Tionchar Polaisiúicrídí Cistanche ar Iompar Bitheolaíoch Chill Ailse Scamhóg A549
Sep 23, 2022
Coimriú: Cuspóir Imscrúdú a dhéanamh ar éifeachtCistánach polaisiúicrídar iompar bitheolaíoch cille ailse scamhóg A549. Modhanna Roinneadh na cealla ailse scamhóg A549 i ngrúpa rialaithe, i.e.Cistánach polaisiúicrídgrúpa 100, 200, 400 ng/mL, grúpa si-NC, grúpa si-LINC01410,Cistánach polaisiúicríd400 ng/mL móide pcDNA,Cistánach polaisiúicríd400 ng/mL móide grúpa pcDNA- LINC01410. Braitheadh ráta iomadú cealla A549 trí mhodh MTT, aimsíodh cumas clónála cealla A549 trí mheasúnacht foirmithe coilíneachta, agus braitheadh cítoiméadracht sreafa 549 ceall.
Baineadh úsáid as ráta apoptosis cille, modh Transwell chun cumas imirce agus ionraidh cealla A549 a bhrath, agus baineadh úsáid as modh RT-qPCR chun léiriú LINC01410 mRNA a bhrath i gcealla A549.
Torthaí:Cistánach polaisiúicrídd’fhéadfadh bac a chur ar iomadú cille A549, foirmiú coilíneachta, imirce, agus cumas ionraidh, slonn LINC01410 mRNA (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Cistánach polaisiúicrídar iomadú, apoptosis, imirce agus ionradh cealla A549. Conclúid:Cistánach polaisiúicrídféadfaidh sé bac a chur ar ghníomhaíocht, foirmiú clón, cumas imirce agus ionradh na gcealla ailse scamhóg agus apoptosis cille a chur chun cinn trí léiriú LINC01410 a laghdú.
Eochairfhocail:Cistánach polaisiúicríd; cill ailse scamhóg A549; LINC01410; iomadú; apoptóis
Cliceáil anseo chun Sampla Saor in Aisce de Cistanche a fháil le haghaidh
Is é ailse scamhóg an meall urchóideach leis an gcéad ráta galrachta agus mortlaíochta i mo thír. I measc na modhanna cóireála ailse scamhóg tá imdhíonadh, máinliacht agus ceimiteiripe [1].
Tá sé léirithe ag staidéir go bhfuil buntáistí móra ag leigheas traidisiúnta na Síne agus a chomhpháirteanna i gcóireáil ailse scamhóg agus gur féidir leo éifeachtúlacht ailse scamhóg a fheabhsú [2-3].CistancheIs ábhar íocshláinte luachmhar i mo thír, agus áirítear ar a phríomh-chomhpháirteanna gliocóisídí iomlán alcóil feinitile, polaisiúicrídí, iridoids, alcalóidigh agus lignans. Fuair staidéir an t-iomlán singlúcóisídí feinileitile de Cistancheféidirdamáiste ae a laghdú i lucha meall H22 agus bac ar fhás siadaí[4]. Is féidir le Ergosteroside, comhábhar gníomhach Cistanche, bac a chur ar fhás siadaí agus ar iomadú cille ailse cholaireicteach i múnla nude xenograft lucha, agus aslú apoptosis [5].
Polaisiúicrídí Cistanched’fhéadfadh ailse scamhóg Lewis agus cealla sarcoma S180 a chosc trí ghníomhaíochtaí cealla marfacha nádúrtha agus interleukin 2 (IL-2) a mhéadú.
Mar sin féin, na feidhmeanna féideartha, próisis bithgenesis agus meicníochtaí bunúsacha dePolaisiúicrídí Cistanchei ailse scamhóg fós doiléir. Tá sé léirithe ag staidéir go ndéantar lncRNAs a dhírialú go minic in ailse scamhóg agus go bhfuil ról tábhachtach acu maidir le hailse scamhóg a tharla, a fhorbairt agus a chóireáil [7]. Tá LINC01410 in iúl go mór in ailse endometrial agus bíonn tionchar aige ar prognóis othair ailse endometrial [8]; Cuireann ró-eisiúint LINC01410 chun cinn angiogenesis agus metastasis ailse gastrach trí chosc a chur ar miR-532-5p [9]; Iomadaíonn cealla ailse thyroid papillary, aistríonn agus ionradh [10-11], agus níl ról LINC01410 in ailse scamhóg soiléir. Ba é cuspóir an turgnaimh seo staidéar a dhéanamh ar éifeachtaíPolaisiúicrídí Cistancheagus LINC01410 maidir le feinitíopa urchóideach na gceall ailse scamhóg, agus an raibh baint ag LINC01410 le rialáil naPolaisiúicrídí Cistanchear iompar bitheolaíoch urchóideach na gceall ailse scamhóige, chun bonn a chur ar fáil le haghaidh tuilleadh taighde arPolaisiúicrídí Cistanche.
Polaisiúicrídí Cistanche
Ábhar polaisiúicrídí Cistanche ar Staidéar ar Chóireáil Ailse
Ceannaíodh cealla ailse scamhóg A549 ón mBailiúchán Cultúir de Chineál Meiriceánach (ATCC).Cistánach polaisiúicríd( íonacht Ceannaíodh níos mó ná nó cothrom le 98 faoin gcéad , uimhir táirge D3281 ) óWecistanche Bio-Tech Biotechnology Co., Ltd. Ceannaíodh séiream bó féatais ó Guangzhou Shuoheng Biotechnology Co., Ltd .;
ceannaíodh meán RPMI-1640 ó Hangzhou Qiannuo Biotechnology Co., Ltd.; Ceannaíodh trealamh MTT ó Shanghai Meixuan Biotechnology Co., Ltd .; ceannaíodh seomra Transwell agus Matrigel ó Beijing Unicon Biotechnology Co., Ltd.; Ceannaíodh trealamh Apoptosis ó PromoCell, Cuideachta na Gearmáine; Ceannaíodh trealamh SYBRremix ExTaqTM ó Shanghai Shanran Biotechnology Co., Ltd.
2 mhodh polaisiúicrídí Cistanche ar Staidéar ar Chóireáil Ailse
2.1 Saothrú cille agus grúpáil cille
Saothraíodh cealla A549 i meán RPMI-1640 ina raibh 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais i gorlann 37 céim , 5 faoin gcéad CO2. Cuireadh cóireáil ar na cealla sa chéim fáis logartamachCistánach polaisiúicrídag mais-thiúchan 100, 200, agus 400 ng/mL, faoi seach, agus taifeadta mar anCistánach polaisiúicrídgrúpaí 100, 200, agus 400 ng/mL; ba iad na cealla A549 nár cuireadh cóireáil orthu le polaisiúicríd Cistanche an grúpa rialaithe. Aistríodh cealla A549 le si-NC nó si-LINC0141, faoi seach, sainithe mar ghrúpa si-NC, grúpa si-LINC01410; aistríodh si-NC agus si-LINC01410 isteach i gcealla A549 agus déileáladh leo le 400 ng/mLCistánach polaisiúicríd, sainithe marPolysaccharide Cistanche400 ng/mL móide grúpa pcDNA,Cistánach polaisiúicríd400 ng/mL móide grúpa pcDNA-LINC01410.
2.2 bhrath modh MTT
Ráta iomadú cille A549 Cuireadh cóireáil ar chealla A549Cistánach polaisiúicrídag comhchruinnithe mais 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, agus 400 ng/mL, faoi seach. Bailigh cealla A549 i ngach grúpa agus cuir i 96-pláta tobair iad, cuir 20 μL de MTT le gach tobar, lean ar aghaidh ag saothrú sa ghorlann ar feadh 4 h, caith an comhshnáthán, cuir 150 μL de DMSO le gach tobar , agus solas gach grúpa cealla a bhrath ag tonnfhad 490 nm. Baineadh úsáid as luachanna dlúis (OD) chun an ráta iomadú cille a ríomh.
Saothrú Cistanche
2.3 Measúnacht ar fhoirmiú coilíneachta
A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>Taifeadadh 50 cill).
2.4 Brath cíteiméadrachta sreafa
Ráta apoptosis cille A549 Bailíodh cealla A549 i ngach grúpa agus cuireadh ar fionraí iad i 100 μL maolán salanda maolánach fosfáit (1 × 106 / mL), agus cuireadh 1 mL de fhionraí cille, 10 μL Annexin V-FITC agus 5 μLPI leis an bhfeadán tástála , cosanta ó solas. Tar éis goir ar feadh 30 nóiméad, bailíodh cealla agus rinneadh anailís orthu de réir cíteiméadracht sreafa.
apoptóis.
2.5 Brath trí mhodh Transwell
Imirce agus cumas ionradh cille A549 Bhí fionraí cille A549 (2×104/200 μL, meán saor ó shéiream) de gach grúpa scaipthe go cothrom i seomra uachtarach seomra Transwell, agus 500 μL RPMI{{ Cuireadh meán 7}} ina raibh 10 faoin gcéad FBS leis an seomra íochtair. Baineadh na cealla sa seomra uachtarach, agus socraíodh na cealla sa seomra íochtair le 4 faoin gcéad paraformaildéad agus dhaite le 0.1 faoin gcéad criostail violet. Breathnaíodh na cealla faoi mhicreascóp solais, agus roghnaíodh 5 réimse radhairc go randamach lena gcomhaireamh. Sa turgnamh ar ionradh cille, bhí Matrigel réamh-brataithe ar an seomra uachtarach de sheomra Transwell, agus bhí an chuid eile de na céimeanna mar an gcéanna leis an turgnamh imirce.
2.6 Brath RT-qPCR
Léiriú LINC01410 mRNA i gcealla A549 Baineadh RNA iomlán as cealla ag baint úsáide as imoibrí TRIzol, agus rinneadh cDNA a shintéisiú de réir threoracha an trealaimh trascríobh droim ar ais. Ba é an córas imoibrithe ná 2 μL de tháirge trascríobh droim ar ais, 10 μL SYBR Green Mix, 0.5 μL de primers tosaigh agus droim ar ais, agus 7 μL d'uisce steiriúla. Ba iad na coinníollacha imoibrithe 95 céim ar feadh 30 s, 60 céim ar feadh 30 s, agus 72 céim ar feadh 30 s, ar feadh 40 timthriall san iomlán; ríomhadh an slonn coibhneasta LINC01410mRNA leis an modh 2-ΔΔCT le GAPDH mar an tagairt inmheánach. Is iad na seichimh primer ná LINC01410 ar aghaidh 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC-3', droim ar ais 5'-ACTGTGCACTGTTACACCA-3'; tagairt inmheánach GAPDH ar aghaidh 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT-3', droim ar ais 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG-3'.
2.7 Anailís staidrimh
Baineadh úsáid as bogearraí SPSS 20.0 le haghaidh próiseála, cuireadh sonraí tomhais in iúl mar (x±s), úsáideadh samplaí neamhspleácha t tástála chun comparáid a dhéanamh idir dhá ghrúpa, baineadh úsáid as anailís aontreo ar athraithis chun comparáid a dhéanamh idir iolraí grúpaí, agus baineadh úsáid as tástáil LSD-t chun comparáid a dhéanamh idir grúpaí. p<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
Púdar Sliocht Cistanche
3 thoradh polaisiúicrídí Cistanche ar Staidéar ar Chóireáil Ailse
3.1 ÉifeachtCistánach polaisiúicrídar iomadú agus apoptosis de chealla A549 I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, an ráta iomadú de chealla A549 i ngach dáileog ghrúpa deCistánach polaisiúicrídméadaithe (P<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">
3.2 ÉifeachtCistánach polaisiúicrídar chumas imirce agus ionraidh cealla A549 I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, líon na gcealla A549 i ngach dáileogghrúpa deCistánach polaisiúicrídlaghdaigh (P<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">
3.3 ÉifeachtCistánach polaisiúicrídar léiriú LINC01410 mRNA i gcealla A549 I gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, léiriú LINC01410 mRNA i gcealla A549 i ngach dáileog ghrúpa deCistánach polaisiúicrída laghdú (P＜0.05) ar bhealach dáileog-spleách.
