Cuireann Sleachta Uisciúla Ó Chistanche Saothraithe Deserticola YC Ma Mar Aidiúvach Polaisiúicríd Freagraí Imdhíonachta Chun Cinn

Déan teagmháil le:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Shuangshuang Feng a,1, Xiumei Yang a, Xiang Weng a,1, Bin Wang b, Ailian Zhang a,*

Teibí

Ábharthacht eitnopharmacological:Tá taispeáint iontach ag polaisiúicrídí luibheimdhíonach- acmhainneacht a fheabhsú. Is príomhuirlis iad aidiúvach chun vacsaíní éifeachtúla a fhorbairt. In ár staidéar roimhe seo, polaisiúicríd intuaslagtha in uisce a bhaintear as fiáinCistanche deserticola YC Maléirigh gníomhaíocht inmunostimulatory potent.

Aidhm an staidéir:Sa staidéar seo, tá animdhíonachpróifílí agus éifeachtúlacht na sleachta uiscí de saothraitheCistanche deserticola YC Ma(AECCD) ar lucha ICR i gcoinne ubhchruthacha (OVA). I dturgnaimh in vitro, rinneadh measúnú ar mheicníocht gníomhachtaithe DC féideartha ag AECCD.

Abhair agus modhanna: AECCDBaineadh úsáid as uisce te agus ina dhiaidh sin deascadh na polaisiúicrídí amh le eatánól. Ar dtús imdhíonadh lucha go subcutaneously le OVA (10 ug an luch) ina n-aonar nó OVA (10 ug an luch) faoi seach ina raibh dáileoga éagsúla AECCD (200, 400, agus 800 ug an luch) ar Laethanta 1 agus 14 agus an méid agus cinéitic de Rinneadh measúnú ansin ar antasubstaintí agus ar fhreagraí trí mheán cille.

Torthaí: AECCDFuarthas freagraí bríomhara agus fadtéarmacha IgG le freagraí measctha Th1/Th2 agus leibhéil uas-rialaithe de chitocíní a bhaineann le Th (CD4 móide IL-4, CD4 móide IFN- , agus CD8 móide IFN- ). Ina theannta sin, tharlódh AECCD an cheallacha láidirimdhíonachfreagra arb iad is sainairíonna é iomadú splenocyte méadaithe chomh maith leis an bhfreagra T cille gníomhachtaithe. Go háirithe, chuir AECCD go mór le haibiú cealla dendritic (DCanna) agus chuir sé bac ar Tregs. Turgnaimh in vitro, léirigh Réamhthástálacha gur spreag AECCD gníomhachtú DC trí aibiú feinitíopach, alt cítocine, agus gníomhaíocht allostimulatory a chur chun cinn. Bhí gabhdóir cosúil le dola 4 (TLR4) ina ghabhdóir riachtanach do DCanna chun AECCD a cheangal go díreach. Laghdaigh coscairí NF-κB na leibhéil slonn CD40, CD80, CD86, agus MHC-II agus táirgeadh IFN- , TNF- , agus IL{-6 trí DCanna.

Conclúidí:Ar deireadh, mhol na torthaí seoAECCDd'fhéadfadh antaigin-shonrach láidir agus marthanach a fháilimdhíonachfreagairtí trí ghníomhachtú DC, a bhí bainteach le rialáil marcóirí aibithe agus slonn cítocine tríd an gcosán NF-κB a bhaineann le TLR4-. Léiríonn an staidéar gur imdhíonmodulator féideartha é AECCD.

Cistanche luibhfeabhsaíonndíolúine.

1. Réamhrá

Tá sé molta ag go leor staidéir gur féidir le aidiúvaigh éifeachtúlacht vacsaíní a fheabhsú i gcoinne galair thógálacha éagsúla cosúil le VEID, COVID{0}}, fliú, agus galar crúb agus béil (Cao et al., 2020; Giuseppe et al., 2018 ). Féadfaidh aidiúvach cineálacha agus méideanna éagsúla freagairtí imdhíonachta a aslú, agus mar sin féadfaidh aidiúvach roghnaithe go cuí animdhíonachan fhreagairt atá ag teastáil le haghaidh pataigin nó antaigin ar leith (Reed et al., 2013). Baineadh úsáid as sleachta luibheacha nádúrtha le fada sa saol laethúil nó i gcúram sláinte. I go leor cásanna, chuir leigheas traidisiúnta na Síne (TCM) agus a chomhpháirteanna gníomhacha, go háirithe aidiúvaigh il-díorthaithe TCM polaisiúicrídí, go mór le héifeachtúlacht na vacsaíní. Bhí roinnt buntáistí ag polaisiúicrídí TCM (Advax ™, polaisiúicríd Astragalus, polaisiúicríd Ginseng, polaisiúicríd Lycium barbarum, agus polaisiúicríd Ganoderma lucidum) thar aidiúvach eile, mar shampla sábháilteacht níos fearr, bith-chomhoiriúnacht, láidirimdhíonachfeabhsú, agus imoibríocht íseal (Li agus Wang, 2015; Schijns et al., 2020). Dá bhrí sin, tá an poitéinseal ag comhdhúile agus foirmlithe polaisiúicríde TCM mar iarrthóirí aidiúvacha.

Cistanche deserticola YC Ma(Roucongrong i Sínis) leigheas traidisiúnta Síneach a taifeadadh i Pharmacopeia na Síne agus tá sé in úsáid mar bhia tonic leis na céadta bliain sa tSín (Coimisiún Pharmacopoeia na Síne, 1992). Léirigh staidéir chógaseolaíochta nua-aimseartha a ilfheidhmchláir chógaseolaíochta agus inmunomodulatory (Dong et al., 2007; Fu et al., 2017). Inár staidéar roimhe seo, chuir na polaisiúicrídí amh a dhíorthaítear ó Cistanche deserticola fiáin YC Ma chun cinn na freagraí humoral agus ceallacha antigen-shonracha agus rialaigh aibiú cealla dendritic (DCs) (Zhang et al., 2018; Zhao et al., 2019). Mar sin féin, rinneadh iniúchadh iomarcach ar Cistanche deserticola YC Ma agus liostaítear é mar speiceas i mbaol.Cistanche deserticola YC Macurtha ar scála mór agus úsáidtear go forleathan i bhforbairt agus cur i bhfeidhm acmhainní TCM. Mar sin féin, níl acmhainneacht aidiúvach saothraithe Cistanche deserticola YC Ma soiléir fós.

Is rialtóirí riachtanacha iad DCanna i gcoinne galair thógálacha. Tar éis DCanna a bheith gníomhachtaithe, idirghníomhaíonn móilíní dromchla agus cítocíní pro-athlastacha ar DCanna le gabhdóirí comhfhreagracha chun cealla T a ghníomhachtú agus freagraí sainiúla antaigin a fháil agus táirgeadh cítocíní a threoraíonn oiriúnaitheach.imdhíonachfreagraí (Banchereau agus Steinman, 1998). Tuairiscíodh go bhfeidhmíonn receptor cosúil le dola 4 (TLR4) ar DCanna mar receptor polaisiúicríde tábhachtach (Park et al., 2014; Qi et al., 2016). Go deimhin, is féidir le go leor polaisiúicrídí idirghníomhú go díreach nó go hindíreach le TLR4 ar DCanna chun an fachtóir núicléach iartheachtach-kappa B (NF-κB) a ghníomhachtú, rud a d'fhéadfadh léiriú géinte proinflammatory éagsúla mar IFN- , TNF- , agus IL{11 }} agus an freagra athlastach chun deireadh a chur le pataiginí (Tian et al., 2019; Zhou et al., 2017; Zhu et al., 2013). Mar sin, rinneadh staidéar forleathan ar DCanna agus NF-κB mar spriocanna féideartha le haghaidh teiripe galair.

Sa staidéar, leis an straitéis in vivo (ICR lucha), rinneamar meastóireacht ar dtús ar na héifeachtaí inmunostimulatory a bhaineann le sleachta uiscí de shaothraithe.Cistanche deserticola YC Ma(AECCD) le dáileoga éagsúla (íseal, meánach agus ard) chun freagairt imdhíonachta a fháil i gcoinne OVA agus míniú a thabhairt ar an mbealach in vitro chun DCanna agus cosáin a bhaineann le gabhdóirí iartheachtacha a ghníomhachtú. Le múnla luiche, nocht muid gur chuir AECCD an fhreagairt fhadtéarmach antashubstainte chun cinn le titers IgG méadaithe agus ceallachaimdhíonachfreagra. Rud atá tábhachtach, ba chúis le AECCD cítocíní a bhaineann le Th, go háirithe táirgeadh IFN, as a dtáinig freagra Th1 ar ionfhabhtuithe. Rinneadh an éifeacht ionduchtaithe a chomhghaolú go dlúth le haibiú DC feabhsaithe agus laghdaigh Tregs. Go meicniúil,AECCDgníomhachtaithe DC chun cinn trí chonair NF-κB TLR a bhaineann leis. Go hachomair, dheimhnigh an staidéar gníomhaíocht chumhachtach aidiúvach AECCD maidir leis an bhfreagra oiriúnaitheach a chur chun cinn. Leag an staidéar bunús le haghaidh aidiúvaigh polaisiúicríde AECCD a fhorbairt.

2. Ábhair agus modhanna

2.1. Imoibrithe

Ovalbúimín (OVA), 3-(4, 5-démheitilthiazol-2-il)-2, 5-bróimíd défheiniltetrasóiliam (MTT), polaimísín B (PMB), concanavalin Fuarthas A (ConA), lipopolysaccharide (LPS), mitomycin C agus 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine (TMB) ó Sigma (SAM). Ceannaíodh séiream bó féatais (FBS) ó Thionscail Bhitheolaíochta. Ceannaíodh Kit Counting Cell-8 (CCK-8) ó Biosharp (tSín). Tháinig comhchuingeacha frith-luiche gabhar IgG/IgG1/IgG2a-HRP ó Southern Biotech (SAM). Tháinig Inject Alum ó Thermo Scientific Pierce (SAM). Ba as Peprotech (SAM) GM-CSF. Antasubstaintí fluaraiseacha (frith-CD3-PE, frith-CD4-APC, frith-CD8a-FITC, frith-CD44-PE, frith-CD62L-PE, frith-MHCII -FITC/Percp-cy5.5, frith-IL-4-PE, frith–IFN– -PE, frith-CD86-APC, frith-CD40-FITC/PE, frith- Tháinig CD11c-PE/FITC, frith-CD{80-APC), Golgistop, Cytofix/Cytoperm, agus maolán Perm/Wash go léir ó BD Bitheolaíocht (SAM). Is ó eBith-eolaíochtaí (SAM) a tháinig an trealamh ruaimnithe rialála T-chealla. Tháinig TAK-242 ó MedchemExpress (Shanghai, an tSín). Bhí PDTC ó Beyotime Biteicneolaíocht (tSín). Ba ó Biolegend (SAM) an trealamh measúnaithe sreafa il-anailítí.

2.2. Ullmhú AECCD

D'aithin an tOllamh Jiang He C. deserticola (Eiseamal dearbhán Uimh. CD10041602).AECCDFuarthas trí eastóscadh uisce, deascadh eatánóil, agus an modh díphróitéinithe le roinnt mionathruithe (Zhang et al., 2018). Go hachomair, baineadh C. deserticola saothraithe le huisce go minic ar dtús agus ansin rinneadh polaisiúicrídí amh a deascadh thar oíche trí eatánól a chur leis de réir cóimheas toirte 1:4. Ansin díphróitéiníodh na polaisiúicrídí amh a fuarthas trí mhodh Sevag (Liu et al., 2012). Braitheadh ​​gurb é an cion iomlán siúcra ná 76.82 faoin gcéad leis an modh aigéid antrane-sulfair (Dubois et al., 1951).

sochair cistanche fireannisteachdíolúine

2.3. Anailís speictreascópach infridhearg

Chun críocha anailís a dhéanamh ar ghrúpaí feidhme orgánacha,AECCDle KBr a bhrú isteach i millíní chun an speictream infridhearg (IR) a thomhas. Cinneadh speictream IR na samplaí laistigh de 4000–400 cm− 1.

2.4. Turgnaimh in vivo

2.4.1. Imdhíonadh ainmhithe

Cuireadh lucha baineann C57BL/6 agus lucha ICR (6 seachtaine d'aois) ó Ollscoil Leighis Xinjiang (Urumqi, an tSín) i dtaithí ar feadh 3 lá. Rinneadh na nósanna imeachta turgnamhacha go léir i gcomhréir le rialacháin an Choiste um Eitic um Thurgnaimh Ainmhithe de chuid Xinjiang Eochair-Saotharlann Acmhainní Bitheolaíochta agus Innealtóireachta Géiniteacha in Ollscoil Xinjiang (BRGE-AE001).

Rinneadh imdhíonadh subcutaneously do lucha le OVA ina n-aonar nó le OVA le tiúchain éagsúla AECCD agus treisíodh iad ar Lá 14 de réir grúpaí éagsúla mar seo a leanas (6 lucha i ngach grúpa): Grúpa rialaithe (0.9 faoin gcéad NaCl), grúpa OVA ( 10 ug OVA),AECCD- Grúpa H (AECCD 800 ug), grúpa OVA/AECCD-L (10 ug OVA, AECCD 200 ug), grúpa OVA/AECCD-M (10 ug OVA, AECCD 400 ug), OVA/AECCD - Grúpa H (10 ug OVA, AECCD 800 ug), agus grúpa OVA/Alum (10 ug OVA, Alum100 ug). Instealladh foirmlithe vacsaíne i 100 μL de 0.9 faoin gcéad NaCl ag dhá shuíomh éagsúla (50 μL ag gach suíomh) i gcraiceann chúl gach luch. Tar éis an vacsaínithe, bailíodh samplaí fola ón plexus aisfhithiseach, agus fuarthas agus stóráil séara ag − 80 ◦C chun anailís bhreise a dhéanamh ar bhrath IgG. Rinneadh iomadú splenocyte agus braite citocín, fo-thacairí cealla T, marcóirí dromchla DC agus Tregs tar éis an phrótacail vacsaínithe céanna.

2.4.2. Anailís antasubstainte

Chinn ELISA titres IgG i serum in aghaidh OVA ar Laethanta 14, 28, 42 agus 56 tar éis vacsaíniú príomhúil a luadh cheana (Zhang et al., 2018). Tomhaiseadh IgG1 agus IgG2a ar Lá 21. Fuarthas an ionsúiteacht ag 450 nm/630 nm trí úsáid a bhaint as léitheoir (Bio-Rad, SAM). Cuirtear torthaí na freagartha antasubstainte in iúl mar titers IgG agus cuirtear isitíopaí IgG1 agus IgG2a in iúl mar ionsúcháin chomhfhreagracha.

2.4.3. Measúnacht iomadú splenocyte

Rinneadh measúnacht ar iomadú splenocyte i lucha le trealamh measúnachta CCK-8 de réir threoracha an déantóra. Ar Lá 21 tar éis an chéad imdhíonta, scoiteadh na splenocytes ó spleen na lucha imdhíonta agus rinneadh na erythrocytes a lí tar éis meilt. Spreagadh splenocytes (1 × 106 cealla / tobar) le OVA (10 ug/mL), OVA323-339 (10 ug/mL), ConA (10 ug/mL), agus LPS (10 ug/mL) le haghaidh dhá lá agus baineadh úsáid as cealla bána mar an rialú. Cuireadh an ghníomhaíocht iomadú in iúl mar innéacs spreagtha (IR), a ríomhadh an cóimheas ionsúcháin de chill spreagtha go cill neamhspreagtha faoin tonnfhad 570/630 nm.

Fíor 1. Speictream FTIR AECCD.

2.5. Turgnaimh in vitro

2.5.1. Giniúint DCanna, inmharthanacht cille, agus leibhéil endotoxin

Fuarthas DCanna díorthaithe ó smeara lucha C57BL/6 de réir an mhodha ar cuireadh síos air roimhe seo (Inaba et al., 1992). Go hachomair, saothraíodh cealla le meán iomlán RPMI-1640 (20 ng/mL GM-CSF agus 5 ng/mL IL-4). Tar éis sé lá, bailíodh gach cill ar fuaidreamh mar DCanna neamhaibí le haghaidh measúnachtaí ina dhiaidh sin. Cinneadh an céatadán de CD11c móide DCs sna cealla neamh-ghreamaitheacha a bheith 94 faoin gcéad de réir cíteiméadracht sreafa.

Braitheadh ​​inmharthanacht cille DCanna agus splenocytes ó lucha ar AECCD leis an trealamh CCK-8 de réir threoracha an déantóra. Fuarthas na cealla ó DCS agus splenocytes agus ansin spreagadh le tiúchan éagsúla deAECCD(0, 10, 100, 400, 800, agus 1600 ug/mL). Cuireadh in iúl inmharthanacht na cille mar an cóimheas idir an absorbance an ghrúpa cóireáilte le ionsú an ghrúpa rialaithe) × 100 faoin gcéad .

Chun éifeacht endotoxin in AECCD a eisiamh, tar éis AECCD (100, 200 agus 400 ug/mL) agus LPS (100 ng/mL) réamhchóireáladh le PMB (100 ug/mL) ar feadh 60 nóiméad, DCs (5 × Gortaíodh 105 cill/mL) le AECCD réamhchóireáilte (100, 200 agus 400 ug/mL) agus LPS ar feadh 12 u. Tar éis na cóireála thuas, rinneadh na leibhéil CD40, CD86, CD80, agus MHCII a mheas.

2.5.2. Anailís ar fheinitíopa DC

Socraíodh leibhéil na móilíní costimulatory chun aibiú DC a mheas trí thurgnaimh in vitro. Ar Lá a sé, cuireadh cóireáil ar DCannaAECCD(20, 100, 200 agus 400 ug/mL) nó LPS (100 ng/mL) ar feadh 12 h. Ansin, rinneadh DCanna a dhaite le móilíní dromchla agus rinneadh anailís orthu de réir cíteiméadracht sreafa.

2.5.3. Táirgeadh cítocine ag DCanna in vitro

Bailíodh forshuíomh saothrán na gceall chun leibhéal na gcítocíní a thomhas trí threalamh ELISA nó trealamh measúnaithe sreafa il-anailítí a úsáid leis an modh CBA. Rinneadh na céimeanna turgnamhacha go léir de réir threoracha an mhonaróra.

2.5.4. Imoibriú limficítí measctha allogeneic (MLR)

Fuarthas splenocytes ó lucha BALB/c go aiseipteach i meán RPMI-1640 (Zhang et al., 2018). Aibí C57BL/6 DC (aibithe i láthair na tiúchana éagsúla deAECCDnó LPS) réamhchóireáilte le 50 ug/ml Mitomycin C ar feadh 60 nóiméad ag 37 ◦C. Tar éis níocháin, rinneadh DCanna a mheascadh le splenocytes de réir cóimheas 1:5 nó 1:10 ar feadh 2 lá. Socraíodh iomadú cille le measúnacht MTT.

Fíor 2. Títer antashubstaintí a bhaineann go sonrach le OVA agus isitíopaí IgG i serum. Bailíodh samplaí séirim tar éis imdhíonadh príomhúil agus teanndáileog d’antasubstaintí le ELISA

2.6. Anailís staitistiúil

Cuirtear sonraí in iúl mar mheán ± SD. Cinneadh an leibhéal suntasach difríochtaí staitistiúla ag One-way ANOVA agus tástáil comparáide il Tukey. Meastar go bhfuil P < 0.05="" suntasach="" go="">

3. Torthaí

3.1. Speictreascópacht FTIR

Na buaiceanna ionsú is mó deAECCDi bhFíor. 1 bhí beanna ionsúcháin saintréithe struchtúir glycosidic a fhreagraíonn don tonnchrith síneadh OH ag 3342.95 cm - 1. Bhí an t-ionsú lag sainiúil de chreathadh síneadh C-H ag an mbanda ag 2933.54 cm− 1. Cuireadh an bhuaic ag 1657.39 cm− 1 i leith creathadh flexural OH. Tugadh an t-ionsú ag 1411.00 cm− 1 do chreathadh síneadh O–H nó C–H agus C–O. Léirigh na beanna ag 1018.38 cm− 1 freisin creathadh banna glycosidic CO agus C–O–C.

3.2. Freagairt antashubstainte serum a bhaineann go sonrach le OVA

Tástáladh sera ó na lucha imdhíonta le seiceáil an raibh antasubstaintí ginte (IgG, IgG1, agus IgG2a) ann in aghaidh OVA. Mar a léirítear i bhFíor 2A, titers IgG i lucha imdhíonta le OVA/AECCD-M elicited higher total IgG (titers: 220,000, 250,000 and 250,000) relative to those of OVA group (titers: 100,000, 100,000 and 120,000), and was close to Alum group (titers: 250,000, 250,000 and 270,000) on Days 28, 42 and 56 after primary vaccination. OVA/AECCD-M/H significantly enhanced IgG1 levels compared to the OVA group (P < 0.05) and the difference between OVA/AECCD-M/H group and Alum group was not significant (P>{{0}}.05). Chuir OVA/AECCD-M/H feabhas suntasach freisin ar leibhéil IgG2a i gcomparáid leis an ngrúpa OVA agus an grúpa Alum (Fíor 2B agus C) (P < 0.05).="" d'fhéadfadh="" leibhéil="" fheabhsaithe="" igg2a="" cosc="" ​​a="" chur="" ar="" ghalar="" óna="" dteastaíonn="">imdhíonachfreagra.

3.3. Freagraí imdhíonachta ceallacha

Rinne measúnacht MTT imscrúdú ar iomadú limficítí spleen faoi athspreagadh le OVA nó OVA323-339. Léirigh anailís ar iomadú go raibh OVA/AECCD-M méadú suntasach ar iomadú splenocyte araon tar éis nochtadh do OVA, OVA323-339, Con A nó LPS i gcoibhneas leis an ngrúpa OVA. D'fheabhsaigh OVA agus OVA323-339 an freagra iomadaithe níos airde ná mar a bhí sa ghrúpa Alum (Fíor 3) (P <>

Fíor 3. Iomadú splenocyte ar chóireáil AECCD in vivo

3.4. Fo-thacair na gcealla T a ghníomhachtú chun na nóid limfe agus an spleen a dhraenáil

Baineadh nóid limfeach agus spleen ó lucha imdhíonta chun fo-thacair T chealla T a bhrath ar Lá 21 tar éis an vacsaínithe príomhúil. Bhí céatadán na bhfo-thacairí cille T (CD4 móide , CD8 móide , CD44 móide cealla T) ó nóid limfe sa ghrúpa OVA/AECCD-M i bhfad níos airde ná an céatadán den ghrúpa OVA agus an ghrúpa Alum (Fíor 4A–D) (P. < 0.05).="" bhí="" na="" céatadáin="" de="" na="" fo-thacairí="" cille="" t="" (cd4="" móide="" ,="" cd8="" móide="" ,="" cd44="" móide="" ,="" agus="" cd62l="" móide="" cealla="" t)="" i="" spleen="" i="" bhfad="" níos="" airde="" ná="" iad="" siúd="" den="" ghrúpa="" ova="" (="" fíor.="" 4e="" -="" j="" )="" (="" p="">< 0.05="" ).="" léirigh="" na="" torthaí="">AECCDceall-idirghabhála chun cinnimdhíonachfreagra.

3.5. Cítocíní secreted ag splenocytes athspreagtha in vivo

Chinneadh cítocíní Th1/Th2 ó spleen lucha imdhíonta trí smálú incheallach ar Lá 21 tar éis an chéad vacsaínithe. Bhí leibhéil CD4 móide IL-4, CD4 móide IFN- , agus CD8 móide IFN- sa ghrúpa OVA/AECCD-M i bhfad níos airde ná mar a bhí sa ghrúpa OVA agus sa ghrúpa Alum (P< 0.05,="" fig.="" 5).="" the="" differences="" indicated="" that="">AECCDd’fhéadfadh freagairtí Th1/ Th2 a spreagadh, go háirithe trí idirghabháil T-cheallaimdhíonachfreagra.

3.6. Aibiú DC agus Tregs in vivo

Is féidir le gníomhachtú DC díolúine oiriúnaitheach a thionscnamh. Éifeachtaí naAECCDar aibiú DC i lucha imdhíonta ar Lá 3 tar éis an chéad imdhíonta. Ba é OVA/AECCD-M a spreag na leibhéil is airde CD40, CD80, CD86, agus MHCII ar DCanna i gcoibhneas leis an ngrúpa OVA agus an difríocht idir grúpa OVA/AECCD-M agus bhí grúpa Alum suntasach (Fíor 6A–D) (P < 0.05).="" bhí="" minicíocht="" cd4="" móide="" cd25="" móide="" foxp3="" móide="" tregs="" sa="" ghrúpa="" ova/aeccd-m="" i="" bhfad="" níos="" ísle="" ná="" mar="" a="" bhí="" sa="" ghrúpa="" ova="" (fíor="" 6e)="" (p="">< 0.05).="" mhol="" na="" sonraí="" seo="" go="" bhféadfadh="" aeccd="" dcanna="" a="" ghníomhachtú="" agus="" minicíocht="" treg="" a="">

3.7. Measúnachtaí cíteatocsaineachta agus éilliú endotoxin

Tar éis an chóireáil le tiúchain éagsúla deAECCDar feadh 2 lá, baineadh úsáid as na cealla ó DCanna agus splenocytes lucha chun an cíteatocsaineacht fhéideartha leis an trealamh CCK-8 a chinneadh. Ní raibh aon fhreagra suntasach ar iomadú coiscthe in inmharthanacht cille DCanna agus splenocytes i gcomparáid le hinmharthanacht na ngrúpaí rialaithe (Fíor 7A-B) (P > 0.05). Léirigh na torthaí seo nár léirigh AECCD ag tiúchan 10–1600 ug/mL aon cíteatocsaineacht suntasach do DCanna agus splenocytes i gcomparáid leis an rialú (P > 0.05). Mar sin, socraíodh go mbeadh an tiúchan de AECCD i dturgnaimh ina dhiaidh sin faoi 1600 ug/mL. Chun cur isteach ar éilliú endotoxin in éifeachtaí AECCD ar ghníomhachtú DC a eisiamh, baineadh úsáid as PMB, antaibheathach a aithníodh go forleathan mar gheall ar a éifeacht neodraithe LPS, chun éilliú endotoxin a eisiamh (Morrison agus Jacobs, 1976). Mar a léirítear i bhFíor 7C–F, CD40, CD80, CD86 nó leibhéil slonn MHC-II i DCanna cóireáilte le AECCD i láthair PMB níor léirigh aon athrú suntasach (P > 0.05). Mar sin féin, breathnaíodh laghdú suntasach de CD40, CD80 CD86, agus leibhéil slonn MHC-II i DCanna cóireáilte LPS i láthair PMB (P < 0.001).="" léirigh="" na="" torthaí="" seo="" go="" raibh="" aeccd="" saor="" ó="" éilliú="">

3.8. Aibiú feinitíopach agus gníomhachtú feidhmiúil DCanna in vitro

Bunaithe ar thurgnaimh imdhíonta thuas, rinneadh tuilleadh iniúchta ar aibiú feinitíopach DCanna tar éis na cóireála le AECCD in vitro. Ar Lá 6, spreagadh DCanna neamhaibí le tiúchan áirithe de AECCD nó LPS chun anailís a dhéanamh ar mhóilíní dromchla.AECCDaibiú cille spreagtha arb iad is sainairíonna é méadú suntasach ar na céatadáin CD40, CD80 CD86, agus MHC II ar bhealach dáileog-spleách (P < 0.001,="" fíor="" 8a–d).="" breathnaíodh="" freisin="" aibiú="" feinitíopach="" den="" chineál="" céanna="" ar="" dcanna="" tar="" éis="" an="" spreagtha="" le="" 100="" ng/ml="" lps.="" léirigh="" na="" sonraí="" anailíse="" gur="" fheabhsaigh="" aeccd="" aibíocht="" dc.="" ó="" na="" torthaí="" thuas,="" chuir="" aeccd="" feabhas="" ar="" aibiú="" feinitíopach="" dcanna.="" d'fhonn="" éifeacht="" aeccd="" ar="" fheidhm="" dc="" in="" vitro="" a="" urramú,="" rinneadh="" imscrúdú="" ar="" chumas="" dcanna="" atá="" cóireáilte="" le="" aeccd="" chun="" iomadú="" cille="" t="" allogeneic="" a="" spreagadh="" i="" mlr="" ag="" cóimheas="" dc-splenocyte="" de="" 1:5="" nó="" 1:10.="" d'eascair="" iomadú="" cille="" t="" suntasach="" i="" gcomparáid="" le="" dcanna="" neamhchóireáilte="" (fíor="" 8e–f)="" de="" bharr="" dcanna="" cóireáilte="" le="" tiúchain="" éagsúla="" aeccd="">< 0.001).="" dc="" maturation="" could="" induce="" the="" production="" of="" cytokines.="" next,="" the="" supernatants="" of="" dcs="" treated="" with="" aeccd="" or="" lps="" were="" detected="" by="" elisa="" kit.="" the="" levels="" of="" il-12="" and="" tnf-α="" in="" the="" supernatants="" of="" dcs="" were="" dramatically="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (p="" <="" 0.001,="" fig.="">

3.9. TLR4, receptor do AECCD ar DCanna

Is féidir le DCanna comharthaíocht cheallacha a thionscnamh trí ghabhdóirí membrane. Chun ról TLR4 a chinneadh maidir le páirt a ghlacadh in aibiú DC arna chóireáil ag AECCD, tar éis na réamhchóireála le TLR4 inhibitor TAK-242, spreagadh DCanna le tiúchan áirithe deAECCD,agus ansin scrúdaíodh stádas gníomhachtaithe DCanna ag cítoiméadar sreafa. Rinneadh anailís ar leibhéil slonn na gcítocíní i bhfostóirí cultúir trí threalamh measúnaithe sreafa ilanailíse. Cuireadh bac suntasach ar uasrialáil CD40, CD80, CD86, agus MHC-II a tharlódh de bharr AECCD trí chosc a chur ar bhealaí TLR4 (P< 0.01,="" fig.="" 9a–d).="" moreover,="" compared="" to="" untreated="" control,="" blocking="" tlr4="" with="" tak-242="" had="" a="" more="" significant="" inhibition="" effect="" on="" the="" production="" of="" ifn-γ,="" tnf-α,="" and="" il-6="" (p="" <="" 0.01,="" fig.="">

3.10. Gníomhachtú DC ag AECCD trí chonair NF-κB a bhaineann le TLR

Chun imscrúdú a dhéanamh an raibh na léirithe de mhóilíní dromchla agus cítocíní DCanna cóireáilte le AECCD á rialú ag NF-κB tar éis DCanna neamhaibí réamhchóireáilte le NF-κB inhibitor PDTC a spreagadh le AECCD ar feadh 12 h, rinneadh leibhéil slonn na móilíní costimulatory agus cytokines a thomhas ag cíteaiméadar sreafa. Na leibhéil CD40, CD80 CD86, agus MHC-II a tharlódh de bharrAECCDBhí laghdú suntasach i gcomparáid leis an rialú gan chóireáil trí bhlocáil NF-κB cosáin le coscairí comhfhreagracha (P <0.001, fíor.="" 10a-d).="" ag="" an="" am="" céanna,="" chuir="" pdtc="" bac="" suntasach="" ar="" léiriú="" ifn-="" ,="" tnf-="" ,="" agus="" il-6="" (p=""><0.05, fíor="">

4. Plé

Faoi láthair, rinneadh imscrúdú ar pholaisiúicrídí éagsúla ó TCM mar aidiúvaigh do vacsaíní daonna agus ainmhithe (Sun et al., 2018; Rey-Ladino et al., 2011). Sa staidéar seo, tá animdhíonach- rinneadh imscrúdú ar éifeachtaí modhnaithe AECCD agus ar mheicníocht gníomhachtaithe príomhúil DCanna in vivo agus in vitro trí shraith turgnaimh chun freagairt imdhíonachta oiriúnaitheach i gcoinne OVA agus stádas gníomhachtaithe DCanna a mheas. Thug turgnaimh in vivo le fios gur chuir AECCD go mór chun cinn táirgeadh isitíopaí IgG agus IgG a bhain go sonrach le OVA, iomadú splenocyte feabhsaithe, agus gníomhachtú cille T spreagtha agus cítocíní (IL-4/IFN- ). Thairis sin,AECCDtháinig feabhas ar aibiú DC agus léirigh Tregs laghdaithe. Thug na torthaí seo le tuiscint gur baineadh feidhm AECCD mar aidiún éifeachtach trí aibiú DC a chur chun cinn agus trí chosc a chur ar Tregs. Léirigh turgnaimh in vitro gur chuir AECCD aibiú feinitíopach DCanna, rannán cítocine, agus gníomhaíocht allospreagthach chun cinn trí chosán NF-κB a bhaineann le TLR4-. Thug na torthaí turgnamhacha seo le fios go raibh cumas suntasach ag AECCD mar spreagthóir feabhsaithe imdhíonachta.

Tá uathúil ag gach aidiúvachimdhíonachtréithe in aghaidh antaiginí éagsúla, rud a thugann le fios go bhfuil cumas feidhmithe ag aidiúvaigh i galair éagsúla. Ar an gcéad dul síos, rinneadh tástáil ar na hairíonna aidiúvacha a bhaineann le comhriarachán AECCD le OVA trína n-éifeachtaí ar fhreagra imdhíonachta oiriúnaitheach i lucha a chinneadh. Léirigh go leor staidéir go raibh na gníomhaíochtaí imdhíonachta-spreagtha comhréireach go díreach leis an dáileog laistigh de raon áirithe (Li et al., 2020; Reed et al., 2020; Zhang et al., 2017). Mar an gcéanna, sa staidéar, léirigh an anailís ar antashubstaint agus isitíopa gur chuir AECCD i raon dáileog áirithe feabhas ar fhreagraí OVA-shonracha IgG, IgG1, agus IgG2a agus gurbh í an dáileog mheánach de AECCD an dáileog optamach. I dturgnaimh ina dhiaidh sin, rinneamar imscrúdú go príomha ar éifeacht spreagthach AECCD ag dáileog mheán optamach. An dáileog mheán deAECCDméadú suntasach ar an bhfreagra ar iomadú splenocyte i lucha imdhíonta, rud a thugann le fios gur chuir AECCD ceallach chun cinnimdhíonachfreagraí i gcoinne OVA. Thug na torthaí seo le tuiscint gur chuir AECCD le freagairtí imdhíonacha greannacha agus ceallacha, a bhain le hacmhainn aidiúvach.

cistéirléirmheasannafaoidíolúine

D’fhéadfadh gníomhaíocht shubstaintiúil T-chealla a bheith fabhrach do dhíothú galair. Le linn animdhíonachMar fhreagra, féadfaidh cealla T gníomhachtaithe fíocháin limfeacha tánaisteacha a bhaint amach, lena n-áirítear spleen agus nóid limfe (Steinman, 2012). An dáileog mheán deAECCDéifeachtúlacht vacsaínithe feabhsaithe go héifeachtach mar go bhféadfadh sé feabhas suntasach a chur ar fhreagraí cille CD4, CD8, CD44, agus CD62L T maidir le nóid limfe agus spleen a dhraenáil. Rinne cealla CD8 T gníomhachtaithe idirghabháil ar dhíothú pataigin trí IFN- . Rinneadh cealla iomadaithe CD4 T a dhifreáil i gcealla Th1 agus cealla Th1. Rinne cealla Th1 cítocín Th1 a scaoileadh chun iomadú lymphocyte a spreagadh agus rinne cealla Th2 cítocín Th2 a scaoileadh chun táirgeadh antashubstainte a fheabhsú (Seder et al., 2008). Sa staidéar, mhéadaigh AECCD na leibhéil CD4 móide IL-4, CD4 móide IFN- , agus CD8 móide IFN- ag dáileog mheánach ag AECCD. Spreag AECCD freagra cothrom Th1/Th2 agus stiúraigh animdhíonachfreagra tríd an líonra cítocín a athrú.

Ba cheart d’ aidiúvach díolúine ar leith a aslú agus toradh na freagartha imdhíonachta a rialú trí stádas DCanna a rialú ag go leor pointí (Carrera Silva et al., 2013). Is táscaire ríthábhachtach é léiriú na móilíní dromchla ar DCanna chun aibiú DC a mheas agus go hiondúil déantar é a chomhghaolú le difreáil limficítí T (Steinman, 2012). Sa staidéar seo, d'fheabhsaigh AECCD léiriú na móilíní costimulatory agus d'éascaigh aibiú DC nuair a úsáideadh é mar aidiúvach i gcoinne OVA. B’fhéidir gurb é seo ceann de na bealaí a chuir AECCD greannacht agus cheallacha chun cinnimdhíonachfreagraí. Idir an dá linn,AECCDlaghdaigh minicíocht CD4 móide CD25 móide Foxp3 móide Tregs freisin, rud a chuir díolúine cothromaithe ar fáil tar éis an vacsaínithe. Thacaigh ár dtorthaí le torthaí le déanaí gurb iad polaisiúicrídí éagsúla ó TCM an rialtóir ar aibiú DC (Bo et al., 2019; Li et al., 2015; Zhu et al., 2016).

Gníomhachtú oiriúnaitheachimdhíonachdéantar freagairtí ó aidiúvaigh polaisiúicríde a idirghabháil go príomha trína n-aithint ag gabhdóirí sonracha DCanna (Akira, 2004). Is féidir le DCanna a chuirtear i ngníomh trí chosáin a bhaineann le TLR4-d’ imdhíon-mhodóirí éagsúla a cheilt mar an t-idirghabhálaí ríthábhachtach in aghaidh ionfhabhtuithe (Akira, 2007). Dá bhrí sin, i dturgnaimh ina dhiaidh sin, rinneamar réamhscrúdú ar mheicníocht mhóilíneach éifeacht spreagthach AECCD ar DCanna in vitro. D'fhonn cítotocsaineacht AECCD a urramú, rinneadh inmharthanacht cille DCanna agus splenocytes ó lucha a chinneadh ar dtús. Níor léirigh AECCD ag 10–1600 ug/mL aon chiteatocsaineacht do DCanna agus splenocytes. Chun éilliú LPS a chur as an áireamh, rinneamar réamhchóireáil ar AECCD le PMB. Níor laghdaíodh leibhéil slonn CD40, CD80 CD86, agus MHC-II i DCanna cóireáilte le AECCD, ach chuir PMB bac go héifeachtach ar léiriú móilíní comhspreagthacha i DCanna a raibh cóireáil LPS orthu. Léirigh sé seo go raibh AECCD saor ó éilliú endotoxin. Ansin, rinneadh iniúchadh breise ar stádas gníomhachtúcháin DCanna. Cosúil le DCanna a bhfuil cóireáil LPS orthu, ar bhealach a bhraitheann ar dháileog,AECCD-mhéadaigh DCanna cóireáilte na leibhéil CD40, CD80 CD86, agus MHC II chomh maith le táirgeadh an chitocín pro-athlastach, a bhí ina pharaiméadar d'aibiú feidhmiúil DCanna. I MLR, rinneadh measúnú ar chumas iomadúcháin na gcealla T allogeneic i DCanna cóireáilte le AECCD. D'fhéadfadh AECCD cealla T allogeneic a phríomhshuim agus a ghníomhachtú. Ar dtús rinneadh réamhchóireáil ar DCanna le Mitomycin C agus ansin nite go críochnúil chun an t-imoibrí seo a bhaint, agus mar sin ní dócha go gcuirfí éifeachtaí AECCD ar DCanna i leith na gníomhaíochta mitoigineach. Léirigh sonraí turgnamhacha go bhféadfaí aibiú feinitíopach DC agus gníomhachtú feidhmiúil a chur i leith an spreagadh ó AECCD.

D'fhéadfadh roinnt polaisiúicrídí TCM aibiú DCanna a spreagadh trí TLR4. Tá ról tábhachtach ag NF-κB mar bhall den chosán iartheachtach a bhaineann le TLR maidir le haibiú feinitíopach agus feidhmiúil DCanna a rialáil agus léiriú géinte éagsúla a bhfuil baint acu leis a spreagadh.imdhíonachfreagraí (Qi et al., 2016; Re agus Strominger, 2001; Wei et al., 2016; Zhu et al., 2013). Trí thurgnaimh in vitro, fuaireamar amach gur chuir AECCD aibiú DC chun cinn agus gur laghdaigh TAK-242 (coiscín TLR4) agus PDTC (inhibitor NF-κB) na leibhéil slonn CD40, CD80, CD86, agus MHC. -II agus leibhéil secretion IFN- , TNF- , agus IL-6 ar DCanna cóireáilte le AECCD, Léirigh na torthaí seo go raibh baint ag TLR4 agus NF-κB le gníomhachtú DC spreagtha ag AECCD agus le secretion cytokine. Bhí na torthaí seo comhsheasmhach le staidéir a tuairiscíodh roimhe seo mar gheall arAECCDmar antaigin feabhsaithe aidiúvach ag díriú ar DCanna.

Go hachomair, thaispeáin ár dtorthaí gur spreag AECCD freagraí marthanacha agus Th1/Th2, go háirithe trí idirghabháil T-cheallaimdhíonachfreagra i gcoinne OVA. Chuir AECCD DCanna i ngníomh tríd an gcosán NF-κB idirghabhála TLR4-, rud a chuir feabhas ar tháirgeadh imdhíonmodulators agus iomadú cealla T allogeneic. Féadfar AECCD a úsáid mar aidiúvach éifeachtach i bhforbairt vacsaíne. Mar sin féin, déanfar anailís chruinn ar chomhpháirteanna chun a chinneadh cén chomhpháirt ina bhfuilAECCDDCanna gníomhachtaithe. Le fócas ar na meicníochtaí maidir le conas a threisíonn AECCD imdhíon-ghineacht, lena n-áirítear leas iomlán a bhaint as foirmlithe aidiúvacha agus an bealach riartha vacsaíne, déanfaimid tuilleadh iniúchta ar na comhpháirteanna inmunomodulatory agus ar airíonna aidiúvacha sonracha AECCD chun aidiúvaigh vacsaíne éifeachtacha a dhearadh i gcoinne galair thógálacha.

cistéirfeabhasdíolúine