 μM), nó meascán de na coscairí ag na tiúchana deiridh ar feadh 40 nóiméad ag 37 céime . Cuireadh Puromycin (tiúchan deiridh 10 ug/ml) leis le linn na 30 nóiméad deireanach. Tar éis cóireála puromycin, nite cealla le PBS fuar agus réamh-dhaite le Beo / Marbh In-Dreatha Cille Marbh Kit agus antasubstaintí i gcoinne marcóirí dromchla. Tar éis staining puromycin intracellular bhí an próiseas staining le haghaidh fachtóirí trascríobh intracellular.

Anailís meitibileach le LC-MS/MS

Rinneadh anailís mheitibileach agus bailiú samplaí mar a rinneadh i dtuarascálacha roimhe seo77. Go hachomair, cuireadh PBMCanna i ngníomh ina n-aonar i 24-phlátaí tobair ag frith-CD3/CD28 daonna ar feadh 3 lá agus saothraíodh iad i meán RPMI 164{{0 le rialú nó le haigéad lachtaigh go dtí an lá 12. Ansin, 8 × Bailíodh 106 chill in aghaidh an tsampla (n=4 sampla neamhspleách in aghaidh an ghrúpa) agus aistríodh chuig feadán 1.5-ml iad le haghaidh lártheifneoraithe ag 300 g ar feadh 5 nóiméad ag 4 chéim agus ansin nite le PBS fuar. Tar éis lártheifneoiriú ag 300 g ar feadh 5 min arís, cuireadh 80% meatánól fuar leis agus vortexed go bríomhar chun cur isteach ar an millíní cille go hiomlán, agus ansin aistríodh na cealla chuig reoiteoir ag −80 céim. Lártheifneoiríodh samplaí ag 12,000 g ar feadh 10 nóiméad ag 4 chéim . Bailíodh an ceannfort. Ar deireadh, rinne UHPLC-MS/MS i Novogene lyophilized agus anailís ar na sleachta. Próiseáladh na comhaid sonraí amh a ghin UHPLC-MS/MS ag baint úsáide as an Aimsitheoir Comhdhúile (v3.1, Thermo Fisher) chun buaic-ailíniú, buaic-phiocadh, agus cainníochtú a dhéanamh do gach meitibilít. Baineadh úsáid as bogearraí metaboanalyst (v5.0) le haghaidh tuilleadh anailíse ar shonraí, agus ansin roghnaíodh cosáin saibhrithe suntasach ag baint úsáide as P < 0.05.

Turgnaimh lipéadaithe cobhsaí-iseatóp

Rinneadh an flosc meitibileach 13C ar chealla T ag baint úsáide as modhanna ar cuireadh síos orthu roimhe60,78,79. Go hachomair, cuireadh PBMCanna i ngníomh in aghaidh an tobair i 24-phlátaí tobair le frith-CD3/CD28 daonna ar feadh 3 lá, mar a thuairiscítear thuas. Le haghaidh rianú glúcóis [13C6], aistríodh an meán tar éis 11 lá go RPMI saor ó ghlúcós (Gibco) arna fhorlíonadh le FBS scagdhealaithe 10% (Thermo Fisher Scientific), 1% peinicillin-streiptimícin, 1% aimínaigéid neamhriachtanacha, 50 μM -mercaptoethanol agus 0.1 M HEPES, ina bhfuil glúcóis 11 mM [13C6] (Cambridge Isotope Laboratories) le rialú nó aigéad lachtaigh 10 mM, ar feadh 24 h. Le haghaidh rianú pailmeite [13C16], cuireadh cealla 2 × 107 T i ngníomh agus cuireadh iad i meán críochnaithe le coinníollacha rialaithe nó aigéad lachtaigh 10 mM mar a thuairiscítear thuas ar lá 12, ina raibh 200 μM [13C16] pailitáit (Saotharlanna Iseatóp Cambridge), ar feadh 8 h. Le haghaidh rianú meitiainín [13C5], leathnaíodh cealla T faoi smacht, aigéad lachtaigh nó aigéad lachtaigh le coinníollacha meitiainín 800 μM ar feadh 12 lá. Ansin, aistríodh cealla 4 × 107 T go meán RPMI iomlán saor ó mheitiainín (Gibco) agus saothraíodh iad faoi choinníollacha rialaithe, aigéad lachtaigh, nó aigéad lachtaigh arna fhorlíonadh le meitiainín (ina bhfuil 100 μM, 100 μM, nó 800 μM [13C5] methionine) (Saotharlanna Iseatóp Cambridge), ar feadh 8 h. Bailíodh na comhlíonta faoi seach agus ansin stóráiltear iad ag −80 céim. Rinneadh cealla a pelleted trí lártheifneoiriú (300 g, 4 céim , 5 nóiméad), nite faoi dhó le saline, agus láithreach flash-reoite i nítrigine leachtach agus a stóráil ag -80 céim . Baineadh meitibilítí trí úsáid a bhaint as meatánól 80% de ghrád HPLC-fuar oighir agus vortexed go hachomair, agus cuireadh 200 ml uisce de ghrád HPLC leis, ansin clóraform de ghrád HPLC 500 ml (meatánól: uisce: cóimheas clóraform, 5:2:5 ). Rinneadh an meascán a vortexed agus a lártheifneoiriú chun scaradh céime a bhaint amach. Triomaíodh na súnáin le casadh folúis le haghaidh díorthaithe ina dhiaidh sin, agus ansin goraíodh iad le hidreaclóiríd methoxyamine 2% (wt/vol) (226904, Sigma-Aldrich) i bpiridín ar feadh 60 nóiméad ag 37 céim , agus silylated ag N-meitil-N-( tert-butyldimethylsilyl) trifluoroacetamide le 1% tert-butyldimethylchlorosilane (TBDMS, 18162-48-6, Regis Technologies) ar feadh 30 nóiméad ag 45 céim . Rinne GC-HRMS anailís ar na díorthaigh glúcóis [13C6], an crómatagraf gáis Trace 1310 (Thermo Fisher) leis an gcolún DB-35MS (Agilent Technologies), agus an córas Q Exactive GC Orbitrap GC-MS/MS (Thermo Fisher). Rinne Metabo-Profile measúnuithe meitibilíde GC-MS/MS. Aithníodh agus rinne Xcalibur (v4.1) agus TraceFinder (v5.1) (Thermo Fisher) na meitibilítí a shainaithint agus a chainníochtú, lena n-áirítear am coinneála, cóimheas muirear-go-mais na blúirí ian, agus buaic-déine. Rinneadh anailís ar na díorthaigh [13C16]palmitate agus [13C5]meitiainín ag crómatagrafaíocht leachta ardbhrú – mais-speictriméadar ceathairpholach trí-bhrú (UPLC-TQMS). Rinneadh anailís ar na sonraí amh ó UPLC-TQMS ag baint úsáide as bogearraí MassLynx Waters (v4.1, Waters) chun buaic-eastóscadh, comhtháthú, sainaithint agus cainníochtú na meitibilítí. Baineadh úsáid as teanga R (v4.1.1) le haghaidh anailís staitistiúil ina dhiaidh sin.

Múnla meall B16 agus imdhíonteiripe aistrithe cille uchtaíoch

Chun gníomhaíocht frith-meall na gcealla T in vivo a imscrúdú, 0.2 × 106 B16-Instealladh subcutaneously cealla melanoma OVA isteach i lucha baineann C57BL/6N. Naoi lá tar éis ionchlannú meall, rinneadh lucha a instealladh go hinfhéitheach le cealla 5 × 106 T ó lucha baineann OT-I méadaithe ar feadh 7 lá i gcoinníollacha éagsúla. Fuair ​​lucha meall-iompartha 5 Gy de ionradaíocht sublethal roimh ACT. Rinneadh limistéar an meall a thomhas gach 2 lá agus ríomhtar é mar fhad (mm) × leithead (mm). Rinneadh lucha le limistéar meall a bhí gar do 300 mm2 a eotánú. Chun iniúchadh a dhéanamh ar mharthanacht na gcealla T leathnaithe i gcoinníollacha éagsúla, aistríodh cealla T 4 × 106 CD45.1+ ó lucha baineann OT-I go lucha baineann C57BL/6N go huchtach. Seachtain ina dhiaidh sin, eotanaíodh lucha agus rinneadh na cealla ó fhuil scoite, spleens, agus nóid limfe a chomhaireamh. Rinneadh cion na gcealla T aistrithe a chinneadh trí gheataí ar chealla T a léirigh CD45.1+ agus CD45.2+ trí chiteiméadracht sreafa.

Múnla lucha NCG agus teiripe CD19-CAR-T

Ionchlannaíodh lucha NCG baineanna go subcutaneously le 1 × 106 CD K562 cealla. Nuair a shroich toirteanna siadaí 75 mm3, fuair lucha 5 × 106 cealla T neamh-aistrithe agus CD{9}}cealla CAR T saothraithe i gceannas nó meán 10 mM ina raibh aigéad lachtaigh. Rinneadh fás meall a thomhas gach 2 lá le calipers leictreonacha agus a ríomh de réir fad (mm) × leithead (mm). Rinneadh lucha le limistéar meall níos mó ná 300 mm2 a eotanú. Bailíodh, díleádh agus próiseáladh na tumaí le Percoll (Sigma), agus ansin socraíodh feidhm na gcealla T agus feinitíopa de réir cítoiméadracht sreafa.

Ráta tomhaltais ocsaigine basal agus anailís ar ráta aigéadaithe extracellular

Le haghaidh anailíse ar shaintréithe meitibileach, rinne anailísí seahorse XF24 (Agilent) an OCR agus ECAR a mheasúnú. Go hachomair, rinneadh réamhchóireáil ar chealla T daonna a shaothraíodh le coinníollacha éagsúla ar feadh 12 lá le meán XF neamh-mhaolánach (RPMI 1640 neamh-mhaolánach ina raibh 10 mM glúcóis 1 mM pyruvate sóidiam, agus 2 mM glutamine) . Ansin, síolaíodh cealla T daonna ag 0.5 × 106 cealla in aghaidh an tobair i microplate cultúir cille XF24 agus goraíodh iad i gorlann neamh-CO2 ar feadh 1 h ag 37 céim . Chun cloí cille a fheabhsú, rinneadh na plátaí a sníomh ag teocht an tseomra ar feadh 5 min ag 100 g le coscán nialasach. Rinneadh anailís ar thomhaltas ocsaigine agus aigéadú eischeallach faoi choinníollacha basal agus mar fhreagra ar 1.25 μM oligomycin, 50 mM 2-deoxy-d-glúcóis, 1.5 μM FCCP, 0.5 μM rotenone, agus 0.5 μM antimycin Atract SRC ríomh ag subhachas. an OCR basal ón OCR uasta.

Sliseanna – qPCR

Rinneadh imdhíon-réamhshamhlú crómatin (ChIP) de réir threoracha an déantóra a cuireadh ar fáil le trealamh lomadh mear einsímeach ChIP-IT (Active Motif). Go hachomair, socraíodh 15 milliún cealla T daonna saothraithe faoi rialú nó coinníollacha aigéad lachtaigh 10 mM le formaildéad ar feadh 10 nóiméad ag teocht an tseomra, agus cuireadh stop leis an imoibriú fosaithe trí 1 × glicín a chur leis. Scriosadh cealla seasta le PMSF agus manglam um chosc próitéine agus stóráiltear iad ag −80 céim roimh lysis cille. Ansin, athchuireadh an millíní leáite i maolán lysis fuar-oighear 1 ml le PMSF agus manglam um chosc próitéine ar oighear ar feadh 30 nóiméad chun ábhar núicléach a fháil. Ansin athchuireadh an millín núicléach agus díleadh é le manglam einsímeach chun crómatán a lomadh ar feadh 15 nóiméad ag 37 céim. Goradh crómatin lomtha le coirníní maighnéadacha próitéin G le frith-c-MYC (CST, cat. uimh. 18583, 1:100 le haghaidh sliseanna) agus frith-IgG (CST, cat. uimh. 2729, 1:100 le haghaidh sliseanna) ag 4 céim thar oíche. Ansin, nite coirníní maighnéadacha le maoláin sliseanna ceithre huaire agus eluted le maolán 50 ul elution. Rinneadh an DNA eluted a aisiompú ar feadh 2.5 h ag 65 céim agus ansin íonaithe trí eastóscadh feanól-clóraform. Baineadh úsáid as an DNA íonaithe chun ChIP-qPCR a dhéanamh chun saibhriú MYC ag tionscnóirí sprice-géinte a bhrath. Tá na primers a úsáidtear le haghaidh ChIP–qPCR le fáil i dTábla Forlíontach 2.

Anailís poitéinseal mais mitochondrial agus membrane

Rinneadh anailís ar mhais mitochondrial agus cumas membrane ag baint úsáide as MitoTracker Green agus eistear meitile tetramethyrhodamine (TMRM). Bhí dhaite cealla le 250 nM MitoTracker Green (Thermo Fisher) nó 50 nM TMRM (Thermo Fisher) i gorlann ag 37 céim (5% CO2) ar feadh 1 h roimh staining dromchla cille. Níodh cealla le maolán FACS faoi thrí, agus ruaimníodh marcóirí dromchla ina dhiaidh sin le haghaidh tuilleadh anailíse FACS.

Anailís staitistiúil

Rinneadh anailís staitistiúil ag úsáid GraphPad Prism leagan 8.0. Taispeántar na torthaí mar mheán ± sem Baineadh úsáid as t-tástáil Dhá-earball an Dalta chun cóireálacha a chur i gcomparáid le grúpaí rialaithe. Cuireadh ANOVA déthreo le tástáil ilchomparáidí Tukey's Sidak nó Dunnett i bhfeidhm ar chomparáidí iolracha. Measadh go raibh P < 0.05 suntasach go staitistiúil.

Tagairtí

1. Gattinoni, L., Speiser, DE, Lichterfeld, M. & Bonini, C. T gaschealla cuimhne i sláinte agus galair. Nát. Med. 23, 18–27 (2017).

2. Gao, S. et al. Cealla T cuimhne cosúil le gaschealla: peirspictíocht ón taobh dorcha. Cill Imdhíonachta. 361, 104273 (2021).

3. Rosenberg, SA & Restifo, NP Aistriú cille uchtaithe mar imdhíonteiripe pearsantaithe le haghaidh ailse an duine. Eolaíocht 348, 62–68 (2015).

4. Ribas, A. & Wolchok, JD Imdhíonteiripe ailse ag baint úsáide as imshuí seicphointí. Eolaíocht 359, 1350–1355 (2018).

5. Lugli, E., Galletti, G., Boi, SK & Youngblood, BA Stem, éifeachtóir, agus stáit hibrideacha cealla cuimhne CD8+ T. Treochtaí Imdhíonachta. 41, 17–28 (2020).

6. Galletti, G. et al. Dhá fhothacar de ghineadóirí cuimhne T CD8+ cosúil le gas, a bhfuil tiomantais cinniúint ar leith acu i ndaoine. Nát. Imdhíonól. 21, 1552–1562 (2020).

7. Gattinoni, L. et al. Fo-thacar de chill T cuimhne daonna a bhfuil airíonna cosúil le gascheall aige. Nát. Med. 17, 1290–1297 (2011).

8. Franco, F., Jaccard, A., Romero, P., Yu, YR & Ho, PC Rialú meitibileach agus epigenetic ar ídiú T-chealla. Nát. Metab. 2, 1001–1012 (2020).

9. Kaech, SM & Cui, W. Rialú tras-scríofa ar éifeachtóir agus cuimhne CD8+ difreáil cille T. Nát. Ath. Immunol. 12, 749–761 (2012).

10. Huang, Q. et al. Difreáil tosaigh ar chealla cuimhne CD8+ T atá sainiúil do siadaí mar fhreagróirí bona fide ar imshuí PD-1/PD-L1 i nóid limfe a dhraenáil. Cill 185, 4049–4066 (2022).

11. Siddiqui, I. et al. Tcf intratumoral Tcf1+ PD-1+ CD8+ Cuireann cealla T le hairíonna cosúil le gas chun cinn rialú siadaí mar fhreagra ar vacsaíniú agus imdhíonteiripe imshuímh seicphointí. Díolúine 50, 195–211 (2019).

12. Jeannet, G. et al. Ról riachtanach an éifeachtóra conair Wnt Tcf-1 chun cuimhne cille feidhmiúil CD8 T a bhunú. Proc. Natl Acad. Sci. SAM 107, 9777–9782 (2010).

13. Henning, AN, Roychoudhuri, R. & Restifo, NP Rialú epigenetic ar dhifreáil cealla T CD8+. Nát. Ath. Immunol. 18, 340–356 (2018).

14. Crompton, JG et al. Nochtar athruithe forchéimnitheacha sa tírdhreach eipigineach an gaol idir na fo-thacairí cille T CD8+. Cill Mol. Imdhíonól. 13, 502–513 (2016).

15. Yu, B. et al. Nochtann tírdhreacha eipigéiniteacha fachtóirí trascríobh a rialaíonn difreáil cealla T CD8+. Nát. Imdhíonól. 18, 573–582 (2017).

16. Araki, Y. et al. Nochtann anailís ar fud an ghéinóim ar mheitiliú histone rialú crómatin stát-bhunaithe de thrascríobh géine agus feidhm na cuimhne CD8+ cealla T. Díolúine 30, 912–925 (2009).

17. Moller, SH, Hsueh, PC, Yu, YR, Zhang, L. & Ho, PC Déanann cláir mheitibileach díolúine cille T a oiriúnú in ionfhabhtú víreasach, ailse agus dul in aois. Metab Cille. 34, 378–395 (2022).

18. Phan, AT et al. Tacaíonn meitibileacht glycolytic bunreachtúil le difreáil chuimhne éifeachtaire cille CD8+ T le linn ionfhabhtú víreasach. Díolúine 45, 1024–1037 (2016).

19. Sinclair, LV et al. Rialú receptor antigen ar mheitibileacht meitiainín i gcealla T. eLife 8, e44210 (2019).

20. O’Sullivan, D. et al. Úsáideann cealla T cuimhne CD8+ lipolysis cille intreach chun tacú leis an ríomhchlárú meitibileach atá riachtanach don fhorbairt. Díolúine 41, 75–88 (2014).

21. Pearce, EL et al. Cuimhne T-chealla CD8 a fheabhsú trí mheitibileacht aigéid shailligh a mhodhnú. Nádúr 460, 103–107 (2009).

22. Van der Windt, GJ et al. Tá cumas riospráide mitochondrial ina rialtóir ríthábhachtach ar fhorbairt chuimhne cille T CD8+. Díolúine 36, 68–78 (2012). 23. Boedtkjer, E. & Pedersen, SF Micrea-thimpeallacht an meall aigéadach mar thiománaí ailse. Annú. Ath. Fisiol. 82, 103–126 (2020). 24. Thommen, DS & Schumacher, mífheidhmiú cille TN T san ailse. Cill Ailse 33, 547–562 (2018).

25. Scharping, NE et al. Represses microenvironment an meall bithgenesis mitochondrial t-chill a thiomáint neamhdhóthanacht meitibileach t-chealla intratumoral agus dysfunction. Díolúine 45, 374–388 (2016).

26. Yu, YR et al. Treisíonn dinimic miteachondrial suaite i CD8+ TILanna ídiú T-chealla. Nát. Imdhíonól. 21, 1540–1551 (2020).

27. Chang, CH et al. Is cúis le dul chun cinn ailse é iomaíocht meitibileach i micri-thimpeallacht an meall. Cill 162, 1229–1241 (2015).

28. Scharping, NE et al. Cuireann strus mitochondrial de bharr spreagadh leanúnach faoi hypoxia ídiú T-chealla go tapa. Nát. Imdhíonól. 22, 205–215 (2021).

29. Jansen, CS et al. Déanann nideoige laistigh den meall a chothabháil agus a dhifreáil cealla CD8 T cosúil le gas. Nádúr 576, 465–470 (2019).

30. Táim, SJ et al. Cealla CD{1}} T a shainiú a sholáthraíonn an pléasctha iolraíoch tar éis teiripe PD-1. Nádúr 537, 417–421 (2016).

31. Haas, R. et al. Rialaíonn lactate ciorcaid meitibileach agus pro-athlastacha chun aistriú cille T agus feidhmeanna éifeachtóra a rialú. PLoS Biol. 13, e1002202 (2015).

32. Wu, H. et al. Táirgeann T-chealla nideoga aigéadacha i nóid limfe chun a bhfeidhmeanna éifeachtóra féin a shochtadh. Nát. Cumann. 11, 4113 (2020).

33. Calcinotto, A. et al. Déanann modhnú aigéadacht mhicrea-chomhshaoil ​​aisiompú ar aimhréidh i limficítí T a dhéanann siadaí daonna agus murine a insíothlú. Ailse Res. 72, 2746–2756 (2012). 34. Gottfried, E. et al. Modhnaíonn aigéad lachtaigh meall-díorthaithe gníomhachtú cille dendritic agus léiriú antaigin. Fuil 107, 2013–2021 (2006).

35. Colegio, NÓ et al. Polarú feidhme macrophages a bhaineann le siadaí ag aigéad lachtaigh a dhíorthaítear siadaí. Nádúr 513, 559–563 (2014).

36. Erra Diaz, F. et al. Tiomáineann acidosis seachcheallach agus cosc ​​mTOR idirdhealú na gceall dendritic daonna a dhíorthaítear ó monocyte. Cill Ionadaí 31, 107613 (2020).

37. Sukumar, M. et al. Má chuirtear cosc ​​ar mheitibileacht glycolytic, feabhsaíonn sé cuimhne cille CD8+ T agus feidhm fhrithtumóra. J. Clin. Infheistiú. 123, 4479–4488 (2013).

38. Scholz, G. et al. Spreagann modhnú comharthaíochta mTOR foirmiú cealla cuimhne T cosúil le gaschealla. EBioLeighis 4, 50–61 (2016).

39. Pollizzi, KN et al. Rialaíonn mTORC1 agus mTORC2 go roghnach difreáil cealla T CD8+. J. Clin. Infheistiú. 125, 2090–2108 (2015).

40. Zhang, L. et al. Rialaíonn sprioc mhamach de choimpléasc rapamycin 2 difreáil cuimhne cille CD8 T ar bhealach atá ag brath ar Foxo. Cill Ionadaí 14, 1206–1217 (2016).

41. Zhou, H. & Huang, S. Ról na comharthaíochta mTOR i motility cille meall, ionradh agus metastasis. Curr. Próitéin Pept. Sci. 12, 30–42 (2011).

42. Arguello, RJ et al. SCENITH: modh sreafa bunaithe ar chiteiméadracht chun meitibileacht fuinnimh a phróifíliú go feidhmiúil le taifeach aonchealla. Metab Cille. 32, 1063–1075 (2020).

43. Ron-Harel, N. et al. Cuireann bithgenesis mitochondrial agus athmhúnlú proteome meitibileacht aon-charbóin chun cinn le haghaidh gníomhachtú T-chealla. Metab Cille. 24, 104–117 (2016).

44. Han, C., Ge, M., Ho, PC & Zhang, L. Fueling T-cell díolúine antitumor: athchuairt ar mheitibileacht aimínaigéad. Imdhíonacht Ailse. Res. 9, 1373–1382 (2021).

45. Kakaradov, B. et al. Rialáil luath tras-scríbhinne agus epigenetic ar dhifreáil cille T CD8+ arna nochtadh trí sheicheamhú RNA aonchealla. Nát. Imdhíonól. 18, 422–432 (2017).

46. ​​Wang, W. & Zou, W. Aimínaigéid agus a n-iompróirí i díolúine T cille agus teiripe ailse. Mol. Cill 80, 384–395 (2020).

47. Marchingo, JM, Sinclair, LV, Howden, AJ & Cantrell, DA Anailís chainníochtúil ar conas a rialaíonn Myc próitéamaí cille T agus cosáin meitibileach le linn gníomhachtú cille T. eLife 9, e53725 (2020).

48. Sukumar, M. et al. Aithníonn poitéinseal membrane mitochondrial cealla a bhfuil gasta feabhsaithe acu le haghaidh teiripe cheallacha. Metab Cille. 23, 63–76 (2016).

49. Alizadeh, D. et al. Feabhsaíonn IL15 gníomhaíocht antitumor cille CAR-T trí ghníomhaíocht mTORC1 a laghdú agus a bhfeinitíopa cuimhne gascheall a chaomhnú. Imdhíonacht Ailse. Res. 7, 759–772 (2019).

50. Buck, MD et al. Rialaíonn dinimic mitochondrial cinniúint T chealla trí ríomhchlárú meitibileach. Cill 166, 63–76 (2016).

51. Krishna, S. et al. Déanann cealla CD8 T cosúil le gas idirghabháil ar fhreagairt imdhíonteiripe cille uchtaíoch i gcoinne ailse an duine. Eolaíocht 370, 1328–1334 (2020).

52. Burger, ML et al. Ordlathais ceannasachta antaiginí cruth TCF1+ ginearaí CD8 T feinitíopaí cille i siadaí. Cill 184, 4996–5014 (2021).

53. Guo, Y. et al. Cuireann athchlárú meitibileach cealla T CD8+ T atá ídithe go foirceanta faoi IL-10 le díolúine frith-meall. Nát. Imdhíonól. 22, 746–756 (2021).

54. Klein Geltink, RI et al. Comhoiriúnú meitibileach ar chealla CD8+ efector T le haghaidh teiripe uchtaithe cille. Nát. Metab. 2, 703–716 (2020).

55. Suzuki, J., Nabe, S., Yasukawa, M. & Yamashita, M. Rialaíonn Glutamine gníomhaíocht antitumor cealla CD8 T. Gan To Kagaku Ryoho 47, 11–15 (2020).

56. Vodnala, SK et al. Spreagtar gascheall agus mífheidhmiú cille T i siadaí trí mheicníocht choiteann. Eolaíocht 363, eaau0135 (2019).

57. Bosticardo, M. et al. Tá gníomhachtú claonta ar limficítí T daonna mar gheall ar pH íseal eischilleánach antagonaithe ag costas B7/CD28. Eur. J. Imdhíon. 31, 2829–2838 (2001).

58. Pucino, V. et al. Cothaítear galair trí dhlúthú lachtáit ag suíomh an athlasadh ainsealacha trí athshreangú meitibileach T CD4+ a spreagadh. Metab Cille. 30, 1055–1074 (2019).

59. Feng, Q. et al. Méadaíonn lachtáit gascheall cealla T CD8+ chun imdhíonacht frith-meall a mhéadú. Nát. Cumann. 13, 4981 (2022).

60. Roy, DG et al. Múnlaíonn meitibileacht meitiainín freagairtí cille cúntóirí T trí athchlárú epigenetic a rialáil. Metab Cille. 31, 250–266 (2020).

61. Zhang, L. & Romero, P. Rialú meitibileach ar chinntí cinniúint CD8+ T agus imdhíonacht frith-tumóra. Treochtaí Mol. Med. 24, 30–48 (2018).

62. Cham, CM, Driessens, G., O'Keefe, JP & Gajewski, TF Cuireann díothacht glúcóis bac ar imeachtaí iolracha slonn géine agus feidhmeanna éifeachtóra i gcealla CD8+ T. Eur. J. Immunol.38, 2438–2450 (2008).

63. O’Sullivan, D. et al. Úsáideann cealla T cuimhne CD8+ lipolysis cille intreach chun tacú leis an ríomhchlárú meitibileach atá riachtanach don fhorbairt. Díolúine 49, 375–376 (2018).

64. Lín, R. et al. Rialaíonn ocsaídiú aigéad sailleach CD8+ cuimhne fíocháin-chónaitheach t-chealla in adenocarcinoma gastrach. Imdhíonacht Ailse. Ath 8, 479–492 (2020).

65. Raud, B. et al. Tá gníomhartha Etomoxir ar chealla T rialála agus cuimhne neamhspleách ar ocsaídiú aigéad sailleach Cpt1a-idirghabhála. Metab Cille. 28, 504–515 (2018).

66. Sharma, U. & Rando, IO Ionchuir mheitibileach isteach san eipiginóim. Metab Cille. 25, 544–558 (2017).

67. Tyrakis, PA et al. Rialaíonn S-2-hiodrocsaglutaráit cinniúint CD8+ T-limficítí. Nádúr 540, 236–241 (2016).

68. Zhang, H. et al. Is rialtóir eipigineach ar fhorbairt cuimhne T-chealla CD8+ é béite-hydroxybutyrate a ghintear le cetogenesis. Nát. Cill Biol. 22, 18–25 (2020).

69. Bian, Y. et al. Athraíonn Ailse SLC43A2 meitibileacht meitiainín T-chealla agus meitiliú histone. Nádúr 585, 277–282 (2020).

70. Wall, M. et al. Cuireann rialú aistritheach ar c-MYC ag rapamycin chun cinn idirdhealú myeloid teirminéil. Fuil 112, 2305–2317 (2008).

71. Yerinde, C., Siegmund, B., Glauben, R. & Weidinger, C. Rialú meitibileach epigenetics agus a ról i CD8+ difreáil cille T agus feidhm. Tosaigh. Imdhíonól. 10, 2718 (2019).

72. Eil, R. et al. Teorainneacha faoi chois imdhíonachta ianach laistigh den microenvironment meall feidhm éifeachtóir cealla T. Nádúr 537, 539–543 (2016).

73. Guo, A. et al. Comhoibríonn comhpháirteanna casta cBAF agus MYC go luath i gcinniúint chill T CD8+. Nádúr 607, 135–141 (2022).

74. Raynor, JL, Chapman, NM & Chi, H. Rialú meitibileach ar ghiniúint T-chealla cuimhne agus gastacht. Cuan Earraigh Fhuar. Dearcadh. Biol. 13, agus 037770 (2021).

75. Kaya-Okur, HS et al. CUT&Clib le haghaidh próifíliú éifeachtach eipigineach ar shamplaí beaga agus cealla aonair. Nát. Cumann. 10, 1930 (2019).

76. Jin, H. et al. ChIPseqSpikeInFree: cur chuige normalaithe ChIP-seq chun athruithe domhanda i modhnuithe histone a nochtadh gan spike-in. Bithfhaisnéisíocht 36, 1270–1272 (2020).

77. Sellick, CA, Hansen, R., Stephens, GM, Goodacre, R. & Dickson, AJ Eastóscadh meitibilít ó chealla mamacha saothraithe fionraí le haghaidh próifíliú domhanda meitibilíte. Nát. Prótacal. 6, 1241–1249 (2011).

78. Li, C. et al. Rialaíonn catabólacht aimínaigéad próitéasas gascheall hematopoietic trí ais GCN2-eIF2. Gaschill na Cille 29, 1119–1134 (2022).

79. Wenes, M. et al. Rialaíonn an t-iompróir pyruvate mitochondrial difreáil cuimhne T-chill agus feidhm antitumor. Metab Cille. 34, 731–746 (2022).