Frith-Aosú - Cothaíonn Scafall Géin-Ghníomhaithe Klotho Freagra Cóireála Athnuachana Créachta i nGaschealla Géin-ghníomhaithe Daonna

3. Plé

Bhí sé mar aidhm ag an staidéar seo imscrúdú a dhéanamh ar thionchar feidhmiúil frith-aosaithe - Scafall géine-ghníomhaithe Klotho ar ADSCanna daonna le haghaidh feidhmeanna feabhsaithe créachta. Ar an iomlán, fuaireamar amach go dtugann an scafall géine-ghníomhaithe gníomhachtú rialaithe ar chumais athghiniúna ADSCanna mar a léirítear i bhFíor5. Go sonrach, d'fheabhsaigh an scafall géine-ghníomhaithe gasta ADSCanna go neamhbhuan trí ghníomhachtú fachtóir trascríobh Deireadh Fómhair-4. Chuir an scafall géine-ghníomhaithe chun cinn freisin gníomhachtú luath na géine frithshnáithíneach TGF- 3, fachtóir ríthábhachtach le haghaidh leighis rialaithe le scarring laghdaithe. Ina theannta sin, rialaigh na ADSCanna gníomhachtaithe angiogenesis endothelial go sealadach agus thacaigh siad le leigheas fibroblast deirmeach trí chomharthaíocht paracrine. I dtreo aibithe, rinne na ADSCanna rialú freisin ar ghníomhachtú na freagartha pro-shnáithíneacha sna fibroblasts deirmeacha. Idir an dá linn, d'athghin na ADSCanna ar an scafall géine-ghníomhaithe go héifeachtach an membrane íoslach deirmeach trí fheabhas a chur ar thaisceadh laminin agus collagen IV. Bhain an freagra seo tuilleadh le laghdaithe scar-ghaolmhar -léiriú próitéin SMA agus sil-leagan maitrís elastin cáilíochtúil feabhsaithe. Chinn ár staidéar le chéile go raibh an -Klotho géine-ghníomhaitheCistancheacmhainneacht iontach le haghaidhleighis fhoirceannadhagus d'fhéadfadhteiripe gascheall-bhunaithe chun cinn chun feidhmchláir leighis a athnuachan.

Figiúr 5. Scéimreach de thionchar feidhme scafall géine-ghníomhaithe B-Klotho ar ADSCanna daonna le haghaidh feidhmeanna cneasaithe créachta. Is iad príomhthorthaí an staidéir seo ná (1) feabhsú neamhbhuan iolrachas gascheall agus freagairt fhrithshnáithíneach, (2) rialú feabhsaithe paracrine i dtreo angiogenesis, agus athmhúnlú collaigine pro-shnáithíneach i fibroblasts deirmeach agus ar deireadh, (3) aibiú méadaithe de Tugann an scannán íoslaigh a bhfuil smacht aige ar scar-ghaolmhar próitéinísexpressionLínte poncaithe do mhaitrís elastin le tuiscint ar thaisce cáilíochtúil feabhsaithe.

Cliceáil Anseo Le Fhios Conas CistancheÉifeachtaí cneasaithe créachta

I straitéisí cneasaithe créachta, cuirtear géinteiripe plasmid-bhunaithe i bhfeidhm chun freagraí ceallacha a fheabhsú go neamhbhuan go dtí go mbeidh deisiú créachta críochnaithe [[.37]. Léiríonn ár scafall géine-gníomhachtaithe freisin go bhfuil an teiripeacha -Rialaítear géine Klotho go neamhbhuan thar 14 lá. Tá slonn feabhsaithe (170-hfhillte) suntasach an -D'fhéadfaí Klotho mRNA ag lá 3 a chur i leith an tionscnóra CMV láithreach-luath arb eol dó feabhas a chur ar ghníomhachtú trascríobh an trasgene ionchódaithe [38]. Mar sin féin, sna MSCanna, d'fhéadfadh an CMV dul faoi methylation DNA nó deacetylation histone is féidir a laghdú ar an abairt transgene [39]. Thairis sin, is eipeasóim neamh-mhacasamhlacha iad na plasmids i gcoitinne, rud a chuireann srian le haistriú trasgene go cealla roinnte, agus is cúis le meath ar an abairt trasgene le himeacht ama [40]. Láithreacht marcóirí heitreacrómatacha a thagann ó sheichimh bhaictéaracha and'fhéadfadh plasmid slonn trasgene a athbhrú tuilleadh [41], ar an iomlán ag cur le slonn géine neamhbhuan.

Ceann de na bealaí a dhéantar chun créachta a bhfuil sé deacair a leigheas a chóireáil ná scafaill bithghníomhacha a bhfuil síolta cille orthu a chur i bhfeidhm. Cúis amháin ná a gcumas deisiú tapa créachta a chur chun cinn. Déanann cealla atá gníomhach go meitibileach sa ghreamú fachtóirí paracrine a scaoileadh agus déantar idirdhealú orthu, ag cur imeachtaí casta comharthaíochta sa timpeallacht chréachta [42]. Tá cumas uathúil ag gaschealla, go háirithe, spreagthaí seachtracha a bhrath agus a bhfreagairt a mhodhnú chun hoiméastáis a athbhunú [43]. Mar sin féin, cailleann gaschealla a ngasachta nuair a leathnaítear iad in vitro chun líon mór ceall a ghiniúint don ghreamacht. Léiríonn ár staidéar gur féidir an gas a fheabhsú go neamhbhuan trí úsáid a bhaint as scafall géine-ghníomhaithe a iompraíonn géine frith-aosaithe. -Klotho. Go sonrach, thugamar faoi deara gur chuir an scafall géine-ghníomhaithe frith-aosaithe le léiriú na géine gasta Deireadh Fómhair-4 sna ADSCanna. Tá Deireadh Fómhair-4 ar cheann de na príomhfhachtóirí tras-scríobhacha i ngaschealla suthacha agus tá sé riachtanach d'fhorbairt sháithiúil rialaithe [44]. Sna ADSCanna, is féidir le gníomhachtú na géine Oct-4 a n-acmhainneacht iomadú agus difreála a chur chun cinn [45]. Mar sin, d'fhéadfadh sé go n-éascódh slonn méadaithe Deireadh Fómhair-4 idirdhealú tapa a dhéanamh ar ADSCanna ar an scafall géine-ghníomhaithe isteach i gcealla óstaigh agus cuidiú leis an bpróiseas cneasaithe.

Tar éis dúinn gníomhachtú na géine Oct-4 sna ADSCanna a thabhairt faoi deara, rinneamar measúnú ar chumas angóigineach na ADSCanna. Tá angiogenesis ríthábhachtach chun an graft a chomhtháthú go héifeachtach leis an bhfíochán óstach.46]. Spreagann cealla sa ghreamú angiogenesis trí fhachtóirí paracrine a secretion. Is imeacht ríthábhachtach é angiogenesis freisin d'fhorbairt fíocháin gránú agus laghdaítear a ghníomhaíocht de réir mar a aibíonn an fíochán gránú [47]. Tá an teorannú cláraithe seo ar ghníomhaíocht angóigineach ag céimeanna níos déanaí an chneasaithe riachtanach chun scarring agus hyper gránú a rialú a d'fhéadfadh bac a chur ar ath-epithelialization [48]. Léiríonn ár dtorthaí freisin gur féidir leis na ADSCanna ar an scafall géine-gníomhaithe feabhas a chur ar sprouting inotelial agus a bhfás a rialú trí chomharthaíocht paracrine. Ina theannta sin, léiríonn na méaduithe suntasacha ar ghníomhaíocht meitibileach na gcealla endothelial agus an sprouting mar fhreagra ar an 3ú lá CM go bhféadfadh an scafall géine-ghníomhachtaithe atá ualaithe ag ADSCs comhtháthú tapa a dhéanamh leis an bhfíochán óstach. Thairis sin, is cur chuige saor ó chealla é úsáid gaschealla CM a ghlactar go coitianta chun cneasaithe créachta cáilíochta a fheabhsú.49]. Mar theorainn, admhaímid go bhfreastalódh cealla endothelial deirmeacha fásta ar mhúnla cille níos fearr chun staidéar a dhéanamh ar angaigéinis; áfach, chun comhsheasmhacht a choinneáil lenár staidéir roimhe seo agus glacadh go forleathan leis na HUVECanna mar iarrthóirí cille "órchaighdeán" [50], ghlacamar le measúnacht angiogenesis HUVECs.

Gné ghinearálta d’aibiú fíocháin gránú is ea méadú ar ghníomhaíocht athmhúnlaithe fibroblast [51]. Le linn na céime seo, cuirtear snáithíní collagen I níos láidre in ionad na maitrísí collagen III de réir a chéile.51]. Ansin cuireann snáithíní collagen crapadh créachta chun cinn [52], agus tá crapadh créachta fíor-riachtanach chun créachta a dhúnadh go hiomlán [53]. Mar sin féin, féadfaidh méadú leanúnach ionsaitheach ar thaisceadh collagen I foirmiú scar a mhéadú [54]. Tá sé ríthábhachtach scarring a rialú mar is féidir leis bac a chur ar fhorbairt aguisíní craiceann eile cosúil le follicles gruaige, faireoga sebaceous, agus faireoga allais, mar shampla, i créachta dónna [54]. Léiríonn ár dtorthaí go bhféadfadh an aois (lá 14) CM ón ngrúpa scafall géine-gníomhaithe rialú a dhéanamh ar léiriú collagen pro-shnáithíneach I i fibroblasts deirmeacha fásta. Tharla an éifeacht rialaithe seo ar na fibroblasts gan tionchar breise ar imirce an fifibroblasts ná ar a gcuid léirithe frith-shnáithíneacha collagen III i gcoibhneas leis an ngrúpa scafaill saor ó ghéine. Mar sin, molaimid go bhféadfadh an scafall géine-ghníomhaithe ualaithe ADSCs rialú níos fearr a thairiscint chun scarring in vivo a theorannú trí shloinneadh collagen I rialaithe. Léirigh Li et al., freisin gur féidir leis na ADSCanna CM léiriú collagen I a laghdú go suntasach i fibroblasts a dhíorthaítear ó scars hipertrófa [55]. Léirigh staidéar eile le Wang et al., laghdú comhchosúil i slonn collagen I i fibroblasts díorthaithe keloid [56], a thaispeánann le chéile an acmhainneacht fhrithshnáithíneach a bheith ag CM na ADSCanna.

Ceann de na torthaí suntasacha a thugamar faoi deara le cur i bhfeidhm an -Is éard atá i scafall géine-ghníomhaithe Klotho ná athghiniúint feabhsaithe an scannáin íoslaigh sna ADSCanna. Tá athghiniúint an membrane íoslaigh riachtanach le haghaidh aibithe soithigh fola agus ath-epithelialization iomlán [57,58]. Tábhachtaí fós, an treocht ina bhfuil na próitéiní laminin(2.1-huaire) agus collaigine IV (8.{{{}}huaire) a uasrialú tuilleadh léiríonn sé aibiú méadaithe an scannáin íoslaigh sa ghrúpa scafall géine-ghníomhaithe [59]. Seachas gníomhú mar fhachtóir frith-aosaithe [60], feidhmíonn an beta klotho íogaireacht i leith fachtóir fáis fibroblast (FGF) ag gabhdóirí FGF a fheabhsú [61]. Ina theannta sin, fuarthas amach go gcuireann méadú ar chomharthaíocht FGF aibiú membrane íoslaigh chun cinn trí sil-leagan lainín agus collagen IV [62]. Dá bhrí sin, ag smaoineamh ar ról beta klotho mar chomhghabhdóir FGF, d'fhéadfadh méadú ar chomharthaíocht ADSCanna FGF idirghabháil a dhéanamh ar an aibiú íoslaigh méadaithe sa ghrúpa scafall géine-ghníomhaithe.

Is é an chomhpháirt membrane íoslach atá uasrialaithe go suntasach sa ghrúpa scafall géine-ghníomhaithe ná an próitéin collagen IV. Is ionann an próitéin collagen IV agus 50 faoin gcéad de na seicní íoslaigh go léir [63] agus soláthraíonn sé cobhsaíocht struchtúrach don membrane íoslach [59]. Mar sin féin, laghdaíonn dul in aois go suntasach léiriú collagen IV san acomhal deirmeach-eipidéarach [58,64] agus is féidir leis an easpa collagen IV pathogenesis scar a chur chun cinn [65]. Mar sin, tugann ár dtorthaí le fios gur féidir le cumas athghiniúna membrane íoslaigh méadaithe an scafall géine-ghníomhachtaithe-ualaithe ADSCs cuidiú go mór le cneasaithe feabhsaithe in othair aosta. Tá sé léirithe ag staidéir eile freisin go bhfuil an poitéinseal iontach teiripeach ag ECM atá díorthaithe ó fhíochán adipíneach le haghaidh deisiú craicinn [66]. Ina theannta sin, is díol spéise é graftaí a ndearnadh innealtóireacht fhíocháin orthu, atá saibhir i laminín agus i collagen IV maidir le deisiú an epithelium riospráide [67]. 

Chomh maith leis an rialú pro-shnáithíneach i dtreo na fibroblasts, léiríonn ár staidéar freisin go gcuireann ADSCanna sa scafall géine-ghníomhaithe in iúl freisin 2-léiriú huaire níos ísle den phróitéin scar-ghaolmhar. -SMA [68]. Cé nach ndearna muid meastóireacht ar a thionchar in vivo, an laghdú ar áitiúil -Tá léiriú SMA ríthábhachtach le haghaidh leighis cáilíochtúil feabhsaithe [69]. Ag baint úsáide as gníomhairí fibrotic cosúil le bleomycin [70] d’fhéadfadh gur bealach amháin é chun luacháil níos fearr a dhéanamh ar airíonna frithshnáithíneacha na ADSCanna/scafall géine-ghníomhaithe in vitro; Mar sin féin, díríomar ar acmhainn theiripeach shealadach na tógála a bhunú.

Táscaire eile go bhféadfadh an scafall géine-ghníomhachtaithe ualaithe ADSCanna feabhas a chur ar leigheas cáilíochtúil is ea an sil-leagan maitrís elastin shnáithíneach a bheith ann in ionad táil allcheallach fánach sa ghrúpa scafaill saor ó ghéine. Tá sil-leagan elastin ar cheann de na príomhghníomhaíochtaí a spreagann cneasaithe créachta gan scar féatais [71]. Mar sin féin, níl sil-leagan elastin ag craicne do dhaoine fásta [71]. Mar sin, is minic a ionchorpraítear tropoelastin, réamhtheachtaí elastin, i scaifeanna bithábhar chun scarring i gcneasaithe créachta a rialú [72]. Le chéile, tugann ár gcuid torthaí le tuiscint go bhfuil na ADSCanna/ -D'fhéadfadh tógáil scafall géine-ghníomhaithe Klotho freagairt láidir frithshnáithíneach a thabhairt in vivo.

4. Ábhair agus Modhanna

4.1. Ullmhú Scafall Géin-Ghníomhaithe

Forbraíodh an scafall géine-ghníomhaithe le próiseas 2-céime. Ar an gcéad dul síos, rinneadh scafaill shulfáit cholagain-chondroitin soladach scagach trí sciodar reoite-thriomú de cholaigine tendón buaibheach de chineál 1 agus de chondroitin-6-sulfáit a díorthaíodh ó cartilage siorcanna (Sigma, RA). Baineadh úsáid as próiseas reoite-thriomú optamaithe a dearadh chun pores aonfhoirmeacha a chruthú chun na scafaill a tháirgeadh [73]. Bunaithe ar ár bprótacal foilsithe [74], ansin déileáladh leis na scafaill reoite-triomaithe go díhidriteirmeach (DHT) ag 105◦C faoi fholús le haghaidh steiriliú agus feabhsú meicniúil. Ansin rinneadh na scafaill aimridithe a thrasnascadh go ceimiceach le hidreaclóiríd 14 mM N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide agus 5.5 mM N-Hidroxysuccinimide (cóimheasa molar 2.5 de EDC/NHS) (Sigma, RA) go dtí réiteach. cobhsaíocht mheicniúil a fheabhsú tuilleadh [75]. Ansin nite na scafaill tras-nasctha le PBS (Gibco, Paisley, RA) chun ceimiceáin iarmharacha a bhaint. Nuair a bhí na scafaill réidh, ullmhaíodh polaplexí ag cóimheas N/P10 (cóimheas nítrigine go fosfáit) trí mhéid réamhchinnte de thuaslagán poileitiléinimín brainseach (PEI) a mheascadh le hionchódú DNA plasmid (pDNA) don ghéine béite-Klotho daonna ( -Klotho), a fuarthas ó SinoBiological, Beijing, an tSín. Roghnaíodh an cóimheas N/P10 bunaithe ar ár staidéir roimhe seo a fuarthas amach go bhféadfadh polaplexí arna bhfoirmiú ag cóimheas N/P 10 nanacháithníní cationic bheaga, cobhsaí a fhoirmiú go héifeachtach le plasmid chomh mór le GLuc (5.76 kb) [21,23]. Sular úsáideadh iad, caolaíodh na plasmids in uisce saor ó endotoxin chun tiúchan oibre a fháilde 0.5µg/µL. Tá cíteomegalóivíreas feabhsaithe láithreach-luath daonna sa plasmid(CMV3) tionscnóir chun léiriú ardleibhéil cobhsaí agus neamhbhuan an ionchódaithe a chur chun cinngéine i gcealla mamaigh.

Ceadaíodh don mheascán plasmid/PEI socrú síos ar feadh 30 nóiméad chun iad féin a chur le chéile i polaphléacsnanacháithníní. Rinneadh na nanacháithníní a sáithiú ansin ar na scafallanna trí phíobáil a dhéanamhtoirteanna comhionanna den tuaslagán polaplex in aghaidh an taobh den scafall. 2 san iomlánµg pDNA bhía úsáidtear in aghaidh an scafall chun an scafall géine-ghníomhaithe a fhorbairt.

4.2. Síolú cille ar -Klotho Scafall Ghin-Ghníomhaithe

Leathnaíodh ADSCanna Daonna (iXCells Biotechnologies, San Diego, CA, SAM) go sliocht 4 sa mheán fáis ADSCs (Cat uimh. MD0003) a sholáthair an chuideachta. 5 san iomlán× 105 ADSCanna (2.5× 105 gach taobh) a síolaíodh ansin in aghaidh an scafall saor ó ghéine (rialú,n = 3) nó scafall géine-ghníomhaithe (tástáil,n = 3). Tar éis ligean do na cealla socrú síos ar feadh thart ar 20 nóiméad, cuireadh 2 mL de mheáin aistrithe OptiMEM (Gibco, RA) leis, agus goraíodh na scafaill cheallacha ag 37◦C ar feadh 24 h. Tar éis gor 24 h, aistríodh na scafaill cheallacha saor ó ghéinte nó géine-gníomhaithe isteach i bplátaí toibreacha nua 12-, agus cuireadh iad le 2 mL de mheán fáis ADSCanna. Rinneadh athrú ar na meáin ansin gach 3-4 lá go dtí an lá 14 trí 1 ml de na meáin oiriúnaithe (CM) a bhailiú agus an méid céanna meán úr a chur ina ionad. Stóráladh gach CM ag−80 ◦C go dtí anailís.

4.3. Anailísí qRT-PCR le Cinneadh -Overexpression Gene Klotho agus Gníomhachtú Géinte Feidhme

D'fhonn rialáil neamhbhuan na ngéine sprice a chinneadh, baineadh cealla ag laethanta 3 (luath) agus 14 (déanach) iar-síolú ar na scafaill saor ó ghéine nó géine-gníomhaithe. Rinneadh na cealla a lysed ar dtús ag baint úsáide as imoibrí lysis Qiazol (Qiagen, Germantown, MD, SAM). Cuireadh clóraform leis ansin chun an lysate cille a scaradh ina chéimeanna próitéine, DNA agus RNA. Ag baint úsáide as an RNeasy Kit (Qiagen, Manchain, RA), baineadh an RNA, agus socraíodh a gcáilíocht agus a gcainníocht ag baint úsáide as léitheoir pláta Multiskan Go (Thermo Scientific, UK) leis an ionsúiteacht socraithe ag 260 nm. Baineadh DNA genómach ansin tríd an RNA a mheascadh le maolán glantacháin DNA géanómach (Qiagen, Manchain, RA) agus téamh go 42◦C ar feadh 2 nóiméad. Ina dhiaidh sin, rinneadh trascríobh droim ar ais chun an cDNA a ullmhú. dúblaigh cDNA in aghaidh an mhacasamhail (n Lódáladh=3) isteach sna plátaí qRT-PCR agus ansin ritheadh ​​an mheasúnacht ag baint úsáid as na primers a liostaítear i dTábla1. Ríomhadh an t-athrú fillte sa slonn mRNA i gcoibhneas leis na cealla ar an scafall saor ó ghéine ag baint úsáide as an 2−∆∆CTmodh as meán de thrí mhacasamhlú in aghaidh an ghrúpa. Baineadh úsáid as GAPDH Daonna (Hs_GAPDH_1_SG, Cat. Uimh. QT00079247) mar an ghéin coimeádta.

4.4. Anailís ar Bhithghníomhaíocht ar Fhachtóirí Rúnaithe ó na ADSCanna ar aghaidh -Klotho Scafall Ghin-Ghníomhaithe

4.4.1. Anailísí Bithghníomhaíochta Pro-Angiogenic

4.4.2. Anailísí Cneasaithe agus Aibithe Fibroblastaí Deirmeacha

Tar éis an mheasúnaithe angiogenesis, rinneamar imscrúdú ar chumas an CM le haghaidh leighis deirmeach trí úsáid a bhaint as measúnacht scratch ar fibroblasts deirmeacha fásta daonna (iXcells, Cat uimh. 10 HU-014). Don staidéar seo, roghnaigh muid go sonrach an CM d'aois ó lá 14 chun staidéar a dhéanamh ar a thionchar ar dhúnadh créachta fibroblast le linn aibithe. Iomlán de 1× 104 Cuireadh na cealla/tobar i 96-pláta tobair le síolú agus goradh iad thar oíche sa mheán fáis fibroblast. An lá dár gcionn, cruthaíodh créacht ar an monolayer trí tip pípéad 200 uL a scratáil go cothrománach trasna an tobair. Rinneadh an monolayer a rinsiú ansin le PBS chun aon bhruscar a bhaint agus a chothú leis an CM. Taifeadadh dúnadh créachta idir 12-16 h tar éis an scratch. Baineadh úsáid as immunostining chun staidéar a dhéanamh ar léiriú collagen pro-fibrotic I (1:100, Novusbio, RA) agus collagen frith-shnáithíneach III (1:100, Novusbio, RA) sna fibroblasts. Bhí na fibroblasts frithdhaite le rhodamine (1:800, Abcam, RA) le haghaidh íomháithe F-actin. Rinneadh imdhíonadh mar a thuairiscítear i Roinn4.5, cé is moite de phróiseáil fíocháin agus deparaffinization. Baineadh úsáid as HUVECanna agus na fibroblasts araon ag sliocht 4.

4.5. Íomháú Imdhíonfhluaraiseachta ar Phróitéiní Maitrís Seach-cheallacha

Tar éis 14 lá de chultúir, baineadh na scafaill cheallacha saor ó ghéine nó géine-ghníomhaithe chun sil-leagan maitrís a bhrath ag baint úsáide as imdhíonfluaraiseacht. Rinneadh próiseáil na samplaí mar a thuairiscítear roimhe seo. Go hachomair, niteadh na scafaill ar dtús le PBS agus socraíodh iad i bhformailin maolánach neodrach 10 faoin gcéad ar feadh 20 nóiméad. Próiseáladh na samplaí seasta ansin ag baint úsáide as an bprótacal caighdeánach le haghaidh díphairifínithe. Gearradh na bloic ina 7- ansinµm slices tiubh agus a bailíodh ar sleamhnáin ghearrtar. Ansin dípharaifíníodh na hailt ag baint úsáide as xiléin agus ina dhiaidh sin athhiodráitíodh an t-alt le grádáin eatánóil ag laghdú. Ina dhiaidh sin, tréscaoiltear na cealla le 0.2 faoin gcéad Tween®Tuaslagán 20 (Sigma-Aldrich, an Fhrainc) i PBS ar feadh 30 nóiméad (nigh 10 nóiméad× 3) agus cuireadh bac air trí úsáid a bhaint as 10 faoin gcéad NGS (Gnáthshéiream Gabhar, Invitrogen, Rockford, IL, SAM)/5 faoin gcéad BSA/0.3 M Glycine (ullmhaithe i dtuaslagán tréscaoilteach) ar feadh 1 h. Tar éis blocála, rinsíodh na sleamhnáin i PBS agus ansin goraíodh iad ag 4◦C thar oíche leis na antasubstaintí chun díriú ar phróitéiní maitrís atá liostaithe i dTábla2. An lá dár gcionn, rinsíodh na sleamhnáin i PBS faoi thrí ar feadh 2-3 nóiméad an ceann chun aon antasubstaintí príomhúla neamhcheangailte a bhaint. Ina dhiaidh sin, goraíodh na sleamhnáin in Alexa 488-IgG frith-luiche gabhar comhchuingeach (A32723, Invitrogen, UK) nó in Alexa 594-IgG frith-choine gabhar comhchuingeach (A11012, Invitrogen, UK) ag 1: 800 caolú ag teocht an tseomra ar feadh 1 h sa dorchadas. Rinneadh an chéim sruthlaithe mar a rinneadh cheana agus frithdhaite do núicléis ag baint úsáide as an meán gléasta le DAPI (ab104139, Abcam, RA). Rinneadh na sleamhnáin a íomháú ansin ag baint úsáide as micreascóp fluaraiseachta (Olympus BX43, an tSeapáin) ag 20× cuspóir. Baineadh úsáid as samplaí gortha le hantasubstaintí tánaisteacha amháin mar rialuithe.

Cainníochtú Íomhá

Baineadh úsáid as bogearraí Íomhá] (Image, NIH, MD, SAM) chun méid na bpróitéiní sainráite a chinneadh go leathchainníochtúil. I gcás gach marcóra, socraíodh luach tairsí tairiseach ar dtús trí réamhíomháú codanna éagsúla. Ag baint úsáide as an luach tairsí socraithe cinneadh dlús comhtháite (limistéar dhaite x meánluach liath) na n-íomhánna agus ansin normalaíodh iad go dtí líon na gceall (comhaireamh DAPI) chun meándhlús fluaraiseachta deiridh a thabhairt in aghaidh na cille. Rinneadh meánmhéid a chainníochtú ó 8-10 íomhá randamach in aghaidh an mhacasamhail le trí mhacasamhlú ar a laghad in aghaidh an ghrúpa. Baineadh úsáid ansin as na meáin a fuarthas ó na trí mhacasamhlú/grúpa chun slonn coibhneasta a thomhas idir na grúpaí.

4.6. Anailís staitistiúil

Cuirtear na torthaí go léir in iúl mar mheán agus diall caighdeánach. Baineadh úsáid go ginearálta as t-tástáil dhá eireaball gan phéire chun an tábhacht staitistiúil idir grúpaí a ríomh, áit ar measadh go raibh p < 0.05 suntasach

Léirigh an staidéar seo go bhfuil anfrith-aosú -Klotho cistanche géine-ghníomhaithetairiscintí rialaithe gníomhachtú acmhainn athghiniúna na ADSCanna. Is iad príomhthorthaí an staidéir seo na (1)feabhsú neamhbhuan ar iolrachas gascheall agus freagairt fhrithshnáithíneach, (2)rialú paracrine feabhsaithe i dtreo angiogenesis, agus athmhúnlú pro-fibrotic collageni fibroblasts deirmeach, agus ar deireadh, (3)aibiú méadaithe an membrane íoslachle smacht ar léiriú próitéiní scar-ghaolmhara. Go críochnaitheach, tugann na torthaí seo le fiosgo bhfuil na ADSCanna-ualaithe -D'fhéadfadh acmhainn iontach a bheith ag scafall géine-ghníomhaithe Klotho acóireáil ar raon leathan de wounds deirmeach.

acmhainní, UILE, FJO agus MBK; coimeád sonraí, GACH agus MBK; scríbhneoireacht - dréacht-ullmhú bunaidhtion, GACH; scríbhneoireacht — athbhreithniú agus eagarthóireacht, UILE, FJO agus MBK; léirshamhlú, GACH; maoirseacht,FJO agus MBK; riarachán tionscadail, MBK; éadáil maoinithe, FJO agus MBK Gach údaran leagan foilsithe den lámhscríbhinn a léamh agus a aontú.

Coinbhleachtaí Leasa:Dearbhaíonn na húdair nach bhfuil aon choinbhleacht leasa ann.

Tagairtí

1. Laiva, AL; Ó Briain, FJ; Keogh, MB Nuálaíochtaí i gcórais seachadta géine agus fachtóir fáis le haghaidh leighis créachta diaibéitis.J. Tissue Eng. Regen. Med.2018, 12, e296–e312. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne] 

2. Makrantonaki, E .; Wlaschek, M.; Scharffetter-Kochanek, K. Pathogenesis de neamhoird cneasaithe créachta i daoine scothaosta.JDDG J. Dtsch. Deirmól. Ges.2017, 15, 255–275. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne]

3. Ganguly, P. ; El-Jawhari, JJ; Burska, AN; Ponchel, F.; Giannoudis, PV; Jones, EA An anailís ar aosú in vivo i gcealla stromal mesenchymal smeara daonna ag baint úsáide as measúnacht aonad-fibroblast a fhoirmíonn coilíneacht agus feinitíopa CD45lowCD271 móide.Gaschealla Int.2019, 2019, 5197983. [CrossRefGenericName] 

4. Westerweel, Corpoideachas; Teraa, M.; Raifii, S.; Jaspers, JE; Bán, IA; Hooper, AT; Verhaar, MC Slógadh cille ginearaí inotelial lagaithe agus stroma smeara mífheidhmiúil i diaibéiteas mellitus.PLoS A hAON2013, 8, e60357. [CrossRefGenericName] 

5. Murray, RZ; Thiar, ZE; Cowin, AJ; Farrugia, BL Forbairt agus úsáid bithábhair mar theiripí leighis créachta.Dóigh. Tráma2019, 

6. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne] 6. Ebrahimian, TG; Pouzoulet, F.; Squiban, C. ; Buard, V. ; Agusré, M.; col ceathrar, B. ; Tamarat, R. Cuireann teiripe cille bunaithe ar chealla stromal a fhaightear ó fhíocháin adipíneach chun cinn leighis créachta fiseolaíocha agus paiteolaíocha.Arterioscler. Throm. Vasc. Biol.2009, 29, 503–510. [CrossRefGenericName] 

7. Wu, Y .; Chen, L.; Scott, PG; Tredget, EE Feabhsaíonn gaschealla Mesenchymal cneasaithe créachta trí dhifreáil agus angiogenesis.Gaschealla2007, 25, 2648–2659. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne] 

8. Foubert, P. ; Gonzalez, AD; Teodosescu, S.; Bearard, F.; Doyle-Eisele, M.; Yekkala, K.; Fraser, JK Teiripe Cille Athghiniúnach Aidipose-Díorthaithe le haghaidh Cneasaithe Créachta Dó: Comparáid idir Dhá Mhodh Seachadta.Adv. Cúram Créachta2016, 5, 288–298. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne]

9. Assi, R. ; Foster, TR; sé, H. ; Stamati, K.; Bai, H.; Huang, Y. ; Dardik, A. Cuireann seachadadh gascheall mesenchymal i scafallanna a ndearnadh innealtóireacht orthu bithimiméadach chun cinn leighis ar othrais diaibéitis.Regen. Med.2016, 11, 245–260. [CrossRefGenericName] [PubMed] 

10. Jiang, Y. ; Chen, B.; Liu, Y.; Zhufu, Z.; Yan, X.; Ho, X.; Tan, Q. Éifeacht an scafall collaigine le cealla codán soithíocha stromal díorthaithe adipéise ar leigheas créachta diaibéiteach: Staidéar ar mhúnla muiceola diaibéitis.Fíochán Eng. Regen. Med.2013, 10, 192–199. [CrossRefGenericName] 

11. Falanga, V. ; Sabolinski, M. Tógáil craiceann beo déshraitheach (APLIGRAF®) dlús a chur le dúnadh iomlán ulcers venous deacair a leigheas.Deisiúchán Créachta Regen.1999, 7, 201–207. [CrossRefGenericName] 12. Hart, CE; Loewen-Rodriguez, A.; Lessem, J. Dermagraft: Úsáid i gcóireáil créachta ainsealacha.Adv. Cúram Créachta.2012, 1, 138–141. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne] 13. Dinh, TL; Veves, A. Éifeachtúlacht Apligraf i gcóireáil ulcers coise diaibéitis.Plast. Athchruthaigh. Surg.2006, 117, 152S–157S. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne]

14. Eaglstein, WH; Falanga, V. Innealtóireacht fíocháin agus forbairt Apligraf®, coibhéis craiceann daonna.Clin. Ther.1997, 19, 894–905. [CrossRefGenericName] 

15. Jiang, T. ; Xu, G. ; Wang, Q.; Yang, L.; Zheng, L. ; Zhao, J.; Zhang, X. In vitro, lagaigh an leathnú ar ghascheall gas mesenchymal pasáiste luath chun lochtanna cartilage a chóireáil.Cealla Bás Dis2017, 8, e2851. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne]

16. Liu, J. ; Ding, Y. ; Liu, Z.; Liang, X. Pianbhreith i nGaschealla Mesenchymal: Athruithe Feidhme, Meicníochtaí Móilíneacha, agus Straitéisí Athnuachana.Tosaigh. Cell Dev. Biol.2020, 8, 258. [CrossRef] [Teach Tábhairne] 

17. Wang, W. ; Xu, X. ; Li, Z.; Lendlein, A. ; Ma, N. Innealtóireacht ghéiniteach gascheall mesenchymal trí sheachadadh géine neamhvíreasach.Clin. Hemorheol. Micreachiorcal.2014, 58, 19–48. [CrossRefGenericName] 

18. Deveza, L. ; Choi, J. ; Laoi, J. ; Huang, N.; Cooke, J. ; Yang, F. Polymer-DNA Nanoparticle-Induced CXCR4 Overexpression Feabhsaíonn Engraftment Gas Cell agus Athghiniúint Fíocháin i Múnla Ischemia Hindlumb Luiche.Teirnostics2016, 6, 1176–1189. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne] 

19. O'Brien, FJ Bithábhair & scafaill d'innealtóireacht fíocháin.Mater. Inniu2011, 14, 88–95. 20. Yanna, I.; Tzeranis, D.; Harley, B. ; Mar sin, P. Scafallanna atá gníomhach ó thaobh na bitheolaíochta de collagen-bhunaithe: Dul chun cinn i bpróiseáil agus tréithriú.Fealsúnacht. tras. R. Soc. A Math. Fis. Eng. Sci.2010, 368, 2123–2139. [CrossRefGenericName] 

21. Laiva, AL; Raftery, RM; Keogh, MB; O'Brien, FJ Tionchar pro-angaigineach SDF-1 scafallanna collaigine-gníomhachtaithe géine in angiogenesis gascheall-tiomáinte.Int. J. Pharm.2018, 544, 372–379. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne] 

22. Lackington, WA; Raftery, RM; O'Brien, FJ Éifeachtúlacht in vitro seoladán treorach nerve géine-ghníomhaithe a ionchorpraíonn nanacháithníní PEI-pDNA neamh-víreasacha a iompraíonn ionchódú géinte do NGF, GDNF agus c-Meitheamh.Biomater Gníomhach.2018, 75, 115–128. [CrossRefGenericName] 

23. Tierney, EG; Duffy, Dochtúir Teaghlaigh; Hibbitts, AJ; Ciarán, SA; O'Brien, FJ Forbairt maitrísí géine neamh-víreasacha le haghaidh athghiniúint cnámh ag baint úsáide as scafaill pholaitiléinimine (PEI) agus collaigine.J. Rialú. Scaoileadh2012, 158, 304–311. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne] 24. Laiva, AL; Ó Briain, FJ; Keogh, MB SDF-1 Tiomáineann scafall collaigine géine-ghníomhaithe idirdhealú feidhmiúil ar chealla Schwann daonna le haghaidh feidhmeanna cneasaithe créachta.Biteicneolaíocht. Bioeng.2021, 118, 725–736. [CrossRefGenericName] [Teach Tábhairne]