Éifeachtaí Néarchosanta Géar-dáileoige-spleách Polai(pro-17 estradiol) i Múnla Luiche de Dhíobháil Contusion Droma

Teibí

17 -Tugann Estradiol (E2) néarchosaint i múnlaí réamhchliniciúla de ghortú chorda an dromlaigh nuair a riartar go córasach í. Ba é sprioc an staidéir seo ná E2 a chur i bhfeidhm go háitiúil ar chorda an dromlaigh gortaithe ar feadh tréimhse marthanach ag baint úsáide as bithábhair scannáin il(pro-E2).

De réir mar a fhoghlaimíonn daoine níos mó faoi ghortuithe chorda an dromlaigh, táimid ag tosú ar an tionchar a bhíonn aige ar shláinte fhisiciúil agus mheabhrach daoine a thuiscint. Cé go bhféadfadh gortuithe chorda an dromlaigh a bheith ina chúis le go leor éifeachtaí díobhálacha, go fortunately, is féidir a dtionchar ar chuimhne a rialú.

Ar dtús, ní mór dúinn a shoiléiriú cad is díobháil chorda an dromlaigh ann. Is nerve é corda an dromlaigh atá cosanta sa spine atá freagrach as treoracha a tharchur ón inchinn chuig codanna éagsúla den chorp. Má ghortaítear corda an dromlaigh, caillfidh codanna áirithe den chorp nasc maith leis an inchinn, rud a fhágann go mbeidh tionchar ag gluaiseacht géaga, braite agus rialú uathrialach.

D’fhéadfadh go mbeadh tionchar áirithe ag gortuithe chorda an dromlaigh ar chuimhne daoine, go háirithe sna céimeanna tosaigh d’othair a bhfuil gortuithe chorda an dromlaigh orthu a athshlánú. Féadfaidh gortuithe chorda an dromlaigh a bheith ina chúis le meath ar aird an duine, ar chuimhne oibre, agus ar chumas próiseála mhothúchánach, rud a chuirfidh isteach ar chumas cuimhne duine.

Mar sin féin, laghdóidh na héifeachtaí diúltacha seo de réir a chéile de réir mar a théann othair faoi chóireáil athshlánúcháin. Is féidir le hothair a gcuimhne a fheabhsú trí pháirt a ghlacadh i gcluichí cuimhne agus oiliúint chognaíoch eile. Ag an am céanna, cabhraíonn athshlánú fisiceach freisin le feidhmeanna mótair agus céadfacha an chomhlachta a athchóiriú, rud a chuireann feabhas ar fheidhmeanna mothúchánacha agus cognaíocha.

Ba cheart dúinn othair a bhfuil gortuithe chorda an dromlaigh orthu a spreagadh chun páirt ghníomhach a ghlacadh i gcóireáil athshlánúcháin agus leanúint d’oiliúint athshlánúcháin chun sláinte fhisiciúil agus mheabhrach a fheabhsú. Creidim le do thoil, le cabhair ó chognaíocht cheart agus ó chóireáil iar-obráide, gur féidir le hothair tionchar díobhála chorda an dromlaigh ar chuimhne a shárú agus leanúint ar aghaidh le saol gníomhach. Is féidir a fheiceáil go gcaithfimid cuimhne a fheabhsú, agus is féidir le Cistanche cuimhne a fheabhsú go suntasach mar is féidir le Cistanche cothromaíocht neurotransmitters a rialáil freisin, mar shampla leibhéil acetylcholine agus fachtóirí fáis a mhéadú, atá an-tábhachtach don chuimhne agus don fhoghlaim. Ina theannta sin, is féidir le Cistanche sreabhadh fola a fheabhsú freisin agus seachadadh ocsaigine a chur chun cinn, rud a d'fhéadfadh a chinntiú go bhfaigheann an inchinn cothú agus fuinneamh leordhóthanach, rud a fheabhsóidh beogacht agus seasmhacht na hinchinne.

Cliceáil fios forlíontaí chun cuimhne a fheabhsú

Tar éis gortú corda contusivespinal i lucha fireann fásta, ionchlannaíodh scannáin pola (pro-E2) go subdural, rinneadh measúnú ar andneuroprotection ag baint úsáide as imdhíon-histochemistry 7 lá tar éis gortú agus ionchlannú. i gcomparáid leis na rialuithe gortaithe.

Chun an dáileog E2 a scaoileadh a mhéadú, rinneadh scannáin phola (pro-E2) scaoileadh bolus trí E2 neamhcheangailte a ionchorprú sna scannáin pola (proE2).

Mar sin féin, i gcomparáid leis na rialuithe gortaithe, níor chuir scannáin pola-scaoileadh bolus (pro-E2) go mór le neuroprotection nó chuir siad srian ar athlasadh ag 7 nó 21 lá tar éis an ghortaithe. dáileoga teiripeacha E2 a scaoileadh níos cruinne.

RÉAMHRÁ

Is riocht lagaithe é gortú trámach chorda an dromlaigh (SCI) a dhéanann difear do bhreis agus 18,{1}} duine gach bliain sna Stáit Aontaithe,1 agus meastar go mbeidh leitheadúlacht domhanda SCI idir 236 agus 1009 in aghaidh an mhilliúin.2

Bíonn móreasnaimh néareolaíocha ar othair a bhfuil tionchar ag SCI orthu, lena n-áirítear caillteanas braite, lagú ar fheidhm bputóg/lamhnán, agus pairilis.3,4 Mar thoradh ar an bpríomhthionchar ar chorda an dromlaigh bás néarónach ag an suíomh gortaithe, rud a mhéadaítear tuilleadh ag roinnt cascáidí díobhálacha tánaisteacha lena mbaineann astrocytes agus macrophages. .

Le himeacht ama, cruthaíonn na astrocytes seo scar glial a chuireann cosc ​​ar shíneadh na n-aisíní thar imeall an loit.5 Níl aon drugaí neuroprotective ceadaithe ag FDA go dtí seo chun SCI a chóireáil.

Dhírigh taighde le blianta fada anuas ar riar sistéamach bithmhóilíní chun caillteanas néaránach a chosc mar gheall ar ghortú tánaisteach agus/nó chun athghiniúint aiseach a chur chun cinn, rud a fhágann go n-athbhunófar feidhm chaillte ar deireadh.6 Bithmhóilín amháin a léirigh gealltanas suntasach i múnlaí réamhchliniciúla SCI ná an baineann. hormón gnéis, 17 -estradiol(E2).

Tá riarachán E2 tairbheach den chuid is mó don néarchóras lárnach trí athlasadh a laghdú,7–9 imoibríocht cille glial a mhaolú,10 srian a chur ar strus ocsaídiúcháin,11–14 agus bás néarónach excitotoxic de bharr glútamáit a mhaolú.15 Feabhsaíonn E2 téarnamh feidhme i múnlaí creimire éagsúla SCI.10, 16,17 Díol spéise é go gcothaítear téarnamh feidhmiúil níos gasta18,19 i gcomparáid le hainmhithe a fhaigheann ach dáileog amháin de bharr riar sistéamach ildháileog E2.17

Ós rud é go gcuireann E2 téarnamh feidhme chun cinn ar bhealach níos éifeachtaí trí réimeanna ildháileog, ba é an sprioc a bhí againn E2 a scaoileadh go háitiúil go háitiúil ag an láthair díobhála (chun aon éifeachtaí lasmuigh den sprioc a chosc) chun teacht timpeall ar fhadhbanna a eascraíonn as dáileoga iolracha/instealltaí sistéamacha E2.

Chuige sin, d’úsáideamar straitéis bithábhar pola(táirgí) inar feidhmíodh an druga dúchasach (E2) ar dtús le grúpaí ailile imoibríocha agus ansin polaiméiríodh é trí bhreisiú radacach fótainitiatedthiol-ene le dithiol solúbtha oligo-(eitiléine glycol), mar a thuairiscítear roimhe seo. .20 Fuaireamar slabhraí polaiméire ardmheáchan móilíneach, arb éard atá iontu E2prodrug mar an t-aonad athfhillteach laistigh den pholaiméir.

Tar éis díghrádú hidrealaíoch, scaoileann an polaiméir E2 de réir a chéile sna meáin máguaird. Is iad na seachtháirgí eile as an léas sin ná dé-ocsaíd charbóin agus oligo (glycol eitiléine) (oEG) (Fíor 1). Is féidir le slabhraí Polai (pro-E2) atá déanta i scannáin nó micreashnáithíní E2 a scaoileadh ag comhchruinnithe nanomolar in vitro ar scála ama míonna go blianta .20

Tá an E2 a scaoiltear ó na scaifeanna polai(pro-E2) seo bithghníomhach, agus cuireann na scaifeanna seo chun cinn neurotrófacht agus neuroprotection in vitro trí néaróin a chosaint ó strus ocsaídiúcháin sárocsaíd hidrigine. Anseo, chuireamar na scannáin pola (pro-E2) i bhfeidhm i múnla murine de contusion SCI, díreach tar éis gortú, agus rinneamar measúnú ar a gcumas neuroprotective in vivo.

Mhéadaigh dearadh ár scannán pola (pro-E2) tosaigh neuroprotection go géar (7 lá tar éis gortú) ag an suíomh gortaithe gan cur isteach ar an bhfreagairt athlastach. Ós rud é go n-eisíonn scannáin pola (pro-E2) nanagram E2 in aghaidh an lae, d'fhorbraíomar straitéis scaoileadh eile inar ionchorpraíodh unboundE2 sa mhaitrís pola (pro-E2). Rinneamar hipitéis go bhféadfadh go gcuirfeadh scaoileadh bolus E2 neamhcheangailte buntáistí breise neuroprotective ar fáil.

Scannáin Poly(pro-E2) a scaoileadh E2 ar bhealach pléasctha agus ina dhiaidh sin scaoileadh leanúnach E2 ón polaiméir ag comhchruinnithe níos ísle. Rinne staining imdhíon-eolaíoch measúnú ar néaróin, astrocytes, agus macrophages/microglia a bhí i láthair go géar ag an suíomh díobhála (7 lá tar éis an ghortaithe) agus go hainsealach (21 lá tar éis an ghortaithe) tar éis SCI i láthair na scannán polai(pro-E2) seo a scaoileann bolus.

TORTHAÍ AGUS PLÉ

Scaoileann scannáin pholai(pro-E2) E2 ag tiúchain nana-mhola, cuireann siad fás néaránach chun cinn ón drongán droma droma, agus cosnaíonn siad néaróin ó strus ocsaídiúcháin sárocsaíd hidrigine in vitro.20 Féachann an staidéar a chuirtear i láthair anseo le cumas poly(pro-E2) a chinneadh. scannáin chun neuroprotection in vivo a sholáthar ag baint úsáide as samhail murine de contusion SCI.

Cothaíodh contusion measartha SCI i lucha fireanna fásta, agus díreach tar éis an ghortaithe, cuireadh scannáin phola (pro-E2) díreach os cionn an ghortaithe (Fíor 2A). Chun a chinntiú gur fhan na scannáin pola(pro-E2) i bhfeidhm tar éis ionchlannú, ionchlannaíodh scannáin pola(pro-E2) a bhí luchtaithe le róidamine B isteach i gcordaí dromlaigh ainmhithe gortaithe. Seacht lá tar éis an ionchlannú, bailíodh cordaí an dromlaigh agus rinneadh iad a íomháú le micreascóp solais (Fíor 2B). I ngach ainmhí, d'fhan na scannáin phola (pro-E2) ionchlannaithe rhodamine B-luchtaithe in áit bhailíochtaithe an phrótacail ionchlannaithe.

Chun tástáil a dhéanamh ar chumas scannáin pola (pro-E2) neuroprotection agus alleviamine lasadh a sholáthar, ionchlannaíodh scannáin pola (pro-E2) (gan rhodamine B) tar éis gortú contusion spinal, agus bailíodh na cordaí dromlaigh 7 lá tar éis gortú agus ionchlannú. Gearradh ailt fadaimseartha (10 μm tiubh), dírithe ar an croílár díobhála, agus imdhíon-lipéadaithe chun néaróin agus macrophages i gcorda an dromlaigh a léirshamhlú (Fíor 3).

Cuireadh lipéid ar na hailt le haghaidh NeuN chun láithreacht néarónach a mheas, agus léirigh anailís chainníochtúil ar an staining gur mhéadaigh na scannáin pola (pro-E2) go suntasach an limistéar dearfach NeuN timpeall an croílár díobhála i gcomparáid leis na rialuithe gortaithe nach bhfuair ionchlannáin scannáin (Fíor 3A; lch.=0.0002). Nocht staining bhreise le haghaidh axons ag baint úsáide as NFH (tromshlabhra neurofilament) freisin an éifeacht neuroprotective géarmhíochaine de na scannáin polai(pro-E2) ionchlannú (Fíor 3B; p=0.0017).

Thugamar faoi deara nach raibh an t-athrú seo ar neuroprotection mar gheall ar athrú ar an apoptosis (caspase 3) ag an suíomh díobhála (Figiúr Tacaíochta S1; p=0.9966). Níor léirigh staining do macrophages gníomhachtaithe (CD68) aon difríochtaí suntasacha idir na hainmhithe il(pro-E2) scannánchóireáilte agus na hainmhithe neamhchóireáilte (Fíor 3C; p= 0.7207).

Nuair a chuirtear le chéile iad, méadaíonn scannáin polai(pro-E2) go measartha neuroprotection go géar gan an freagra athlastach a athrú. Mhéadaigh scannáin Poly(pro-E2) dlús néarónach beagnach 20%, ach ní raibh aon éifeachtaí frith-athlastacha soiléire ag na scannáin (bunaithe ar chainníochtú an limistéar ina bhfuil na macrophages gníomhachtaithe) (Fíor 3).

D'fhéadfadh an easpa laghdaithe seo ar athlasadh a léiriú go bhfuil na dáileoga frith-athlastacha agus neuroprotective de E2 ar leith agus nár baineadh amach iad araon leis an bhfoirmiú scannáin reatha.20 Rinneamar hipitéis go bhféadfadh scaoileadh E2 ó na scannáin pola (pro-E2) athlasadh a laghdú go géar. agus cumasaíonn siad freagairt néarachosanta níos láidre.

Chun an dáileog E2 a scaoiltear go géar a mhéadú, athraíodh scannáin thepoly (pro-E2) ionas go dtarlódh scaoileadh bolus E2 díreach tar éis iad a ionchlannú. Tar éis scaoileadh bolus E2, leanfadh díghrádú polaiméire go dtí scaoileadhE2 ag an tiúchan céanna agus a bhí roimhe seo. Baineadh úsáid arís as na scannáin phola (pro-E2) seo a scaoileadh bolus sa turgnamh a thuairiscítear thuas, agus rinneadh measúnú ar néarchosaint agus athlasadh ag 7 lá iar-ghortaithe (dpi).

Mar sin féin, in ionad sochair bhreise, níor tháinig méadú suntasach ar na scannáin bolúis scaoileadh poly(pro-E2) ar an limistéar dearfach NeuN i gcomparáid leis na rialuithe gortaithe, neamhchóireáilte (Fíor 4A; p=0.6770). Mhéadaigh na scannáin pola-scaoileadh bolus(proE2) slonn CD68, ach ní raibh an méadú difriúil go staitistiúil (p= 0.1780).

Breathnaíodh freisin treochtaí méadaitheacha in imoibríocht glial agus athlasadh microglial i láthair na scannán pola-scaoileadh bolus (pro-E2) mar gheall ar an méadú ar léiriú GFAP (astrocytes) agus Iba1 (microglia); áfach, ní raibh na méaduithe seo níos airde go staitistiúil ná an méid a breathnaíodh sna rialuithe gortaithe, neamhchóireáilte (p=0.3233 agus p=0.3053, faoi seach). Nuair a chuirtear le chéile iad, thug scannáin pholai-scaoileadh bolus (pro-E2) faoi deara néarchosaint, agus níor laghdaíodh imoibríocht astrocyte agus láithreacht macraphage/microglia mar a bhí hipitéisithe ar dtús.

Ós rud é nár breathnaíodh difríochtaí idir ainmhithe gortaithe, neamhchóireáilte agus gortaithe, ainmhithe cóireáilte scannáin pola-scaoileadh bolus (proE2) ag an bpointe ama géarmhíochaine, 7 dpi, roghnaíodh pointe ama ainsealach le haghaidh tuilleadh imscrúdaithe ó na scannáin poly(pro-E2). is féidir E2 a scaoileadh go fadtéarmach.20 Rinneadh an turgnamh a bhfuil cur síos air thuas arís leis na scannáin bolus-releasingpoly (pro-E2), ach rinneadh measúnú ainsealach ar na hainmhithe ag 21 dpi (Fíor 5).

Lipéadaíodh cordaí droma do na cineálacha cille céanna a luadh níos luaithe. Tar éis anailíse a dhéanamh, bhí claonadh i dtreo méadú ar an gcodán achair de NeuN sna hainmhithe ionchlannaithe scannáin polai(pro-E2) a scaoileann bolus i gcomparáid leis na hainmhithe gortaithe gan chóireáil (Fíor 5A; p=0.0897) Ina theannta sin, breathnaíodh treochtaí nuair a laghdaigh scannáin pholai-scaoileadh bolus (pro-E2) codán achair de shloinneadh CD68 agus GFAP i gcomparáid le sonraí ó rialuithe ainmhithe gortaithe gan chóireáil (Fíor 5B, C; p=0.0859 agus p.=0.2780).

Mar sin féin, ní raibh aon cheann de na treochtaí difriúil go staitistiúil. Ar an láimh eile, léirigh codanna fíocháin lipéadaithe Iba1 ainmhithe cóireáilte polai(pro-E2) a scaoiltear óbolus slonn méadaithe i gcomparáid le sonraí ó rialtáin neamhchóireáilte, gortaithe (p < 0.0001). Léiríonn ár gcuid oibre roimhe seo go bhfuil poly(pro -E2) scannáin arna gcaitheamh ar chlúdach 15 mm × 15 mm scaoileadh thart ar 266 ng de E2 in aghaidh an lae,20 a aistríonn go dtí thart ar 2 ng de E2 in aghaidh an lae ó na scannáin (1 mm × 1.8 mm) a úsáidtear anseo. Scaoileann na scannáin polai(pro-E2) a scaoileann bolus 40 ug breise de E2 neamhcheangailte go géar tar éis ionchlannú.

Léiríonn taighde a dhíríonn ar úsáid E2 i samhlacha SCI creimirí go ndéanann estrogen íseal-dáileog (10 ug/kg) a riartar go hinfhéitheach gliosis imoibríoch a mhaolú agus go soláthraíonn sé neuroprotection agus é ag maolú teagmhais athlastacha, ag coiscthe apoptóis, agus ag méadú angiogenesis.21 Os a choinne sin, tá dáileoga arda sistéamach de estrogen ag éifeachtaí díobhálacha lena n-áirítear rátaí méadaithe veinthrombóis dhomhain agus ailse22,23 agus forbairt tréithe fisiceacha baininscneach i bhfireannaigh. Is díol suntais é seo ós rud é gur dhírigh an chuid is mó de thaighde E2 ar E2 a sheachadadh go sistéamach go hinfhéitheach nó go hinpeiritónach.

Ag cur san áireamh na hábhair imní sábháilteachta a bhaineann le dáileoga arda E2 a úsáid go córasach, tá sé tábhachtach an tiúchan E2 a bharrfheabhsú le haghaidh seachadadh áitiúil chuig corda an dromlaigh gortaithe chun fo-iarsmaí a chosc. Go dtí seo, níl ach staidéar amháin tar éis E2 a sheachadadh ó bhithábhar trí nanacháithníní a úsáid chun E2 a sheachadadh go fócasach (2.5 ug nó 25 ug). Laghdaigh scaoileadh ó nanacháithníní athlasadh go tapa go géar i múnla contusion francach SCI.9D'fhéadfadh an easpa freagra suntasach staitistiúil inár sonraí (Fíoracha 4 agus 5) a bheith mar gheall ar éagothroime toan sa mhéid E2 atá á sheachadadh againn go háitiúil do chorda an dromlaigh leis. toouch E2 (40 ug) á scaoileadh go géar agus is fíorbheagán (2 ng) atá á scaoileadh go hainsealach.

Cé gur treochtaí measartha iad an méid a bhreathnaíonn muid ó na sonraí seo, leagann an staidéar seo béim ar an tábhacht a bhaineann le dáileoga E2 chun neuroprotection in vivo a chur chun cinn. D’fhéadfadh laghdú ar an dáileog tosaigh E2 agus cinéitic díghrádaithe an bhithábhar poly(pro-E2) a choigeartú an fhadhb seo a mhaolú agus d’fhéadfadh torthaí neuroprotective níos fearr a sholáthar.

Cé go ndearnadh an staidéar seo ar fhir amháin, tá sé ríthábhachtach measúnú a dhéanamh ar éifeacht na scannán pola (pro-E2) seo sa dá inscne chun acmhainn aistritheach bhailí a bhunú don bhithábhar seo. Tá sé léirithe ag taighde, tar éis SCI, go bhféadfadh leibhéil mhéadaithe estrogen i mná a bheith freagrach go páirteach as a dtorthaí feidhmiúla feabhsaithe i gcomparáid le fireannaigh.24Ós rud é go bhfuil láithreacht estrogen méadaithe i mná, caithfidh aon straitéis bithábhar a úsáideann estrogen an leibhéal méadaithe seo a chur san áireamh agus an t-ábhar a mhodhnú. scaoileadh go cinéiteach dá réir sin lena chinntiú go bhfanann an dáileog a sheachadtar mar a chéile d’fhir agus do mhná.

MODHANNA

Déantúsaíocht Scannán Polai(pro-E2).

Rinneadh an polaiméir polai(pro-E2) P1 a shintéisiú agus a shaintréithe mar a thuairiscítear go mion roimhe seo.20 Tá meáchan móilíneach meán-mheáchan MW ~ 80 kDa ag an polaiméir agus scaiptheacht de ± 3, de réir crómatagrafaíocht tréscaoilte glóthach (GPC). Déanadh scannáin pholai(pro-E2) tríd an polaiméir a thuaslagadh i gclóraform (5 wt %/wt; polaiméir/clóraform), agus an tuaslagán a chaitheamh anuas ar chlúdaigh ghloine 15 mm × 15 mm (100 μL tuaslagán in aghaidh an chlúdaigh), agus iad a fhágáil. a thriomú thar oíche faoi fholús (<100 mTorr) at room temperature (RT). In a subset of experiments, the polymer solution was supplemented with rhodamine B (0.005 wt %/wt; rhodamine B/chloroform) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) to verify the presence of the poly(pro-E2) films in animals post-implantation.
Chun scannáin pola(pro-E2) a chruthú le E2 neamhcheangailte, rinneadh scannáin trí E2(Abcam, Cambridge, MA) neamhcheangailte a chur leis an tuaslagán polaiméire (0.0625 wt %/wt; E2/clóraform) roimh-theilgean an tuaslagán ar na clúdaigh. Roimh ionchlannú, rinneadh na clúdaigh chlúdaigh le scannán a steiriliú ag baint úsáide as radaíocht ultraivialait (UV) ar feadh 30 nóiméad agus scafa na scannáin ó na clúdaigh i gcomh-aireachta bithshábháilteachta steiriúla. Ansin gearradh na scannáin pola (pro-E2) i bpíosaí 1 mm × 1.8 mm, oiriúnach le haghaidh ionchlannú i luch fásta mar a thuairiscítear thíos.

Contusion Gortú Chorda Dhromlaigh agus Ionchlannú Scannán Polai(pro-E2).

D'fhormheas Institiúid Polaiteicnice Rensselaer agus Coistí um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Institiúideach Ollscoil Stáit Ohio (IACUC) gach gnáthamh cúraim mháinliachta agus iarobráide. Chun contusion SCI a spreagadh, rinneadh ainéistéitic ar lucha fireann fásta C57BL/6 (10- go dtí 12- seachtain d’aois), a ceannaíodh ó Jackson Laboratory (stoc uimh. 000664; Bar Harbour, ME), le hinstealladh inperitoneal de ketamine (80 mg/kg) agus xylazine (10 mg/kg). Bearraíodh cúl na n-ainmhithe agus ullmhaíodh iad go aiseipteach ag baint úsáide as eatánól 70% agus béitedine.

Tar éis an t-ainmhí a chur ar eochaircheap téimh arna chothabháil ag 37 céim, osclaíodh na sraitheanna craiceann agus matán chun an colún veirteabrach a nochtadh, agus rinneadh laminectomy droma ar an vertebra naoú chliabhraigh (T9) chun corda an dromlaigh a nochtadh. Spreagadh contusionSCI measartha (75 kdyn) ag an leibhéal seo ag baint úsáide as imbhuailteoir Infinite Horizons (Precision Systems andInstrumentation, Lexington, KY).

Tar éis hemostasis a bhaint amach, osclaíodh an dura (Fíor 2) agus scannán pola (pro-E2) nó scannán polai (pro-E2) a scaoileadh bolus (1 mm × 1.8 mm) faoin dura agus os cionn an chorda dhromlaigh, ag clúdach. an suíomh gortaithe. In ainmhithe rialaithe, osclaíodh an dura ach níor cuireadh na scannáin pola (pro-E2) i bhfeidhm. Dúnadh na sraitheanna matán ansin ag baint úsáide as comhuaimeacha steiriúla, agus dúnadh an craiceann ag baint úsáide as gearrthóga créachta miotail steiriúla.

Fuair ​​na lucha 2 ml de shalainn steiriúil arna instealladh go subcutaneously agus tugadh ar ais chuig a gcáis agus cuireadh ar shraith teo sleamhnáin go 37 céim thar oíche. Chun hiodráitiú cuí a chinntiú agus chun ionfhabhtuithe a chosc, rinneadh na lucha a instealladh go subcutaneously le 1-2 ml de saline steiriúil agus Gentocin (1 mg/kg) gach lá ar feadh na chéad 5 lá tar éis an ghortaithe (dpi). Léiríodh lamhnáin dhá uair sa lá le linn na dturgnaimh. Cuireadh na hainmhithe go léir faoi chuimsiú gnáthchoinníollacha ar feadh 12-uair an chloig de thimthriall éadrom-dorcha le rochtain ad libitum ar bhia agus uisce.

Fómhar Fíocháin.

Ag na pointí ama teirminéil ainmnithe de 7 nó 21 dpi, cuireadh na lucha instealladh le maritis de ketamine / xylazine (dáileog máinliachta 1.5 ×) agus perfused trascardially le 0.1 Mphosphate-seile maolánach (PBS; pH 7.4) ina dhiaidh sin bhí 4% paraformaldehyde (PFA; pH 7.4). Baineadh na cordaí dromlaigh, iar-seasta ar feadh 2 h i 4% PFA, agus ansin aistríodh chuig 0.2M maolán fosfáit (PB; pH 7.4) thar oíche.

Rinneadh na cordaí dromlaigh a chrióchosaint i 30% de shiúcrós ar feadh 48 h ag 4 céim agus ansin blocáladh iad i gcodanna 10 mm dírithe ar an láthair gortaithe agus na colúin droma os comhair aníos. Bhí na hailt seo leabaithe i meán teochta barrfheabhsaithe fíocháin (VWR International, Radnor, PA) agus reo go tapa ar oighear tirim. Rinneadh na cordaí dromlaigh go léir a ghearradh ag 10 μm ar chrioostat Microm HM505E, curtha ar shleamhnáin ColorFrost Plus (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), agus ansin é a stóráil ag −20 céim go dtí go n-úsáidtear é le haghaidh imdhíonchothaithe.

Imdhíon-cheimic agus Cainníochtú.

Leáigh na sleamhnáin ar shleamhnán teo ar feadh 1 h agus ansin sruthlaigh iad 3 huaire i 0.1 MPBS. Múchadh gníomhaíocht peroxidase ingenous trí na sleamhnáin a chothú i 6% H2O2 caolaithe i meatánól ar feadh 15 nóiméad ag RT. Tar éis iad a ní 3 huaire i 0.1 M PBS, goradh na hailt le 4% BSA agus 0.1% Triton X-100 in 0.1 M PBS le haghaidh 1 h tar éis gor thar oíche na n-antasubstaintí príomhúla ag 4 céim nó RT (Tábla 1).

Cuireadh antasubstaintí tánaisteacha biotinylated cuí ar na sleamhnáin (1:1000; Vector Laboratories,Burlingame, CA) ag RT ar feadh 1 h. Chun an t-antasubstaint cheangailte a shamhlú, goraíodh na sleamhnáin le Vectastain Elite-ABC (Vector Laboratories) ar feadh 1 h agus forbraíodh iad le ImmPACT3,3′-diaminobenzidine (DAB) nó foshraith Vector SG (Saotharlanna Veicteoir) ar feadh 10 nóiméad.

Díhiodráitíodh na gníomhartha seo trí ghortaí seicheamhach 2 × 2 min i 70% agus 90% eatánól, 2 × 3 min in eatánól 100%, agus ina dhiaidh sin 3 × 3 min in Histoclear, agus ar deireadh clúdaigh le Permount (ThermoFisher Scientific). Baineadh úsáid as sé chuid in aghaidh an ainmhí, le spásáil 100 μm óna chéile idir chorda an dromlaigh gortaithe, don anailís chainníochtaithe.

Rinneadh na codanna imdhíon-lipéadaithe a íomháú ag baint úsáide as micreascóp íomháithe Axioplan 2 atá feistithe le ceamara AxioCamdigital agus bogearraí AxioVision leagan 4.8.2 (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, an Ghearmáin) agus cuspóir 5 ×.

Rinneadh líon na bpicteilín deimhneacha i ngach rannóg a chomhaireamh ag baint úsáide as bogearraí anailíse íomhá MIPAR (MIPAR, Worthington, OH) chun an codán den limistéar dearfach faoin gcéad in aghaidh an ailt a ríomh. Ríomhadh an meán-achar faoin gcéad deimhneach de na sé chuid in aghaidh an ainmhí do gach ceann de na stains agus tuairiscíodh.

Anailís Staitistiúil.

Tuairiscítear na sonraí go léir mar an meán ± diall caighdeánach. Rinneadh anailís staitistiúil ag baint úsáide as Bogearraí Staitistiúla GraphPad Prism 9 (Bogearraí GrafPad, San Diego, CA). Sna turgnaimh ar fad, baineadh úsáid as 5-6 ainmhí in aghaidh an ghrúpa, a tháinig as ar a laghad dhá bheart ainmhithe éagsúla. Chun na difríochtaí idir na grúpaí scannán rialaithe agus pola (pro-E2) a thástáil, baineadh úsáid as t-tástáil an mhic léinn (Fíoracha 3, 4, agus 5). Fuarthas suntasacht ag p Níos lú ná nó cothrom le 0.05.

Ábhar Forlíontach

Déan tagairt don leagan Gréasáin ar PubMed Central le haghaidh ábhar breise.

BUÍOCHAS

Gabhann na húdair buíochas le Wenmin Lai as a cúnamh leis na lialanna luiche.

Maoiniú

Fuair ​​an obair seo tacaíocht ó Chomhaltacht Fondúireacht Craig H. Neilsen (Deontas 468116) agus ó Chomhaltacht Fondúireacht Taighde Pairilis Veterans of America (Deontas 3171) chuig MKG agus ó NIH R01 (Deontas NS092754) agus Deontas Tacaíochta Institiúideach Bhord Athbhreithnithe Díobhálacha Corda Dhromlaigh Stáit Nua-Eabhrac C32J45 C32J45. Rinneadh an obair ainmhithe ar fad le cúnamh ó Roinn Néareolaíochta Ollscoil Stáit Ohio Máinliachta Core le tacaíocht ó NINDS Grant P30NS104177.

TAGAIRTÍ

(1). Ionad Staidrimh Náisiúnta um Dhíobhálacha Chorda Dhromlaigh. (2020) Fíricí agus Figiúirí Díobhálacha Chorda Dhromlaigh ag aGlance, Ollscoil Alabama ag Birmingham, Birmingham, AL.

(2). Cripps RA, Lee BB, Sciathán P, Weerts E, MacKay J, agus Brown D (2011) Léarscáil Dhomhanda d’Eipidéimeolaíocht Díobhálacha Chorda Dhromlaigh Thruamataigh: I dTreo Stór Sonraí Beo um Chosc ar Dhíobhálacha. Corda an Dhromlaigh. 49, 493–501. [PubMed: 21102572]

(3). Donovan WH (2007) Díobháil Chorda Dhromlaigh - San Am Atá, Láithreach, agus Todhchaí. Iris an Leighis Chorda Dhromlaigh 30, 85-100.

(4). Pickelsimer E, Shiroma EJ, agus Wilson DA (2010) Imscrúdú ar fud an Stáit ar Choinníollacha Díobhálacha Sláinte Daoine a bhfuil Díobháil Chorda Dhromlaigh orthu. J. Corda Dhromlaigh Med. 33 (3), 221–231. [PubMed: 20737795]

(5). Silver J, agus Miller JH (2004) Regeneration beyond the Glial Scar. Nat. An tUrr Neurosci. 5 (2), 146–156. [PubMed: 14735117]

(6). Varma AK, Das A, Wallace G, Barry J, Vertegel AA, Ray SK, agus Banik NL (2013) Díobháil SpinalCord: Athbhreithniú ar Teiripe Reatha, Cóireálacha sa Todhchaí, agus Basic Science Frontiers.Neurochem. Res. 38, 895–905. [PubMed: 23462880]

(7). Zendedel A, Mönnink F, Hassanzadeh G, Zaminy A, Ansar MM, Habib P, Slowik A, Kipp M, andBeyer C (2018) Attenuates Estrogen Léiriú Inflammasome Áitiúil agus Gníomhachtaithe tar éis Díobhála Corda Spinal. Mol. Neurobiol. 55 (2), 1364–1375. [PubMed: 28127698]

(8). Lee JY, Choi HY, Ju BG, agus Yune TY (2018) Maolaíonn Estrogen Péine Neuropathic a tharlódh tar éis Díobhála Chorda Dhromlaigh trí Chosc ar Microglia agus Gníomhachtú Astrocyte. Bithchim. Bithfhis. Acht, Mol. Bunús Dis. 1864 (7), 2472–2480. [PubMed: 29653184]

(9). Cox A, Varma A, Barry J, Vertegel A, agus Banik N (2015) Nanoparticle Estrogen in Rat SpinalCord Díobhála Faightear Éifeachtaí Frith-Alasacha Mear in Plasma, Sreabhán Ceirbreach, agus Fíocháin.J. Neurotrauma 32 (18), 1413–1421. [PubMed: 25845398]

(10). Sribnick EA, Samantaray S, Das A, Smith J, Matzelle DD, Ray SK, agus Banik NL (2010) Postinjury Cóireáil estrogen ar Dhíobháil Chorda Dhromlaigh Ainsealach Feabhsaíonn Feidhm Locomotor inRats. J. Neurosci. Res. 88 (8), 1738–1750. [PubMed: 20091771]

(11). Honda K, Shimohama S, Sawada H, Kihara T, Nakamizo T, Shibasaki H, agus Akaike A (2001) Aistriú Comhartha Antaipoptotic Nongenomic ag Estrogen i Néaróin Chortúla Saothraithe. J.Neurosci. Res. 64 (5), 466–475. [PubMed: 11391701]

(12). Sribnick EA, Wingrave JM, Matzelle DD, Ray SK, agus Banik NL (2003) Estrogen mar Ghníomhaire Neuroprotective i gCóireáil Díobhála Corda Dhromlaigh. Ann. NY Acad. Sci. 993,125–133. [PubMed: 12853305]

For more information:1950477648nn@gmail.com