Éifeachtaí Glyeosides As Cistanche Ar Fhoghlaim Cognition agus Synaptach Plaisteacht i bhFrancaigh Múnla Díothachta Codlata

Teibí

Cuspóir:Iniúchadh a dhéanamh an féidir le gliocóisídí cistánach feabhas a chur ar fhoghlaim agus ar fheidhm chognaíoch na bhfrancaigh samhail díothachta codlata trí phlaisteacht shionaptach a rialáil.

Modhanna: Roinneadh caoga francach Wistar fireann go randamach i ngrúpa rialaithe bán (Rialú), grúpa rialaithe ardáin (PC), grúpa múnla (Múnla),gliocóisídí den ghrúpa cistanche (GCanna), agus grúpa estazolam (Est ). Ullmhaíodh an tsamhail díothachta codlata de francaigh trí mhodh timpeallachta uisce il-ardán modhnaithe. Baineadh úsáid as lúbra uisce Morris agus tástáil pháirce oscailte chun feidhm chognaíoch spásúil agus athruithe mothúchánacha na bhfrancach a bhrath. Baineadh úsáid as staining Nissl chun breathnú ar na hathruithe ar mhoirfeolaíocht agus cainníocht na cealla nerve salimistéar hippocampal CAl na francaigh. Baineadh úsáid as blot an Iarthair agus R'T - PCR chun na leibhéil slonn de synaptophysin(SY'N), substaint dhlúth membrane postsynaptic 95 ( PSD {{ }} ), agusfachtóir neurotrófach inchinn-díorthaithe (BDNF). 

Torthaí;Léirigh torthaí lúbra uisce Morris gur i gcomparáid leis an ngrúpa Rialaithe, ancumas foghlama agus cognaíocha na francaighsa ghrúpa Múnla laghdú suntasach (P<0. 05 ), and the learning and memory function of rats wascóireáil GCs feabhsaithe ( P <0. 05). The results of the open field test showed that compared with the Control group, the movement distance and standing times of the Model group were significantly increased ( P <0. 05 ), the resting time was significantly shortened( P <0.05 ), and the anxiety was increased, while after GCs treatment, the movement distance and standing times decreased ( P <0. 05 ), the resting time increased ( P <0. 05), and the anxiety was improved. The results of Western blot and R'T - PCR showed that the leibhéil próitéine agus slonn géine de BDNF, SYN, agus PSD -95sa ghrúpa Mlodel laghdú suntasach (P<0. 05 ), while after treatment with GCs, the expression levels ofBDNF, SYN and PSD -95 were significantly up-regulated ( P <0.05). Conclusion: Glycosides of cistanche may af. feet synaptic plasticity by regulating the expression of synaptic-related markers, thereby improving the learning and cognitive function of sleep deprivation model rats.

FORLÍONTAÍ UM FHOIRMIÚ CISTANCHE Luibhe DOFHEABHSÚ FOGHLAIM AGUS FEIDHM Cognaíoch

PRÍOMHfhocailGlicóisídí cistéise; Hippocampus; Díothacht codlata; Foghlaim agus cuimhne; imní; Plaisteacht shionaptach

Neamhord codlata (SD)tá aneamhord feidhmiúil codlata neamhghnáchade bharr sraith fachtóirí casta marinsomnia, aislingeacht, agusmúscailt éasca. Le blianta beaga anuas,minicíocht SDag méadú de réir a chéile. Thuairiscigh staidéir ghaolmhara gur féidir le SD a bheith ina chúisgalair cardashoithíoch,mífheidhmiú meitibileach,galair imdhíonachta, aguslárchóras na néaróggalair degenerative cosúil le galar Alzheimer [1]. Is féidir le SD damáiste ocsaídiúcháin a dhéanamh do néaróin hippocampal, mífheidhm chognaíoch a chur faoi deara, agus athruithe giúmar a tháirgeadh mar imní agus dúlagar [2]. Is ábhar íocshláinte luachmhar é Cistanche deserticola is féidir a úsáid mar leigheas agus bia sa tSín. Tá éifeachtaí aige tonifying an duáin agus athlánú qi, moistening an intestines a chur chun cinn gluaiseachtaí bputóg, agus yang neartú. Tá éifeachtaí frithocsaídeacha, frith-apoptotic, cosanta ae agus neuroprotective ag príomh-sliocht Cistanche deserticola, glycosides cistanche (GCs). Fuair ​​​​ár dtaighde roimhe seo gur féidir le GCanna feabhas a chur ar fhoghlaim agus ar fheidhm chognaíoch lucha SAMP8 trí ról frithocsaídeach agus frith-apoptotic a imirt [4].

Tá sé léirithe ag staidéir ghaolmhara go bhfuil dlúthbhaint ag mífheidhm chognaíoch de bharr SD le plasticity synaptic [5]. Mar sin féin, is beag tuairiscí ar an meicníocht trína rialaíonn GCanna plaisteacht synaptic agus a fheabhsaíonn lagú foghlama agus cuimhne agus meath cognaíoch i bhfrancaigh de bharr díothachta codlata. Mar sin, tá sé mar aidhm ag an staidéar seo iniúchadh a dhéanamh an bhfuil tionchar ag GCanna ar plasticity synaptic trí léiriú marcóirí a bhaineann le synaptic a rialáil, agus ar an gcaoi sin feabhas a chur ar fheidhm foghlama agus chognaíoch na bhfrancach le samhlacha díothachta codlata, agus smaointe cóireála agus pleananna nua a sholáthar do GCanna chun foghlaim agus cognaíocha a chóireáil. lagú de bharr neamhoird codlata.

1 Ábhair agus modhanna

1.1 Ainmhithe turgnamhacha

Ceannaíodh francaigh fireann Wistar idir 6 agus 8 seachtaine d'aois, ag meáchan 280 go 300 g, ó Beijing Sibeifu, le ceadúnas táirgthe ainmhithe [SCXK (Beijing) 2019-0010]. Coinníodh na hainmhithe go léir in Ionad Turgnaimh Ainmhithe Choláiste Leighis Baotou faoi na coinníollacha seo a leanas: teocht (24 ± 1) céim , taise 50% go 55%, 12 h éadrom agus 12 h dorcha, gan aon srianta ar bhia agus uisce. Cheadaigh coiste eitice na scoile an turgnamh seo [Baoyi Lunshen 2022 No. (63)].

1. 2 Príomh-imoibrithe agus ionstraimí

Ceannaíodh gliocóisídí iomlána Cistanche deserticola ó Chengdu Xiyu Cistanche Biotechnology Co., Ltd. (uimhir bhaisc: KSM20220609011); ceannaíodh táibléid Estazolam ó CSPC Pharmaceutical Group Ouyi Pharmaceutical (uimhir bhaisc: 044220343); ceannaíodh maolán luchtaithe próitéine (P1015), maolán lysis RIPA (R0010), tuaslagán ceimiceach (PE0010), etc. ó Beijing Solebao; ceannaíodh substaint dhlús postsynaptic in antashubstaint 95 (PSD-95) (AB192757) agus synaptophysin (SYN) (ab32127) ó Abcam, USA Company; ceannaíodh fachtóir neurotrófach inchinn-díorthaithe (BDNF) (48503-2) agus -actin (52901) ó SAB Company, SAM; ceannaíodh antashubstaint thánaisteach IgG frith-choine gabhar (SA00001-20) ó Proteintech Company, SAM; ceannaíodh francach melatonin (MT) agus ELISA Scientific Research Kit (MM-0657R1) ó Jiangsu Enzyme Immunoassay Industry Co., Ltd. Sliseoir pairifín (Leica, an Ghearmáin); micreascóp optúil (Leica, an Ghearmáin);

Maze uisce Morris, bosca tástála páirce oscailte (Shanghai Xinruan); gaireas leictreafóiréis ingearach (Cuideachta Beijing Liuyi); croiteoir decolorization (Cuideachta Beijing Liuyi); córas anailíse íomháithe próitéin (Shanghai Tanon Technology); fluaraiseacht ionstraim PCR cainníochtúil (Xi'an Tianlong Technology Co., Ltd).

1.3 Modhanna turgnamhacha

1.3.1 Grúpáil ainmhithe agus riaradh drugaí

Roinneadh 50 francaigh fireann Wistar go randamach i ngrúpa rialaithe bán (Grúpa rialaithe), grúpa rialaithe ardáin (rialú ardán-foirm, grúpa PC), grúpa múnla (grúpa múnla), gliocóisídí iomlána de ghrúpa Cistanche deserticola (grúpa GCs). , 50 mg/kg), agus grúpa estazolin (grúpa Est, 0.54 mg/kg), le 10 bhfrancach i ngach grúpa. Tugadh 0.9% salanda don ghrúpa Rialaithe agus don ghrúpa PC trí thomhas. Cuireadh na grúpaí go léir ag 7 am gach lá tar éis don samhaltú tosú, agus mhair an gavage ar feadh 21 lá.

1.3. 2. Múnla ainmhithe díothachta codlata a ullmhú

Bunaíodh an tsamhail díothachta codlata ag baint úsáide as an modh timpeallachta uisce il-ardán modhnaithe [6]. Ba umar uisce roisín poileitiléin dronuilleogach 130 cm × 50 cm × 45 cm an trealamh turgnamhach. Cuireadh ardán beag le trastomhas 5 cm agus airde 20 cm san umar uisce. Bhí trastomhas 10 cm ar ardán an ghrúpa PC agus airde 20 cm. Líonadh an umar uisce le huisce go dtí doimhneacht de thart ar 18 cm agus coinníodh teocht an uisce ag (20 ± 1) céim . Seachtain amháin roimh thús an turgnaimh, cuireadh na francaigh sa bhosca díothachta codlata gach lá ar feadh 60 nóiméad chun iad féin a chur i dtaithí ar an gcomhshaol. Tar éis an tsamhail a bhunú, ach amháin an grúpa Rialaithe, cuireadh francaigh gach grúpa ar an ardán beag in am ó 8 am go 8 pm gach lá le haghaidh díothachta codlata ar feadh 21 lá as a chéile.

Bhí rochtain saor in aisce ag gach francach ar bhia agus ar uisce agus bhog siad go héasca ar an ardán. Ba é an timthriall éadrom agus dorcha 12 uair an chloig gach lá.

1. 3. 3 Turgnamh lúbra uisce Morris

Roinneadh an gcathair ghríobháin uisce Morris i 4 réimse, líonadh le huisce, agus cuireadh an t-ardán sa cheathrú 4ú. Bhí an dromchla uisce thart ar 2 cm os cionn an ardáin. Cuireadh melanin inite de ghrád bia leis an uisce, agus coinníodh teocht an uisce ag (25 ± 1) céim . (1) Turgnamh loingseoireachta suite: Roghnaíodh lár gach limistéir agus cuireadh na francaigh go réidh san uisce. Bhí cead acu iniúchadh a dhéanamh faoi shaoirse. Taifeadadh an t-am a thóg sé ar na francaigh an sprioc-ardán a aimsiú laistigh de 60 soicind. Treoraíodh francaigh nár aimsigh an t-ardán chuig an ardán agus d'fhan siad ar feadh 20 soicind. Leanadh den oiliúint ar feadh 5 lá. (2) Tástáil taiscéalaíochta spáis: Ar an 6ú lá, baineadh an t-ardán agus cuireadh na francaigh san uisce ó lár an 2ú ceathrú in aghaidh an bhalla. Taifeadadh an líon uaireanta a ndeachaigh na francaigh thar an ardán laistigh de 120 s agus an t-am ar fhan siad sa 4ú ceathrú.

1. 3. 4 Turgnamh páirce oscailte

Baineadh úsáid as bosca turgnamhach 100 cm × 100 cm × 50 cm, agus roinntear bun an bhosca ina 9 greille. Cuireadh gach grúpa francaigh sa seomra turgnamhach páirce oscailte roimh ré chun oiriúnú don timpeallacht faoi dhíon ar feadh 60 min. Ag tús an turgnaimh, cuireadh na francaigh tástála i gcoirnéil sheasta den bhosca turgnamhach réimse oscailte ar a seal, agus taifeadadh líon na n-amanna seasamh, achar gluaiseachta, agus am statach na francaigh laistigh de 5 min ag baint úsáide as bogearraí anailíse iompraíochta. Ceanglaíodh go mbeadh an timpeallacht ciúin le linn an turgnaimh, agus wiped an gléas turgnamhach le huisce agus alcól faoi seach idir dhá thurgnamh chun boladh an chéad francach a chosc ó thionchar a dhéanamh ar bhreithiúnas iompraíochta an chéad francach eile.

1. 3. 5 Measúnacht imdhíonachta-nasctha le heinsím (ELISA)

Brath leibhéil serum MT i bhfrancaigh Rinneadh ainéistéisiú ar francaigh trí instealladh ion-peritoneal, agus bailíodh 5 ml fola ón aorta bhoilg. Tar éis fanacht ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra, lártheifneoiríodh an fhuil chun serum a fháil. Cuireadh 40 μL de chaolaitheoir samplach le gach tobar, agus ansin cuireadh 10 μL den sampla a bhí le tástáil leis. Tar éis é a shéaladh le scannán séalaithe, goraíodh an pláta ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad. Nite 5 huaire, cuireadh 50 μL de thuaslagán lipéadaithe einsím leis, agus séalaithe an pláta le scannán ina saothraítear rónta agus gor ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad. Nite 5 huaire, agus ansin cuireadh an tuaslagán forbartha dath agus an réiteach foirceanta imoibrithe ar a seal. Rinneadh luach OD gach tobair a thomhas ag lipéadóir einsíme ag tonnfhad 450 nm.

1. 3. 6 Nissl staining

Roghnaíodh trí francach ó gach grúpa, agus baineadh fíochán inchinn trí dhíchaipitliú agus socraíodh é le tuaslagán polyoxyethylene 4%. Bhí an fíochán díhiodráitithe, tumtha i dtuaslagán céir, leabaithe, agus slisnithe trí mhodhanna traidisiúnta. Coinníodh na slices le tiús 5 μm, rinsed le PBS, dhaite le 0.1% toluidín gorm ar feadh 0.5 h, difreáilte le 95% alcól, díhiodráitíodh iad le 100% alcól, trédhearcach le xiléin, agus séalaithe le guma neodrach. Breathnaíodh na hathruithe ar mhoirfeolaíocht agus ar líon na néaróin sa réigiún CA1 den hippocampus francach faoi mhicreascóp agus bailíodh íomhánna.

1. 3. 7 Turgnamh blotála an Iarthair

Roghnaíodh ceithre francach as gach grúpa, agus scoiteadh an hippocampus trí chaipitliú. Meascadh an fíochán hippocampus le maolán RIP A lysis i dtimpeallacht folcadáin oighir agus lártheifneoiríodh an fíochán chun an comhshnáthán a fháil. Braitheadh ​​an tiúchan próitéine leis an modh BCA. Cuireadh 20 ug próitéine le maolán luchtaithe próitéine le haghaidh leictreafóiréis. Tar éis don leictreafóiréis próitéine a bheith críochnaithe, aistríodh an membrane ag sreabhadh leanúnach 300 mA, blocáilte le púdar bainne bearrtha 5%, goraíodh an príomh-antasubstaint ag 4 céim thar oíche, agus gor an antashubstaint tánaisteach ag teocht an tseomra ar feadh 2 h. Tar éis an réiteach forbartha dath a úsáid, rinneadh anailís staitistiúil ar na bannaí próitéine ag baint úsáide as córas anailíse íomháithe chemiluminescence.

1. 3. 8 turgnamh RT-PCR

Roghnaíodh trí francach ó gach grúpa chun aonchineálach fíocháin hippocampal a ullmhú. Baineadh an RNA iomlán sa sreabhach fíocháin trí mhodh Trizol agus rinneadh an tiúchan a thomhas. Baineadh úsáid as trealamh sintéise cDNA troscadh le haghaidh tras-scríobh droim ar ais, agus rinneadh imoibriú aimpliúcháin chainníochtúil fhluaraiseachta ag baint úsáide as trealamh cainníochtúil fluaraiseachta chun leibhéal léirithe coibhneasta mRNA próitéine a bhaineann le synaptic a bhrath. Rinneadh anailís ar na torthaí trí úsáid a bhaint as 2-ΔΔCt. Taispeántar na seichimh primer i dTábla 1.

Tábla 1 Seichimh primer RT-PCR

1.4 Modhanna staidrimh

Cuireadh na torthaí sonraí a bhí i gcomhréir leis an ngnáthdháileadh in iúl mar mheán ± diall caighdeánach (x ± s), agus rinneadh anailís staitistiúil ag baint úsáide as bogearraí GraphPad Prism 9.5. Baineadh úsáid as anailís aontreo ar athraitheacht chun comparáid a dhéanamh idir samplaí iolracha, agus léirigh P < 0.05 go raibh an difríocht suntasach go staitistiúil.