Freagra Imdhíonta Feabhsaithe Béite-glúcáin ar Vacsaín Galar Newcastle Agus Léiriú MRNA Athraithe Spleen i Sicíní

Teibí

Rinneadh an staidéar reatha chun imscrúdú a dhéanamh ar éifeacht riaradh béil b-glucan (G70), táirge a fhaightear ó bhalla cille giosta, ar thíolairí coiscthe hemagglutachta (HI) a bhaineann go sonrach le víreas galar Newcastle (NDV), iomadú limficítí, agus ról na bhfodhaonraí limficítí T i sicíní a bhfuil vacsaín NDV beo orthu. Ina theannta sin, rinneadh imscrúdú ar thionchar b-glúcáin ar léiriú géine splenic trí sheicheamh tras-sgrìobhaidh. Léirigh na torthaí gur mhéadaigh forlíonadh b-glucan an titer de serum NDV HI an t-innéacs spreagtha NDV de limficítí san fhuil imeallach agus sa chonair intestinal, agus chuir sé chun cinn idirdhealú a dhéanamh ar limficítí T i gcealla T CD4+. Léirigh an anailís seicheamhú RNA (RNA-seq) go ndearna G70 na habairtí mRNA a bhaineann le receptor cúpláilte G-próitéin agus polaipíde aicme I MHC a rialáil, agus gur laghdaigh sé na habairtí mRNA a bhaineann le cathelicidin agus betadefensin. D'fhéadfadh éifeacht inmunomodulatory G70 feidhmiú tríd an gcosán comharthaíochta kinase próitéine mitogen-gníomhachtaithe. Go hachomair, d’fhéadfadh G70 éifeachtúlacht imdhíoneolaíoch na vacsaíne beo NDV i sicíní a threisiú agus d’fhéadfaí é a chur i bhfeidhm mar iarrthóir aidiúvach ionchasach sa tionscal éanlaithe clóis.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Eochairfhocail: vacsaín galar Newcastle, béite-glúcán, aidiúvach, cearc dubh-cnámh, RNA-seq

RÉAMHRÁ

Déantar polaisiúicrídí balla cille giosta a riginiú go díreach ó bhalla cille Saccharomyces cerevisiae agus úsáidtear iad go forleathan mar thionscnóirí fáis, gníomhairí frithmhiocróbacha, nó inmunomodulators in éanlaith chlóis chun táirgeadh agus sláinte a fheabhsú (Schiavone et al., 2017; Hasted et al., 2021). Roimhe seo, léiríodh go gcuireann táirge ar a dtugtar PW220, a bhfuil polaisiúicrídí balla cille giosta ann, leis an bhfreagairt imdhíonachta a spreag víreas galar Newcastle (NDV) agus chun pobal miocróbach cecum sicíní a athrú trí riaradh béil (Bi et al., 2020). ). Tá polaisiúicrídí balla cille giosta comhdhéanta go príomha de b-glúcán agus mannán-oligosaccharides (Wang et al., 2018). Sa staidéar seo, rinneadh imscrúdú ar b-glúcán maidir lena éifeacht ar an bhfreagairt imdhíonachta ar vacsaín NDV i sicíní. Is orgán ríthábhachtach é an spleen chun an fhreagairt imdhíonachta a thionscnamh. Léirigh staidéar le déanaí go ndearna PW220, ar táirge balla cille giosta é, an slonn mRNA de TGF-b, IL-6, TLR5, GATA-3, agus T-geall i spleen na sicíní ( Bi et al., 2022). Mar sin féin, ní mór an mheicníocht shonrach a shoiléiriú. Tá seicheamhú RNA (RNA-seq) ar cheann de na teicneolaíochtaí tréchuir ard is féidir a chur i bhfeidhm ar léiriú géine cainníochtúil a mheas agus a sholáthraíonn anailís ar phróifílí slonn éagsúla ag leibhéal an tras-scríbhinne iomláin (Zhao et al., 2018). Leis na buntáistí a bhaineann le híogaireacht ard agus ar chostas íseal, tá RNA-seq fostaithe go forleathan i staidéir beostoic agus éanlaithe clóis (Teixeira et al., 2019; Yuan et al., 2020). Mar sin, sa staidéar seo, rinneadh measúnú ar an éifeacht a bhaineann le b-glúcán a riar ar thíolairí coiscthe hemagglutachta (HI) a bhaineann go sonrach le NDV, iomadú limficítí, agus fodhaonraí T-limficítí i sicíní a vacsaíníodh ó bhéal le vacsaín NDV. Ina theannta sin, baineadh úsáid as anailís tras-scríbhinne chun meastóireacht a dhéanamh ar éifeacht b-glúcáin ar léiriú géine agus ar bhunbhealaí aistrithe comhartha i spleen na sicíní.

cistanche tubulosa-feabhas a chur ar chóras imdhíonachta

Cliceáil anseo chun táirgí Cistanche Feabhsú Díolúine a fheiceáil

【Iarr tuilleadh】 Ríomhphost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Ainmhithe

Fuarthas sicíní cnámh dubh tráchtála aon lá d'aois (fireann) ó Guizhou Yushun Poultry Co., Ltd (Anshun, an tSín). Roinneadh na sicíní i gcliabháin sreinge a cheadaíonn rochtain saor in aisce ar bheatha agus ar uisce. Sa chéad 7 d, coinníodh teocht an tseomra ag 33 céim C go 35 céim Cand ansin laghdaigh sé de réir a chéile 1 céim C in aghaidh gach 2 d go dtí 27 céim C. Próiseáladh na sicíní go léir de réir na gcaighdeán a bhunaigh an Southwest University Healthcare Care agus Coiste Úsáide (Uimhir an Teastais Eitice: IAC-2021-0057). Eotanaíodh gach éan turgnamhach le CO2 ag deireadh an staidéir.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Vacsaín

Sholáthair Qingdao YEBIO Bioengineering Co., Ltd. (Qingdao, an tSín) an vacsaín beo NDV (Strain La Sota).

Imoibrithe 

Fuarthas táirge balla cille giosta (YP) G70 ó bhalla cille giosta (Saccharomyces cerevisiae), ina bhfuil b-glucan (Níos mó ná nó cothrom le 70%) (AngelG70, QB/T4572, Angel Yeast, Yichang, an tSín). Ceannaíodh antaigin agus sera rialaithe dearfach araon chun titers HI a bhaineann go sonrach le NDV a thomhas ó Ionad Forbartha Diagnóisice Qingdao Regen (Qingdao, an tSín). CD frith-sicín3-APC (C2818-T9580), CD4-FITC(D0117-WA78E), agus CD8- PE (L{{14 }} Tairgeadh TH49T) i bhfrancaigh ag Nanjing Zeweil Biological Technology Co., Ltd. (Nanjing, an tSín).

Dearadh Turgnamhach

Sannadh daichead a hocht sicín cnámh dubh ag 5 lá d'aois go randamach i 3 ghrúpa (Tábla 1) agus tugadh an aiste bia basal (Tábla 2) nó an aiste bia basal le 0.1% G7{{10} } (b-glúcán, 0.7 g/kg) forlíonadh ar feadh ré an taighde reatha. Rinneadh vacsaíniú Grúpa H (G70 +) agus C (Vacsaín) ó bhéal le vacsaín NDV ar 14 agus 28 d, faoi seach. Caitheadh ​​le Grúpa S (Sailne) le toirt chomhionann salainn. Baineadh samplaí fola trí veiníriú sciatháin ag aois 5, 7, 14, 21, 28, 35, agus 42 d chun an titer HI a thástáil. Seacht lá tar éis an vacsaínithe teanndáileog, roghnaíodh 8 sicín i ngach colún go randamach agus íobairt asphyxiation ag baint úsáide as CO2. Scaradh limficítí ó fhuil imeallach agus ó jejunum chun iomadú limficítí agus anailís chiteiméadrachta sreafa a dhéanamh. I gcás samplála jejunal, ba é an ligament fionraí duodenal pointe tosaigh an jejunum agus bailíodh alt 5 cm ar fad ó thúsphointe an jejunum. Bhí an spleen reoite go tapa i nítrigin leachtach agus ansin é a stóráil ag -80 céim le haghaidh RT-qPCR agus próifíliú seicheamh.

Tábla 1. Dearadh turgnamhach

Tábla 2. 1 Comhdhéanamh agus cion cothaitheach aistí bia basal broiler turgnamhacha.

Staidéar HI

Rinneadh an mheasúnacht le haghaidh titers HI a bhaineann go sonrach le NDV sa serum tar éis na tuairisce roimhe seo (Ball et al., 2019). Go hachomair, caolaíodh séiream le salanda maolánach fosfáite (PBS) ó 1:2 go 1:1,024 i bpláta microtiter bun V 96-. Ansin, cuireadh 25 ml de chaolú NDV leis in aghaidh an tobair agus gor é ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad. Tar éis sin, cuireadh 25 mL de fhionraí erythrocyte rooster 1% le gach tobar agus gor ag 37 céim ar feadh 30 nóiméad. Tástáladh gach sampla faoi dhó agus cuireadh rialuithe dearfacha agus diúltacha san áireamh ar gach pláta. Bhí titers HI bunaithe ar an caolú is mó a raibh mar thoradh ar chosc iomlán ar hemagglutination. Tomhaiseadh an meán-títer HI agus earráid chaighdeánach (SE) in aghaidh an ghrúpa.

Limficítí a Leithlisiú ón bhFola Forimeallach

Rinneadh limficítí a leithlisiú agus a bhailiú ó limficítí fola forimeallacha ag baint úsáide as Kit Meánach Scaradh Lymficítí (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd., Tianjin, an tSín). Ansin, stóráladh limficítí i bhfionraí le meán RPMI 1640 (Solarbio, Beijing, an tSín) lena n-áirítear 5% serum lao féatais agus 25 mM HEPES (pH 7.0).

Leithlisiú limficítí ó Jejunum

Rinneadh an próiseas sannacháin de réir an tuairisc roimhe seo, agus le mionathruithe (Yuan et al., 2020). I mbeagán focal, bain úsáid as scagaire cille 70 mm chun an stéig a roinnt ina 4 mL de PBS fuar. Ina dhiaidh sin, lártheifneoiríodh fionraí na gcealla samplacha ag 4,500 rpm ar feadh 12 nóiméad nuair a baineadh an súthaire. Ansin, athchóirigh na cealla gut go meán iomlán (Solarbio Co., Beijing, an tSín) comhdhéanta de 5% serum bó féatais (FBS) i RPMI 1640 (Sijiqing Co., Hangzhou, an tSín). Sa deireadh, an trealamh leithlisiú limficítí sicín (Tianjin Haoyang Bitheolaíochta Monarú Co Ltd) chun limficítí a scaradh. scoilt an fíochán stéig i 4 mL de PBS fuar ag baint úsáide as scagaire cealla 70 mm. Ina dhiaidh sin, lártheifneoiríodh fionraí na gcealla samplacha ag 4,500 rpm ar feadh 12 nóiméad agus cuireadh an comhshnaidhm i leataobh. Tar éis sin, athchuireadh na cealla intestinal isteach i RPMI 1640 (Solarbio Co.) ina raibh 5% FBS (Sijiqing Co.). Ar deireadh, scaradh limficítí ag baint úsáide as an trealamh leithlisithe limficítí sicín (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd.).

Iomadú Lymphocytes 

Síolaíodh cealla i 96-plátaí tobair (5£105 an tobar), spreagtha ag antaigin NDV neamhghníomhaithe do 4 aonad hemagglutination nó toirt chomhionann de shalainn. Rinneadh tástáil ar gach sampla i 3 mhacasamhlú. Goradh na cealla agus antaigin ar feadh 44 h ag 37 céim i 5% CO2 agus ansin cuireadh 50 mL meitile thiazolyl tetrazolium (MTT) (2 mg / mL) le gach tobar agus goraíodh iad ar feadh 4 h eile. Rinneadh na samplaí a lártheifneoiriú ag 1,200 £ g ar feadh 8 min ag teocht faoi dhíon. Ina dhiaidh sin, baineadh an súiteán go cúramach agus cuireadh 100 ml de DMSO le gach tobar. Croitheadh ​​na plátaí ar feadh 8 nóiméad chun na criostail a thuaslagadh go hiomlán. Ar deireadh, taifeadadh an meán-dlúis optúil (OD) ag 570 nm. Fuarthas an t-innéacs spreagtha (IR) trí úsáid a bhaint as an gcothromóid: luachanna OD toibreacha spreagtha / luachanna OD toibreacha neamhspreagtha (Cui et al., 2020).

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Anailís ar Chíteiméadracht Sreafa ar Fhodhaonraí T-limficítí

Aonairíodh fionraí cille lymphoid agus nite faoi dhó le PBS. Athraíodh an tiúchan cille go 106 /mL agus ansin coinníodh ar an oighear é. Dathaíodh gach sampla le 2 ml de CD frith-sicín francach3-APC, CD4- FITC, agus CD frith-sicín francach8-PE faoi choinníollacha solasdhíonacha ar feadh 30 nóiméad, ina dhiaidh sin trí 2 nite le PBS. Rinneadh na cealla a mheas trí anailís cíteaiméadrachta sreafa ar chiteaiméadar Sreafa (BD Bioscience, San Jose, CA).

Anailís RT-qPCR

Díorthaíodh an RNA iomlán ón spleen ag baint úsáide as imoibrí TRIzol (Takara, Shiga, an tSeapáin) de réir threoirlínte an mhonaróra agus ansin é a thiontú go cDNA ag baint úsáide as PrimeScript RT Master Mix (Takara, Dalian, an tSín) ar thimthriallóir teirmeach T100 (Bio-Rad, Earcail, CA). Fostaíodh an béite-actin sicín mar ghéine rialaithe inmheánaigh. Rinneadh RT-qPCR de ghéinte roghnaithe ar Chóras PCR Il-Fíor-Ama (AB, Carlsbad, CA) leis an SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Takara). Rinneadh an modh cainníochtúil coibhneasta (244CT) chun an éagsúlacht chainníochtúil a mheas (Bi et al., 2022). Tá na seichimh primer liostaithe i dTábla 3.

Eastóscadh RNA

Úsáideadh gach ceann de na 3 shampla spleen ó Ghrúpa H (G70 +Vacsaín) agus Grúpa C (Vacsaín) don imoibrí RNA-seq le TRIzol (Takara). Tar éis sin, rinneadh tástáil ar an RNA le haghaidh éillithe agus díghrádaithe le glóthach agarose 1% agus rinneadh anailís ar an íonacht RNA ag baint úsáide as speictreafótaiméadar NanoPhotometer (IMPLEN, Westlake Village, CA). Cinneadh an tiúchan RNA trí úsáid a bhaint as an Qubit RNA Assay Kit i Qubit 2.0 Fluaraiméadar (Life Technologies, Carlsbad, CA). Rinneadh sláine an RNA a thomhas ag baint úsáide as Kit Measúnachta RNA Nano 6000 de chóras Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). Léirigh na torthaí go raibh an RNA iomlán agus gan éilliú DNA.

Anailís Transcriptome

Sholáthair Novogene Bioinformatics Technology Co. Ltd. (Beijing, an tSín) seicheamhú trascriptome, cóimeáil seichimh, agus anailís sonraí. Liostaíodh na príomhnósanna imeachta don tras-scríobh mar seo a leanas: 1) Rinneadh íonú mRNA ón RNA iomlán trí úsáid a bhaint as coirníní maighnéadacha poly-T oligo-ceangailte. Rinneadh ilroinnt le cations défhiúsacha i Maolán Imoibrithe Sintéise Chéad Chéad Snáithe NEB Eile (5X) ag teocht ard. 2) Rinneadh cDNA den chéad snáithe a shintéisiú trí úsáid a bhaint as primer heicseamair randamach agus Víreas Leoicéime Moloney Murine (M-MuLV) Droim ar ais. Ansin rinneadh sintéis cDNA an dara snáithe a shintéisiú trí úsáid a bhaint as DNA Polaiméaráis I agus RNase H. 3) Claochlaíodh na forchrochtaí a bhí fágtha ina bhfoircinn mhaol trí ghníomhaíochtaí exonucleáis/polaiméiráis. Ansin ligeadh struchtúr lúb hairpin NEB Next Adapter chun ullmhú le haghaidh hibridiú tar éis deireadh 3 'de na blúirí DNA a adenylation. 4) Fuarthas thart ar 250 go 3{00 bplúirí cDNA agus íonaíodh an leabharlann ag baint úsáide as córas AMPure XP Beckman Coulter (Beckman Coulter, Beverly, MA). Ansin cuireadh 3 ml NEBU SER Einsím (Thermo Fisher, Hillsboro, OR) i bhfeidhm le méid-roghnaithe, adapter-ligated cDNA ag 37 céim C ar feadh 15 nóiméad, agus ina dhiaidh sin 5 min ag 95 céim . Rinneadh aimpliú PCR le polaiméaráise Phusion High-Fidelity DNA. Sa deireadh, íonaíodh táirgí PCR (córas AMPure XP) agus measadh cáilíocht leabharlainne ag baint úsáide as an gcóras Agilent Bioanalyzer 2100. Rinneadh cnuasú na samplaí innéacschódaithe ar TruSeq PE Cluster Kit v3-cBot-HS (Illumina, San Diego, CA). Ansin, rinneadh an seicheamhú ar ardán Illumina Novaseq agus gineadh léamha péireáilte 150 bp. Íoslódáladh comhaid anótála géanóm tagartha agus samhail ghéine ó shuíomh Gréasáin an ghéanóim (ftp://ftp.ensembl.org/pub/release- 98/fasta/gallus_gallus/ agus ftp://ftp. ensembl.org/ pub/re-lease-98/gtf/gallus_gallus/). Bunaíodh innéacs den ghéanóm tagartha ag baint úsáide as HISAT2 (v2.0.5) agus rinneadh léamha glana péireáilte a ailíniú leis an ngéanóm tagartha. Ríomhadh an líon léite a léarscáilíodh do gach géine agus na Fragments Per Kilobase per Million (FPKM) do gach géine bunaithe ar fhad na géine agus líon na léimh a léarscáilíodh don ghéin ag baint úsáide as Áireamh Gné v1.5.{{38} }lch3. Baineadh úsáid as an bpacáiste DESeq2 R (1.16.1) le slonn difreálach idir grúpa H (G70 + Vacsaín) agus grúpa C (Vacsaín). Géinte le P < 0.05 agus |log2 (athrú fillte)| > Sainmhíníodh 1 mar ghéinte slonn difreálach (DEGanna).

Tábla 3. Seichimh na primers do RT-qPCR.

Bailíochtú Cainníochtúil PCR Fíor-Ama 

Roghnaíodh dhá DEG uas-rialaithe agus 4 DEG íosrialaithe i gcomparáid le Vacsaín Grúpa H (G70 +) vs Grúpa C (Vacsaín) chun torthaí seicheamhaithe tras-rialaithe ag RT-qPCR a dhearbhú. Tiontaíodh an RNA go cDNA ag baint úsáide as PrimeScript RT Master Mix (Takara) ar an timthriallóir teirmeach T100 (Bith-Rad). Tá na seichimh primer liostaithe i dTábla 3. Baineadh úsáid as sicín b-actin mar an ghéin rialaithe inmheánaigh. Rinneadh RT-qPCR de ghéinte roghnaithe ar Chóras PCR Iolrach fíor-ama (Bithchórais Fheidhmeach, Carlsbad, CA) leis an SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Takara). Cuireadh modh cainníochtúil coibhneasta (244CT) i bhfeidhm chun an éagsúlacht sa chainníochtú a mheas. Rinneadh trí chóip de na samplaí go léir le haghaidh anailíse.

Anailís staitistiúil

Baineadh úsáid as tástáil post hoc aontreo ANOVA le Duncan le haghaidh comparáidí iolracha idir grúpaí a úsáideann bogearraí SPSS (leagan 21.0, SPSS Inc., Chicago, IL). Cuirtear sonraí in iúl mar mheán § SE. Measadh go raibh luach P < 0.05 suntasach go staitistiúil.

TORTHAÍ Tionchar b-Glúcán ar Thíortha antashubstainte Séiream

Mar a léirítear i bhFíor 1, tháinig laghdú ar na leibhéil HI a bhaineann go sonrach le NDV i ngach grúpa roimh an vacsaíniú agus mhéadaigh siad i ngrúpaí H (G70+Vacsaín) agus C (Vacsaín) tar éis an imdhíonta. Is díol suntais é gur breathnaíodh leibhéil HI níos airde i ngrúpa H (G70+Vacsaín) ag 21 (P > 0.05), 28 (P < 0.{{ 14}}5), 35 (P > 0.05), agus 42 (P > 0.05) d d aois ná i ngrúpa C (Vacsaín).

Éifeacht b-Glúcán ar Iomadú Lymficítí

Léirítear éifeacht G70 ar iomadú limficítí fola imeallacha i bhFíor 2A. Feabhsaíodh SI i limficítí fola in éin ar forlíonadh G70 (G70 + Vacsaín) ag 7 d (P < 0.05) an teanndáileog imdhíonta, i gcomparáid leis an ngrúpa Vacsaín. Ina theannta sin, méadaíodh go suntasach SI i limficítí jejunal ag 7 d (P < 0.05) imdhíonadh iar-teanndáileog i gcomparáid leis an ngrúpa Vacsaín (Fíor 2B).

Éifeacht b-Glúcáin ar an gcóimheas CD4 + / CD8 + T Cille san Fhuil Forimeallach 

Léiríodh i bhFíoracha 3A agus 3B geataí limficítí agus cealla CD3 + agus léirigh Fíoracha 3C go 3E an cóimheas idir cealla T CD4 + /CD8 + sa G70, vacsaíní, agus grúpaí seile, faoi seach. Mar a léirítear i bhFíor 3F, ní raibh aon difríocht shuntasach idir an grúpa Vacsaín agus an grúpa Salainn tar éis teannadh imdhíonta (P > 0.05), cé go raibh cion na CD4 + /CD{{12} } Ba léir go raibh an chill T níos airde sa ghrúpa G70 (G70 + Vacsaín) ná mar a bhí sa ghrúpa Vacsaín (P < 0.05).

Fíor 1. An éifeacht a bhíonn ag riaradh b-glúcán béil ar na titers antashubstaintí serum don vacsaín NDV. Cuirtear sonraí in iúl mar mheán § SE.

Léiriú Géine Gaolmhara

Mar a léirítear i bhFíor 4, tháinig méadú suntasach ar slonn mRNA TGF-b (P < 0.05), IL-6 (P < 0.{{13} }5), agus TLR5 (P < 0.05) i spleen na sicíní a cuireadh cóireáil orthu le G70 (G- Vacsaín), i gcomparáid leis an ngrúpa Vacsaín. Ní bhfuarthas aon difríocht shuntasach sa slonn mRNA de IFN-g (P> 0.05), TLR4 (P> 0.05), agus TLR3 (P> 0.05) sa spleen idir an G70 (G0 Vacsaín) agus Vacsaín grúpaí.

Anailís Sonraí Seicheamhaithe RNA 

Fuarthas 24.1 G de shonraí amh mar a chuirtear i láthair i dTábla S1 den ábhar forlíontach as seicheamhú RNA ó 8 leabharlann spleen. Ciallaíonn CN vacsaíniú grúpa, agus ciallaíonn HN vacsaíniú grúpa G70 +. Cuimsíonn Leabharlann C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3, agus H4 faoi seach, 45,591,492, 47,424,782, 46,193,492, 54,403,376, 47,118,476, 45,814,54,476,45,814,476,45,814,476,45,804,476,45,814 8 léann bunaidh. Tar éis aptamer, baineadh seichimh dhébhríocha agus seichimh ar ardchaighdeán amach, ag fágáil 44,050,198, 45,449,884, 44,261,112, 52,097,846, 45,542,404, 44,566,290, 44,113,172, agus 440260. Bhí níos mó ná 96% de na léamha glana i measc na mbunléamh, agus rinneadh 8 leabharlann a mheaitseáil trí úsáid a bhaint as HISAT2 chun léamha a sheicheamhú le bunachar sonraí tagartha ar a raibh an genome Gallus. Ina theannta sin, mapáladh na léamha glana chuig an mbunachar sonraí seo i níos mó ná 95% de na cásanna. Go sonrach do na leabharlanna ó na leabharlanna C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3, agus H4 bhí 40,921,384 (92.9%), 41,302,100 (90.87%), 40,771,075 (92.11%), 46,905,743. %), 40,213,444 (90.23%), 40,922,895 (92.77%), agus 40,971,972 (93.06%) léamh uathúil don bhunachar sonraí tagartha, faoi seach.

Géinte a Léirítear go Difreálach

Mar a léiríodh i bhFíor 5A, sainaithníodh 198 géin a cuireadh in iúl go difreálach, lena n-áirítear 47 géinte uas-rialaithe agus 151 géinte síosrialaithe. Rinneadh cur síos mionsonraithe ar na DEGanna i dTábla ábhar forlíontach S2. Léiríonn Fíor 5B go bhfuil in-atáirgtheacht mhaith cóireálacha ag DEGanna.

Anailís ar Aicmiú Ontology Géine agus Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes Saibhriú

Aicmíodh géinte a chuirtear in iúl go difreálach i 3 phríomhchatagóir feidhme bunaithe ar chóras aicmithe Gene Ontology (GO): próiseas bitheolaíoch, comhpháirt cheallacha, agus feidhm mhóilíneach. Cuirtear na 10 dtéarmaí GO is fearr sna 3 chatagóir i láthair i bhFíor 6. Bhí barrachas géinte bainteach leis an "freagra ar imdhíonachta humoral," "freagra chemokine," "freagra ar humoral frithmhiocróbach," "freagra cosanta i gcoinne an bhaictéar, " "freagra imdhíonachta ar ghreann frithmhiocróbach arna idirghabháil ag peiptídí frithmhiocróbacha," "freagra cosanta i gcoinne baictéar Gram-diúltach," agus "freagra cosanta i gcoinne baictéar Gram-dearfach" i gcatagóir na bpróiseas bitheolaíoch. Ina theannta sin, sa chatagóir feidhm mhóilíneach, bhí cóimheas iontach de na géinte a bhaineann le "CC móitíf chemokine receptor chemokine receptor (CCR) ceangailteach receptor chemokine," "ceangailteach receptor chemokine," agus "lipopolysaccharide ceangailteach." Ina theannta sin, ba iad "coimpléasc slabhra riospráide mitochondrial I," "coimpléasc dehydrogenase NADH," agus "slabhra riospráide" na téarmaí saibhrithe ba cheannasach i gcatagóir na gcomhpháirteanna cille. Rinneadh anailís conair Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes freisin ar na géinte a cuireadh in iúl go difreálach. Mhol na torthaí go ndearnadh géinte a ghrúpáil go príomha i 7 cosán lena n-áirítear "Idirghníomhaíocht ligand-receptor Neuroactive," "Acomhal Bearna," "cosán comharthaíochta kinase próitéine mitogen-gníomhachtaithe (MAPK), "iompróirí ABC," "Biosintéis aimínaigéid," "Meitibileacht drugaí," agus "Easpórtáil Próitéin."

Fíor 2. Éifeacht riarachán béil b-glucan ar innéacs spreagthach lymphocyte (SI). (A) Linfocítí fola imeallacha; (B) limficítí stéig. Cuirtear sonraí in iúl mar mheán § SE.

Fíor 3. Éifeacht riaradh b-glúcáin ar chóimheas cille CD4+/CD8+ d'fhuil imeallach. (A) Geata ar limficítí; (B) geata ar chealla T CD3+; (C) minicíochtaí cealla CD3+ CD4 + CD8 + T i ngrúpa vacsaíní G70+; (D) minicíochtaí cealla T CD3+ CD4 + CD8 + sa ghrúpa Vacsaín; (E) minicíochtaí CD3+ CD4 + CD8 + cealla T i ngrúpa Salainn; (F) bardiagram a sheasann do chóimheas CD4+/CD8+. Cuirtear sonraí in iúl mar mheán § SE.

Fíor 4. Éifeacht riarachán béil b-glucan ar léiriú mRNA i spleen sicín. Cuirtear sonraí in iúl mar mheán § SE.

Fíor 5. Achoimre ar shonraí RNA-Seq. (A) Liosta de na géinte in iúl go difreálach, (B) léarscáil cnuasaithe de na DEGs.

Fíorú na nGéinte a Léirítear go Difreálach ag RT-qPCR

Deimhníodh na 6 DEG a bhí suas nó síos-rialaithe ag PCR cainníochtúil fíor-ama. Mhol an toradh go raibh na sonraí RT-qPCR de réir na sonraí RNA-seq i gcoitinne, rud a léirigh toradh seicheamhaithe iontaofa (Fíor 7). Slonn mRNA de Ghéin a Bhaineann le Pathway Pathway MAPK Mar a léirítear i bhFíor 8, laghdaigh slonn mRNA de FAS (P < 0.05) agus CACNA2 (P < {-.05) go suntasach braitheadh ​​​​i spleen na sicíní sa ghrúpa G70 (G70 + Vacsaín) i gcomparáid leis an ngrúpa Vacsaín. Ina theannta sin, tháinig méadú uimhriúil ar slonn mRNA DUSP5 agus DUSP4, agus laghdaíodh slonn mRNA de p38, JNK, agus ERK go huimhriúil sa ghrúpa G70 (G70 + Vacsaín) i gcomparáid leis an ngrúpa Vacsaín (P > 0.05). .

PLÉ

Déantar vacsaín bheo ND a ionaclú go forleathan i bhfeirmeacha sicín agus fós tá ráigeanna corracha de ghalar Newcastle in ealtaí éanlaithe imdhíonta (Zhang et al., 2022). Sainmhínítear na vacsaíní is fearr chun imdhíonacht cheallacha agus mucosal a spreagadh chomh maith le díolúine humoral éifeachtach (Shan et al., 2019). Mar sin, díríodh aird níos mó agus níos mó ar aidiúvaigh a d’fhéadfadh freagairtí imdhíonachta mucosal agus ceallacha a thabhairt (Chen et al., 2014; Yu et al., 2015). I gcomparáid leis an mbealach insteallta, is cur chuige níos éasca é riarachán béil a laghdaíonn costais agus a chothaíonn níos lú strus do sicíní broiler (Boyaka et al., 2003; Zhang et al., 2008). Léirigh torthaí an staidéir seo gur mhéadaigh aiste bia arna fhorlíonadh le b-glúcán go mór an leibhéal titers HI a bhain go sonrach le NDV i serum sicíní, atá comhsheasmhach le tuarascálacha roimhe seo (Horst et al., 2019). Tá antashubstaint NDV-shonrach riachtanach chun freagairt imdhíonachta humoral a fhorbairt chun sicíní a chosaint ó ionfhabhtú NDV (Martinez et al., 2018; Li et al., 2020). Táirgeann limficítí B antasubstaintí agus leathnaíonn limficítí T mar fhreagra ar mitogen (Bohacova et al., 2021). Sa staidéar reatha, ba léir go raibh an t-innéacs spreagtha de limficítí fola imeallacha sicín go NDV den ghrúpa G70 níos airde ná an grúpa vacsaínithe, rud a léiríonn go raibh níos mó limficítí T i ngníomh. Is iad na fodhaonraí is mó de limficítí T na cealla T CD4 + agus CD8 + (Cui et al., 2020). Táirgeann cealla T CD4 + go príomha cítocíní agus cuireann siad aibiú cille B chun cinn, ach baineann cealla T CD8 + le marú na spriocchealla (Zhang et al., 2021b). Sa taighde seo, bhí méadú soiléir ar an gcóimheas cealla T CD4 +/CD8 + a braitheadh ​​sa ghrúpa G70, rud a thugann le tuiscint go bhféadfadh G70 níos mó cealla T CD4 + ó fhuil imeallach a ghníomhachtú. Ina theannta sin, thugamar faoi deara innéacs spreagtha i bhfad níos airde lymphocyte intestinal sa ghrúpa G70 ná mar a bhí sa ghrúpa Vacsaín, a dheimhnigh go bhféadfadh b-glucan limficítí intestinal a spreagadh freisin. Dhearbhaigh ár dturgnaimh roimhe seo gur mhéadaigh sliocht balla cille giosta PW220 go suntasach cealla sIgA agus IgA + intestinal-shonrach (Bi et al., 2020). Is é sin le rá, tá b-glucan G70 agus PW220 araon éifeachtach chun díolúine mucosal intestinal a chur chun cinn.

sochair cistanche do na fir-neartú chóras imdhíonachta

Tuairiscíodh cheana díolúine feabhsaithe ainmhithe trí b-glúcán a thabhairt. Tá Guo et al. (2003) gur fheabhsaigh riar b-glúcáin an t-innéacs bursa agus antasubstaintí NDV-shonracha i sicíní. Levine et al. (2018) gur féidir le forlíonadh b-glúcáin MHC intestinal Ⅱ a uas-rialáil agus líon na gcealla CD45 + a mhéadú chun gortú stéigeach a mhaolú.

Li et al. (2005) go bhféadfadh b-glúcán aiste bia leibhéil slonn mRNA de IL-8 agus TGF-b i gconair intestinal na muc a rialáil. Níl meicníocht éifeacht inmunomodulatory b-glucan soiléir. Kim et al. (2010) gur chuir b-glúcán aibiú cealla dendritic chun cinn trí shloinneadh CD40, CD80, agus CD86 a uas-rialáil. Ina theannta sin, Lee agus Kim (2014) agus Su et al. (2020) gur ghníomhaigh b-glúcán gabhdóirí aitheanta patrún mar an receptor Dectin-1, receptor cosúil le Dola, agus CR3 (Baert et al., 2015). Orgán ríthábhachtach is ea an spleen chun freagairt imdhíonachta a thionscnamh agus tá ról ríthábhachtach aige san imdhíonacht dhúchasach agus faighte (Bronte agus Pittet, 2013). Mar sin féin, níl ach beagán taighde bunaithe ar anailís RNA-seq ar léiriú mRNA i riarachán iar-bhéil spleen de pholaisiúicrídí giosta. Sa staidéar seo, mhol anailís chonair Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes go ndearnadh na géinte seo a ghrúpáil go príomha i 2 chonair, lena n-áirítear "idirghníomhaíocht ligand-receptor neuroactive" agus "cosán comharthaíochta MAPK." Saibhríodh na gabhdóirí le haghaidh aitheantais patrún atá dírithe ar b-glúcán ar dhromchla cealla imdhíonachta (Goodridge et al., 2009). Tar éis aitheantas b-glucan, spreag na gabhdóirí seo tyrosine kinase agus fachtóir núicléach kappaB (NF-kappaB), rud a d'eascair ionduchtú secretion pro-inflammatory cytokine agus gníomhachtú freagraí imdhíonachta (Kankkunen et al., 2010; Masuda et al. ., 2012; Xu et al., 2016; Bode et al., 2019). Tá ról ríthábhachtach ag an MAPK, mar theaghlach de kinases próitéin serine-threonine, maidir le hathlasadh agus táirgeadh cytokine i sicíní. Bhí Byun et al. (2016) gur ardaigh b-glúcán táirgeadh interferon-g agus interleukin-2 agus gur spreag sé leibhéil i bhfad níos airde fosfarylation de MAPK p38 i macraphage peritoneal. Wang et al. (2014) go maolaíonn b-glúcán freagraí athlastacha i gcealla THP-1 trí ghníomhachtú p38 MAPK a chosc. Sa staidéar seo, aithníodh 13 DEG lena n-áirítear DUSP4, CACNA2D1, PDGFD, PTPRR, ENSGALG00000006351, FAS, MAP2K3, MYC, DUSP5, MAX, SRF, PRKCB, agus EGFR i gcosán freagartha comharthaíochta MAPK, a mhol go bhféadfadh b-glucan rialáil a dhéanamh ar imdhíonacht. de spleen via MAPK i sicíní. Is aicme caomhnaithe de Ser/Thr kinases é an MAPK i gcealla a bhaineann go príomha le freagraí ceallacha amhail freagairt imdhíonachta, apoptosis, agus iomadú. Áirítear ar theaghlach MAPK 3 fhotheaghlach ar a laghad: c-Jun N-terminal kinase (JNK), p38 MAPK, agus kinase extracellular rialaithe comharthaí (ERK) (Hong et al., 2020; Zhang et al., 2021a). Is fosfataí dé-shonracha iad DUSP4 agus DUSP5 a chuireann bac go sonrach ar ghníomhaíocht baill teaghlaigh MAPK ar nós p38, JNK, agus ERK, ag imirt ról rialála tábhachtach chun ró-imoibriú athlastach a chosc agus aischéimniú athlasadh sa chorp a chur chun cinn (Imasato et al. ., 2002; Talreja et al., 2021). Ina theannta sin, tuairiscíodh go gcuireann RNA beag neamhchódaithe darb ainm gga-miR-200a{{{-3p{{-3p{{{{-3p{{{{{-3}p{{{-3}p{{{{{-3}p{{{{-3}p{{{{-3}p{{{{-3}p{{{{{{-3}p{{{{-3}p{{{-3}p) na bhfachtóirí pro-athlastacha in iúl agus mar sin rialaíonn sé freagairt uath-imdhíonachta an óstaigh trí chonair MAPK a rialáil go diúltach. agus a móilíní comharthaíochta iartheachtacha (Pham et al., 2017). Sa staidéar reatha, léirigh anailís RT-qPCR gur tháinig laghdú ar léiriú mRNA de P38, JNK, agus ERK agus gur tháinig méadú ar abairt mRNA de DUSP4 agus DUSP5 i sicíní a chothaítear b-glúcán (G70). Tugann na torthaí seo le fios go bhféadfadh baint a bheith ag éifeacht feabhsaithe imdhíonachta b-glucan (G70) ar vacsaín galar Newcastle le rialáil aiseolais dhiúltach fachtóirí pro-athlastacha arna n-idirghabháil trí MAPK. Ina theannta sin, is substaint riachtanach é FAS a dhéanann idirghabháil ar apoptosis agus tá sé ríthábhachtach le haghaidh homeostasis imdhíonachta (Krueger et al., 2003; Guegan agus Legembre, 2018). Idir an dá linn, is fo-aonad cainéal cailciam-spleách ar voltas é CACNA2, a bhfuil éifeacht bolscaireachta aige ar iomadú cille, imirce agus ionradh (Sun et al., 2020). Sa staidéar seo, tháinig laghdú suntasach ar FAS agus CACNA2 i sicíní arna bhforlíonadh le b-glúcan (G70), rud a léiríonn go n-imríonn b-glucan (G70) éifeachtaí feabhsaithe imdhíonachta go príomha trí chosc a chur ar apoptosis cille imdhíonachta agus uathdhíonacht a chothromú. Soláthraíonn na torthaí seo tagairt theoiriciúil maidir le húsáid b-glucan (G70) mar fheabhsaitheoir imdhíonachta i suíomhanna cliniciúla. Mar sin féin, tá tuilleadh cruthúnais de dhíth ar mheicníocht b-glucan a fheabhsaíonn freagairt imdhíonachta trí éifeacht aiseolais dhiúltach an chosáin MAPK. Tá sé suimiúil a thabhairt faoi deara go raibh géinte ionchódaithe cathelicidin comhdhéanta de CATH3, CATH1, CATH2, agus géinte ionchódaithe b-defensin lena n-áirítear AvBD6, AvBD7, AvBD1, agus AvBD4 a laghdú go suntasach sa Vacsaín comparáide H (Grúpa G70 +) vs Rialú (Vacsaín Grúpa). Is móilíní éifeachtóra iad Peptides Cosanta Óstach (HDPanna) a bhfuil ról ríthábhachtach acu sa chóras imdhíonachta dúchasach (Cuperus et al., 2013). Thángthas ar na peptídí seo i raon speiceas ainmhithe ó mhamaigh go héin. Tá 4 cathelicidins i sicíní, comhdhéanta de CATH1, CATH2, CATH3, agus CATHB1, a mharaíonn baictéir éagsúla go héifeachtach (Hamad et al., 2017). Is peiptídí beaga cationacha iad béite-chosaintí éanúla (AvBDs), a dtugtar galinacean orthu mar mhalairt air, a bhfuil 3 nasc déshulfíde cistéin acu idir a gcuid iarmhair cistéin agus tá ról tábhachtach acu sa chóras imdhíonachta dúchasach (Yoshimura, 2015). B’fhéidir gur mhínigh rialachán aiseolais an laghdú ar léiriú cathelicitín agus béite-defensin, áit ar laghdaíodh daonraí baictéarach agus parabacterial le polaisiúicrídí balla cille giosta (Bi et al., 2020). Nochtadh torthaí cosúla i staidéir eile. Shao et al. (2016) gur chuir forlíonadh b-glúcán giosta i sicín broiler ionfhabhtú Salmonella faoi chois agus gur laghdaigh sé léiriú HDPanna trí anailís chainníochtúil PCR fíor-ama. Sa staidéar seo, d'fheabhsaigh táirge G70 comhdhéanta den chuid is mó de b-glucan leibhéal na n-antasubstaintí NDV-shonracha i serum, mhéadaigh sé an t-innéacs spreagtha NDV de limficítí fola imeallacha agus limficítí intestinal, agus chuir sé chun cinn idirdhealú idir limficítí fola imeallacha T go CD{{ 123}} T cealla. Ina theannta sin, léirigh anailís RNA-seq go ndearna G70 na habairtí mRNA a bhaineann le receptor serotonin cúpláilte G-próitéin agus polaipeiptíde MHC rang I a rialáil agus gur laghdaigh sé na habairtí mRNA a bhaineann le cathelicidin agus beta-defensin. Agus éifeacht fheabhsaithe G70 ar an vacsaín ND i sicín á gcur san áireamh, is féidir staidéar breise a dhéanamh ar éifeacht G70 ar vacsaíní éanlaithe eile ar nós vacsaín an fhliú éanúil.

Fíor 6. Anailís conairí KEGG.

Fíor 7. Deimhniú RT-qPCR ar iarrthóirí DEG roghnaithe. Cuirtear sonraí in iúl mar mheán § SE.

Fíor 8. Slonn mRNA coibhneasta sa spleen. Baineadh RNA iomlán as an spleen. Seirbheáladh an sicín b-actin mar an ghéin rialaithe inmheánaigh. Cuirtear sonraí in iúl mar mheán § SE.

TAGAIRTÍ

Baert, K., E. Sonck, BM Goddeeris, B. Devriendt, agus E. Cox. 2015. Difríochtaí cineál-shonracha cille in aithint b-glúcáin agus comharthaíochta i gcealla imdhíonachta dúchasacha muc. Dev. Comp. Imdhíonól. 48: 192-203.

Ball, C., A. Forrester, A. Herrmann, S. Lemiere, agus K. Ganapathy. 2019. Imdhíonacht chosanta chomparáideach a sholáthraíonn vacsaíní beo víreas galar Newcastle nó meiteaipéineamóivíreas éanúil nuair a dhéantar iad a chomhriar in éineacht le tréithchineálacha clasaiceacha agus athraitheacha den víreas broincítis ionfhabhtaíoch i sicíní broiler lae. Vacsaín. 37:7566-7575.

Bi, S., J. Zhang, Y. Qu, B. Zhou, X. He, agus J. Ni. 2020. Chuir táirge balla cille giosta feabhas ar fhreagra IgA intestinal agus d’athraigh speiceas microflora cecum tar éis vacsaínithe béil i sicíní. Éanlaith. Sci. 99:6576-6585.

Bi, S., J. Zhang, L. Zhang, K. Huang, J. Li, agus L. Cao. 2022. Freagraí imdhíonachta cille-idirmheánaithe uasrialaithe ar an vacsaín víreas galar Newcastle. Éanlaith. Sci. 101:101712–101721.

Bode, K., F. Bujupi, C. Link, T. Hein, S. Zimmermann, D. Peiris, V. Jaquet, B. Lepenies, H. Weyd, agus PH Krammer. 2019. Má dhéantar cinneadh-1 de cheangal ar iarscríbhinní ar chealla apoptotic, laghdaítear lamháltas imdhíonach imeallach trí NADPH oxidase-2. cill. Rep. 29:4435-4446.

Bohacova, P., J. Kossl, M. Hajkova, B. Hermankova, V. Holan, agus E. Javorkova. 2021. Difríocht idir cealla B agus T spreagtha mitogen i gceangal neamhshonrach antasubstaintí R-phycoerythrin-chomhchuingeach. J. Imdhíon. Modhanna. 493:113013–113023.

Boyaka, PN, A. Tafaro, R. Fischer, K. Fujihashi, E. Jirillo, agus JR McGhee. 2003. Ionramháil theiripeach ar an gcóras imdhíonachta: díolúine mucosal dúchasach agus oiriúnaitheach a fheabhsú. Curr. Pharm. Dearadh. 9: 1965-1972.

Bronte, V., agus MJ Pittet. 2013. An spleen i rialáil áitiúil agus córasach díolúine. Díolúine. 39:806-818.

Byun, E., S. Park, B. Jang, N. Sung, agus E. Byun. 2016. Spreagann b-glúcán gáma-ionradaithe gníomhaíocht inmunomodulation agus frith-ailse trí bhealaí MAPK agus NF-kB. J. Sci. Bia. Agr. 96:695-702.

Chen, X., X. Chen, S. Qiu, Y. Hu, C. Jiang, D. Wang, Q. Fan, C. Zhang, Y. Huang, Y. Yu, H. Yang, C. Liu, Z .Gao, R. Hou, agus X. Li. 2014. Éifeachtaí epimedium polysaccharide-propolis flavone leacht béil ar dhíolúine mucosal i sicíní. Int. J. Biol. Macromol. 64:6-10.

Cui, X., Y. Wang, R. Guan, M. Lu, L. Yuan, W. Xu, agus S. Hu. 2020. Freagraí imdhíonachta feabhsaithe le hanailís próitéamaíoch serum ar vacsaín hu caorach ar an ngalar crúb agus béil eiblithe in aidiúvach ola glasraí. Vacsaíní. 8:180-197

Cuperus, T., M. Coorens, A. van Dijk, agus HP Haagsman. 2013. Peptides cosanta óstach éanúil. Dev. Comp. Imdhíonól. 41:352-369.

Goodridge, HS, AJ Wolf, agus DM Underhill. 2009. Aitheantas béite-glúcáin ag an gcóras imdhíonachta dúchasach. Imdhíonól. Ath. 230:38-50.

Guegan, J., agus P. Legembre. 2018. Feidhmeanna neamh-poptotic de Fas/ CD95 sa fhreagairt imdhíonachta. FEBS J 285:809–827.

Guo, Y., RA Ali, agus MA Qureshi. 2003. Tionchar béite-glúcáin ar fhreagraí imdhíonachta i sicíní gríoscáin. Imdhíon-arm. Imdhíonól. 25:461–472.

Hamad, SK, S. Kim, SW El-Kadi, EA Wong, agus RA Dalloul. 2017. Léiriú comparáideach ar pheptídí cosanta óstach in éanlaithe turcaí. Éanlaith. Sci. 96: 2083-2090.

Hasted, T., S. Sharif, P. Boerlin, agus MS Diarra. 2021. Poitéinseal imdhíon-spreagthach torthaí agus a n-eastóscáin in éanlaith chlóis. Tosaigh. Imdhíonól. 12:641696.

Hong, Y., J. Lee, TH Vu, S. Lee, HS Lillehoj, agus YH Hong. 2020. Déanann éanlaith sicín b-defensin 8 freagairt imdhíonachta a mhodhnú trí na cosáin chomharthaíochta kinase próitéine mitogen-gníomhachtaithe i líne ceall macrafage sicín. Éanlaith. Sci. 99:4174-4182.

Horst, G., R. Levine, R. Chick, agus C. Hofacre. 2019. Éifeachtaí béite- 1,3-glúcáin (AletaTM) ar fhreagra vacsaínithe i sicíní gríoscáin. Éanlaith. Sci. 98: 1643-1647.

Imasato, A., C. Desbois-Mouthon, J. Han, H. Kai, ACB Cato, S. Akira, agus J. Li. 2002. Cuireann cosc ​​ar p38 MAPK ag glucocorticoids trí ionduchtú MAPK phosphatase-1 le haemophilus neamhchlóite de bharr tionchar a imirt ar ghabhdóir cosúil le dola 2. J. Biol. Ceimic. 277:47444–47450.

Kankkunen, P., L. Teiril€a, J. Rintahaka, H. Alenius, H. Wolff, agus S. Matikainen. 2010. (1,3) Gníomhaíonn béite-glúcáin deictin-1 agus NLRP3 inflammasome i macraifítí daonna. J. Imdhíon. 184:6335-6342.

Kim, HS, JY Kim, HK Lee, MS Kim, SR Lee, JS Kang, HM Kim, K. Lee, JT Hong, Y. Kim, agus S. Han. 2010. Gníomhachtú cille dendritic ag glucan scoite amach ó umbilicaria esculenta. Imdhíonach. líonra. 10:188-197.

Krueger, A., SC Fas, S. Baumann, agus PH Krammer. 2003. Ról CD95 i rialáil apoptosis T-chealla forimeallach. Imdhíonól. Ath. 193:58-69.