Aisiompaíonn Echinacoside Athmhúnlú miócairdiach agus Feabhsaíonn Feidhm Croí

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Yajuan Ni1|Jie Deng1|Xin Liu1|Qing Li1|Juanli Zhang1|Hongyuan Bai1|Jinwen Zhang2

Teibí

Is bunús paiteolaíoch tábhachtach de HF é athmhúnlú miócairdiach, tá strus ocsaídiúcháin mitochondrial ina thionscnóir ar hypertrophy miócairdiach, fiobróis, agus apoptosis. Is é ECH an príomh-chomhpháirt ghníomhach de leigheas Sínis traidisiúnta Cistanches Herba, léiríonn neart staidéir go bhfuil cumas láidir frithocsaídeach aige i gcealla nerve agus siadaí, cuireann sé cosc ​​ar strus ocsaídiúcháin mitochondrial, cosnaíonn sé feidhm mitochondrial, ach níl an mheicníocht shonrach soiléir. Is ais thábhachtach frithocsaídeach é SIRT1/FOXO3a/MnSOD, aimsíonn staidéar go nascann ECH go comhfhiúsach le SIRT1 mar ligand agus go n-uasrialaíonn sé slonn SIRT1 i gcealla inchinn. Tugaimid hipitéis go bhféadfadh ECH athmhúnlú miócairdiach a aisiompú agus feabhas a chur ar fheidhm chroí HF trí ais chomharthaíochta SIRT1/FOXO3a/MnSOD a rialáil agus strus ocsaídiúcháin miteachondrial i gcáirdiomyocytes a chosc. Anseo, déanaimid ar an gcéad dul síos samhail cheallacha de strus ocsaídiúcháin ag ISO le cealla AC-16 agus réamhchóireáil le ECH, an leibhéal ROS mitochondrial, gortú ocsaídiúcháin mtDNA, MMP, próitéin charbónáitithe, sárocsaídiú lipid, ROS intracellular, agus aimsítear apoptosis, deimhnigh éifeacht ECH i strus ocsaídiúcháin mitochondrial agus feidhm in vitro. Ansin, bunaímid múnla HF francach arna spreagadh ag ISO agus réamhchóireáil le ECH. Déantar innéacsanna feidhm chroí, athmhúnlú miócairdiach, strus agus feidhm ocsaídiúcháin mitochondrial, léiriú ais comharthaíochta SIRT1/FOXO3a/MnSOD a thomhas, léiríonn na sonraí go bhfeabhsaíonn ECH feidhm chroí, go gcuireann sé bac ar hipertróf miócairdiach, méadaíonn fiobróis agus apoptosis léiriú SIRT1/FOXO3a/ Ais comharthaíochta MnSOD, laghdaíonn sé na damáistí ocsaídiúcháin mitochondrial, cosnaíonn sé feidhm mitochondrial. Bainimid de thátal as go n-aisiompaíonn ECH athmhúnlú miócairdiach agus go bhfeabhsaítear feidhm chairdiach tríd an ais SIRT1/FOXO3a/MnSOD a uas-rialáil agus trí strus ocsaídiúcháin mitochondrial i bhfrancaigh HF a chosc.

EOCHAIRSEALACHSechinacoside, cliseadh croí, strus ocsaídiúcháin mitochondrial, athmhúnlú miócairdiach

cistanche luibheanna úrachunstrus ocsaídiúcháin mitochondrial

1|RÉAMHRÁ

Is é cliseadh croí (HF) an toradh deiridh ar fhormhór na ngalar cardashoithíoch a bhfuil leitheadúlacht ard agus droch-prognóis acu, agus leis an treocht atá ag dul in olcas i ndaonra atá ag dul in aois, tháinig méadú géar ar an ospidéal agus ar bhásmhaireacht mar gheall ar chliseadh croí ainsealach (CHF) ar fud an domhain.1 Le 20 bliain anuas, tá dul chun cinn mór déanta ag cóireálacha drugaí do HF, ach tá an éifeacht an-teoranta, agus mar sin tá gá go práinneach le drugaí nua. Tá athmhúnlú miócairdiach mar bhunús paiteolaíoch tábhachtach de HF agus tá sé tréithrithe ag hipertróf miócairdiach, apoptosis, fiobróis interstitial, tá na cealla miócairdiach dí-eagraithe, agus mar thoradh ar laghdú ar chodán ejection (LVEF), méadú ar thoisí deiridh diastólacha agus systolic ventricular chlé. (LVIDd agus LVIDs), agus laghdú ar ghiorrú codánach ventricular chlé (LVFS).2 Ach níor tuigeadh go hiomlán fós na meicníochtaí ba bhun leo. Le blianta beaga anuas, deimhníodh go leor staidéir go bhfuil strus ocsaídiúcháin ina thionscnóir tábhachtach d’athmhúnlú miócairdiach.3-7

Is coinníoll é strus ocsaídiúcháin ina ndéantar speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS) nó fréamhacha saor in aisce a ghiniúint go ró-mhór agus go n-eascraíonn damáiste ocsaídiúcháin do chomhpháirteanna cille, agus is cúis le mífheidhmiú cille é seo, ar a seal, is é 8Mitochondria príomhfhoinse ROS intracellular, mar thoradh ar. sceitheadh ​​​​ón slabhra iompair leictreon riospráide, agus is iad mitochondria an suíomh is íogaire maidir le héifeachtaí ROS.9 D'aithin staidéir i HF giniúint mhéadaithe ROS ó choimpléasc I den slabhra riospráide.8 Ionsaíonn táirgeadh méadaithe ROS comhpháirteanna mitochondrial ar dtús agus bíonn strus ocsaídiúcháin mar thoradh air. , a léiriú mar charbónú próitéiní, sárocsaídiú lipid, agus damáiste DNA,10 agus mífheidhm mitochondria, as a dtagann foirmiú iomarcach ROS,8 mar chiorcal fí. Léirítear gur féidir leis an strus ocsaídiúcháin marthanach a bheith ina chúis le hipertróf miócairdiach agus fiobróis miócairdiach,11-13 agus apoptosis cealla miócairdiach a chur faoi deara trí apoptóis atá ag brath ar mitochondria a ghníomhachtú mar thoradh ar charbónú próitéiní membrane mitochondrial agus cailliúint acmhainneacht membrane mitochondrial.14 Mar sin , meastar go bhféadfadh cosc ​​ar strus ocsaídiúcháin mitochondrial a bheith ina straitéis nua chun athmhúnlú miócairdiach agus fiú HF a chosc.15-17

Is é Echinacoside (ECH), glycosíd feanilethanoid nádúrtha, an príomh-chomhpháirt ghníomhach de Cistanches Herba, arb é leigheas traidisiúnta na Síne é. Le blianta beaga anuas, rinneadh staidéar forleathan ar ECH sa néarchóras agus tumaí, agus tuairiscíodh go bhfuil éagsúlacht d'éifeachtaí cógaseolaíochta aige, mar shampla airíonna frithocsaídeacha, frith-athlastacha, frith-apoptóis agus frith-meall.18,19In. cealla nerve, cuireann ECH go mór le cumas frithocsaídeach, laghdaítear táirgeadh ROS, feabhsaíonn sé acmhainneacht membrane mitochondrial (MMP), agus méadaíonn sé inmharthanacht cille, taispeánann 20 éifeachtaí cosanta ar fheidhm mitochondrial agus bac ar strus ocsaídiúcháin mitochondrial, cosnaíonn sé i gcoinne díobhála ocsaídiúcháin agus feabhsaíonn sé cuimhne, cuireann sé cosc ​​​​ar deireadh thiar. neurodegeneration.21,22 Méadaíonn ECH gníomhaíocht SOD freisin agus imríonn sé ról cosantach i bhfíochán inchinne agus i bhfíochán reitine,19,23 ach níl an mheicníocht shonrach dá éifeacht frithocsaídeach soiléir.

Tá dlúthbhaint ag SIRT1 le strus ocsaídiúcháin, agus is é ais chomharthaíochta SIRT1/FOXO3a/MnSOD an ais frithocsaídeach is tábhachtaí agus tá sé freagrach as strus ocsaídiúcháin mitochondrial a chosc, dáileann MnSOD go forleathan i mitochondria agus tá sé freagrach go príomha as imréitigh ROS miteachondrial, mar sin de. chun strus ocsaídiúcháin a chosc, is féidir le comhdhúile a ghníomhaíonn an ais fhrithocsaídeach seo bac a chur ar strus ocsaídiúcháin.24,25 Tá sé léirithe ag staidéir le déanaí go bhfeidhmíonn ECH a éifeachtaí cógaseolaíochta trí ilbhealaí comharthaíochta a rialú, mar p-AKT, mTOR/STAT3, TGF-beta 1/Smads , agus cosán comharthaíochta SIRT1.26-29 aimsíonn staidéar nua go gceanglaíonn ECH go comhfhiúsach le SIRT1 mar ligand agus go n-uasrialaíonn sé slonn SIRT1 i gcealla inchinn.26Molann sé go bhféadfadh ECH srian a chur ar strus ocsaídiúcháin miteachondrial i gcridimiicítí agus miócairdiach droim ar ais. athmhúnlú. Mar sin féin, tá taighde ar éifeachtaí ECH tar éis díriú ar an néarchóras nó ar an meall, tá éifeachtaí agus meicníochtaí ECH ar strus ocsaídiúcháin mitochondrial i cardiomyocytes agus athmhúnlú miócairdiach fós anaithnid. Anseo, déanaimid múnla ceallacha de strus ocsaídiúcháin a aslú trí ISO ar dtús agus deimhnímid éifeacht ECH ar strus ocsaídiúcháin miteachondrial agus ar fheidhm in vitro. Ansin, bunaímid múnla HF francach arna tharlú ag ISO agus léirímid go n-aisiompaíonn ECH athmhúnlú miócairdiach agus go bhfeabhsaíonn sé feidhm chairdiach trí ais chomharthaíochta SIRT1/FOXO3a/MnSOD a uas-rialáil agus trí strus ocsaídiúcháin mitochondrial i bhfrancaigh HF a chosc. Tá na torthaí ceaptha chun fianaise thurgnamhach a sholáthar maidir le forbairt drugaí nua chun cliseadh croí a chosc.

2|ABHAIR AGUS MODHANNA

2.1|Cultúir agus cóireáil cille

Ceannaítear cealla AC16 ó Bhailiúchán Cultúir Bena. Coinnítear na cealla i glúcóis ard Tá forlíonadh meán modhnaithe Dulbecco's Eagle (DMEM; Hyclone, GE Healthcare, USA) le 10 faoin gcéad de shéiream bó féatais (10 faoin gcéad FBS; Gibco) i bhfleascáin T-75 (Corning Glassworks, Corning, NY, SAM). Coinnítear na coinníollacha ag 37 céim in atmaisféar tais ina bhfuil 5 faoin gcéad CO2. Chomh luath agus a shroicheann na cealla cumar 70 faoin gcéad -80 faoin gcéad, gortar cealla grúpa ISO (Sigma, USA) le meán ina bhfuil 10uM ISO (Sigma, SAM) ar feadh 24h, déantar cealla grúpa ECH a réamhchóireáil le 50uM ECH (MCE , USA) le haghaidh nochtadh ISO 30min roimh ré. Ní dhéileáiltear le cealla rialaithe (Ctrl) rud ar bith.

cisteán ar díolsliocht

2.2|Leibhéal ROS mitochondrial a bhrath ag baint úsáide as cemiluminescence luminol

Déantar mitochondria a leithlisiú agus a íonú ó chealla AC-16 trí úsáid a bhaint as Mitochondria Isolation Kit (Sigma, USA) de réir threoracha an déantóra. Socraítear tiúchan próitéine ag an trealamh measúnaithe próitéin BCA (Biteicneolaíocht). Aimsítear leibhéal ROS mitochondrial ag lonrúil (3-hiodraisín aimínophthalic 5-aimín-2,3-dé-hidr-1,4-phthalazinedione) ag baint úsáide as trealamh Elisa (GERMED SCIENTIFIC INC, USA), imoibríonn sé le ROS agus is cúis le hastú fótón, arb é speictream banna é a bhfuil buaicphointe ag thart ar 460nm, agus aimsítear an tAonad Solais Coibhneasta (RLU) trí ionstraim tomhais chemiluminescence agus a thiontú go RLU/ug. próitéin mitochondrial.

2.3|8-Úsáidtear OHdG chun damáiste ocsaídiúcháin DNA miteachondrial a mheas

Déantar damáiste ocsaídiúcháin DNA miteachondrial a mheas trí inneachar 8-Hidrocsa-2-dé-ocsaigeanóisín (8-OHG) a bhrath. Déantar mitochondria íonaithe i gcealla a leithlisiú ag baint úsáide as trealamh leithlisithe mitochondria mar atá thuas (Sigma). Socraítear tiúchan próitéine ag an trealamh measúnaithe próitéin BCA (Biteicneolaíocht). Ansin, déantar iad a dhícheangal chun leibhéal 8-OHdG a chinneadh ag baint úsáide as trealamh Elisa (GERMED SCIENTIFIC INC, USA) de réir threoracha an déantóra. Déantar ionsúiteacht an athraithe datha a thomhas i speictreafótaiméadar ag an tonnfhad 450 nm. Cinntear an tiúchan de 8-OHdG sna samplaí ansin trí OD na samplaí a chur i gcomparáid leis an gcuar caighdeánach agus a thiontú go NG/ml.

2.4|Tomhas MMP ag JC-1

Déantar mitochondria a aonrú agus a íonú de AC-16 agus déantar tiúchan próitéine a chinneadh mar a luadh thuas. Ansin cuirtear na miteacoindria ar fionraí ag tiúchan 1mg/ml, déantar an MMP a thomhas ag baint úsáide as trealamh measúnaithe JC-1 de réir threoracha an déantóra. Déantar déine an fhluaraiseachta a thomhas ag tonnfhad excitation: 490nm, scoilt 5nm, tonnfhad astaithe: 590 nm, scoilt 5nm le hionstraim speictreafótaiméadar,30 léirítear na torthaí mar FLU/ugP.

2.5|Brath cealla apoptotic trí chiteiméadracht sreafa i gCealla AC-16

Úsáidtear cíteiméadracht sreafa chun apoptosis ceallacha a mheas. Úsáidtear fearas braite apoptosis Annexin V-FITC/PI (CWBIO, an tSín) chun cealla apoptotic agus necrotic a bhrath de réir threoracha an tsoláthraí. Aithnítear apoptosis luathchéime, apoptosis nó neacróis déanach-chéime, smionagar ceallacha, agus cealla inmharthana mar iarscríbhinn V ( móide ) / PI ( - ), iarscríbhinn V ( móide ) / PI ( móide ), iarscríbhinn V ( -) / PI ( móide ) agus iarscríbhinn V ( - )/PI ( - ), faoi seach. Déantar anailís ar dhéine fhluaraiseachta ag baint úsáide as cíteaiméadar sreafa (BD FACSVerse™ Flow Cytometer, BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Déantar gach turgnamh 3 huaire.

2.6|Rinneadh measúnú ar an ROS intracellular de réir cíteaiméadar sreafa

Tar éis cóireála, déantar na cealla a trypsinized, nite dhá uair le PBS. Déantar na cealla a athbhrú ansin i PBS, a dhaite le DCFH-DA (Beyotime, an tSín) ag an tiúchan deiridh de 1 μM agus gortar iad ar feadh 1 h ag 37 céim i goradán le CO2, agus ansin déantar iad a thástáil i cítoiméadar sreafa ag excitation 488 nm. . Léiríonn an déine fluaraiseachta leibhéal na ROS intracellular.

2.7|Tástáil cion próitéin charbóinile i mitochondria de chealla AC-16

Tar éis cóireála, déantar mitochondria íonaithe a leithlisiú agus a sonicated ar oighear agus déantar iad a chóireáil le sulfáit streptomycin 1 faoin gcéad chun aigéid núicléacha mitochondrial a deascadh, déantar tiúchan próitéine a chinneadh. Déantar an cion próitéine carbónil a thástáil ag baint úsáide as trealamh Elisa (GERMED SCIENTIFIC INC, USA) bunaithe ar dhíorthú an ghrúpa charbóinile le dinitrophenylhydrazine (DNPH), de réir threoracha an trealaimh, déantar OD a thomhas le léitheoir micreaphláta agus a thiontú ina nmol/ mg próitéine trí chomparáid a dhéanamh leis an gcuar caighdeánach.

2.8|Cinneadh leibhéal sárocsaídiúcháin lipid i mitochondria de chealla AC-16

Tar éis cóireála, bailítear cealla agus déantar iad a líseáil, déantar mitochondria a leithlisiú agus a íonú, agus a scoilteadh le ultrafhuaime, déantar tiúchan próitéine a chinneadh ag trealamh measúnaithe próitéin BCA (Biteicneolaíocht), déantar sárocsaídiú lipid a chinneadh de réir leibhéal malondialdehyde (MDA) tríd an measúnú TBARS. , ag baint úsáide as trealamh (Nan jing Jian cheng, an tSín) agus déantar leibhéal MDA a thomhas de réir phrótacal an mhonaróra. Braitear OD ag 586 nm ag léitheoir micreaphláta agus déantar é a thiontú go próitéin μmol/g trí chomparáid a dhéanamh leis an gcuar caighdeánach.

2.9|Ainmhithe agus cóireáil

Faightear francaigh fireanna óga Sprague-Dawley a bhfuil meáchan 120-140g orthu ó Lárionad Ainmhithe Saotharlainne Ollscoil Xi'an Jiao tong (Shaanxi, an tSín). Cloíonn an t-imscrúdú leis an Treoir um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Saotharlainne, arna fhoilsiú ag Institiúidí Náisiúnta Sláinte na SA (foilseachán NIH uimhir.85-23, leasaithe i 1996), agus cheadaigh na húdaráis áitiúla na prótacail turgnamhacha ( Coiste Eitice Bithleighis na Roinne Leighis de chuid Ollscoil Xi' a Jiao tong). Bunaítear an tsamhail francach HF mar a chuireamar síos roimhe seo.31 Go hachomair, déantar Isoproterenol (10 mg/kg) a riaradh uair amháin sa lá trí instealladh intraperitoneal ar feadh 2 sheachtain (sainithe mar ghrúpa HF), riartar ECH le 20 ug/g uair amháin sa lá trí instealladh intraperitoneal ag 30 nóiméad sula ndéantar cóireáil ISO (a shainmhínítear mar ghrúpa ECH), agus maireann an riarachán ar feadh 2 sheachtain. Déantar ainmhithe rialaithe a riar le 0.9 faoin gcéad NaCl (sainithe mar ghrúpa Ctrl). Déantar tomhais echocardiography chun feidhm chroí a mheas.

2. 10|Tomhais echocardiographic

Déantar ainmhithe a ainéistéisiú trí instealladh ionperitoneal de 300 mg/kg de hiodráit chlórach. Úsáidtear córas ultrafhuaime SONOS-2500 le trasduchtóir ultrafhuaime 7.5 MHz (HP, SAM) chun scrúduithe macallagrafacha a dhéanamh. An codán ejection ventricular chlé (LVEF), giorrú codánach ventricular chlé (LVFS), toisí deireadh-diastolic ventricular chlé (LVIDd), toisí deireadh-systolic ventricular chlé (LVIDs), ráta croí (HR), tiús septal interventricular sa diastole (IVSTd ), déantar tiús bhalla posterior ventricular chlé i diastole (LPPWTd) a thomhas mar a thuairiscítear dúinn roimhe seo.32

Coscann FIGIÚR 1 50μmol ECH go héifeachtach an strus ocsaídiúcháin miteachondrial ar chealla AC-16 de bharr 10μmol/L ISO agus cosnaíonn sé feidhm miteachondrial agus laghdaítear apoptosis.

2. 11|Tomhaistear cóimheas croí-mheáchan le meáchan coirp (HW/BW).

Déantar an francach a mheá roimh ainéistéiseach, tá an croí úr scoite amach agus níonn sé an fhuil le 0.1mol/L PBS, gearrtar soithigh agus fíocháin iomarcacha eile agus déantar an croí a mheá, ansin déantar HW/BW(mg/100g) ríomh.

2.12|staining histological

Déantar croí na bhfrancach a dháileadh agus a shocrú i 4 faoin gcéad paraformaildéad, leabaithe i pairifín, agus roinnte i slices 5 μm-tiubh. Úsáidtear staining Haematoxylin-Eosin (HE) chun na hathruithe paiteolaíocha a urramú agus úsáidtear trichrome Masson chun snáithíní collagen de fhíochán miócairdiam francaigh a mheas. Déantar an codán toirte collaigine cairdiach (CVF) agus achar trasghearrtha cardiomyocytes a thomhas le Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, MD, USA).

2. 13|staining TUNEL

Bailítear fíochán miócairdiach ón bhfiontar clé agus déantar an measúnú TUNEL mar a thuairiscíomar roimhe seo32

2. 14|Tarchur micreascóp leictreon

Socraítear fíochán croí úr i glútaraildéad 2.5 faoin gcéad ag 4 céim , gearrtar an fíochán ina 1mm3 de réir toirte agus socraítear é arís i glútaraildéad 2.5 faoin gcéad ag 4 céim ar feadh 2 uair, ansin nitear é le 0.1mol/L PBS, seasta in aigéad osmach 1 faoin gcéad, díhiodráitithe le haicéatón, leabaithe le roisín eapocsa, déantar slices ultrathin a tanaí thart ar 800nm, a dhaite le aicéatáit úráinile agus chiotráite luaidhe, agus ansin breathnaítear iad faoi mhicreascóp leictreoin tarchurtha (H{ {13}}, Hitachi Limited, an tSeapáin). Chun éifeacht chosanta ECH i moirfeolaíocht mitochondrial a chainníochtú, déantar anailís staitistiúil ar an meán-imlíne mitochondrial, ar an meánlimistéar trasghearrtha mitochondrial, ar chéatadán díghiniúna, agus ar chéatadán folúisithe i mitochondria le Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, USA).

2. 15|PCR cainníochtúil

Ullmhaítear RNA iomlán ó fhíochán ventricular clé le himoibrí Trizol (Invitrogen, Carlsbad, USA). Déantar cDNA a shintéisiú trí úsáid a bhaint as Kit Sintéise cDNA 1ú Snáithe TUREscript (Takara, an tSeapáin). Seo a leanas seichimh primer collaigine a d’úsáid mé le haghaidh PCR fíor-ama: ar aghaidh: 5′-GTCGTATCCAGTGCGTGGTC-3′, aisiompaithe: 5′-GTGGAGTCGGCAATTGCA-3′. GAPDH ar aghaidh 5'-GGC AAG GTC ATC CCA GAG CT-3', droim ar ais 5'-CGC CTG CTT CAC CAC CTT CT-3'. Déantar PCR cainníochtúil fíor-ama (qPCR) le SYBRPremix Ex Taq (Fíor-Am Foirfe) (Takara, an tSeapáin). Ríomhtar an leibhéal coibhneasta mRNA trí normalú go GAPDH, de réir an mhodha 2-ΔΔCT.

2. 16|Anailís blot an Iarthair ar léiriú próitéine SIRT1, FOXO3a, MnSOD

Baintear próitéin iomlán fíocháin ventricular chlé ar oighear ag baint úsáide as Maolán RIPA fuar (BioRad, SAM) le Cocktail Inhibitor Protease (Sigma-Aldrich). Déantar an tiúchan a chinneadh ag an modh BCA. Déantar cur síos ar nósanna imeachta blot an Iarthair roimhe seo.33 Go hachomair, déantar an sampla próitéine a chodánú ar glóthacha dodeicile sulfáit-polyacrylamide sóidiam 15 faoin gcéad, aistrithe go seicní PVDF (BioRad, SAM), bacáilte ag 5 faoin gcéad bainne bearrtha, agus gortha le antasubstaint MYH ó luch. (caolaithe 1:200, Santa Cruz, SAM). Ansin, gortha le horseradish antashubstaint luch gabhair sárocsaíd-chomhchuingeach (caolaithe 1:2,000, Santa Cruz, SAM). Ríomhtar an leibhéal coibhneasta próitéine tríd an meánluach gathanna go -actin a normalú. Braitear bannaí próitéine ag córas cemiluminescence (ChemiDoc XRS, BioRad).

2. 17|Strus ocsaídiúcháin mitochondrial i miócairdiam francach a thomhas

Déantar mitochondria íonaithe de mhiocairdiam francach a leithlisiú trí úsáid a bhaint as Mitochondria Isolation Kit (Sigma, SAM) de réir threoracha an mhonaróra, mitochondrial ROS, MMP, damáiste ocsaídiúcháin mtDNA, cion próitéin carbónáitithe, agus leibhéal sárocsaídiúcháin lipid i mitochondria trí úsáid a bhaint as na modhanna céanna. turgnaimh cille cur síos orthu thuas. Is fiú a thabhairt faoi deara, go n-aimsítear ROS i bhfíochán miócairdiach le tóireadóirí fluaraiseacha DCFH-DA, braitear déine fluaraiseachta leis an ionstraim tomhais lipéadaithe einsím, léirítear na torthaí mar phróitéin mitochondrial RLU/ug.

2. 18|Anailís staitistiúil

Cuirtear na sonraí go léir i láthair mar acmhainn ± SEM. Baintear úsáid as ANOVA aontreo chun difríochtaí i measc grúpaí iolracha a chur i gcomparáid, agus ina dhiaidh sin déantar tástáil tábhachta post hoc Tukey. Cinntear na staitisticí go léir trí úsáid a bhaint as bogearraí SPSS15.0 (SPSS Inc, IL, USA). Meastar luach dóchúlachta P < .05="" a="" bheith="">

3|TORTHAÍ

3.1|Coscann 50 μM ECH go héifeachtach damáiste ocsaídiúcháin mitochondrial agus apoptosis i gcealla AC-16

Socraítear cealla neamhchóireáilte mar ghrúpa Ctrl. Ar an gcéad dul síos, mar a léiríonn Fíor 1A, cuireann ECH cosc ​​ar ROS miteachondrial arna tharlú ag ISO. Léiríonn cealla cóireáilte ISO méadú suntasach ar ROS mitochondrial i gcomparáid le Ctrl agus déantar an méadú seo a mhaolú go suntasach trí réamhchóireáil le 50 μM ECH. Ar an dara dul síos, is féidir le ECH damáiste ocsaídiúcháin mtDNA de bharr ISO a chosc. 8-Creidtear go bhfuil OHdG ar cheann de na loit DNA is flúirseach a eascraíonn as strus ocsaídiúcháin agus is bithmharcóir é ar dhamáiste agus deisiú DNA ocsaídiúcháin. Mar a thaispeánann Fíor 1B, aimsítear ábhar 8-OHdG i mitochondria íonaithe ó chealla AC{-16, léiríonn na torthaí gur tháinig méadú suntasach ar leibhéal 8-OHdG i mitochondria ó chealla cóireáilte ISO, ach rinneadh an t-athrú a aisiompú le 50 μM ECH. Ar an tríú dul síos, tá ECH éifeachtach chun an MMP a chosaint, atá lagaithe ag ISO. Tá laghdú suntasach ar dhéine an fhluaraiseachta i gcealla atá cóireáilte le ISO i gcomparáid le cealla Ctrl, ach maolaíonn réamhchóireáil le 50 μM ECH laghdú MMP go suntasach, mar a léiríonn Fíor 1C. Ar an gceathrú dul síos, tugann ECH cosaint ar dhamáiste ocsaídiúcháin do phróitéin miteachondrial i gcealla AC{-16. Mar a thaispeánann Fíor 1D, méadaítear go suntasach an cion próitéine carbóinile i mitochondria de chealla cóireála ISO agus maolaíonn ECH an éifeacht. Ar an gcúigiú háit, cuireann ECH bac freisin ar shárocsaídiú lipid miteachondrial i gcealla AC{-16 a tharlódh de bharr ISO. Mar a léiríonn Fíor 1E, is léir go bhfuil leibhéal na sárocsaídí lipid i mitochondria de chealla ISO níos airde ná mar atá i gcealla Ctrl, agus laghdaítear an méadú seo go suntasach le réamhchóireáil 50μM ECH. I ndeireadh na dála, cuireann ECH bac ar charnadh ROS incheallach. Mar a léiríonn Fíor 1F, tá méadú suntasach ar leibhéal na ROS intracellular i gcealla ISO agus laghdaítear go suntasach é i gcealla réamhchóireáilte ECH. Léiríonn Fíor 1G go bhfuil méadú suntasach tagtha ar an ráta apoptosis de chealla AC-16 tar éis gor 24h le 10μM ISO, i gcomparáid leis na cealla Ctrl, ach laghdaíonn cealla réamhchóireála le 50 μM ECH go suntasach apoptosis spreagtha ISO.

FIGIÚR 2 Déantar hipertróf cairdiach na bhfrancach HF arna tharlú ag ISO a mhaolú agus cuirtear feabhas suntasach ar fheidhm an chroí trí chóireáil ECH.

3.2|Déanann ECH aisiompú ar athmhúnlú miócairdiach agus feabhsaítear feidhm chairdiach na bhfrancaigh HF arna n-ionsú ag ISO

Mar a léirítear i bhFíor 2A, tá hipertróf soiléir ag croíthe i bhfrancaigh HF agus déantar iad a aisiompú trí chóireáil le ECH. Mar a léiríonn Fíoracha 2B-D agus L, laghdaíonn ECH an HW/BW. Léiríonn torthaí echocardiography go laghdaítear LVEF agus LVFS go suntasach sa ghrúpa HF, tá méadú suntasach tagtha ar LVIDd, LVIDs, agus IVSTd sa ghrúpa HF. Mar sin féin, laghdaíonn ECH go suntasach LVIDd, LVIDs, IVSTd agus feabhsaíonn sé LVEF agus LVFS, níl aon difríocht shuntasach i AD i measc na dtrí ghrúpa, tá LVPWTd méadaithe i HF, ach níl aon difríocht idir ECH agus Ctrl, nó idir ECH agus HF, go léir mar Léiríonn Figiúr 2E-K. Léiríonn torthaí staining HE go laghdaítear hipertróf miócairdiach, neamhord socraithe nó neacróis degeneration, insíothlú cille athlastach agus hyperemia interstitial agus éidéime i bhfrancaigh HF, agus ECH go mór na damáistí seo, hypertrophy miócairdiach agus neamhord socraithe a mhaolú, an laghdaítear neacróis degeneration agus infiltrate athlastach, mar a thaispeántar i bhFíor 3A. Déantar limistéar trasghearrtha an cardiomyocyte a thomhas, déantar é a mhéadú go suntasach tar éis ISO agus laghdaítear é i ngrúpa cóireáilte ECH, mar a léiríonn Fíor 3E. Léiríonn measúnuithe ar sil-leagan collaigine trí smálú Masson go bhfuil méadú soiléir ar an ábhar collaigine ventricular chlé i bhfrancaigh HF agus go laghdaítear é tar éis cóireála le ECH, rud a laghdaíonn CVF ar ndóigh. Nochtann anailís PCR fíor-ama go bhfuil athscríbhinní cineál procollagen Ⅰ uasrialaithe i bhfrancaigh ISO agus ís-rialaithe i bhfrancaigh ECH, tá na torthaí seo comhsheasmhach lena chéile, mar a léiríonn Fíoracha 3B agus FG, léiríonn na sonraí go laghdaíonn ECH go héifeachtach sil-leagan collagen. . Tá méadú suntasach tagtha ar líon na gcealla TUNEL-dearfach i cardiomyocytes i bhfrancaigh HF i gcomparáid le Ctrl, laghdaíonn ECH go suntasach apoptosis cille miócairdiach, agus léiríonn Fíor 3C-D íomhá ionadaíoch cealla TUNEL-dearfach i réimsí cumhachta íseal agus ard faoi seach, agus Figiúr Léiríonn 3H ráta apoptosis na gcealla miócairdiach. Léiríonn na torthaí seo go n-aisiompaíonn ECH hipertróf miócairdiach, fiobróis miócairdiach interstitial, agus apoptosis, agus go bhfeabhsaíonn sé feidhm chroí i bhfrancaigh HF arna spreagadh ag ISO.

FIGIÚR 3 Léiríonn torthaí staining histological go n-aisiompaíonn ECH athmhúnlú ventricular chlé ar francaigh HF a tharlódh de bharr ISO.

3.3|Cosnaíonn ECH ultrastruchtúr miócairdiach i bhfrancaigh HF

Léiríonn torthaí na leictreon-mhicreagraif tarchurtha go bhféadfadh ECH an damáiste don ultrastruchtúr miócairdiach a mhaolú, mar a léiríonn Fíor 4A-B. Is socrú ingearach iad myofibrils, is léir go bhfuil an struchtúr sarcomere, socraítear na myofibrils go néata, agus tá an líne Z soiléir. Tá mitochondria socraithe go néata agus tá an struchtúr soiléir i bhfrancaigh Ctrl. Mar sin féin, tá myofibrils dí-eagraithe, réabtha, agus tuaslagtha, tá struchtúr an sarcomere doiléir, gan an líne Z, tá an crios crapadh miócairdiach le feiceáil, méadaítear líon agus toirt na mitochondria, tá cruthanna agus méideanna difriúla ag mitochondria, socraithe i neamhord, níl an struchtúr soiléir, tá swelling agus ilroinnt crista, titim nó clumping agus tuaslagtha i bhfolús i bhfrancaigh HF. Is léir go maolaíonn ECH na hathruithe seo, tá formhór na snáithíní matáin cairdiacha socraithe go néata agus tá filiméid miócairdiach soiléir, tá líne Z ann, cé go bhfuil roinnt díscaoileadh filiméid le feiceáil, tá struchtúr sarcome soiléir, laghdaítear dlús na mitochondrial, na cruthanna. agus déantar méideanna a mhaolú, a shocrú ar bhealach níos néata, is léir go laghdaítear ECH at i mitochondria agus ilroinnt crista, titim nó cnuasach, agus folúisiú ag ECH i gcomparáid le HF. Aithnítear at mitochondria agus ilroinnt crista, titim nó cnapáil, agus folúsú páirteach mar dhíghiniúint miteachondrial. Léiríonn na torthaí go gcosnaíonn ECH ultrastructure miócairdiach go héifeachtach, agus go háirithe cosnaíonn sé moirfeolaíocht mitochondrial i bhfrancaigh HF, mar a léiríonn Fíor 4C-F.

Cosnaíonn FIGIÚR 4 ECH ultrastruchtúir chardimíicítí agus moirfeolaíocht miteachondrial na bhfrancach HF arna tharlú ag ISO.

3.4|Rialaíonn ECH léiriú próitéine de SIRT1, FOXO3a, agus MnSOD

Léiríonn anailís Western Blot go bhfuil leibhéal slonn próitéine SIRT1, FOXO3a, agus MnSOD laghdaithe go mór i bhfrancaigh HF, áfach, is léir go n-uas-rialaíonn ECH an slonn próitéine laghdaithe. Taispeántar na bannaí próitéin ionadaíocha de thorthaí inmunoblotting agus anailís staitistiúil i bhFíor 5. Léiríonn an chuid de na sonraí go n-ardaíonn ECH léiriú próitéine SIRT1, FOXO3a, agus MnSOD.

3.5|Coscann ECH strus ocsaídiúcháin mitochondrial i bhfíochán miócairdiach ventricular chlé

Sa chuid seo, déantar ROS mitochondrial, MMP, damáiste ocsaídiúcháin DNA mitochondrial, ábhar próitéin carbónil, agus leibhéal sárocsaídiúcháin lipid i mitochondria i bhfíochán miócairdiach ventricular chlé na francaigh a thomhas go léir, agus tá na torthaí comhsheasmhach le turgnaimh cille, is é sin le rá, Laghdaíonn ECH ROS mitochondrial, cosnaíonn sé MMP, laghdaítear an méid damáiste de mtDNA, laghdaítear cion próitéine carbóinile agus sárocsaídiú lipid i mitochondrial, mar a léiríonn Fíor 6.

Déanann FIGIÚR 5 ECH suas-rialú an leibhéal slonn próitéine de SIRT1, FOXO3a, agus MnSOD atá ís-rialaithe i bhfrancaigh HF.

4|PLÉ

Léiríonn an staidéar seo go bhfuil róil éifeachtacha ag ECH maidir le hathmhúnlú miócairdiach a chosc agus feidhm chroí a fheabhsú trí ais chomharthaíochta SIRT1/FOXO3a/MnSOD a uas-rialáil agus strus ocsaídiúcháin mitochondrial a chosc.

Is iad na mitochondria príomhshuíomh giniúna ROS mar fhotháirge de fosfarylation ocsaídiúcháin, mar gheall ar a ghaireacht do ROS, próitéiní mitochondrial, lipidí, agus mtDNA a chreidtear a bheith ina spriocanna príomhúla damáiste ocsaídiúcháin tar éis astú iomarcach de ROS mitochondrial, 34,35 spreagann an damáiste seo táirgeadh breise ROS, leanann an ciorcal fí ar aghaidh, d'fhéadfadh hipertróf miócairdiach, apoptosis, fiobróis interstitial, agus HF a bheith mar thoradh ar ROS agus strus ocsaídiúcháin trí bhealaí comharthaíochta iolracha a ghníomhachtú.35 Mar sin, is cosúil go bhféadfadh drugaí a dhírigh ar chosc ar ocsaídiúcháin mitochondrial. Tá strus éifeachtach chun athmhúnlú miócairdiach a chosc. Is glycosíd feanilethanoid nádúrtha é ECH, comhpháirt den luibh Sínis traidisiúnta Cistanche tubulosa. déantar staidéar forleathan air agus tá sé cruthaithe go bhfuil cineálacha gníomhaíochtaí cógaseolaíochta aige le blianta beaga anuas, mar shampla frith-meall, frith-apoptosis, frith-aosú, gníomh neuroprotective, agus mar sin de. Tá sé cruthaithe ag staidéir go mbraitheann gníomhartha cógaseolaíochta ECH go príomha ar a mhaoin de ghníomhaíocht frithocsaídeach agus frith-athlastach, laghdaítear 18,21 agus ECH ROS mitochondrial agus cosnaíonn sé feidhm mitochondrial i gcoinne damáiste ocsaídiúcháin i gcealla nerve.20,22 Anseo, léirigh muid ar an gcéad dul síos Laghdaíonn ECH ROS mitochondrial de cardiomyocytes, dá bhrí sin, feabhas a chur ar MMP, laghdaítear damáiste ocsaídiúcháin mtDNA, próitéin, agus lipidí, cosc ​​​​a chur go héifeachtach ar damáiste ocsaídiúcháin mitochondrial agus apoptosis in vitro agus in vivo a laghdú, mar sin, aisiompaíonn sé athmhúnlú miócairdiach agus feabhsaíonn sé feidhm chroí. Ciallaíonn sé gur druga nua féideartha é ECH chun athmhúnlú miócairdiach agus HF a chosc.

I ngnáthchoinníollacha, déantar ROS mitochondrial a ghlanadh go príomha le MnSOD a dháileann i mitochondria agus a chosnaíonn i gcoinne damáiste ocsaídiúcháin mitochondrial. Laghdaíonn Ang II léiriú MnSOD de chardiomyocytes go suntasach agus spreagann sé hipertróf miócairdiach, áfach, d'fhéadfadh resveratrol léiriú MnSOD a mhéadú agus hipertróf miócairdiach a tharlódh le Ang II.36 a chosc. .37,38 I lucha cnagadh géine MnSOD sainiúil cairdiach, níorbh fhéidir ROS mitochondrial a ghlanadh agus méadaítear ROS i gcridomyocytes, ba chúis leis seo mífheidhm mitochondrial agus méadú cairdiach forásach, rud a d'eascair cliseadh croí sa deireadh.39 Sa staidéar reatha, deimhnímid go laghdaítear léiriú MnSOD go suntasach, rud a mhaolaítear le cóireáil ECH, agus dá bhrí sin, laghdaítear ROS mitochondrial agus cuirtear bac ar strus ocsaídiúcháin mitochondrial. Ciallaíonn sé go gcosnaíonn ECH cardiomyocytes ar dhamáiste ocsaídiúcháin trí léiriú MnSOD a uasrialáil, déanaimid iniúchadh breise ar na meicníochtaí móilíneacha is bun leis na héifeachtaí seo.

Tá léiriú MnSOD á rialú ag FOXO3a, ar fachtóir trascríobh é agus a cheanglaíonn i réigiún tionscnóra géine MnSOD agus mar thoradh air go gcuirtear tras-scríobh géine chun cinn.40 Is móilíneach in aghaidh an tsrutha de FOXO3a é SIRT1 agus is féidir leis FOXO3a a ghníomhachtú trí dhí-aicéitiliú. Tá ról lárnach ag ais chomharthaíochta SIRT1/FOXO3a/MnSOD i gcosaint ar strus ocsaídiúcháin i gcineálacha cineálacha cealla, cuireann gníomhachtú na haise comharthaíochta le estradiol bac ar strus ocsaídiúcháin agus cuireann sé an chosaint chairdiach24 i bhfeidhm; Cuireann gníomhachtú na haise comharthaíochta ag resveratrol bac ar bhás cille ocsaídiúcháin de bharr strus40; Seachas sin, cuireann angiotensin II cosc ​​ar chonair SIRT1/FoxO3a/MnSOD agus spreagann sé strus ocsaídiúcháin mitochondrial, damáiste mtDNA in osteoblasts, méadaíonn an staidéar reatha strus ocsaídiúcháin trí chosc ar léiriú MnSOD trí Chonair Sirt1/FoxO3a.42 Cinneann an staidéar reatha laghdaítear léiriú SIRT1, FoxO3a, agus MnSOD go léir go mór i bhfrancaigh HF agus tá ROS mitochondrial ardaithe agus feabhsaítear strus ocsaídiúcháin, áfach, déantar na hathruithe a aisiompú ag ECH. Léiríonn taighde nua go nascann ECH SIRT1 go díreach mar ligand agus go ndéanann sé coimpléasc le 9 nasc comhfhiúsach agus go rialaíonn sé slonn SIRT1 i gcealla néaracha suas. SIRT1 i gcáirdiomyocytes, uas-rialaíonn sé léiriú géine MnSOD trí FoxO3a agus cuireann sé cosc ​​ar ROS miteachondrial agus strus ocsaídiúcháin.

Is féidir le ischemia ainsealach fadtéarmach a bheith ina chúis le hibernation miócairdiach, is gnách go dtaispeánann na cealla miócairdiacha seo atá ag geimhriú caillteanas filiméid conarthacha, tá gráinníní glycogen iomarcacha sa chitosól, sarcoplasmic reticulum, agus cailltear feadáin transverse,43 freisin, tá neamhghnáchaíochtaí i méid agus cruth mitochondrial. , hipertróf miócairdiach imoibríoch agus fiobróis interstitial, atá tánaisteach do chaillteanas mióicítí.44 Thugamar faoi deara freisin na hathruithe thuas i bhfrancaigh HF inár staidéar, ach cuireann ECH faoiseamh suntasach ar na hathruithe seo, mar a thuairiscigh an staidéar is déanaí go bhféadfadh aisghabháil fheidhm chairdiach tar éis strus ischemic a bheith ina Gné de hibernation miócairdiach,45 tá an leibhéal glycogen miócairdiach a thomhas freisin, léiríonn na torthaí nach bhfuil aon difríocht shuntasach idir na trí ghrúpa, mar a thaispeántar i bhFíor 7J.

Braitheadh ​​​​an staidéar roimhe seo freisin geimhriú miócairdiach i múnla muice cliseadh croí neamh-ischaemic ag luascadh an bhalla saor LV le ard-minicíocht,46 toisc go bhfuil ról tábhachtach ag bac micrea-soithíoch i hibernation miócairdiach agus an mhífheidhm conarthach dá bharr, agus go bhfuil feabhas suntasach nuair a bhíonn an déantar bacainn mhicrea-shoithíoch a aisiompú le druga.47 Faoi láthair, is é conclúid roinnt staidéir go bhfuil teiripe athvascularization éifeachtach chun an miócairdiam a gheimhridh,43 trí úsáid a bhaint as staining HE agus Masson. de réir ECH, mar a thaispeántar i bhFíor 7A-H. Léirigh staidéir roimhe seo go n-imríonn comhdhúile nádúrtha eile, mar shampla eorna béite-glucan éifeachtaí cardioprotective trí léiriú MnSOD, 48,49, agus ardú MnSOD a bhaineann le dlús méadaithe ribeach miócairdiach agus léiriú VEGF. Rinneamar RT-PCR chun léiriú VEGF a bhrath, tá na sonraí comhsheasmhach le teacht ar staining histological, rud a chiallaíonn go bhféadfadh ECH angiogenesis a chur chun cinn agus dlús ribeach miócairdiach a mhéadú trí léiriú VEGF a rialáil, mar a thaispeántar i bhFíor 7I. Fuarthas amach sa staidéar reatha gur féidir le ECH ribeach miócairdiach agus arteriolar a chosaint agus a mhéadú trí chonair SIRTI/FOXO3a/MnSOD suas-rialaithe agus léiriú VEGF, rud a chuireann bac ar an miócairdiam geimhridh agus ag cur le feabhas a chur ar fheidhm an chroí.

Cistanche rannchuidíonnchunfeabhas a chur ar fheidhm croí.

Le haghaidh tuilleadh eolais, cliceáil anseo le do thoil.

Is fiú a thabhairt faoi deara, is eol go maith gur athrú paiteolaíoch tábhachtach é apoptosis cardiomyocyte ar chliseadh croí, agus deimhníonn an staidéar seo go deimhin go laghdaíonn líon mór cealla apoptotic i bhfrancaigh HF agus ECH go suntasach an apoptosis trí chonair SIRTI/FOXO3a/MnSOD a rialáil agus cosc strus ocsaídiúcháin mitochondrial, mar a luadh thuas.

Thar aon ní eile, aisiompaíonn ECH athmhúnlú miócairdiach agus feabhsaíonn sé feidhm chroí tríd an ais chomharthaíochta SIRT1/FoxO3a/MnSOD a uasrialáil, rud a chuireann cosc ​​ar strus ocsaídiúcháin miteachondrial agus ag laghdú miócairdiam geimhridh. Mar sin, moltar gur druga féideartha é ECH chun athmhúnlú miócairdiach agus HF a chosc nó a chóireáil.