Spreagann Glicóisídí Feinileatánóideach Cistanche Tubulosa Apoptosis i gCealla Eca-109 Tríd an gCosán atá ag brath ar Mhitochondria
Mar 06, 2022
Teagmháil: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Ríomhphost:audrey.hu@wecistanche.com
CHANGSHUANG FU , JINYU LI , ADILA AIPIRE , LIJIE XIA , YI Yang , QIUYAN CHEN , JIE LV , XINHUI WANG agus JINYAO LI
Teibí
Cistanche tubulosatá feidhmeanna bitheolaíocha éagsúla aige. Sa staidéar reatha, rinneadh imscrúdú ar éifeacht antitumor na gliocóisídí feinileatánóideach intuaslagtha in uisce de C. tubulosa (CTPG-W) ar ailse esophageal. Cóireáladh cealla Eca-109 le CTPG-W agus tomhaiseadh inmharthanacht na gceall le measúnacht MTT. Rinneadh anailís ar an apoptosis, timthriall cille, poitéinseal membrane mitochondrial (Δψm), agus speicis ocsaigin imoibríoch ag cíteiméadracht sreafa. Braitheadh leibhéil na bpróitéiní i gconairí apoptotic le hanailís blotála an iarthair. Cinneadh gur laghdaigh CTPG-W inmharthanacht chealla Eca-109 go suntasach trí ionduchtú apoptóis agus gabháil timthriall cille. Tar éis cóireála CTPG-W, tháinig laghdú suntasach ar an Δψm de Eca-109, a bhaineann leis na leibhéil uasrialaithe de linfoma B-chealla-2 (Bcl-2) a bhaineann le X agus leibhéil ísrialaithe de Bcl-2. Mar thoradh air sin, méadaíodh na leibhéil cíteochrome c agus c-Meitheamh NH{2-cineasa críochfoirt, rud a d'uasrialáil na leibhéil polaiméire scoilte (ADP-ribose) agus scoilte-caspase-3, {{18} } agus -9, ach ní caspase-8. Dá réir sin, léirigh leibhéil na speiceas ocsaigine imoibríoch i gcealla Eca{-109 athruithe suntasacha. Thug na torthaí seo le fios gur spreag CTPG-W apoptosis de chealla Eca{-109 trí chonair chleithiúnaí miteachondrial.
Réamhrá
Tá ailse esophageal ar cheann de na cineálacha ailse is coitianta leis an 11ú ráta galrachta is airde agus an 6ú ráta mortlaíochta is airde ar fud an domhain agus ba chúis leis ~439,{3}} básmhaireacht in 2015 (1). Athraíonn minicíocht na hailse esophageal go háirithe i measc réigiúin éagsúla, le hoirthear na hÁise agus oirthear agus deisceart na hAfraice ag taispeáint na rátaí is airde minicíochta agus iarthar na hAfraice ag taispeáint na rátaí is ísle in 2012 (1,2). Sa tSín, b'ionann na cásanna ailse esophageal measta agus básmhaireacht 477,000 agus 375,000, faoi seach, in 2015 (3). Cé gur tháinig laghdú ar ráta galrachta ailse esophageal i dtíortha innéacs sochdhéimeagrafach lár agus ard-mheán idir 2005 agus 2015, tá an ráta mortlaíochta fós ard mar gheall ar an droch-prognóis (1,4). Baineadh úsáid as an teaglaim de resection máinliachta le ceimiteiripe nó radaiteiripe chun ailse esophageal a chóireáil, áfach, tuairiscíodh gur fhan an ráta marthanais 5-bliana idir 2003 agus 2014.<20% in="" china,="" the="" usa,="" and="" europe="" (4,5).="" for="" these="" reasons,="" it="" is="" urgent="" to="" develop="" novel="" therapeutic="" agents="" to="" treat="" esophageal="">
Baineadh úsáid as leigheas luibhe traidisiúnta Síneach (CHM) chun cineálacha éagsúla ailse a chóireáil, lena n-áirítear ailse scamhóg neamh-bheag cille (6), ailse cholaireicteach (7), carcinoma hepatocellular (8). Le déanaí, thuairiscigh na trialacha cliniciúla gur léirigh an teaglaim de CHM le ceimiteiripe nó radaiteiripe, ní hamháin go raibh roinnt buntáistí ann maidir le cáilíocht na beatha agus go laghdaigh sé fo-iarsmaí de bharr ceimiteiripe nó radaiteiripe (9,10), ach gur fheabhsaigh sé ráta marthanais na n-othar freisin. le scamhóg cille neamh-bheag, ae, gastric, cholaireicteach, nasopharyngeal nó ailse cheirbheacsach (9). Mar sin féin, tá fianaise contrártha ann maidir le héifeachtúlacht na cóireála CHM ar ailse esophageal (10,11). Chinn staidéir iomadúla go bhféadfadh roinnt leigheasanna nó comhpháirteanna luibhe bac a chur ar fhás cealla ailse esophageal in vitro agus in vivo, lena n-áirítear Andrographis paniculata (12,13), Daikenchuto (14), icariin (15), Rosa Roxburghii Tratt, agus Fagopyrum Cymosum (16), Jaridonin (17), Marsdenia tenacissima (18), OP16 (úrscéal ent-kaurene diterpenoid) (19), Qigasan (20) agus decoction Tonglian (21). Is cineál CHM é Cistanche agus feidhmíonn sé feidhmeanna bitheolaíocha éagsúla, lena n-áirítear frith-ocsaídiú, frith-athlasadh, agus neuroprotection (22,23). Léirigh ár staidéar roimhe seo go bhfuilGlicóisídí feinileatánóideach cistanche tubulosa(CTPG) d’fhéadfadh fás na gcealla meileanoma B16-F10 in vitro agus in vivo a chosc (24). Mar sin féin, cuireann droch-tuaslagthacht uisce CTPG a úsáideadh roimhe seo teorainn le forbairt drugaí (24). Dá bhrí sin, baineadh úsáid as CTPG intuaslagtha in uisce (CTPG-W) agus rinneadh imscrúdú ar an éifeacht antitumor ar chealla ailse esophageal (Eca-109). Cinneadh go bhféadfadh CTPG-W bac a chur ar inmharthanacht chealla Eca-109 go dáileog-spleách trí ionduchtú apoptóis trí chonair chleithiúnaí miteachondrial.
Ábhair agus modhanna Ainmhithe.
Ceannaíodh lucha baineann C57BL/6 (6-8 seachtainí, ~25 g) ó Ionad Taighde Ainmhithe Saotharlainne Beijing (Beijing, an tSín) agus iad lonnaithe sa teocht-rialaithe (25˚C), solas-timthriallta (12/ 12) Áis Ainmhithe Ollscoil Xinjiang (Urumqi, an tSín). Fuair gach ainmhí uisce agus bia saor ó phataigin.
Líne cille agus cultúr. Caomhnaíodh an líne ceall carcanóma esophageal daonna (Eca-109) ag Príomh-Saotharlann Acmhainní Bitheolaíochta agus Innealtóireachta Géiniteach Xinjiang (Coláiste na hEolaíochta Beatha agus na Teicneolaíochta, Ollscoil Xinjiang, Urumqi, an tSín) agus saothraíodh í in RPMI{{1} } mheán (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, SAM) arna fhorlíonadh le serum bó féatais féatais 10 faoin gcéad (FBS; MRC, EN MOASAI Biological Technology Co., Ltd, Jiangsu, an tSín), 1 faoin gcéad L -glútaimín (100 mM), peinicillin 100 U/ml agus streiptimícin 100 µg/ml ag 37˚C in atmaisféar humidithe ina bhfuil 5 faoin gcéad CO2.
Crómatagrafaíocht leacht ardfheidhmíochta (HPLC). Ceannaíodh CTPG-W (cat. uimh. SGJG20170410) ó Shanghai Upbio Tech Co., Ltd. (Shanghai, an tSín). Bhí na comhdhúile móra CTPG cáilithe agus cainníochtaithe ag HPLC de réir ár staidéar roimhe seo (24). Go hachomair, rinneadh HPLC ar Cholún ZORBAX SB-C18 (250x4.6 mm; 5 µm) ag 30˚C agus eluted le tuaslagán d'aigéad formach 0.2 faoin gcéad agus grádán meatánóil ag tosú ag 23 faoin gcéad, mar a cuireadh 1 ml gach nóiméad. ar feadh 45 nóiméad go dtí go sroichfidh siad 31 faoin gcéad . Instealladh agus aimsíodh sampla 10 µl ag 330 nm. Ceannaíodh an caighdeán echinacoside ó Shanghai Baoban Biotech Co., Ltd (Shanghai, an tSín), agus ceannaíodh an caighdeán acteoside ó Sigma-Aldrich (Merck KGaA, Darmstadt, an Ghearmáin). Baineadh úsáid as na caighdeáin chun anailís a dhéanamh ar chomhpháirteanna CTPG-W.
Measúnacht MTT. Rinneadh iomadú cille a thomhas le measúnacht MTT. Ionaclúdh cealla eca{{0}} i 96-plátaí tobair ag dlús 5x103 chealla i 100 µl RPMI{{5 }} meánach/maith agus saothraithe ag 37˚C ar feadh 24 h, ansin cóireáilte ag tiúchain éagsúla (0, 200, 400, 600, agus 800 µg/ml) de CTPG-W nó 0.4 faoin gcéad sulfocsaíd démheitile (DMSO) le haghaidh 24, 48 agus 72 h. Baineadh úsáid as DMSO mar rialú tuaslagóir (800 µg/ml CTPG-W ina bhfuil 0.4 faoin gcéad DMSO). Baineadh úsáid as cisplatin (20 µg/ml) mar an rialú dearfach. Ina dhiaidh sin, caitheadh an sáile tar éis lártheifneoraithe ag 225 xg ar feadh 5 nóiméad ag teocht an tseomra, agus cuireadh tuaslagán MTT 100 µl (0.5 mg/ml i meán RPMI{-1640 gan FBS) le gach tobar agus gor ag 37˚C. ar feadh 3 h. Rinneadh na criostail formazan foirmithe a thuaslagadh i 200 µl DMSO. Rinneadh na luachanna dlús optúla (OD) a thomhas ag tonnfhad 490 nm ag 96-léitheoir micreaphláta tobair (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA). Ríomhadh inmharthanacht choibhneasta na gceall de réir na foirmle: Inmharthanacht cille ( faoin gcéad ) { { 36 }} ( ODtreated / ODuntreated )x100 faoin gcéad . Breathnaíodh ar mhoirfeolaíocht chealla Eca-109 le micreascóp fluaraiseachta inbhéartaithe (méadú, x200) (Nikon Eclipse Ti-E; Nikon Corporation, Tóiceo, an tSeapáin).
Chun splenocytes a iomadú, rinneadh lucha C57BL/6 a eothánú trí dhíláithriú ceirbheacsach, agus rinneadh spleens a leithlisiú. Rinneadh an fionraí aonchealla agus síolaíodh splenocytes i 96-plátaí tobair ag dlús 1x105 chealla/tobar i meán 100 µl RPMI-1640, agus ansin déileáladh leo le tiúchain éagsúla (0, 200, 400, 600, agus 800 µg/ml) de CTPG-W ar feadh 24, 48 agus 72 h ag 37˚C le 5 faoin gcéad CO2. Rinneadh iomadú splenocytes a thomhas trí mheasúnú MTT, de réir an phrótacail thuasluaite. Innéacs spreagthach=ODtreated/ODuntreated.
Tomhas apoptosis agus an timthriall cille. Saothraíodh cealla eca{{0}} i miasa 6{{60 mm ar dhlús 2.5x105 chealla/mhias ar feadh 24 h agus déileáladh leo le tiúchain éagsúla ({{31}) }, 200, 400, 600, agus 800 µg/ml) de CTPG-W nó 0.4 faoin gcéad DMSO ar feadh 24 h ag 37˚C le 5 faoin gcéad CO2. Bailíodh cealla agus dathaíodh iad le trealamh Braite Apoptosis isothiocyanate V-fluorescein (FITC) / Propidium iaidíd (PI) (Shanghai Shengsheng Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, An tSín), de réir phrótacail an mhonaróra. Bailíodh samplaí trí shreabh-chítiméadracht (BD FACSCalibur; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) agus rinne FlowJo 7.6 (Tree Star, Inc., Ashland, OR, USA) anailís orthu. Chun anailís a dhéanamh ar éifeacht CTPG-W ar an timthriall cille, síolaíodh cealla 2.5x105 Eca-109 i miasa cultúir 60 mm agus déileáladh leo le CTPG-W (0, 100, 200, agus 400 µg/ml) nó 0.4 faoin gcéad DMSO ar feadh 24 h ag 37˚C le 5 faoin gcéad CO2. Baineadh gach cill agus nite faoi dhó le fuar-oighear PBS (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), a socraíodh ansin in eatánól fuar oighir 70 faoin gcéad ag 4˚C ar feadh 30 nóiméad. Tar éis níocháin faoi dhó le PBS le fuar oighir, cuireadh cealla arís ar fionraí i maolán staining 300 µl PI/RNase (BD Biosciences, San Jose, CA, SAM) ar feadh 10 nóiméad ag teocht an tseomra. Rinneadh anailís ar an dáileadh timthriall cille leis na bogearraí ModFit LT 3.0 de réir cíteiméadracht sreafa (BD FACSCalibur).
Anailís ar acmhainneacht membrane mitochondrial (Δψm) agus speiceas ocsaigin imoibríoch (ROS). Chun anailís a dhéanamh ar an Δψm, déileáladh le cealla Eca{{{0}} le CTPG-W (0, 400, 600 agus 800 µg/ml) nó 0.4 faoin gcéad DMSO do 24 h ag 37˚C le 5 faoin gcéad CO2, agus dhaite leis an trealamh measúnaithe féideartha membrane mitochondrial le JC-1 (Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime, Shanghai, An tSín), de réir phrótacal an mhonaróra, ar feadh 20 nóiméad ag 37˚C . Tar éis níocháin faoi dhó le maolán níocháin JC{-1 (Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime), athchuireadh samplaí le maolán níocháin 300 µl JC-1 agus rinneadh anailís orthu de réir cíteiméadracht sreafa (BD FACSCalibur). Breathnaíodh freisin ar fhluaraiseacht lí JC-1 i gcealla Eca-109 le micreascóp fluaraiseachta inbhéartaithe (méadú, x200; Nikon Eclipse Ti-E). Chun anailís a dhéanamh ar ROS, déileáladh le cealla Eca-109 le CTPG-W (0, 400, 600, agus 800 µg/ml) ar feadh 2, 4, 6, 12, agus 24 h, agus dathaíodh iad le Speicis Ocsaigin Imoibríocha Assay Kit (Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime), de réir phrótacal an mhonaróra, ar feadh 20 min ag 37˚C. Tar éis níocháin trí huaire le PBS oighearfhuar, bailíodh samplaí trí chitoiméadracht sreafa (BD FACSCalibur) agus rinne bogearraí FlowJo 7.6 anailís orthu.
Gníomhaíocht scavenála radacach 2,2-défheinil-1-picrylhydrazil (DPPH). Socraíodh gníomhaíocht scavenging radacach saor in aisce CTPG-W le measúnacht radacach saor in aisce DPPH de réir an phrótacail foilsithe le mionmhodhnú, de réir mar a cuireadh eatánól in ionad meatánóil chun DPPH a thuaslagadh (25,26). Le haghaidh tomhais ar staid sheasmhaigh, meascadh 150 µl DPPH (100 mmol/l) in eatánól le tiúchain éagsúla CTPG-W (25, 50, 75, 100, 250, 300, 400, 500, agus 600 µg/ml) i 50 µl PBS, agus gor sa dorchadas ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra. Braitheadh an ionsúiteacht ag 517 nm i láthair agus in éagmais CTPG-W. Úsáideadh 50 µl de Vitimín C mar an rialú dearfach. Ríomhadh an ghníomhaíocht scabhála radacach DPPH ag baint úsáide as an bhfoirmle: Scavenging ( percent )=[1-(A sample-Ablank)/A0] x100, áit arb é Abán ionsúchán an rialaithe (gan DPPH), Is ionann sampla agus ionsúchán an tsampla agus is é A0 an t-ionsú PBS le DPPH.
Anailís blot an Iarthair. Cóireáladh cealla Eca{{{0}} le CTPG-W (0, 200, 600 µg/ml) nó 0.4 faoin gcéad DMSO ar feadh 24 h ag 37˚C le 5 faoin gcéad CO2. An níochán seo a leanas faoi dhó le PBS, cuireadh cealla i maolán Radioimmunoprecipitation Assay Lysis (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd., Beijing, China) ar feadh 20 nóiméad ar oighear. Tar éis lártheifneoiriú ag 10,000 xg ar feadh 10 nóiméad ag 4˚C, bailíodh na forlíonta, agus braitheadh tiúchan próitéine le trealamh aigéad bicinchoninic (Thermo Fisher Scientific, Inc.) de réir phrótacail an mhonaróra. Rinneadh anailís blot an Iarthair de réir ár gcur síos roimhe seo (24). Na hantasubstaintí i gcoinne caspase-7 (cat. uimh. D120077), caspase-8 (cat. uimh. D155240), caspase-9 (cat. uimh. D220078), liomfóma B-chealla-8 {24}} (Bcl-2)-ghaolmhar X (Bax) (cat. uimh. D220073) agus Bcl-2 (cat. uimh. D260117), agus frith-luch IgG-horseradish peroxidase (HRP ) (cat. uimh. D111050) agus ceannaíodh IgG-HRP frith-choine (cat. uimh. D110058) ó BBI Life Sciences (Shanghai, an tSín). Ceannaíodh antasubstaintí in aghaidh caspase-3 (cat. uimh. E-AB-10050) agus caspase gníomhach-3 (cat. uimh. E-AB-22115) ó Elabscience ( Wuhan, an tSín). Antasubstaintí eile i gcoinne caspase-7 (cat. uimh. 9492), polai (ADP-ribose) polymerase (PARP) (cat. uimh. 9542), cíteochrome c (cat. uimh. AC909), c-Meitheamh NH{ {48}}fuarthas críochfort kinase (JNK) (cat. uimh. 9252S), agus -actin (cat. uimh. 58169) ó Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, SAM). Caolaíodh gach antasubstaint phríomhúil agus tánaisteach ag 1:1,000. Goradh na príomh-antasubstaintí ag 4˚C thar oíche agus gor na hantasubstaintí tánaisteacha ag 37˚C ar feadh 1 h.
Braitheadh na spriocphróitéiní trí úsáid a bhaint as trealamh feabhsaithe measúnachta ceimileacain (Institiúid Biteicneolaíochta Beyotime), de réir phrótacal an déantóra.
Anailís staitistiúil. Ríomhadh tábhacht staitistiúil trí anailís aontreo ar an éagsúlacht le tástáil iar hoc Tukey agus rinneadh anailís ar na torthaí trí úsáid a bhaint as bogearraí GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) i measc na ngrúpaí cóireála agus rialaithe. Cuireadh na sonraí go léir i láthair mar an meán ± diall caighdeánach. p<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Glicóisídí feinileatánóideach cistanche tubulosa(CTPG)
Torthaí
Cuireann CTPG-W bac ar fhás cealla Eca-109. Bhí na comhpháirteanna CTPG-W cáilithe agus cainníochtaithe ag HPLC (Fíor 1), a cuireadh i gcomparáid leis na caighdeáin echinacoside agus acteoside. De réir na mbuaic-amanna coinneála agus na buaic-réimsí, bhí 39.16 faoin gcéad de echinacoside agus 2.44 faoin gcéad de acteoside CTPG-W. Ar an gcéad dul síos, rinneadh éifeacht CTPG-W ar inmharthanacht chealla Eca-109 a chinneadh le measúnacht MTT. Díscaoileadh CTPG-W in DMSO ag 200 mg/ml agus caolaíodh é le meán RPMI-1640 ina raibh 10 faoin gcéad de FBS teas-dhíghníomhaithe go dtí na tiúchain shonraithe. Cóireáladh cealla Eca-109 le CTPG-W agus rinneadh anailís ar inmharthanacht na gceall le measúnacht MTT ag na pointí ama sonraithe. Laghdaigh cóireáil CTPG-W go suntasach inmharthanacht na gceall Eca{-109 ar mhodh dáileog agus am-spleách (P<0.001; fig.="" 2a).="" the="" morphology="" of="" eca-109="" cells="" was="" observed="" with="" an="" inverted="" fluorescence="" microscope="" (magnification,="" x200)="" following="" ctpg‑w="" treatment="" for="" 24="" h,="" which="" changed="" notably="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" with="" the="" cells="" shrinking="" and="" becoming="" round="" following="" ctpg-w="" treatment="" (fig.="" 2b).="" these="" results="" indicate="" that="" ctpg-w="" suppresses="" the="" growth="" of="" eca-109="" cells.="" the="" effect="" of="" ctpg-w="" on="" the="" proliferation="" of="" splenocytes="" was="" also="" detected="" with="" an="" mtt="" assay.="" ctpg-w="" significantly="" promoted="" the="" proliferation="" of="" splenocytes="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="" 2c),="" indicating="" that="" it="" has="" no="" cytotoxic="" effect="" on="">
Iondaíonn CTPG-W apoptosis i gcealla Eca-109. Chun imscrúdú a dhéanamh ar chuir CTPG-W fás cealla Eca-109 faoi chois trí ionduchtú apoptosis nó neacróis, déileáladh le cealla le tiúchain éagsúla CTPG-W. Tar éis 24 h, braitheadh apoptosis agus necróis na gcealla Eca-109 le staining Annexin V/PI. Mar a léirítear i bhFíor 3A, bhí gated cealla Iarscríbhinn V-/PI móide mar chealla necrotic, agus Annexin V móide / PI móide agus Annexin V móide / PI- cealla gated mar cealla apoptotic. Ba é CTPG-W a spreag apoptosis na gcealla Eca{-109 go príomha ar bhealach a bhí ag brath ar dháileog, cé gur tháinig méadú suntasach ar chealla necrotic Eca-109 faoi chóireáil 600 agus 800 µg/ml CTPG-W (P<0.001 at="" 600="" µg/ml="" and=""><0.05 at="" 800="" µg/ml).="" consistently,="" the="" levels="" of="" pro-apoptotic="" bax="" and="" anti-apoptotic="" bcl-2="" in="" eca-109="" cells="" were="" upregulated="" and="" downregulated,="" respectively,="" upon="" ctpg-w="" treatment="" (fig.="" 3b).="" the="" results="" indicated="" that="" ctpg-w="" primarily="" inhibited="" the="" growth="" of="" eca-109="" cells="" through="" the="" induction="" of="">
Déanann CTPG-W gabháil do thimthriall cille ag an gcéim S i gcealla Eca-109. Cuirfidh suaitheadh ar an timthriall cille ailse fás cille faoi chois agus cuirfidh sé apoptosis chun cinn (27). Aimsíodh dáileadh na timthriall cille i gcealla Eca-109 le staining PI tar éis cóireála CTPG-W ar feadh 24 h. Tugadh faoi deara gur mhéadaigh cealla sa chéim S agus léirigh cealla sna céimeanna G0/G1 laghdú suntasach foriomlán ar chóireáil CTPG-W (P<0.05; fig.="" 4),="" indicating="" that="" ctpg-w="" arrests="" the="" eca-109="" cell="" cycle="" at="" the="" s="">
Laghdaíonn CTPG-W Δψm agus spreagann sé scaoileadh cíteochróim c. Is féidir cosán cleithiúnach miteachondrial (28,29) a tharlú as apoptosis. Tá róil thábhachtacha ag na baill atá ar son agus frith-apoptotic den teaghlach próitéin BCL-2 i rialáil sláine membrane miteachondrial (30,31). Tar éis cóireáil CTPG-W ar feadh 24 h, rinneadh measúnú ar an Δψm ag baint úsáide as staining JC-1. Díscaoilfidh comhiomlán JC-1 (fluaraiseacht dearg a braitheadh in FL-2) isteach i monaiméir (fluaraiseacht glas a bhraitear in FL-1) nuair a bhíonn Δψm ag laghdú (32). Mar a léirítear i bhFíor 5A, tháinig méadú suntasach ar mhinicíochtaí FL-1 móide FL-2-/ cealla móide ar bhealach dáileog-spleách, rud a léiríonn gur laghdaigh Δψm cealla Eca-109. Breathnaíodh ar na hathruithe fluaraiseachta i gcealla Eca-109 freisin le micreascóp fluaraiseachta inbhéartaithe (Fíor 5 B). Leis na tiúchana méadaithe de CTPG-W, tháinig laghdú ar an bhfluaraiseacht dearg agus tháinig méadú ar an bhfluaraiseacht glas, atá ag teacht leis na sonraí ó chiteiméadracht sreafa. Tugadh faoi deara freisin go raibh méadú suntasach ar leibhéal na cíteochrome c sa chitosól (Fíor 5 C), atá mar thoradh ar laghdú Δψm. Treisíonn sé seo an tátal a baineadh as an líon méadaithe FL-1 móide FL-2-/ móide cealla gur laghdaigh Δψm mar thoradh ar chóireáil CTPG-W. Tuairiscíodh gur féidir le JNK gníomhachtú an teaghlaigh próitéin BCL-2 a rialáil is cúis le scaoileadh cíteochrome c (33-35). Cinneadh freisin go raibh leibhéal JNK uasrialaithe go suntasach tar éis cóireála CTPG-W (Fíor 5C). Thug na torthaí le fios go bhféadfadh CTPG-W apoptosis na gceall Eca{-109 a aslú trí chosán cleithiúnach miteachondrial.
Tionchar CTPG-W ar ghiniúint ROS incheallach. D'fhéadfadh ROS Δψm a laghdú chun apoptosis a spreagadh (36). Le fiosrú an féidir le CTPG-W táirgeadh ROS a mhéadú, déileáladh le cealla Eca-109 le tiúchain éagsúla CTPG-W. Bailíodh cealla ag na pointí ama sonraithe agus dathaíodh iad le DCFH-DA. Socraíodh táirgeadh ROS incheallach i gcealla Eca-109 trí chitoiméadracht sreafa. Mar a léirítear i bhFíor 6A, mhéadaigh 800 µg/ml CTPG-W táirgeadh ROS go suntasach ó 2-6h agus laghdaigh sé ó 12-24 h. Ina theannta sin, mhéadaigh 400 µg/ml CTPG-W táirgeadh ROS go suntasach ó 12-24 h. Ina theannta sin, níor athraigh 200 µg/ml CTPG-W táirgeadh ROS go suntasach. D’fhéadfadh go mbeadh baint ag na hathruithe dinimiciúla ar tháirgeadh ROS le apoptosis cille Eca-109. Cinneadh freisin go raibh gníomhaíocht scavening radacach saor in aisce ag CTPG-W (Fíor 6B), a d'fhéadfadh a bheith bainteach leis an laghdú ar tháirgeadh ROS i gcealla Eca-109 cóireáilte le 800 µg/ml CTPG-W tar éis 12 h.
Déanann CTPG-W gníomhaíocht caspase-3, caspase-7, caspase-9 agus PARP a uasghrádú. D'fhéadfadh scaoileadh cíteochrome c mar gheall ar laghdú Δψm na próitéisí caspase a ghníomhachtú chun apoptosis a spreagadh (29,30,37). Tar éis cóireála CTPG-W ar feadh 24 h, aimsíodh gníomhachtú caspase-3, 7, 8, 9, agus PARP le hanailís blot an iarthair. I gcomparáid leis an rialú, tá na leibhéil caspase scoilte-9, caspase scoilte-7, caspase scoilte-3, agus PARP scoilte, ach ní na leibhéil caspase scoilte{{{{). 20}}, arna uasrialáil ag cóireáil CTPG ar bhealach dáileog-spleách (Fíor 7). Léirigh na torthaí seo gur laghdaigh CTPG-W Δψm agus gur chuir sé scaoileadh cíteochrome c chun cinn chun caspáis a spreagann apoptosis cealla Eca{-109 a ghníomhachtú.
Sliocht Cistanche tubulosa
Plé
D'fhéadfadh CHM traidisiúnta aslú apoptosis na cealla ailse esophageal trí bhealaí éagsúla, lena n-áirítear an receptor bás eistreach, mitochondrial intreach agus cosáin struis reticulum endoplasmic (29). Léirigh ár staidéar roimhe seo gur chuir CTPG, mar phríomh-chomhpháirt C. tubulosa, bac ar fhás cealla melanoma B16-F10 trí ionduchtú apoptóis trí chonair chleithiúnaí mitochondrial (24). Sa staidéar seo, rinneadh imscrúdú ar éifeacht antitumor CTPG-W ar chealla Eca-109 agus cinneadh gur chuir CTPG-W bac ar fhás cealla Eca-109, apoptosis spreagtha, agus gabháil timthriall cille, laghdaithe Δψm, méadú ar scaoileadh cíteochrome c agus caspáis gníomhachtaithe. D'fhéadfadh CTPG agus CTPG-W apoptosis agus gabháil timthriall cille a spreagadh i gcealla ailse. Mar sin féin, tá na meicníochtaí cruinn difriúil mar gheall ar chomhpháirteanna éagsúla CTPG (26.64 faoin gcéad echinacoside, 10.19 faoin gcéad acteoside, agus 1.71 faoin gcéad isoacteoside) agus CTPG-W (39.16 faoin gcéad echinacoside agus 2.44 faoin gcéad acteoside). Ghabh CTPG cealla B{16-F10 ag na céimeanna G0/G1, ach ghabh CTPG-W cealla Eca{-109 ag an gcéim S (24). Mhéadaigh CTPG táirgeadh ROS ar dháileog-spleách, ach léirigh sé athrú ar bhealach a bhí ag brath ar am ag dáileog ard CTPG-W, a mhéadaigh go suntasach ag tús na cóireála CTPG-W (2-6 h) agus laghdú suntasach tar éis 12 h, i gcomparáid leis an rialú. Cúis fhéideartha is ea éiceachóisíd an phríomh-chomhpháirt de CTPG-W. Thuairiscigh roinnt staidéar go bhféadfadh echinacoside bac a chur ar tháirgeadh ROS agus apoptosis ROS-spreagtha chun a éifeachtaí neuroprotective agus frith-aosaithe a chur i bhfeidhm (38-40). Ar an gcaoi chéanna, breathnaíodh an ghníomhaíocht scavening radacach saor in aisce sa staidéar seo. Mar sin, measadh go bhféadfadh roinnt comhpháirteanna, lena n-áirítear verbascoside, iso-verbascoside, agus salidroside i dáileog ard CTPG-W giniúint ROS a aslú láithreach chun apoptosis de chealla Eca{-109 (41,42), agus ansin Bhí ROS scavenged ag echinacoside. Cúis eile a d'fhéadfadh a bheith ann maidir leis na difríochtaí i dtáirgeadh ROS ag CTPG agus CTPG-W ná gur úsáideadh línte cealla éagsúla sa staidéar seo agus staidéar roimhe seo (24). Thuairiscigh Dong et al (43) go bhféadfadh echinacoside apoptosis cealla ailse cholaireicteach SW480 daonna a aslú trí ghiniúint damáistí DNA ocsaídiúcháin gan leibhéil ROS méadaithe.
Laghdaigh cóireáil CTPG-W Δψm agus ba chúis le scaoileadh cytochrome c, rud a chuireann scoilteacht caspase-9 (28). Go comhsheasmhach, uasrialáladh na leibhéil caspase scoilte-9 trí chóireáil CTPG-W. Ina dhiaidh sin, is féidir leis an caspase gníomhach-9 caspase-3 a ghníomhachtú chun apoptosis a spreagadh (44). Rinneadh na leibhéil caspase scoilte-3 a uasrialáil freisin trí chóireáil CTPG-W. Mar sin féin, níor ghníomhaigh CTPG-W caspase-8, rud a thugann le fios nach raibh baint ag cosán gabhdóra báis eistreach leis an apoptosis a tharlódh de bharr CTPG-W. Tugann na breathnuithe seo le fios go spreagann CTPG-W apoptosis de chealla Eca-109 trí chonair chleithiúnaí miteachondrial a ghníomhachtú.
Feidhmíonn PARP róil thábhachtacha i gcobhsaíocht ghéanómach agus is féidir leis na caspásaí gníomhacha, go háirithe caspase-3 agus -7 (45) é a scoilt. Cinneadh gur ghníomhaigh cóireáil CTPG-W caspase-3 agus -7, rud a d’fhéadfadh PARP a scoilt chun bac a chur ar dheisiú DNA agus apoptosis a chruthú.
Cuireann CTPG-W bac ar dháileog agus ar am-spleách ar fhás cealla BEL-7404 carcanóma hepatocellular daonna (sonraí neamhfhoilsithe). Cé go gcuireann CTPG-W bac ar fhás cealla Eca-109 agus BEL-7404, cuireann sé chun cinn iomadú splenocytes, a d’fhéadfadh a bheith mar gheall ar ábhar polaisiúicrídí (~50 faoin gcéad) i CTPG-W (46). ). Ar an gcaoi chéanna, thuairiscigh roinnt staidéar gur féidir le polaisiúicrídí iomadú splenocytes (46-49) a chur chun cinn. I múnla na luiche, socraíodh gur mhéadaigh CTPG-W an t-innéacs spleen go suntasach, i gcomparáid leis an ngrúpa rialaithe, ach nach raibh tionchar aige ar mheáchan coirp agus ar innéacsanna orgán eile lena n-áirítear croí, ae, duán agus scamhóg (sonraí neamhfhoilsithe), rud a thugann le fios nach bhfuil aon éifeacht citotocsaineach ag CTPG-W ar ghnáthchealla.
I dteannta a chéile, léirigh na sonraí go gcuireann CTPG-W bac ar fhás cealla Eca-109 trí ionduchtú apoptóis trí chonair chleithiúnaí miteachondrial.
sochair cistanche: frith-apoptosis
Buíochas
Ba mhaith leis na húdair buíochas a ghabháil leis an Dr. Jianhua Yang (Coláiste an Leighis Baylor) as an lámhscríbhinn a snasú.
Maoiniú
Thacaigh an 13ú Plean Cúig Bliana do Thionscadal Tairisceana Bitheolaíochta Buntábhachtacha leis an staidéar seo (deontas uimh. 17SDKD0202), Gnáth-Ollscoil Xinjiang agus Príomh-Saotharlann um Feidhmchlár agus Rialachán Bithéagsúlachta Comhshaoil Speisialta i Xinjiang (deontas uimh. XJTSWZ-2017-04) chuig JL agus Deontas Fondúireacht Eolaíochta Nádúrtha Náisiúnta na Síne (deontas uimh. 31760260) chuig XW.
Infhaighteacht sonraí agus ábhar
Tá sonraí agus ábhair a úsáideadh agus a ndearnadh anailís orthu le linn an staidéir seo ar fáil ón údar comhfhreagrach ar iarratas réasúnach.
Ranníocaíochtaí údair
Rinne CF, AA, YY, agus QC na turgnaimh. Rinne LX, JLv, agus XW anailís ar na sonraí agus ar na figiúirí ullmhaithe. Dhear JinyuL agus JinyaoL an tionscadal agus scríobh siad an lámhscríbhinn.
Faomhadh eitice agus toiliú le bheith rannpháirteach
D'fhormheas an Coiste um Eitic Turgnaimh Ainmhithe de chuid Xinjiang Eochair-Saotharlann Acmhainní Bitheolaíochta agus Innealtóireacht Ghéiniteach gach turgnaimh ainmhithe (faomhadh, uimh. BRGE-AE001; Ollscoil Xinjiang).
Toiliú an othair le foilsiú
Neamhbhainteach.
Leasanna iomaíocha
Dearbhaíonn na húdair nach bhfuil aon leasanna iomaíocha acu.
Tagairtí
Wu CR, Lín HC, agus Su MH: Aisiompú trí uiscíSleachta Cistanche tubulosaó easnaimh iompraíochta i múnla francach cosúil le galar Alzheimer: Ábharthacht don sil-leagan amyloid agus feidhm lárnach néar-tharchuradóir. BMC Comhlánú Altern Med 14: 202, 2014.
Li J, Aspire A, Gao L, Huo S, Luo J agus Zhang F:Glicóisídí feanylthanoid ó Cistanche tubulosacuireann sé bac ar fhás cealla B16-F10 in vitro agus in vivo araon trí ionduchtú apoptóis trí Pathway-spleách ar miteachondria. J Ailse 7: 1877-1887, 2016.
Brand-Williams W, Culver ME, agus Berset C: Úsáid modh radacach saor in aisce chun gníomhaíocht frithocsaídeach a mheas. LWT-Teicneolaíocht Eolaíochta Bia 28: 25-30, 1995.
