Cothaíonn Dendrimer–tesaglitazar Comhchuingeach Athrú Feinitíopa Micriglia agus Feabhsaíonn sé Fagaicíotóis -amalóideach† Cuid 2

Measúnachtaí bitheolaíocha in vitro

Cultúr cille. Fuarthas líne chill mhicriglial murine BV2 ó Áis Cultúir Cille Ospidéal na Leanaí i Michigan.

Le blianta beaga anuas, fuair eolaithe amach go bhfuil dlúthbhaint ag cultúr na gceall le cuimhne an duine. Tá sé léirithe ag staidéir, trí staidéar a dhéanamh ar chultúr na gceall, gur féidir na meicníochtaí móilíneacha sa phróiseas cuimhne agus foghlama a aimsiú, rud a chuireann feabhas ar chumas cognaíocha agus cuimhne an duine.

Tagraíonn cultúr cille don phróiseas chun cealla bitheolaíocha a chur i meán cultúir ina bhfuil cothaithigh riachtanacha le fás agus atáirgeadh faoi choinníollacha in vitro. Is iad cealla na haonaid bhunúsacha den saol, agus cuireann cultúr na gceall ardán ar fáil d'eolaithe chun staidéar a dhéanamh ar iompar cille agus ar ghníomhaíochtaí saoil. Trí staidéar a dhéanamh ar chealla, d'aimsigh eolaithe go leor faisnéise faoi fhás néaróin agus naisc synaptic. Ní hamháin go gcuideoidh na torthaí seo le daoine tuiscint níos fearr a fháil ar an gcaoi a n-oibríonn an inchinn ach cabhraíonn siad freisin le cóireálacha agus drugaí nua a fhorbairt.

Léiríonn taighde le blianta beaga anuas go bhfuil dlúthbhaint ag cultúr na gceall le cuimhne an duine freisin. Fuair ​​​​eolaithe amach go dteastaíonn go leor rialáil mhóilíneach agus seachadadh comhartha chun cuimhne an duine a fhoirmiú agus a chothabháil. Tá go leor cosúlachtaí idir na meicníochtaí seachadta agus rialaithe comhartha seo agus na meicníochtaí i gcultúr na gceall. Trí staidéar a dhéanamh ar na meicníochtaí seachadta comhartha agus rialála i gcultúr na gceall, is féidir le heolaithe meicníochtaí cuimhne agus foghlama an duine a thuiscint níos fearr.

Ina theannta sin, léirigh roinnt staidéir freisin gur féidir le cultúr na gceall cuimhne an duine agus cumas foghlama a fheabhsú ar bhealaí áirithe. Mar shampla, trí úsáid a bhaint as modh ar a dtugtar "spreagadh leictreach", is féidir gníomhaíocht na gceall agus an nasc idir néaróin a spreagadh, rud a fheabhsóidh cumas cognaíocha an duine agus éifeachtaí foghlama. Cé go bhfuil an modh seo fós sa chéim taighde saotharlainne, táthar ag súil go mbeidh sé ina mhodh oiliúna cognaíocha nua sa todhchaí.

Go hachomair, tá dlúthbhaint idir cultúr na gceall agus cuimhne an duine. Trí staidéar a dhéanamh ar chealla, is féidir linn meicníocht chognaíoch agus cuimhne an duine a thuiscint níos fearr agus cabhrú freisin le modhanna cóireála nua agus modhanna oiliúna cognaíocha a fhorbairt. Bímis ag tnúth le rannchuidiú na teicneolaíochta cultúir cille don chine daonna sa todhchaí! Is féidir a fheiceáil go gcaithfimid cuimhne a fheabhsú, agus is féidir le Cistanche cuimhne a fheabhsú go suntasach toisc go bhfuil éifeachtaí frithocsaídeacha, frith-athlastacha agus frith-aosaithe ag Cistanche, a d'fhéadfadh cabhrú le ocsaídiú agus imoibrithe athlastacha san inchinn a laghdú, rud a chosnaíonn sláinte an néarchóras. Ina theannta sin, is féidir le Cistanche fás agus deisiú na gcealla néaróige a chur chun cinn, rud a fheabhsaíonn nascacht agus feidhm líonraí néaracha. Is féidir leis na héifeachtaí seo cabhrú le cuimhne, cumas foghlama, agus luas smaointeoireachta a fheabhsú, agus féadann siad cosc ​​a chur ar mhífheidhm chognaíoch agus galair neurodegenerative freisin.

Cliceáil fios forlíontaí chun cuimhne a threisiú

Saothraíodh cealla BV2 i meán EaglesMedium Athraithe Dulbecco (DMEM) le séiream féatais bhó-ainmhithe 10% (HI FBS) agus 1% peinicillin/streiptimícin (P/S) ag céim 37 agus 5% CO2.

Nuair a shroich na cealla comhlí sa fhleascán saothraithe, cuireadh na cealla isteach i bhfleascán nua ag baint úsáide as 0.05% trypsin-eitiléinediamine aigéad tetra-aicéiteach (EDTA). Maidir leis na turgnaimh, cuireadh cealla BV2 i DMEM le 5% HIFBS agus 1% P/S. 24-48 uair ina dhiaidh sin, spreagadh na cealla le 100 ng ml−1 (300 ml-1) de LPS ar feadh 3 uair an chloig chun ligean do na cealla feinitíopa pro-athlastach (M1) a iontráil chun an timpeallacht néar-athlastach atá i láthair i go leor galair néareolaíocha a insamhail.

Ansin rinneadh na cealla a chomhchóireáil le LPS agus le Tesa saor in aisce nó le D-Tesa ag tiúchain éagsúla do 48 lámh ansin bailíodh an comhshnaidhm agus na cealla le haghaidh próiseála. Cealla nár chóireáil le LPS (Gan LPS) riamh agus cealla cóireáilte le LPS-amháin i gcónaí (LPS-amháin) a bhí mar na grúpaí rialaithe. Rinneadh réitigh stoic saor in aisce Tesa agus D-Tesa a steiriliú agus úsáid á baint as scagairí polai(éitear sulfóin) 0.2 µm.

Bhí D-Tesa intuaslagtha sna meáin chumarsáide cille. Rinneadh Tesa a thuaslagadh trí úsáid a bhaint as démheitiolsulfocsaíd (DMSO) ag níos lú ná 0.1% (v/v) tiúchan deiridh.Cítotocsaineacht, measúnacht ar ocsaíd nítreach, agus TNF-ELISA. Maidir le measúnacht cíteatocsaineachta, déileáladh le cealla mar a thuairiscítear thuas i96-pláta tobair, agus ansin rinneadh cítotocsaineacht Tesa agus D-Tesa in aisce a mheas le measúnacht MTT de réir threoracha an déantóra.

Maidir leis an measúnú ar ocsaíd nítreach, déileáladh le cealla mar a thuairiscítear thuas i 12-phlátaí toibreacha, agus ansin bailíodh forlíonta ó chealla cóireáilte agus rinneadh leibhéil ocsaíd nítreach a chainníochtú láithreach trí phrótacal an déantóra don Imoibrí Gries a leanúint.

Maidir leis an TNF-ELISA, déileáladh le cealla mar a thuairiscítear thuas i 12-phlátaí toibreacha, agus ansin bailíodh agus stóráladh forlíonta ó chealla cóireáilte ag −80 céim go dtí go raibh siad réidh le próiseáil bhreise.

Leáigh na samplaí ansin ar oighear agus ritheadh ​​anTNF-ELISA trí phrótacal an déantóra a leanúint. Le haghaidh na staidéar seo, rinneadh sonrú agus vortexed D-Tesa agus Tesa saor araon go dtí go raibh siad araon intuaslagtha go hiomlán. Chun Tesa saor a thuaslagadh, rinneadh é a thuaslagadh i DMSO ar dtús sular chaolaíodh é, áit a raibh an tiúchan deiridh DMSO faoi 0.1%(v/v) do gach sampla Tesa saor in aisce.

Ós rud é go raibh D-Tesa intuaslagtha i meáin cheallacha, níor cuireadh DMSO leis na samplaí sin. Maidir le staidéir allin vitro, cuireadh méid coibhéiseach de dhrugaí saor in aisce nó comhchuingeach i bhfeidhm ar chealla sna grúpaí saor in aisce Tesa agus D-Tesa araon.

PCR fíor-ama cainníochtúil (qRT-PCR). Déileáladh le cealla mar a thuairiscítear thuas i 12-plátaí toibreacha, agus tar éis an comhshamhail a bhailiú, bailíodh cealla in Imoibrí Invitrogen™ TRIzol™ (ó Fisher Scientific) agus asbhaineadh RNA trí phrótacal an mhonaróra a leanúint. Rinneadh anailís ar thiúchan agus ar íonacht an RNA a bhí mar thoradh air ag baint úsáide as Nanodrop.

Tiontaíodh méideanna coibhéiseacha RNA ó gach sampla go cDNA trí phrótacal an déantóra maidir le Trealamh Ard-AcmhainnecDNA Trascríobh Droim ar ais (ó Applied Biosystems le Thermo Fisher Scientific) a leanúint.

Baineadh úsáid as an cDNA a tháinig as an anailís forqRT-PCR ag baint úsáide as an imoibrí glas FAST-SYBR agus ag leanúint phrótacal an déantóra. Ríomh an meaisín luachanna Ct agus rinneadh anailís ar na sonraí ag baint úsáide as an modh 2−ΔΔCt.

I gcás gach marcóra difriúil, ríomhadh an luach ΔΔCt tríd an ΔCt don ghrúpa No LPS a dhealú ón ΔCt do gach sampla. Ba é an luach ΔCt an luach Ct don ghéine úis lúide an Ct do GAPDH do gach sampla tugtha.

Nuair a ríomhadh an 2−ΔΔCt do gach grúpa, normalaíodh iad go léir ansin go dtí an grúpa No LPS, rud a thug leibhéal slonn comhchoibhneasta 1.0 don ghrúpa No LPS do gach marcóir. Na seichimh primer ar aghaidh agus siar a úsáidtear forqRT -PCR taispeántar sa tábla thíos. Tá gach sraith scríofa ó 5′→3′.

Ina theannta sin, ceannaíodh priméirí atá ar fáil go tráchtála ó BIORAD le haghaidh iNOS/Nos2 (qmmuCID0023087), TLR4 (qmmuCID0023548), CD206/Mrc1 (qmmuCID0012670), TGF- 1 (qmmuCID0017320), TLR4 (qmmuCID0023548), CD206/Mrc1 (qmmuCID0012670),TGF- 1 (qmmuCID0017320), (qmmuCID0017320), agus 6404), agus PPAR (qmmucid0018821). Measúnacht phagocytosis.

Cinneadh an tionchar a bhí ag onfagocytosis saor in aisce Tesa agus D-Tesa de -amyloid ag baint úsáide as modh a tuairiscíodh roimhe seo.47 Go hachomair, díscaoileadh Plúr HiLyte™ 488-lipéadaithe -amyloid1–42 (ó Anaspec Inc.) i DMSO (tiúchan deiridh DMSO). faoi ​​0.5% (v/v)) agus caolaithe go 5 µg ml−1 i PBS.

Tar éis na cealla a chóireáil le Tesa agus D-Tesa leis an scéim cóireála a leagtar amach thuas, cuireadh an tuaslagán -amyloid i bhfeidhm ar na cealla ar feadh 2 uair an chloig. Ansin, nitear na cealla faoi thrí le Tuaslagán Cothromaithe Salann Hank le caitíní défhiúsacha (cailciam agus maignéisiam), a bhaintear as na toibreacha ag baint úsáide as trypsin, agus athchóiríodh i maolán FACS (ó Invitrogen).

Stóráladh samplaí ar oighear, agus ritheadh ​​iad láithreach ar cítoiméadracht sreabhadh Sony Cell Sorter SH800, agus rinneadh anailís ar na sonraí leis na bogearraí gaolmhara.

Socraíodh an geata ag baint úsáide as cealla nach bhfuil cóireáilte le fluaraiseacha -amyloid, agus is iad na torthaí a thaispeántar ná an céatadán de chealla ó gach grúpa a léirigh fluaraiseacht os cionn an fhluaraiseachta chúlra.

Tuairiscíodh freisin an meándéine fluaraiseachta (MFA) de HiLyte™ 488-lipéadaithe -amyloid do gach grúpa. Rinneadh an mheasúnacht seo i ndúblach.Staitisticí. Tá na sonraí go léir a thaispeántar mar thoradh ar thrí thurgnamh ar leith, gach ceann déanta i dtrí thurgnamh mura sonraítear a mhalairt. Baineadh úsáid as GraphPad Prism 5 agus Microsoft Excel chun staitisticí a dhéanamh.

Rinneadh trialacha t-earball péireáilte na Mac Léinn, le BonferroniCorrection. Baineadh úsáid as tástáil Grubbs chun asluiteacha a chinneadh. Baineadh úsáid as GraphPad Prism 5 do Windows chun sonraí a bhreacadh (San Diego, CA). Is iad na sonraí a thaispeántar ná an meán + SEM.

Torthaí agus plé

Sintéis agus tréithriú D-Tesa

Chun seachadadh spriocdhírithe intracellular chuig cealla microglial gníomhachtaithe san inchinn a cheadú, rinneadh Tesa a chomhchuingeach go comhfhiúsach ar dhromchla G4-PAMAM-OH le naisc eistir inscortha idir an druga agus an nascóir dendrimer (Fíor 1).

Sa chéad chéim, imoibríodh Tesa (1) le haisíd tetramethylene glycol (TEG-azide)(2) chun Tesa-TEG-azide (3) a tháirgeadh, a bhfuil nasc eistear aige idir an druga agus an nascóir (Fíor 1A).

Léirigh an HPLC de chomhdhúil(3) am coinneála de 13.4 nóiméad agus íonacht níos mó ná 99% (Fíor S1B†). Léirigh mais-speictream (3) buaicphointe 610.13 [M + 1]+ a fhreagraíonn do mheáchan móilíneach Tesa-TEG-azide, rud a dheimhnigh tuilleadh foirmiú an táirge (Fíor S2†). Ar leithligh, imoibríodh G4-PAMAM-OH dendrimer (4) le 5-aigéad heicseanóch ag baint úsáide as imoibriú eistearúcháin chun D-YNE (5) (Fíor 1B) a tháirgeadh.

Ar deireadh, d'imoibrigh Tesa-TEG-azide (3) agusD-YNE (5) ag imoibriú cliceáil an-éifeachtach ar chiochadailiúchán copar-catalyzedazide-ailcéin (CuAAC) le táirgeadhD-Tesa (6) (Fíor 1B).48 An 1H NMR. dheimhnigh sintéis rathúil gach idirmheánach agus an táirge deiridh; Chuimsigh D-Tesa (6) na beanna tréithiúla de phrótóin dendrimer agus de nascóirí drugaí a léirigh sintéis rathúil D-Tesa (Fíor 2A).

NMR den chomhchuingeach D-Tesa deiridh le fios go raibh meán de dheich móilín Tesa ceangailte le eachdendrimer. Dhearbhaigh HPLC comhchuingeach comhfhiúsach rathúil, mar léirigh D-Tesa aistriú ón D-YNE agus TesaTEG-azide (Fíor 2B agus S1†).

Tá tuaslagthacht lag uiscí ag Tesa, a mheastar a bheith 0.0035 mg mL−1.49 D'fheabhsaigh comhchuingeach dendrimer Tesa onhydroxyl dendrimer a intuaslagthacht uisce roinnt ord méide ón meastachán seo. Bhí tuaslagthacht in uisce ag D-Tesa ag 22 mg ml -1, agus ós rud é go gcuimsíonn Tesa ∼19% de mhais D-Tesa, tuaslagadh coibhéis 4.2 mg ml-1 de Tesa (Fíor 3 A).

Méadaíonn an tuaslagthacht mhéadaithe a chuireann an dendrimer ar fáil éasca le foirmiú agus cuireann sé deireadh leis an ngá atá le heasnaimh a d'fhéadfadh a bheith tocsaineach.50 Tá na tairbhí seo go léir sa bhreis ar chumas níos fearr an dendrimer drugaí saor in aisce a sheachadadh ar fud an BBB go microglia in vivo, agus d'fhéadfadh laghdú a dhéanamh ar an méid. dáileogachta chun éifeacht theiripeach a bhaint amach.18–28 Ar deireadh, bhí meánmhéid de 7.75 ± 0.29 nm (Fíor S3†) ag D-Tesa, agus poitéinseal zeta de 2.86 ± 0.38 mV (Tomhas N=5 agus N=3, faoi seach).

Scaoileadh drugaí

Dhearamar D-Tesa chun Tesa a scaoileadh go hincheallach laistigh de thimpeallacht íseal pH agus ardchruinnithe eistearáis inendosomes/líseasóim de mhicriglia gníomhachtaithe. Thuairiscigh muid roimhe seo go n-iontrálann dendrimers PAMAM cealla go príomha trí endocytosis sreabhán-chéim, agus go n-aistríonn na feisicíní ina bhfuil na comhchuingeacha ina lísisóm.51

ghoradh muid D-Tesa ag 37 céim i maolán chiotráite sóidiam (pH 5.5) i láithreacht eistiráis chun aithris a dhéanamh ar choinníollacha líseasóim, mar a rinneadh roimhe seo. ] maolán, pH 7.4).

Faoi choinníollacha plasma, ní scaoiltear ach thart ar 1.5% de Tesa tar éis 48 uair an chloig, agus scaoiltear níos lú ná 20% de Tesa faoi lá 25, rud a thugann le tuiscint go bhfuil cobhsaíocht plasma an chomhchuingeach (Fíor 3B).

Faoi choinníollacha líseasómacha, scaoiltear thart ar 60% de Tesa ó D-Tesa laistigh den chéad 48 uair an chloig, agus laistigh de 19 lá, scaoiltear beagnach 100% de Tesa. Léiríonn na torthaí seo go soláthraíonn D-Tesa scaoileadh leanúnach spreagtha den druga saor in aisce don chéad choicís a gortar faoi choinníollacha líseasómacha atá ábhartha go fiseolaíoch.

Ina theannta sin, tá an scaoileadh íosta Tesa i gcoinníollacha plasma insamhladh (grúpa pH 7.4) thar na chéad 48 uair an chloig suntasach, ós rud é gurb é seo an t-am cúrsaíochta tipiciúil G4-PAMAM-OH roimh imréiteach duán, is dócha go scaoilfear Tesa sominimal ón. comhchuingeacha sula sroicheann siad an microglia.24

Laghdaigh D-Tesa léiriú marcóirí M1 agus mhéadaigh marcóirí M2

Chun cumas D-Tesa a mheas chun aistriú feinitíopa M1 go M2 a spreagadh, rinneamar measúnú ar chumas D-Tesa slonn na marcóirí M1 agus M2 in vitro a athrú ag baint úsáide as líne chill mhicriglial murine (BV2).

Cruthaíodh cealla BV2 trí chealla microglial murine a mharú agus léiríodh gur cealla microglia eile oiriúnacha iad chun staidéar a dhéanamh ar an bhfreagra athlastach microglial. ng ml−1 (300 endotoxinuit (AE) in aghaidh an ml) LPS ar feadh 3 huaire.

Ansin, rinneamar comhchóireáil ar na cealla le LPS agus le Tesa nó D-Tesa saor in aisce ar feadh 48 uair an chloig, agus ansin bhailigh muid na samplaí. Chuireamar cóireáil ar na cealla ag tiúchain 1.5, 15, agus 150 µM saor in aisce Tesa nó D-Tesa, ar bhonn coibhéiseach drugaí.

Léirigh an measúnú MTT nach raibh Tesaor D-Tesa saor in aisce ag na tiúchain seo ina chúis le cíteatocsaineacht (Fíor S4†). Rinneadh staidéar tosaigh ar aimsiú dáileog le Tesaand D-Tesa chun an dáileog is éifeachtaí de Tesa agusD-Tesa a chinneadh.

Ní athraíonn cóireáil le Tesa agus D-Tesadid saor ó 1.5 agus 15 µM an secretion ocsaíd nítreach nó TNF- , mar a chinneann an t-imoibrí Griess agus TNF-ELISA, faoi seach (Fíor S5†). Bunaithe ar na torthaí seo, ní dhearnamar anailís ar na tiúchain níos ísle seo inár dtástálacha qRT-PCR.

I go leor galair néar-mheathlúcháin, is é príomhfheidhm néar-tocsaineach amháin de pro-athlastach, M1 microglia a n-rún de speicis ocsaigine imoibríocha (m.sh. ocsaíd nítreach) a mharaíonn néaróin go díreach.57,58 Ina dhiaidh sin, tá sé curtha in iúl gurb é straitéis theiripeach féideartha amháin ná cruthú na móilíní seo a laghdú.

Rinneamar measúnú ar chumas D-Tesa an éifeacht seo a bhaint amach. Tar éis spreagadh LPS, laghdaigh D-Tesa ocsaíd nítreach rúnda agus leibhéil mRNA ocsaíd nítreach induchtaithe (iNOS) 3.7-huaire (p < 0.0001) agus 2-huaire (p {{). 7}}.011), faoi seach, i gcomparáid le cealla cóireáilte ach amháin le LPS (LPS-amháin) (Fíor 4A agus B).

Ar an láimh eile, laghdaigh saor Tesa an ocsaíd secretednitric níos measartha (1.4-huaire, p=0.004) agus níor tháinig laghdú suntasach ar an slonn iNOS mRNA (Fíor 4A agus B mar thoradh air). ).

Bhí D-Tesa i bhfad níos éifeachtaí ná Tesain saor in aisce a shochtadh secretion ocsaíd nítreach. Ansin, ag brath ar ifmicroglia atá i feinitíopa M1 nó M2, microglia upregulate ceachtar iNOS nó Arginase 1 (Arg1) a mheitibiliú L-arginine toproduce ocsaíd nítreach as a bhfreagra M1 pataigin-marú, orornithine agus úiré le haghaidh an freagra leighis fhoirceannadh M2, faoi seach. 59

Ag teacht lena íosrialáil ar iNOS, mhéadaigh D-Tesaincéad leibhéil mRNA Arg1 2-huaire (p=0.011) i gcomparáid leis an rialú LPS-amháin, cé nár mhéadaigh Tesa saor in aisce slonn go suntasach (p=0 .40) (Fíor 4C).

D'aistrigh D-Tesa, agus go pointe níos lú saor in aisce Tesa, an microglia ó nítreachocsaíd cíteatocsaineach a scaoileadh go L-arginine a mheitibiú le haghaidh leighis créachta, a bhfuil impleachtaí aige maidir le laghdú agus féidearthacht aisiompú a dhéanamh ar an néarthocsaineacht de bharr microglia i néar-mhíothlú.5–7,10

Is trí obair roimhe seo a thaispeáin ligand nádúrtha PPAR (15-deoxy-Δ12,{4}}prostaglandin J2) laghdú ar iNOS agus léiriú ocsaíd nítreach agus rúndacht i LPS cóireáilte is ea an íosrialáil iNOS agus leibhéil ocsaíd nítreach secreted le cóireáil D-Tesa. microglia bunscoile.60

Is cítocíní iad IL-10, IL-4, agus TGF- 1 a shúdaítear trí mhicroglia M2 a ghníomhaíonn go malartach agus is féidir leo timpeallacht néarchosanta, fhrith-athlastach a chothú san inchinn.58,61,62I dTreo sa chríoch seo, mhéadaigh D-Tesa slonn IL-105.5-fold (p=0.011) agus IL-4 8.2-fold (p { {15}}.013) i gcomparáid leis an rialú LPS-amháin (Fíor 4D agus E).

Níor tháinig méadú suntasach ar leibhéil IL-10 nó IL{-4 in Free Tesa, cé go raibh na meáin 1.7-huaire (p=0.066) agus 2.{{7} }huaire (p=0.11)níos airde, faoi seach, do mhicriglia atá cóireáilte le Tesa i gcomparáid le rialuithe LPS amháin (Fíor 4D agus E). Ina theannta sin, mhéadaigh D-Tesa slonn TGF- 1 2.3-fold (p=0.015) agus saor in aisce níor athraigh Tesa slonn go suntasach (Fíor 4F).

Mar sin, spreagann D-Tesa an rún de chitocíní frith-athlastacha tar éis cóireáil LPS ar mhicroglia, ar féidir leis an timpeallacht neurotocsaineach, pro-athlastach atá i láthair i ngalar néar-mheathlúcháin a mhaolú.5–7,10

Slonn D-Tesa de mharcóirí fochineál M2-

Is marcóirí sonracha iad CD206, Ccl1, agus TLR8 le haghaidh na bhfochineálacha M2a, M2b, agus M2c microglia, faoi seach.58 D-Tesa CD2 athrialaithe06 slonn 4.{{10 }}huaire (p < 0.001), Ccl1 3.5-huaire (p < 0.005), agus TLR8 5-fold (p < 0.01), cé nár mhéadaigh saor Tesa slonn na ceann ar bith de na trí mharcóir seo (Fíor 5A–C).

Léiríonn na sonraí seo go léiríonn microglia cóireáilte le D-Tesa upregulation suntasach marcóirí de na trí fhochineál M2, a aontaíonn leis an tuiscint go bhfuil microglia feinitíopa plaisteach agus nach dénártha.63-65

Déanann an ainmníocht M1/M2 róshimpliú ar an gcastacht is féidir le microglia a bheith ann i speictream stát gníomhachtaithe; feadh an chontanam seo, tá trí fheinitíopa M2 ar leith (M2a, M2b, agus M2c) tréithrithe, agus spreagann D-Tesa léiriú marcóirí i gcomhréir le gach ceann de na stáit seo. próitéiní trí upregulating scavenger gabhdóirí, deisiú fíocháin, agus frith-athlastacha gníomhartha.

Tá microglia M2b cosúil le M1 microglia sa mhéid is go gcuireann siad IL-1 , TNF- , agus IL-6 in iúl; áfach, tá M2b éagsúil ó M1 microglia sa mhéid is go gcuireann siad IL-10 in iúl ag ardleibhéil agus go laghdaítear slonn iNOS. Spreagann macrophages M2b agus microglia T-chealla Th2, rud a léiríonn ceann de theoiric M2b chun freagra frith-athlastach a spreagadh.

Tá baint ag M2cmicroglia le cneasaithe créachta, athmhúnlú fíocháin, forlámhú iarainn, agus gníomhachtú STAT3 a laghdaíonn comharthaíocht proinflammatory.58,61,63,66 Spreagann gníomhaíocht PPAR Tesa lúb ar aghaidh as a dtagann léiriú méadaithe ar PPAR agus a phróitéin comharthaíochta in aghaidh an tsrutha (STAT6), atá ina marcóirí M2a araon.58D-Tesa mhéadaigh slonn PPAR 2.3-fold (p=0.0036)agus STAT6 3.4- fillte (p < 0.001), agus mhéadaigh Tesa saor in aisce STAT6 1.8-huaire (p=0.011) gan méadú suntasach ar slonn PPAR (1.58-méadú fillte, p=0.17) (Fíor 5D agus E).

Mar thoradh ar léiriú méadaithe STAT6 agus PPAR tá táirgeadh géine antiinflammatory agus cosc ​​ar chomharthaí pro-athlastacha trí ghníomhaíocht NF-κB a chosc. Ós rud é gur féidir M2a microglia a tharlú trí chóireáil a dhéanamh ar mhicroglia le IL-4, a chomharthaíonn trí STAT6 agus PPAR , is féidir polarú feedforwardM2a a bheith mar thoradh ar uasrialáil na bpróitéiní comharthaíochta iartheachtacha seo.68

Inár dtástálacha, mhéadaigh gníomhachtú LPS leibhéil IL-6, TNF- , agus IL{-1, agus d'uasghrádaigh cóireáil le D-Tesa léiriú na gcítocíní seo tuilleadh (Fíor S6A–D†), rud is dócha dueto D-Tesa aslú an feinitíopa M2b (Fíor 5B).

Mhéadaigh Free Tesain an slonn IL-6 agus níor athraigh slonn TNF- agus IL-1 go suntasach (Fíor S6A–D†). Cé go bhfuil na cytokines secreted ag M1 microglia, tá M2b microglia alsoexpress na cítocíní.58,61 CD86 marcóir ar an dá M1 agus M2b microglia, agus méadaítear le cóireáil D-Tesa (Fig. S6E†).

Ina theannta sin, is teaghlach de phróitéiní infhéitheacha é an suppressor de chomharthaíocht chitocine (SOCS) a rialaíonn polarú feinitíopach an mhicriglia trí chonairí comharthaíochta iolracha arna ngníomhú ag cítocíní a shochtadh.69 Ball amháin den teaghlach seo is ea SOCS1, agus tá sé léirithe go gcuireann sé bac ar LPS/TLR4 comharthaíocht idirghabhála NF-κB agus JAK2, rud a laghdódh an méid TNF- , IL-1 , agus IL-6 a scaoiltear le micreaglia M1 tríd an gcosán LPS/TLR4.

Déanann D-Tesa slonn SOCS1 a uasghrádú i gcomparáid le rialú LPS-amháin (Fíor S6F†), rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh an méadú ar IL-6, TNF- agus IL-1 a thaispeánann D-Tesac a bheith mar gheall ar ionduchtú an feinitíopa M2b agus ní trí fheabhas a chur ar an bhfeinitíopa LPS/TLR4, M1-aschuireann sé.

Ina theannta sin, comharthaí LPS trí TLR4 agus chun gníomhachtú iomarcach cheallacha a chosc, tá meicníocht aiseolais diúltach ag microglia trína n-eascraíonn gníomhachtú TLR4 le léiriú laghdaithe TLR4.70

Mhéadaigh cóireáil le Tesa saor in aisce agus D-Tesa leibhéil TLR4 3.6-huaire (p < 0.001) agus 3.7-huaire (p < 0.001), faoi seach (Fíor 5F), ag tabhairt le tuiscint gur athraigh Tesa agus D-Tesa an cosán comharthaíochta aiseolais diúltach tipiciúilLPS/TRL4.

For more information:1950477648nn@gmail.com