Tá EDS1-idirghníomhú J Protein 1 ina Rialtóir Diúltach Riachtanach ar Dhíolúine Dhéanach Plandaí in Arabidopsis

Teibí

Tá meicníochtaí beachta tagtha chun cinn ag plandaí chun freagairtí imdhíonachta i gcoinne pataiginí a bharrfheabhsú. Tá ról ríthábhachtach ag IOCHTAINEACHT GALAIR fheabhsaithe 1 (EDS1) maidir le himdhíonacht dhúchasach plandaí trí fhriotaíocht bhunach agus imdhíonacht arna spreagadh le héifeachtaí a rialú. Tá gáinneáil núicléitoplasmach ar EDS1 ag teastáil le haghaidh treisiú friotaíochta, ach tá an mheicníocht mhóilíneach fós doiléir. Anseo, léirímid go bhfeidhmíonn EDS1-INTERACTING J PROTEIN1 (EIJ1), a fheidhmíonn mar chaperone cosúil le próitéin DNA mar fhreagra ar ionfhabhtú paitigin, mar rialtóir diúltach riachtanach ar dhíolúine plandaí trí idirghníomhú le EDS1. Níor chuir an sóchán caillteanas feidhme EIJ1 isteach ar fhás plandaí ach chuir sé go mór le friotaíocht pataigin. Ar ionfhabhtú pataigineach, d’athlonnaigh EIJ1 ón gclóraplast go dtí an cíteaplasma, áit a ndearna sé idirghníomhú le EDS1, rud a chuir srian ar gháinneáil EDS1 arna spreagadh ag pataigin go dtí an núicléas agus ag cur isteach ar fhriotaíocht ag céim an ionfhabhtaithe luath. Le linn forbairt galair, díghrádaíodh EIJ1 de réir a chéile, rud a cheadaigh carnadh núicléach EDS1 le haghaidh treisiú friotaíochta trascríobh. Chuir an brú avirulentach Pst DC3000 (AvrRps4) deireadh le gníomhaíocht choisctheach EIJ1 trí dhíghrádú a spreagadh go tapa sa fhreagra díolúine a spreag an éifeacht. Mar sin, léiríonn ár dtorthaí go bhfuil EIJ1 ina rialtóir diúltach cleithiúnach riachtanach ar dhíolúine plandaí dúchasach agus go soláthraíonn sé tuiscint mheicníoch ar conas a rialaítear dáileadh núicléach i gcoinne cíteaplasma EDS1 le linn na freagartha imdhíonachta.

sochair cistanche-neartú chóras imdhíonachta

Réamhrá

Tá líonra casta forbartha ag plandaí chun a gcuid freagraí imdhíonachta a mhodhnú. Chun iad féin a chosaint ar phataiginí, úsáideann gléasraí dhá phríomhstraitéis rialála: díolúine patrún-spreagtha (PTI), agus imdhíonacht arna spreagadh ag éifeacht (ETI). Tá PTI á rialú ag gabhdóirí aitheanta patrún (PRRanna) a aithníonn patrúin móilíneacha a bhaineann le pataigin nó miocróib (Zipfel, 2008). Chun ionfhabhtú a éascú, cuireann pataiginí borrtha PTI faoi chois trí éifeachtóirí pataigin a scaoileadh, agus ionramhálann siad cealla óstaigh chun éadáil cothaitheach a éascú agus ar deireadh atáirgeadh (Tsuda agus Katagiri, 2010). Tugtar friotaíocht basal ar an bhfriotaíocht leibhéal íseal a thaispeánann an gléasra do na pataiginí borrtha seo (Jones agus Dangl, 2006; Klessig et al., 2018). Ar an láimh eile, déantar ETI a idirghabháil trí phróitéiní frithsheasmhachta in aghaidh galair (R) planda-ionchódaithe, ar féidir leo láithreacht éifeachtóirí atá secreted ag pataiginí a aithint go díreach nó go hindíreach (Tsuda agus Katagiri, 2010). Tá suíomh ceangailteach núicléitíde agus fearann ​​athchraolta atá saibhir i leucine (NB-LRR) i bhformhór na bpróitéiní R. Próitéiní TIR-NB-LRR (TNL) a thugtar ar na próitéiní NB-LRR a bhfuil fearann ​​idirghníomhaithe próitéine-próitéin N-terminal Tola/Interleukin-1 iontu, agus tá siad comhdhéanta den ghrúpa is mó de NB- próitéiní LRR (Caplan et al., 2008). I gcomparáid le frithsheasmhacht basal, spreagann ETI freagairt chosanta níos láidre agus níos tapúla i gcoinne pataiginí agus is minic a bhíonn bás cille áitiúil ag gabháil leis, ar sainghné den fhreagra hipiríogaireach é (HR; Dodds agus Rathjen, 2010). Cabhraíonn IOCHTAINEACHT GALAIR fheabhsaithe 1 (EDS1), rialtóir lárnach ar dhíolúine plandaí, le friotaíocht basal a rialú trí srian a chur ar ionradh pataiginí bithtrófacha agus hemibiotrófacha (Wiermer et al., 2005). Tá ról tábhachtach ag EDS1 freisin in ETI, a dhéantar idirghabháil den chuid is mó ag an rang TNL de phróitéiní R (Heidrich et al., 2012). Oibríonn EDS1 go dlúth lena chroí-rialálaithe PHYTOALEXIN DEFICIENT 4 agus SENESCENCE-ASSOCIATED GENE 101 sa chíteaplasma agus / nó núicléas chun táirgeadh speiceas ocsaigin imoibríoch intracellular (ROS), carnadh aigéad salaicileach (SA), agus próisis eile a rialáil, rud a threisíonn friotaíocht pataigin (Ruste). ´rucci et al., 2001; Rietz et al., 2011; Wagner et al., 2013). Dá réir sin, tá an mutant Arabidopsis eds1 so-ghabhálach go mór do Pseudomonas syringae pv. brú trátaí (Pst) DC3000 agus léiríonn sé ETI comhréiteach TNL-idirghabhála, ina gcuirtear bac ar abairt ISOCHORISMATE SYNTHASE1 (ICS1; géine bithsintéiseach SA) agus biosintéis SA (Parker et al., 1996; Feys et al., 2001; Bartsch et al. al., 2006). Ina theannta sin, taispeánann EDS1 gáinneáil próitéine idir an cíteaplasma agus an núicléas arna idirghabháil ag gabhdóirí iompair núicléach (Garcı´a et al., 2010). Cé go bhfuil friotaíocht basal agus táirgeadh ROS i gceist le feidhmeanna núicléacha EDS1, tá gá le comhordú ar logánú núicléach i gcoinne cíteaplasma EDS1 (Heidrich et al., 2011). Tá cothromaíocht idir an méid EDS1 sa chitosól agus an méid sa núicléas tábhachtach le haghaidh frithsheasmhachta basal éifeachtach agus díolúine arna spreagadh ag TNL (Garcı´a et al., 2010). Mar sin féin, níl sé soiléir conas a choinníonn EDS1 an patrún dáileacháin núicléicíteoplasmach le linn freagairtí imdhíonachta dúchasacha plandaí. Is próitéiní chaperone iad próitéiní DnaJ (nó próitéiní J) (Pulido agus Leister, 2018) a bhaineann leis an gcistéin (Cys) - superfamily fearainn saibhir agus a ghlacann páirt i bhfillte agus i gcóimeáil próitéiní sróine, ag iompar próitéiní trasna seicní agus athfhillteach ina dhiaidh sin, agus diúscairt próitéiní neamhfhillte nó lochtacha (Bukau et al., 2006). Tá na próisis seo ag teastáil le haghaidh gnáthfheidhm fhormhór na bpróitéiní ceallacha ag céimeanna éagsúla forbartha (Pulido agus Leister, 2018). Léiríonn taighde in orgánaigh éagsúla go n-imríonn próitéiní DNA róil éagsúla i bhfreagairtí strus bitheolaíocha agus aibitheacha, go háirithe i bhfreagraí imdhíonachta. I Nicotiana benthamiana, feidhmíonn próitéin DnaJ Nb-MIP1 mar cochaperone mar fhreagra ar phataiginí víreasacha (Du et al., 2013). Pónaire soighe (Glycine max L.) Tá próitéin turraing teasa Gm 40 (HSP40.1), próitéin DnaJ núicléas-áitithe, ina rialtóir dearfach ar fhriotaíocht in aghaidh víreas mósáic pónaire soighe (Liu agus Whitham, 2013). I dtrátaí (Solanum lycopersicum), tuairiscíodh go bhfuil an próitéin DnaJ cloroplast-localized, Le-CDJ2, chun feabhas a chur ar fhriotaíocht don phataigin baictéarach, Pseudomonas solanacearum (Wang et al., 2014). Ina theannta sin, tuairiscíodh go rialódh Tsi1- próitéin idirghníomhaithe1 (Tsip1), próitéin tobac (Nicotiana tabacum) DnaJ, gníomhachtú tras-idirghabhálaithe Tsi mar fhreagra ar strus (Ham et al., 2006). Léiríonn na torthaí seo go soiléir go bhfuil ról tábhachtach ag próitéiní DNA maidir le himdhíonacht plandaí, cé go bhfuil gá le himscrúdú breise ar na meicníochtaí bunúsacha. Sa staidéar seo, rinneamar aonrú Arabidopsis thaliana EDS1 INTERACTING J PROTEIN 1 (EIJ1), próitéin HSP cosúil le DnaJ, agus thaispeáin muid go ndearna EIJ1 idirghníomhú le EDS1 in planta. Léirigh na plandaí tsóiteáin caillteanas feidhme eij1 gnáthfhás, friotaíocht pataigin níos láidre, agus léiriú níos airde ar ghéinte a bhaineann le friotaíocht ar ionfhabhtú pataiginí i gcomparáid le plandaí de chineál fiáin. Mar sin féin, níor éirigh le sóchán caillteanas feidhme EIJ1 feinitíopa so-ghabhálach an tsóiteáin eds1 a shábháil ar dhúshlán le Pst DC3000. Ina theannta sin, scaoileadh an próitéin EIJ1, a logálann go hiondúil don chlóraplast, ón gclóraplast go dtí an cíteaplasma ar ionaclú pataigin, áit a ndearna sé idirghníomhú le EDS1, rud a chuir cosc ​​ar gháinneáil pataigin-spreagtha chuig an núicléas agus dá bharr sin cur isteach ar an bhfreagairt friotaíochta go luath. céim ionfhabhtaithe. Cuireann na torthaí seo sonraí tábhachtacha ar fáil maidir leis an meicníocht rialála atá mar bhonn leis an bpatrún dáileacháin núicléicíteaplasma EDS1 agus soláthraíonn siad sprioc a d’fhéadfadh a bheith éifeachtach maidir le pórú in aghaidh galair i mbarraí.

sochair cistanche-neartú chóras imdhíonachta

Torthaí

Idirghníomhaíonn EIJ1 le EDS1 in vitro agus in vivo

Mar chuid riachtanach de fhreagraí cosanta plandaí, tá EDS1 suite ag príomh nód de líonra comharthaíochta imdhíonachta dúchasach an ghléasra. Chun comhpháirtithe próitéine idirghníomhaithe féideartha EDS1 a aithint, rinneamar scagadh giosta dhá-hibrideach. Léirigh EDS1 idirghníomhaíocht láidir le HSP Arabidopsis 40- cosúil le próitéin chaperone (AT2G24860) le feidhm anaithnid (Fíor 1, A agus B), a bhaineann le superteaghlach DnaJ (Fíor Forlíontach 1A); tagraítear don phróitéin seo feasta mar EIJ1. Léirigh anailís seicheamh go bhfuil 144 iarmhair aimínaigéad in EIJ1, lena n-áirítear ceithre mhóitíf mhéara Zn Cys-saibhir (CXXCXGXG; Fíor Forlíontach 1A). Cé go bhfuil homalóga EIJ1 ag speicis angiosperm eile, is cosúil go bhfuil na homalóga is gaire teoranta do Brassicaceae (Fíor Forlíontach 1B agus Comhad S1). Go háirithe, léirigh EIJ1 cosúlachtaí seicheamh le próitéin N. tabacum Tsip1, a bhfuil baint aige le friotaíocht pataigin (Fíor Forlíontach 1B; Ham et al., 2006). Chun na fearainn fheidhmiúla atá freagrach as an idirghníomhú idir EDS1 agus EIJ1 a shainaithint, baineadh úsáid as dhá leagan teasctha de na próitéiní seo i dtástálacha giosta dhá-hibrideach (Fíor 1A; Fíor Forlíontach 1A). Léirigh foirceann N EIJ1 idirghníomhaíocht láidir leis an EDS1 fad iomlán chomh maith le foirceann EDS1 N ach idirghníomhaíocht lag le críochfort EDS1 C (Fíor 1B). Tugann sé seo le tuiscint go bhfuil an foirceann N de EDS1, ina bhfuil fearann ​​cosúil le lipáis, agus an foirceann N de EIJ1 riachtanach agus leordhóthanach chun a n-idirghníomhaíocht. Cé go bhfuil fearann ​​méara Zn Cys-saibhir caomhnaithe i bhfoirceann C EIJ1 a d'fhéadfadh a cheangal le DNA nó próitéiní eile a éascú, ní chuireann sé leis an idirghníomhú le EDS1. D’fhíoraigh measúnachtaí tarraingthe anuas an t-idirghníomhú idir EDS1 agus EIJ1 in vitro (Fíor 1C), agus baineadh úsáid as measúnachtaí comh-imdhíonachta (Co-IP) ag baint úsáide as 35Spro: EIJ1- 6HA 35Spro: EDS1-3FLAG gléasraí trasgenacha dheimhnigh siad a n-idirghníomhaíocht le plandaí (Fíor 1D). Le chéile, léiríonn na torthaí seo go n-idirghníomhaíonn EDS1 le EIJ1 in vitro agus in vivo araon. Tréithriú EIJ1 Chun logánú focheallach EIJ1 a chinneadh, chomhleamar fráma léitheoireachta oscailte EIJ1 leis an ngéin tuairisceora mCherry faoi rialú tionscnóir víreas mósáic cóilis 35S chun an 35Spro: EIJ{1-mCherry construct a ghiniúint. Rinneadh an tógáil seo a chlaochlú go neamhbhuan ina duilleoga N. benthamiana trí agrain-scagadh. Léirigh micreascópacht fhluaraiseachta go raibh EIJ1-mCherry logánta don chloroplast agus don núicléas (Fíor 2A). Deimhníodh an patrún logánaithe seo trí anailís imdhíon-blot ar phlandaí trasgenacha 35Spro: EIJ{1-6HA (Fíor Forlíontach 2). Chun patrún slonn EIJ1 a fhiosrú, comhleádh seicheamh géanómach EIJ1 leis an ngéin tuairisceora ß-glucuronidase (GUS) chun EIJ1pro: EIJ1-GUS transgenic Arabidopsis lines a ghiniúint. Braitheadh ​​​​gníomhaíocht láidir GUS i duilleoga agus fréamhacha rosette; áfach, bhí gníomhaíocht GUS lag i siliques agus dobhraite i gais agus bláthanna (Fíor 2B). Bhí na torthaí seo comhsheasmhach leis na torthaí léirithe do EIJ1, a scrúdaíodh trí thrascríobh droim ar ais cainníochtúil-PCR (RT-PCR) i bhfíocháin éagsúla (Fíor 2C). Ós rud é go bhfuil EDS1 ina rialtóir lárnach ar dhíolúine plandaí (Saikat et al., 2011), rinneamar imscrúdú ar cibé an bhfuil EIJ1, comhfhachtóir tuartha EDS1, ag gabháil leis an bhfreagra ar ionfhabhtú pataigin freisin. Ba chúis leis an leibhéal tras-scríbhinne EIJ1 ná cóireáil le baictéir hemibiotrófacha Pst DC3000 nó SA (Fíor 2D). Léirigh staining GUS go raibh EIJ1 ionduchtaithe agus comhchruinnithe go suntasach timpeall ar na trichomáin i nduilleoga ionaclaithe Pst DC (Fíor 2E–G), rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh ábharthacht bhitheolaíoch EIJ1 a bheith mar fhreagra cosanta (Xin and He, 2013). Ansin, scrúdaíomar an leibhéal EIJ1 i ngléasraí 35Spro: EIJ1-HA atá cóireáilte le Pst DC3000 nó SA. Díol spéise é, tar éis cóireáil Pst DC3000 nó SA, díghrádaíodh EIJ1 de réir a chéile tar éis ionduchtaithe tapa (Fíor 2, H agus I). Ní raibh an toradh seo comhsheasmhach leis an bpatrún slonn cobhsaí de EIJ1-HA a breathnaíodh i bplandaí 35Spro: EIJ{1-HA le linn ionfhabhtú paitigin (Fíor Forlíontach 3), rud a léiríonn rialáil iar-thscríbhinne EIJ1. Le chéile, tugann na torthaí seo le fios go bhfuil baint ag EIJ1 leis an bhfreagra imdhíonachta plandaí.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Cuireann sóchán caillteanas feidhme EIJ1 le friotaíocht in aghaidh Pst DC3000 tríd an gcosán SA

Chun ról EIJ1 in imdhíonacht plandaí a imscrúdú, d’aithníomar mutant Arabidopsis (SALK_142975) ina raibh ionsá T-DNA sa tríú exon de EIJ1 (Fíor 3, A agus B). Léirigh anailís chainníochtúil RT-PCR go raibh EIJ1 curtha in iúl go dona sa tsóiteáin ionsáite T-DNA eij1 seo; mar sin, thugamar an ailléil eij{{10}} EIJ1 seo (Fíor 3C). Ina dhiaidh sin, rinneamar measúnú ar an bhfeinitíopa friotaíochta galair de 3-phlandaí mutant eij{1-1 seachtain d’aois agus éiceachlónna Arabidopsis (A. thaliana) Columbia (Col-0; plandaí de chineál fiáin) trí ionaclú le Pst DC3000. Léirigh measúnú ar na duilleoga ionfhabhtaithe ag 5 lá tar éis ionaclaithe (dpi) go raibh níos lú loit necrotic ar dhuilleoga eij1-1 ná ar dhuilleoga Col-0 (Fíor 3D). Go comhsheasmhach, léirigh duilleoga eij1-1 titer baictéarach i bhfad níos ísle ná duilleoga Col{-0 ag 5 dpi, cé nár léirigh an titer baictéarach aon difríocht idir Col-0 agus duilleoga eij{{{- ag 0 pso (Fíor 3E). Ansin, ghineamar línte comhlánaithe eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA trí bhlúire géanómaíochta EIJ1 atá comhleádh le seicheamh clibe 6xHA a athrú go cúlra eij1-1. D'éirigh leis na línte comhlánaithe feinitíopa friotaíochta pataigin eij1-1 (Fíor 3E) a shábháil go hiomlán, ag tacú leis gur tsóiteán caillteanas-feidhme é eij1-1. Chun éifeacht EIJ1 ar dhíolúine apoplastic a chinneadh, rinneadh measúnú freisin ar fheinitíopa friotaíochta galair na línte comhlánaithe seo trí insíothlú brú Pst DC3000, agus fuarthas torthaí den chineál céanna (Fíor Forlíontach 4A). Chun feidhm EIJ1 a dhearbhú, d’aithníomar ansin Arabidopsis mutant eij1-2 eile (WiscDsLox343G09), ina raibh ionsá T-DNA i réigiún tionscnóra EIJ1 (Figiúr Forlíontach 5, A agus B). Is ar éigean a bhí na tras-scríbhinní EIJ1 inbhraite sa tsóiteán eij1-2, rud a thugann le fios gur ailléil nialasach é eij1-2 de EIJ1. Cosúil le eij1-1, léirigh measúnachtaí fáis baictéaraigh go raibh eij1-2 i láthair ag titer baictéarach i bhfad níos ísle ná mar a bhí ag Col-0 (Fíor Forlíontach 5, D agus E). Go hachomair, léiríonn na torthaí seo go bhfuil ról tábhachtach faoi chois ag EIJ1 i bhfreagairt imdhíonachta plandaí.

Fíor 1 Idirghníomhaíonn EIJ1 le EDS1 in vitro agus in planta. (A) Léaráid scéimreach a thaispeánann na fearainn atá le fáil in EIJ1, EDS1, agus a leaganacha teasctha. (B) Léiríonn measúnachtaí giosta dhá-hibrideach na hidirghníomhaíochtaí idir EIJ1, EDS1, agus a leaganacha teasctha. Fásadh cealla giosta trasfhoirmithe ar mheán SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade agus SD/-Trp/-Leu. Rialuithe folamh, veicteoir-amháin; AD, fearann ​​gníomhachtaithe; BD, fearann ​​ceangailteach DNA. (C) Measúnacht tarraingthe anuas a thaispeánann an idirghníomhaíocht dhíreach idir próitéiní comhleá His-EIJ1 agus GST-EDS1 in vitro. Goradh próitéiní his-EIJ1 le próitéin GST díluailithe nó GST-EDS1. Braitheadh ​​antasubstaintí frith-A agus frith-GST codáin imdhíon-réamhtheachtaithe, faoi seach. (D) Co-IP a thaispeánann idirghníomhaíocht EIJ1 agus EDS1 i nduilleoga Arabidopsis. Próitéiní iomlána a bhaintear as 3-35Spro: EIJ1-6HA seachtain d'aois (mar rialú géinitíopa) agus 35Spro: EIJ1-6HA 35Spro: EDS1-3Bhí duilleoga FLAG imdhíonta ag antashubstaint frith-FLAG nó séiream réamh-imdhíonachta (IgG). Braitheadh ​​na próitéiní coimmunprecipitated ag baint úsáide as antasubstaintí frith-FLAG agus frith-HA, faoi seach. Rinneadh na torthaí ionadaíocha a cuireadh i láthair in (B–D) a athdhéanamh go neamhspleách trí huaire.

Is sainmharc é táirgeadh sárocsaíd hidrigine (H2O2), cineál speiceas imoibríoch ocsaigine, maidir le haithint rathúil pataiginí agus gníomhachtú freagairtí cosanta plandaí ina dhiaidh sin, lena n-áirítear bás cille cláraithe a bhaineann le HR (Lam et al., 2001; Torres et al. al., 2006; Nanda et al., 2010). Mar sin, rinneamar monatóireacht ar an leibhéal H2O2 i 3-Col ionaclaithe paitigin de sheachtain d'aois-0, eij1-1, agus eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA plandaí ag baint úsáide as an modh staining 3,{3-diaminobenzidine (DAB). Léirigh na torthaí gur charnaigh H2O2 go leibhéil arda sna plandaí ionfhabhtaithe ach níor aimsíodh é sna gléasraí neamh-ionaclaithe (bréagacha) (Fíor 3F). Braitheadh ​​leibhéal níos airde H2O2 i nduilleoga eij1-1 ná i nduilleoga Col- 0 agus i línte comhlánaithe a ionaclaithe le Pst DC3000 (Fíor 3F). Ina theannta sin, cé gur léirigh staining trypan-gorm gur tharla bás cille (microHR, Alvarez et al., 1998) sna duilleoga eij1-1 ag 24-h iar-ionaclaithe (HPI) le Pst DC3000, ach níor tharla breathnaíodh microHR i ngléasraí Col-0 agus eij{1-1 EIJpro1:EIJ{1-6HA (Fíor 3G). Mar thoradh ar ionaclú le avirulent Pst DC3000 (AvrRps4) bhí carnadh níos airde de H2O2 agus níos mó microHR, cé nár breathnaíodh aon difríocht infheicthe i measc na dtrí ghéinitíopa seo (Fíor 3, F, agus G). Thug na torthaí seo le tuiscint go raibh ról fíor-riachtanach ag EIJ1 maidir le friotaíocht basal in aghaidh pataiginí.

Fíor 2 Patrún slonn EIJ1 mRNA agus próitéin. (A) Clóraplast agus logánú núicléas EIJ1. Cuireadh próitéin chomhleá mCherry EIJ in iúl go neamhbhuan i nduilleoga N. benthamiana agus rinneadh anailís uirthi trí mhicreascópacht chomhfhócasach. Léiríonn fluaraiseacht DAPI an núicléas. Léirítear fluaraiseacht clóraifill mar dhath glas. Barra=10 lm. (B) ruaimniú GUS a thaispeánann slonn EIJ1 i bhfréamhacha, gais, duilleoga rósaí, bláthanna, siliceanna, agus 10-síológ lae (ó chlé go deas). Barra=1 mm. (C) Patrún slonn EIJ1 i bhfíocháin éagsúla de phlandaí Col lena n-áirítear fréamhacha, gais, duilleoga rósaí, bláthanna, agus siliceanna, mar a bhraitheann qRT-PCR. Ríomhadh an slonn coibhneasta trí leibhéal trascríobh na géine scrúdaithe a normalú i gcoinne leibhéal ACTIN2 (mar atá thíos). Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bitheolaíocha. Léiríonn litreacha cás íochtair difríochtaí suntasacha (ANOVA aontreo, P 5 0.01; Tacar Sonraí Forlíontacha 1). (D) Anailís slonn ar EIJ1 ag baint úsáide as 3-plandaí Col seachtaine d'aois tumtha le Pst DC3000 (OD600=0.1) nó spraeáilte le 0.05 mM SA. Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bhitheolaíocha (Tacar Sonraí Forlíontacha 1). (E–G) Léiríonn staining GUS ionduchtú léiriú EIJ1 ag pataiginí. pEIJ1:EIJ1-Déanadh gléasraí GUS a ionaclú bréige (10 mM MgCl2; E) nó ionaclaithe tum-ionaclaithe le Pst DC3000 (OD600=0.1; F). Barra=1 mm. Léiríonn an pictiúr méadaithe go bhfuil EIJ1-GUS comhchruinnithe ag an réigiún tríchóime in (G). barra=100 lm. Baineadh duilleoga ag 4 hpi agus goradh iad le tuaslagán ruaimnithe GUS. (H) agus (I) Patrún slonn EIJ1 tar éis cóireáil Pst DC3000 nó SA. Baineadh próitéiní iomlána as 3-35Spro: EIJ1-6plandaí HA seachtain d'aois a ionaclaithe le Pst DC3000 (OD{600=0.1; H) nó a spraeáil le 0.05 mM SA(I), agus braitheadh ​​ag baint úsáide as antashubstaint frith-HA. Taispeánann na painéil bun staining le Coomassie Brilliant Blue (CBB) mar rialú luchtaithe. Rinneadh na hanailísí immunoblot a chuirtear i láthair in (H) agus (I) a athdhéanamh go neamhspleách trí huaire.

Fíor 3 Aithint an Arabidopsis EIJ1 mutated allele eij1-1. (A) Léaráid scéimreach a thaispeánann suíomh ionsáite T-DNA in eij1-1 (SALK_142975). Léirítear exons ag boscaí agus introns ag línte idir na boscaí. Cuireann boscaí dubha na réigiúin códaithe EIJ1 i láthair, agus seasann boscaí bána don réigiún neamhaistrithe. Léiríonn an triantán suíomh ionsáite T-DNA. (B) Deimhníonn aimpliú PCR ar DNA géanómach gur tsóiteán isteach homaisigeach é eij1-1. Taispeántar na primers a úsáideadh (P1, P2) in (A). Léiríonn LB an primer teorann clé T-DNA agus léiríonn M na marcóirí móilíneacha DNA. (C) anailís qRT-PCR ar slonn EIJ1. Baineadh RNA iomlán as 3-eij1 seachtaine d'aois agus duilleoga Col. Socraíodh slonn coibhneasta EIJ1 in eij1-1 go 1. Is iad na sonraí an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bhitheolaíocha (Socr Sonraí Forlíontacha 1). (D) Feinitíopa friotaíochta galar Col, eij1-1, agus dhá líne thrasghéineacha chomhlánaithe ionadaíocha EIJ1 eij1 EIJ1pro: EIJ{1-6HA. Rinneadh plandaí trí seachtaine d'aois a thum-ionaclú le Pst DC3000 (OD{600=0.05). Grianghraf de na duilleoga a thaispeántar ag 5 pso. Barraí=5 mm. (E) Fás baictéarach Pst DC3000 ar phlandaí a gcuirtear síos orthu in (D) ag 0 agus 5 dpi. cfu/g, aonaid a fhoirmíonn coilíneacht in aghaidh an g meáchain úr. Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bitheolaíocha. Léiríonn litreacha cás íochtair difríochtaí suntasacha (aon-bhealach ANOVA, P 5 0.01, Tacar Sonraí Forlíontacha 1). (F) Scrúdú ar leibhéil H2O2 i nduilleoga Col,

Déanann EIJ1 imdhíonacht plandaí a idirghabháil trí ghníomhaíocht EDS1 a chosc

Chun an gaol géiniteach idir EDS1 agus EIJ1 a thuiscint, ghineamar línte dúbailte tsóiteáin eij1-1 eds1-22 tríd an tsóiteáin eij1-1 a thrasnú le eagar1-22, caillteanas de- ailléil tsóiteáin feidhme de chúlra EDS1-90 (AT3G48090; Col-0), a thaispeánann frithsheasmhacht in aghaidh pataigineach (Yang agus Hua, 2004). Níor tugadh faoi deara aon difríocht moirfeolaíoch i measc plandaí mutant eij1-1, eds1-22, agus eij1-1 eds1-22 faoi ghnáthchoinníollacha fáis (Fíor 4, A agus B). Tar éis ionaclaithe le Pst DC3000, léirigh na plandaí mutant eij1-1 friotaíocht níos láidre ná plandaí Col{-0 ag 5 dpi (Fíor 4, A agus B). Mar sin féin, léirigh na heagráin eij1-1 1-22 tsóiteáin dúbailte loit necrotic iontacha agus titer ard bhaictéarach, inchomparáide leis na eagna1-22 tsóiteáin singil, rud a thugann le fios nach raibh an ailléil eij1-1 in ann chun feinitíopa na n-eagráin atá so-ghabhálach ó ghalair a tharrtháil 1-22 (Fíor 4, A agus B). Rinneadh measúnú freisin ar fhriotaíocht galar tar éis brú-insíothlú Pst DC3000, agus fuarthas torthaí comhchosúla (Fíor Forlíontach 4B). Ina theannta sin, d'úsáideamar an ailléil null EDS1, eag1-2; Col-0 cúlra; Bartsch et al., 2006), chun na plandaí tsóiteáin dúbailte eij1-1 eds1-2 a ghiniúint le haghaidh anailís ghéiniteach. Cosúil le eij1-1 eag1-22, léirigh na heagráin eij1-11-2 loit necrotic iontacha agus titer baictéarach níos airde ná eij1-1, mar a bhí inchomparáide leis na eds1-2 mutant singil (Fíor Forlíontach 6). Tugann an fhianaise ghéiniteach seo le fios go bhfuil EDS1 eipstatach do EIJ1. Ag teacht leis na breathnuithe thuas, charnaigh H2O2 go leibhéil arda in eij{1-1 duilleoga ach go leibhéil ísle in eagar1- 22 agus eij{1-1 eds1-22, i gcomparáid le Col{{{{). 53}} duilleoga, ar ionaclú Pst DC3000 (Fíor 4C). Ina theannta sin, ba léir go raibh microHR in eij1-1 faoi chois ag cailliúint feidhme EDS1 ag 24 hpi le Pst DC3000 nó avirulent Pst DC3000 (AvrRps4; Fíor 4D). Ag teacht leis an toradh seo, bhí leibhéil slonn ICS1 agus PR1 i ngléasraí eij1-1 eag1-22 agus eag1-22 inchomparáide ach cuid mhaith níos ísle ná iad siúd i ngléasraí eij{1-1 agus Col{ {71}} plandaí (Fíor 4E). Tacaíonn na torthaí seo go bhfuil freagairt imdhíonachta dúchasach EIJ ag brath ar EDS1. Chun imscrúdú a dhéanamh ar ról idirghníomhaíocht EIJ1-EDS1 i bhfreagairt imdhíonachta plandaí, rinneamar anailís RNA-seq ar eij1-1, eds1-22, agus fágann Col{-0 ag 24 hpi le Pst DC3000 ; le Col-0 neamh-inoclaithe baineadh úsáid as mar chóireáil bhréige. Sainaithníodh 2762, 923, agus 622 géinte léirithe go difreálach (DEGanna) i Col_Pst DC3000 versus Col_bréagach, eij1-1_Pst DC3000 versus Col_ Pst DC3000, agus eagna1-22_Pst DC3000 versus Col_Pst DC3000 comparáidí. Tagraítear do na géinte seo ina dhiaidh seo mar ghéinte a fhreagraíonn do phataigin, EIJ1-rialaithe, agus géinte rialaithe EDS, faoi seach (Fíor Forlíontach 7A agus Tacar Sonraí 2). I measc na ngéinte seo, bhí 471 á rialú ag EIJ1; rialaíodh 396 ag EDS1 (Fíor 4F; Tacar Sonraí Forlíontacha 2); agus rinneadh 124 díobh a chomhrialú ag EIJ1 agus EDS1 (Fíor 4F). Léirigh anailís bhraisle go raibh 93.5% (116) de na géinte comhrialaithe (124) uas-rialaithe ag EDS1 agus íosrialaithe ag EIJ1 (Fíor 4F; Fíor Forlíontach 7B agus Tacar Sonraí 2), ag tacú le ról faoi chois EIJ1 ar Feidhm EDS1. Léirigh anailís ontology géine (GO) freisin go bhfuil an chuid is mó de na géinte a rialaítear go freasúil ag EIJ1 agus EDS1 bainteach go príomha le freagraí struis agus freagraí imdhíonachta dúchasacha (Fíor 4G; Tábla Forlíontach S1). Tugann na hanailísí seo le fios go rialaíonn EIJ1 agus EDS1 géinte a bhaineann le friotaíocht ar bhealach codarsnachta le linn ionfhabhtú paitigin. Ní raibh cuid mhaith de na géinte rialaithe EDS (272/396) á rialú ag EIJ1, is dócha mar gheall ar an athrú ar fhilleadh níos ísle (52) nó EIJ1-fheidhm neamhspleách EDS1.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Idirghníomhaíonn EIJ1 le EDS1 sa chiteaplasma agus cuireann sé cosc ​​ar gháinneáil núicléach EDS1

Tá EIJ1 logánaithe chuig clóraplast agus núicléas na gcealla duille (Fíor 2A), ach taispeánann próitéin EDS1 patrún dáileacháin núicléitítoplasmach, a tharlaíonn sa dá áit (Garcı´a et al., 2010). Chun imscrúdú a dhéanamh ar an áit agus ar an gcaoi a n-idirghníomhaíonn EIJ1 le EDS1 i planta, rinneamar measúnachtaí díomuan gutha ag baint úsáide as prótaplastaí Arabidopsis. Is díol spéise é, cé gur choinnigh EIJ1 a bhunphatrún logánaithe focheallach sa chloroplast agus sa núicléas i láthair na próitéine fluaraiseachta glas (GFP; control), bhí an EIJ clóraplast-logánta idirleata sa chíteaplasma nuair a chomhshamhaíodh é le EDS1- {9}}GFP i bprótaplastaí (Fíor 5A, féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2). Deimhníodh an feiniméan seo i gcealla eipideirm N. benthamiana, inar comhléiríodh EIJ1-mCherry go sealadach le EDS1-GFP nó le rialú GFP (Fíor Forlíontach 8, féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2) . Tugann na tuairimí seo le fios go bhféadfadh athlonnú focheallach EIJ1 a bheith mar thoradh ar ró-eisbhrú EDS1. Ansin, chun an suíomh focheallach a n-idirghníomhaíonn EDS1 agus EIJ1 a chinneadh, rinneamar measúnacht tarraingt anuas ag baint úsáide as an próitéin comhleá athchuingreach Glutathione S-Transferase (GST)-EDS1 (baoite) agus eastóscán iomlán próitéine, codáin laghdaithe núicléis, agus núicléis- codáin saibhrithe de 35Spro: EIJ1-HA línte trasgenacha (próitéiní creiche). Léirigh ár dtorthaí gur bhain EDS1 imdhíon-réamhshamhlú le EIJ1-HA nuair a bhí an sliocht iomlán próitéine agus codáin ídithe núicléis de 35Spro: EIJ1-HA duilleoga á n-úsáid, ach níor tharla sé agus na codáin saibhrithe núicléis á n-úsáid (Fíor 5B), rud a thugann le tuiscint go dtarlaíonn an idirghníomhaíocht idir EIJ1 agus EDS1 sa chiteaplasma.

Rialaíonn Fíor 4 EIJ1 agus EDS1 frithsheasmhacht plandaí i gcoinne pataiginí ar an taobh eile. (A) Feinitíopa friotaíochta galair de chuid Col, eij1-1, eag1-22, agus eij1-1 eag1-22. Rinneadh plandaí trí seachtaine d'aois a thum-ionaclú le Pst DC3000 (OD600=0.05). Grianghraf de na duilleoga a thaispeántar ag 5 pso. Barra=5 mm. (B) Fás baictéarach Pst DC3000 ar phlandaí a gcuirtear síos orthu in (A) ag 0 agus 5 dpi. Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bitheolaíocha. Léiríonn litreacha cás íochtair difríochtaí suntasacha (aon-bhealach ANOVA, P 5 0.01, Tacar Sonraí Forlíontacha 1). (C) Scrúdú ar leibhéil H2O2 i bplandaí Col, eij1-1, eag1-22, agus eij{1-11-22. Rinneadh plandaí trí seachtaine d'aois a thum-ionaclú le Pst DC3000 nó Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.1), agus ansin dathaíodh iad le DAB ag 24 hpi. barra=500 lm. (D) Anailís bás cille ar phlandaí Col, eij1-1, eag1-22, agus eij1-1 eag1-22. Rinneadh plandaí trí seachtaine d'aois a dhéphionoclú le Pst DC3000 nó Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.1), agus ansin dathaíodh iad le trypan gorm ag 24 hpi. Barra=500 lm.

Ós rud é go rialaíonn EIJ1 freagairt imdhíonachta plandaí go diúltach ar bhealach atá ag brath ar EDS (Fíor 4), rinneamar iniúchadh ar éifeacht na bpataiginí ar an idirghníomhú idir EIJ1 agus EDS1. Is ionadh é, chuir ionfhabhtú Pst DC3000 feabhas ar an idirghníomhaíocht EDS1-EIJ1 sa chiteaplasma seachas sa chloroplast agus sa núicléas (Fíor 5C, féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2). Chuir an toradh seo, in éineacht le patrún dáileacháin núicléas-cíteaplasma EDS1 agus ról logánú núicléach EDS1 i dtreisiú na frithsheasmhachta pataiginí ag an leibhéal tras-scríobhach (Garcı´a et al., 2010), iallach orainn imscrúdú a dhéanamh ar ról EIJ1 i gáinneáil fhocheallach EDS1 le linn ionfhabhtú paitigin. Nuair a chuireamar EDS{16}}FLAG in iúl go neamhbhuan i bprótacailí Arabidopsis scoite amach ó phlandaí eij1-1, ró-eisiúint EIJ1, agus Col-0, chuir EIJ1 go háirithe brú ar gháinneáil EDS1 isteach sa núicléas (Figiúr Forlíontach 9) . Ina theannta sin, níor léirigh anailís imdhíon-blot mórán difríochta i raidhse na próitéine EDS1 iomlán idir eag1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG agus eij1-1 eag1-22 EDS1pro: EDS{{30} }Plandaí trasgenacha BRATACH (Fíor 5D, féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2). Mar sin féin, i gcomparáid le eags1-22 EDS1pro: EDS1-3plandaí trasgineacha FLAG, léirigh Pst DC3000- eagráin ionaclaithe1-22 EDS1pro: EDS13FLAG méadú suntasach i leibhéal na próitéine EDS1 núicléas-saibhrithe agus laghdú ar an leibhéal EDS1 cíteaplasma-áitithe (Fíor 5D, féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2), ag deimhniú ról faoi chois EIJ1 sa cíteaplasma-go gáinneáil núicléas EDS1. Ansin, rinneamar tástáil ar cibé an raibh tionchar ag an bpróiseas athdháilte seo arna idirghabháil ag an idirghníomhaíocht EIJ1-EDS1 ar rialáil tras-scríobh na ngéinte a bhaineann le friotaíocht i bplandaí. Athraíodh na tógálacha éifeachtóra FLAG 35Spro: EIJ1-mCherry agus 35Spro: EDS1-3ina n-aonar nó in éineacht le tógálacha an tuairisceora ina gcealla eipideirm dhuilleoige N. benthamiana (Fíor 5E). Ag 24 hpi le Pst DC3000, ghníomhaigh EDS1 slonn PR1 agus ICS1 (Fíor 5F), agus chuir EIJ1 bac suntasach ar léiriú géine spreagtha EDS (Fíor 5F). Murab ionann agus an EIJ1 lánfhad, ní raibh an foirceann N-críochfort den phróitéin EIJ1, nach bhfuil aon tionchar aige ar eij1-1, in ann an slonn PR1 spreagtha EDS1- a chosc (Fíor Forlíontach 10, A agus B). ), rud a thugann le fios go bhfuil struchtúr próitéine slán EIJ1 riachtanach dá fheidhm choisctheach. Le chéile, tacaíonn na torthaí seo go bhfeidhmíonn EIJ1 mar fhrithbhrúiteoir riachtanach i bhfreagairt friotaíochta meánaithe EDS trí gháinneáil núicléicíteoplasmach EDS1 a rialáil. Toisc gur díghrádaíodh an próitéin EIJ1 de réir a chéile i bplandaí ionaclaithe Pst DC nó SA-chóireáil tar éis ionduchtaithe tosaigh tapa (Fíor 2, H agus I), rinneamar imscrúdú cibé an spreagann EDS1, ina dhiaidh sin, díghrádú EIJ1 trí a idirghníomhú próitéine-próitéin. Léiríodh i dtástálacha díghrádaithe saor ó chealla agus ar thástálacha braite próitéine in vivo ag baint úsáide as eds1-22 35Spro: EIJ1-HA gléasraí trasghéineacha nach ndearna easpa ná láithreacht EDS1 difear do dhíghrádú EIJ1 (Figiúr Forlíontach 11), rud a thugann le tuiscint gur Níl baint ag EDS1 le díghrádú pataigineach EIJ1.

Buntáistí cistanche tubulosa- an córas imdhíonachta a neartú

Athraíonn ionfhabhtú pataigineach logánú focheallach EIJ1

Thug an idirghníomhaíocht fheabhsaithe idir EIJ1 agus EDS1 sa cíteaplasma ar ionaclú pataigin (Fíor 5, B, agus C) le tuiscint go bhféadfaí EIJ1 a athlonnú i gcealla plandaí de bharr pataigin. Chun an fhéidearthacht seo a thástáil, rinneamar scrúdú ar logánú focheallach EIJ1 i duilleoga N. benthamiana atá ionaclaithe le Pst DC3000. Faoi choinníollacha neamh-ionfhabhtaithe, rinneadh EIJ1-mCherry a logánú don chlóraplast agus don núicléas. Mar sin féin, ag 24 dpi, laghdaíodh na comharthaí fluaraiseachta go mór sna clóraplastaí agus feabhsaíodh iad sa cíteaplasma (Fíor 6A). Chun a chinneadh tuilleadh an gcuireann pataiginí tús le díchomhthiomsú EIJ1 ón gclóraplast go dtí an cíteaplasma i nduilleoga, rinneadh anailís imdhíon-blot ar phróitéin EIJ1 ag baint úsáide as plandaí trasgenacha 35Spro: EIJ1-6HA. Rinneadh próitéiní iomlána, próitéiní clóraplasta, agus próitéiní cíteaplasmacha a leithlisiú ó phlandaí trasgenacha 35Spro: EIJ1-6HA ag 0 agus 4 hpi le Pst DC3000. Méadaíodh raidhse EIJ1 go suntasach sa chodán cíteaplasmach ach tháinig laghdú ar an gcodán clóraplasta ag 24 dpi (Fíor 6B, féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2), rud a léiríonn comhghaol diúltach idir leibhéil próitéin EIJ1 sa chloroplast agus sa chiteaplasma.

Fíor 5 EIJ1 Idirghníomhaíonn sé le EDS1 sa chiteaplasma chun idirghabháil a dhéanamh ar gháinneáil núicléach EDS1. (A) Anailís slonn neamhbhuan a thaispeánann logánú EDS1 agus EIJ1 i bprótaplastaí Arabidopsis. Barra=10 lm. (B) Measúnacht idirghníomhaíochta tarraingthe anuas idir EIJ1 agus EDS1. Próitéiní iomlána, codáin núicléiseacha-ídithe, agus codáin núicléis-saibhrithe a bhaintear as 3-eij seachtaine1-1 35Spro: EIJ1-6HA plandaí trasgenacha gortha le próitéiní GST-EDS1 nó GST díluailithe , faoi seach. Braitheadh ​​IPanna ag baint úsáide as antasubstaintí frith-HA nó frith-GST. Baineadh úsáid as PEPC agus histone H3 mar mharcóirí cíteaplasmacha agus núicléacha, faoi seach. Léiríonn réiltíní na bandaí de phróitéiní GST-EDS1. (C) Cuireann ionfhabhtú Pst DC3000 le hidirghníomhaíocht próitéine EDS1 agus EIJ1 sa chiteaplasma. Baineadh próitéiní iomlána, codáin núicléisí-ídithe, codáin saibhrithe núicléis, agus próitéiní clóraplasta as 3-EIJ1pro: EIJ1-6HA 35Spro: EDS{31}HA 35Spro: EDS1-3atá ionaclaithe le gléasraí FLAG, arna tumadh le Pst DC3000 (OD600=0.1) nó bréag-ionaclaithe ag 4 hpi, agus imdhíon-réamhshamhlú ag baint úsáide as antashubstaint frith-FLAG nó séiream réamh-imdhíonachta (IgG). Braitheadh ​​na próitéiní comh-imdhíonachta ag baint úsáide as antasubstaintí frith-HA agus frith-FLAG. Codáin N-ídithe, núicléis-ídithe; Codáin shaibhrithe N, núicléasaithe. Baineadh úsáid as PEPC agus histone H3 mar mharcóirí cíteaplasmacha agus núicléacha, faoi seach. (D) Léiríonn anailís imdhíonta go ndéanann EIJ1 idirghabháil ar dháileadh cíteaplasmach i gcoinne núicléach EDS1. Baineadh próitéiní iomlána, codáin núicléisithe, agus codáin saibhrithe le núicléis as 3-eagráin sheachtaine1-22 EDS1pro: EDS1- 3FLAG agus eij{{1 eagráin1-22 }} EDS1pro: EDS1-3Gléasraí trasgenacha FLAG tumtha le Pst DC3000 (OD{{{{{{600=0}.1)) nó bréag-ionaclaithe ag 4 hpi, agus braite ag baint úsáide as antashubstaint frith-FLAG. Déine choibhneasta na bpróitéiní ó eag1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG agus an chóireáil ionaclaithe bhréige socraithe go 1. M, bréige; P, Pst DC3000. Baineadh úsáid as PEPC agus histone H3 mar mharcóirí cíteaplasmacha agus núicléacha, faoi seach. Rinneadh na torthaí a cuireadh i láthair in (A), (C), agus (D) a athdhéanamh go neamhspleách trí huaire (Comhad Forlíontach 2). (E) agus (F) Anailís neamhbhuan ar ghníomhaíocht tionscnóra PR1 agus ICS1 arna rialú ag EIJ1 agus EDS1. Taispeántar in (E) tógálacha éagsúla a úsáidtear i dtástálacha slonn díomuan. Ceachtar PR1pro: GUS nó ICS1pro: Comhchlaochlaíodh GUS le héifeachtóirí nó an veicteoir folamh (Rialú) ina duilleoga N. benthamiana spááilte le Pst DC3000 (OD{600=0.1) ar feadh 24 h. Taispeántar in (F) gníomhaíocht choibhneasta GUS (GUS/Luciferase) a léiríonn leibhéal slonn PR1 agus ICS1 arna rialú ag éifeachtóirí éagsúla. Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bhitheolaíocha (Tacar Sonraí Forlíontacha 1). Léiríonn litreacha cás íochtair difríochtaí suntasacha (aon-bhealach ANOVA, P 5 0.01).

Tugann díthiomsú EIJ1 arna spreagadh ag pataigin ón gclóraplast le fios go bhfuil feidhm fhéideartha ag EIJ1 sa chiteaplasma. Chun an fhéidearthacht seo a thástáil, dhíluailíomar an próitéin EIJ1 ar na clóraplastaí tríd an seicheamh spriocdhírithe clóraplasta (CTS; Lee et al., 2008) a cheangal le foirceann N-teirminéil ghéin tuairisceora EIJ1-mCherry. Cuireadh an comhleá CTS-EIJ1-mCherry in iúl ansin i duilleoga N. benthamiana atá faoi smacht an tionscnóra dúchais. Níor braitheadh ​​fluaraiseacht ach amháin sna clóraplastaí, ach ní i gcíteasól agus i núicléas Pst DC3000-duilleoga ionaclaithe N. benthamiana (Fíor Forlíontach 12A). Dheimhnigh an bhreathnóireacht seo gur coinníodh an CTStagged EIJ1 sa chloroplast agus nár cuireadh iallach air isteach sa chiteaplasma mar gheall ar ionfhabhtú paitigin. Ghineamar línte trasgenacha Arabidopsis EIJ1pro: CTS-EIJ1-6HA chun feidhm bhitheolaíoch CTS-EIJ1 i bhfreagairt imdhíonachta plandaí a mheas. Mar a bheifí ag súil leis, murab ionann agus eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA, níor léirigh na línte eij1-1 EIJ1pro: CTS-EIJ1-6HA difríocht shuntasach idir an fhriotaíocht do phataiginí i gcomparáid le eij1-1, rud a thugann le fios nach bhfuil EIJ1 díluailithe sa chlóraplast in ann feinitíopa friotaíochta galair eij1-1 (Fíor 6C) a tharrtháil. Ag teacht leis an tuairim seo, coinníodh léiriú PR1 ag leibhéal ard i ngléasraí trasgenacha eij1-1 EIJ1pro: CTSEIJ1-6HA, cosúil le eij1-1 (Figiúr Forlíontach 12B). Ina theannta sin, léirigh CTS-EIJ1 níos lú cumas chun gníomhaíocht trascríobh EDS1 a athbhrú ná EIJ1 (Fíor 6, D, agus E). Mar thoradh ar na torthaí seo tháinig muid ar an tátal go spreagann freagairt luath óstaigh ar ionfhabhtú pataigineach athlonnú fo-cheallacha EIJ1, rud a mhodhnaíonn an freagra imdhíonachta trí gháinneáil EDS1 a bhrú isteach sa núicléas.

Rialaíonn EIJ1 an freagra a spreagann éifeachtóir-truicear virulence

Aithníonn an receptor TIR-NB-LRR RPS4 an próitéin éifeachtóra AvrRps4 de P. syringae arna scaoileadh ag an gcóras secretion cineál III chun ETI a thionscnamh, atá ag brath ar EDS1 (Gassmann et al., 1999; Wirthmueller et al., 2007; Heidrich et al., 2012). Rinneamar duilleoga eij1-1 a ionaclú leis an Pst íontach DC3000 (AvrRps4) nó Pst DC3000 borrtha le measúnú an bhfuil baint ag EIJ1 le ETI. Léirigh na duilleoga eij1-1 friotaíocht níos mó i gcoinne Pst DC3000 borb ná mar a bhí ar dhuilleoga Col-0 (Fíor 7A). Mar sin féin, níor tugadh faoi deara aon difríocht shuntasach idir duilleoga Col{-0 agus eij{1-1 i bhfriotaíocht in aghaidh avirulent Pst DC3000 (AvrRps4), cé gur léirigh an dá ghéinitíopa friotaíocht níos mó in aghaidh avirulent Pst DC3000 (AvrRps4) ná le Pst DC3000 ( Fíor 3, F agus G; Fíor7, A), rud a thugann le fios go bhféadfadh sé nach mbeadh EIJ1 riachtanach do ETI spreagtha RPS. Chinneamar freisin friotaíocht na bplandaí in aghaidh Pst DC3000 hrcC, a chothaíonn córas secretion cineál III lochtach agus a mhainníonn éifeachtóirí a instealladh isteach i gcealla óstaigh chun PTI a chosc (Gassmann et al., 1999; Gloggnitzer et al., 2014). Léirigh na duilleoga eij1-1 mutant agus Col-0 araon friotaíocht comhchosúil le Pst DC3000 hrcC (Fíor Forlíontach 13), rud a thugann le tuiscint nach bhfuil baint ag EIJ1 le PTI.

Ós rud é go bhfuil carnadh núicléach EDS1 fíor-riachtanach don athchlárú de bharr TIR-NB-LRR ar léiriú agus friotaíocht géine cosanta (Garcı´a et al., 2010), scrúdaíomar cibé an rialaíonn EIJ1 an dáileadh focheallach. de EDS1 mar fhreagra ar ETI. Ionaclúdh duilleoga 3-eagráin seachtaine1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG agus eij1-1 eagráin1-22 EDS1pro: EDS1-3plandaí FLAG le ceachtar Pst DC3000 nó Pst DC3000 (AvrRps4), agus baineadh na codáin núicléis-ídithe agus núicléis-saibhrithe ag 0 agus 4 hp. Ag teacht leis an staidéar roimhe seo (Garcı´a et al., 2010), chonacthas méadú ar logánú núicléach EDS1 in eagráin1-22 EDS1pro: EDS1-3gléasraí FLAG arna ionaclú le Pst DC3000 (AvrRps4), ach níl siad ionaclaithe le Pst DC3000. Mar sin féin, níor chuir caillteanas feidhme EIJ1 isteach ar an carnadh núicléach de chuid ETI-spreagtha EDS1 (Fíor 7B; féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2). Tugann sé seo le tuiscint go spreagann an Pst DC3000 (AvrRps4) avirulent gáinneáil EDS1 isteach sa núicléas trí EIJ1 a sheachaint nó go gcuireann sé deireadh le feidhm EIJ1 ar bhealach anaithnid. Chun na féidearthachtaí seo a thástáil, rinneamar scrúdú ar éifeacht avirulent Pst DC3000 (AvrRps4) ar leibhéal EIJ1. Cosúil leis na torthaí a fuarthas ag baint úsáide as línte overexpression EIJ1 (Fíor 2H), léirigh na plandaí eij1-1 EIJ1pro: EIJ1-6HA atá ionaclaithe le Pst DC3000 carnadh EIJ1 méadaithe ag céim luath den ionfhabhtú, cé go raibh EIJ1 de réir a chéile díghrádaithe tar éis 8 hpi (Fíor 7C; féach macasamhla i gComhad Forlíontach 2). Is leor an carnadh EIJ1 chun cosc ​​a chur ar gháinneáil spreagtha EDS1 isteach sa núicléas ag céim luath an ionfhabhtaithe (Fíoracha 5, D, agus 7, B) a chosc. Ag teacht leis an toradh seo, chuir caillteanas feidhme EIJ1 dlús le traslonnú núicléach EDS1 i ngléasraí ionfhabhtaithe (Fíor Forlíontach 14). I gcodarsnacht leis sin, chuir Pst DC3000 (AvrRps4) deireadh le feidhm EIJ1 trí dhíghrádú próitéin EIJ1 a spreagadh go tapa, ach ní trí thrascríobh géine EIJ1 a chosc (Fíor 7C; Fíor Forlíontach 15), rud a chuir chun cinn traslonnú núicléach EDS1 níos mó ag céim luath an ionfhabhtaithe (Fíor 7B). ). Tacaíonn an bhreathnóireacht gur léirigh plandaí eij{{3- a ionaclaithe le Pst DC3000 friotaíocht atá inchomparáide leis an bhfriotaíocht atá ag gléasraí Col-0 agus eij{{{{1-1) atá ionaclaithe leis an avirulent Pst DC3000 (AvrRps4) leis an hipitéis seo. D’fhéadfadh sé seo a mhíniú, go pointe áirithe ar a laghad, cén fáth ar féidir leis an brú borrtha, ach ní an brú borrtha, an fhriotaíocht threisithe chun freagairt ETI a spreagadh. Mar sin, tugann na tuairimí seo le tuiscint go bhfuil baint ag EIJ1 le freagairt borrtha éifeachtóra i gcealla óstaigh.

Fíor 6 Tá athlonnú EIJ1 chuig an gcíteaplasma riachtanach le haghaidh friotaíochta cleithiúnach EDS. (A) Athraíonn ionfhabhtú Pst DC3000 logánú focheallach EIJ1. Cuireadh EIJ1-mCherry in iúl go neamhbhuan i nduilleoga N. benthamiana spáctha le Pst DC3000 (OD600=0.1) nó bréag-ionaclaithe ar feadh 24 h. barra=10 lm. (B) Spreagann ionfhabhtú Pst DC3000 dí-chomhcheangal EIJ1 ón gclóraplast. Baineadh próitéiní iomlána, próitéiní cíteaplasmacha, agus próitéiní clóraplastacha ó 3-phlandaí seachtaine EIJ1pro: EIJ1-6HA atá ionaclaithe le Pst DC3000 (OD{600=0.1) nó bréige-ionaclaithe ag 4 hpi agus braite ag an antashubstaint frith-HA. Baineadh úsáid as PEPC, histone H3, agus RbcL mar mharcóirí cíteaplasmacha, núicléacha agus clóraplasta, faoi seach. Socraítear déine coibhneasta na bpróitéiní le cóireáil bhréagach go 1. Rinneadh na torthaí a cuireadh i láthair in (A) agus (B) a athdhéanamh go neamhspleách trí huaire (Comhad Forlíontach 2). (C) Ní féidir le EIJ1 díluailithe i gclóraplastaí friotaíocht eij1-1 a athbhunú. Ionaclúdh plandaí trí seachtaine d'aois le Pst DC3000 (OD600=0.05). Cinneadh an titer baictéarach de Pst DC3000 ag 0 agus 5 dpi. CTS, comharthaí logánaithe clóraplasta. Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bhitheolaíocha (Tacar Sonraí Forlíontacha 1). (D) agus (E) Anailís neamhbhuan ar ghníomhaíocht tionscnóirí caidreamh poiblí arna rialú ag EIJ1, CTS-EIJ1, agus EDS1. Taispeántar in (D) tógálacha éagsúla a úsáidtear i dtástálacha slonn díomuan. PR1pro: Rinneadh GUS a chomh-chlaochlú le héifeachtóirí nó an veicteoir folamh (Rialú) ina duilleoga N. benthamiana spayáilte le Pst DC3000 (OD600=0.1) ar feadh 24 h. Taispeántar in (E) gníomhaíocht choibhneasta GUS (GUS/Luciferase) a léiríonn leibhéal slonn PR1 arna rialú ag éifeachtóirí éagsúla. Léiríonn barraí earráide an diall caighdeánach de shamplaí neamhspleácha faoi thrí. Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bitheolaíocha. Léiríonn litreacha cás íochtair difríochtaí suntasacha (aon-bhealach ANOVA, P 5 0.01, Tacar Sonraí Forlíontacha 1).

Déanann Fíor 7 EIJ1 agus EDS1 friotaíocht basal plandaí a mhodhnú. (A) Fás baictéarach ar Col agus eij1-1 mutant. Rinneadh plandaí trí seachtaine d'aois a thum-ionaclú le Pst DC3000 nó Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.05). Cinneadh an titer baictéarach de Pst DC3000 ag 0 agus 5 dpi. Is ionann na sonraí agus an meán ± SD de thrí mhacasamhlú bitheolaíocha. Léiríonn litreacha cás íochtair difríochtaí suntasacha (aon-bhealach ANOVA, P 5 0.01, Tacar Sonraí Forlíontacha 1). (B) Is ar éigean a chuireann EIJ1 isteach ar Pst DC3000 (AvrRps4) - carnadh spreagtha EDS1 i núicléis. Baineadh codáin núiclé-ídithe agus codáin núiclé-saibhrithe as 3-eagráin seachtaine1-22 EDS1pro: EDS1-3FLAG agus eij{1-1 eagar1-22 EDS1pro: EDS1-3tumann gléasraí trasghéineacha FLAG atá ionaclaithe le Pst DC3000 (OD{600=0.1), Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.1), nó bréige ionaclaithe ag 4 hpi, agus braite ag úsáid antashubstaint frith-FLAG. Baineadh úsáid as PEPC agus histone H3 mar mharcóirí cíteaplasmacha agus núicléacha, faoi seach. Socraíodh déine coibhneasta próitéiní ó phlandaí le cóireáil bhréagach go 1. M, bréag; P, Pst DC3000; R, Pst DC3000 (AvrRps4). (C) Cuireann ionfhabhtú Pst DC3000 (AvrRps4) díghrádú próitéin EIJ1 chun cinn. Baineadh próitéiní iomlána as 3-eij seachtaine1-1 EIJ1pro: EIJ1-6plandaí HA tum-ionaclaithe le Pst DC3000 nó Pst DC3000 (AvrRps4; OD600=0.1) , agus braitheadh ​​ag baint úsáide as antashubstaint frith-HA. Taispeánann an painéal bun staining le Coomassie Brilliant Blue (CBB) mar rialú luchtaithe. Rinneadh na torthaí ionadaíocha a cuireadh i láthair in (B) agus (C) a athdhéanamh go neamhspleách dhá uair eile agus rinneadh iad a iniúchadh le hantasubstaint frith-ACTIN mar rialú luchtaithe (Comhad Forlíontach 2). (D) Samhail hipitéiseach de EIJ1 a rialaíonn friotaíocht basal plandaí EDS. Nuair a dhéanann pataiginí ionradh ar phlandaí, scaoiltear EIJ1 go tapa ón gclóraplast isteach sa chiteaplasma áit a n-idirghníomhaíonn sé le EDS1. Cuireann an idirghníomhaíocht EIJ1-EDS1 cosc ​​ar EDS1 a shutadh ón gcíteaplasma isteach sa núicléas agus mar sin cuireann sé srian ar fhriotaíocht núicléach EDS1, rud a cheadaíonn modhnú freagairtí imdhíonachta idirghabhálaithe EDS. Léiríonn línte saigheada agus blunted gníomhachtú agus faoi chois, faoi seach.

Plé

Chun maireachtáil a uasmhéadú, tá meicníocht bheacht forbartha ag plandaí chun fás a bharrfheabhsú agus chun cosaint a dhéanamh ar phataiginí ionracha, cé go bhfuil sonraí iomadúla na meicníochtaí seo doiléir fós. Tá áit lárnach ag EDS1 i líonra comharthaíochta imdhíonachta dúchasach an ghléasra, mar go rialaíonn sé an fhriotaíocht in aghaidh pataiginí bithotrófacha agus hemibiotrófacha (Wiermer et al., 2005). Sa staidéar seo, shainaithnímid géine, EIJ1, a ionchódaíonn próitéin chaperone DnaJ, agus thaispeáin sé go bhfuil EIJ1 freagrúil d'ionfhabhtú pataigineach luath agus go bhfuil ról aige i díolúine dúchasach plandaí trí idirghníomhú go díreach le EDS1. Bunaithe ar na torthaí seo, molaimid múnla rialála do EIJ1 (Fíor 7D). Nuair a dhéanann pataiginí ionradh ar phlandaí, scaoiltear EIJ1 go tapa ón gclóraplast go dtí an cíteaplasma, áit a n-idirghníomhaíonn sé le EDS1. Cuireann an t-idirghníomhú EIJ1-EDS1 seo cosc ​​ar EDS1 a shutadh ón gcíteaplasma isteach sa núicléas, agus cuireann sé seo srian ar fhriotaíocht núicléach EDS1, rud a cheadaíonn modhnú freagairtí imdhíonachta trí mheán EDS ar nós ionduchtú bithshintéise SA agus léiriú friotaíochta. -ghaolmhar géinte. Nuair a fhulaingíonn plandaí spreagthaí leanúnacha ó phataiginí ionracha, déantar EIJ1 a dhíghrádú de réir a chéile, rud a fhágann go bhfuil carnadh núicléach méadaithe EDS1 le haghaidh treisiú friotaíochta. Léiríonn na torthaí seo ról riachtanach faoi chois atá ag EIJ1 le linn freagairt luath an óstaigh ar ionradh pataigin, ag líonadh na bearna inár dtuiscint ar conas a rialaítear logánú focheallach EDS1 chun frithsheasmhacht a thabhairt.

Léirigh anailís seicheamh gur próitéin DNA é EIJ1. Ionchódaíonn an genome Arabidopsis seacht gcineál clasaiceacha éagsúla de phróitéiní DnaJ (Pulido agus Leister, 2018). Léiríonn staidéir roimhe seo go n-imríonn próitéiní DNA róil thábhachtacha agus faoi leith maidir le himdhíonacht plandaí. Mar shampla, rialaíonn pónaire soighe (Glycine max) GmHSP40 bás cille agus frithsheasmhacht in aghaidh galair (Liu agus Whitham, 2013). I gcodarsnacht leis sin, rialaíonn próitéin ríse (Oryza sativa L.) Os-DjA6 díolúine dúchasach plandaí tríd an gcosán díghrádaithe proteasome trí mheán an ubiquitination (Zhong et al., 2018). Tá éifeachtóir fíneáltacht Hopl1 P. syringae-shonrach, ina bhfuil fearann ​​J, dírithe ar an gclóraplast, áit a n-idirghníomhaíonn sé le hinnealra struis-fhreagartha an ghléasra (Jelenska et al., 2007). Léiríonn na staidéir seo go bhfuil róil éagsúla ag próitéiní DNA i bhfreagairt cosanta plandaí. Rialaíonn Tsip1, próitéin N. tabacum DnaJ atá homalógach do EIJ1, gníomhachtú tras-idirghabhálaithe géinte mar fhreagra ar strus (Ham et al., 2006). Ionchódaíonn Tsi1 fachtóir tras-scríofa de chineál APETALA2 (AP2) a fheidhmíonn mar rialtóir tábhachtach i bhfreagairtí struis bitheacha agus aibitheacha in N. tabacum (Park et al., 2001). Spreagann SA athlonnú Tsip1 ón gclóraplast go dtí an cíteaplasma, rud a éascaíonn an t-idirghníomhú idir Tsip1 agus Tsi1 agus iontráil an choimpléasc Tsip1-Tsi1 ina dhiaidh sin isteach sa núicléas le haghaidh gníomhachtú tras-scríobhach ar ghéinte a bhaineann le strus (Ham et al., 2006). . Murab ionann agus Tsip1, rinneadh EIJ1 a logánú don chlóraplast agus don núicléas faoi ghnáthchoinníollacha sa staidéar seo. Thaispeáin muid go spreagann ionfhabhtú pataigin athlonnú EIJ1 ón gclóraplast go dtí an cíteaplasma agus go gcuireann an idirghníomhaíocht idir EIJ1 agus EDS1 sa chíteaplasma bac ar fhriotaíocht núicléach trí mheán EDS. Ag teacht leis an gcinneadh seo, léirigh an tsó-shóiteán caillteanas feidhme eij1 friotaíocht níos láidre i gcoinne pataiginí ná an cineál fiáin (Col-0). Deimhníonn sé seo go bhfuil ról diúltach ag EIJ1 maidir le himdhíonacht dhúchasach plandaí. De réir staidéir roimhe seo, tá gníomhaíochtaí núicléacha agus cíteaplasma comhordaithe EDS1 riachtanach do phlandaí chun an fhreagairt imdhíonachta dúchasach ar phataiginí a chomhlánú (Garcı´a et al., 2010; Heidrich et al., 2011). Tá gá le logánú núicléach EDS1 le haghaidh athchlárú tras-scríofa frithsheasmhachta spreagtha TNL chun freagairtí cosanta plandaí a bhaineann le SA agus eile a spreagadh (Wirthmueller et al., 2007). Coinnítear an linn cíteaplasmach EDS1 freisin le linn an phróisis ionfhabhtaithe le haghaidh frithsheasmhacht iomlán in aghaidh pataiginí (Garcı´a et al., 2010). Ardaíonn na tuairimí seo imní shuntasach maidir leis an gcaoi a rialaíonn plandaí go beacht leithdháileadh EDS1 idir an cíteaplasma agus an núicléas le haghaidh freagraí cosanta cuí nuair a thugann ionfhabhtú pataigineach dúshlán dóibh. Anseo, léirímid go bhfuil leithdháileadh beacht EDS1 chuig urranna fo-cheallacha éagsúla á rialú go páirteach ag EIJ1 trí idirghníomhaíocht próitéine-próitéine. Chuir sóchán feidhm EIJ1 chun cinn go háirithe gáinneáil EDS1 go dtí an núicléas (Fíoracha 5, D, agus 7, B), rud a d'fhág go raibh frithsheasmhacht in aghaidh galair feabhsaithe.

Toisc gur chothaíodh EIJ1 go tapa ag céim luath d’ionfhabhtú pataigin agus gur díghrádaíodh é ina dhiaidh sin le linn fhorbairt an ghalair, tá tuairim againn gur rialtóir diúltach díolúine tábhachtach é EIJ1 a ligeann do phlandaí a gcuid cosaintí optamach a bheachtú. D’fhéadfadh cosc ​​a chur ar fhreagairtí imdhíonachta neamhriachtanacha ar spreagadh gearrthéarmach amhail ionsaí ócáideach ó bhaictéir phataigineacha mar gheall ar an mbrú faoi chois trí mheán EIJ ar ghníomhaíocht EDS1. Mar mhalairt air sin, féadfaidh baictéir phataigineacha imdhíonacht óstaigh a ionramháil trí dhí-chomhcheangal EIJ1 ón gclóraplast a spreagadh, trí éifeachtóirí borrtha a chur faoi deara, is dócha. Níorbh fhéidir linn an fhéidearthacht go ndéanfadh EIJ1 feidhm anaithnid sa chloroplast a eisiamh. Mar is eol dúinn, déantar SA, hormone planda agus móilín comharthaíochta a bhfuil baint aige le frithsheasmhacht in aghaidh pataiginí bithtrófacha, a bhithshintéisiú go príomha sa chlóraplast agus ansin é a onnmhairiú amach sa cíteaplasma ag EDS5, iompróir ildrugaí agus tocsain (Serrano et al., 2013). Is dócha gur rialtóir diúltach é EIJ1 ar charnadh SA, toisc gur laghdaigh sé léiriú na géine biosintéiseach SA ICS1 ar ionaclú pataigin (Fíor 4E). Chomh maith leis an gcos faoi chois tras-mheánaithe idirghabhála EIJ trína idirghníomhú le EDS1, is féidir go mbeidh ról díreach ag EIJ1 freisin i mbithshintéis SA nó iompar SA ón gclóraplast ar bhealach neamhaitheanta. Ní haon ionadh é dá bhfaighfí amach go raibh baint ag EIJ1 agus próiseas biosintéise na SA i staidéar amach anseo. Suimiúil go leor, bhí EIJ1 logánaithe go dtí an núicléas freisin. Cé nach ndearna EIJ1 idirghníomhú le EDS1 sa núicléas, is dócha mar gheall ar an easpa comhfhachtóirí nó modhnuithe riachtanacha, is fiú imscrúdú breise a dhéanamh ar fheidhm EIJ1 núicléas-áitiúil.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Táirgeann baictéir phataigineacha éifeachtóirí infhéitheacha chun PTI an óstaigh a bhréagnú trí dhíriú ar phróitéiní friotaíochta pataigin mar PRRanna, ach mothaíonn gabhdóirí cíteaplasmacha plandaí cosúil le NOD na héifeachtaí seo chun ETI a thionscnamh (Dou agus Zhou, 2012; Khan et al., 2016). Léirigh staidéir roimhe seo agus ár dtorthaí go gcuireann avirulent Pst DC3000 (AvrRps4) gáinneáil ar an EDS1 cíteaplasmach isteach sa núicléas (Garcı´a et al., 2010). Ina theannta sin, níor léirigh ár dtorthaí aon difríocht shuntasach i Pst DC3000 (AvrRps4) - spreag carnadh núicléach EDS1 agus friotaíocht pataigin ina dhiaidh sin idir gléasraí mutant Col-0 agus eij1-1 (Fíor 7, A, agus B) . Ina theannta sin, bhí an fhriotaíocht a léirigh an tsóiteán eij1-1 inchomparáide leis an bhfriotaíocht a léirigh plandaí Col{-0 atá ionaclaithe le brú córas secretion cineál III-lochtach Pst DC3000 hrcC (Figiúr Forlíontach 12). Ina theannta sin, bhí carnadh EIJ1 i bhfad níos ísle i bplandaí atá ionaclaithe le avirulent Pst DC3000 (AvrRps4) ná i bplandaí atá ionaclaithe le Pst DC3000 (Fíor 7C) borrtha, rud a thugann le fios go bhfuil EIJ1 ina rialtóir riachtanach ar fhreagairt imdhíonachta a spreagtar le héifeachtaí borrtha i gcealla óstaigh. Toisc go ndearna gléasraí ionaclaithe Pst DC aithris ar fheinitíopa friotaíochta plandaí Pst DC3000 (AvrRps4)-ionaclaithe Col{-0 (Fíoracha 3, F, G, 4, C, D, agus 7, A), féadfaidh EIJ1 feidhmiú mar bhac chun cosc ​​a chur ar ionduchtú ETI trí thréithe borrtha. Mar fhocal scoir, tá EIJ1 aitheanta againn, próitéin chaperone DnaJ, agus léirigh muid go bhfuil baint aige le freagairt imdhíonachta luath ar phataiginí plandaí. Cuireann an idirghníomhaíocht idir EIJ1 agus EDS1 bac ar gháinneáil núicléach EDS1, is dócha chun spreagadh gearrthéarmach trí fhreagraí imdhíonachta plandaí nach bhfuil gá leo a chosc, chun ionradh pataigineach a éascú trí mheicníocht ionramhála, nó an dá rud. Beag beann ar an mbunmheicníocht, d’fhéadfaí an ailléil EIJ1 a úsáid mar sprioc féideartha éifeachtach chun díolúine dúchasach plandaí a mhodhnú i pórú atá in aghaidh galair. Toisc nach gcuireann EIJ1 isteach ar ghnáthfhás na bplandaí, d’fhéadfadh maolú ar fheidhm EIJ1 trí eagarthóireacht géanóim leibhéal friotaíochta barraí i gcoinne galair a ardú go feiceálach gan mórán tionchair ar fhás.

Tagairtí

Alvarez, ME, Pennell, RI, Meijer, PJ, Ishikawa, A, Dixon, RA, Lamb, C (1998) Déanann idirmheánacha ocsaigine imoibríocha idirghabháil líonra comharthaí sistéamach i mbunú díolúine plandaí. Cill 92: 773–784

An, C, Mou, Z (2011) Aigéad salaicileach agus an fheidhm atá aige maidir le díolúine plandaí. J Integr Bithiolra Plandaí 53: 412–428

Armbruster, U, Carrillo, ó chlé, Venema, K, Pavlovic, L, Schmidtmann, E, Kornfeld, A, Jahns, P, Berry, JA, Kramer, DM, Jonikas, MC (2014) Cuireann ian antiport dlús le haclaíocht fótaisintéiseach i solas luaineach timpeallachtaí. Cumann 5: 5439

Bartsch, M, Gobbato, E, Bednarek, P, Debey, S, Schultze, JL, Bautor, J, Parker, JE (2006) Comharthaíocht GALAIR FEABHSAITHE Neamhspleách ar aigéad salaicileach1 in Arabidopsis tá díolúine agus bás cille á rialú ag an monooxygenase FMO1 agus an Nudix hydrolase NUDT7. Cill Phlandaí 18: 1038–1051

Ben Rejeb, K, Lefebvre-De Vos, D, Le Disquet, I, Leprince, AS, Bordenave, M, Maldiney, R, Jdey, A, Abdelly, C, Savoure´, A (2015) Sárocsaíd hidrigine arna dtáirgeadh ag ocsaídí NADPH méaduithe carnadh proline le linn salainn nó strus mannitol in Arabidopsis thaliana. Fiatól Nua 208: 1138–1148

Bukau, B, Weissman, J, Horwich, A (2006) Chaperones mhóilíneach agus rialú cáilíochta próitéine. Cill 125: 443–451

Caplan, J, Padmanabhan, M, Dinesh-Kumar, SP (2008) Gléasra gabhdóirí imdhíonachta NB-LRR: ó aitheantas go hathchlárú trascríobh. Miocrób Óstach Cill 3: 126–135 10.1016/j.chom.2008.02.010

Dodds, PN, Rathjen, JP (2010) Díolúine plandaí: i dtreo dearcadh comhtháite ar idirghníomhaíochtaí plandaí-pataigine. Nat Rev Géiniteach 11:539–548

Dou, D, Zhou, JM (2012) Éifeachtóirí phytopathogen a dhéanann imdhíonacht óstach a threascairt: naimhde éagsúla, catha den chineál céanna. Miocrób Óstach Cill 12: 484-495

Du, Y, Zhao, J, Chen, T, Liu, Q, Zhang, H, Wang, Y, Hong, Y, Xiao, F, Zhang, L, Shen, Q (2013) Cineál I Tá próitéiní J-fearainn NbMIP1 ag teastáil le haghaidh ionfhabhtú víreas mósáic tobac agus díolúine dúchasach plandaí. PLoS Pathog 9: e1003659

Fan, H, Hu, Y, Tudor, M, Ma, H (1997) Idirghníomhaíochtaí sonracha idir fearainn K AG agus AGLanna, baill de theaghlach fearainn MADS de phróitéiní ceangailteacha DNA. Gléasra J 12: 999–1010

Feys, BJ, Moisan, LJ, Newman, MA, Parker, JE (2001) Idirghníomhú díreach idir próitéiní comharthaíochta frithsheasmhachta galair Arabidopsis, EDS1 agus PAD4. EMBO J 20: 5400–5411

Garcı´a, AV, Blanvillain-Baufume´, S, Huibers, RP, Wiermer, M, Li, G, Gobbato, E, Rietz, S, Parker, JE (2010) Tá gá le gníomhaíochtaí cothromaithe núicléacha agus cíteaplasma EDS1 le haghaidh a freagra imdhíonachta dúchasach iomlán plandaí. PLoS Pathog 6: e1000970

Gassmann, W, Hinsch, ME, Staskawicz, BJ (1999) Is ball den teaghlach TIR-NBS-LRR géinte frithsheasmhach in aghaidh galair í an ghéin fhrithsheasmhachta baictéarach Arabidopsis RPS4. Planda J 20: 265–277

Gloggnitzer, J, Akimcheva, S, Srinivasan, A, Kusenda, B, Riehs, N, Stampfl, H, Bautor, J, Dekrout, B, Jonak, C, Jime’nez-Go’mez, JM (2014) Nonsense- modhnaíonn lobhadh mRNA idirghabhála leibhéil gabhdóirí imdhíonachta chun cosaint antibacterial plandaí a rialáil. Miocrób Óstach Cill 16: 376–390

Ham, BK, Park, JM, Lee, SB, Kim, MJ, Lee, IJ, Kim, KJ, Kwon, CS, Paek, KH (2006) Earcaítear Tobac Tsip1, próitéin méar Zn de chineál DnaJ, chuig agus a chumasaíonn Rinne Tsi1-gníomhachtú tras-idirghabhála. Cill Phlandaí 18: 2005–2020

Heidrich, K, Blanvillain-Baufume´, S, Parker, JE (2012) Srianta móilíneacha agus spáis ar chomharthaíocht gabhdóra NB-LRR. Curr Opin Planda Biol 15: 385–391

Heidrich, K, Wirthmueller, L, Tasset, C, Pouzet, C, Deslandes, L, Parker, JE (2011) Nascann Arabidopsis EDS1 aitheantas éifeachtóra pataigin le freagraí imdhíonachta a bhaineann go sonrach le ceall. Eolaíocht 334: 1401–1404

Hu, Y, Zhou, L, Huang, M, He, X, Yang, Y, Liu, X, Li, Y, Hou, X (2018) Tá ról riachtanach ag Gibberellins i embryogenesis déanach Arabidopsis. Plandaí Nat 4: 289–298

Huang, M, Hu, Y, Liu, X, Li, Y, Hou, X. (2015) Déanann Arabidopsis LEAFY COTYLEDON1 idirghabháil ar fhorbairt postembryonic trí idirghníomhú le FACHTÓIR IDIRNÁISIÚNTA PHYTOCHROME4. Cill Phlandaí 27: 3099–3111

Déanann Jelenska, J, Yao, N, Vinatzer, BA, Wright, CM, Brodsky, JL, Greenberg, JT (2007) AJ éifeachtóir virulence fearainn Pseudomonas syringae clóraplastaí óstacha a athmhúnlú agus cosaintí a shochtadh. Curr Biol 17:499–508

Jones, J, Dangl, J (2006) An córas imdhíonachta plandaí. Dúlra 444: 323–329

Khan, M, Subramaniam, R, Desveaux, D (2016) As gardaí, decoys, baits, agus gaistí: dearcadh pataigin i bplandaí de réir braiteoirí cineál III éifeacht. Curr Opin Micribhithil 29: 49–55

Kinkema, M, Fan, W, Dong, X (2000) Tá gá le logánú núicléach NPR1 chun léiriú géine PR a ghníomhachtú. Cill Phlandaí 12: 2339–2350

Koch, E, Slusarenko, A (1990) Tá Arabidopsis so-ghabhálach d'ionfhabhtú ag fungas mildew lag. Cill Phlandaí 2: 437–445

Lam, E, Kato, N, Lawton, M (2001) Bás cille cláraithe, mitochondria, agus freagairt hipiríogaireachta plandaí. Dúlra 411: 848–853

Lee, DW, Kim, JK, Lee, S, Choi, S, Kim, S, Hwang, I (2008) Tá foghrúpaí seicheamh iolracha ag a bhfuil móitífeanna seichimh sainiúla clóraplasta a dhírítear ar chloroplasta mar pheptídí idirthurais plastid ionchódaithe le hArabidopsis. Cill Phlandaí 20: 1603–1622